ES2616884T3 - Compuesto de semifluorocarbono que contiene agente de contraste - Google Patents

Abstract

Emulsión acuosa que comprende a) un compuesto semifluorado de fórmula I: CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I) en la que x es un número entero que varía de 1 a 8 e y es un número entero de 2 a 10. b) un triglicérido que es miscible con el compuesto semifluorado a 20 °C; y c) un emulsionante.

Description

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Compuesto de semifluorocarbono que contiene agente de contraste.

La presente invencion se refiere a una emulsion acuosa que comprende un compuesto de semifluorocarbono especffico, un triglicerido de cadena media (MCT) y un emulsionante, asf como al uso de la emulsion como un agente de contraste o agente mejorador de contraste. Ademas, la invencion se refiere al uso de dicha emulsion para la deteccion de diagnostico de afecciones patologicas inflamatorias al usar imagenologfa MR.

Las enfermedades inflamatorias son, por mucho, las causas mas importantes de morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Aunque hay procedimientos de diagnostico y terapeuticos eficaces para las enfermedades inflamatorias agudas (causadas predominantemente por patogenos), en muchos casos el diagnostico de enfermedades inflamatorias cronicas es en su mayor parte diffcil y el tratamiento de las mismas esta limitado a medidas sintomaticas. Los procedimientos no invasivos de imagenologfa, tales como ecocardiograffa, tomograffa computarizada y espectroscopia de resonancia magnetica nuclear, proporcionan informacion anatomica detallada y, por tanto, son herramientas valiosas para evaluar la funcion de los organos. Sin embargo, con ninguno de los procedimientos mencionados ha sido posible hasta la fecha detectar procesos inflamatorios inequfvocamente con una alta resolucion espacial.

En Nature Biotechnology Vol. 23, N° 8, agosto de 2005, p. 983-987, Arens et al. se describen procedimientos para realizar un seguimiento de las celulas inmunoterapeuticas. Por medio de imagenologfa por resonancia magnetica (MRI) de perfluoro-15-corona-5-eter se intenta detectar celulas in vivo que poseen relevancia inmunoterapeutica. Se usaron celulas dendrfticas cargadas ex vivo con perfluoro-15-corona-5-eter. Subsiguientemente, el destino de las mismas despues de su inyeccion en tejido de raton o administracion intravenosa a ratones se examino in vivo. Los documentos WO 2005/072780 A2 y WO 03/075747 A2 se refieren a examenes similares. En Medica Mundi 47/1, abril de 2003, p. 34-39, G. M. Lanza et al. se describe el uso de nanopartfculas paramagneticas para el reconocimiento de celulas. En este procedimiento, se usan las nanopartfculas paramagneticas para producir la extincion de senal en la imagen de resonancia magnetica 1H. Los vehfculos cargados con 19F se usaron como sondas.

El documento WO-A-2005/072780 se refiere al marcado ex vivo de celulas aisladas con perfluorocarbonos. Se divulga que las celulas aisladas etiquetadas con perfluorocarbonos ex vivo son adecuadas para estudiar migraciones celulares en el organismo despues de la inyeccion.

Oku, Naoto et al. (Biochimica et Biophysica Acta 1280 (1996), 149-154) se refiere al uso de liposomas cargados con glucosa marcada con 18F para estudiar el "trafico liposomal". Los estudios se realizaron por medio de diagnosticos PET.

El documento US 2009/0280055 A1 divulga el uso de bromuro de perfluoroctilo para fines de diagnostico usando procedimientos de imagenologfa.

Es el objetivo de la presente invencion proporcionar un procedimiento que permite la visualizacion de condiciones especfficamente patologicas, tales como procesos inflamatorios, por medio de procedimientos de imagenologfa, y por lo tanto el reconocimiento de las regiones afectadas.

Un objetivo adicional de la presente invencion es la provision de agentes de diagnostico a base de fluorocarbono para el diagnostico especffico de enfermedades cardiovasculares, en particular el diagnostico de procesos inflamatorios del sistema cardiovascular, y mas especfficamente para el diagnostico de miocarditis o cardiomiopatfa inflamatoria.

Un objeto adicional de la invencion es la provision de un aceite biocompatible en emulsion acuosa que puede usarse para la espectroscopia de resonancia magnetica y que es estable en almacenamiento, incluso en condiciones de estres tales como la esterilizacion.

Una primera realizacion de la presente invencion es una emulsion acuosa que comprende

a) un compuesto semifluorado de formula I:

CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero que varfa de 2 a 10,

b) un triglicerido que es miscible con el compuesto semifluorado a 20 °C; y

c) un emulsionante.

Una realizacion especffica adicional de la invencion es una emulsion acuosa que comprende

a) un compuesto semifluorado de formula I:

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CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero que varfa de 2 a 10,

b) un triglicerido de cadena media (MCT) y

c) un emulsionante.

La emulsion de la invencion es preferentemente una emulsion de aceite en agua que comprende obligatoriamente un compuesto semifluorado.

Los compuestos semifluorados en el contexto de la presente invencion son alcanos semifluorados. Los alcanos semifluorados comprenden un fluorocarbono y un resto hidrocarbonado. Comunmente, los alcanos semifluorados siguen las siguientes nomenclaturas: FXHY, en la que X representa el numero de atomos de carbono que estan sustituidos con atomos de fluor e Y representa el numero de atomos de carbono que estan sustituidos con atomos de hidrogeno. Por ejemplo el perfluorohexiloctano esta representado por la formula: F6H8.

F6H8 se muestra en la siguiente formula:

imagen1

Los compuestos semifluorados que son adecuados para las emulsiones de la presente invencion se reflejan en la formula (I):

CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero que varfa de 1 a 10.

En una realizacion x en la formula (I) varfa de 2 a 6, preferentemente de 3 a 6, mas preferentemente de 4 a 6 y especialmente x es 5.

En otra realizacion preferida adicional y en la formula (I) varfa de 2 a 9, preferentemente de 3 a 8, mas preferentemente de 5 a 8, aun mas preferentemente de 6 a 8 y especialmente y es 7.

Los buenos resultados en terminos de imagenologfa y estabilidad de la emulsion puedes lograrse con compuestos semifluorados de formula (I) en la que y es superior a x.

Compuestos semifluorados especialmente preferidos son perfluorohexiloctano (F6H8) y/o perfluorobutilpentano (F4H5).

Un componente adicional de la invencion es un triglicerido que es miscible con el compuesto semifluorado a 20 °C (en lo sucesivo tambien compuesto b)).

Dentro del significado de la presente invencion, el triglicerido (componente b)) es miscible en el compuesto semifluorado (componente a)) si a una temperatura de 20 °C y despues del mezclado y del almacenamiento subsiguiente a 20 °C durante 24 horas el componente a) y el componente b) no forman fases continuas separadas.

En una realizacion preferida, el componente b) es miscible en el componente a) en cualquier relacion. En particular, el componente a) y el componente b) son miscibles en una relacion en peso del componente a) al componente b) de 1:20 a 1:0,7, preferentemente de 1:15 a 1:0,8, mas preferentemente de 1:10 a 1:0,9, aun mas preferentemente de 1:4 a 1:1, especialmente de 1:2 a 1:1.

En una realizacion alternativa, la relacion en peso del componente a) al componente b) es de de 1:20 a 1:0,20, preferentemente de 1:15 a 1:0,25, mas preferentemente de 1:10 a 1:0,30, aun mas preferentemente de 1:4 a 1:0,35, especialmente de 1:2 a 1:0,4.

En una realizacion preferida, el triglicerido que es miscible con el compuesto semifluorado es un triglicerido de cadena media (MCT).

En una realizacion especffica la relacion en peso del componente a), preferentemente F6H8, a MCT varfa de 4:1 a 1:4, especialmente de 3:2 a 2:3.

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El aceite de la emulsion acuosa descrito en el presente documento comprende preferentemente trigliceridos de cadena media. Los "trigliceridos de cadena media (MCT)" son una clase de aceite de trigliceridos que o bien puede derivarse de la naturaleza o bien ser sinteticos. Los MCT se forman a partir de acidos grasos de 6 a 14 carbonos, preferentemente de 6 a 12 carbonos, especialmente de 8 a 10 carbonos, de longitud. Los MCT pueden contener acido caprflico (por ejemplo, en una cantidad de aproximadamente el 50% a aproximadamente el 80% en peso de los MCT), un FA saturado de 8 carbonos (8:0). Los MCT pueden contener acido caprico (por ejemplo, en una cantidad de aproximadamente el 20% a aproximadamente el 50% en peso de los MCT), un FA saturado de 10 carbonos (10:0). Por ejemplo, los trigliceridos de cadena media pueden contener trigliceridos de acido caprflico y acido caprico, en una cantidad de al menos el 90% en peso de los trigliceridos de cadena media. La descripcion de los MCT para su uso en la presente descripcion puede, por ejemplo, cumplir con los requisitos de la monograffa de EP 0868, titulada "Triglycerides, Medium Chain" (Triglycerida saturate media) (EP 0868, 2008).

De acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, el triglicerido de cadena media (MCT) es glicerol que esta esterificado con acidos carboxflicos como se especifica en lo siguiente:

acido caproico en una cantidad del 2% en peso - o inferior;

acido caprflico en una cantidad que varfa de aproximadamente el 50 a aproximadamente el 80% en peso; acido caprico en una cantidad que varfa de aproximadamente el 20 a aproximadamente el 50% en peso; acido laurico en una cantidad del 3% en peso o inferior;

acido mirfstico en una cantidad del 1% en peso o inferior, basandose el % en peso (% p) en el peso total de los acidos grasos.

Los trigliceridos de cadena media (MCT) son excelentes disolventes para los compuestos semifluorados. De acuerdo con la invencion, pueden usarse uno o mas MCT. El MCT esta disponible comercialmente como, por ejemplo, Miglyol 812 (SASOL GmbH Alemania), o CRODAMOL CGT-PN (Croda Inc, Nueva Jersey).

De acuerdo con otra realizacion preferida de la presente invencion, la emulsion comprende un MCT que consiste en glicerol que esta esterificado con acidos grasos que comprende al menos el 50% en peso de acidos grasos seleccionados de entre el grupo de acidos grasos que tienen 7, 9 y 11 atomos de carbono. El preferido es triheptanoina.

La cantidad del triglicerido b), preferentemente los trigliceridos de cadena media en la emulsion de la presente invencion puede variar del 2 al 40, preferentemente del 5 al 25, y mas preferentemente del 8 al 18% en peso (% p), en base al peso total de la emulsion.

En un aspecto preferido de la invencion, la cantidad del compuesto semifluorado a) y el triglicerido b), que es preferentemente el triglicerido de cadena media, varfa del 5 al 40% en peso, preferentemente del 10 al 30% en peso, especialmente del 15 al 25% en peso, en particular del 18 al 22% en peso, por ejemplo preferentemente el 20% en peso, en base al peso total de la emulsion.

Un buen equilibrio de una alta concentracion del compuesto semifluorado y una excelente estabilidad a largo plazo puede lograrse si la relacion en peso del compuesto de carbono semifluorado a) al triglicerido, que es preferentemente el triglicerido de cadena media (MCT) varfa de 1:20 a 1:0,7, preferentemente de 1:15 a 1:0,8, mas preferentemente de 1:10 a 1:0,9, mas preferentemente de 1:4 a 1:1, especialmente de 1:2 a 1:1, por ejemplo, aproximadamente 1:1,5.

En una realizacion alternativa, la relacion en peso del componente a) al componente b) es de 1:20 a 1:0,20, preferentemente de 1:15 a 1:0,25, mas preferentemente de 1:10 a 1:0,30, aun mas preferentemente de 1:4 a 1:0,35, especialmente de 1:2 a 1:0,4.

La emulsion de la invencion comprende el compuesto semifluorado y preferentemente el triglicerido de cadena media (MCT). De acuerdo con un aspecto de la invencion, los componentes de aceite de la emulsion forman una solucion homogenea a 20 °C. El MCT y el compuesto semifluorado como el F6H8 son miscibles a 20 °C y por lo tanto forman una solucion homogenea. La fase oleosa puede comprender componentes de aceite adicionales, tales como trigliceridos de acidos grasos de cadena larga a base de aceite vegetal o aceites marinos como aceite de pescado. La cantidad de los componentes de aceite adicionales se ajusta preferible de forma que se mantenga una fase oleosa completamente miscible. Generalmente, la cantidad de componentes de aceite que son diferentes del compuesto semifluorado y el triglicerido b), que es preferentemente el mCt, es inferior al 50 por ciento en peso (% p), preferentemente inferior al 40% en peso, mas preferentemente inferior al 30% en peso, aun mas preferentemente inferior al 20% en peso, especialmente inferior al 10% en peso, en particular inferior al 5% en peso o carece esencialmente de los mismos, basandose la cantidad en el peso total de los componentes de aceite.

La relacion en peso de MCT a trigliceridos de cadena larga (LCT) en la emulsion de la invencion generalmente puede variar de 1:1 a 10000:1 o mas, preferentemente varfa de 3:2 a 1000:1, mas preferentemente varfa de 3:1 a

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Los aceites que pueden estar presentes en las emulsiones de la invencion y que son diferentes de MCT pueden seleccionarse de "trigliceridos de cadena larga (LCT)".

En ciertas realizaciones, el aceite puede comprender un aceite vegetal. "Aceite vegetal" se refiere al aceite derivado de semillas de plantas o nueces. Los aceites vegetales son normalmente "trigliceridos de cadena larga" (LCT), formados cuando tres acidos grasos (generalmente de 14 a 22 carbonos en longitud, con enlaces insaturados en numeros y ubicaciones variables, dependiendo de la fuente del aceite) forman enlaces ester con los tres grupos hidroxilo del glicerol. En ciertas realizaciones, los aceites vegetales de grado altamente purificado (tambien llamados "superrefinados") se usan para garantizar la seguridad y la estabilidad de las emulsiones de aceite en agua. En ciertas realizaciones pueden usarse aceites vegetales hidrogenados, que se producen mediante hidrogenacion controlada del aceite vegetal.

Los aceites vegetales ejemplares incluyen, pero no se limitan a, aceite de almendra, aceite de babasu, aceite de semilla de grosella negra, aceite de borraja, aceite de canola, aceite de ricino, aceite de coco, aceite de mafz, aceite de semilla de algodon, aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de palma, aceite de palmiste, aceite de colza, aceite de cartamo, aceite de soja, aceite de girasol y aceite de sesamo. Las formas hidrogenadas y/o parcialmente hidrogenadas de estos aceites tambien pueden usarse. En realizaciones especfficas, el aceite adicionalmente comprende aceite de cartamo, aceite de sesamo, aceite de mafz, aceite de oliva y/o aceite de soja. En realizaciones mas especfficas, el aceite adicionalmente comprende aceite de cartamo y/o aceite de soja.

En realizaciones especfficas en las que el aceite adicionalmente comprende aceite de soja, el aceite de soja puede tener un contenido de acido palmftico (p/p) de entre el 9 y el 13%, un contenido de acido estearico de entre el 2,5% y el 5%, un contenido de acido oleico de entre el 17% y el 30%, un contenido de acido linoleico de entre el 48% y el 58%, y un contenido de acido linolenico de entre el 5% y el 11%.

Ademas, en una realizacion especffica, la emulsion acuosa de la invencion puede comprender trigliceridos estructurados. Un "triglicerido estructurado", tal como se usa en el presente documento, es un triglicerido que comprende trigliceridos o mezclas de trigliceridos que tienen al menos un grupo de acido graso con una longitud de cadena de 6 a 12 atomos de carbono y al menos un grupo de acido graso con una longitud de cadena de carbono de mas de 12 unidades de carbono.

Un componente adicional de la emulsion de la invencion es un emulsionante. Preferentemente, el emulsionante se selecciona del grupo que consiste en fosfolfpidos, tensioactivos anfoteros e ionicos tales como sales de acidos grasos.

El emulsionante puede estar presente en la emulsion en una cantidad de hasta el 10% en peso, preferentemente del 0,5 al 5% en peso, en base al peso total de la emulsion.

Preferentemente, el emulsionante es un fosfolfpido o una mezcla de fosfolfpidos.

En un aspecto, el emulsionante puede comprender lecitinas, preferentemente lecitinas de origen natural tales como lecitina de soja, lecitina de huevo, lecitina de aceite de girasol, esfingosina, gangliosidos, fitoesfingosina y combinaciones de los mismos. La lecitina hidrogenada, es decir, el producto de la hidrogenacion controlada de lecitina, tambien puede usarse adicionalmente en el emulsionante.

Los ejemplos de fosfolfpidos utiles en la presente invencion incluyen, pero no se limitan a, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol, acido fosfatfdico, liso-fosfatidilcolina y mezclas de los mismos. El componente de fosfolfpido de las composiciones puede ser o bien un fosfolfpido simple o bien una mezcla de varios fosfolfpidos. Los fosfolfpidos usados pueden ser naturales o sinteticos, pero deben ser aceptables para la administracion parenteral, especialmente intravenosa.

Una lista no exhaustiva de fosfolfpidos adecuados que pueden estar presentes adicionalmente en el emulsionante se enumera a continuacion:

Acidos fosfatfdicos, incluidos acido 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfatfdico, sal de sodio (DMPA, Na), acido 1,2- dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatfdico, sal de sodio (DPPA, Na), acido 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfatfdico, sal de sodio (DSPA, Na); fosfocolinas, incluidas 1,2-dilauroil-sn-glicero-3-fosfocolina (DLPC), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3- fosfocolina (DMPC), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC); fosfoetanolaminas, incluidas 1,2-dilauroil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DLPE), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3- fosfoetanolamina (DMPE), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DPPE), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3- fosfoetanolamina (DSPE); fosfogliceroles, incluidos 1,2-dilauroil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, sal de sodio (DLPG, Na), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, sal de sodio (DMPG, Na), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-sn-1-glicerol, sal de amonio (DMP-sn-1-G, NH4), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, sal de sodio (DPPG, Na), 1,2-diestearoil-sn- glicero-3-fosfoglicerol, sal de sodio (DSPG, Na), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfo-sn-1-glicerol, sal de sodio (DSP-sn- 1G, Na); fosfoserinas, incluida 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfo-1-serina, sal de sodio (DPPS, Na); fosfolfpidos de cadena mixta, incluidos 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC), 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-

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fosfoglicerol, sal de sodio (POPG, Na), 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, sal de amonio (POPG, NH4); lisofosfolfpidos, incluidos 1-palmitoil-2-liso-sn-glicero-3-fosfocolina (P-liso-PC), 1-estearoil-2-liso-sn-glicero-3- fosfocolina (S-liso-PC); fosfolfpidos pegilados, incluidos N-(carbonil-metoxipolietilenglicol 2000)-MPEG-2000-DPPE, sal de sodio, N-(carbonil-metoxipolietilenglicol 5000)-MPEG-5000-DsPE, sal de sodio, N-(carbonil- metoxipolietilenglicol 5000)-MPEG-5000-DPPE, sal de sodio, N-(carbonil-metoxipolietilenglicol 750)-MPEG-750- DSPE, sal de sodio, N-(carbonil-metoxipolietilenglicol 2000)-MPEG-2000-DSPE, sal de sodio.

En una realizacion, la cantidad de fosfolfpido en la emulsion de la presente invencion, en peso en base al peso total de la composicion, se encuentra dentro de un intervalo del 0,1 al 30% en peso. En ciertas realizaciones, el fosfolfpido puede estar presente dentro de un intervalo del 0,5 al 15% en peso, incluyendo del 0,8 al 10% en peso, tal como del 1 al 5% en peso.

En una realizacion ejemplar, la cantidad de fosfolfpido en la emulsion acuosa de la presente invencion es de hasta el 10% en peso (% p), preferentemente del 0,5 al 5% en peso en base al peso total de la emulsion.

En una realizacion, el emulsionante comprende lecitina de huevo que comprende el 60-80% p/p, tal como el 67% p/p, de fosfatidilcolina; el 10-20% p/p, tal como el 15% p/p, de fosfatidiletanolamina; <=3% p/p, tal como el 2% p/p, de esfingomielina; y <=3% en p/p, tal como el 1% p/p, de lisofosfatidilcolina.

La "lecitina de huevo PL90" (Fresenius Kabi AB) es un ejemplo de una lecitina de huevo que tiene tal contenido de fosfolfpidos.

En particular, pueden lograrse buenos resultados con un emulsionante que comprende una lecitina que comprende de aproximadamente el 80 a aproximadamente el 85% en peso de fosfatidilcolina;

de aproximadamente el 7,0 a aproximadamente el 9,5% en peso de fosfatidiletanolamina;

menos del 3% en peso de lisofosfatidilcolina;

menos del 0,5% en peso de lisofosfatidiletanolamina; y

de aproximadamente el 2 a aproximadamente el 3% en peso de esfingomielina.

De acuerdo con una realizacion preferida de la presente invencion, el emulsionante comprende una mezcla de fosfolfpidos y glicolfpidos. Sorprendentemente, se ha encontrado que las mezclas de fosfolfpidos y glicolfpidos mejoran ademas la estabilidad de almacenamiento de las emulsiones a temperaturas superiores (40 °C). En particular, estas mezclas estabilizan las emulsiones incluso en condiciones de estres como la esterilizacion de las emulsiones. Las emulsiones de la invencion estan generalmente esterilizadas, por ejemplo a 121 °C durante 15 min a una presion de 2 bares en un autoclave giratorio.

Los glicolfpidos son lfpidos con un carbohidrato unido. Los glicolfpidos son lfpidos de membrana carentes de fosforo de las membranas celulares donde uno o mas mono u oligosacaridos estan conectados a un lfpido. Los lfpidos son acidos grasos que estan conectados a traves de enlaces ester con glicerol o a traves de enlaces amida con esfingosina.

En una realizacion preferida, la emulsion de la invencion comprende adicionalmente glicolfpidos, que se seleccionan preferentemente de gliceroglicolfpidos, como mono galactosildiglicerido o glicoesfingolfpidos o cerebrosidos.

En una realizacion preferida, la cantidad de glicolfpidos es del 5 al 30% en peso, preferentemente del 10 al 28% en peso en base al peso total de la suma de glicolfpido y fosfolfpido. Las mezclas de fosfolfpidos y glicolfpidos estan disponibles comercialmente como Lipoid S 75 ex Lipoid GmbH, Alemania.

En una realizacion preferida especial el emulsionante comprende

de aproximadamente el 68 a aproximadamente el 73% en peso de fosfatidilcolina;

de aproximadamente el 7 al 10% en peso de fosfatidiletanolamina;

menos de aproximadamente el 3% en peso de lisofosfatidilcolina; y

de aproximadamente el 14 a aproximadamente el 25% en peso de glicolfpidos, basandose todo el peso en la cantidad total de la suma de glicolfpidos y fosfolfpidos.

La emulsion comprende preferentemente del 0,5 al 5% en peso, mas preferentemente del 1,0 al 4,0% en peso de un emulsionante, basandose la cantidad en el peso total de la emulsion.

La emulsion de la invencion es preferentemente una emulsion de aceite en agua en la que la fase acuosa es la fase continua y la fase oleosa es la fase discontinua.

Como se senalo anteriormente, la emulsion de aceite-en-agua de la presente invencion comprende ademas un

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medio acuoso. "Medio acuoso" o "fase acuosa" se refiere a un liquido que contiene agua. En algunas realizaciones, el medio acuoso es agua y/o una solucion amortiguadora acuosa.

La emulsion acuosa, preferentemente la emulsion de aceite en agua, de la invencion puede comprender del 70 al 98% en peso, preferentemente del 70 al 90% en peso de agua, en base al peso total de la emulsion.

En algunas formas de realizacion, la emulsion puede comprender de 0 a 4 mM, preferentemente de 0,5 a 3 mM de un agente amortiguador fisiologicamente compatible.

En algunas realizaciones, las emulsiones acuosas de acuerdo con la presente invencion comprenden opcionalmente un co-tensioactivo. Los co-tensioactivos adecuados para su uso en las emulsiones de la presente invencion son aquellos que impiden la floculacion y/o coalescencia de la emulsion de lfpidos. Los co-tensioactivos ejemplares incluyen, pero no se limitan a colesterol, acido oleico, oleato, Tween80 (monooleato de PEG-sorbitan), HCO-60, Solutol H15 (polioxietileno-660-hidroxiestearato), PEG-400 (polietilenglicol), Pluronic F68 (BASF), Cremofor EL (polioxietileno-35-ricinoleato), o la sal de un acido biliar, tal como acido desoxicolico. En otras realizaciones, el co- tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en acidos grasos C12-C22, sales de los mismos y/o mezclas de los mismos, como de acidos grasos C16-C20, sales de los mismos y/o mezclas de los mismos, o acidos grasos C18, sales de los mismos y/o mezclas de los mismos. En realizaciones especfficas, el acido graso es monoinsaturado.

En algunas realizaciones, el co-tensioactivo puede estar presente en la emulsion en una cantidad (% p) superior o igual al 0,005%, superior o igual al 0,01%, o superior o igual al 0,02%. De acuerdo con cualquiera de estas realizaciones, el co-tensioactivo puede estar presente en una cantidad (% p) inferior o igual al 4%, inferior o igual al 1%, o inferior o igual al 0,04%.

En realizaciones especfficas, el co-tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en acidos grasos de cadena larga, como acido palmftico, acido oleico o acido estearico, o las sales alcalinas de los mismos. El oleato y/o el acido oleico, particularmente el oleato de sodio, son co-tensioactivos particularmente adecuados.

En ciertas realizaciones en las que el co-tensioactivo es oleato y/o acido oleico, el co-tensioactivo puede estar presente en una cantidad (% p) igual o superior al 0,005% en peso, igual o superior al 0,01% en peso, o igual o superior al 0,02% en peso, De acuerdo con cualquiera de estas realizaciones, el co-tensioactivo puede estar presente en una cantidad (% p) inferior o igual al 0,5% en peso, inferior o igual al 0,2% en peso, inferior o igual al 0,1% en peso, o inferior o igual al 0,05% en peso. En realizaciones especfficas, el co-tensioactivo es oleato de sodio y esta presente en una cantidad del 0,03% en peso (0,3 g/l). Las emulsiones descritas en el presente documento pueden ser adecuadas para infusion por via parenteral, tal como infusion por via intravenosa. En realizaciones especfficas, la concentracion de ciertos co-tensioactivos, por lo tanto, se mantiene a un mfnimo para evitar efectos secundarios como irritacion, inhibicion del citocromo P450, etc. En realizaciones especfficas, Pluronic F68 (poli(etilenglicol)-13-poli(propilenglicol-co-propilenglicol) esta presente en una cantidad inferior al 0,7% en peso, o inferior al 0,5% en peso, En otras realizaciones especfficas, Solutol-HS (Macrogol-15-hidroxiestearato) esta presente en una cantidad inferior al 1,2% en peso, o inferior al 1 % en peso.

La emulsion de aceite en agua de acuerdo con la invencion puede comprender un agente de tonicidad. Tales composiciones pueden tener una osmolalidad en el intervalo de 200-1000 mOsm/kg, preferentemente 220 a 800 mOsm/kg, especialmente 250 a 600 mOsm/kg.

De acuerdo con realizaciones especfficas de la invencion, las emulsiones pueden ser isotonicas e isosmoticas. Las composiciones pueden tener una osmolalidad de 220-600 mOsm/kg, o de 230 a 360 mOsm/kg.

Los agentes de tonicidad adecuados incluyen cloruro de potasio o de sodio, trahalosa, sacarosa, sorbitol, glicerol, glucosa, xilitol, manitol, polietilenglicol, propilenglicol, albumina, aminoacidos y mezclas de los mismos. En ciertas realizaciones, una osmolalidad de 270 a 330 mOsm/kg, tal como 280 a 300 mOsm/kg, se logra con un agente que tambien aumenta la presion osmotica, como glicerol, dextrosa, lactosa, sorbitol o sacarosa.

En una realizacion, el agente de tonicidad es un poliol fisiologicamente aceptable, como glicerol, sorbitol o xilitol. En una realizacion especffica, el agente de tonicidad es glicerol.

Asf, de acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, la emulsion adicionalmente comprende un agente de tonicidad, preferentemente glicerol.

El agente de tonicidad puede estar presente en una cantidad que varfa del 0,1 al 10% en peso, preferentemente del 0,5 al 8% en peso, mas preferentemente del 1 al 5% en peso, en base al peso total de la emulsion.

El agente de tonicidad se usa generalmente en una cantidad que no tiene efectos biologicos adversos, pero que es suficiente para proporcionar composiciones isosmoticas y/o isotonicas. Cuando el glicerol es el agente de tonicidad, el glicerol puede estar presente en el intervalo del 2 al 5% (% p), tal como del 2,1% al 2,9% (% p), incluyendo del 2,3% al 2,7%. En realizaciones especfficas, las emulsiones de la presente invencion comprenden el 2,5% de glicerol (25 g/l). En una realizacion adicional, el agente de tonicidad esta presente en una cantidad del 2,5% en peso o superior, en base al peso total de la emulsion.

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En algunas realizaciones, las emulsiones de acuerdo con la presente invencion tienen un pH dentro del intervalo de pH de 6,0 a pH 9,0, tal como de pH 6,5 a pH 8,5, incluyendo un pH de 7,5 a 8,5, tal como de 8,0 a 8,5. En una realizacion alternativa, el pH puede variar dentro de un intervalo de 5,0 a 9,0. El pH de las composiciones puede ajustarse mediante procedimientos conocidos en la tecnica, por ejemplo, mediante el uso de una base apropiada que neutraliza la carga negativa de los acidos grasos, mediante el uso de un amortiguador apropiado, o una combinacion de los mismos. Una variedad de bases y amortiguadores es apropiada para su uso con las emulsiones de la presente invencion. Un experto en la tecnica apreciara que la adicion de amortiguador a la emulsion no solo afectara al pH final, sino tambien a la fuerza ionica de la emulsion. Los amortiguadores de alta fuerza ionica pueden afectar negativamente el potencial zeta de la emulsion y son, por lo tanto, no deseables. En una realizacion especffica, se ajusta el pH al valor deseado mediante la adicion de hidroxido de sodio, como un hidroxido de sodio 0,1 N o de hidroxido de sodio 1 N. Con el fin de estabilizar ademas la emulsion de la invencion contra procesos oxidativos puede estar presente un antioxidante. En una realizacion preferida, la emulsion comprende adicionalmente un antioxidante, preferentemente alfa-tocoferol.

La emulsion de acuerdo con la presente invencion comprenden opcionalmente uno o mas aditivos farmaceuticamente aceptables, tales como aditivos agentes acidificantes, alcalinizantes, de union, quelantes, complejantes, solubilizantes, antisepticos, conservantes (incluidos antimicrobianos y antioxidantes), agentes de suspension, agentes estabilizantes, agentes humectantes, agentes modificadores de viscosidad, disolventes, crioprotectores, diluyentes, lubricantes y otros materiales biocompatibles o agentes terapeuticos. En ciertas realizaciones, dichos aditivos ayudan a estabilizar aun mas la emulsion o a hacer que las emulsiones de la presente invencion sean biocompatibles.

De acuerdo con una realizacion preferida de la invencion, la densidad a 25 °C de la fase oleosa, en particular, la densidad de la mezcla consistente de trigliceridos b) que es preferentemente MCT, y el compuesto semifluorado, varfa entre 0,9 a 1,1 g/cm3, mas preferentemente varfa entre 0,95 y 1,05 g/cm3 o de aproximadamente 0,95 a aproximadamente 1,10 g/cm3. En un aspecto adicional de la invencion, la densidad de la fase oleosa no se desvfa mas de 10%, preferentemente no mas de 5%, especialmente no mas de 3% de la densidad de la fase acuosa. La fase acuosa comprende todos los ingredientes que estan en la fase continua y la fase oleosa comprende todos los componentes que estan en la fase discontinua.

Se ha encontrado que pueden lograrse buenos resultados de diagnostico con emulsiones que tienen un tamano de gota de aceite en el intervalo nanometrico. De acuerdo con un aspecto preferido de la invencion, las partfculas de la fase discontinua tienen un diametro de partfcula promedio preferentemente que varfa de 1 a 500 nm, mas preferentemente de 10 a 400 nm y aun mas preferentemente de 50 a 350 nm, medido con espectroscopia de correlacion de fotones (PCS) a 25 °C.

Una realizacion adicional de la invencion es la emulsion de la invencion para su uso como medicamento.

Se ha encontrado que el compuesto semifluorado presente en la emulsion de la presente invencion es absorbido por los monocitos/macrofagos de tal manera que las celulas se vuelven marcadas especfficamente, que pueden usarse para el diagnostico en los procedimientos de imagenologfa. Sorprendentemente, se encontro un potencial de diagnostico para la visualizacion de procesos inflamatorios, en particular del sistema cardiovascular, y ganglios linfaticos.

Por lo tanto, las emulsiones de las invenciones son adecuadas para su uso como agente de contraste o agente mejorador del contraste. En particular, para las tecnicas de imagenologfa por resonancia magnetica nuclear, las emulsiones son adecuadas ya que dicho compuesto de carbono semifluorado de las emulsiones esta enriquecido y se distribuye especfficamente en los tejidos inflamatorios.

Otro aspecto de la invencion es la emulsion de la invencion para su uso como agente mejorador de contraste o agente de contraste para la deteccion de diagnostico, por medio de un procedimiento de imagenologfa que usa tecnicas MR.

Una realizacion adicional de la presente invencion es la emulsion de la invencion para su uso como agente de contraste para la deteccion de diagnostico, por medio de un procedimiento de imagenologfa, en particular en el que el proceso de imagenologfa se basa en la medicion de la resonancia magnetica nuclear del isotopo 19F.

La evaluacion de las mediciones correspondientes y la conversion de las mismas en una imagen es conocida para un experto, como puede observarse, por ejemplo, en:

Haacke M E, Brown W R, Thompson M R, Venkasetan R: Magnetic Resonance Imaging-Physical Principles and Sequence Design, Wiley, Nueva York, 1999;

Yu J X, Kodibagkar V D, Cui W, Mason R P. 19F: a versatile reporter for noninvasive physiology and pharmacology using magnetic resonance; Curr Med Chem. 12: 819-48, 2005;

Wernick M N, Aarsvold J N Emission Tomography: The Fundamentals of PET and SPECT, Academic Press, Londres, 2004.

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Las emulsiones son, en particular, adecuadas para detectar procesos inflamatorios. De acuerdo con un aspecto adicional de la invencion, la emulsion es para la deteccion de diagnostico, por medio de un proceso de imagenologfa, de los procesos inflamatorios seleccionados del grupo que consiste en reaccion inflamatoria periferica a infartos como infarto de miocardio, apoplejfa; inflamacion de organos, como miocarditis, encefalitis, meningitis; esclerosis multiple; inflamacion del aparato gastrointestinal, como enfermedad de Crohn; inflamacion de los vasos, como arteriosclerosis, en particular, placas vulnerables; deteccion de abscesos y tambien artritis, en la que el proceso de imagenologfa se basa en medir la resonancia magnetica nuclear del isotopo 19F.

En otro aspecto de la invencion, la emulsion es para su uso en la deteccion de diagnostico, basada en procedimientos de imagenologfa no invasivos del sistema cardiovascular, incluidos el miocardio, arterias y venas; reacciones inflamatorias que ocurren en procesos patologicos tales como infarto de miocardio, miocarditis, aterosclerosis y trombosis que conducen a procesos inflamatorios y degenerativos de la vasculatura encontrados en neurologfa tales como apoplejfa o tumor; pulmologfa tales como trombosis, inflamacion, sarcoidosis; gastroenterologfa tales como tumores, enfermedades inflamatorias intestinales como enfermedad de Crohn; y reumatologfa tales como enfermedades autoinmunitarias de los vasos tales como arteritis de Takayasu.

Una realizacion adicional de la invencion se refiere a un procedimiento que comprende adquirir procedimientos de imagenologfa no invasiva de un paciente al que la emulsion de la invencion se ha administrado previamente con el fin de disolverla en el torrente sangufneo del paciente.

Preferentemente, el procedimiento de imagenologfa no invasiva es un procedimiento de imagenologfa RM.

En un aspecto adicional preferido del procedimiento de la invencion, el proceso de imagenologfa se basa en medir la resonancia magnetica nuclear del isotopo 19F o el isotopo 19F y el isotopo 1H.

La presencia de los isotopos 19F y/o 18F en los compuestos fluorados permite la ventaja de usar dispositivos ya conocidos y existentes en el hospital, a saber, espectroscopia de resonancia nuclear magnetica con isotopos 19F y/o el uso de la espectroscopia de emision de positrones de isotopos 18F.

Por el uso de la emulsion de acuerdo con la invencion pueden detectarse las siguientes condiciones patologicas particularmente:

1) Visualizacion de los ganglios linfaticos y su ampliacion patologica

a) canceres que afectan directamente a los ganglios linfaticos: enfermedad de Hodgkin, linfomas de no Hodgkin;

b) metastasis tumorales, por ejemplo, de cancer de mama;

c) infecciones vfricas y bacterianas, por ejemplo, sffilis, tuberculosis;

2) Reacciones de inflamacion en la zona fronteriza de

a) infartos, por ejemplo, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular;

b) tumores;

3) inflamacion de organos: miocarditis, encefalitis, meningitis (meninges cerebrales y espinales);

4) esclerosis multiple;

5) inflamaciones del aparato gastrointestinal, por ejemplo, enfermedad de Crohn;

6) inflamacion de los vasos, por ejemplo, arteriosclerosis, especialmente llamados "placas vulnerables";

7) deteccion de abscesos;

8) deteccion de artritis.

La emulsion de la invencion se administra habitualmente por via parenteral antes de iniciar el proceso de imagenologfa. En una realizacion preferida, la emulsion se administra por via intravenosa o intraarticular.

Un aspecto adicional de la invencion es un procedimiento para la deteccion de un proceso inflamatorio, que comprende:

(a) administrar la emulsion de la invencion a un sujeto en necesidad de ello; y

(b) formar imagenes del compuesto que contiene fluor en dicho sujeto, seleccionandose dicho proceso inflamatorio preferentemente del grupo que consiste en:

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un cancer que afecta directamente los ganglios linfaticos; un proceso inflamatorio en la zona fronteriza de un infarto o tumor; inflamacion de un organo; esclerosis multiple; inflamacion del aparato gastrointestinal; inflamacion de vasos; artritis; y abscesos.

Una realizacion adicional de la invencion es un procedimiento para la fabricacion de la emulsion de la invencion que comprende las siguientes etapas:

i) proporcionar una mezcla que comprende

a) un compuesto semifluorado de formula I:

CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero de 1 a 10.

b) un triglicerido que es miscible con el compuesto semifluorado a 20 °C, preferentemente un triglicerido de cadena media (MCT) y

c) un emulsionante, y

d) agua; y

ii) homogeneizar la mezcla, preferentemente homogeneizando la mezcla en un homogeneizador de alta presion;

iii) opcionalmente esterilizar la emulsion.

En otro aspecto el procedimiento de fabricacion comprende las etapas de:

i) disolver el compuesto semifluorado en triglicerido b), que es preferentemente el triglicerido de cadena media; y

ii) emulsionar la fase oleosa en la fase acuosa, preferentemente en presencia del emulsionante.

De acuerdo con una realizacion especffica, la composicion acuosa se homogeneiza con el fin de producir una suspension homogenea, antes de que dicha composicion acuosa se combine con la composicion oleosa.

En una realizacion especffica, la homogeneizacion se realiza a una presion superior o igual a 350 bares, o superior o igual a 370 bares.

En realizaciones especfficas, los procedimientos de fabricacion de las emulsiones implican las etapas de disolver el emulsionante en medio acuoso (en lugar de en aceite), anadir la fase oleosa a la fase acuosa (en lugar de al reves), y homogeneizacion a una presion superior o igual a 350 bareskPa. Estas etapas dan lugar a emulsiones con propiedades ventajosas en terminos de tamano de partfcula y estabilidad de emulsion.

En otra realizacion especffica, la emulsion se empaqueta en recipientes sellados, y se esteriliza, como por calentamiento a al menos 121 °C (por ejemplo, de 121 °C a 123 °C) durante un mfnimo de 15 minutos de tiempo de mantenimiento. El programa de autoclave puede ser un ciclo giratorio.

Una realizacion adicional de la invencion es un recipiente que contiene la emulsion de la invencion. El material del recipiente se selecciona preferentemente del grupo que consiste en vidrio y polfmeros organicos y mezclas de los mismos. Los polfmeros organicos preferidos son polietileno y/o polipropileno.

En una realizacion preferida del procedimiento de fabricacion de la invencion, dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) preparar una mezcla del modo siguiente

a-1) preparar una mezcla que comprende agua y un emulsionante,

a-2) preparar una mezcla homogenea que comprende el compuesto semifluorado y el triglicerido,

a-3) combinar la mezcla obtenida en la etapa a-1) con la mezcla obtenida en la etapa a-2); y

b) homogeneizar la mezcla obtenida en la etapa a), preferentemente homogeneizar la mezcla obtenida en la etapa a) con un homogeneizador de alta presion.

En una realizacion especialmente preferida del procedimiento de fabricacion de la emulsion de la presente invencion, dicho procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) preparar una mezcla del modo siguiente

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a-1) preparar una mezcla que comprende los componentes solubles en agua de la emulsion, preferentemente una mezcla que comprende agua, emulsionante y agente de tonicidad, en particular una mezcla que comprende agua, fosfolfpido, oleato de sodio y glicerol,

a-2) preparar una mezcla homogenea de los componentes solubles en aceite de la emulsion, preferentemente una mezcla que comprende el compuesto semifluorado, el triglicerido y un antioxidante, mas preferentemente una mezcla que comprende F6H8, MCT y alfa-tocoferol,

a-3) combinar la mezcla obtenida en la etapa a-1) con una mezcla obtenida en la etapa a-2); y

b) homogeneizar la mezcla obtenida en la etapa a) para preparar una pre-emulsion;

c) homogeneizar adicionalmente la mezcla obtenida en la etapa b) mediante un homogeneizador de alta presion.

Sorprendentemente, se ha encontrado que los mejores resultados pueden obtenerse homogeneizando la emulsion en el etapa b) y la etapa c) en un intervalo de temperatura preferido de entre 30 a 70 °C, mas preferentemente entre 40 y 60 °C.

En una realizacion preferida adicional del procedimiento de fabricacion se aplica una etapa d) en la que la emulsion se esteriliza, preferentemente por calentamiento a al menos 121 °C durante un mfnimo de 15 minutos.

Las cantidades y los componentes preferidos de la emulsion se mencionan en combinacion con la emulsion de la invencion.

Un aspecto adicional de la invencion es un procedimiento para operar un tomografo de resonancia magnetica. En este procedimiento se emite un campo magnetico alterno y se detecta la absorcion del campo magnetico emitido por una muestra a examinar.

Estas etapas de procedimiento corresponden a la operacion habitual de un tomografo de resonancia magnetica. El procedimiento de la invencion sirve para la deteccion de un compuesto semifluorado de formula I:

CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero que varfa de 2 a 10 en una emulsion de la presente invencion.

El procedimiento de la invencion se caracteriza en que la frecuencia del campo magnetico alterno esta entre B x 40,045600 MHz/T y B x 40,065600 MHz/T, siendo B la intensidad de campo magnetico en Tesla.

Con el fin de obtener la frecuencia anteriormente mencionada para el campo magnetico alterno se han realizado las siguientes etapas de procedimiento:

En primer lugar, la frecuencia del campo magnetico alterno ha sido elegida con B x 40,05560 MHz/T. Con el fin de detectar un compuesto desconocido que contiene un atomo de fluoro se usa una amplia excitacion y recepcion de ancho de banda (por ejemplo +/- 5 kHz). En el centro de esta banda de excitacion esta la frecuencia de excitacion del nucleo de atomo de fluoro (40,05560 MHz/T). Esta frecuencia se define como la posicion cero.

Durante la excitacion el espectro caracterfstica del compuesto desconocido que contiene fluor aparece en una cierta frecuencia de desplazamiento. Si este no es el caso, el ancho de banda elegido (por ejemplo +/- 5 kHz) tiene que ser ampliado.

Despues de que el espectro especffico se haya encontrado en una cierta frecuencia el espectro de excitacion se desplaza eligiendo una frecuencia de desplazamiento apropiada. Los inventores han encontrado que una frecuencia de desplazamiento de +/- 100 Hz a +/- 10.000 Hz es apropiada. Al elegir una frecuencia tal la excitacion y recepcion de ancho de banda pueden reducirse significativamente, obteniendo asf una reduccion del ruido de modo que pueda obtenerse una mejor senal a la relacion de ruido.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a un procedimiento para detectar en una muestra que se va a examinar un compuesto semifluorado de formula I:

CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero que varfa de 2 a 10 en una emulsion de la invencion. En este procedimiento se emite un campo magnetico alterno y se detecta la absorcion del campo magnetico emitido por una muestra a examinar. Estas etapas corresponden a la operacion habitual de un tomografo de resonancia magnetica.

De acuerdo con la presente invencion, al menos una imagen de protones de fluor 19F se superpone sobre una imagen de proton 1H. Con ello, los protones de la imagen 1H se muestran como una imagen de escala en grises y

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los protones de la imagen de fluor 19F se muestran mediante el uso de un gradiente de color, indicando un extremo de este gradiente de color una baja concentracion de protones de fluor 19F e indicando el otro extremo de este gradiente de color una alta concentracion de protones de fluor 19F.

Estas etapas de procedimiento pueden aplicarse, por ejemp|o, para asignar la senal de9 fluor detectada 1a una cierta parte del cuerpo de un paciente. Para este proposito es posible interpolar el volumen F y el volumen H con el fin de obtener una mejor resolucion. Como se ha explicado, la imagen de proton 1H se visualiza como una imagen de escala en grises, mientras que la imagen de proton de fluor 19F puede mostrarse, por ejemplo, como un gradiente de color que cambia de negro a verde o de azul a rojo, por ejemplo.

En primer lugar, se genera un video tridimensional. Sin embargo, se prefiere que se generen las imagenes bidimensionales subsiguientes de cada capa, mostrando cada una de las mismas una seccion transversal de la muestra que se va a examinar. Se prefiere que se calculen las proyecciones de maxima intensidad (MIP). Estas imagenes de capas bidimensionales muestran de manera comprensiva en cuales esta presente la estructura anatomica del agente de contraste.

En una realizacion preferida de la presente invencion, las senales de alteracion generadas por los protones de fluor 19F en una segunda muestra que no se va a examinar se eliminan. Tales senales de alteracion pueden, por ejemplo, generarse por el agente de contraste en el hfgado o el bazo de un paciente. El agente de contraste en el hfgado puede causar una senal de alteracion muy fuerte cuando durante un proceso de imagenologfa se pretende detectar, por ejemplo, una inflamacion en la region del corazon de un paciente, ya que el hfgado se localiza muy cerca del corazon.

Con el fin de eliminar tales senales de alteracion es posible comparar el valor para la concentracion de fluor en un primer pixel con los valores de todos los pfxeles proximos en el espacio tridimensional alrededor de este primer pixel. Por este medio, si la diferencia entre los valores para la concentracion de fluor de dos pfxeles adyacentes es inferior a un umbral, se considera que estos dos pfxeles pertenecen a un conjunto de pfxeles, por ejemplo, al hfgado del paciente. Este conjunto de alteracion de pfxeles puede eliminarse de la imagen obtenida si este conjunto no representa la muestra que se va a examinar (en este caso el corazon del paciente). La eliminacion de este conjunto de alteracion puede realizarse, por ejemplo, manualmente.

Cuando se superponen imagenes de fluor 19F con la imagen de proton 1H se prefiere que estas imagenes se hayan obtenido sin cambiar la geometrfa de medicion, lo que significa que ambos conjuntos de datos contienen senales desde el mismo volumen.

El ruido que puede estar presente en las imagenes de proton de fluor 19F puede suprimirse promediando las diferentes tomas. La desviacion estandar a del ruido se mide, para lo que puede usarse 3 ■ a o 5 ■ a como un umbral para la senal que se va a detectar. Esto significa que solo las senales que son tres veces mas altas que la desviacion estandar del ruido son consideradas como una senal "real". Este umbral puede adaptarse por el usuario de modo que es posible adaptar las imagenes obtenidas a la cantidad de ruido. Se prefiere que las ultimas etapas de procedimiento mencionadas no se apliquen a las imagenes de proton 1H, puesto que estas tienen una SNR mayor.

Todas las etapas de procedimiento que se han discutido en el contexto de la ultima invencion mencionada estan basicamente relacionadas con las etapas de procesamiento de senal y por lo tanto pueden realizarse independientemente a partir del proceso de adquisicion de datos en cualquier momento y en cualquier lugar. En particular, al realizar estas etapas de procedimiento no requieren la presencia de un cuerpo de paciente.

Las realizaciones preferidas de las emulsiones usadas en los procedimientos de la invencion se describen junto con la emulsion de la invencion.

A continuacion, la invencion se ilustra adicionalmente por medio de ejemplos:

Seccion experimental Ejemplos 1-3

Las emulsiones de la seccion experimental en general, se han preparado del modo siguiente:

1) mezclar el emulsionante con agua;

2) preparar una mezcla de los componentes hidrofobos tales como MCT, compuesto fluorado y opcionalmente a-tocoferol;

3) anadir la mezcla acuosa de la etapa 1) a la mezcla oleosa de la etapa 2);

4) homogeneizar la emulsion con un homogeneizador de alta presion 3 veces a 700 bares y 2 veces a 1000bares en un homogeneizador de alta presion Panda® Plus 2000.

La Tabla 1 muestra las composiciones de emulsion de aceite en agua y la Tabla 2 muestra los datos de estabilidad de almacenamiento respectivos a 20 °C. Las cantidades referidas en la Tabla son en % en peso (% p) en base al peso total de la emulsion.

Tabla 1: Composiciones de emulsion de aceite en agua de acuerdo con los ejemplos 1 a 3 de la invencion y el 5 ejemplo comparativo 9

Componente

Ejemplo 1 Ejemplo 2 Ejemplo 3 Ejemplo Comparativo 9

F6H8 1}

4 6 8 20

MCT2)

16 14 12

Lipoid E 80 3)

2 2 2 2

Agua

Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100

11 Perfluorhexiloctano ex Novaliq, Alemania

2) Trigliceridos de cadena media (50-80% en peso de acido graso C8 y 20-50% en peso de acido graso C10)

3) fosfolfpidos de huevo ex lipoidea GmbH, Alemania

10 Tabla 2: Datos de estabilidad de almacenamiento de las emulsiones de acuerdo con los ejemplos 1 a 3

Ejemplo

Tiempo de almacenamiento [dfas] Zpromedio [nm] I.P. pH

1

0 148,3 0,073 8,09

7

158,1 0,093 6,61

14

169,2 0,098 6,12

28

173,9 0,098 5,83

2

0 166,1 0,054 8,10

7

173,6 0,075 6,59

14

184,2 0,061 6,19

28

185,0 0,069 5,96

3

0 155,7 0,075 8,11

7

167,7 0,065 6,62

14

176,7 0,068 6,08

28

178,5 0,090 5,98

El diametro de partfcula promedio (Zpromedio) y el fndice de polidispersidad (I.P.) se han determinado mediante espectroscopia de correlacion de fotones (PCS).

La Figura 1 muestra los datos para las pruebas de estabilidad de almacenamiento tal como se refleja en la Tabla 2, asf como los datos con referencia al ejemplo comparativo 9.

5 La Figura 1A muestra el crecimiento de partfcula de las emulsiones de acuerdo con los ejemplos 1 a 3, asf como el ejemplo comparativo 9. La medicion de crecimiento de partfculas comenzo inmediatamente despues de la fabricacion de la emulsion.

La Figura 1A muestra que el diametro de partfcula promedio de las gotas de aceite dentro de 28 dfas aumenta en aproximadamente el 11% para el ejemplo 1, en aproximadamente el 15% para el ejemplo 2, en aproximadamente el 10 17% para el ejemplo 3 y en aproximadamente el 23% para el ejemplo comparativo 9. El aumento de crecimiento de

partfcula es mayor cuanto mayor es la concentracion del compuesto semifluorado.

La Fig. 1B muestra la dependencia del aumento de crecimiento de partfcula de la concentracion del compuesto semifluorado F6H8.

La Tabla 2A refleja los datos que se muestran en las Figuras 1, 1A y 1B. Las pruebas de almacenamiento se han 15 realizado a 20 °C.

Tabla 2 A

Ejemplo

Tiempo de almacenamiento [dfas] ZPromedio [nm] P.I. Aumento de crecimiento de partfcula absoluto [nm] Aumento de crecimiento de partfcula relativo [%]

1

0 148,3 0,073 0,0 0,0

7

158,1 0,093 7,5 4,5

14

169,2 0,098 18,1 10,9

28

173,9 0,098 18,9 11,4

2

0 166,1 0,054 0,0 0,0

7

173,6 0,075 12,0 7,7

14

184,2 0,061 21,0 13,5

28

185,0 0,069 22,8 14,6

3

0 155,7 0,075 0,0 0,0

7

167,7 0,065 9,8 6,6

14

176,7 0,068 10,9 14,1

28

178,5 0,090 25,6 17,3

Ejemplo

0 132,4 0,181 0,0 0,0

Comparativo 9

7 154,1 0,183 21,7 16,4

14 156,2 0,187 23,8 18,0

28 163,4 0,177 31,0 23,4

Se ha encontrado que puede lograrse un equilibrio optimizado de una alta concentracion del compuesto semifluorado (que es necesario para lograr un buen contraste en la medicion MR) y una emulsion estable de almacenamiento si la densidad de las gotas de aceite (MCT y el compuesto semifluorado) es aproximadamente la 5 misma que la densidad de la fase acuosa. Mediante la adaptacion de la densidad de la fase oleosa a la densidad de los fenomenos de coalescencia de fase acuosa de las gotas, asf como mediante fenomenos de sedimentacion, que desestabilizan la emulsion, puede disminuirse.

La Figura 1C muestra los resultados de la medicion de densidad de diferentes mezclas de MCT y F6H8.

A aproximadamente el 38,5% en peso de F6H8 y aproximadamente el 61,5% en peso de MCT, (peso basado en el 10 peso total de la fase oleosa) la densidad de la mezcla oleosa corresponde a la densidad de la fase acuosa.

EJEMPLOS COMPARATIVOS 1-8, 9A y 10-12

El bromuro de perfluorooctilo (PFOB) es un agente de contraste conocido para la espectroscopia de resonancia magnetica. Se ha encontrado que el PFOB no puede disolverse en MCT. Por lo tanto, se han preparado emulsiones en las que el PFOB se estabiliza mediante bromuro de perfluorodecilo (PFDB), que puede disolverse en PFOB.

15 La Tabla 3 y la Tabla 4 muestran las composiciones de emulsion de aceite en agua de los ejemplos comparativos 18, 9A y 10-12 y la Tabla 6 muestra los datos de estabilidad de almacenamiento respectivos a 20 °C. Las cantidades mencionadas en las Tablas 2 y 4 son en % en peso (% p) en base al peso total de la emulsion.

Tabla 3: Ejemplos Comparativos 1 a 4

Componente

Ejemplo Comparativo1 Ejemplo Comparativo2 Ejemplo Comparativo 3 Ejemplo Comparativo 4

PFOB 1}

20 20 20 20

PFDB 2)

0.2 1 2 4

Lipoid E 80 3)

2 2 2 2

Agua

Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100

20 11 Bromuro de perfluorooctilo ex ABCR GmbH & Co. KG, Alemania

2) Bromuro de perfluorodecilo ex ABCR GmbH & Co. KG, Alemania

3) Fosfolfpido de huevo ex Lipoid GmbH, Alemania

Tabla 4: Ejemplos comparativos 5 a 8

Componente

Ejemplo Comparativo 5 Ejemplo Comparativo 6 Ejemplo Comparativo 7 Ejemplo Comparativo 8

PFOB 1

20 20 20 20

PFDB 2)

0.2 1 2 4

Lipoid S 73 3)

2 2 2 2

Agua

Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100

1) Bromuro de perfluorooctilo

2) Bromuro de perfluorodecilo

5 3) fosfolfpido ex Lipoid GmbH, Alemania

Tabla 5: Ejemplos Comparativos 9A y 10 a 12

Componente

Ejemplo Comparativo 9A Ejemplo Comparativo 10 Ejemplo Comparativo 11 Ejemplo Comparativo 12

PFOB 1)

20 20 20 20

PFDB 2)

0.2 1 2 4

Lipoid S 75 3)

2 2 2 2

Agua

Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100

1) Bromuro de perfluorooctilo ex ABCR GmbH & Co. KG, Alemania

2) Bromuro de perfluorodecilo ex ABCR GmbH & Co. KG, Alemania

10 3) Fosfolfpido de soja ex Lipoid GmbH, Alemania

Tabla 6: Datos de estabilidad de almacenamiento de las emulsiones de acuerdo con los Ejemplos comparativos 1 a 8, 9A y 10 a 12

Ejemplo Comparativo

Tiempo de almacenamiento [dfas] ZAverage [nm] P.I. pH

0 168,5 0,128 6,93

1

7 314,3 0,197 5,59

14 310,0 0,217 5,14

28 316,5 0,242 4,52

2

0 119,7 0,187 6,75

7

270,8 0,150 5,55

14

278,4 0,221 5,35

28

267,6 0,187 5,32

3

0 157,7 0,155 7,11

7

249,0 0,156 5,85

14

263,7 0,153 5,53

28

178,4 0,061 5,74

4

0 157,5 0,193 6,99

7

244,7 0,121 6,01

14

267,5 0,120 5,71

28

259,2 0,154 5,55

5

0 141,5 0,222 7,25

7

318,8 0,160 6,47

14

377,9 0,250 6,40

28

485,8 0,358 6,04

6

0 130,1 0,282 2,27

7

290,5 0,134 6,98

14

444,3 0,224 6,62

28

365,5 0,257 6,73

7

0 146,7 0,184 7,75

7

269,0 0,171 6,96

14

289,8 0,160 5,83

28

315,4 0,156 6,56

8

0 141,9 0,217 7,58

7

230,8 0,129 6,68

14

253,0 0,117 6,69

28

346,6 0,133 5,90

9A

0 170,1 0,117 7,29

7

272,8 0,114 6,38

14

283,2 0,121 5,79

28

249,6 0,071 5,23

10

0 152,4 0,137 7,18

7

241,8 0,094 5,96

14

233,5 0,100 5,59

28

243,3 0,092 5,29

11

0 165,5 0,128 7,18

7

217,5 0,115 6,04

14

224,1 0,136 6,03

28

224,8 0,096 5,66

12

0 144,9 0,135 7,24

7

207,0 0,127 5,78

14

212,4 0,092 5,97

28

208,9 0,107 5,71

La Figura 2 muestra los datos para las pruebas de estabilidad de almacenamiento como se refleja en la Tabla 6. En la parte izquierda de la Fig. 2 se representan los datos para las emulsiones de acuerdo con los Ejemplos comparativos 1 a 4 y en la parte derecha los datos para las emulsiones de acuerdo con los Ejemplos comparativos 5 5 a 8.

La Figura 2A muestra los datos para las pruebas de estabilidad de almacenamiento para el Ejemplo 9A y 10 a 12.

Como puede observarse en la Tabla 6 y en la Figura 2, asf como en la Fig. 2A, las emulsiones de los Ejemplos Comparativos 1 a 8, 9A y 10 a 12 muestran un aumento significativo del tamano de partfcula promedio durante un tiempo de almacenamiento de 28 dfas.

10 Por el contrario, las emulsiones de acuerdo con los ejemplos 1 a 3 de las invenciones son mucho mas estables en almacenamiento. Durante un tiempo de almacenamiento de 28 dfas puede observarse solo un ligero aumento en el

tamano de partfcula promedio de la emulsion (Fig. 1 y Tabla 2).

Prueba con diferente emulsionante

Sorprendentemente, se ha encontrado que las emulsiones de la presente invencion pueden estabilizarse aun mas mediante la seleccion del emulsionante.

5 El emulsionante Lipid S PC-3 se considera menos adecuado (Fig. 2) y no ha sido probado ademas para las emulsiones de la invencion.

La Tabla 7 muestra emulsiones de la presente invencion de acuerdo con los ejemplos 4 y 5.

Tabla 7: Composiciones de emulsion de aceite en agua de acuerdo a los ejemplos 4 y 5

Componente

Ejemplo 4 Ejemplo 5

F6H8 D

8 8

MCT2)

12 12

Lipoide E 80 3)

2

Lipoid S 75 4)

2

Oleato de sodio

0,03 0,03

alfa-tocoferol

0,02 0,02

Agua

Ad 100 Ad 100

10

1) Perfluorhexiloctano ex Novaliq, Alemania

2) Trigliceridos de cadena mediana (50-80% en peso de acido graso Ca; 20-50% en peso de acido graso C10)

3) Fosfolfpido de huevo ex Lipoid GmbH, Alemania

4) Fosfolfpido ex Lipoid GmbH, Alemania (fosfolfpidos de soja con 14 a 25% en peso de glicolfpido)

15 Las emulsiones de acuerdo con el ejemplo 4 y el ejemplo 5 se analizan ademas para determinar si las condiciones de esterilizacion afectan a la estabilidad de las emulsiones. Las emulsiones se han esterilizado en un autoclave rotatorio y se comparan con emulsiones no esterilizadas (condicion de esterilizacion: calentamiento a 121 °C durante 15 min a 2 bares).

La Tabla 8 muestra los datos de estabilidad de las emulsiones de acuerdo con el ejemplo 4 y 5 sin esterilizacion y 20 despues de la esterilizacion.

Tabla 8: Datos de estabilidad de almacenamiento para los ejemplos 4 y 5 de la invencion bajo condiciones esterilizadas y no esterilizadas

Ejemplo

Esterilizado/No esterilizado Almacenamiento tiempo [dfas] ZPromedio [nm] I.P. pH

4

No esterilizado 0 156,5 0,082 8,13

7

170,5 0,108 5,84

14

176,6 0,086 5,68

28

194,9 0,043 5,00

esterilizado

0 156,5 0,082 8,13

7

263,2 0,028 7,15

14

264,9 0,072 7,12

28

260,8 0,040 7,07

5

No esterilizado 0 170,6 0,102 8,00

7

176,9 0,080 6,40

14

177,7 0,075 5,12

28

167,0 0,067 4,07

Esterilizado

0 170,6 0,102 8,00

7

177,0 0,059 8,09

14

178,9 0,095 8,00

28

175,4 0,086 7,93

5 La Figura 3 muestra los datos para las pruebas de estabilidad de almacenamiento como se refleja en la Tabla 8. En la parte izquierda de la figura 3 se representan los datos para las emulsiones de acuerdo con el Ejemplo 4 y en la parte derecha de los datos para las emulsiones de acuerdo con el ejemplo 5.

La Figura 3 y la Tabla 8 muestran que la emulsion de acuerdo con el ejemplo 5 es mas estable que la emulsion del Ejemplo 4. La emulsion de acuerdo con el ejemplo 5 tambien es mas estable despues de que la emulsion se haya 10 esterilizado en un autoclave giratorio.

Ademas, las emulsiones del ejemplo 4 y 5 se han almacenado durante 168 dfas a 40 °C. Se ha encontrado sorprendentemente que la emulsion del Ejemplo 5, incluso a una temperatura de almacenamiento de 40 °C no cambio significativamente la estabilidad ffsica (Fig. 4).

5

10

15

20

25

30

35

La Fig. 4 muestra los resultados de prueba de 3 muestras de la emulsion de acuerdo con el ejemplo 5. La Fig. 3A muestra los resultados de prueba de 3 muestras de la emulsion de acuerdo con el ejemplo 4. Ejemplo 6 de la invencion:

Tabla 9: Composicion de emulsion de acuerdo con el Ejemplo 6

Componente

Ejemplo 6

F6H8

8

MCT

12

Lipoid S 75

2

alfa-tocoferol

0,02

Glicerol

2.5

Oleato de sodio

0.03

NaOH

Ad pH 8,2

Agua

Ad 100

La emulsion de acuerdo con el ejemplo 6 se ha preparado mediante la preparacion de una mezcla homogenea de F6H8, MCT y alfa-tocoferol a 50 °C. Por separado, una mezcla del emulsionante Lipoid S 75 y el oleato de sodio co- emulsionante junto con el glicerol y el agua se mezclan en un dispositivo de mezcla de rotor/estator (Ultra Turrax) a 50 °C a 15000 rpm durante 20 minutos. Subsiguientemente, la mezcla que comprende MCT, F6H8 y alfa-tocoferol

se proporciona a la mezcla acuosa y se homogeneiza a 50 °C con un Ultra Turrax (tipo T 25 ex IKA) a 20000 rpm

durante 20 minutos. La pre-emulsion obtenida se homogeneiza adicionalmente subsiguientemente en un homogeneizador de alta presion (APV tipo 1000/2000) [cinco ciclos a 500bares y, subsiguientemente, a 60bares].

La emulsion obtenida se esteriliza subsiguientemente a 121 °C durante 15 minutos en un autoclave.

Se ha encontrado sorprendentemente que la emulsion del Ejemplo 6 incluso a una temperatura de almacenamiento de 40 °C no cambio significativamente la estabilidad ffsica incluso despues de tres meses (Fig. 4A).

La Figura 4A muestra los resultados de prueba de la emulsion de acuerdo con el ejemplo 6.

La composicion de emulsion del ejemplo 6 se ha usado para las mediciones de MRI in vivo.

Con el fin de comprobar si las emulsiones de F6H8/MCT pueden visualizarse in vivo por medio de MRI y detectarse en el tejido diana, se realizaron los primeros examenes farmacocineticos.

La Figura 5 muestra los efectos de la acumulacion de la sangre de una manera ejemplar.

La Figura 5 muestra la emulsion 6 de acuerdo de la invencion en el corazon como el tejido diana en acumulacion de la sangre. Las reconstrucciones en 3D ejemplares de la anatomfa T2 TSE y las secuencias 3D 19F de colores se han reconstruido en comun en un conjunto de datos a partir de una rata como un conjunto total de datos (A) y con el hfgado eliminado mediante computacion (B). En la fila de abajo, se muestra el conjunto de datos 3D completo (C) con el corazon como un detalle ampliado (D).

Por lo tanto, puede demostrarse que las emulsiones de acuerdo con la invencion pueden visualizarse in vivo en el miocardio. Ademas, se examino la representacion de un infarto en MRI. Los resultados se muestran en la Figura 6 siguiente.

La figura 6 muestra: (A) El torax de rata en seccion transversal en la zona miocardica in vivo en una imagen MRI ponderada en T2 (1.5 Tesla, Philips), que se superpone con la imagen 19F coloreada (1H/19F), con la misma geometrfa 24 h despues de la aplicacion de la emulsion de acuerdo con el Ejemplo 6. (B) El miocardio como un detalle ampliado de la imagen 1H/19F, que muestra el enriquecimiento del agente de contraste que contiene fluor en el nivel del infarto de miocardio, y el sitio de adhesion entre el pericardio y las costillas causado por la cirugfa. (C) Registro in situ del corazon de rata, que muestra una inflamacion muy pronunciada del pericardio (lfnea verde) al lado de la zona infartada.

Por lo tanto, puede demostrarse que el agente de contraste se enriquece en el parea infartada. Ademas, las imageries de MRI se compararon con las secciones histologicas, que se muestra en la Figura 7.

Figura 7: (A) El torax de rata en la seccion transversal en la zona miocardica in vivo en una imagen de MRI ponderada en T2 (1.5 Tesla, Philips), que se superpone con la imagen 19F coloreada (1H/19F), con la misma 5 geometrfa 24 h despues de la aplicacion de la emulsion de acuerdo con el Ejemplo 6. (B) El miocardio como un detalle ampliado de la imagen de 1H/19F, que muestra el enriquecimiento del agente de contraste que contiene fluor en el nivel del infarto de miocardio, y el sitio de adhesion entre el pericardio y las costillas causado por la cirugfa. (C) La tincion de HE de una seccion de eje corto histologica ejemplar [7 pm] del miocardio de rata infartada se muestra debajo de A. El area miocardica infartada se muestra en azul en la tincion de HE.

10 Las emulsiones se han probado en dos modelos:

el modelo de infarto de miocardio, cuya lfnea temporal se refleja en la figura. 8; y

el modelo de miocarditis, cuya lfnea temporal se refleja en la figura. 9.

Induccion de infarto

Se han usado como animales ratas SD que tienen un peso de 200 a 350 g.

15 Anestesia: Estos animales se sedan en una caja de anestesia mediante inhalacion de isoflurano, y despues se anestesian mediante una administracion intramuscular. , Debe garantizarse una anestesia que asegure la ausencia de dolor, incluso durante la anestesia. Por lo tanto, los animales reciben una mezcla de anestesia y analgesia con: 0,15 mg/kg de medetomidina + 0,05 mg/kg de fentanilo + 2,0 mg/kg de midazolam i.m.; la antagonizacion se efectua con 0,75 mg/kg atipamezol + 0,12 mg/kg de naloxona + 0,2 mg/kg s.c. Debido a nuestras experiencias anteriores 20 con flunixina (2,5 mg/kg s.c.), usamos la misma como preparacion para el tratamiento del dolor postoperatorio. Si la terapia fallara, consideramos una modificacion de la terapia de analgesico con buprenorfina (0,05 mg/kg s.c.).

Subsiguientemente, el animal recibe una administracion de atropina i.m. durante la intubacion posterior para apoyar la circulacion y para la proteccion contra irritaciones vagales.

Agentes de contraste a base de fluor en enfermedades cardiovasculares:

25 Aunque el uso de medetomidina es recomendable basicamente solo para animales con un sistema cardiovascular sano, debe esperarse en animales jovenes sanos (las medidas cardiotoracicas previstas se realizaron con animales que tiene un peso corporal de aproximadamente 200 g) que el mecanismo de Frank Starling aun no esta completamente maduro. Por lo tanto, la bradicardia mediada por la actividad antisimpaticotonica central de medetomidina puede no compensarse suficientemente mediante un aumento del volumen sistolico. La 30 administracion de atropina provoca un aumento del trabajo cardfaco. Sin embargo, la vasoconstriccion provocada por la estimulacion del receptor a2 periferico no cambia el flujo de sangre coronaria (asf como cerebral y renal) sustancialmente, de modo que no debe asumirse en este caso una carga cardiaca especffica, y el efecto cronotropico de la atropina para la situacion general de la circulacion debe ser predominante. Por lo tanto, se considera que una condicion circulatorio hipertensiva transitoria debe ser bien tolerada, lo que esta de acuerdo con 35 las observaciones clfnicas en la fase postoperatoria. Adicionalmente, siempre se toma la ligadura coronaria y su posible efecto (agudo) en el rendimiento de bombeo del corazon se toma en cuenta. Sin embargo, debido a la complejidad de la operacion manual y la varianza de la anatomfa coronaria de los animales de prueba, no puede formularse ninguna ley universal.

Los efectos hipertensivos son remitidos inmediatamente despues de la antagonizacion postoperatoria de 40 medetomidina, de modo que la duracion de la hipertension se mantiene dentro de lfmites razonables y, sobre todo, controlable.

Puesto que los animales estan intubados en el contexto de la medida operativa, existen riesgos de irritaciones vagales (con bradicardia consecutiva), por un lado, y de complicada intubacion en el caso de hipersalivacion, por el otro; este ultimo tambien es consecuente con nuestras propias experiencias. Estos riesgos pueden reducirse por una 45 administracion preoperatoria de atropina.

Con todo, se ha encontrado una indicacion para la administracion de atropina preoperativa.

Despues de haberse iniciado la etapa de tolerancia, la rata se afeita y se desinfecta en el lado izquierdo.

La rata se conecta posteriormente a la bomba de respiracion, que se ajusta a una frecuencia de 75-80 golpes por minuto y un volumen tidal a 2.0 ml (para ratas que pesaban 200-250 g). Es recomendable conectar el animal a la 50 bomba de respiracion lo mas tarde posible antes de que se inicie la toracotomfa, debido a que la respiracion artificial siempre significa otra intervencion en el organismo.

Despues de conectar la bomba de respiracion, el torax puede abrirse con unas pinzas curvas en el nivel de la quinta y sexta costillas. Esto debe hacerse con sumo cuidado, ya que el pulmon puede lesionarse muy facilmente de esta

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

manera. La cavidad toracica se debe abrir con una longitud de aproximadamente 1,0 cm a 1,5 cm para que se adapte el retractor de herida. Tan pronto como se haya creado una zona de operacion lo suficientemente grande, opcionalmente mediante una diseccion de tejidos blandos correspondiente, debe detectarse el curso de la arteria coronaria sinistra. Se origina desde la aorta entre el tronco pulmonar y el apendice auricular izquierdo, facilmente reconocible por una lfnea de grasa epicardica. Sin embargo, la arteria coronaria sinistra a menudo no puede ser vista, o solo en parte es asf, debidos a que los vasos coronarios de ratas no discurren superficialmente, sino dentro del miocardio. La rama principal de la arteria coronaria sinistra, la LAD (descendente anterior izquierda), discurre sustancialmente recta desde la rafz aortica al apice del corazon. Una de las ramas laterales proximales (D1 o D2) de la LAD se cierra mediante una ligadura coronaria. La sutura-ligadura de la rama lateral D1 o D2 se efectua mediante una sutura de un solo nudo. Una oclusion de la LAD (proximal) misma causarfa demasiado extendido un escenario de miocardio, a lo que solo rara vez sobreviven los animales. Subsiguientemente, la caja toracica se cierra en dos capas (suturas de costillas y de piel). Las costillas se cierran por dos o tres suturas de un solo nudo. Los musculos del pecho se disponen meramente uno sobre otro. La costura de la piel se cierra con una sutura de guante continua.

3 dfas despues de la ligadura las emulsiones que contienen fluorocarbono se administran a los animales. Despues de otras 24 horas se realiza el analisis MRI (ver Fig. 8)

Se proporciona a todos los animales analgesia cada 12 horas durante la totalidad de la duracion de prueba de 6 dfas: flunixina (Finadyne) 2,5 mg/kg de masa corporal s.c.

Los datos generales de desarrollo, tales como el peso y el comportamiento, se toman de todos los animales dos veces a la semana.

Cirugfa de infarto:

Estos animales se sedan en una caja de anestesia mediante inhalacion de isoflurano, y luego se anestesian mediante la administracion intramuscular de una solucion mixta Domitor®/Dormicum® (0,3 mg de medetomidina y 4 mg de midazolam por kg de peso corporal). Posteriormente, los animales reciben una administracion de atropina (0,01 mg de atropina por kg de masa corporal, s.c.) durante la intubacion posterior para apoyar a la circulacion y para la proteccion contra irritaciones vagales.

Examenes de MRI:

Estos animales reciben exclusivamente una anestesia por inhalacion (oxfgeno + isoflurano al 2,0%). Este ultimo se tolera bien, y los animales no tienen ninguna fase larga de vigilia despues.

Mientras que estan bajo la anestesia, se administra a los animales los agentes de contraste a base de fluor a traves de la vena de la cola.

Modelo de inflamacion del miocardio:

Todos los animales reciben una administracion i.v. de doxorrubicina o solucion salina isotonica una vez a la semana durante un perfodo de 6 semanas consecutivas. Cada administracion se efectua bajo anestesia general. Una semana despues de la ultima administracion se administra a los animales la emulsion de la invencion. 24 horas mas tarde se realiza el analisis de MRI.

La emulsion de acuerdo con el Ejemplo 6 se ha modificado de modo que el emulsionante ha sido reemplazado por un fosfolfpido pegilado. Se ha encontrado que la opsonizacion de las gotas de emulsion se reduce significativamente. Debido a este efecto se esperaba que la cantidad del compuesto de fluorocarbono (F6H8) en la zona de la inflamacion estuviera por debajo del lfmite de deteccion. Sin embargo, se ha encontrado sorprendentemente que la miocarditis podrfa incluso visualizarse en imagenes que se muestran en la Fig. 11.

En los dfas de examen en el MRI, los animales reciben anestesia por inhalacion (mezcla de isoflurano y de oxfgeno 1,5%-2,5%). Ademas, a los animales se les administra una dosis de los compuestos de agente de contraste a base de fluor a traves de la vena de la cola durante el examen dependiendo del grupo al que pertenecen. Despues del ultimo examen de MRI, el animal respectivo se sacrifica proporcionandole una sobredosis de isoflurano y los organos se retiran subsiguientemente.

Todos los animales reciben adicionalmente analgesia. Para este proposito se usa paracetamol AL, debido a que tiene solo un pequeno efecto antinflamatorio. Los animales reciben el paracetamol a traves del agua de bebida a una dosis de 150 mg/kg de peso corporal durante todo el perfodo experimental.

Los datos generales de desarrollo, como peso y comportamiento, se adquieren diariamente de todos los animales. Induccion de miocarditis:

Los animales reciben exclusivamente una anestesia por inhalacion (oxfgeno + isoflurano al 2,0% + gas de la risa). Este ultimo se tolera bien y no causa una fase de vigilia prolongada. Con el inicio de la anestesia, los animales reciben la analgesia correspondiente.

Examenes de MRI:

Los animales reciben exclusivamente anestesia por inhalacion (oxfgeno + isoflurano al 2,0%). Este ultimo se tolera bien y no produce a una fase de vigilia prolongada. Mientras que estan bajo anestesia, se administra a los animales un agente de contraste a base de fluor a traves de la vena de la cola.

5 Los resultados de MR de un infarto de un animal tratado con la composicion del Ejemplo 6 se reflejan en la Fig. 10 y de una miocarditis en la que el animal se trata con una emulsion tal como se describe en el Ejemplo 6 con la excepcion de que el emulsionante se ha sustituido por un fosfolfpido pegilado se reflejan en la Fig. ll.

Claims (15)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   1. Emulsion acuosa que comprende

   a) un compuesto semifluorado de formula I:

   CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

   en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero de 2 a 10.

   b) un triglicerido que es miscible con el compuesto semifluorado a 20 °C; y

   c) un emulsionante.
2. 2. Emulsion de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el compuesto semifluorado es perfluorohexiloctano (F6H8) y/o perfluorobutilpentano (F4H5).
3. 3. Emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones anteriores, en la que la cantidad del compuesto de carbono semifluorado a) y el triglicerido b), que es preferible un triglicerido de cadena media, varfa del 5 al 40% en peso, preferentemente del 10 al 30% en peso, particularmente del 15 al 25% en peso, en base al peso total de la emulsion.
4. 4. Emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones anteriores, en la que la relacion en peso del compuesto de carbono semifluorado a) al triglicerido b), que es preferentemente un triglicerido de cadena media (MCT), varfa de 1:20 a 1:0,20 , preferentemente de 1:15 a 1:0,25, mas preferentemente de 1:10 a 1:0,30, aun mas preferentemente de 1:4 a 1:0,35, particularmente de 1:2 a 1:0,4.
5. 5. Emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones anteriores para su uso como un agente de contraste o agente mejorador de contraste.
6. 6. Emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones anteriores para su uso como un agente mejorador de contraste o agente de contraste para la deteccion de diagnostico, por medio de un proceso de imagenologfa que usa tecnicas de MR.
7. 7. Emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en la deteccion de diagnostico, por medio de un proceso de imagenologfa, de procesos inflamatorios seleccionados del grupo que consiste en reaccion inflamatoria periferica a infartos tales como infarto de miocardio, apoplejfa; inflamacion de organos, tal como miocarditis, encefalitis, meningitis; esclerosis multiple; inflamacion del aparato gastrointestinal, tal como enfermedad de Crohn; inflamacion de los vasos sangufneos, tal como arteriosclerosis, en particular, placas vulnerables; deteccion de abscesos y tambien artritis, en el que el proceso de imagenologfa se basa en la medicion de la resonancia magnetica nuclear del isotopo 19F.
8. 8. Emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en la deteccion de diagnostico, basada en procedimientos de imagenologfa no invasiva del sistema cardiovascular, incluyendo el miocardio, arterias y venas; reacciones inflamatorias que ocurren en procesos patologicos tales como infarto de miocardio, miocarditis, aterosclerosis y trombosis que provocan procesos inflamatorios y degenerativos de la vasculatura encontrados en neurologfa tales como apoplejfa o tumor; pulmologfa tales como trombosis, inflamacion, sarcoidosis; gastroenterologfa, tales como tumores, enfermedades inflamatorias del intestino tales como la enfermedad de Crohn; y reumatologfa tales como enfermedades autoinmunitarias de los vasos sangufneos tales como arteritis de Takayasu.
9. 9. Uso de la emulsion de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5 en un proceso de imagenologfa por resonancia magnetica.
10. 10. Procedimiento para la fabricacion de la emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende las etapas de:

    a) preparar una mezcla mezclando

    - un compuesto semifluorado de formula I:

    CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

    en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero de 2 a 10,

    - un triglicerido que es miscible con el compuesto semifluorado a 20 °C,

    - un emulsionante; y

    - agua

    5

    10

    15

    20

    25

    30

    35

    40

    b) homogeneizar la mezcla obtenida en la etapa a); y

    c) esterilizar opcionalmente la emulsion.
11. 11. Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 10, que comprende las siguientes etapas:

    a) preparar una mezcla del modo siguiente

    a-1) preparar una mezcla que comprende agua y un emulsionante,

    a-2) preparar una mezcla homogenea que comprende el compuesto semifluorado y el triglicerido,

    a-3) combinar la mezcla obtenida en la etapa a-1) con la mezcla obtenida en la etapa a-2); y

    b) homogeneizar la mezcla obtenida en la etapa a), preferentemente homogeneizar la mezcla obtenida en la etapa a) con un homogeneizador de alta presion.
12. 12. Procedimiento para operar un tomografo de resonancia magnetica para la deteccion de un compuesto semifluorado de formula I:

    CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

    en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero de 2 a 10,

    en una emulsion tal como se define en una o mas de las reivindicaciones 1 a 8, comprendiendo el procedimiento las etapas de procedimiento:

    - emitir un campo magnetico alterno,

    - detectar la absorcion del campo magnetico emitido por la muestra que se va a examinar, caracterizado por que

    la frecuencia del campo magnetico alterno esta entre H ■ 40,05650 MHz/T y H ■ 40,06150 MHz/T, siendo H la intensidad de campo magnetico en Tesla.
13. 13. Procedimiento para detectar en una muestra que se va a examinar un compuesto semifluorado de formula I:

    CF3-(CF2)x-(CH2)y-CH3 (I)

    en la que x es un numero entero que varfa de 1 a 8 e y es un numero entero que varfa de 2 a 10 en una emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones 1 a 8,

    comprendiendo el procedimiento las etapas de procedimiento siguientes:

    - emitir un campo magnetico alterno,

    - detectar la absorcion del campo magnetico emitido por la muestra que se va a examinar, caracterizado por las siguientes etapas de procedimiento:

    - superponer al menos una imagen de proton de fluor 19F sobre una imagen de proton 1H,

    por lo que la imagen de los protones de 1H se visualiza como una imagen de escala en grises y la imagen de los protones de fluor 19F se muestran usando un gradiente de color, indicando un extremo de este gradiente de color una baja concentracion de 19F e indicando el otro extremo de este gradiente de color una alta concentracion de 19F.
14. 14. Procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 13, caracterizado por las siguientes etapas de procedimiento:

    - eliminar senales de alteracion generadas por los protones de fluor 19F en una segunda muestra que no se va a examinar mediante las siguientes etapas de procedimiento:

    - comparar el valor de la concentracion de fluor en un primer pixel con valores de todos los pfxeles en el espacio tridimensional alrededor de este primer pixel,

    por lo que, si la diferencia entre los valores de la concentracion de fluor de dos pfxeles adyacentes se encuentra por debajo de un umbral se considera que estos dos pfxeles pertenecen a un conjunto de pfxeles,

    - eliminar este grupo alterador de pfxeles de la imagen obtenida, si el conjunto no representa la muestra que se va a examinar.
15. 15. Procedimiento que comprende adquirir procedimientos de imagenologfa no invasiva de un paciente al que se ha administrado la emulsion de acuerdo con una o mas de las reivindicaciones 1 a 8 previamente con el fin de disolverla en el torrente sangufneo del paciente.