ES2591106T3

ES2591106T3 - Proceso de producción para cefradina

Info

Publication number: ES2591106T3
Application number: ES10794956.2T
Authority: ES
Inventors: Harold Monro Moody; Van Theodorus Johannes Godfried Maria Dooren
Original assignee: DSM Sinochem Pharmaceuticals Netherlands BV
Current assignee: Centrient Pharmaceuticals Netherlands BV
Priority date: 2009-12-14
Filing date: 2010-12-14
Publication date: 2016-11-24
Anticipated expiration: 2030-12-14
Also published as: EP2513327A2; WO2011073166A3; CN102656274B; WO2011073166A2; EP2513327B1; HK1176644A1; CN102656274A

Abstract

Proceso para preparar cefradina, comprendiendo dicho proceso a. convertir D-dihidrofenilglicina (DHPG) en una forma activada (DHPGa) que es una amida o un éster; y b. hacer reaccionar el ácido 7-aminodesacetoxi-cefalosporánico (7-ADCA) con D-dihidrofenilglicina en forma activada (DHPGa) en presencia de una penicilina acilasa en una mezcla de reacción acuosa para formar cefradina, caracterizado porque al menos la etapa (a) y la etapa (b) del proceso se llevan a cabo en condiciones anaerobias.

Description

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preparada en un proceso enzimático, y pueden, por ejemplo, aplicarse ventajosamente para la cristalización de cefradina preparada en un proceso químico (por ejemplo, en ausencia de una enzima).

La cefradina preparada en un proceso enzimático haciendo reaccionar 7-ADCA con DHPGa en presencia de una enzima en una mezcla de reacción para formar cefradina, preferentemente en un proceso según la presente 5 divulgación, también puede cristalizarse a una temperatura entre 35 y 60 ºC, por ejemplo, a una temperatura entre 35 y 55 ºC, por ejemplo, a una temperatura entre 35 y 45 ºC.

La cristalización de cefradina en una disolución acuosa que comprende cefradina puede realizarse a cualquier pH adecuado. Preferentemente, la cristalización de la cefradina puede realizarse a un pH de entre 4,0 y 6,0, preferentemente a un pH de entre 4,5 y 5,5, más preferentemente a un pH de entre 4,7 y 5. Sorprendentemente se

10 encontró que a los intervalos de pH preferidos a los que se realiza la cristalización, el rendimiento de los cristales de cefradina aumentó. En la región estructural del presente proceso, el pH de la disolución acuosa puede ajustarse de varias formas, por ejemplo químicamente, añadiendo un ácido, por ejemplo un ácido mineral, en particular ácido sulfúrico, ácido clorhídrico o ácido nítrico. Preferentemente, dicha cristalización se realiza continuamente.

Se encontró sorprendentemente que la aplicación de las condiciones preferidas producía la cefradina hidratada que

15 presentaba una elevada estabilidad en la prueba de estabilidad medida por una disminución de la absorbancia a una longitud de onda de 450 nm.

El proceso según la presente divulgación también comprende realizar dicha cristalización a tal pH y a tal temperatura que la absorbancia a 450 nm de la cefradina hidratada preparada esté por debajo de 0,050, preferentemente por debajo de 0,040, y lo más preferentemente por debajo de 0,030, normalmente por encima de 0,005.

20 En una realización del proceso, la reacción enzimática se lleva a cabo en presencia de bisulfito sódico. Preferentemente, la cantidad de bisulfito sódico presente en la reacción enzimática es entre 1 y 25 mM, preferentemente entre 5 y 15 mM. Sorprendentemente, la presencia de bisulfito sódico durante la reacción enzimática disminuyó la coloración de la cefradina preparada.

El bisulfito sódico también puede estar presente durante la cristalización de cefradina en el proceso según la

25 invención. Preferentemente, la cantidad de bisulfito sódico presente durante la cristalización de cefradina para formar los cristales de cefradina monohidratada es entre 5 y 250 mM, más preferentemente entre 25 y 150 mM. La cefradina hidratada puede separarse de la disolución acuosa y secarse de cualquier manera adecuada.

La cefradina hidratada obtenible por el proceso como se describe en el presente documento tiene preferentemente las siguientes propiedades:

30 a. ≤5 % de cefalexina, más preferentemente ≤4 % de cefalexina, más preferentemente ≤5 % de cefalexina incluso más preferentemente ≤2 % de cefalexina y lo más preferentemente ≤1 % de cefalexina, y/o

b. una absorbancia a 450 nm de por debajo de 0,2, preferentemente por debajo de 0,15, más preferentemente por debajo de 0,1, más preferentemente por debajo de 0,05. Preferentemente, la cefradina hidratada tiene una absorbancia de entre 0,001 y 0,2, preferentemente entre 0,002 y 0,15, más

35 preferentemente entre 0,004 y 0,1, más preferentemente entre 0,005 y 0,05, y más preferentemente de entre 0,010 y 0,040; y/o

c. una alta estabilidad del color en la prueba de estabilidad a la tensión, es decir, la coloración de la cefradina hidratada está por debajo de 0,20, más preferentemente por debajo de 0,15, y lo más preferentemente por debajo de 0,10 a una absorbancia de 450 nm después de 8 semanas de

40 almacenamiento a 40 ºC a una humedad relativa del 75 %; y/o

d. no contiene, o sustancialmente no contiene, disolventes orgánicos. Preferentemente, la cefradina hidratada contiene ≤100 ppm de DMF, más preferentemente ≤75 ppm de DMF, más preferentemente ≤50 ppm de DMF, más preferentemente ≤25 ppm de DMF, incluso más preferentemente ≤10 ppm de DMF y lo más preferentemente DMF no detectable y/o la cefradina hidratada contiene ≤200 ppm de DCME, más

45 preferentemente ≤150 ppm de DCME, más preferentemente ≤100 ppm de DCME, más preferentemente ≤50 ppm de DCME, más preferentemente ≤25 ppm de DCME, incluso más preferentemente ≤10 ppm de DCME y lo más preferentemente DCME no detectable.

La cefradina hidratada según la invención puede tener cualquier combinación de las propiedades (a) a (d) enumeradas anteriormente, por ejemplo, a+b o a+c o a+d o b+c o b+d o c+d, a+b+c o a+b+d o a+c+d o b+c+d o

50 a+b+c+d. Se prefiere la composición con al menos la propiedad a: a+b o a+c o a+d o a+b+c o a+b+d o a+c+d o lo más preferido a+b+c+d.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se usó gas nitrógeno de la rejilla sin más purificación. DHPG se obtuvo de Shanghai Comfort Biochemical Co.

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EJEMPLOS

Ejemplo comparativo

a) Síntesis de disolución de éster metílico de D-dihidrofenilglicina (DHPGM)

Se suspendieron 153 g de DHPG con un contenido de 99,11 % como se mide por ensayo potenciométrico y con un contenido de D-fenilglicina (PG) del 0,58 % en 280 ml de metanol y se dosificaron 121 g de ácido sulfúrico concentrado en 60 minutos (durante la dosificación la temperatura se mantuvo a 15-20 ºC). La mezcla se mantuvo a reflujo durante 2 horas y se concentró a presión reducida (p=100 mBar, T = 75-80 ºC). Entonces, se añadieron 140 ml de metanol y la mezcla se mantuvo otra vez a reflujo durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El procedimiento se repitió otras seis veces. Finalmente, se añadieron 140 ml de metanol; la disolución se sometió a reflujo durante otra hora y se enfrió a temperatura ambiente. El pH aumentó a 2,1 con amoniaco concentrado en 15 minutos a 20 ºC. Se añadieron 87 ml de agua. El metanol se destiló a presión reducida y 40-50 ºC. Finalmente se obtuvieron 374 g de disolución con un pH de 2,0 y que contenía 40,87 % de DHPGM y 2,0 % de PGM.

b) Síntesis enzimática de cefradina

Un reactor con un fondo de tamiz de 175 µm se cargó con 37 g del mutante de PenG acilasa de Escherichia coli inmovilizada Phe-B24-Ala. Posteriormente se añadieron 22,3 g de 7-ADCA, 0,03 g de EDTA y 50 g de agua a 20 ºC y el pH se ajustó a 7,2 con 25 % de amoniaco. Se dosificaron 46 g de la disolución de DHPGM como se obtuvo en la etapa a) (anteriormente) dentro del reactor a una velocidad constante en 180 min. El pH se mantuvo a 7,2 con amoniaco. La temperatura se mantuvo a 20 ºC. Después de 60 min se añadieron 0,1 g de cefradina sólida (semilla). Después de 240 min, el pH se disminuyó a 6,0 con 25 % de ácido sulfúrico.

c) Recuperación de cefradina

El reactor se descargó a través del tamiz del fondo con agitación ascendente. La suspensión de cefradina resultante se filtró a través de un filtro de vidrio. Las aguas madres resultantes se transfirieron de nuevo dentro del reactor. Esta secuencia de etapas se repitió cinco veces. Posteriormente, la enzima se lavó con 3 x 10 ml de agua. La torta húmeda de cefradina, las aguas madres y las aguas de lavado se combinaron, y la temperatura se disminuyó a 2 ºC. El pH se disminuyó a 1,8 con 25 % de ácido sulfúrico y la disolución resultante se filtró a través de un filtro de 0,45 µm. La disolución de cefradina filtrada se calentó a 48 ºC, el pH se aumentó a 2,6 con amoniaco concentrado y se añadió 1,0 g de cefradina sólida (semilla). Después de 15 minutos el pH aumentó a 4,8 en 40 minutos. Posteriormente, la suspensión se agitó a 20 ºC durante otros 30 min. La suspensión se filtró a través de un filtro de vidrio y la torta húmeda se lavó con 2 x 20 ml de agua y 2 x 25 ml de acetona. Después de secar, se obtuvieron 19,0 g de cefradina monohidratada con un contenido de cefalexina del 7,3 %.

Ejemplo 1

a) General; preparación de materiales de partida

Se purificó gas nitrógeno por filtración a través de un filtro de humedad Varian CP17971 y un filtro Varian CP17970, sucesivamente. Se desgasificaron ácido sulfúrico, metanol, agua y enzimas con nitrógeno antes de uso, hasta que el contenido de oxígeno en la salida había llegado a por debajo de 100 ppm. Se usó DHPG con un contenido de PG del 1,14 %, después de 13 meses de almacenamiento. La síntesis completa se hizo en equipo cerrado y bajo nitrógeno.

b) Síntesis de disolución de DHPGM

Se suspendieron 153 g de DHPG con un contenido de 99,11 % como se mide por ensayo potenciométrico y con un contenido de D-fenilglicina (PG) del 1,14 % en 280 ml de metanol, y la suspensión se desgasificó con nitrógeno. Se dosificaron 121 g de ácido sulfúrico concentrado en 60 minutos (durante la dosificación la temperatura se mantuvo a 15-20 ºC). La mezcla se mantuvo a reflujo durante 2 horas y se concentró a presión reducida (p = 100 mBar, T = 7580 ºC). La rotura del vacío (aumento de presión de vacío a atmosférica) se hizo con nitrógeno. Se añadieron 140 ml de metanol y la mezcla se mantuvo otra vez a reflujo durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El procedimiento se repitió durante otras seis veces. Finalmente, se añadieron 140 ml de metanol; la disolución se sometió a reflujo durante otra hora y se enfrió a temperatura ambiente.

El pH aumentó a 2,1 con amoniaco concentrado en 15 minutos a 20 ºC. Se añadieron 87 ml de agua. El metanol se destiló a presión reducida y 40-50 ºC. Finalmente se obtuvieron 374 g de disolución con un pH de 2,0, y que contenía 44,96 % de DHPGM y 0,87 % de PGM. Aparentemente, cuando la síntesis se lleva a cabo bajo nitrógeno, se forma menos PGM (0,87 %) en comparación con el ejemplo comparativo (2,00 %).

c) Síntesis enzimática de cefradina

Un reactor con un fondo de tamiz de 175 µm se cargó con 37 g del mutante de PenG acilasa de Escherichia coli inmovilizada Phe-B24-Ala. Se añadieron 22,3 g de 7-ADCA, 0,03 g de EDTA, 0,4 g de persulfato de sodio y 50 g de agua a 20 ºC y la suspensión se desgasificó con nitrógeno. El pH se ajustó a 7,2 con 25 % de amoniaco.

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Claims

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