ES2596953T3 - Diastereómeros de 10-propargil-10-desazaaminopterina para uso en el tratamiento del cáncer de pulmón - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende el compuesto 10-propargil-10-desazaaminopterina o una sal de la misma y un vehículo farmacéuticamente aceptable para el uso en un método para tratar el cáncer de pulmón en un ser humano, en el que el diastereómero ácido (2S)-2-[[4-[(1R)-1-[(2,4-diaminopteridin-6-il)metil]but-3- inil]benzoil]amino]pentanodioico o una sal del mismo está en una cantidad mayor del 90% en peso de la cantidad total de 10-propargil-10-desazaaminopterina o la sal de la misma.

Description

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cantidad de dosis de alrededor de 100 a alrededor de 275 mg/m2 (alrededor de 2,5 a alrededor de 6,9 mg/kg). En una realización, el diastereómero PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede administrar en una cantidad de entre alrededor de 0,25 mg/kg y alrededor de 4 mg/kg; entre alrededor de 0,75 mg/kg y alrededor de 3 mg/kg; en una cantidad entre alrededor de 1,0 mg/kg y alrededor de 2,5 mg/kg; en una cantidad de alrededor de 0,25 mg/kg o alrededor de 0,75 mg/kg (o una cantidad equivalente en área de superficie corporal (ASC)).

Para el tratamiento de un trastorno inflamatorio, el diastereómero PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede administrar por vía oral, intramuscular, intravenosa, intraarterial o intratecal. A los expertos en la técnica se les ocurrirán otras vías. Para el tratamiento de un trastorno inflamatorio, que incluye, sin limitación, psoriasis, artritis reumatoide, y/o artritis reumatoide juvenil, la dosis puede incluir lo siguiente. Los métodos de la presente descripción para la artritis reumatoide adulta o artritis reumatoide juvenil de curso poliarticular incluyen la administración oral de entre alrededor de 1 y alrededor de 30 mg una vez a la semana; en una realización, se administran alrededor de 7,5 mg una vez a la semana. Otras dosis pueden incluir 10 mg/m2 administrados una vez a la semana. Las dosis se pueden ajustar gradualmente para conseguir una respuesta óptima. A las dosis mayores, tales como sobre 20 mg/m2/sem., o 0,65 a 1,0 mg/kg/sem., se puede conseguir una mejor absorción mediante dosis intramusculares o subcutáneas. La dosis adecuada puede incluir también 7,5 mg a la semana, o dosis orales divididas de entre alrededor de 0,5 y alrededor de 10 mg; en una realización, la dosis puede ser una dosis oral dividida de 2,5 mg a intervalos de 12 horas para tres dosis administradas como un curso de tratamiento una vez a la semana. La dosis puede continuar, con tal de que sea eficaz, e incluye la terapia durante hasta dos años o más.

El diastereómero PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro y otros agentes tales como, por ejemplo, gemcitabina, erlotinib, un taxano, o bortezomib, se pueden administrar o utilizar de manera concurrente en combinación como parte de un régimen de tratamiento común, en el que el PDX-10a y/o PDX-10b y el/los otro(s) agente(s) se administran al mismo tiempo o en momentos diferentes. En una realización de esta descripción, una composición farmacéutica puede comprender el diastereómero PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro en combinación con un agente antineoplásico, en el que dicho agente antineoplásico es un miembro seleccionado del grupo que consiste en fármacos alquilantes, antimetabolitos, inhibidores de microtúbulos, podofilotoxinas, antibióticos, nitrosoureas, terapias hormonales, inhibidores de quinasas, activadores de la apoptosis de células tumorales, y agentes antiangiogénicos.

Por ejemplo, el otro agente se puede administrar antes de, inmediatamente después o tras un periodo de tiempo (por ejemplo 24 horas) respecto de la administración del diastereómero PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro. Así, para los fines de esta solicitud, el término administrar se refiere en general a la administración concurrente o a la administración secuencial de los fármacos y en cualquier orden en un régimen de tratamiento paralelo con o sin una separación en el tiempo entre los fármacos, a menos que se especifique de otra manera.

En una realización, se puede administrar PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro a 2 mg/kg c.d. durante cinco días, o dos ciclos de cinco días cada uno, comenzando al inicio del régimen de tratamiento.

Se usa de manera adecuada PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro en combinación con una complementación de ácido fólico y vitamina B12 para reducir los efectos secundarios del tratamiento. Por ejemplo, los pacientes se pueden tratar con ácido fólico (1 mg/m2 al día comenzando 1 semana antes del tratamiento con el diastereómero PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro o, de manera alternativa, 1 mg perioral (p.o.) al día no basado en el ASC); y B12 (1 mg/m2 al mes, o, de manera alternativa, administrado de manera intramuscular (I.M.) cada 8-10 semanas como 1 mg (no basado en el ASC), o, de manera alternativa, 1 mg p.o. al día (no basado en el ASC).

Se puede administrar PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro en una amplia diversidad de formas farmacéuticas diferentes. Por ejemplo, el PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede administrar preferiblemente de manera oral o parenteral. En una realización, el PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede administrar de manera oral. En una realización, el PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se administra de manera parenteral, y se puede administrar por medio de la vía intravenosa.

El PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede administrar con diversos vehículos inertes farmacéuticamente aceptables en forma de comprimidos, cápsulas, pastillas, trociscos, caramelos duros, polvos, esprays, cremas, bálsamos, supositorios, jaleas, geles, pastas, lociones, pomadas, elixires, jarabes, y similares. La administración de tales formas farmacéuticas se puede llevar a cabo en dosis individuales o múltiples. Los vehículos incluyen diluyentes sólidos o rellenos, medios acuosos estériles y diversos disolventes orgánicos atóxicos, y otros. Las composiciones farmacéuticas orales se pueden endulzar y/o aromatizar de manera adecuada. Para la administración oral de PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puros, los comprimidos que contienen uno o ambos agentes activos se combinan con cualquiera de diversos excipientes tales como, por ejemplo, celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato cálcico, fosfato dicálcico y glicina, junto con diversos disgregantes tales como almidón (y preferiblemente almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto con aglutinantes de granulación similares a polivinil pirrolidona, sacarosa, gelatina y goma arábiga. Además, los agentes lubricantes tales como estearato magnésico, lauril sulfato sódico y talco a menudo son muy útiles para fines de formación de comprimidos. También se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similar como rellenos en cápsulas de gelatina; los materiales preferidos a este respecto incluyen también lactosa o azúcar de leche, así como polietilen glicoles de peso molecular elevado. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires

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para administración oral, el PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede combinar con diversos edulcorantes

o agentes aromatizantes, materiales colorantes o tintes, y, si se desea, también emulsionantes y/o agentes de suspensión, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilen glicol, glicerina y diversas combinaciones similares de los mismos. Se puede preparar un comprimido que contiene la composición de la presente descripción mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes o adyuvantes secundarios. Los comprimidos producidos mediante compresión se pueden preparar comprimiendo en un aparato adecuado el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un agente aglutinante, lubricante, diluyente inerte, tensioactivo o dispersante. Los comprimidos moldeados se pueden producir moldeando en un aparato adecuado una mezcla del compuesto pulverizado humedecido con un diluyente líquido inerte. Cada comprimido contiene preferiblemente de alrededor de 0,05 mg a alrededor de 10 g del ingrediente activo, y cada oblea o cápsula contiene preferiblemente de alrededor de 0,05 mg a alrededor de 10 g del ingrediente activo; los comprimidos también pueden contener de manera adecuada alrededor de 2,5 mg de ingrediente activo por comprimido o alrededor de 7,5 mg por comprimido.

Para la administración parenteral de PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro, se pueden emplear soluciones, así como soluciones acuosas estériles que comprenden el agente activo o una sal hidrosoluble correspondiente del mismo. Tales soluciones acuosas estériles preferiblemente se tamponan de manera adecuada, y además preferiblemente se hacen isotónicas, p.ej., con suficiente solución salina o glucosa. Estas soluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para fines de inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Las soluciones oleosas son adecuadas para fines de inyección intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se lleva a cabo fácilmente mediante técnicas farmacéuticas habituales muy conocidas para los expertos en la técnica.

Para fines veterinarios, los agentes activos se pueden administrar por separado o juntos a animales mediante el uso de cualquiera de las formas y mediante cualquiera de las vías descritas anteriormente. En una realización preferida, se administra PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro en forma de una cápsula, bolo, comprimido, poción líquida, mediante inyección o en forma de un implante. Como alternativa, el PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro se puede administrar con el pienso de los animales, y para este fin se puede preparar un aditivo para forraje concentrado o premezcla para un forraje normal para animales. Tales formulaciones se preparan de una manera convencional de acuerdo con la práctica veterinaria habitual.

La presente descripción proporciona además un kit que comprende un recipiente individual que comprende PDX-10a

o PDX-10b sustancialmente puro. En una realización preferida, los recipientes del kit pueden incluir además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El kit puede incluir además un diluyente estéril, que se almacena preferiblemente en otro recipiente distinto. El kit puede incluir además un folleto en el envase que comprende instrucciones impresas que instruyen sobre el uso del tratamiento combinado como método para tratar el cáncer y/o trastornos inflamatorios.

Preferiblemente, la composición está compuesta de un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro (lo que incluye las sales, ésteres, solvatos, y polimorfos farmacéuticamente aceptables de cada componente de los mismos). Además, dentro de esta realización preferida, la presente descripción abarca una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad, cuyo uso da como resultado la inhibición del crecimiento de las células neoplásicas, tumores benignos o malignos, o metástasis, o el tratamiento de la inflamación, que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz atóxica de PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro (lo que incluye las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos).

El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales preparadas a partir de bases o ácidos atóxicos farmacéuticamente aceptables. Cuando un compuesto de la presente descripción es ácido, se puede preparar su sal correspondiente de manera conveniente a partir de bases atóxicas farmacéuticamente aceptables, que incluyen las bases inorgánicas y las bases orgánicas. Las sales obtenidas a partir de tales bases inorgánicas incluyen las sales de aluminio, amonio, calcio, cobre (cúpricas y cuprosas), férricas, ferrosas, litio, magnesio, manganeso (mangánicas y manganosas), potasio, sodio, zinc, y similares. Las especialmente preferidas son las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. En una realización, la sal es la sal de hidrocloruro. Las sales derivadas de bases atóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables también incluyen las sales de aminas primarias, secundarias, y terciarias, así como de aminas cíclicas y aminas sustituidas tales como las que se dan de manera natural y las aminas sustituidas sintetizadas. Otras bases atóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables a partir de las cuales se pueden formar sales incluyen las resinas de intercambio iónico tales como, por ejemplo, arginina, betaína, cafeína, colina, N',N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina, y similares.

Además de las formas farmacéuticas habituales expuestas anteriormente, el PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro (lo que incluye las sales, ésteres, solvatos, y polimorfos farmacéuticamente aceptables de cada componente de los mismos) se puede administrar también mediante dispositivos de administración y/o medios de liberación controlada.

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Las composiciones farmacéuticas de la presente descripción pueden estar en una forma adecuada para la administración rectal, en la que el vehículo es un sólido. Es preferible que la mezcla forme supositorios de dosis unitaria. Los vehículos adecuados incluyen manteca de cacao y otros materiales usados habitualmente en la técnica. Los supositorios se pueden formar de manera conveniente mezclando primero la composición con el/los vehículo(s) ablandado(s) o fundido(s), seguido de enfriamiento y conformación en moldes.

Además de los ingredientes de vehículos anteriormente mencionados, las formulaciones farmacéuticas descritas anteriormente pueden incluir, según sea adecuado, uno o más ingredientes de vehículos adicionales tales como diluyentes, tampones, agentes aromatizantes, aglutinantes, agentes tensioactivos, espesantes, lubricantes, conservantes (que incluyen antioxidantes) y similares. Además, se pueden incluir otros adyuvantes para hacer que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor deseado. Las composiciones que contienen PDX-10a y/o PDX10b (lo que incluye las sales, ésteres, solvatos, y polimorfos farmacéuticamente aceptables de cada componente de los mismos) se pueden preparar también en forma de polvo o de líquido concentrado.

Los niveles de dosis para los compuestos de la combinación de la presente descripción serán aproximadamente como se describen en la presente memoria, o como se describen en la técnica para estos compuestos. Se entiende, sin embargo, que el nivel de dosis específico para cualquier paciente particular dependerá de una diversidad de factores que incluyen la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, momento de la administración, vía de administración, velocidad de eliminación, combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad particular que se somete a terapia.

En un aspecto, la presente descripción incluye las composiciones farmacéuticas de la presente descripción para el uso en un método para tratar el cáncer. El cáncer a tratar puede ser cualquiera de varios cánceres, como se define en otra parte en la presente memoria, que incluyen, sin limitación, cáncer de próstata, linfoma de células T, cáncer de mama, cáncer de pulmón, neoplasias malignas hematológicas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer del tracto gastrointestinal, cáncer ovárico, y osteosarcoma.

En un aspecto, la presente descripción incluye las composiciones farmacéuticas de la presente descripción para el uso para tratar un trastorno inflamatorio. Un trastorno inflamatorio a tratar puede ser cualquiera de varios trastornos inflamatorios, como se define en otra parte en la presente memoria, e incluye, por ejemplo, la artritis reumatoide.

En otro aspecto, la presente descripción incluye el uso de un compuesto según la descripción en la fabricación de una composición farmacéutica para tratar el cáncer. El cáncer a tratar puede ser cualquiera de varios cánceres, como se define en otra parte en la presente memoria, que incluyen, sin limitación, cáncer de próstata, linfoma de células T, cáncer de mama, cáncer de pulmón, neoplasias malignas hematológicas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer del tracto gastrointestinal, cáncer ovárico, y osteosarcoma.

En otro aspecto, la presente descripción incluye el uso de un compuesto según la presente descripción en la fabricación de una composición farmacéutica para tratar un trastorno inflamatorio. Un trastorno inflamatorio a tratar puede ser cualquiera de varios trastornos inflamatorios, como se define en otra parte en la presente memoria, e incluye, por ejemplo, la artritis reumatoide. Los objetivos, ventajas, y características nuevas adicionales de la presente descripción serán evidentes para un experto en la técnica tras el examen de los ejemplos siguientes, que no pretenden ser limitantes. Además, cada una de las diversas realizaciones y aspectos de la presente descripción, tal como se definieron anteriormente en la presente memoria y como se reivindican en la sección de reivindicaciones más adelante, hallan un soporte experimental en los ejemplos siguientes.

Las diversas realizaciones de la descripción también podrían incluir las permutaciones de los diversos elementos enumerados en las reivindicaciones, como si cada reivindicación dependiente fuera una reivindicación dependiente múltiple que incorpora las limitaciones de cada una de las reivindicaciones dependientes precedentes así como las reivindicaciones independientes. Tales permutaciones están expresamente dentro del alcance de esta descripción.

Aunque la invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencia a varias realizaciones, los expertos en la técnica entenderían que se pueden hacer cambios en la forma y los detalles a las diversas realizaciones descritas en la presente memoria sin apartarse del alcance de la invención tal como se define en las reivindicaciones, y que las diversas realizaciones descritas en la presente memoria no pretenden actuar como limitaciones sobre el alcance de las reivindicaciones.

Ejemplos

Los ejemplos siguientes se proporcionan con fines ilustrativos solamente, y no pretenden limitar el alcance de la invención tal como se define en las reivindicaciones.

Ejemplo 1: Preparación de PDX racémico

La FIG. 1 muestra un esquema sintético útil en la preparación de 10-propargil-10-dAM de acuerdo con la presente descripción. Una mezcla de un 60% de NaH en una dispersión en aceite (1,06 g, 26,5 mmol) en 18 mL de THF secado con tamiz se enfrió a 0 °C. La mezcla fría se trató con una disolución de éster dimetílico de ácido homotereftálico (5,0 g, 24 mmol. de compuesto 1 en la FIG. 1) en THF seco (7 mL), y la mezcla se agitó durante 1

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hora a 0 °C. Se añadió bromuro de propargilo (26,4 mmol), y la mezcla se agitó a 0 °C durante otra hora, y después a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla resultante se trató con 2,4 mL de ácido acético del 50% y después se vertió en 240 mL de agua. La mezcla se extrajo con éter (2 veces, 150 ml). Los extractos de éter se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron hasta un aceite naranja-amarillo. La cromatografía en gel de sílice (600 mL de malla 230-400) con elución mediante ciclohexano-EtOAc (8:1) proporcionó el producto de éster dimetílico de ácido α-propargilhomotereftálico (compuesto 2) en forma de un sólido blanco (4,66) que mediante CCF (ciclohexano-EtOAc, 3:1) pareció ser homogéneo. Los datos del espectro de masas de este producto, sin embargo, demostraron que era una mezcla del producto deseado 2, y el compuesto dipropargilado. No se detectó el material de partida 1. La HPLC muestra que la proporción de productos mono-a di-propargilados es de alrededor de 3:1. Debido a que el producto dipropargilado, a diferencia del compuesto 1, no puede producir un coproducto indeseado en la siguiente etapa de la reacción, este material fue adecuado para la conversión en el compuesto 3. La ausencia del compuesto de partida 1 en el producto usado para continuar con la síntesis es preferible para evitar la formación secuencial de 10-dAM durante las transformaciones que conducen al producto final.

Se formó una mezcla combinando 0,36 g de NaH al 60% (9 mmol) en una dispersión en aceite con 10 mL de DMF seca y se enfrió a 0-5 °C. La mezcla fría se trató gota a gota con una disolución del producto de la primera reacción (compuesto 2) (2,94 g, 12 mmol) en 10 mL de DMF seca y después se agitó a 0 °C durante 30 minutos. Después de enfriar a -25 °C, se añadió gota a gota una disolución de hidrobromuro de 2,4-diamino-6-(bromometil)-pteridina 0,2 2propanol (1,00 g, 2,9 mmol) en 10 mL de DMF seca mientras se mantenía la temperatura cerca de -25 °C. La temperatura de la mezcla agitada se dejó elevar a -10 °C a lo largo de un periodo de 2 horas. Después de otras 2 horas a -10 °C, la temperatura se dejó elevar a 20 °C, y la agitación a temperatura ambiente continuó durante 2 horas más. La reacción se ajustó después a pH 7 mediante la adición de CO2 sólido. Después de concentrar a vacío para eliminar el disolvente, el residuo se agitó con éter dietílico y se recogió el material insoluble en éter, se lavó con agua, y se secó a vacío para proporcionar 1,49 g de un producto bruto. Este producto bruto se disolvió en CHCl3-MeOH (10:1) para la aplicación en una columna de gel de sílice. La elución mediante el mismo sistema de disolventes proporcionó éster metílico de ácido 10-propargil-10-carbometoxi-4-desoxi-4-amino-10-desazapteroico (compuesto 3) que fue homogéneo en CCF con un rendimiento del 40% (485 mg).

Una suspensión agitada del compuesto 3 (400 mg, 0,95 mmol) en 2-metoxietanol (5 mL) se trató con agua (5 mL) y después una disolución de hidróxido sódico del 10% (3,9 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, durante cuyo tiempo se dio la disolución. La disolución se ajustó a pH 8 con ácido acético y se concentró a alto vacío. El residuo resultante se disolvió en 15 mL de agua y se acidificó a pH 5,5-5,8, lo que dio como resultado la formación de un precipitado. El precipitado se recogió, se lavó con agua y se secó a vacío para recuperar 340 mg de compuesto 4 (rendimiento del 91%). El análisis mediante HPLC indicó una pureza del producto del 90%.

El compuesto 4 (330 mg) se descarboxiló mediante calentamiento en 15 mL de DMSO a 115-120 °C durante 10 minutos. Un ensayo mediante HPLC después de 10 minutos confirmó que la conversión fue fundamentalmente completa. El DMSO se eliminó mediante destilación a vacío (baño a 40 °C). El residuo se agitó con NaOH 0,5 N para proporcionar una disolución clara. La acidificación a pH 5,0 con HCl 1 N proporcionó ácido 10-propargil-4-desoxi-4amino-10-desazapteroico (compuesto 5) en forma de un sólido amarillo con un rendimiento del 70%. La HPLC indicó que la pureza del producto en esta etapa fue de un 90%.

El compuesto 5 (225 mg, 0,65 mmol) se acopló con hidrocloruro de L-glutamato de dimetilo (137 mg, 0,65 mmol) mediante el uso del reactivo BOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino) fosfonio (287 mg, 0,65 mmol, Aldrich Chemical Co.) en DMF (10 mL) que contenía trietilamina (148 mg, 1,46 mmol). La mezcla se agitó durante 3 horas a 20-25 °C y después se evaporó hasta sequedad. El residuo se agitó con agua, y se recogió el producto bruto insoluble en agua y se secó a vacío. El producto bruto (350 mg) se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con elución con CHCl3-MeOH (10:1) que contenía trietilamina (0,25% en volumen) para recuperar 165 mg de éster dimetílico de 10-propargil-10-desazaaminopterina (compuesto 6, rendimiento del 50%) que fue homogéneo en CCF (CHCl3-MeOH 5:1).

El compuesto 6 (165 mg, 0,326 mmol) se suspendió en 10 mL de MeOH con agitación al que se le añadieron 0,72 mL (0,72 meq) de NaOH 1 N. La agitación a temperatura ambiente continuó hasta que se disolvió tras unas cuantas horas. La disolución se mantuvo a 20-25 °C durante 8 horas, y después se diluyó con 10 mL de agua. La evaporación a presión reducida eliminó el metanol, y la disolución acuosa concentrada se dejó a 20-25 °C durante otras 24 horas. La HPLC demostró después que la hidrólisis del éster fue completa. La disolución acuosa clara se acidificó con ácido acético a pH 4,0 para precipitar 10-propargil-10-desazaaminopterina en forma de un sólido amarillo pálido. El producto recogido, lavado con agua y secado a vacío pesó 122 mg (rendimiento del 79%). Los ensayos mediante análisis elemental, RMN de protón y espectroscopía de masas fueron completamente coherentes con la estructura asignada. El análisis mediante HPLC indicó una pureza del 98%, y estableció que el producto no contenía 10-desazaaminopterina.

Ejemplo 2: Preparación de los diastereómeros PDX-10a y PDX-10b

Para preparar los diastereómeros de la presente descripción, se disolvieron 225 g del compuesto 6 racémico (preparado mediante el método mostrado en el Ejemplo 1) en la fase móvil (100% de etanol) a 3,1 g/l. Se usó agitación y calentamiento para disolver la alimentación. La disolución de alimentación se filtró a través de un filtro de

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Vdss [L]c

0,07 -0,89 0,15-0,18 8-16 15-24 37 -105 48 -162

Vdss respecto del PCd [L/kg]

0,2 -2,5 ND 0,9 -1,9 ND 0,4 -1,2 ND

t1/2 term[h]c

1-20 1 -6 4,4-4,9 4,7-5,5 12-18 11-16

a Datos de FC no compartimentales de pacientes con gran número de muestras (n = 10 [C1D1] y n = 6 [C1D6/C2D6]) b Mezcla racémica (PDX-10a + PDX-10b), machos y hembras (media) Intervalo de la media observada para machos y hembras y para PDX-10a y PDX-10b. Los valores estimados se calcularon mediante el uso del PC medio para machos y hembras; 0,35 kg para ratas, 8,5 kg para perros, y 85 kg para seres humanos (PC medio de una población de FC no compartimental de PDX-008) C = ciclo, D = dosis, mg = miligramo, kg = kilogramo, m2 = metro cuadrado, Cmax = concentración máxima, ng = nanogramo, mL = mililitro, ABC∞ = área bajo la curva hasta el infinito, min = minuto, CLtot = aclaramiento total, PC = peso corporal, ND = no determinado, Vdss = volumen de distribución en el estado estacionario, L = litro, t1/2 term = semivida terminal, h = hora

Se analizaron los parámetros farmacocinéticos (FC) de la población (POP) y los efectos de factores covariables (COV) para PDX-10a y PDX-10b tras la administración de PDX racémico en pacientes de cáncer. Se combinaron los datos FC POP de 3 estudios: 1) un estudio de fase 1 en pacientes de cáncer de pulmón no microcítico con dosis intravenosas (IV) de 150-325 mg/m2, 2) un estudio de fase 1 en pacientes de cáncer avanzado con dosis IV de 80140 mg/m2 más un taxano, y 3) un estudio de fase 2 en pacientes con PTCL recidivante o resistente a una dosis de 30 mg/m2/semana IV. Los datos FC POP para cada diastereómero se analizaron mediante el uso de una modelización no lineal de efectos mixtos con una estimación condicional de primer orden. La cualificación del modelo incluyó comprobaciones predictivas y por el método Bootstrap no paramétrico. Resultados: La base de datos de FC POP estuvo compuesta de 154 pacientes (94 hombres y 60 mujeres, edades 21-85 años, pesos 42,9-158 kg), que aportaron 1176 concentraciones plasmáticas de PDX-10a y 1173 de PDX-10b. Los datos de FC POP para PDX-10a y PDX-10b se describieron mediante modelos de 3 compartimentos (CMT) parametrizados como aclaramiento (CL), volúmenes para los CMT 1, 2, y 3, y 1º y 2º CLs inter-CMT, con las estimaciones de parámetros para PDX-10a: 35,0 L/hr, 11,0 L, 9,71 L, 50,6 L, 6,97 L/h, 1,43 L/h, y PDX-10b: 17,2 L/hr, 8,89 L, 6,79 L, 12,65 L, 5,53 L/h, y 0,601 L/h, respectivamente. El CL de PDX-10a y PDX-10b se redujo en 0,13 y 0,08 L/h por una reducción de 1 mL/min en el aclaramiento de creatinina. Otros hallazgos COV fueron similares para PDX-10a y PDX-10b.

Ejemplo 5: Ensayos de citotoxicidad in vitro en líneas celulares de tumores sólidos y hematológicos

Se pueden ensayar líneas celulares de cáncer adicionales de acuerdo con los métodos resumidos en el Ejemplo 3. Las líneas celulares de cáncer para el linfoma de células T, mieloma múltiple, neoplasias malignas hematológicas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer del tracto gastrointestinal, cáncer ovárico, y osteosarcoma se ensayan con PDX10a y PDX-10b. Los diastereómeros respectivos tienen una actividad diferencial, PDX-10a muestra una actividad incrementada respecto de PDX racémico y/o PDX-10b en ciertas líneas celulares, y PDX-10b muestra una actividad incrementada respecto de PDX racémico y/o PDX-10a en otras líneas celulares.

Ejemplo 6: Modelos de xenoinjerto in vivo con tumores sólidos y linfomas

Se inoculan de manera subcutánea células tumorales adecuadas a ratones hembra atímicos en el flanco derecho como se discutió en el Ejemplo 5 para establecer el xenotrasplante. El volumen tumoral y los pesos corporales se monitorizan dos veces a la semana. Una vez que el tumor establecido alcanza 75 -150 mm3, los ratones se asignan de manera aleatoria a un grupo de tratamiento con control, PDX racémico, PDX-10a, o PDX-10b. Los tratamientos se administran mediante inyección IP. Se administra solución salina tamponada con fosfato como vehículo de control. Los diastereómeros respectivos pueden tener una actividad diferencial, PDX-10a muestra una actividad incrementada respecto de PDX racémico y/o PDX-10b para ciertos explantes, y PDX-10b muestra una actividad incrementada respecto de PDX racémico y/o PDX-10a para otros explantes.

Ejemplo 7: Formulación Oral -Comprimidos

Cada comprimido contiene PDX-10a y/o PDX-10b sódico (ingrediente activo) en una cantidad equivalente a la cantidad marcada de PDX-10a o PDX-10b sustancialmente puro, y contiene los siguientes ingredientes inactivos: lactosa anhidra, crospovidona, hidroxipropil metilcelulosa, estearato magnésico, celulosa microcristalina, polietilen glicol, polisorbato 80, almidón pregelatinizado, carbonato sódico monohidrato, talco y dióxido de titanio. Las cantidades de ingrediente activo por comprimido son 2,5 mg, 5 mg, 7,5 mg, o 10 mg.

El ingrediente activo se mezcla con los otros ingredientes hasta que se forma una mezcla uniforme. Se mezcla uno o más de los otros ingredientes con agua para formar una pasta. Esto se mezcla después hasta que se obtienen

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