ES2603216T3 - Derivados de purina 6,9-disustituida para uso cosmético - Google Patents

Abstract

Un método para mejorar la apariencia cosmética de las células epidérmicas de mamíferos, el cual comprende el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:**Fórmula** donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido o bencilo metoxi-sustituido, y R9 es 2-tetrahidropiranilo o 2-tetrahidrofuranilo.

Description

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DESCRIPCION

DERIVADOS DE PURINA 6,9-DISUSTITUIDA PARA USO COSMETICO Ambito Tecnico

[0002] La presente invencion proporciona el uso de compuestos de Formula (I) para mejorar la apariencia cosmetica de las celulas epidermicas de mai^eras o celulas de la piel humana.

La presente solicitud se define en las reivindicaciones anexas. Materias que no estan comprendidas en el ambito de las reivindicaciones no forman parte de la presente invencion.

Estado de la Tecnica

[0003] El envejecimiento celular o la senescencia celular es una caractenstica universal de las celulas normales no transformadas, la cual se manifiesta por alteraciones morfologicas, acompanadas por una perdida del potencial o capacidad proliferativos, dependientes de la edad, incluyendo la incapacidad de las celulas para responder a los factores de crecimiento exogenos. Se han propuesto una variedad de teonas para explicar el fenomeno de la senescencia celular. La evidencia experimental sugiere que la perdida del potencial o capacidad proliferativos dependientes de la edad puede ser la funcion de un programa genetico (vease, por ejemplo, Smith et al., Mech. Age. Dev. 13, 387 (1980); y Kirkwood et at., Theor. Biol. 53, 481 (1975)). Esta evidencia incluye estudios de fusion celular con fibroblastos humanos in vitro , los cuales demuestran que el fenotipo quiescente de senescencia celular es dominante sobre el fenotipo proliferativo (vease, por ejemplo, Pereira-Smith et at., Somatic Cell Genet. 8, 731 (1982); y Norwood et at., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1, 223 (1974)) y que la smtesis de protemas en celulas senescentes, anterior a la fusion con celulas jovenes, es necesaria para la inhibicion de la smtesis del ADN en el nucleo joven del heterodicarionte (vease, por ejemplo, Burmer et al., Exp. Cell Res. 145, 708 (1983); y Drescher-Lincoln et at., Exp. Cell Res. 153, 208 (1984)). Tambien, la microinyeccion de mARN de fibroblastos senescentes en fibroblastos jovenes inhibe la habilidad de las celulas jovenes para sintetizar ADN (vease, por ejemplo, Lumpkin et at., Science 232, 393 (1986)) y la entrada de la celula joven en la fase S del ciclo celular (Lumpkin et al., Exp. Cell Res. 160, 544 (1985)). Ademas, especies de mARN unicas son amplificadas en fibroblastos senescentes in vitro (vease, por ejemplo, Wellinger et al, J. Cell Biol., 34, 203 (1986); Flemming et at., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 4099 (1988); West et at., Exp. Cell Res. 184, 138 (1989); y Giordano, Exp. Cell Res. 185, 399 (1989)). Tambien se ha sugerido que existe un programa genetico alterado en fibroblastos senescentes humanos, lo cual implica la represion de la expresion de c-fos a nivel transcripcional (vease, por ejemplo, Seshadri et at., Science 247, 205 (1990)). Por lo tanto, parece haber diferencias genotfpicas, asf como tambien fenotfpicas, entre celulas jovenes y viejas.

[0004] En los ultimos anos, 6-aminopurinas sustituidas han adquirido un considerable significado bioqmmico. Algunos compuestos de este tipo promueven el crecimiento vegetal y pertenecen al grupo de reguladores de crecimiento denominados "citoquininas" (Letham, Ann. Rev. Plant. Physiol. 18, 349 (1967)). En bioensayos basados en la induccion de la division celular en cultivos de tejidos vegetales, el compuesto citoquinina mas activo es la citoquinina natural trans-zeatina (6-((E)-4-hidroxi-3-metilbultil-2- enilamino)purina, Letham, Planta 74, 228 (1967)). Citoquininas estrechamente relacionadas con zeatina se dan como bases en ARN soluble (Skoog et at., Science 154, 1354 (1966)). En los RNA de serina y tirosina de levaduras, plantas y animales, la citoquinina esta adyacente al anticodon. El crecimiento de cultivos celulares de mairnferos es inhibido por determinadas adenosinas N0005 6-substituidas con actividad citoquinina (Grace et at., Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 8, 23 (1967)). Con secciones del tallo, cortes de hojas y uvas en desarrollo, 6-bencilamino-9-(2-tetrahidropiraniI)purina (BPA) ha sido reportado por provocar un mayor crecimiento que 6-bencilaminopurina (BA) de citoquinina. En bioensayos de cultivos celulares y algunas especies hortmolas, BPA tambien se ha demostrado como mas activo (Werbrouck et at., Physiol. Plant 98, 291 (1996)).

[0005] Adicionalmente, determinadas aminopurinas 6-sustituidas (incluyendo kinetina y zeatina) han demostrado que tienen significantes propiedades anti-envejecimiento y otras propiedades, y se han encontrado utiles para el tratamiento de celulas de mamfferos, incluyendo la piel humana y/o las celulas de la piel humana. La aplicacion topica de tales composiciones permitieron la mejora de la apariencia cosmetica de la piel; tales composiciones tambien podnan ser empleadas para el tratamiento de la piel y enfermedades o condiciones relacionadas. Significativamente, estas aminopurinas 6-sustituidas no

incrementan de manera sustancial, en las cantidades empleadas, la tasa de crecimiento y la capacidad proliferativa total de las celulas de mamffero tratadas. Vease, por ejemplo, las patentes US 5,371,089 (6 de Diciembre, 1994) y 5,602,139 (11 de Febrero, 1997) (mejora de la apariencia cosmetica de la piel); Patente US 5,614,407 (25 de Marzo, 1997) (ralentizar o retrasar cambios morfologicos que habitualmente acompanan al envejecimiento de las celulas de mamfferos en cultivos); y Patentes US 5,021,422 (4 de Junio, 1991) y 5,164,394 (17 de Noviembre 1992) (tratamiento de ciertas enfermedades hiperproliferativas de la piel). Todas las patentes enumeradas quedan con esto incorporadas por referencia. Las acciones anti-envejecimiento de aminopurinas 6-sustituidas sobre la piel humana fueron tambien demostradas por Rattan y Clark (Biochem. Biophys. Res. Commun. 201, 665-672 (1994) en cultivos de fibroblastos

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humanos, donde la presencia de kinetina (N6-furfuril-adenina) retraso la aparicion y disminuyo la relevancia de muchas caractensticas morfologicas y bioqmmicas asociadas con pases seriados de celulas. La efectividad de tales aminopurinas 6-sustituidas para mantener la funcion celular normal en celulas que estan envejeciendo, proporciona la base para su uso en preservar la vitalidad de piel en proceso de envejecimiento. Mas recientemente, estudios clmicos realizados en la Universidad de California, Irvine por el Dr. Gerald Weinstein (Cosmetic Dermatology 15, 29-32 (2003)) mostraron que productos topicos con kinetina en concentraciones que vanan entre 0,005 y 0,10% (Kinerase®), mejoran la apariencia de piel facial levemente a moderadamente fotodanada. Los tratamientos tras 12 y 24 semanas produjeron una mejora significativa en la apariencia de la textura de la piel, hiperpigmentacion moteada, y arrugas finas, en comparacion con el estado basal, tal y como evaluado tanto por el medico como por los sujetos. Los tratamientos tambien produjeron una mejora en la funcion barrera de la piel, tal y como evaluado por medio de una disminucion de la perdida de agua transepidermica.

[0006] Prevenir, revertir o ralentizar el proceso de envejecimiento celular ha sido una persistente, aunque esquiva, meta de la ciencia biologica, lo cual tendna una serie de significativas y practicas consecuencias. Prevenir el envejecimiento de las celulas de la piel humana u otros organos estana asociado con la conservacion de la integridad estructural y funcional y tambien de la integridad cosmetica. Si celulas cultivadas pudieran tratarse de manera que retuvieran caractensticas de celulas jovenes, la produccion de productos valiosos por tales celulas en cultivo podna ser mejorada.

[0007] A pesar de que aminopurinas 6-sustituidas, especialmente kinetina y zeatina, tienen significantes propiedades anti-envejecimiento y otras propiedades, sena deseable proporcionar compuestos adicionales reguladores del crecimiento, diferenciadores, y/o anti-senescentes. Sena especialmente deseable si tales compuestos tuvieran una selectividad y eficacia (es decir, menos toxicos y mas eficaces) que las aminopurinas 6-sustituidas actualmente empleadas. La presente invencion proporciona tales compuestos anti-envejecimiento mejorados.

Resumen de la Invencion 0008

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[0008] La presente invencion esta dirigida a derivados de purina 6,9-disustituida de la formula general

y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, bencilo metoxi-sustituido; y donde Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2-tetrahidrofuranilo. Grupos furfurilo metoxi-sustituidos incluyen, por ejemplo, 3-metoxifurfurilo, 4-metoxifurfurilo, y 5-metoxifurfurilo. Grupos fenilo metoxi-sustituidos incluyen, por ejemplo, 2-metoxifenilo, 3-metoxifenilo, 4-metoxifenilo, 2,3- dimetoxifenilo, 2,4-dimetoxifenilo, 2,5-dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 2,3,4-

trimetoxifenilo, 2,3,5-trimetoxifenilo. Grupos bencilo metoxi-sustituidos incluyen, por ejemplo, 2- metoxibencilo, 3-metoxibencilo, 4-metoxibencilo, 2,3-dimetoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, 2,5-

dimetoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, 3,5-dimetoxibencilo, 2,3,4-trimetoxibencilo, 2,3,5-trimetoxibencilo. El derivado de purina 6,9-disustituida preferido es 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina (tambien conocido como N6-furfuril-9-(2-tetrahidropiranil)adenina o piranil kinetina), la cual tiene la formula general

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Estos derivados de purina 6,9-disustituida han demostrado poseer propiedades anti-senescentes, antiinflamatorias y/o propiedades inmunosupresoras.

[0009] Los derivados de purina 6,9-disustituida de las presentes reivindicaciones son utiles como 5 composiciones cosmeticas para inhibir el envejecimiento y la senescencia, mejorando la apariencia cosmetica de celulas epidermicas de mamnferos, tales como queratinocitos o fibroblastos, y/o mitigar los efectos adversos del envejecimiento en celulas epidermicas de mairnferos, tales como queratinocitos o fibroblastos. Son especialmente utiles como composiciones cosmeticas para inhibir el envejecimiento y la senescencia y/o mejorar la apariencia cosmetica de las celulas epidermicas humanas y/o de la piel 10 humana. Por lo tanto, la presente invencion proporciona un metodo para mitigar los efectos adversos del envejecimiento en celulas de mamnfero, donde dicho metodo comprende aplicar una cantidad efectiva de un derivado de purina 6,9-disustituida a las celulas de mamffero, donde el derivado de purina 6,9- disustituida tiene la formula general

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido, y bencilo metoxi-sustituido; y donde Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2- tetrahidrofuranilo.

[0010] En algunos aspectos, los derivados de purina 6,9-disustituida tambien son utiles para el 20 tratamiento de ciertas enfermedades de la piel, incluyendo enfermedades hiperproliferativas de la piel . Las composiciones que contienen estos derivados de purina 6,9-disustituida pueden, por ejemplo, ser empleadas para el tratamiento de condiciones de la piel, tales como lupus, eccema alergico, eccema toxico, dermatitis atopica, ictiosis, papiloma, enfermedad de Bowen, queratosis seborreica, queratosis actmica, carcinoma basal y de celulas escamosas, y similares. Por lo tanto, la descripcion tambien 25 proporciona un metodo para tratar enfermedades de la piel en celulas de marnffero, donde dicho metodo comprende aplicar una cantidad efectiva de un derivado de purina 6,9-disustituida a las celulas de mamffero que necesitan tal tratamiento, donde el derivado de purina 6,9-disustituida tiene la formula

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general

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido, y bencilo metoxi-sustituido; y donde Rg es 2-tetrahidropiranilo o 25 tetrahidrofuranilo.

[0011] En algunos aspectos, los derivados de purina 6,9-disustituida tambien son utiles para tratar condiciones relacionadas con inflamacion. Tales condiciones relacionadas con inflamacion incluyen, por ejemplo, inflamacion, lesiones (por ejemplo, acelerar la curacion de las mismas), dolor y otras respuestas inmunologicas que resultan de una inflamacion (por ejemplo, proporcionando alivio de las mismas), y/o 10 tratar enfermedades inflamatorias de la piel (por ejemplo, dermatitis atopica, liquen plano, hiperpigmentacion, lesiones por herpes simple, y similares.). Por lo tanto, la descripcion tambien proporciona un metodo para tratar condiciones de inflamacion en celulas de mamffero, donde dicho metodo comprende aplicar una cantidad efectiva de un derivado de purina 6,9-disustituida a las celulas de marnffero que necesitan tal tratamiento, donde el derivado de purina 6,9-disustituida tiene la formula 15 general

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido, y bencilo metoxi-sustituido; y donde Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2- tetrahidrofuranilo.

20 [0012] Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion pueden ser empleados en

composiciones en forma de compuestos libres de las formulas anteriores o como sales farmaceuticamente aceptables de los mismos. Sales farmaceuticamente aceptables pueden ser formadas con, por ejemplo, metales alcalinos, amonio, o aminas. Los derivados o sus sales puede estar en la forma de una mezcla racemica o de isomeros opticamente activos; tambien pueden estar en forma de sales de

25 adicion con acidos.

Descripcion detallada

[0013] Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion tienen la formula general

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donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido, y bencilo metoxi-sustituido;

30 y donde Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2-tetrahidrofuranilo. Grupos furfurilo metoxi-sustituidos incluyen, por ejemplo, 3-metoxifurfurilo, 4-metoxifurfurilo, y 5-metoxifurfurilo. Grupos fenilo metoxi-sustituidos incluyen, por ejemplo, 2-metoxifenilo, 3-metoxifenilo, 4-metoxifenilo, 2,3-dimetoxifenilo, 2,4-dimetoxifenilo, 2,5- dimetoxifenilo, 3,4-dimetoxifenilo, 3,5-dimetoxifenilo, 2,3,4-trimetoxifenilo, y 2,3,5-trimetoxifenilo. Grupos bencilo metoxi-sustituidos incluyen, por ejemplo, 2-metoxibencilo, 3-metoxibencilo, 4-metoxibencilo, 2,335 dimetoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, 2,5-dimetoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, 3,5-dimetoxibencilo, 2,3,4- trimetoxibencilo, y 2,3,5-trimetoxibencilo. El derivado de purina 6,9-disustituida preferido es 6- furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina. Estos derivados de purina 6,9-disustituida han demostrado poseer propiedades anti-senescentes, antiinflamatorias y/o propiedades inmunosupresoras cuando se ponen en contacto con celulas de mamffero, incluidas celulas humanas.

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[0014] Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion son utiles como composiciones cosmeticas para inhibir el envejecimiento y la senescencia y/o mejorar la apariencia cosmetica de celulas epidermicas de mamnferos, tales como queratinocitos o fibroblastos. Son especialmente utiles como composiciones cosmeticas para inhibir el envejecimiento y la senescencia y/o mejorar la apariencia cosmetica de las celulas epidermicas humanas y/o de la piel humana.

[0015] En algunos aspectos, los derivados de purina 6,9-disustituida tambien son utiles para el tratamiento de ciertas enfermedades o condiciones de la piel, incluyendo (pero no limitadas a) enfermedades hiperproliferativas de la piel . Las composiciones que contienen estos derivados de purina 6,9-disustituida pueden, por ejemplo, ser empleados para el tratamiento de lupus, eccema alergico, eccema toxico, dermatitis atopica, ictiosis, papiloma, enfermedad de Bowen, queratosis seborreica, queratosis actmica, carcinoma basal y de celulas escamosas, acne, eritema y similares.

[0016] En algunos aspectos, los derivados de purina 6,9-disustituida tambien son utiles para tratar la inflamacion, acelerar la curacion de lesiones, proporcionar alivio del dolor y de otras respuestas inmunologicas resultantes de la inflamacion, y/o tratar enfermedades o condiciones inflamatorias de la piel (por ejemplo, dermatitis atopica, liquen plano, hiperpigmentacion, lesiones por herpes simplex, eritema y similares).

[0017] Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion pueden ser empleados en composiciones en forma de compuestos libres de las formulas anteriores o como sales farmaceuticamente aceptables de los mismos; puede emplearse un derivado de purina 6,9-disustituida individualmente o una mezcla de los mismos. Sales farmaceuticamente aceptables pueden ser formadas con, por ejemplo, metales alcalinos, amonio, o aminas. Los derivados o sus sales puede estar en la forma de una mezcla racemica o de isomeros opticamente activos; tambien pueden estar en forma de sales de adicion con acidos.

[0018] Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion generalmente estan contenidas en una composicion excipiente adecuada para la aplicacion a las celulas de interes (por ejemplo, piel humana) y en una cantidad adecuada para su uso previsto. Tales composiciones incluyen, por ejemplo, composiciones cosmeticas y farmaceuticas. Generalmente, tales composiciones comprenden de alrededor del 0,005 a alrededor del 20 por ciento de ingrediente activo, preferiblemente de alrededor del 0,05 a alrededor del 10 por ciento, y mas preferiblemente de alrededor del 0,1 a alrededor del 2 por ciento. Las composiciones, especialmente las composiciones cosmeticas y farmaceuticas, pueden estar en la forma de soluciones, cremas, aerosoles, lociones lechosas, lociones, geles, apositos, cataplasmas, champus, lapices labiales, unguentos, pastas, espumas, tinturas, pulverizaciones y similares. La forma de la composicion no es cntica, siempre y cuando sea adecuada para su uso previsto.

[0019] Excipientes o vetuculos cosmeticos y farmaceuticos aptos para la administracion de los compuestos aqu proporcionada incluye cualquier excipiente conocido para aquellos expertos en la materia como adecuado para la forma particular de administracion. Adicionalmente, los compuestos pueden ser formulados como el ingrediente activo farmaceutico unico en la composicion o pueden ser combinados con otros ingredientes activos. El compuesto activo esta incluido en el excipiente en una cantidad suficiente para ejercer un efecto terapeuticamente y/o cosmeticamente util en ausencia de graves efectos toxicos en el individuo tratado. La concentracion efectiva puede ser determinada de manera empmca, ensayando los compuestos empleando sistemas in vitro e in vivo, incluyendo cultivos tisulares y ratones sin pelo u otros modelos animales apropiados. Efectos terapeuticamente y/o cosmeticamente utiles incluyen, pero no estan limitados a, retrasar, ralentizar, prevenir, revertir, reducir, y por lo demas modificar de un modo beneficioso, un estado patologico o efectos cosmeticos adversos asociados con el envejecimiento de las celulas de mairnferos, especialmente celulas humanas, y aun mas especialmente celulas de la piel humana. Tales efectos cosmeticos pueden incluir, por ejemplo, mejorar la apariencia de la piel humana ya danada por envejecimiento o exposicion al sol/viento, prevenir (o ralentizar) en primer lugar la aparicion de tal dano en piel indemne, y/o prevenir (o ralentizar) la aparicion de dano adicional en piel ya danada. Tales efectos terapeuticos pueden incluir, por ejemplo, mejorar la condicion de la piel humana ya danada por un estado patologico, prevenir (o ralentizar) en primer lugar la aparicion de tal estado patologico, y/o prevenir (o ralentizar) la reaparicion de estados patologicos adicionales.

[0020] La concentracion de compuesto activo en la composicion dependera de la absorcion, la inactivacion, las tasas de excrecion del compuesto activo, la pauta de dosificacion, y la cantidad administrada, asf como de otros factores conocidos por los expertos en la materia. Normalmente una dosis terapeuticamente y/o cosmeticamente eficaz debe liberar una concentracion de al menos alrededor del 0,005 por ciento, preferiblemente al menos alrededor del 0,05, y mas preferiblemente al menos alrededor del 0,1 por ciento del compuesto activo al tejido tratado. El ingrediente activo puede administrarse de una sola vez, o puede dividirse en un numero de dosis inferiores para ser administradas a intervalos de tiempo. Se entiende que la dosificacion precisa y la duracion del tratamiento es una funcion del tejido que esta siendo tratado y pueden ser determinadas de manera empmca empleando protocolos de ensayo conocidos o por extrapolacion a partir datos de ensayos in vivo o in vitro. Es de senalar que las concentraciones y valores de dosificacion tambien pueden variar con la edad del individuo

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tratado. Tambien debe entenderse que para cualquier sujeto particular, los regfmenes de dosificacion espedficos deben ser ajustados a lo largo del tiempo, segun la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administracion de las composiciones, y que los intervalos de concentracion expuestos aqu son a modo de ejemplo solamente, y no pretenden limitar el alcance de las composiciones reivindicadas.

[0021] Para el tratamiento de la piel, los compuestos se pueden formular como composiciones cosmeticas o farmaceuticas para aplicacion local o topica sobre la piel, en las cuales los derivados de purina 6,9- disustituida se mezclan con un excipiente farmaceuticamente o cosmeticamente aceptable. Las composiciones se pueden proporcionar en forma de geles, cremas, lociones, solidos, soluciones, suspensiones, aerosoles, y similares. Las composiciones para tratar piel humana se formulan para aplicacion topica con un derivado de purina 6,9-disustituida en un intervalo de concentracion eficaz, entre alrededor del 0,005 a alrededor del 20 por ciento, preferiblemente de alrededor del 0,05 a alrededor del 10 por ciento, y mas preferiblemente de alrededor del 0,1 a alrededor del 2 por ciento en una crema, unguento, locion, gel, solucion, base solida o excipiente conocidos en la tecnica por ser no toxicos y dermatologicamente aceptables. La fraccion de la concentracion o del peso del derivado de purina 6,9- disustituida disuelto, suspendido, dispersado, o mezclado de otra manera en una composicion para su uso con la piel humana sera tal que el derivado de purina 6,9-disustituida es liberado a las celulas activas de la piel (por ejemplo, fibroblastos) en una concentracion eficaz, generalmente al menos alrededor del 0,005 por ciento, preferiblemente al menos alrededor del 0,05 por ciento, y preferiblemente al menos alrededor del 0,1 por ciento, de tal manera que los efectos adversos del envejecimiento se reducen, revierten o retardan. El lfmite superior se debe ajustar de tal manera que la tasa de division celular o la capacidad proliferativa total de las celulas no sea incrementada sustancialmente, en particular de tal manera que las celulas o tejidos tratados no presentan signos tfpicos de alteraciones cancerosas o pre- cancerosas o cualquier otro cambio cosmeticamente no deseado, tal como el desarrollo de lesiones. Aunque el lfmite superior puede ser de hasta alrededor del 20 por ciento, en general se prefieren lfmites superiores inferiores (tales como 10 por ciento, 2 por ciento, o incluso 1 por ciento), ya que los efectos anti-envejecimiento son evidentes en tales intervalos inferiores y el riesgo de un incremento indeseable en la tasa de division celular o la capacidad proliferativa total de las celulas se minimiza. En general, los vehnculos emolientes o lubricantes que ayudan a hidratar la piel son mas preferidos que los vehnculos volatiles, tales como etanol, los cuales resecan la piel.

[0022] Ejemplos de bases o vetnculos adecuados para la preparacion de composiciones para su uso con piel humana son petrolato, petrolato mas siliconas volatiles, lanolina, crema fna (USP), y unguento hidrofflico (USP). Las composiciones se pueden preparar para que contengan una cantidad eficaz de uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida formulados para aplicacion topica, tales como emulsionados, suspendidos o mezclados de otro modo con un unguento adecuado o crema base.

[0023] La eleccion de un vehnculo aceptable se determina en gran medida por la forma en que el derivado de purina 6,9-disustituida va a ser administrado. Tales metodos incluyen la administracion topica. Vehnculos farmaceuticamente y dermatologicamente aceptables para aplicacion topica incluyen los adecuados para uso en lociones, cremas, soluciones, suspensiones, geles, solidos y similares. Generalmente, el vehnculo es o bien de naturaleza organica o una emulsion acuosa y capaz de tener el derivado de purina 6,9-disustituida dispersado, suspendido o disuelto en el mismo. El vehnculo puede incluir, por ejemplo, emolientes farmaceuticamente aceptables, potenciadores de la absorcion por la piel, protectores Uv, antioxidantes, tampones, agentes colorantes, fragancias, emulsionantes, cargas, agentes espesantes, disolventes, y similares.

[0024] Sigue una lista mas detallada y descripcion de tales formas (lo cual no se pretende que sea exhaustivo):

[0025] (1) Lociones. Las lociones contienen una concentracion efectiva de uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida. La concentracion efectiva es preferiblemente efectiva para liberar a las celulas activas de la piel los derivados de purina 6,9-disustituida en una concentracion de entre alrededor del 0,05 a alrededor del 10 por ciento, en particular a los fibroblastos en la dermis. Las lociones tambien pueden contener de alrededor del 1 a alrededor del 50 por ciento, preferiblemente de alrededor del 3 a alrededor del 15 por ciento, de un emoliente y el resto de agua, un tampon adecuado, un alcohol C2 o C3, o una mezcla de agua o el tampon y el alcohol. Se puede emplear cualquier emoliente conocido para los expertos en la materia como adecuado para aplicacion a la piel humana. Esto incluye, pero no se limita a, los siguientes:

[0026] (a) Aceites y ceras de hidrocarburos, incluyendo (pero no limitado a) aceite mineral, petrolato, parafina, ceresina, ozoquerita, cera microcristalina, polietileno y perhidroescualeno.

[0027] (b) Aceites de silicona, incluyendo (pero no limitado a) dimetilpolisiloxanos, metilfenilpolisiloxanos, copolfmeros de silicona-glicol solubles en agua y solubles en alcohol.

[0028] (c) Grasas y aceites de trigliceridos, incluidos aquellos derivados de fuentes vegetales, animales y marinas. Ejemplos incluyen (pero no se limitan a) aceite de ricino, aceite de cartamo, aceite de semilla de

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algodon, aceite de mafz, aceite de oliva, aceite de hngado de bacalao, aceite de almendras, aceite de aguacate, aceite de palma, aceite de sesamo y aceite de soja.

[0029] (d) Esteres de acetoglicerido, incluyendo (pero no limitados a) monogliceridos acetilados.

[0030] (e) Gliceridos etoxilados, incluyendo (pero no limitado a) tales como monoestearato de glicerilo etoxilado.

[0031] (f) Alquilesteres de acidos grasos con 10 a 20 atomos de carbono. Metil-, isopropil- y butilesteres de acidos grasos son utiles aqrn. Ejemplos incluyen (pero no se limitan a) laurato de hexilo, laurato de isohexilo, palmitato de isohexilo, palmitato de isopropilo, miristato de isopropilo, oleato de decilo, oleato de isodecilo, estearato de hexadecilo, estearato de decilo, isoestearato de isopropilo, adipato de diisopropilo, adipato de diisohexilo, adipato de dihexildecilo, sebacato de diisopropilo, lactato de laurilo, lactato de miristilo, y lactato de cetilo.

[0032] (g) Alquenilesteres de acidos grasos con 10 a 20 atomos de carbono. Ejemplos de los mismos incluyen (pero no se limitan a) miristato de oleilo, estearato de oleilo, y oleato de oleilo.

[0033] (h) Acidos grasos con 9 a 22 atomos de carbono. Ejemplos adecuados incluyen (pero no se limitan a) acidos pelargonico, laurico, minstico, palmttico, estearico, isoestearico, hidroxiestearico, oleico, linoleico, ricinoleico, araquidonico, behenico, y erucico.

[0034] (i) Alcoholes grasos con 10 a 22 atomos de carbono, incluyendo (pero no limitado a) alcoholes laurico, miristflico, cetflico, hexadecanoico, esteanlico, isoesteanlico, hidroxiesteanlico, oleflico, ricinoleflico, behemlico, erudlico, y 2-octil dodecanoico.

[0035] (j) Eteres de alcohol grasos, incluyendo (pero no limitado a) alcoholes grasos etoxilados de 10 a 20 atomos de carbono, tales como (pero no estan limitados a) alcoholes laurico, cetflico, esteanlico, isoesteanlico, oleflico y de colesterol, teniendo unidos al mismo de 1 a 50 grupos de oxido de etileno o de 1 a 50 grupos de oxido de propileno o mezclas de los mismos.

[0036] (k) Eter-esteres, incluyendo (pero no limitado a) esteres de acidos grasos de alcoholes grasos etoxilados.

[0037] (I) Lanolina y derivados, incluyendo (pero no limitados a) lanolina, aceite de lanolina, cera de lanolina, alcoholes de lanolina, acidos grasos de lanolina, lanolato de isopropilo, lanolina etoxilada, alcoholes de lanolina etoxilada, colesterol etoxilado, alcoholes de lanolina propoxilada, lanolina acetilada, alcoholes de lanolina acetilada, linoleato de alcoholes de lanolina, ricinoleato de alcoholes de lanolina, acetato de ricinoleato de alcoholes de lanolina, acetato de esteres de alcohol etoxilados, hidrogenolisis de lanolina, lanolina etoxilada hidrogenada, sorbitol delanolina etoxilada, y bases de absorcion de lanolina lfquidos y semisolidos.

[0038] (m) Alcoholes polihfdricos y derivados de polieter, incluyendo (pero no limitado a) propilenglicol, dipropilenglicol, polipropilenglicol (P.M. 2000-4000), polioxietilen-polioxipropilen-glicoles, polioxipropilen- polioxietilen-glicoles, glicerol, glicerol etoxilado, glicerol propoxilado, sorbitol, sorbitol etoxilado, hidroxipropilsorbitol, polietilenglicol (P.M. 200-6000), polietilen-metoxiglicoles 350, 550, 750, 2000, 5000, homopolfmeros de poli[oxido de etileno] (P.M. 100.000-5.000.000), polialquilenglicoles y derivados, hexilenglicol (2-metil-2,4-pentanodiol), 1,3-butilenoglicol, 1,2,6-hexanotriol, etohexadiol USP (2-etil-1,3- hexanodiol), glicol vecinal C15-C18 y polioxipropilen-derivados de trimetilolpropano.

[0039] (n) Esteres de alcoholes polihfdricos, incluyendo (pero no limitado a) mono- y di-esteres de acido graso de etilenglicol y mono- y di-esteres de acido graso de dietilenglicol, polietilenglicol (P.M. 200-6000), mono- y di-esteres grasos, mono- y di-esteres de acido graso de propilenglicol, monooleato de polipropilenglicol 2000, monoestearato de polipropilenglicol 2000, monoestearato de propilenglicol etoxilado, mono- y di-esteres de acido graso de glicerilo, poliesteres de acido graso de poliglicerol, monoestearato de glicerilo etoxilado, monoestearato de 1,3-butilenglicol, diestearato de 1,3-butilenglicol, ester de acido graso de polioxietilen poliol, esteres de acido graso de sorbitan, y esteres de acido graso de polioxietilen sorbitan.

[0040] (o) Esteres de ceras, incluyendo (pero no limitado a) cera de abejas, esperma de ballena, miristato de miristilo y estearato de estearilo y derivados de cera de abeja, incluyendo, pero no limitado a, polioxietilen sorbitol de cera de abejas, los cuales son productos de reaccion de cera de abejas con sorbitol etoxilado con un contenido variable de oxido de etileno, que forman una mezcla de eter-esteres.

[0041] (p) Ceras vegetales, incluyendo (pero no limitado a) ceras de carnauba y candelilla.

[0042] (q) Fosfolfpidos, incluyendo (pero no limitado a) lecitina y derivados.

[0043] (r) Esteroles, incluyendo (pero no limitado a) esteres de colesterol y de acidos grasos de colesterol.

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[0044] (s) Amidas, incluyendo (pero no limitado a) amidas de acidos grasos, amidas de acidos grasos etoxiladas, y alcanolamidas de acidos grasos solidos.

[0045] Las lociones tambien pueden contener de alrededor del 1 a alrededor del 10 por ciento, mas preferiblemente de alrededor del 2 a alrededor del 5 por ciento, de un emulsionante. Los emulsionantes pueden ser no ionicos, anionicos o cationicos. Ejemplos de emulsionantes no ionicos adecuados incluyen (pero no se limitan a) alcoholes grasos que tienen de 10 a 20 atomos de carbono, alcoholes grasos que tienen de 10 a 20 atomos de carbono condensados con 2 a 20 moles de oxido de etileno u oxido de propileno, alquilfenoles con 6 a 12 atomos de carbono en la cadena alqmlica, condensados con 2 a 20 moles de oxido de etileno, mono- y di-esteres de acidos grasos de oxido de etileno, mono- y di-esteres de acidos grasos de oxido de etilenglicol, donde la unidad de acido graso contiene de 10 a 20 atomos de carbono, dietilenglicol, polietilenglicoles de peso molecular de 200 a 6000, propilenglicoles de peso molecular de 200 a 3000, glicerol, sorbitol, sorbitan, polioxietilen sorbitol, polioxietilen sorbitan y esteres de ceras hidrofflicos. Emulsionantes anionicos adecuados incluyen (pero no se limitan a) los jabones de acidos grasos, por ejemplo, jabones de sodio, potasio y trietanolamina, en los cuales la unidad de acido graso contiene de 10 a 20 atomos de carbono. Otros emulsionantes anionicos adecuados incluyen (pero no se limitan a) los alquilsulfatos de metal alcalino, de amonio o de amonio sustituido, alquilarilsulfonatos, y sulfonatos de alquil etoxi eter con 10 a 30 atomos de carbono en la unidad alquilo. Los sulfonatos de alquil etoxi eter contienen de 1 a 50 unidades de oxido de etileno. Entre los emulsionantes cationicos adecuados estan compuestos de amonio cuaternario, morfolinio y piridinio. Algunos de los emolientes descritos en los parrafos precedentes tambien tienen propiedades emulsionantes. Cuando se formula una locion que contiene un emoliente tal, no es necesario un emulsionante adicional, aunque puede incluirse en la composicion.

[0046] El resto de la locion generalmente es agua o un alcohol C2 o C3, o una mezcla de agua y el alcohol. Las lociones se pueden formular simplemente mezclando todos los componentes entre sf. Preferiblemente el derivado de purina 6,9-disustituida se disuelve, suspende o dispersa uniformemente de otra manera en la mezcla.

[0047] Pueden ser incluidos otros componentes convencionales de tales lociones. Uno de tales aditivos es un agente espesante a un nivel de alrededor del 1 a alrededor del 10 por ciento de la composicion. Ejemplos de agentes espesantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, polfmeros de carboxipolimetileno reticulado, etilcelulosa, polietilenglicoles, goma de tragacanto, goma de karaya, gomas xantana y bentonita, hidroxietilcelulosa, e hidroxipropilcelulosa.

[0048] Un ejemplo preferido de una composicion adecuada para aplicacion sobre la piel facial humana como una locion, contiene alrededor del 0,5 a alrededor del 10 por ciento de un derivado de purina 6,9- disustituida de esta invencion (preferiblemente piranil kinetina) en una base preparada mezclando 10 partes de monoestearato de glicerol, 10 partes de alcohol cetilico, 30 partes de esperma de ballena, 10 partes de Tween 20 (derivado de polioxialquileno de monoestearato de sorbitan), 10 partes de Span 20 (monolaurato de sorbitan), 12,5 partes de glicerina, y 100 partes de agua.

[0049] (2) Cremas. Las cremas estan formuladas para contener una concentracion efectiva de uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida. La concentracion efectiva es tipicamente una cantidad efectiva para liberar al tejido tratado los derivados de purina 6,9-disustituida en una concentracion de entre alrededor del 0,5 a alrededor del 10 por ciento, en particular a los fibroblastos en la dermis. Las cremas tambien contienen de alrededor del 5 a alrededor del 50 por ciento, preferiblemente de alrededor del 10 a alrededor del 25 por ciento, de un emoliente y el resto es agua u otro excipiente no toxico adecuado, tal como un tampon isotonico. Los emolientes, como se ha descrito anteriormente para las lociones, tambien se pueden usar en las composiciones de crema. La crema tambien puede contener un emulsionante adecuado, como se describio anteriormente. El emulsionante se incluye en la composicion a un nivel de alrededor del 3 a alrededor del 50 por ciento, preferiblemente de alrededor del 5 a alrededor del 20 por ciento.

[0050] (3) Soluciones y suspension. Las soluciones se formulan para contener una cantidad efectiva de uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida que es tipicamente una cantidad efectiva para liberar a celulas activas de la piel los derivados de purina 6,9-disustituida a entre alrededor del 0,5 a alrededor del 10 por ciento, en particular los fibroblastos de la dermis; el resto es agua, un disolvente organico adecuado u otro disolvente adecuado o tampon. Materiales organicos adecuados utiles como disolvente o una parte de un sistema disolvente son los siguientes: propilenglicol, polietilenglicol (P.M. 200-600), polipropilenglicol (P.M. 425-2025), glicerina, esteres de sorbitol, 1,2,6-hexanotriol, etanol, isopropanol, tartrato de dietilo, butanodiol, y mezclas de los mismos. Tales sistemas disolventes pueden contener tambien agua.

[0051] Estas composiciones que se formulan como soluciones o suspensiones pueden aplicarse sobre la piel, o pueden ser formuladas como un aerosol y se aplica a la piel como una pulverizacion. Las composiciones de aerosol ademas contienen de alrededor del 25 a alrededor del 80 por ciento, mas preferiblemente de alrededor del 30 a alrededor del 50 por ciento, de un propulsor adecuado. Ejemplos de tales propulsores son los hidrocarburos de bajo peso molecular clorados, fluorados y clorofluorados.

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Tambien se emplean oxido nitroso, dioxido de carbono, butano y propano como gases propulsores. Estos propulsores se emplean tal como se entiende en el estado de la tecnica en una cantidad y bajo una presion adecuada para expulsar el contenido del contenedor.

[0052] (4) Geles. Las composiciones de gel se pueden formular mezclando simplemente un agente espesante adecuado con las composiciones de solucion o suspension descritas anteriormente. Ejemplos de agentes espesantes adecuados han sido previamente descritos con respecto a las lociones.

[0053] Las composiciones gelificadas contienen una cantidad efectiva de derivados de uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida, la cual tipicamente es una cantidad efectiva para liberar a las celulas activas de la piel, en particular los fibroblastos de la dermis, los derivados de purina 6,9-disustituida a entre alrededor del 0,05 a alrededor del 10 por ciento; de alrededor del 5 a alrededor del 75 por ciento, preferiblemente de alrededor del 10 a alrededor del 50 por ciento, de un disolvente organico como descrito anteriormente; de alrededor del 0,5 a alrededor del 20 por ciento, preferiblemente de alrededor del 1 a alrededor del 10 por ciento del agente espesante; siendo el resto agua u otro excipiente acuoso.

[0054] (5) Solidos. Las composiciones de formas solidas se pueden formular como composiciones de tipo barra, destinados a aplicarse en los labios u otras partes del cuerpo. Tales composiciones contienen una cantidad efectiva de uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida. La cantidad es tipicamente una cantidad efectiva para liberar a las celulas activas de la piel, particularmente los fibroblastos de la dermis, los derivados de purina 6,9-disustituida, a entre alrededor del 0,5 a alrededor del 10 por ciento. Los solidos tambien contienen de alrededor del 50 a alrededor del 98 por ciento, preferiblemente de alrededor del 60 a alrededor del 90 por ciento, de los emolientes anteriormente descritos. Esta composicion puede contener ademas desde alrededor del 1 a alrededor del 20 por ciento, preferiblemente de alrededor del 5 a alrededor del 15 por ciento, de un agente espesante adecuado, y, si se desea o es necesario, emulsionantes y agua o tampones. Agentes espesantes descritos anteriormente con respecto a las lociones se emplean adecuadamente en las composiciones en forma solida.

[0055] Tambien se pueden emplear en cualquiera de estos tipos de composiciones para aplicacion topica, u otra forma de aplicacion, otros ingredientes, tales como conservantes, incluyendo metil-parabeno o etil- parabeno, perfumes, colorantes o similares, que son conocidos en la tecnica por proporcionar a composiciones para aplicacion sobre la piel la estabilidad, fragancia o color deseables, u otras propiedades deseables, tales como blindaje de rayos actmicos del sol.

[0056] La composicion tambien puede incluir otros ingredientes activos mitigantes de efectos adversos por la edad, tales como retinoides, kinetina, y/o zeatina, distintos de los derivados de purina 6,9- disustituida, pero no debe incluir ingredientes que potencian o inducen propiedades inductoras de la division celular, tales como auxina. Composiciones preferidas contienen, como el unico ingrediente activo mitigante de efectos adversos por la edad, uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida.

[0057] Composiciones para uso con piel humana preferiblemente se pueden aplicar una vez al dfa o, si es necesario para lograr el resultado deseado, mas a menudo, a las areas de la piel para la que se pretende el tratamiento. Se entiende que el regimen de tratamiento preciso depende del individuo tratado y puede determinarse empmcamente dependiendo de la formulacion y, en particular, de la edad del individuo tratado. Cualquier regimen es aceptable, siempre que se logren los efectos mitigantes de la edad deseados, sin efectos secundarios indeseables sustancialmente perjudiciales o duraderos.

[0058] Los metodos para tratar piel humana se practican mediante la aplicacion sobre la piel, preferiblemente a diario, de una composicion de la invencion adecuada para el tratamiento de piel humana, tal y como tratado anteriormente, por un penodo indefinido, en general, mientras la persona desee disfrutar de la mitigacion de los efectos adversos del envejecimiento de la piel. Una aplicacion diaria de una composicion sobre la piel debena ser necesaria durante al menos alrededor de un mes, y hasta al menos alrededor de un ano, dependiendo de la edad de la persona, la condicion de la piel a la que se aplica la composicion, y la concentracion de derivado de purina 6,9 disustituida en la composicion, antes de que los efectos beneficiosos (por ejemplo, retrasando cambios morfologicos relacionados con la edad en fibroblastos de la capa celular basal de la piel) comiencen a ser evidentes en la superficie de la piel. Si la aplicacion del derivado de purina 6,9-disustituida se finaliza, los efectos del envejecimiento mitigados por el metodo pueden producirse de nuevo despues de algun tiempo.

[0059] Para fibroblastos (u otras celulas activas, tales como queratinocitos) de la piel humana, el metodo se practica aplicando sobre la superficie externa de la piel una composicion que esta formulada como una crema, unguento, locion, gel, solucion, perfume, solido u otra forma adecuada, fisiologicamente aceptable,s para la aplicacion sobre la superficie externa de la piel, donde la composicion contiene uno o mas derivados de purina 6,9-disustituida en una concentracion efectiva para liberar a la dermis de la piel una concentracion efectiva, efectiva para mitigar los efectos adversos del envejecimiento sobre celulas activas (por ejemplo, fibroblastos) en la dermis, por lo que la piel tratada envejece mas lentamente que piel no tratada y/o se vuelve mas joven en apariencia que anteriormente al tratamiento, tal como se manifiesta por una reduccion en la formacion de arrugas y/o flacidez u otros indicadores cosmeticos de edad. Tales concentraciones son tipicamente de alrededor del 0,05 a alrededor del 10 por ciento

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(preferiblemente de alrededor del 0,1 a alrededor del 2 por ciento). La concentracion precisa, la cual puede ser determinada empmcamente, es una funcion del vehmulo excipiente o de liberacion y de la forma en la cual se presenta la composicion sobre la superficie de la piel.

[0060] La divulgacion tambien se refiere a metodos para el tratamiento de la senescencia celular y de los estados patologicos mencionados anteriormente, as^ como para mitigar los efectos adversos del envejecimiento de las celulas de mamnferos, especialmente celulas humanas (y mas especialmente celulas de la piel humana). El o los derivados de purina 6,9-disustituida de esta divulgacion pueden ser administrados de manera profilatica o terapeutica, en forma de composiciones descritas anteriormente y en las cantidades efectivas descritas anteriormente.

[0061] Tal y como empleado aqrn, mitigar el efecto adverso del envejecimiento de las celulas de mairnfero significa que el desarrollo de las alteraciones morfologicas que ocurren normalmente con el envejecimiento en celulas normales de marnffero in vitro o in vivo, se ralentiza, se revierte y/o se retrasa. Los efectos adversos del envejecimiento tambien incluyen alteraciones en la expresion genica y en la biosmtesis de protemas, relacionadas con la edad. El efecto mitigante referido aqrn se consigue sin incrementar sustancialmente la tasa de crecimiento o la capacidad proliferativa total de las celulas que son tratadas.

[0062] La mitigacion de los efectos adversos del envejecimiento en celulas, incluyendo los efectos en celulas in vitro y/o in vivo, puede detectarse como un retraso o reversion de la aparicion de las alteraciones morfologicas y fenotfpicas relacionados con la edad que habitualmente se producen con el envejecimiento de las celulas. Estas alteraciones incluyen las alteraciones detectadas en las celulas de cultivos tisulares, tales como la incapacidad de las celulas mas viejas de responder a factores de crecimiento exogenos y/o al alto nivel de autofluorescencia encontrado en las celulas viejas. Segun envejecen las celulas, exhiben una perdida del potencial proliferativo dependiente de la edad. Celulas de fibroblasto cultivadas que son viejas, muestran numerosas caractensticas relacionadas con la edad, incluyendo morfologfa aplanada e irregular, tamano anormalmente grande, crecimiento escaso, rendimiento celular por unidad de superficie de sustrato del cultivo bajo, una frecuencia significativa de celulas polinucleadas, dificultad en la tripsinizacion, la incapacidad de crecer hasta confluencia, y/o una alta tasa de produccion de desechos en el medio de cultivo. Las celulas jovenes muestran mayor capacidad de respuesta a factores de crecimiento y tasas de smtesis de ADN y de protemas mas elevadas que las celulas viejas. Celulas de fibroblastos de marnfferos jovenes, incluidos los humanos, en cultivo tisular, se muestran sanas y limpias; poseen una morfologfa regular, larga y delgada, fusiforme; estan densamente dispuestas en formaciones, mientras alcanzan la confluencia en sustratos de cultivo; no crecen mas unas que otras; rara vez tienen mas de un nucleo; y producen pocos desechos en el medio de cultivo. Alteraciones in vivo relacionadas con la edad incluyen alteraciones en los tejidos de marnfferos, tales como el desarrollo de, o el aumento del o la profundidad de las arrugas, lmeas, flacidez de la piel, decoloraciones, manchas, apariencia coriacea y/o amarilleada, asociados a la apariencia cosmetica de la piel, asf como a las alteraciones en la integridad estructural y funcional del tejido. Las composiciones de esta invencion son efectivas para mejorar la apariencia general y el estado de la piel, incluyendo las alteraciones relacionadas con la edad y alteraciones que podnan no estar estrechamente relacionadas con el envejecimiento (por ejemplo, el acne, eritema, enrojecimiento, y similares). Para los fines de esta invencion, tales alteraciones que podnan no estar estrechamente relacionadas con el envejecimiento, o incluso podnan ser independientes del envejecimiento, pretenden estar incluidas en las alteraciones relacionadas con la edad.

[0063] Los metodos de esta invencion pueden emplearse en combinacion con otros metodos terapeuticos o cosmeticos (especialmente aquellos asociados con el tratamiento de la piel humana). Por lo tanto, los presentes metodos pueden emplearse en combinacion con, por ejemplo, tratamientos o dispositivos de laser o basados en otros tipos de luz.

[0064] Tal y como empleado aqrn, la capacidad proliferativa total de las celulas normales, tales como celulas de fibroblastos, es una medida de la capacidad proliferativa finita de celulas y se refiere al numero total de duplicaciones del numero celular, a la cual puede someterse un cultivo de tales celulas antes de que el crecimiento del cultivo cese, y es una funcion de la edad del donante del que se obtuvieron las celulas. Las celulas obtenidas a partir de tejido fetal presentan una mayor capacidad proliferativa en cultivo que las celulas obtenidas a partir de tejido adulto.

[0065] Tal y como empleado aqrn, la tasa de crecimiento o la tasa de proliferacion es una medida de la velocidad a la que las celulas se dividen. Una unidad de medida reconocida por los expertos en la materia es el redproco del tiempo de duplicacion. Al final del ciclo de vida de un cultivo de celulas normales, el cese del crecimiento del cultivo aparece muy rapidamente, disminuyendo desde valores casi normales, caractensticos de las celulas jovenes, a cero, en solamente unas pocas duplicaciones.

[0066] Tal y como empleado aqrn, alterar sustancialmente la tasa de crecimiento o la capacidad total proliferativa significa alterar la tasa de division celular o el numero de duplicaciones celulares mas alla de lo que esta dentro de la variacion normal entre celulas y tejidos. En particular, la tasa de crecimiento o la capacidad proliferativa total no se altera de tal manera que las celulas tratadas sean inmortalizadas o

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experimenten una transformacion maligna. En el caso de celulas tratadas in vivo, el tejido tratado no altera sustancialmente el tamano, el espesor o desarrolla celulas precancerosas o cancerosas. Metodos para la evaluacion de la tasa de crecimiento y la capacidad proliferativa total son conocidos por los expertos en la materia. Cualquiera de estos metodos, incluyendo los ejemplificados aqm, se puede emplear para evaluar la alteracion en la tasa de crecimiento o en la capacidad proliferativa total.

[0067] Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion por lo general pueden

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prepararse a partir de las correspondientes purinas 6-cloro-9-sustituidas, mediante reaccion con la amina apropiada.

6-Cloro-9-(2-tetrahidropiranil)purina, la cual se puede emplear para preparar los derivados de purina 6,9- disustituida preferidos de esta invencion, puede sintetizarse a partir de 6-cloropurina y 3,4-dihidropirano, empleando acido p-toluensulfonico, de acuerdo con la bibliograffa (Robins et al., J. Am. Chem. Soc. 83, 2574 (1961)). Bencilaminas, fenilaminas y furfurilaminas de partida, no sustituidas o metoxi-sustituidas, no disponibles comercialmente (de lo contrario, obtenidas a traves de Sigma Aldrich o Fluorochem), pueden prepararse a partir de los aldetndos correspondientes, en presencia de un catalizador metalico adecuado. La 6-cloro-9-(2-tetrahidrofuranil)purina puede sintetizarse a partir de 6-cloropurina y 3,4-dihidrofurano, empleando acido p-toluensulfonico.

[0068] Los siguientes ejemplos se incluyen con fines ilustrativos. A menos que se indique lo contrario, todas las concentraciones, proporciones y similares estan basados en peso.

[0069] Ejemplo 1. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-cIoro-9-(2-tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 6-cloropurina (60 g, 388 mmol) y monohidrato de acido tosico (1 g) en acetato de etilo (750 ml) se agito vigorosamente a 50°C. Se anadio 3,4-dihidropirano (40 ml, 438 mmol) gota a gota a lo largo de un penodo de 30 min, manteniendo la temperatura de reaccion entre 55-60°C (Robins et al., 1961). La solucion fue agitada durante una hora adicional, y a lo largo de este penodo se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadio amomaco acuoso concentrado (35 ml) y la solucion se agito durante 5 min. Subsiguientemente se extrajo una solucion homogenea de color verde oscuro con 2 x 200 ml de agua. El extracto de acetato de etilo de color amarillo se seco durante la noche sobre sulfato de sodio y despues se enfno a -20°C. El solido amarillo generado se seco nuevamente al vacfo sobre pentoxido de fosforo a 37°C. Rendimiento: 66,9 g (72,2%). Espectrometna de masas-espectro de energfa Ms (ES): [M+H]* = 239 (100).

[0070] Ejemplo 2. El ejemplo tambien ilustra la preparacion de 6-cIoro-9-(2-tetrahidropiranil)-purina. Una mezcla de 6-cloropurina (50 g, 323 mmol) y acido p-toluensulfonico (2,5 g, 14,5 mmol) en acetato de etilo (200 ml) se agito vigorosamente a temperatura ambiente. Se anadio 2,3-dihidrofurano (37,5 g, 535 mmol) gota a gota a lo largo de un penodo de 30 min. La solucion se agito durante una hora adicional, durante la cual se disolvio completamente la 6-cloropurina (Lewis et al., J. Org. Chem., 26; 1961; 3837). Subsiguientemente, se anadio amomaco acuoso (150 ml) mezclado con agua, en relacion molar 1:1. Se extrajo entonces una solucion homogenea de color amarillo oscuro con 2x100 ml de agua. El extracto de acetato de etilo de color amarillo se seco durante la noche sobre sulfato de sodio. Entonces, la solucion se filtro y se evaporo. Despues de la evaporacion al vacfo, se seco al vacfo un aceite crudo de color amarillo sobre pentoxido de fosforo a 37°C. El producto crudo de color amarillo se recristalizo a partir de eter de petroleo. Rendimiento: 80%, solido amarillo. Punto de fusion: 92-95°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (tolueno:acetato de etilo, 1:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >97%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 2.05sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.22sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.48m(2H); 3.95q(1H, J = 7.4 Hz); 4.20qq(1H, Ja = 7.4 Hz, Jb = 1.9 Hz); 6.40m(1H); 8.78s(1H); 8.80s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): [M+H]* = 225 (100).

[0071] Ejemplo 3. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-fururilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina. A furfurilamina (100 g, 91 ml, 1030 mmol,) se anadieron 30,3 g de 6-cIoro-9-(2-tetrahidropiranil) purina (126,9 mmol). El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. La solucion homogenea se calento a 90°C durante 60 minutos y subsiguientemente se enfrio hasta temperatura ambiente. Inmediatamente se deposito y separo por filtracion hidrocloruro de furfurilamina cristalino, incoloro. El filtrado restante se evaporo al vacfo. Se anadio isooctano (600 ml) al aceite amarillo, se agito intensamente, y se permitio reposar a temperatura ambiente. El producto cristalizo lentamente a lo largo de alrededor de 1 hora. Un precipitado solido blanco se separo por filtracion, se lavo con eter etflico (50 ml), y se seco al aire durante la noche para eliminar el disolvente. El producto crudo se recristalizo en

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metanol. Rendimiento: 24,4 g (81,52 mmol, 64,2%). Punto de fusion: de manera precisa 144-145°C, ninguna descomposicion. Cromatograffa en capa fina (TLC) (cloroformo:metanol (95:5 (v: v))), una sola mancha (Rf=0,35). Cromatograffa en capa fina (TLC) (cloroformo): una sola mancha (Rf=0,34). Pureza HPLC: 99+%. Analisis elemental % (esperado / encontrado): C = 60,19/60,14, H = 5,72/5,70, N = 23,40/23,30.

[0072] Ejemplo 4. El ejemplo tambien ilustra la preparacion de 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)- purina. A furfurilamina (1456 mg, 15 mmol) dispuesta en 100 ml de n-propanol, se anadieron 6-cloro-9-(2- tetrahidrofuranil)purina (2247 mg, 10 mmol) y trietilamina (3,6 ml, 25 mmol). El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. La solucion homogenea se calento a 100°C durante 3 horas y subsiguientemente se enfrio hasta temperatura ambiente. Despues de la evaporacion al vado, el material resultante se trato con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de eter dietflico. El producto crudo blanco se recristalizo en metanol. Rendimiento: 85%, solido blanco. Punto de fusion: 128-129°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (CHCl3:metanol, 8:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >99%. 1H- NMR (400 MHz, DMSO): 2.02sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.22sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.42m(2H); 3.91q(1H, J = 7.4 Hz); 4.14q(1H, J = 7.4 Hz); 4.70bs(2H); 6.23dd(1H, Ja = 3.2 Hz, Jb = 0.9 Hz); 6.26m(1H); 6.36t(1H, J = 2.4 Hz); 7.53m(1H); 8.19bs(1H); 8.24s(1H); 8.27s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): [M+H]+= 286 (100).

[0073] Ejemplo 5. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(4-metoxibencilamino)-9-(2-

tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 10 mmol de 6-cIoro-9-(2-tetrahidropiranil)purina (preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), 12 mmol de 4-metoxibencilamina y 5 ml de trietilamina fue refluida en n- propanol durante 3 horas. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua y se extrajo en acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se seco sobre Na2SO4, se filtro, se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 30 ml de eter dietflico. Un residuo solido se separo por filtracion y el producto crudo se recristalizo a partir de metanol. Rendimiento: 80 %, solido blanco.

Punto de fusion: 137-138°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (CHCl3:metanol, 8:2 (v:v)), una sola

mancha. Pureza HPLC: > 98 %. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 1.55m(2H); 1.68m(1H); 1.93m(2H); 2.26qq (Ja = 11.0 Hz, Jb = 4.3 Hz); 3.64qq (1H, Ja = 11.0 Hz, Jb = 4.3 Hz); 3.70s(3H); 4.00d(1H, J = 11.0 Hz); 4.65s(2H); 5.63dd(1H, Ja = 11.0 HZ, Jb = 2.2 Hz); 6.85d(2H, J= 8.8Hz); 7.28d(2H, J= 8.8 Hz); 8.23s (1H); 8.29bs(1H); 8.34s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (Es): [M+H]+= 340 (100).

[0074] Ejemplo 6. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(2-metoxibencilamino)-9-(2-

tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 6-cloro-9-(2-tetrahidropiranil)purina (2387 mg, 10 mmol), preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina, 2-metoxibencilamina (1470 mg, 12 mmol) y 5 ml de trietilamina (35 mmol), se refluyo en n-propanol durante 3 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de eter de petroleo. El producto crudo blanco se recristalizo en metanol. Rendimiento: 90%, solido blanco. Punto de fusion: 106-108°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (CHCl3:metanol, 8:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 1.56m(2H); 1.71in(1H); 1.94m(2H); 2.27qq(1H, Ja = 12.3 Hz, Jb = 3.8 Hz); 3.67m(1H); 3.83s(3H); 4.20m(1H); 4.71 bs(2H); 5.64dd(1H, Ja = 11.3 Hz, Jb = 1.9 Hz); 6.83tt(1H, Ja = 7.4 Hz, Jb = 0.9 Hz); 6.97dd(1H, Ja = 8.2 Hz, Jb = 0.7 Hz); 7.14d(1H, J = 7.3 Hz); 7.20tt(1H, Ja = 7.8 Hz, Jb = 1.7 Hz); 8.09s(1H); 8.21 s(1h); 8.36s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): [M+H]+= 340 (100).

[0075] Ejemplo 7. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(4-metoxibencilamino)-9-(2-

tetrahidrofunanil)purina. Una mezcla de 10 mmol de 6-cIoro-9-(2-tetrahidrofuranil)purina (preparada a

partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), 12 mmol de 4-metoxibencilamina y 5 ml de trietilamina fue refluida en n-propanol durante 3 horas. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante consecuentemente se trato con agua y se extrajo en acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 30 ml de eter dietflico. El residuo solido se separo por filtracion y el producto crudo se recristalizo a partir de metanol. Rendimiento: 80 %, solido blanco. Punto de fusion: 182-183°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (CHCl3:metanol, 8:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: > 98 %. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 2.02sxt(1H, J = 7.4 Hz); 2.21sxt(1H, J = 7.4 Hz); 2.44m(2H); 3.72s(3H); 3.90q (1H, J = 7.4 Hz); 4. 15q (J = 7.4 Hz); 4.67s(H); 6.28m(1H); 6.86d(2H, J =8.7 Hz); 7.31d(2H, J = 8.7 Hz); 8.1bs(1H); 8.19s(1H); 8.29s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): (M+H]* = 326(100).

[0076] Ejemplo 8. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(2-metoxibencilamino)-9-(2-

tetrahidrofuranil)purina. Una mezcla de 2247 mg (10 mmol) de 6-cloro-9-(2-tetrahidropiranil)purina (preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), 2-metoxibencilamina (1470 mg, 12 mmol) y 5 ml de trietilamina (35 mmol), se refluyo en n-propanol durante 3 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de hexano. El producto crudo blanco se recristalizo en metanol. Rendimiento: 90%, solido blanco. Punto de fusion: 97-99°C. Cromatograffa en

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capa fina (TLC) (CHC^metanol, 8:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 2.02m(1H); 2.21sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.43m(2H); 3.83s(3H); 3.91 q(1H, J = 7.4 Hz); 4. 14q(1H, J =7.4 Hz); 4.68bs(2H); 6.26m(1H); 6.83tt(1H, Ja = 7.4 Hz, Jb = 0.9 Hz); 6.98dd(1H, Ja = 8.2 Hz, Jb = 0.7 Hz); 7.12d(1H,J = 7.3 Hz); 7.20tt(1H, Ja = 7.8 Hz, Jb = 1.7 Hz); 8.05bs(1H); 8.18s(1H); 8.27s(1H). Espectrometna de masas-espectro de ene^a MS (ES): [M+H]+= 326 (100).

[0077] Ejemplo 9. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(3-metoxibencilamino)-9-(2- tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 10 mmol de 6-cIoro-9-(2-tetrahidropiranil)purina, 12 mmol de 3- metoxibencilamina y 5 ml de trietilamina fue refluida en n-propanol durante 3 horas. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua y se extrajo en acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se seco sobre Na2SO4, se filtro y subsiguientemente se evaporo. Cuando el residuo oleoso se trato con 30 ml de n-hexano, se formo un producto blanco en polvo. El producto crudo se cristalizo a partir de metanol. Rendimiento: 70 %, solido blanco. Punto de fusion: 134-135°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (CHC^CHaOH, 85:15 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >99%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 1.56m (2H); 1.70m (1H),1.94m(2H); 2.30qq (1H, Ja=11.0Hz, Jb =4.3 Hz); 3.67tt (1H, Ja=11.0 Hz, Jb=4.3 Hz); 3.83s(3H); 4.00d(1H, J = 11Hz); 4.71 s(2H); 5.64dd (1H, Ja= 11.0 Hz, Jb=4.3 Hz); 6.831 (1H, J = 7.7 Hz); 6.97d (1H, J = 7.7 Hz); 7.14d (J = 7.7 Hz); 7.20tt(1H, Ja=7.7Hz, Jb=1.5 Hz); 8.09bs(1H): 8.21 s(1H); 8.36s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): [M+H]*= 340 (100).

[0078] Ejemplo 10. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(4-metoxifenilamino)-9-(2-

tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 2387 mg (10 mmol) de 6-cloro-9-(2-tetrahidropiranil)purina (preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), 4-metoxifenilamina (1803 mg, 15 mmol) y 5 ml de diisopropilamina (35 mmol), se refluyo en n-propanol (100 ml)durante 5 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de eter de petroleo. Rendimiento: 90%, solido blanco. Punto de fusion: 150-151 °C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (acetato de etilo:tolueno, 3:1 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H-NMR (400 Mhz, DMSO):

1.59m(2H); 1.73m(1H); 1.97m(2H); 2.31qq(1H, Ja = 12.3 Hz, Jb = 3.8 Hz); 3.69m(1H); 4.02m(1H); 5.68dd(1H, Ja = 11.3 Hz, Jb = 1.9 Hz); 6.91d(1H, J = 9.0 Hz); 7.78d(1H, J = 9.0 Hz); 8.34s(1H); 8.47s(1H); 9.72s(1H). Espectrometna de masas-espectro de ene^a MS (ES): [M+H]+= 326 (100).

[0079] Ejemplo 11. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(3-metoxibencilamino)-9-(2-

tetrahidrofuranil)purina. Una mezcla de 10 mmol de 6-cIoro-9-(2-tetrahidrofuranil)purina (preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), 12 mmol de 3-metoxibencilamina y 5 ml de trietilamina se refluyo en n-propanol durante 3 horas. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua y se extrajo en acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se seco sobre Na2SO4, se filtro y se evaporo. El residuo se lavo subsiguientemente con 30 ml de n-hexano. Se separo por filtracion un residuo solido blanco y el producto crudo se cristalizo a partir de metanol. Despues de varias horas, se obtuvieron cristales transparentes puros. Rendimiento: 80 %, solido blanco. Punto de fusion: 87-88°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (CHC^metanol, 8:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: > 98 %. 1H- NMR (400 MHz, DMSO): 2.02sxt(1H, J = 7.4 Hz); 2.22sxt(1H, J = 7.4 Hz); 2.45m(2H); 3.84s(3H); 3.91q (1H, J = 7.4 Hz); 4.14q (1H, J = 7.4 Hz); 4.68s(2H); 6.26m (1H); 6.83t (1H, J = 7.7 Hz); 6.98d(1H, J = 7.7 Hz); 7.11d(1H, J =7.7 Hz); 7.20t(1H, J = 7.7 Hz); 8.06bs(1H); 8.17s(1H); 8.27s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (Es): [M+H]* = 326 (100).

[0080] Ejemplo 12. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(2,5-dimetoxibencilamino)-9-(2- tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 2387 mg (10 mmol) de 6-cloro-9-(2-tetrahidropiranil)purina, 2,5- dimetoxibencilamina (2006 mg, 12 mmol) y 5 ml de trietilamina (35 mmol), se refluyo en n-propanol durante 3 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de eter diefflico. Un solido blanco se separo por filtracion y se seco al vado. Rendimiento: 95%, solido blanco. Punto de fusion: 150-152°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (acetato de etilo:hexano, 1:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 1.56m(2H); 1.70m(1H); 1.94m(2H); 2.27qq (1H, Ja = 12.3 Hz, Jb = 3.8 Hz); 3.60s(3H); 3.70s(3H); 3.66m(1H); 3.78s(3H); 4.00m(1H); 4.68bs(2H); 5.64dd(1H, Ja = 11.2 Hz, Jb = 2.0 Hz); 6.75m(2H); 6.89dd(1H, Ja = 9.2 Hz, Jb = 1.9 Hz); 8.10bs(1H); 8.21 s(1H); 8.36s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): [M+H]+= 370 (100).

[0081] Ejemplo 13. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(2,5-dimetoxibencilamino)-9-(2- tetrahidrofuranil)purina. Una mezcla de 2247 mg (10 mmol) de 6-cloro-9-(2-tetrahidrofuranil)purina (preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), 2,5-dimetoxibencilamina (2006 mg, 12 mmol) y 5 ml de trietilamina (35 mmol), se refluyo en n-propanol durante 3 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-propanol, el material resultante se trato con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de eter diefflico. Un producto crudo blanco se

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recristalizo en metanol. Rendimiento: 90%, solido blanco. Punto de fusion: 103-104°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (acetato de etilo:hexano, 1:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 2.02m(1H); 2.21 sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.43m(2H); 3.60s(3H); 3.78s(3H); 3.91 q(1H, J = 7.4 Hz); 4.14q(1H, J = 7.4 Hz); 4.65bs(2H); 6.26m(1H); 6.74m(2H); 6.90d(1H, J = 8.8 Hz); 8.10bs(1H); 8.18s(1H); 8.28s(1H). Espectrometna de masas-espectro de ene^a MS (Es): [M+H]+= 356 (100).

[0082] Ejemplo 14. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(2,3,4-trimetoxibencilamino)-9-(2- tetrahidropiranil)purina. Una mezcla de 2387 mg (10 mmol) de 6-cloro-9-(2-tetrahidropiranil)purina, hidrocloruro de 2,3,4-trimetoxibencilamina (2799 mg, 12 mmol) y 8 ml de trietilamina (57 mmol), se refluyo en n-butanol (45 ml) durante 3 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-butanol, el material resultante se trato con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 30 ml de eter dietflico. Un solido blanco se separo por filtracion y se recristalizo a partir de metanol. Rendimiento: 90%, solido blanco. Punto de fusion: 142-143°C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (acetato de etilo:hexano, 1:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H- NMR (400 MHz, DMSO): 1.57m(2H); 1.72m(1H); 1.95m(2H); 2.27qq(1H, Ja = 12.3 Hz, Jb = 3.8 Hz); 3.67m(1H); 3.73s(3H); 3.75s(3H); 3.84s(3H); 4.00m(1H); 4.66bs(2H); 5.63dd(1H, Ja = 11.3 Hz, Jb = 1.9 Hz); 6.69d(1H, J = 8.7 Hz); 6.91d(1H, J = 8.7 Hz); 8.04bs(1H); 8.20s(1H); 8.34s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (eS): (M+H]+= 400 (100).

[0083] Ejemplo 15. Este ejemplo ilustra la preparacion de 6-(2,3,4-trimetoxibencilamino)-9-2- tetrahidrofuranil)purina. Una mezcla de 2247 mg (10 mmol) de 6-cloro-9-(2-tetrahidrofuranil)purina (preparada a partir de 1546 mg de 6-cIoropurina), hidrocloruro de 2,3,4-trimetoxibencilamina (2799 mg, 12 mmol) y 8 ml de trietilamina (57 mmol), se refluyo en n-butanol durante 3 horas. El solido se disolvio completamente mediante mezcla exhaustiva. Despues de la evaporacion al vado del n-butanol, el material resultante se trato con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml). El extracto de acetato de etilo se evaporo y el residuo subsiguientemente se lavo con 50 ml de hexano. Un producto crudo blanco se recristalizo en metanol. Rendimiento: 90%, solido blanco. Punto de fusion: 140-141 °C. Cromatograffa en capa fina (TLC) (acetato de etilo:hexano, 1:2 (v:v)), una sola mancha. Pureza HPLC: >98%. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 2.02sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.22sep(1H, J = 6.8 Hz); 2.44m(2H); 3.73s(3H); 3.75s(3H); 3.84s(3H); 3.91 q(1H, J = 7.4 Hz); 4.13q(1H, J = 7.4 Hz); 4.65bs(2 H); 6.26m(1H); 6.70d(1H, J = 8.6 Hz); 6.90d(1H, J = 8.6 Hz); 8.03bs(1H); 8.19s(1H); 8.26s(1H). Espectrometna de masas-espectro de energfa MS (ES): [M+H]+= 386 (100).

[0084] Ejemplo 16. Se han llevado a cabo diversos estudios a corto plazo, preliminares, del efecto de 6- furfuriIamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina en celulas de fibroblastos de piel humana cultivadas. El estudio inicial implico la adicion de 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil) purina (40 a 400 pM) a celulas de fibroblastos de piel humana en un cultivo. El porcentaje de union de las celulas a la superficie del frasco de cultivo no se vio afectado despues de 6 horas de tratamiento. En los restantes experimentos presentados en este ejemplo, se anadio la 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiraniI)purina directamente al medio de cultivo, al mismo tiempo que se sembraron las celulas.

Se ensayo un rango mas amplio de concentraciones (de 0,01 a 500 pM), para determinar los efectos de la 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiraniI)purina sobre la supervivencia de los fibroblastos de piel humana cultivados despues de 3 dfas de tratamiento. A concentraciones de entre 1 y 200 pM, puede haber habido una ligera estimulacion del crecimiento y de la supervivencia celular. No fueron aparentes ni toxicidad ni otros efectos negativos debido al tratamiento de las celulas con 6-furfurilamino-9-(2-

tetrahidropiraniI)purina.

Tambien se evaluo el efecto del tratamiento con 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiraniI)purina (0 a 400 pM) sobre el crecimiento a corto plazo de los fibroblastos humanos jovenes. El crecimiento celular fue similar en las muestras sin tratar y en muestras tratadas con 40, 80, y 200 pM de 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina. En niveles de tratamiento de alrededor de 400 pM puede haber habido una ligera disminucion en el crecimiento de las celulas. Experimentos similares se llevaron a cabo para determinar la extension de apoptosis y la tincion con beta-galactosidasa en celulas tratadas con 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina y no tratadas. No hubo indicios de la induccion de apoptosis o senescencia prematura de fibroblastos humanos tratados con las diferentes dosis de 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina.

Tambien se examino el efecto de 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina en celulas senescentes. Un numero igual de celulas senescentes se sembraron en matraces separados y despues se trataron con diferentes concentraciones de 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina (0 a 400 pM). El numero de celulas se determino despues de 7 y 14 dfas de tratamiento, empleando un contador Coulter, despues de la tripsinizacion y resuspension de las celulas. No se observaron efectos negativos despues de 7 dfas. Despues de 14 dfas de tratamiento, puede haber habido un ligero efecto negativo sobre la supervivencia de las celulas senescentes con 200pM de 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina o mas. A concentraciones inferiores, no se observaron efectos negativos, a pesar de que podna haber habido un ligero aumento en el numero de celulas de las celulas senescentes tratadas con 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina.

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Celulas senescentes de pasos finales, con un ciclo de vida de mas del 95%, tambien fueron tratadas con diferentes concentraciones de 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina (0 a 200 jM) para evaluar las alteraciones relacionadas con la edad. Los patrones de tincion con actina se examinaron despues de tres dfas. El tratamiento con 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina generalmente altero el patron de tincion con actina, desde un patron altamente polimerizado a un patron de filamentos menos polimerizados. Patrones menos polimerizadas y difusos de tincion con actina, generalmente estan asociados con caractensticas juveniles de fibroblastos humanos. Por lo tanto, la 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina parece revertir algunas de las alteraciones relacionadas con la edad en la organizacion de la actina en celulas senescentes.

Fibroblastos senescentes de piel humana se trataron tambien con 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina (0 a 400 jM) y se evaluaron para la reversion de alteraciones relacionadas con la edad. Hubo diferencias significativas en la apariencia de las celulas despues de 7 y 30 dfas de tratamiento. Las celulas tratadas fueron en general de apariencia mas joven, en los terminos de volverse mas delgadas y dispuestas en formaciones, despues de 30 dfas de tratamiento. Incluso a concentraciones mas altas (200 y 400 jM), las celulas tratadas con 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina paredan ser mas pequenas y tener menos desechos intracelulares en comparacion con celulas no tratadas.

En base a estos estudios, la 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina parece ser bien tolerada por los fibroblastos de piel humana jovenes y senescentes, y tener efectos positivos en terminos de reversion del patron de actina y de la morfologfa de celulas senescentes a caractensticas relativamente mas jovenes. No se observo induccion significativa de crecimiento adicional o division celular.

[0085] Ejemplo 17. La actividad citotoxica in vitro de varios de los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion se determino empleando un ensayo de microtitulacion con calcema AM y un panel de lmeas celulares de diferentes ongenes histogeneticos y de especies; tambien se examino la kinetina como un control. Debido a que solo las celulas metabolicamente activas escinden calcema AM (tetra- acetoximetilester de calcema), la concentracion intracelular de calcema se corresponde con el numero de celulas vitales en el cultivo.

[0086] Se emplearon las siguientes lmeas celulares: osteosarcoma humano (HOS); carcinoma de mama MCF-7; leucemia mieloide humana K-562; y fibroblastos de raton NIH3T3. Las celulas se mantuvieron en recipientes plasticos de cultivo tisular Nunc/Corning de 80 cm 2, y se cultivaron en medio de cultivo celular (DMEM con 5 g/I de glucosa, glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 jg/mI de estreptomicina, 10% de suero fetal bovino, y bicarbonato de sodio).

[0087] Se prepararon y diluyeron las suspensiones celulares segun el tipo de celula particular y la densidad celular objetivo esperada (2.500-30.000 celulas por pocillo, en base a las caractensticas de crecimiento celular) y se anadieron mediante pipeta (80 jl) en placas de microtitulacion de 96 pocillos. Se permitio un penodo de pre-incubacion a los inoculados de 24 horas a 37°C y 5% de CO2 para estabilizacion. Se anadieron diluciones cuadruplicadas de la concentracion de ensayo prevista, a tiempo cero, en almuotas de 20jl a los pocillos de la placa de microtitulacion. Los compuestos ensayados en general se evaluaron a seis diluciones cuadruplicadas. La mayor concentracion de pocillo empleada en el presente estudio fue de 166,7 jM. Todas las muestras se examinaron por triplicado. Las incubaciones de las celulas con los compuestos ensayados se realizaron durante 72 horas a 37°C, en atmosfera de 5% de CO2 y humedad del 100%. Al final del periodo de incubacion, se anadio calcema AM hasta una concentracion final de 1 jg/ml incubada durante 1 hora. La intensidad de fluorescencia (FI) se midio con un lector Labsystem FlA Reader Fluoroscan Ascent (Reino Unido). La supervivencia de las celulas (Gl50)se calculo empleando la siguiente ecuacion:

G|50_(F|pocillo expuesto a compuesto/F|pocillo de control promedio) / (F|pocillo de control promedio - F|blanco promedio) x 100%.

El valor de Gl 50, la concentracion del farmaco letal para el 50% de las celulas, se calculo a partir de las curvas de respuesta a dosis obtenidas.

[0088] Se obtuvieron los siguientes resultados:

Compuesto

GI50 (pmol/l) para la lmea celular ensayada

HOS

K-562 MCF7 NIH-3T3

Kinetina

>166,7 164,1 >166,7 155,1

6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina

>166,7 >166,7 >166,7 >166,7

6-(3,5-dimetoxibencilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina

>166,7 - >166,7 >166,7

5

10

15

20

25

6-(4-metoxibencilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina

>166,7 >166,7 >166,7 >166,7

6-(2,3-dimetoxibencilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina

>166,7 - >166,7 >166,7

6-(3-metoxibencilamino-9-(2- tetrahidrofuranil)purina

>166,7 - >166,7 >166,7

6-(4-metoxibencilamino-9-(2- tetrahidrofuranil)purina

>166,7 - >166,7 >166,7

Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion mostraron una toxicidad mmima o ninguna toxicidad para las celulas en concentraciones de hasta 166,7 jM, y por lo tanto son adecuados para aplicaciones cosmeticas.

[0089] Ejemplo 18. La actividad citotoxica in vitro de varios de los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion contra fibroblastos diploides humanos se determino mediante el ensayo estandar MTT, optimizado para placas de 96 pocillos. El ensayo se basa en la medicion espectrofotometrica del producto de la conversion metabolica de MTT por las mitocondrias de las celulas vivas.

Fibroblastos humanos de prepucio (lmea celular BJ) a pases intermedios se mantuvieron en recipientes plasticos de cultivo tisular de 75 cm2 y se cultivaron en medio de cultivo celular (DMEM con 5 g/I de glucosa, glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 jg/mI de estreptomicina, 10% de suero fetal bovino y bicarbonato de sodio).

[0091] Alrededor de 5000 celulas fueron sembradas por pocillo de la placa de 96 pocillos. Despues de 24 horas el medio de cultivo celular fue reemplazado por el medio de cultivo celular que contiene un compuesto de ensayo. Los compuestos ensayados en general se evaluaron a seis diluciones duplicadas. La mayor concentracion empleada en el presente estudio fue habitualmente de 200 jM. En el caso de compuestos con solubilidad limitada en el medio de cultivo, se ajusto la concentracion maxima. Cada compuesto de ensayo se examino en cinco repeticiones. Se incubaron las celulas con los compuestos ensayados durante 72 horas a 37°C, en atmosfera de 5% de CO2 y humedad del 100%. Al final del periodo de incubacion, el medio de cultivo se reemplazo por medio de cultivo celular que contiene MTT (0,5 mg/ml) y las celulas se incubaron durante otras 3 horas. El formazano formado se solubilizo mediante DMSO y se midio la absorbancia a 570 nm. La capacidad de los compuestos ensayados para inhibir la actividad reductora del MTT en las celulas fue calculada como

|C _ (Apocillo expuesto a compuesto — Ablanco promedio) / Apocillo control promedio-Ablanco promedio) x 100%.

El IC10, la concentracion del farmaco que causa una reduccion del 10% de la actividad reductora del MTT, se calculo a partir de las curvas de respuesta a dosis obtenidas.

[0092] Se obtuvieron los siguientes resultados:

Compuesto

Maxima concentracion ensayada (Mmol/l) IC10 (pmol/l)

6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

200 >200

6-furfurilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)purina

200 >200

6-(4-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

100 >100

6-(4-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)purina

100 >100

6-(3-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)purina

100 >100

6-(2,4-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

25 >25

6-(3,5-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)purina

200 >200

6-(3,4-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

200 >200

6-(3,4-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)purina

200 >200

6-(2,3,4-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

37,5 >37,5

6-(2,3,4-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

200 >200

6-(2,4,5-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

200 >200

6-(2,4,5-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

200 >200

6-(2,4,6-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

50 >50

6-(3,4,5-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

100 >100

5

10

15

20

25

30

35

6-(3,4,5-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

200

>200

Los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion no mostraron ningun efecto perjudicial sobre la actividad mitocondrial y la viabilidad celular en un amplio rango de concentraciones y por lo tanto son adecuados para aplicaciones cosmeticas.

[0093] Ejemplo 19. Se determino la inhibicion de la senescencia por varios de los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion; la kinetina tambien se evaluo como un control. Fibroblastos diploides humanos (celulas HCA de diversos estadms de pases: pase 25 - designado HCA25; pase 45 - designado HCA45; y pase 80 - designado HCA80) se tineron para actividad de p-galactosidasa. El medio empleado para el cultivo celular se elimino, las celulas se lavaron dos veces en PBS, y se fijaron en 2 a 3 ml de solucion de fijacion, compuesta por un 2% de formaldelmdo y un 0,2% de glutaraldehfdo en PBS. Las celulas se incubaron a temperatura ambiente durante 5 minutos, y despues se lavaron dos veces con PBS. Las celulas subsiguientemente se incubaron a 37°C (sin CO 2) durante 1 a 16 horas en 2-3 ml de la solucion que comprende ferricianuro de potasio (5 mM), ferrocianuro de potasio (5 mM), MgCl 2 (2 mM), X-gal (5-bromo-4-cIoro-3-indolil-p-D-gaIactopiranosido) (1 mg/ml), en tampon cftrico/ fosfato (pH 6,0). Se anadieron los compuestos de ensayo (alrededor de 50 pM) al medio en cada pase. Despues de este penodo de incubacion, se observaron las muestras celulares con el fin de detectar la presencia de celulas azules, lo que indica que X-gal habna sido escindido (positivo para celulas senescentes). En este experimento, solamente las celulas senescentes se tineron de azul, debido a la accion de la p- galactosidasa sobre el sustrato.

[0094] Los resultados se presentan a continuacion:

Compuesto

Celulas Senescentes (%)

HCA25

HCA50 HCA80

Kinetina

3 5 38

6-(2-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

4 6 22

6-(3-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

5 5 24

6-(4-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

4 3 26

6-(2,4-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

4 6 25

6-(2,3,4-trimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

4 5 31

6-furfurilamino-9-(2-tetrahidrofuranil)purina

3 4 12

6-(2,4-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

4 4 29

6-(3,4-dimetoxifenilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

5 7 28

6-(2,4,5-trimetoxifenilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

5 4 25

Los derivados de purina 6,9-disustituida fueron en general mas efectivas que la quinetina en la retencion de niveles mas bajos de celulas senescentes despues de 80 pases.

[0095] Ejemplo de Referencia 20. Se determino la actividad anti-inflamatoria de varios de los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion; la kinetina tambien se evaluo como un control. Glioma de rata C6 (ATCC No. CCL107) fue cultivado en monocapa en medio exento de suero, qmmicamente definido, que contiene medio HAM F-10 / medio esencial mmimo (1:1 v/v), 2 mM L-glutamina, 1% (v/v) vitaminas de medio esencial mmimo (100x), 1% (v/v) amino acidos no esenciales de medio esencial mmimo (100x), 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina, y 30 nM de selenito de sodio. La incubacion se llevo a cabo a 37°C en una atmosfera humidificada. Los ensayos se realizaron en la fase de crecimiento logantmico a una densidad de 2,5x10 5 celulas/cm2. La smtesis intracelular de AMPc fue inducida mediante la adicion de 5 mM (-)-isoproterenol; se anadieron diversas cantidades de los compuestos de ensayo, al mismo tiempo que el (-)-isoproterenol. Despues de 30 min de incubacion a 37°C, se retiro el medio y se determino la cantidad celular de cAMP, empleando el kit de inmunoensayo de enzima cAMP de Amersham. El valor de I50 se determino a partir de una curva dosis-respuesta por duplicado.

[0096] Se obtuvieron los siguientes resultados:

Compuesto

Actividad anti-inflamatoria

I50 (pM)

Efecto

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Compuesto

Actividad anti-inflamatoria

I50 (pM)

Efecto

Kinetina

- No activo

6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

13 Inhibicion

6-fenilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

45 Inhibicion

6-(3-metoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

7 Inhibicion

6-(3,5-dimetoxibencilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina

11 Inhibicion

Los derivados de purina 6,9-disustituida demostraron actividad anti-inflamatoria. La kinetina fue inactiva en el protocolo de ensayo.

[0097] Ejemplo 21. Se han llevado a cabo una serie de ensayos relacionados con la seguridad de la 6- furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina, empleando protocolos y procedimientos convencionalmente aceptados. Los resultados de estos estudios se resumen aqrn.

[0098] Ensayo de Ames. Los ensayos se llevaron a cabo empleando DMSO como disolvente, y los niveles de dosis de la 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina a 2,5, 5,0, 15, 50, 500, 1500, y 5000 pg/placa, basados en protocolos y procedimientos estandar (Ames et at., Mutation Research, 31, 347-364 (1975); Maron et at., Mutation Research, 113, 173-215 (1983)). Empleando auxotrofos para la histidina de Salmonella typhimurium TA98 y TA100, en presencia y ausencia de hngado de rata inducido por Aroclor S9, no se observaron respuestas mutagenicas con 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina en los niveles ensayados.

[0099] Ensayo in vitro de cribado de aberraciones cromosomicas.

La 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina fue ensayada en el ensayo in vitro de cribado de aberraciones cromosomicas, empleando celulas de ovario de hamster chino (CHO), tanto en ausencia como en presencia de un sistema de activacion S9 inducido por Acroclor, para evaluar su potencial clastogenico. Se empleo DMSO como el disolvente y el intervalo de dosis oscilo desde 0,272 hasta 272 pg/ml. El porcentaje de celulas con aberraciones estructurales o numericas en las muestras tratadas con 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina no se incremento de manera significativa por encima del de las muestras de control con disolvente. En base a este estudio, se concluyo que la 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina es negativa con respecto a la induccion de aberraciones cromosomicas estructurales y numericas en celulas CHO.

[0100] Ensayo Vascular en Membrana Corioalantoidea. El potencial de la 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina para la irritacion ocular se determino mediante el procedimiento descrito en Bagley et at., Alternative Methods in Toxicology, Vol. 6 in Progress in in vitro Toxicology, 131-138 (1988). La membrana corioalantoidea de huevos de gallina White Leghorn, incubada durante 14 dfas, se dosifico con 40 pg del compuesto de ensayo (y tres concentraciones inferiores en agua destilada) y despues se incubaron adicionalmente durante alrededor de 30 minutos, momento en el cual se examino la membrana corioalantoidea con respecto a hemorragia vascular, inyeccion capilar, y/o la presencia de vasos sangumeos fantasma. El valor de RC50 (concentracion calculada que produce una reaccion positiva en el 50% de los huevos tratados) fue del 105%. En las condiciones de este ensayo, un valor de RC50 menor del 1% sena considerado un irritante, mientras que un valor de RC50 mayor del 3% sena considerado un no irritante. Por lo tanto, en base a este ensayo, se encontro que el compuesto de ensayo es no irritante.

[0101] Ensayo MTT de Viabilidad en Epidermis. Empleando un sistema MatTek Corporation's EpiDerm™ (que consiste en queratinocitos epidermicos normales, obtenidos de humanos (NHEK), los cuales se han cultivado para formar un modelo altamente diferenciado de la epidermis humana de multiples capas), se determino que la 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina sena de esperar que fuera clasificada como no irritante.

[0102] Toxicidad Oral Aguda. Ratas Wistar hembra se les dosifico por via oral 2000 mg/kg de 6- furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina y despues se observaron 1/2, 1, 2, 3, y 4 horas despues de la dosificacion y a continuacion una vez al dfa durante 14 dfas, con respecto a efectos toxicologicos y farmacologicos; todos los animales fueron sacrificados de manera humanitaria empleando CO2 despues del estudio y se examinaron con respecto a patologfa macroscopica. Todos los animales sobrevivieron la dosis oral; cambios de peso durante el estudio fueron normales; y los resultados de la necropsia fueron normales.

[0103] Patch Test con Aplicacion repetida en Humanos. Gel de ensayo (alrededor de 0,2 ml), que contiene alrededor del 0,1 por ciento de 6-furfurilamino-9-2-tetrahidropiranil)purina, dispuesto sobre un

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parche de oclusion cuadrado de 2 cm, se coloco sobre la espalda de cada sujeto y se mantuvo durante 24 horas. Este procedimiento se repitio todos los lunes, miercoles y viernes hasta que se hubieron realizado nueve (9) aplicaciones en la misma zona (fase de induccion). El area fue examinado antes de cada nueva aplicacion. Alrededor de 10-14 dfas despues de que se hubiera retirado el noveno parche, un parche de desaffo (fase de desaffo) se coloco en una nueva zona de la espalda y entonces se examino 24 y 72 horas despues para reactividad. Las respuestas cutaneas se basaron en una escala de seis puntos (0 = no hay evidencia de efecto; + = apenas perceptibles; 1 = leves, 2 = moderadas, 3 = marcadas, y 4 = severas).

[0104] Cincuenta y dos (52) sujetos completaron las fases de induccion y desaffo (un total de 10 aplicaciones por sujeto). De los sujetos que completaron el estudio, solo un sujeto tema una calificacion de apenas perceptible (+) despues de la aplicacion en la fase de desaffo (solamente a 24 horas; cuando se examino a las 72 horas no hubo evidencia de efecto); esta respuesta unica observada no fue considerada evidencia de irritacion o de naturaleza alergica. Todos los demas sujetos no presentaron ninguna evidencia de irritacion (es decir, 0 en la escala) durante las fases de induccion o desaffo. No se observo evidencia de dermatitis de contacto alergica inducida u otra irritacion en sujetos humanos.

[0105] Ejemplo 22. La seguridad y eficacia de los derivados de purina 6,9-disustituida de esta invencion como tratamientos topicos anti-edad de la piel, se examinaron empleando el modelo de raton sin pelo (un modelo bien establecido para el estudio de los tratamientos de fotoenvejecimiento). Ratones sin pelo SKH-1 hembra (5 semanas de edad, 20-25 gramos, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) fueron alojados individualmente en jaulas de filtro superior, y se aclimataron durante 5-7 dfas despues de la entrega. Los ratones se dividieron en grupos de tratamiento (n = 6), incluyendo dos grupos de control diferentes (control no tratado, control de velffculo) y un control terapeutico (crema con 0,05% de acido trans-retinoico comercialmente disponible). Agua y comida para ratones se proporcionaron ad libitum.

[0106] Los grupos experimentales (6 ratones por grupo) incluyeron los siguientes tratamientos: (1) Control no tratado; (2) Control de vehfculo (locion MillCreek); (3) Kinetina (0,1% en locion MillCreek); (4) 6- Furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina (0,1% en locion MillCreek); y (5) Control terapeutico (crema con 0.05% de acido trans-retinoico). Los diferentes tratamientos se aplicaron diariamente (lunes a viernes) durante 3 semanas sobre la piel del dorso (alrededor de 2 cm x 2 cm) de los ratones sin pelo, a una dosiificacion de alrededor de 20 mg.

[0107] En el estado basal (anterior al primer tratamiento), y semanalmente, la piel dorsal se midio con respecto a la perdida de agua transepidermica (TEWL), el nivel de humedad de la piel, y elasticidad de la piel. El posible efecto de estas formulaciones topicas sobre la proliferacion de celulas epidermicas se investigo empleando bromodesoxiuridina como un marcador inmunohistoqmmico de la proliferacion celular. El examen histologico de la piel tratada y control tambien se empleo para determinar los efectos cutaneos de estas formulaciones topicas.

[0108] Se realizaron inspecciones diarias para evaluar la posible aparicion de eritema (irritacion) de la zona, empleando criterios de puntuacion establecidos, donde Grado 0 = sin respuesta; Grado 1 = enrojecimiento muy ligero; Grado 2 = enrojecimiento leve; Grado 3 = enrojecimiento / irritacion moderados; Grado 4 = enrojecimiento / irritacion severos; Grado 5 = enrojecimiento / irritacion muy severos; y Grado 6 = necrosis.

[0109] Las mediciones del nivel de humedad de la piel y la elasticidad de la piel son metodos no invasivos importantes, los cuales se emplean para caracterizar los efectos humectantes y anti-arrugas sobre la piel. Se empleo un instrumento de combinacion DermaLab™ para medir el nivel de humedad de la piel y la elasticidad de las zonas objetivo de la piel en el estado basal y a intervalos semanales. Este instrumento estaba equipado con sondas duales, las cuales se colocan sobre la superficie de la piel, y se tomo una medicion cuantitativa de los respectivos parametros y se registraron las mediciones en un ordenador integrado.

[0110] A todos los grupos de animales se les inyecto bromodesoxiuridina (100 mg/kg) I.P. 4 horas despues de la aplicacion final. Los animales se sacrificaron entonces mediante inhalacion de CO2 3 horas mas tarde, seguido de dislocacion cervical. Las zonas de ensayo se extirparon y se obtuvieron biopsias por puncion de 6 mm de cada zona de tratamiento y de las zonas de control no tratadas. Las biopsias se depositaron en viales etiquetados que conteman 4% de formalina tamponada neutral, para la inclusion en parafina y tincion con anti-BrdU. Secciones de parafina fueron cortadas a un espesor de 5 pM y se tineron empleando el kit de inmunohistoqmmica BrdU (X1545K de Exalpha Biologicals, Inc.) y un protocolo de tincion estandar. Los portaobjetos se contratineron debilmente en hematoxilina de Mayer y se evaluo con un microscopio optico el numero de celulas BrdU-positivas por mm de epidermis para cada seccion.

[0111] Se tomaron biopsias de piel de cada zona de tratamiento y de piel no tratada como control. Las biopsias se fijaron en 4% de formalina tamponada neutra, se incluyeron en parafina, y se tineron con hematoxilina y eosina. Se examinaron las secciones de piel tenidas para determinar los efectos del tratamiento sobre la histologfa epidermica, dermica, y de la capa cornea. Las biopsias tambien se examinaron microscopicamente con respecto a celulas inflamatorias.

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[0112] Irritacion de la piel. Los productos de ensayo fueron bien tolerados con el tratamiento prolongado durante 3 semanas. Solamente la crema de acido trans-retinoico causo irritacion significativa (Grado 3), tras 1 a 3 semanas de tratamiento. Todos los demas tratamientos se encontraron por debajo del Grado 1,5, cayendo el tratamiento con 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina por debajo del Grado 1 a lo largo del penodo de 3 semanas.

[0113] Nivel de Humedad de la Piel. El control terapeutico mostro una disminucion significativa en la conductancia de la piel y, por tanto, una disminucion del nivel de humedad de la piel. Por el contrario, los compuestos ensayados y el vehmulo solo produjeron un incremento gradual en el nivel de humedad de la piel. En la semana 3 el contenido medio de humedad de todos los compuestos ensayados fue mayor que el control de vehmulo o el control no tratado. En general, el tratamiento con 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina produjo uno de los mayores incrementos en la humedad de la piel de los compuestos examinados.

[0114] Elasticidad de la piel. No se observaron cambios significativos en la elasticidad de la piel de los grupos de tratamiento durante el penodo de ensayo de 3 semanas, para ninguno de los grupos de ensayo. Por lo tanto, la elasticidad de la piel de los grupos de tratamiento fue comparable a la del control no tratado y los grupos de tratamiento con vehmulo solamente.

[0115] Tincion con bromodesoxiuridina (BrdU). La tincion con bromodesoxiuridina de la epidermis se midio para determinar el efecto de los compuestos ensayados sobre la proliferacion de celulas epidermicas. No hubo diferencia estadfstica en la tincion epidermica con BrdU en los compuestos ensayados, en comparacion con el control sin tratar o el control de vehmulo, o cualquier diferencia en la tincion con BrdU con los compuestos de ensayo. Los tejidos terapeuticos tratados con control no mostraban tincion epidermica con BrdU, pero algunas zonas localizadas de tincion en la dermis, posiblemente relacionadas con la inflamacion inducida por retinoides.

[0116] Se obtuvieron biopsias de tejido a la terminacion del estudio tras 3 semanas de tratamiento. La evaluacion histologica mostro piel normal de apariencia “sana” con todos los compuestos ensayados. En contraste, el control terapeutico mostro un marcado aumento del espesor de la epidermis y cambios inflamatorios en la dermis. El grosor de la seccion de piel de las biopsias tenidas con H & E fue medido por microscopfa optica. El espesor de la epidermis, la dermis y la capa cornea, medida tras 3 semanas de tratamiento, fue comparable a la del vehmulo y del control sin tratar. En contraste, el control terapeutico aumento tanto el espesor epidermico como el espesor dermico.

[0117] Estos resultados proporcionan evidencia tanto de la seguridad como de la eficacia de 6- furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina para su uso para mejorar la apariencia cosmetica y para conservar la vitalidad de la piel en proceso de envejecimiento sin irritacion.

[0118] Ejemplo 23. Se ha llevado a cabo un estudio clmico para determinar la eficacia cosmetica y la tolerancia por parte de los sujetos de la 6-furfurilamino-9-(2-tetrahidropiranil)purina (0,10%) aplicada de manera topica dos veces al dfa durante 12 semanas, para mejorar los signos y smtomas clmicos de la piel facial fotodanada. Se reclutaron para el estudio cuarenta voluntarias con edades de entre 40 y 65 anos con signos de leves a moderados de piel facial fotodanada. Treinta y cuatro sujetos completaron el estudio; la edad media de los sujetos que completaron el estudio fue de alrededor de 54 anos. Los sujetos fueron instruidos para aplicar el producto ensayado a la piel facial completa dos veces al dfa (eso es, por la manana temprano y aproximadamente 1 hora antes de la hora de acostarse) durante 12 semanas consecutivas. Los sujetos tambien fueron instruidos para no emplear otros productos topicos o medicaciones de cuidado de la piel durante el estudio, aparte de filtros solares o limpiadores suaves y el uso de cosmeticos con color. El producto ensayado comprendfa 0,1 por ciento de 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina en Locion MillCreek como vehmulo.

[0119] Los sujetos fueron evaluados en las semanas 2, 4, 8 y 12. La piel facial tratada se evaluo con respecto a signos clmicos del envejecimiento cutaneo (por ejemplo, arrugas gruesas y finas, aspereza, hiperpigmentacion moteada) al inicio del estudio (estado basal), asf como a las 2, 4, 8 y 12 semanas. Tambien se obtuvo la autoevaluacion de los sujetos con respecto a la mejora en comparacion con el estado basal (arrugas, textura, manchas, color y mejora global). Adicionalmente, se tomaron mediciones para la perdida de agua transepidermica (TEWL) y para la humedad de la piel en las mejillas de todos los sujetos.

[0120] Perdida de agua transepidermica (TEWL). TEWL se refiere a la cantidad de perdida de vapor de agua a traves de la capa cornea. Un incremento en los valores de TEWL sugiere o bien la perdida de agua por evaporacion (por ejemplo, sudoracion o evaporacion) o danos en la barrera de la piel. Una disminucion en los valores de TEWL sugiere o bien la mejora de la funcion de barrera o la presencia de una barrera sobre la piel. Se tomaron mediciones de TEWl empleando un sensor de TEWL (Courage & Khazaka, Colonia, Alemania) compuesto por una sonda (que contiene sensores de humedad y temperatura) conectada a una unidad de procesamiento central. Para cada sujeto, la sonda se coloco en el centro de ambas mejillas y las mediciones se tomaron por duplicado.

5

10

15

20

25

30

[0121] Mediciones de la humedad de la piel. Se realizo una medicion indirecta del nivel de humedad de la piel midiendo los cambios en las propiedades electricas de la piel. Se tomaron mediciones de capacitancia basadas en impedancia sobre la piel, empleando un dispositivo NOVA DPM 9003 (NOVA Technologies, Gloucester, MA, EE.UU.). El dispositivo realiza mediciones a diferentes frecuencias preseleccionadas (hasta 1 MHz) de la corriente alterna aplicada. Se determina un valor directamente relacionado con la capacitancia en unidades arbitrarias; un valor mayor indica una mayor capacitancia, lo cual indica un mayor nivel de humedad en la zona de ensayo. Se tomaron mediciones por triplicado en el centro de ambas mejillas para cada sujeto del ensayo.

[0122] Evaluacion por Expertos de la Piel Facial del Sujeto. En la visita de estado basal (Dfa 0), un investigador evaluo la cara de cada sujeto con respecto a la presencia de arrugas finas, arrugas gruesas, aspereza, hiperpigmentacion moteada, y otros parametros, empleando una escala de cinco puntos (0 = ninguna; 1 = minima; 2 = leve; 3 = moderada, y 4 = severa). La gravedad global del fotodano de la piel (arrugas, aspereza e hiperpigmentacion moteada) se evaluo empleando una escala de 10 puntos (0 = Ninguno; 1-3 = leve; 4-6 = Moderado; y 7-9 = Severo); sujetos con puntuaciones de gravedad del estado basal mayores que 6 fueron excluidos del estudio.

[0123] En cada visita subsiguiente, el investigador evaluo la mejora general en comparacion con el estado basal empleando una escala de 6 puntos (1 = mejora excelente; 2 = mejora marcada; 3 = mejora moderada; 4 = leve mejona; 5 = ninguna mejora; y 6 = peor.

[0124] Percepcion de la eficacia por parte del sujeto. En cada visita subsiguiente, se solicito a los sujetos que completaran un cuestionario de autoevaluacion, para evaluar la mejora desde el estado basal para la textura de la piel, color de la piel, manchas (eso es, manchas marrones), arrugas finas; y la mejora global, empleando una escala de cinco puntos (1 = muy mejorado; 2 = algo mejorado; 3 = sin cambios; 4 = algo peor, y 5 = mucho peor).

[0125] Resultados. Se obtuvieron los siguientes resultados de ensayo, promediados para todos los sujetos y registrados como valores medios.

Estado basal Semana 2 Semana 4 Semana 8 Semana 12

TEWL (g/m2/hr)

13,15 12,89 11,70* 13,08 9,54*

Cambio respecto al estado basal

/ -1,98% -9,62% 0,11% -27,79%

Humedad de la piel (unidades arbitrarias)

118,03 125,37* 141,30* 158,04* 165,42*

Cambio respecto al estado basal

/ 6,22% 20,96% 35,10% 41,21%

* Diferencia significativa (p<0,05) en comparacion con el estado basal.

Una disminucion en los valores de la TEWL indica una mejora en la funcion barrera de la piel; un incremento en los valores de TEWL puede indicar una interrupcion en las propiedades de barrera. Un incremento de la humedad de la piel indica indirectamente un incremento en los niveles de hidratacion.

[0126] Para la evaluacion por parte del investigador de las condiciones generales de la piel, se obtuvieron los siguientes resultados empleando una escala de cinco puntos (0 = ninguna; 1 = minima; 2 = leve; 3 = moderada, y 4 = severa).

Estado basal Semana 2 Semana 4 Semana 8 Semana 12

Arrugas finas

2,23 2,18 1,97* 1,74* 1,62*

Cambio respecto al estado basal

/ -1.28% -11.25% -21.79% -27.63%

Arrugas gruesas

2,25 2,35 2,22 2,20 2,03*

Cambio respecto al estado basal

/ 4.44% -4.76% -7.23% -13.75%

Aspereza

1,68 1,05* 0,58* 0,23* 0,26*

5

10

15

20

25

30

Cambio respecto al estado basal

/ -37.31% -63.79% -85.71 % -83.64%

Hiperpigmentacion moteada

1,73 1,70 1,50* 1,23* 1,03*

Cambio respecto al estado basal

/ -1.45% -15.63% -30.65% -40.68%

Irritacion de la piel

0 0 0 0 0

Cambio respecto al estado basal

/ 0 0 0 0

Acne

0,63 0,60 0,53 0,53 0,32*

Cambio respecto al estado basal

/ -4.00% -13.64% -9.52% -45.00%

Eritemat

0,60 0.40tt 0,31* 0,20* 0,21*

Cambio respecto al estado basal

/ -33.33% -47.62% -66.67% -66.67%

* Diferencia significativa (p<0,05) en comparacion con el estado basal.

t Si los datos fueron restringidos solamente a los sujetos que tenlan signos de eritema en el estado basal, hubo una diferencia significativa en todos los perlodos de tiempo. Cuando los datos fueron restringidos solamente a los sujetos que no tenlan signos de eritema en el estado basal, no hubo aumento significativo en cualquier perlodo de tiempo, indicando la no induccion de signos visibles de eritema.

tt Altamente sugestivo (p=0,056) de un aumento significativo de eritema en la semana 2.

Un porcentaje de cambio negativo en los parametros de la tabla anterior representa una mejora en el parametro relevante. Se observo una mejora significativa por parte de los expertos evaluadores en uno o mas perlodos de tiempo para las arrugas finas y gruesas, aspereza, hiperpigmentacion moteada, acne y eritema. No se observo ninguna irritacion de la piel.

[0127] La evaluacion del investigador de la condicion general de la piel basada en la apariencia cosmetica relacionada con el envejecimiento de la piel, empleando una escala de 10 puntos (0 = Ninguna; de 1 - 3 = Leve; 4 - 6 = Moderada; y 7 - 9 = Severa), fue la siguiente: 4,10 en el estado basal; 4,05 a las 2 semanas (cambio del -1,22% respecto al estado basal); 3,56 a las 4 semanas (cambio del -15,23% respecto al estado basal); 3,20 a las 8 semanas (cambio del -24,32% respecto al estado basal); y 3,03 a las 12 semanas (cambio del -27,97% respecto al estado basal). Las diferencias observadas en las semanas 4, 8 y 12 fueron significativas (p<0.001). Un porcentaje de cambio negativo en la condicion general de la piel representa una mejora en la apariencia cosmetica relacionada con el envejecimiento de la piel.

[0128] La evaluacion del investigador de la mejora general de la condicion de la piel (en relacion al estado basal), empleando una escala de 6 puntos (1 = mejora excelente; 2 = mejora marcada; 3 = mejora moderada; 4 = leve mejorfa; 5 = ninguna mejora; y 6 = peor), fue la siguiente: 4.95 a las 2 semanas; 4,44 a las 4 semanas (cambio del -10.61 % respecto a los datos de la semana 2); 4,11 a las 8 semanas (cambio del -16,67% respecto a los datos de la semana 2); y 4,12 a las 12 semanas (cambio del -17,16% respecto a los datos de la semana 2). Las diferencias observadas en las semanas 4, 8 y 12 fueron significativas (p<0.001). Un porcentaje de cambio negativo en mejorfa general representa una mejora en las condiciones de la piel.

[0129] Los resultados de la auto evaluacion de los sujetos de las condiciones de la piel durante el estudio, empleando una escala de cinco puntos (1 = muy mejoradas; 2 = algo mejoradas; 3 = sin cambios; 4 = algo peores, y 5 = mucho peores), fueron los siguientes:

Semana 2 Semana 4 Semana 8 Semana 12

Textura de la piel

2,21 2,03* 1,91* 1,74*

Cambio relativo a los datos de la semana 2

/ -8,97% -15,58% -23,38%

Color de la piel

2,74 2,50* 2,23* 2,12*

Cambio relativo a los datos de la semana 2

/ -5,32% -18,28% -22,58%

Manchas/manchas

2,70 2,58 2,26* 2,15*

Semana 2 Semana 4 Semana 8 Semana 12

marrones

Cambio relativo a los datos de la semana 2

/ -6,19% -18,95% -23,16%

Arrugas finas

2,62 2,11* 2,00* 1,88*

Cambio relativo a los datos de la semana 2

/ -18,68% -23,60% -28,09%

Mejona general

2,36 2,14 1,97* 1,91*

Cambio relativo a los datos de la semana 2

-6,17 -16,25% -18,75%

* Diferencia significativa (p<0,05) en comparacion con los datos de la semana 2.

Un porcentaje de cambio negativo en los parametros de la tabla anterior representa una mejora en el parametro relevante. Los sujetos informaron de una mejora significativa en uno o mas penodos de tiempo 5 para la textura de la piel, color de la piel, manchas, manchas marrones, y arrugas finas. Ademas, los sujetos informaron de un mejora significativa en las semanas 8 y 12 en el estado general y la apariencia de su piel.

[0130] En general, los sujetos experimentaron una mejora significativa en la condicion general de la piel y una reduccion significativa de los efectos adversos asociados con el envejecimiento durante el penodo de

10 estudio, basado tanto en la evaluacion de expertos como en la autoevaluacion. No se observaron irritacion de la piel ni otros efectos adversos.

[0131] Ejemplo 24. Este ejemplo compara los datos clmicos para 6-furfurilamino-9-(2- tetrahidropiranil)purina (0,10%) aplicada de manera topica, tomados del Ejemplo 23, con datos clmicos similares, generados por kinetina (0,1%) aplicada de manera topica, de un estudio anterior. El protocolo

15 para el ensayo clmico anterior para kinetina fue similar al protocolo como descrito en el Ejemplo 23 para el compuesto inventivo; treinta y dos voluntarias completaron el estudio con kinetina previo. Esta comparacion esta basada en las evaluaciones por parte de expertos y autoevaluaciones del estado de la piel para datos de ocho y doce semanas, para algunos de los parametros evaluados en ambos estudios.

[0132] Las comparaciones basadas en la evaluacion por parte de expertos son las siguientes:

Mejoria media desde estado basal

Datos de la Semana Ocho

Datos de la Semana Doce

Kinetina

Compuesto inventivo Kinetina Compuesto inventivo

TEWL

13% 1% 15% 28%

Arrugas finas

2% 22%* * sP 0s CD 28%*

Arrugas gruesas

4% 7% 4% 14%*

Aspereza

35% 86%* 52%* 84%*

Hiperpigmentacion moteada

25%* 31%* 25%* 41%*

Condicion general de la piel

3% 24%* 4%* 28%*

20 * Mejoras clinicamente significativas (p<0,05)

[0133] Las comparaciones basadas en la autoevaluacion por parte de los sujetos son las siguientes:

Sujetos que refirieron Mejoria respecto al Estado Basal

Datos de la Semana Ocho Datos de la Semana Doce

Kinetina Compuesto inventivo Kinetina Compues to inventivo

Textura

77% 83% 87% 88%

Arrugas finas

57% 83% 71 % 88%

Manchas

50% 60% 74% 63%

Color

53% 66% 71% 68%

Claims (14)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   REIVINDICACIONES

   1. Un metodo para mejorar la apariencia cosmetica de las celulas epidermicas de mai^eras, el cual comprende el uso de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

   imagen1

   donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido o bencilo metoxi-sustituido, y Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2-tetrahidrofuranilo.
2. 2. El metodo segun la reivindicacion 1, donde las celulas de mairnfero son celulas de piel humana.
3. 3. El metodo segun la reivindicacion 1 o 2, donde en la formula (I) R6 es furfurilo o furfurilo metoxi- sustituido y Rg es 2-tetrahidropiranilo.
4. 4. El metodo segun la reivindicacion 3, donde R6 es furfurilo.
5. 5. Un metodo para mejorar la apariencia cosmetica de celulas de piel humana, el cual comprende el uso de una composicion que comprende un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

   imagen2

   donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido o bencilo metoxi-sustituido, y Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2-tetrahidrofuranilo.
6. 6. El metodo segun la reivindicacion 5, donde las celulas de piel humana estan en un ser humano vivo.
7. 7. El metodo segun la reivindicacion 5 o 6, donde en la formula (I) R6 es furfurilo o furfurilo metoxi- sustituido y Rg es 2-tetrahidropiranilo.
8. 8. El metodo segun la reivindicacion 7, donde R6 es furfurilo.
9. 9. El metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 5-8, donde el contenido del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la composicion es de 0,05-10%, preferiblemente 0,1-2%.

   imagen3
10. 10. Uso no terapeutico de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

    donde R6 es furfurilo, furfurilo metoxi-sustituido, fenilo, fenilo metoxi-sustituido o bencilo metoxi-sustituido, y Rg es 2-tetrahidropiranilo o 2-tetrahidrofuranilo, para mejorar la apariencia cosmetica de celulas epidermicas de mai^eras.
11. 11. El uso no terapeutico segun la reivindicacion 10, donde en la formula (I) R6 es furfurilo o furfurilo metoxi-sustituido y Rg es 2-tetrahidropiranilo.
12. 12. El uso no terapeutico segun la reivindicacion 11, donde R6 es furfurilo.
13. 13. El uso no terapeutico segun cualquiera de las reivindicaciones 10-12, donde el compuesto de formula

    5 (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo esta presente en una composicion que comprende

    ademas un excipiente cosmetico.
14. 14. El uso no terapeutico segun la reivindicacion 13, donde el contenido del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la composicion es de 0,05-10%, preferiblemente 0,12%.