CN105142681B

CN105142681B - 含半氟碳化合物的造影剂

Info

Publication number: CN105142681B
Application number: CN201480016964.3A
Authority: CN
Inventors: 索斯藤·凯勒; 多里斯·勒特莱恩; 尤尔根·斯密特; 托勒·特里奇; 菲利普·史托瓦; 艾卡特·弗莱克
Original assignee: B Braun Medical Inc
Current assignee: B Braun Medical Inc
Priority date: 2013-03-25
Filing date: 2014-03-18
Publication date: 2019-03-12
Anticipated expiration: 2034-03-18
Also published as: TW201524521A; JP6356780B2; PT2978455T; RU2672588C2; EP2978455A1; MX2015013746A; IL239203A0; HUE030818T2; IL239203A; MX362702B; PL2978455T3; KR102210774B1; WO2014154531A1; CN105142681A; ES2616884T3; RU2015130915A; KR20150132836A; CA2893799C; US20230355810A1; RU2015130915A3

Abstract

本发明涉及一种水性乳液，所述水性乳液包括：(a)通式(I)所示的半氟化化合物：CF₃‑(CF₂)_x‑(CH₂)_y‑CH₃ (I)。其中，x为一从1至8的整数，y为一从2至10的整数，(b)与所述半氟化化合物在20℃易混合的甘油三酯；及(c)乳化剂。

Description

含半氟碳化合物的造影剂

技术领域

本发明涉及一种由特定的半氟碳化合物、中链甘油三酯(MCT)和乳化剂组成的水性乳液，以及该乳液作为造影剂或者造影增强剂的使用。进一步地，本发明涉及所述乳液在使用磁共振成像(MRI,Magnetic Resonance Imaging)的炎症病理条件的诊断检测中的使用。

背景技术

炎症疾病是目前为止全世界范围内发病率和死亡率最重要的起因。虽然在许多情况下对于急性炎症疾病(主要由病原体引起)有有效的诊断和治疗方法，然而慢性炎症疾病的诊断是最难的，并且慢性炎症疾病的治疗仅限于对症措施。非侵入性成像方法，例如超声心动、计算机断层成像和核磁共振光谱，可以提供详细的解剖信息，从而成为评估器官功能的有用工具。然而，所提到的这些方法至今都不能以高空间分辨率明确地检测炎症过程。

在Arens等人的文章(Nature Biotechnology，2005年8月，第8期，第 23卷：983-987页)中描述了用于跟踪免疫细胞的方法。通过全氟-15-冠-5醚的磁共振成像，试图检测活体内表现出免疫相关性的细胞。他们使用在活体外通过氟-15-冠-5醚使其带电的树突状细胞，随后，将其注射入小鼠组织或静脉注射入小鼠体内，在活体内检查其成活率。专利文献WO 2005/072780 A2和WO 03/075747 A2也涉及到了类似的检查。在G.M.Lanza等人的文章 (Medica Mundi，2003年4月，第47期，第1卷：34-39页)中描述了用于靶向细胞的顺磁性纳米粒子的使用。在这种方法中，顺磁性纳米粒子被用于在¹H-磁共振成像中产生信号消光，而以¹⁹F标记的介质作为探针。

专利文献WO-A-2005/072780涉及在体外对离体细胞通过全氟化碳进行标记，其公开了在活体外以全氟化碳标记的离体细胞在注射后适合于研究有机体内的细胞迁移。

Oku,Naoto等人的文章(Biochimica et Biophysica Acta，1996年，第 1280卷：149-154页)涉及以用于研究“脂质体输送”的¹⁸F-标记的葡萄糖而带电的脂质体的使用。这些研究是通过PET(Positron Emission Computed Tomography，正电子发射型计算机断层显像)诊断进行的。

专利文献US 2009/0280055 A1中公开了通过成像方法进行诊断时全氟溴辛烷的使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方法，该方法可通过成像方法实现特定病理条件如炎症过程的可视化，并且从而实现感染区域的识别。

本发明的另一目的在于提供一种氟碳基诊断试剂，所述氟碳基诊断试剂用于心血管疾病的特异性诊断，特别是心血管系统的炎症过程的诊断，更具体地，心肌炎或炎症性心肌病的诊断。

本发明的又一目的在于提供生物相容性水包油型乳液，所述生物相容性水包油型乳液可用于磁共振波谱，并且即使在压力条件(如杀菌)下可稳定储存。

本发明的第一实施例为水性乳液，所述水性乳液包括：

(a)通式(I)的半氟化化合物：

CF₃-(CF₂)_x-(CH₂)_y-CH₃ (I)

其中，x为一从1至8的整数，y为一从2至10的整数；

(b)与所述半氟化化合物在20℃易混合的甘油三酯；以及

(c)乳化剂。

本发明另一实施例的水性乳液包括：

(a)通式(I)的半氟化化合物：

CF₃-(CF₂)_x-(CH₂)_y-CH₃ (I)

其中，x为一从1至8的整数，y为一从2至10的整数；

(b)中链甘油三酯(MCT)；以及

(c)乳化剂。

本发明的乳液优选为必须包括半氟化化合物的水包油型乳液。

在本发明的意义范围内所述半氟化化合物为半氟化烷烃。所述半氟化烷烃包括一碳氟基团和一碳氢基团。通常，半氟化烷烃遵循以下术语规则：FXHY中X代表由氟原子取代的碳原子数，Y代表由氢原子取代的碳原子数。例如，全氟己基正辛烷以表达式F6H8表示。

F6H8为下述结构：

适合于本申请的乳液的半氟化化合物以通式(I)表示：

CF₃-(CF₂)_x-(CH₂)_y-CH₃ (I)

其中，x为一从1至8的整数，y为一从1至10的整数。

在一实施例中，通式(I)中的x范围为2至6，优选为3至6，更优选为4至6，特别地x为5。

在另一优选实施例中，通式(I)中的y范围为2至9，优选为3至8，更优选为5至8，进一步优选为6至8，特别地y为7。

就乳液的成像和稳定性而言，当使用通式(I)中y大于x的半氟化化合物时可以获得好的效果。

特别优选半氟化化合物为全氟己基正辛烷(F6H8)和/或全氟丁基正戊烷(F4H5)。

本发明中另一化合物为与所述半氟化化合物在20℃易混合的甘油三酯 (以下称化合物(b))。

在本发明的意义范围内，所述甘油三酯(化合物(b))为在20℃时与半氟化化合物(化合物(a))易混合，混合并随后在20℃储存24h后所述化合物(a)和化合物(b)不形成分离的连续相。

在一优选实施例中，所述化合物(b)可以任何比例容易混合于所述化合物(a)。特别地，所述化合物(a)和化合物(b)在重量比为从1:20至 1:0.7范围内易混合，优选为1:15至1:0.8，更优选为1:10至1:0.9，进一步优选为1:4至1:1，特别地为1:2至1:1。

在一可选实施例中，所述化合物(a)和化合物(b)的重量比为从1:20 至1:0.20，优选为1:15至1:0.25，更优选为1:10至1:0.30，进一步优选为1:4至1:0.35，特别地为1:2至1:0.4。

在一优选实施例中，所述与半氟化化合物易混合的甘油三酯为中链甘油三酯(MCT)。

在一特别实施例中，所述化合物(a)(优选为F6H8)与MCT的重量比范围为4:1至1:4，优选为3:2至2:3。

这里描述的水性乳液的油优选包括中链甘油三酯。“中链甘油三酯”( MCTS)为一类可以自然得到或者合成的甘油三酯油。所述MCT可由长度为6至14个碳原子的脂肪酸得到，优选为6至12个碳原子，特别地为8至 10个碳原子。所述MCT可包括辛酸(例如，数量为所述MCT重量的约 50％至约80％)、8碳饱和脂肪酸(8:0)。所述MCT可包括癸酸(例如，数量为所述MCT重量的约20％至约50％)、10碳饱和脂肪酸(10:0)。例如，所述中链甘油三酯可包括辛酸和癸酸的甘油三酯，数量为所述中链甘油三酯重量的至少90％。本公开中使用的MCT的描述可以，例如，满足欧洲药典 0868(EP 0868,2008)中的中链甘油三酯(Triglycerides,Medium Chain，欧洲药典名称为Triglycerida saturate media)的要求。

根据本发明的另一方面，所述中链甘油三酯(MCT)为用以下羧酸酯化了的丙三醇：

2wt％或以下的己酸；

约50wt％至约80wt％的辛酸；

约20wt％至约50wt％的癸酸；

3wt％或以下的十二烷酸；

1wt％或以下的十四酸，其中，wt％是基于所述脂肪酸的总重量。

所述中链甘油三酯(MCT)为所述半氟化化合物的良好溶剂。根据本发明，可以使用一种或多种MCT。MCT是可在市面上买到的，例如有 Miglyol 812(德国SASOL股份有限公司)或者CRODAMOL GTCC-PN(新泽西Croda股份有限公司)。

根据本发明的另一优选实施例，所述乳液包括一种MCT，所述MCT由通过脂肪酸酯化了的丙三醇组成，所述脂肪酸中包括至少50wt％的脂肪酸选自具有7个、9个和11个碳原子的脂肪酸组。所述MCT优选为三庚酸甘油酯。

本发明的乳液中的所述甘油三酯(b)(优选为中链甘油三酯)的含量范围可为基于所述乳液总重量的2～40wt％，优选为5～25wt％，最优选为 8～18wt％。

根据本发明的一优选方面，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的含量(优选为所述中链甘油三酯)为基于所述乳液总重量的5～40wt％，优选为10～30wt％，特别为15～25wt％，尤其为8～22wt％，例如约为20wt％。

当所述半氟化碳化合物(a)和所述甘油三酯(优选为中链甘油三脂(MCT)) 的重量比在1:20至1:0.7时所述半氟化化合物可以在高浓度和卓越的长期稳定性之间实现较好的平衡，所述重量比优选为1:15至1:0.8，更优选为1:10 至1:0.9，更优选为1:4至1:1，特别地为1:2至1:1，例如，约为1:1.5。

在一可选实施例中，所述化合物(a)和化合物(b)的重量比为从1:20至1:0.20，优选为1:15至1:0.25，更优选为1:10至1:0.30，进一步优选为1:4 至1:0.35，特别地为1:2至1:0.4。

本发明的乳液包括半氟化化合物以及优选为中链甘油三酯(MCT)的甘油三酯(b)。根据本发明的一个方面，所述乳液的油组分在20℃形成均质溶液。所述MCT和半氟化化合物如F6H8在20℃易混合，从而形成均质溶液。所述油相可以包括另一油组分，例如基于植物油、水产油如鱼油的长链脂肪酸甘油酯。该另一油组分的数量优选调整为可以维持完全混合的油相。通常，所述不同于半氟化化合物和甘油三酯(b)(优选为MCT)的油组分的含量为少于50wt％，优选为少于40wt％，更优选为少于30wt％，进一步优选为少于20wt％，特别地少于10％，尤其地少于5％或实质上没有，其中，所述重量分数为基于油组分的总重量。

本发明的乳液中所述MCT与长链甘油三酯(LCT)的重量比范围通常为从1:1至10000:1或以上，优选为3:2至1000:1，更优选为3:1至500:1，特别地，为5:1至200:1。

存在于本发明的乳液中且不同于MCT的油可以选自长链甘油三酯 (LCT)。

在某些实施例中，所述油可包括植物油。所述植物油指的是从植物的种子或坚果中提炼的油。植物油是典型的长链甘油三酯(LCT)，其在当三个脂肪酸(通常长度为14至22个碳原子，取决于油的来源具有不同数量和不同位置的不饱和键)通过丙三醇的三个羟基形成酯键时得到。在某些实施例中，高纯度(也叫作特级精炼)的植物油用于保证水包油型乳液的安全和稳定性。在某些实施例中，可以使用通过控制植物油的氢化得到的氢化植物油。

典型的植物油包括但不限于杏仁油、巴巴苏仁油、黑加仑籽油、玻璃苣油、芥花油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉花籽油、橄榄油、花生油、棕榈油、棕榈仁油、菜籽油、红花油、豆油、葵花油、芝麻油。这些油的氢化油和/或部分氢化油也可以使用。在特定实施例中，所述油还包括红花油、芝麻油、玉米油、橄榄油和/或豆油。在更多特定实施例中，所述油还包括红花油和/或豆油。

在所述油还包括豆油的特定实施例中，所述豆油可含有9～13wt％的棕榈酸、2.5～5wt％之间的硬脂酸、17～30wt％的油酸、48～58％的亚油酸以及 5～11％的亚油酸。

进一步地，在一特定实施例中，本发明的水性乳液可包括结构化的甘油三酯。这里“结构化的甘油三酯”为具有至少一链长度为6至12个碳原子的脂肪酸根和至少一链长度为12个碳原子以上的脂肪酸根的甘油三酯或者是这些甘油三酯组成的混合物。

本发明的乳液中另一组分是乳化剂。优选地，所述乳化剂选自由磷脂、两性离子表面活性剂如脂肪酸盐组成的组中。

所述乳化剂在乳液中的含量可达到乳液总重量的10wt％，优选为 0.5wt％至5wt％。

优选地，所述乳化剂为磷脂或磷脂的混合物。

一方面，所述乳化剂可包括卵磷脂，优选为自然存在的卵磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、葵花油卵磷脂、鞘氨醇、神经节苷脂、植物鞘氨醇及上述卵磷脂的各种组合。氢化卵磷脂，即通过控制卵磷脂的氢化得到的产品，也可在乳化剂中使用。

在本发明中有用的典型的磷脂包括但不限于磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酸、溶血磷脂酰胆碱及其混合物。该组成物中的磷脂成分可以是单一的磷脂或多种磷脂的混合物。使用的磷脂可以是天然的或者合成的，但应当可用于注射实施，尤其是静脉注射。

下列为还可添加到本申请的乳化剂中的适合的磷脂的非详尽清单：

磷脂酸，包括1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酸，钠盐(DMPA， Na)，1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酸，钠盐(DPPA，Na)，1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酸，钠盐(DSPA，Na)；磷酸胆碱，包括1,2-二月桂酰基- sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)，1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱( DMPC)，1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)，1,2-二硬脂酰基-sn- 甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)；磷酸乙醇胺，包括1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DLPE)，1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE)， 1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE)，1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3- 磷酸乙醇胺(DSPE)；磷酸甘油，包括1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸甘油，钠盐(DLPG，Na)，1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸甘油，钠盐( DMPG，Na)，1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸-sn-1-甘油，铵盐(DMPG- sn-1-G，NH₄)，1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸甘油，钠盐(DPPG，Na)， 1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸甘油，钠盐(DSPG，Na)，1,2-二硬脂酰基- sn-甘油-3-磷酸-sn-1-甘油，钠盐(DSP-sn-1G，Na)；磷酸丝氨酸，包括1,2- 二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸，钠盐(DPPS，Na)；混合链磷脂，包括1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)，1-棕榈酰基-2-油酰基 -sn-甘油-3-磷酸甘油，钠盐(POPG，Na)，1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3- 磷酸甘油，铵盐(POPG，NH₄)；溶血磷脂，包括1-棕榈酰基-2-lyso-sn-甘油-3-磷酸胆碱(P-lyso-PC)，1-硬脂酰基-2-lyso-sn-甘油-3-磷酸胆碱(S-lyso- PC)；聚乙二醇磷脂，包括N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-MPEG-2000- DPPE，钠盐，N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-5000)-MPEG-5000-DSPE，钠盐，N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-5000)-MPEG-5000-DPPE，钠盐，N-(羰基 -甲氧基聚乙二醇-750)-MPEG-750-DSPE，钠盐，N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-MPEG-2000-DSPE，钠盐。

在一实施例中，本发明的乳液中磷脂的含量为在该组成物总重量的 0.1～30wt％范围内。在某些实施例中，磷脂的含量可在0.5～15wt％范围内，包括0.8～10wt％，例如1～5wt％。

在一典型实施例中，本发明的水性乳液中所述磷脂的含量可达到所述乳液总重量的10wt％，优选为0.5～5wt％。

在一实施例中，所述乳化剂包括蛋黄卵磷脂，所述蛋黄卵磷脂包括 60～80wt％(例如67wt％)的磷脂酰胆碱、10～20wt％(例如15wt％)的磷脂酰乙醇胺、≤3wt％(例如2wt％)的鞘磷脂、≤3wt％(例如1wt％)的溶血磷脂酰胆碱。

蛋黄卵磷脂PL90(瑞典费森尤斯卡比公司)为一种具有这样的磷脂含量的蛋黄卵磷脂。

尤其是，当所述乳化剂中的卵磷脂包括：

大约80wt％至大约85wt％的磷脂酰胆碱；

大约7.0wt％至大约9.5wt％的磷脂酰乙醇胺；

少于3wt％的溶血磷脂酰胆碱；

少于0.5wt％的溶血磷脂酰乙醇胺；及

大约2wt％至大约3wt％的鞘磷脂时，可以得到好的结果。

根据本发明的一优选实施例，所述乳化剂包括磷脂和糖脂的混合物。意外地发现，磷脂和糖脂的混合物进一步提高了所述乳液在高温(40℃)下的储存稳定性。尤其地，该混合物使所述乳液即使在压力条件如乳液的消毒下保持稳定。本发明的乳液通常是例如于旋转高压灭菌器内的2bar的压力下在121℃保持15分钟进行消毒。

糖脂是连接了糖类的脂质。糖脂是细胞膜上的无磷膜脂，其中一个或多个单糖或低聚糖链接到脂质上。所述脂质为与丙三醇通过酯键结合或者是与鞘氨醇通过酰胺键结合的脂肪酸。

在一优选实施例中，本发明的乳液还包括糖脂，所述糖脂优选选自甘油糖脂，例如单半乳糖基甘油二酯、鞘糖脂或者脑苷脂。

在一优选实施例中，所述糖脂的含量为糖脂和磷脂总和的总重量的5～30wt％，优选为10～28wt％。磷脂和糖脂的混合物是市场上可买到的，如德国Lipoid股份有限公司的类脂S75。

在一特别优选实施例中，所述乳化剂包括：

大约68wt％至大约73wt％的磷脂酰胆碱；

大约7wt％至大约10wt％的磷脂酰乙醇胺；

少于3wt％的溶血磷脂酰胆碱；

大约14wt％至大约25wt％的糖脂，其中所述重量分数为基于糖脂和磷脂总和后的总重量。

所述乳液优选包括0.5～5wt％，更优选为1.0～4.0wt％的乳化剂，其中，所述重量分数为基于乳液的总重量。

本发明的乳液优选为水包油型乳液，其中水性相为连续相，油性相为不连续相。

如上提及，本发明的水包油型乳液进一步包括一水性介质。“水性介质”或“水性相”指的是含水的液体。在一些实施例中，水性介质为水和/ 或水性缓冲溶液。

本发明的水性乳液，优选为水包油型乳液，可包括占乳液总重量的 70～98wt％，优选为70～90wt％的水。

在一些实施例中，所述乳液可以包括0～4mM，优选为0.5～3mM的生理相容的缓冲剂。

在一些实施例中，本发明的水性乳液可选地包括一表面活性剂。适合用于本申请的乳液中的表面活性剂为那些可以防止所述脂质乳液的絮凝和/或聚结的表面活性剂。典型的表面活性剂包括但不限于胆固醇、油酸、油酸盐、Tween 80(失水山梨醇单油酸酯)、HCO-60、SOLUTOL H15(聚乙二醇- 660-羟基硬脂酸)、PEG-400(聚乙二醇)、Pluronic F68(德国巴斯夫公司) 、Cremophor EL(聚乙二醇-35-蓖麻酸酯)、或胆汁酸如脱氧胆酸盐。在其它实施例中，所述表面活性剂选自由C12-C22脂肪酸、它们的盐、和/或它们的混合物组成的组，比如由C16-C20脂肪酸、它们的盐、和/或它们的混合物组成的组，或者由C18脂肪酸、它们的盐，和/或它们的混合物组成的组。在特定的实施例中，脂肪酸为单不饱和脂肪酸。

在一些实施例中，所述表面活性剂在乳液中的含量(重量分数)可为大于或等于0.005wt％、大于或等于0.01wt％、或者大于或等于0.02wt％。根据这些实施例中的任一实施例，所述表面活性剂的含量(重量分数)可为等于或小于4wt％、等于或小于1wt％、或者等于或小于0.04wt％。

在特定实施例中，所述表面活性剂选自由长链脂肪酸例如棕榈酸、油酸或硬脂酸，或者它们的碱金属盐组成的组。油酸盐和/或油酸，尤其是油酸钠，是特别合适的助表面活性剂。

在所述表面活性剂为油酸盐和/或油酸的某些实施例中，所述表面活性剂的含量为等于或大于0.005wt％、等于或大于0.01wt％、或者等于或大于 0.02wt％。根据这些实施例中的任一实施例，所述表面活性剂的含量可为小于或等于0.5wt％、小于或等于0.2wt％、小于或等于0.1wt％、或者小于或等于0.05wt％。在特定实施例中，所述表面活性剂为油酸钠并且含量为 0.03wt％(0.3g/L)。这里描述的乳液可适合于注射，例如静脉注射。在特定实施例中，某些表面活性剂的浓度因此保持最小值以防止副作用例如刺激、细胞色素P450酶的抑制等。在特定实施例中，泊洛沙姆F68(Pluronic, poly(ethyleneglycol)-13-poly(propylene glycol co-propylene glycol)的含量为小于0.7wt％，或者小于0.5wt％。在其他特定实施例中，Solutol-HS(15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯)的含量为小于1.2wt％，或者小于1wt％。

本发明的水包油型乳液可包括一渗透剂，这样的组成物可具有 200～1000mOsm/kg的渗透压，优选为220～800mOsm/kg，特别地为 250～600mOsm/kg。

根据本发明的特定实施例，所述乳液可以为等压或等渗的。该组成物可具有220-600mOsm/kg的渗透压，或者230-360mOsm/kg的渗透压。

适合的渗透剂包括氯化钾或氯化钠、海藻糖、蔗糖、山梨醇、丙三醇、葡萄糖、木糖醇、甘露醇、聚乙二醇、丙二醇、白蛋白、氨基酸及它们的混合物。在某些实施例中，当使用的渗透剂，如甘油、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇或蔗糖，也能提高渗透压时，可以达到270～330mOsm/kg，例如280～300 mOsm/kg的渗透压。

在一实施例中，所述渗透剂为生理上可接受的多元醇，例如丙三醇、山梨糖醇或木糖醇。在一特定实施例中，所述渗透剂为丙三醇。

这样，根据本发明的又一方面，所述乳液还包括渗透剂，优选为丙三醇。

所述渗透剂的含量范围为所述乳液总重量的0.1～10wt％，优选为 0.5～8wt％，更优选为1～5wt％。

所述渗透剂通常以不带来不利的生物学效应，但足以使组成物达到等渗和/或等压的含量使用。当丙三醇为渗透剂时，丙三醇的含量范围为2～5wt％ (重量分数)，例如2.1～2.9wt％，包括2.3～2.7wt％。在特定实施例中，本发明的乳液包括2.5wt％(即25g/L)的丙三醇。在另一实施例中，所述渗透剂的含量为所述乳液总重量的2.5wt％或以上。

在一些实施例中，本发明的乳液的p H值范围在6.0至9.0内，例如6.5 至8.5，包括7.5至8.5，例如8.0至8.5。在一可选实施例中，pH 值范围可在5.0至9.0内。组成物的pH 值可通过现有方法进行调节，如通过使用合适的可中和脂肪酸的负电荷的碱、通过使用合适的缓冲液、或者是两种方法的结合。有多种碱和缓冲液可适合于与本申请的乳液使用。技术人员会发现，乳液中缓冲溶液的加入将不仅影响最终的pH 值，还影响乳液的离子强度。高离子强度的缓冲溶液可能会对乳液的zeta电位造成不利影响，从而是不可取的。在一特定实施例中，通过添加氢氧化钠，例如0.1N(当量)或 1N的氢氧化钠调节到所需的pH 值。

为进一步保持本发明的乳液在抗氧化过程的稳定性，可使用抗氧化剂。在一优选实施例中，所述乳液还包括抗氧化剂，优选为α-生育酚。

本发明的乳液可选地包括一种或多种药学上可接受的添加剂，例如酸化剂、碱化剂、粘合剂、螯合剂、络合剂、增溶剂、杀菌剂、防腐剂(包括抗菌剂和抗氧化剂)、悬浮剂、稳定剂、润湿剂、粘度改善剂、溶剂、冷冻保护剂、稀释剂、润滑剂及其他生物相容材料或治疗剂。在某些实施例中，这些添加剂有助于进一步稳定所述乳液或者促进本发明的乳液的生物相容性。

根据本发明的一优选实施例，所述油相，尤其是由优选为MCT的甘油三酯(b)和半氟化化合物组成的混合物在25℃时的密度为在0.9～1.1g/cm³，更优选为0.95～1.05g/cm³或者大约0.95g/cm³至大约1.10g/cm³之间。根据本发明的另一方面，所述油相的密度偏离水性相的密度不超过10％，优选不超过5％，特别是不超过3％。所述水性相包括所有连续相组分，所述油相包括所有不连续相组分。

已经发现当乳液的油滴尺寸在纳米范围内时可以获得好的诊断结果。根据本发明的一优选方面，不连续相的颗粒的平均直径优选为1～500纳米，更优选为10～400纳米，进一步优选为50～350纳米，所述直径为在25℃下通过光子相关光谱(PCS)技术测量得到。

本发明的另一实施例为本发明的乳液用作药剂。

已经发现，本发明的乳液中的半氟化化合物被单核细胞/巨噬细胞吸收后，可使得细胞被特定标记，细胞被特定标记可在成像方法中使用。意外的是，由此发现了炎症过程，尤其是心血管系统和淋巴结的炎症过程的可视化的诊断潜力。

因此，本发明的乳液适合用作造影剂或造影增强剂。尤其是对于核磁共振成像技术来说，所述乳液是适合的，这是因为所述乳液中的半氟化碳化合物特异性富集并分布在炎症组织中。

本发明的另一方面是本发明的乳液用作通过使用磁共振技术的成像程序进行的诊断检测的造影增强剂或造影剂。

本发明的另一实施例是本发明的乳液在借助成像程序的诊断检测中用作造影剂，尤其是成像过程是基于¹⁹F同位素的核磁共振测量的成像程序。

相应测量的评价及将其转换为图像对技术人员来说是已知的，例如，从专著《磁共振成像:物理原理及序列设计》(Magnetic Resonance Imaging- Physical Principlesand Sequence Design,Haacke M E,Brown W R,Thompson M R,Venkasetan R.WileyPress，Newyork，1999)、文章《¹⁹F：使用磁共振的非侵入性生理和物理通用指示剂》(¹⁹F:aversatile reporter for non-invasive physiology and pharmacology usingmagnetic resonance,Yu J X,Kodibagkar V D,Cui W,Mason R P..Curr Med Chem.2005(12):819-48)、及专著《PET和 SPECT的基本原理》(The Fundamentals of PET and SPECT,Wernick M N, Aarsvold J N Emission Tomography.Academic Press，London,2004)中就可以看出。

所述乳液尤其适合于检测炎症过程。根据本发明的另一方面，所述乳液用于通过成像程序进行的炎症过程的诊断检测，这里所说的炎症过程选自由梗塞(如心肌梗塞、中风)外周的炎症、器官炎症(如心肌炎、脑炎、脑膜炎)、多发性硬化、胃肠道炎症(如克罗恩病)、血管炎症(如动脉硬化，尤其是易损斑块)组成的组，以及用于脓肿和关节炎的检测，其中成像过程是基于¹⁹F同位素的核磁共振的测量。

根据本发明的另一方面，所述乳液用于基于心脑血管系统(包括心肌、动脉和静脉)、疾病过程(如神经学上发现的导致脉管系统出现炎性和衰退过程(如中风或肿瘤)的心肌梗塞、心肌炎、动脉粥样硬化和血栓)中发生的炎性反应、胸腔学(如血栓、炎症、结节病)、肠胃病学(如肿瘤、炎症性肠病(如克罗恩病))以及风湿病(如血管的自身免疫性疾病(如多发性大动脉炎))的非侵入性成像程序的诊断检测。

本发明的另一实施例指的是一种包括获取病人的非侵入性成像程序的方法，本发明的乳液预先对病人注射以将其溶解在病人的血液中。

优选地，所述非侵入性成像程序为磁共振成像程序。根据本发明的方法的进一步优选方面，所述成像程序是基于¹⁹F同位素、或¹⁹F同位素和¹H同位素的核磁共振测量。

在半氟化化合物中存在的¹⁹F同位素和/或¹⁸F同位素实现了现已知且存在于医院的设备，即核磁共振光谱与¹⁹F同位素使用的优势，和/或¹⁸F同位素的正电子放射光谱的使用的优势。

通过本发明的乳液的使用，可特别检测以下病理情况：

(1)淋巴结及其病理放大的可视化；

(a)直接影响淋巴结的恶性肿瘤：霍奇金(Hodgkin)病和非霍奇金淋巴瘤；

(b)肿瘤转移，如从乳腺癌；

(c)病毒和细菌感染，如梅毒、结核；

(2)以下边界区域的炎症反应

(a)梗塞，如心肌梗塞、中风；

(b)肿瘤；

(3)器官的炎症：心肌炎、脑炎、脑膜炎(脑膜与脊膜)；

(4)多发性硬化症；

(5)胃肠道炎症，如克罗恩病；

(6)血管炎症，如动脉硬化，尤其是所谓的“易损斑块”；

(7)脓肿的检测；

(8)关节炎的检测。

本发明的乳液通常在成像过程开始之前经非肠道实施。在一优选实施例中，所述乳液为静脉注射或关节内注射。

本发明的另一方面为用于炎症过程的检测的方法，所述方法包括：

(a)将本发明的乳液实施到需要它的对象；然后

(b)在所述对象内对含氟化合物成像，

其中，所述炎症过程优选选自由直接影响淋巴结的恶性肿瘤、梗塞或肿瘤的边界区域的炎症过程、器官的炎症、多发性硬化症、胃肠道的炎症、血管的炎症、脓肿和关节炎组成的组。

本发明的另一实施例为本发明的乳液的制备方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供一混合物，所述混合物包括

(a)通式(I)的半氟化化合物

CF₃-(CF₂)_x-(CH₂)_y-CH₃ (I)

其中x为一从1至8的整数，y为一从1至10的整数，

(b)与所述半氟化化合物在20℃易混合的甘油三酯，优选为中链甘油三酯(MCT)，

(c)乳化剂，和

(d)水；以及

(ii)将所述混合物均质化，优选在高压均质机下进行；

(iii)可选地将该乳液消毒。

另一方面，所述生产方法包括以下步骤：

(i)将半氟化化合物溶解在甘油三酯(b)中，所述甘油三酯(b)优选为中链甘油三酯；及

(ii)在水性相中乳化所述油相，优选在有乳化剂的情况下。

根据一特定实施例，在水性组分和油性组分混合前，将水性组分进行均质化处理以形成均质悬浮液。

在一特定实施例中，所述均质化在大于或等于350bar的压力下，或者在大于或等于370bar的压力下进行。

在特定实施例中，所述乳液的制备方法包括将乳化剂溶解在水性介质 (不是油)中，将油相加入到水性相中(反之不亦然)，在大于或等于 350bar的压力下进行均质化的步骤。这些步骤使得所述乳液在颗粒尺寸和乳液稳定性方面具有优异的性能。

在另一特定实施例中，所述乳液被包装在密封容器内，并进行消毒，如加热至至少121℃(如121℃至123℃)保持至少15分钟。该高温灭菌程序可以为旋转循环式。

本发明的另一实施例为盛放本发明的乳液的容器。所述容器的材料优选选自由玻璃、有机聚合物、及其混合物组成的组。优选的有机聚合物为聚乙烯和/或聚丙烯。

在本发明的制备方法的一优选实施里中，所述方法包括以下步骤：

(a)通过以下步骤准备一混合物：

(a-1)准备一包括水和乳化剂的混合物，

(a-2)准备一包括半氟化化合物和甘油三酯的均质混合物，

(a-3)将步骤(a-1)中得到的混合物与步骤(a-2)得到的混合物混合；

(b)将步骤(a)中得到的混合物均质化，优选在高压均质机下进行。

在本发明的乳液的制备方法的一特别优选实施里中，所述方法包括以下步骤：

(a)通过以下步骤准备一混合物：

(a-1)准备一包括所述乳液的水溶性组分的混合物，优选为包括水、乳化剂和渗透剂的混合物，尤其是包括水、磷脂、油酸钠和丙三醇的混合物，

(a-2)准备一所述乳液的油溶性组分的混合物，优选为包括半氟化化合物、甘油三酯和抗氧化剂的混合物，更优选为包括F6H8、MCT、及α-生育酚的混合物，

(b)将步骤(a)中得到的混合物均质化，得到一预制乳液；

(c)将步骤(b)中得到的混合物在高压均质机下进行进一步均质化。

意外地发现，当在优选温度范围为30～70℃，更优选为40～60℃时，对步骤(b)和(c)中的乳液均质化可以得到最好的结果。

在所述制备方法的另一优选实施例中，还包括一步骤(d)，对所述乳液进行消毒，优选通过加热至至少121℃保持15分钟进行。

乳液的优选含量和组分参见本发明的乳液的说明。

本发明的另一方面为进行磁共振体层摄影的方法。在本方法中，发射一交变磁场，并检测待测样本对该交变磁场的吸收。这些方法步骤对应通常的磁共振体层摄影的操作。本发明的方法被用于检测本发明的乳液中的以通式(I)表示的半氟化化合物：

CF₃-(CF₂)_x-(CH₂)_y-CH₃ (I)

其中，x为一从1至8的整数，y为一从2至10的整数。

本发明的方法的特征在于，交变磁场的频率在B×40.045600MHz/T与 B×40.065600MHz/T之间，B为磁场强度，磁场强度单位为T。

为了获得所述交变磁场的上述频率，需进行以下步骤：

首先，所述交变磁场的频率选择为B×40.05560MHz/T。为了检测未知的包含氟原子的化合物，使用一宽的激发带和接收带(如+/-5kHz)。在中间，该激发带为氟原子核的激发频率(40.05560MHz/T)，将该频率定义为 0位置。

在激发中，该未知的含氟的化合物的特征光谱出现在一特定的偏移频率上，如果不是这样，则所选择的带宽(如+/-5kHz)必须要加宽。

当某一频率上出现所述特征光谱后，所述激发光谱通过选择一合适的偏移频率而偏移。发明人发现，在+/-100Hz与+/-10000Hz之间的偏移频率是合适的。通过选择这样的频率，所述激发带宽和接收带宽可显著降低，这样就降低了噪声，从而可以得到较好的信噪比。

本发明的另一方面涉及一种在待测样本中检测本发明的乳液中的以通式 (I)所示的半氟化化合物的方法：

CF₃-(CF₂)_x-(CH₂)_y-CH₃ (I)

其中，x为一从1至8的整数，y为一从2至10的整数。在该方法中，发射一交变磁场，并检测待测样本对该交变磁场的吸收。这些步骤对应通常的磁共振体层摄影的操作。

根据本发明，在一¹H质子图像上至少叠加一¹⁹F氟质子图像。这样，¹H质子图像以灰度图像显示，¹⁹F质子图像以彩色梯度显示，该彩色梯度的一端表示¹⁹F氟质子的低浓度，另一端表示¹⁹F氟质子的高浓度。

这些发明步骤可以通过例如将检测的氟信号分配到病人身体的某一部分进行实施。为了达到这一目的，可以通过改变¹⁹F和¹H的量而获得较好的分辨率。根据所述，¹H质子图像以灰度图像显示，而¹⁹F质子图像例如可以用例如从黑至绿或从蓝至红的彩色梯度图像显示。

首先，生成一个三维视频，然而，接下来优选生成每一层的二维图像，每一图像表示待测样本的横截面。优选计算最大强度投影(MIP’s)。这些二维层图像以全面的方式显示出造影剂存在于哪一解剖结构中。

在本发明的一优选实施例中，消除了由非待测的第二样本中的¹⁹F氟质子产生的干扰信号。这种干扰信号可例如由病人的肝脏或脾脏中的造影剂产生。由于肝脏和心脏的位置非常近，当试图检测例如病人的心脏区域的炎症时，肝脏中的造影剂会产生非常强的干扰信号。

为了消除这些干扰信号，可以比较第一像素的氟浓度值与该第一像素周围的三维空间内的所有相邻像素的氟浓度值。这样，如果相邻两像素的氟浓度值之差低于一阈值，这两个像素就被认为是属于一个像素集群，如病人的肝脏。如果该集群不是待测样本(在这种情况下指病人的心脏)，则这种干扰的像素集群可以从得到的图像上去除。这一干扰集群可以通过例如手动去除。

当叠加¹⁹F质子图像和¹H质子图像时，优选这些图像为在没有改变测量几何的情况下得到的，也就是说两个数据集均包含来自同一量的信号。

¹⁹F质子图像中可能存在的噪声可以通过平均不同的获得值来得到抑制。计算噪声的标准偏差σ，并将3σ或5σ作为待测信号的阈值。也就是说，只有那些大于噪声的标准偏差三倍的信号才被认为是“真”信号。该阈值可被用户修改，以使得到的图像适用于噪声的数量。优选不将上述最后提及的方法步骤应用于¹H质子图像，因为这些步骤中有高的信噪比。

在最后提及的发明的情况中讨论的所有方法步骤主要涉及信号处理步骤，从而可在任何时间任何地点独立于数据采集过程而进行。特别地，执行这些方法步骤不需要病人的身体的存在。

本发明的方法中使用的乳液的优选实施例参见本发明的乳液中的描述。

具体实施方式

以下通过通过举例对本发明进行进一步说明。

实验阶段

例1至例3

实验阶段的乳液通常通过以下步骤进行准备：

(1)将乳化剂与水混合；

(2)准备一疏水性组分的混合物，如MCT、氟化化合物、以及可选的α-生育酚的混合物；

(3)将步骤(1)得到的水性混合物加到步骤(2)的油性混合物中；

(4)将所述乳液通过高压均质机在700bar的压力下进行三次均质化，并且在Plus 2000型高压均质机中在1000bar的压力下进行2次均质化。

表1所示为水包油型乳液组成物，表2所示为在20℃下各自的储存稳定性数据。表中的数量指的是基于所述乳液的总重量的重量分数。

表1本发明的例1至例3及对比例9的水包油型乳液组成物

注：

1)德国Novaliq公司的全氟己基正辛烷

2)中链甘油三酯(50–80wt％的C₈脂肪酸和20–50wt％的C₁₀脂肪酸)

3)德国Lipoid股份有限公司的蛋黄卵磷脂

表2例1至例3的乳液的储存稳定性数据

平均颗粒直径和多分散系数是通过光子相关光谱法(PCS)测定得到的。

图1所示为表2中体现的储存稳定性测试的数据及对比例9中的有关数据。

图1A所示为例1至例3及对比例9中乳液的颗粒增长。所述颗粒增长的测量在乳液制备后立即开始。

图1A展示了在28天之内，例1的油滴的平均颗粒直径增长了约 11％，例2约15％，例3约17％，对比例9约23％。所述半氟化化合物的浓度越高，颗粒的生长增长越多。

图1B展示了颗粒的生长增长对半氟化化合物F6H8的浓度的依赖性。

表2A反映了图1、1A和1B中所示的数据。储存测试在20℃下进行。

表2A

已经发现，当油滴(MCT和半氟化化合物)的密度约等于水性相的密度时，可以达到半氟化化合物(该半氟化化合物对于在磁共振测量中获得好的对比度是必要的)的高浓度和储存稳定的乳液之间的最优化平衡。通过将油相的密度调整至水性相的密度，可减少那些使乳液变得不稳定的液滴的凝聚现象及沉淀现象。

图1C所示为MCT和F6H8的不同混合物的密度测量结果。

在F6H8的重量分数约为38.5wt％和MCT的重量分数约为61.5wt％时( 重量分数为基于油相的总重量)，所述油性混合物的密度相当于水性相的密度。

对比例1至对比例8、对比例9A及对比例10至对比例12

全氟溴辛烷(PFOB)为已知的用于磁共振光谱的造影剂。已经发现，PFOB不能溶解于MCT中。因此，通过能溶解在PFOB中的全氟溴癸烷( PFDB)对PFOB加以稳定，使乳液得以制备。

表3和表4所示为对比例1至对比例8、对比例9A及对比例10至对比例12中的水包油型乳液组成物，表6所示为在20℃下各自的稳定性。表2 和表4中的数量指的是基于乳液总重量的重量百分比(wt％)。

表3对比例1至对比例4

注：

1)德国ABCR股份有限公司的全氟溴辛烷

2)德国ABCR股份有限公司的全氟溴癸烷

3)德国Lipoid股份有限公司的蛋黄卵磷脂

表4对比例5至对比例8

注：

1)德国ABCR股份有限公司的全氟溴辛烷

2)德国ABCR股份有限公司的全氟溴癸烷

3)德国Lipoid股份有限公司的磷脂

表5对比例9A及对比例10至对比例12

注：

1)德国ABCR股份有限公司的全氟溴辛烷

2)德国ABCR股份有限公司的全氟溴癸烷

3)德国Lipoid股份有限公司的大豆卵磷脂。

表6对比例1至对比例8、对比例9A及对比例10至对比例12的乳液

的储存稳定性数据

图2所示为表6中体现的稳定性测试的数据。图2的左侧展示的为对比例1至对比例4的乳液的数据，右侧展示的为对比例5至对比例8的乳液的数据。

从表6和图2中可以看出，对比例1至对比例8、对比例9A及对比例 10至对比例12的乳液在28天的储存时间内，平均颗粒尺寸表现出明显的增长。

相反地，本发明的例1至例3的乳液则稳定得多。在28天的储存时间内，乳液的平均颗粒尺寸仅表现出轻微的增长。

不同乳化剂的试验

意外地发现，本发明的乳液可通过选择乳化剂进一步得以稳定。

乳化剂类脂S PC-3被认为是不太合适的(图2)，没有进一步对本发明的乳液进行测试。

表7所示为本发明的例4和例5的乳液。

表7例4和例5的水性乳液混合物中的油

注：

1)德国Novaliq公司的全氟己基正辛烷

2)中链甘油三酯(50-80wt％的C₈脂肪酸和20-50wt％的C₁₀脂肪酸)

3)德国Lipoid股份有限公司的蛋黄卵磷脂

4)德国Lipoid股份有限公司的磷脂(含14-25wt％糖脂的大豆卵磷脂)

进一步分析了例4和例5中的乳液的稳定性是否受消毒条件的影响。将乳液在旋转的高压灭菌器中消毒并与未消毒的乳液进行比较(消毒条件：加热至121℃在2bar的压力下保持15分钟)。

表8所示为例4和例5的乳液在未消毒时和消毒后的稳定性数据。

表8本发明的例4和例5的乳液在消毒和未消毒条件下的储存稳定性

数据

图3所示为表8体现的储存稳定性测试的数据，图3的左侧为例4的乳液的数据，右侧为例5的乳液的数据。

图3和表8显示出例5的乳液比例4的乳液更稳定。例5的乳液在旋转高压灭菌器中消毒后也变得更稳定。

例4和5的乳液进一步地在40℃进行储存168天。意外地发现，即使在40℃的储存温度下，例5的乳液的物理稳定性也没有明显改变(图4)。

图4所示为例5的乳液的三个试样的测试结果。

图3A所示为例4的乳液的三个试样的测试结果。

本发明的例6

表9例6的乳液组成物

例6的乳液通过在50℃下制备一F6H8、MCT和α-生育酚的均质混合物而得到。分开来说，由乳化剂类脂S 75和助乳化剂油酸钠组成的混合物与丙三醇和水在一转/定混合装置(Ultra turrax)内在50℃和15000转/分下混合20分钟。接着，将由MCT、F6H8和α-生育酚组成的混合物加到水性混合物中，并在50℃下通过Ultra turrax装置(德国IKA公司T 25型号) 在20000rpm下保持20分钟进行均质化。所得到的预制乳液然后在一高压均质机(APV公司的1000/2000型号)内进一步进行均质化(先在500bar的压力下进行5个循环，然后在60bar下进行)。

随后将所得到的乳液于一高温灭菌器中121℃下保持15分钟进行消毒。

意外地发现，即使在40℃的储存温度下，即使在3个月后例6的乳液的物理稳定性也没有明显改变(图4A)。

图4A所示为例6的乳液的测试结果。

例6的乳液组成物被用于活体内MRI测量。

为了检查F6H8/MCT乳液是否可在活体内通过MRI进行可视化及在靶向组织中检测到，进行第一药代动力学检查。

图5所示为一典型方式的血池效应。

图5所示为在心脏中作为血池中的靶向组织的本发明的乳液6。解剖的 T2TSE序列和着色的3D ¹⁹F序列的典型3D重构通常在一从一大鼠中得到的作为总的数据集(A)，并且通过计算去除了肝脏的数据集(B)中进行。下行所示为心脏的完整的3D数据集(C)和放大图(D)。

这样，可以看出，本发明的乳液可在活体内于心肌层中可视化。进一步地检查了MRI中梗塞的表征。结果显示在图6中。

图6显示出了：(A)在例6的乳液应用24小时后有相同的几何形状的大鼠胸腔的活体心肌区域的横截面的T2加权MRI图像(1.5T，Philips)，该T2加权MRI图像被着色的19F图像(1H/19F)叠加。(B)1H/19F图像 (该图像显示出含氟造影剂在心肌梗塞区域的富集)中放大的心肌层，及由外科手术引起的心包膜和肋骨之间的粘连的位置。(C)大鼠心脏的现场记录，展示出梗塞区域旁边的心包膜(绿色轮廓)有强烈明显的炎症。

因此，可以看出造影剂在梗塞区域富集。进一步地，如图7所示，将 MRI图像和组织切片进行了比较。

图7中：(A)在例6的乳液应用24小时后有相同的几何形状的大鼠胸腔的活体心肌区域的横截面的T2加权MRI图像(1.5T，Philips)，该T2加权MRI图像被着色的19F图像(1H/19F)叠加。(B)1H/19F图像(该图像显示出含氟造影剂在梗塞区域的富集)中放大的心肌层，及由外科手术引起的心包膜和肋骨之间的粘连的位置。(C)A中展示的梗塞的大鼠心肌的典型组织的短轴剖面[7μm]的HE染色。梗塞的心肌区域在HE染色中显示为蓝色。

所述乳液以两种模式进行测试：

心肌梗塞模型，其时间轴如图8所示；及

心肌炎模型，其时间轴如图9所示。

梗塞的诱发

使用重量在200-350克之间的SD大鼠。

麻醉：通过使这些动物吸入异氟烷使其安静的待在麻醉箱内，然后通过肌肉注射进行麻醉。必须保证麻醉能够使其免于痛苦甚至在麻醉的过程中。因此，动物接受的是麻醉和镇痛的混合，包括：肌肉注射0.15mg/kg美托咪定+0.05mg/kg芬太尼+2.0mg/kg咪达唑仑；皮下注射0.75mg/kg阿替美唑 +0.12mg/kg纳洛酮+0.2mg/kg以产生拮抗作用。由于我们之前使用氟苄烟酸 (皮下注射2.5mg/kg)的经验，我们将它作为手术后疼痛治疗的准备。如果治疗失败，我们将考虑改用丁丙诺啡(皮下注射0.05mg/kg)进行止痛治疗。

接着，在随后的插管期间，对动物实施肌肉注射阿托品以支持循环以及保护迷走神经免受刺激。

心血管疾病中的氟基造影剂：

尽管美托咪定基本上被推荐仅用于具有健康心血管系统的动物，应当预料到，在健康的幼鼠(计划的心胸措施针对体重大约200g的动物实施) 中，其Frank Starling(FS)机制还不完全成熟。因此，由美托咪定的中央- 抗交感神经过敏的活动介导的心动过缓并不能够通过增加心搏量得到完全补偿。阿托品的注射引起了心脏工作的增加。然而，由外周α2受体刺激引起的血管收缩实质上并不改变冠状动脉(还有大脑和肾脏)的血流量，所以这里不假设特定的心脏负荷，而阿托品对循环的整体情况的心率变时性作用才是主要的。因此，暂时的高血压循环情况是可以接受的，这与术后阶段的临床观察是一致的。此外，还考虑到一直进行冠状动脉结扎及其对心脏的泵送性能可能产生的(严重)影响。然而，由于动物实验中人工操作的复杂性及冠状动脉解剖结构的变化性，没有一个普遍规律。

在美托咪定的术后拮抗作用下，高血压立即下降，从而高血压的持续是维持在合理范围内，并且，最重要，是可控的。

由于在手术实施的过程中动物是被插管的，一方面有迷走神经刺激(伴随连续心跳过缓)的风险，另一方面有在唾液分泌过多时插管复杂的风险；后者与我们的实验是一致的。这些风险可通过术前注射阿托品而降低。

总而言之，发现了需要在术前注射阿托品。

在耐受阶段开始之后，大鼠的左侧被剃毛并且消毒。

随后大鼠被连接到呼吸泵，所述呼吸泵的频率为每分钟75-80次，一次换气量为2.0ml(对于体重200-250g的大鼠)。在开胸手术之前尽可能晚地将动物连接至呼吸泵是适当的，因为人工呼吸常常意味着对生物体的另外干涉。

连接呼吸泵后，可使用弯钳在第5和第6根肋骨处将胸腔打开。该过程需极为小心，因为肺会非常容易因此受伤。胸腔须打开大约1.0cm至1.5cm 的长度，以将创口牵开器放入。当有了足够大的手术区域后，视情况切开相应的软组织，然后须检测左冠状动脉的走线。它起源于肺动脉干和左心耳之间的主动脉，通过心外膜脂肪线可容易辨别。然而，由于大鼠的管状血管不在表面上行走，而是在心肌层内，因此左冠状动脉经常看不见或只有部分可见。左冠状动脉的主分支，即LAD(左前降支)，实质上从主动脉根至心尖直线行走。LAD的其中一近侧分支(D1或D2)通过冠状动脉结扎关闭。 D1或D2侧枝的缝合-结扎受到单结缝合的影响。(近侧)LAD本身的闭塞可能会引起梗塞的扩展过大，从而只有很少的动物能够幸免于其活下来。接下来，通过两层(肋骨和皮肤缝合)关闭胸腔。肋骨通过两个或三个单结缝合而关闭，胸部肌肉只是一层位于另一层上。皮肤通过连续的连锁缝术而缝合。

结扎3天后，将所述含氟碳化合物的乳液实施至动物。再24小时后，进行MRI分析(见图8)。

在整个6天的测试期间内，每12小时对所有动物进行止痛一次：皮下注射2.5mg/kg体重的氟苄烟酸(福乃达)。

所有动物进展的常规数据，如体重和反应，每两星期获取一次。

梗塞外科手术：

通过使这些动物吸入异氟烷使其安静地待在麻醉箱内，然后肌肉注射美托咪定/咪达唑仑的混合溶液(每Kg体重0.3mg美托咪定和4mg咪达唑仑)。随后，在接下来的插管期间对这些动物给予阿托品(每KG体重 0.01mg，皮下注射)用以支持循环和保护免受迷走神经刺激。

MRI检查：

这些动物仅接受吸入麻醉(氧气+2.0％的异氟烷)。后者耐受性良好，动物之后不再有长时间的清醒阶段。

在麻醉状态中，这些动物已经被通过尾静脉注射氟基造影剂。

心肌层的炎症模型：

所有动物在连续6个星期内每星期接受一次静脉注射阿霉素或生理盐水溶液。每一注射都是在全身麻醉下实现的。在最后一次注射后一周时，对动物注射本发明的乳液。24小时后进行MRI分析。

将例6的乳液修改为所述乳化剂由聚乙二醇磷脂取代。发现乳液液滴的调理素作用明显降低。由于该效果，人们希望炎症区域的氟碳化合物( F6H8)的含量在检测极限以下。然而，意外地发现，心肌炎甚至可以如图 11中那样展示。

在MRI检查的那几天，对动物实施吸入麻醉(1.5％至2.5％的异氟烷和氧气的混合物)。进一步地，在检查中，根据它们属于哪一组，对所述动物通过尾静脉注射一剂氟基造影剂混合物。在最后的MRI检查之后，通过提供过量的异氟烷使每个动物死亡，并随后去除器官。

所有的动物还接受止痛。为了实现这一目的，可使用对乙酰氨基酚铝，因为它只有一点抗炎效果。在整个实验期间内，动物通过饮用每kg体重 150mg剂量的水而获得该对乙酰氨基酚。

所有动物进展的常规数据，如体重和反应，每天获取一次。

心肌炎的诱发

这些动物仅接受吸入麻醉(氧气+2.0％的异氟烷+笑气)。后者耐受性良好，不会导致长时间的清醒阶段。在麻醉开始时，动物接受相应的止痛。

MRI检查

这些动物仅接受吸入麻醉(氧气+2.0％的异氟烷)。后者耐受性良好，不会导致长时间的清醒阶段。而在麻醉时，这些动物已经被通过尾静脉注射氟基造影剂。

图10反映的是注射了例6的乳液的动物的梗塞的磁共振结果，图11反映的是注射了例6中的乳化剂被聚乙二醇磷脂取代的乳液的动物的心肌炎的磁共振结果。

Claims

1.一种水性乳液，其特征在于，包括

(a)半氟化化合物，其为全氟己基正辛烷(F6H8)和/或全氟丁基正戊烷(F4H5)；

(b)与所述半氟化化合物在20℃易混合的甘油三酯；及

(c)乳化剂；

所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的含量范围为所述乳液总重量的5～40wt％；

所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的重量比范围为1:20至1:0.20；

所述乳化剂为磷脂或磷脂的混合物；所述乳化剂在乳液中的含量范围为乳液总重量的0.5wt％至5wt％；

所述乳液用于作为造影剂或造影增强剂。

2.如权利要求1所述的乳液，其特征在于，所述甘油三酯(b)为中链甘油三酯。

3.如权利要求1所述的乳液，其特征在于，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的含量范围为所述乳液总重量的10～30wt％。

4.如权利要求3所述的乳液，其特征在于，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的含量范围为所述乳液总重量的15～25wt％。

5.如权利要求1所述的乳液，其特征在于，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的重量比范围为1:15至1:0.25。

6.如权利要求5所述的乳液，其特征在于，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的重量比范围为1:10至1:0.30。

7.如权利要求6所述的乳液，其特征在于，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的重量比范围为1:4至1:0.35。

8.如权利要求7所述的乳液，其特征在于，所述半氟化化合物(a)和甘油三酯(b)的重量比范围为1:2至1:0.4。

9.如前述权利要求中的任一项所述的乳液，其特征在于，所述乳液用作通过使用磁共振技术的成像程序进行的诊断检测的造影增强剂或造影剂。

10.如权利要求1至8中的任一项所述的乳液，其特征在于，所述乳液用于通过成像程序进行的炎症过程的诊断检测，所述炎症过程选自由下列各项组成的组：梗塞外周的炎症反应；器官炎症；多发性硬化；胃肠道炎症；血管炎症；以及脓肿和关节炎的检测，其中所述成像程序是基于¹⁹F同位素的核磁共振测量。

11.如权利要求10所述的乳液，其特征在于，所述梗塞为心肌梗塞或中风。

12.如权利要求10所述的乳液，其特征在于，所述器官炎症为心肌炎、脑炎或脑膜炎。

13.如权利要求10所述的乳液，其特征在于，所述胃肠道炎症为克罗恩病。

14.如权利要求10所述的乳液，其特征在于，所述血管炎症为动脉硬化。

15.如权利要求14所述的乳液，其特征在于，所述动脉硬化为易损斑块。

16.如权利要求1至8中的任一项所述的乳液，其特征在于，所述乳液用于基于下列各项的非侵入性成像程序的诊断检测：

心血管系统，包括心肌层、动脉和静脉；

发生于疾病过程中的炎症反应；

胸腔学；

肠胃病学；

以及风湿病学。

17.如权利要求16所述的乳液，其特征在于，所述疾病过程导致神经学上发现的脉管系统的炎症和衰退过程。

18.如权利要求17所述的乳液，其特征在于，所述炎症和衰退过程为中风或肿瘤。

19.如权利要求17所述的乳液，其特征在于，所述疾病过程为心肌梗塞、心肌炎、动脉粥样硬化和血栓。

20.如权利要求16所述的乳液，其特征在于，所述胸腔学为血栓、炎症或结节病。

21.如权利要求16所述的乳液，其特征在于，所述肠胃病学为肿瘤或炎症性肠病。

22.如权利要求21所述的乳液，其特征在于，所述炎症性肠病为克罗恩病。

23.如权利要求16所述的乳液，其特征在于，所述风湿病学为血管的自身免疫性疾病。

24.如权利要求23所述的乳液，其特征在于，所述血管的自身免疫性疾病为多发性大动脉炎。

25.一种制备如权利要求1至16中的任一项所述的乳液的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)通过混合以下物质准备一混合物

-半氟化化合物，其为全氟己基正辛烷(F6H8)和/或全氟丁基正戊烷(F4H5)；

-与所述半氟化化合物在20℃易混合的甘油三酯；

-乳化剂；及

-水；

(b)将步骤(a)中得到的混合物均质化；及

(c)可选地将乳液消毒。

26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)通过以下步骤准备一混合物：

(a-1)准备一包括水和乳化剂的混合物，

(a-2)准备一包括半氟化化合物和甘油三酯的均质混合物，

(a-3)将步骤(a-1)中得到的混合物与步骤(a-2)得到的混合物混合；及

(b)将步骤(a)中得到的混合物均质化。

27.如权利要求26所述的方法，其特征在于，步骤(b)为采用一高压均质机将步骤(a)中得到的混合物均质化。

28.一种为检测由权利要求1至16中的任一项所述的乳液中的半氟化化合物而进行磁共振体层摄影的方法，所述半氟化化合物为全氟己基正辛烷(F6H8)和/或全氟丁基正戊烷(F4H5)；

所述方法包括以下步骤：

-发射一交变磁场，

-检测待测样本对该交变磁场的吸收，

其特征在于，

所述交变磁场的频率在H·40.05650MHz/T至H·40.06150MHz/T之间，H为磁场强度，磁场强度单位为T。

29.一种在待测样本中检测由权利要求1至16中的任一项所述的乳液中的半氟化化合物的方法，所述半氟化化合物为全氟己基正辛烷(F6H8)和/或全氟丁基正戊烷(F4H5)；

所述方法包括以下步骤：

-发射一交变磁场，

-检测待测样本对该交变磁场的吸收，

其特征在于，包括以下方法步骤：

-在¹H质子图像上叠加至少一¹⁹F氟质子图像，

借此，¹H质子图像以灰度图像显示，¹⁹F氟质子图像以彩色梯度显示，该彩色梯度的一端表示¹⁹F的低浓度，另一端表示¹⁹F的高浓度。

30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，包括以下方法步骤：

-通过以下步骤消除由非待测的第二样本中的¹⁹F氟质子产生的干扰信号:

-比较第一像素的氟浓度值和该第一像素周围的三维空间内所有像素的氟浓度值，

借此，如果相邻两像素的氟浓度值之差低于一阈值，这两个像素就被认为是属于一个像素集群，

-如果该集群不代表待测样本，则从得到的图像上去除这一干扰的像素集群。