ES2568889T3 - Asociación de monosacáridos con agentes antioxidantes y su utilización en cosmética - Google Patents

Abstract

Utilización cosmética de una composición que comprende en un medio fisiológicamente aceptable la asociación de al menos un monosacárido seleccionado entre la manosa, la ramnosa y su mezcla y de al menos un agente antioxidante, para mejorar la luminosidad de la tez, para disminuir y/o prevenir las características de las arrugas y/o finas líneas, para mejorar y/o disminuir el microrelieve de la piel, para alisar la piel, para mejorar las propiedades mecánicas de la piel y/o para favorecer la reparación de la piel, en la cual el al menos un agente antioxidante es la floretina.

Description

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trifluoropropildimeticona; y los elastómeros de silicona como los productos comercializados bajo las denominaciones “KSG” por la sociedad Shin-Etsu, bajo las denominaciones “Trefil”, “BY29” ó “EPSX” por la sociedad Dow Corning o bajo las denominaciones “Gransil” por la sociedad Grant Industries.

Estos cuerpos grasos se pueden seleccionar de manera variada por el experto en la materia con objeto de preparar una composición que tenga las propiedades, por ejemplo de consistencia o de textura, deseadas.

Las emulsiones contienen generalmente al menos un emulsionante seleccionado entre los emulsionantes anfóteros, aniónicos, catiónicos o no iónicos, utilizados solos o mezclados, y eventualmente un co-emulsionante. Los emulsionantes se seleccionan de manera apropiada según la emulsión que se ha de obtener (E/H ó H/E). El emulsionante y el co-emulsionante están generalmente presentes en la composición, en una proporción que va de 0,3 a 30% en peso, y de preferencia de 0,5 a 20% en peso en relación con el peso total de la composición.

Para las emulsiones E/H, se pueden citar, por ejemplo como emulsionantes los dimeticona copolioles tales como la mezcla de ciclometicona y de dimeticona copoliol vendida bajo la denominación “DC 5225 C” por la sociedad Dow Corning, y las alquil-dimeticona polioles tales como la laurilmeticona copoliol vendida bajo la denominación “Dow Corning 5200 Formulation Aid” por la sociedad Dow Corning y la cetil dimeticona copoliol vendida bajo la denominación “Abil EM 90®” por la sociedad Goldschmidt. También se puede utilizar como tensioactivo de emulsiones E/H un organopolisiloxano sólido elastómero, reticulado, que comprende al menos un grupo oxialquileno, tal como los obtenidos según el modo operativo de los ejemplos 3, 4 y 8 del documento US-4-5,412,004 y de los ejemplos del documento US-A-5,811,487, especialmente el producto del ejemplo 3 (ejemplo de síntesis) de la patente US-A-5,412,004 y tal como el comercializado bajo la referencia KSG 21 por la sociedad Shin Etsu.

Para las emulsiones H/E se pueden citar por ejemplo como emulsionantes los emulsionantes no iónicos tales como los ésteres de ácidos grasos y de glicerol oxialquilenados (más particularmente polioxietilenados); los ésteres de ácidos grasos y de sorbitano oxialquilenados; los ésteres de ácidos grasos oxialquilenados (oxietilenados y/u oxipropilenados); los éteres de alcoholes grasos oxialquilenados (oxietilenados y/u oxipropilenados); los ésteres de azúcares tales como el estearato de sacarosa; y sus mezclas tales como la mezcla de estearato de glicerilo y de estearato de PEG-40.

Estas composiciones pueden ser igualmente emulsiones H/E estabilizadas por partículas como por ejemplo las partículas poliméricas descritas en la patente FR2760641, polímeros anfífilos reticulados o no, tales como los descritos en las solicitudes: FR2853543 y FR2819175.

De forma conocida, la composición cosmética puede contener igualmente los adyuvantes habituales en el sector cosmético, tales como los gelificantes hidrófilos o lipófilos, los aditivos hidrófilos o lipófilos, los conservantes, los antioxidantes, los disolventes, los perfumes, las cargas, los absorbentes de olores y las materias colorantes. Las cantidades de estos diferentes coadyuvantes son las utilizadas clásicamente en el sector cosmético y, por ejemplo, varían aproximadamente de 0,01% a 10% del peso total de la composición. Estos adyuvantes, según su naturaleza, se pueden introducir en la fase grasa, en la fase acuosa y/o en las fases lipídicas.

Como disolventes utilizables en la invención, se pueden citar los alcoholes inferiores, especialmente etanol, isopropanol, dipropilenglicol, butilenglicol y propilenglicol.

Como gelificantes hidrófilos utilizables en la invención, se pueden citar como ejemplos no limitativos, los polímeros carboxivinílicos (carbomer®), los polímeros acrílicos tales como los copolímeros de acrilatos/alquilacrilatos, las poliacrilamidas, los polisacáridos tales como la hidroxipropilcelulosa, las gomas naturales y las arcillas, como gelificantes lipófilos se pueden citar las arcillas modificadas tales como las bentonitas, las sales metálicas de ácidos grasos como los estearatos de aluminio, la sílice hidrófuga, la etilcelulosa y el polietileno.

Cuando la composición se administra por vía oral, se presenta ventajosamente en forma de una cápsula de gelatina, de un comprimido o de pildoras. Cuando la composición se administra por inyección cutánea, se presenta particularmente en forma de de una solución estéril.

Las composiciones de la invención pueden contener otros activos hidrófilos o lipófilos. Estos activos se seleccionan especialmente entre los agentes antioxidantes, los agentes dermo-relajantes o dermodecontractantes, los agentes anti-edad, los agentes anti-glicación, los agentes estimulantes de la síntesis de macromoléculas dérmicas o epidérmicas y/o que impiden su degradación, los agentes estimulantes de la proliferación de fibroblastos o de queratinocitos y/o la diferenciación de los queratinocitos, los agentes que favorecen la maduración de la envolvente córnea, los inhibidores de NO-sintasa y los agentes que estimulan el metabolismo energético de las células. Las listas de estos activos se dan a continuación a título ilustrativo, y no deben ser considerados de ningún modo como limitativos.

Agentes anti-edad:

Entre los activos conocidos para luchar contra los signos del envejecimiento, especialmente cutáneo, se pueden citar especialmente:

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-ya sea sobre la síntesis de los glucosaminoglucanos tales como el producto de fermentación de la leche por lactobacillus vulgaris, comercializado por la sociedad BROOKS bajo la denominación comercial Biomin Yogourth®; el extracto de alga parda Padina pavonica comercializado por la sociedad ALBAN MÜLLER bajo la denominación comercial HSP3®; el extracto de Saccharomyces cerevisiae disponible especialmente de la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Firmalift® o de la sociedad LSN bajo la denominación comercial Cytovitin®; un extracto de Laminaria ochroleuca tal como la Laminaïne® de Secma; la esencia de Mamaku de Lucas Meyer, un extracto de berro (Odraline® de Silab).

-ya sea sobre la síntesis de la fibronectina, tales como el extracto de zooplancton Salina comercializado por la sociedad SEPORGA bajo la denominación comercial GP4G®; el extracto de levadura disponible especialmentede la sociedad ALBAN MÜLLER bajo la denominación comercial Drieline® y el palmitoil pentapéptido comercializado por la sociedad SEDERMA bajo la denominación comercial Matrixil®.

Entre los activos estimulantes de las macromoléculas epidérmicas, tales como la filagrina y las queratinas, se pueden citar especialmente el extracto de lupina comercializado por la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Structurine®; el extracto de brotes de haya Fagus sylvatica comercializado por la sociedad GATTEFOSSE bajo la denominación comercial Gatuline® RC; el extracto de zooplancton Salina comercializado por la sociedad SEPORGA bajo la denominación comercial GP4G®; el tripéptido de cobre de PROCYTE; un extracto peptídico de Voandzeia subterránea tal como el comercializado por la sociedad Laboratoires Sérobiologiques bajo la denominación comercial Filladyn LS 9397®.

Preferentemente se utilizará un activo estimulante de la síntesis de macromoléculas dérmicas y/o epidérmicas y/o que impiden su degradación, seleccionado entre los agentes estimulantes de la síntesis de los glucosaminoglucanos, los agentes que inhiben la degradación de la elastina, los agentes estimulantes de la síntesis de la fibronectina, los agentes estimulantes de la síntesis de macromoléculas epidérmicas, y sus mezclas.

Aún más preferentemente, se utilizará un activo que estimule la síntesis de los glucosaminoglucanos seleccionado entre un extracto de alga parda Padina pavonica, un extracto de Saccharomyces cerevisiae, un extracto de Laminaria ochroleuca, la esencia de mamaku, un extracto de berro y sus mezclas.

Como activos preferidos que estimulan la síntesis de macromoléculas dérmicas y/o epidérmicas y/o que impiden su degradación, se pueden citar: los péptidos de síntesis tales como la iamina, el biopéptido CL o palmitoiloligopéptido comercializado por la sociedad SEDERMA; los péptidos extraídos de vegetales tales como el hidrolizado de soja comercializado por la sociedad COLETICA bajo la denominación comercial Phytokina®; los péptidos de arroz tal como el Nutripeptide® de SILAB, el metilsilanol manuronato tal como el Algisium C® comercializado por Exsymol; el ácido fólico; un extracto de Medicago sativa (alfalfa) tal como el comercializado por SILAB bajo la denominación Vitanol®; un extracto peptídico de avellana tal como el comercializado por la sociedad Solabia bajo la denominación Nuteline C®; la arginina; un extracto de afanizomenona flos-aquae (cianoficea) comercializado bajo la denominación Lanablue® por Atrium Biotechnologies, el extracto de malta comercializado por la sociedad COLETICA bajo la denominación comercial Collafit® el licopeno; un extracto de lichi; un extracto de moringa tal como el Arganyl LS 9781 de Cognis; un extracto de vaccinium myrtillus tales como los descritos en la solicitud FR-A-2814950; el retinol y derivados, en particular el palmitato de retinol; el extracto de Saccharomyces cerevisiae comercializado por la sociedad LSN bajo la denominación comercial Cytovitin®; un extracto peptídico de avellana tal como el comercializado por la sociedad Solabia bajo la denominación Nuteline C®; el ácido {2-[acetil-(3-trifluorometil-fenil)amino]-3-metil-butirilamino}acético, denominado de otro modo N-[N-acetil, N’-(3-trifluorometil)fenil valil]glicina ó Nacetil-N-(3-trifluorometil)fenil]valil-glicina ó acetil trifluorometil fenil valilglicina o un éster de éste con un alcohol de C1-C6; un extracto de péptidos de arroz tal como Colhibin® de Pentapharm, o un extracto de Phyllanthus emblica tal como Emblica® de Rona; un extracto de alga parda Padina pavonica comercializado por la sociedad ALBAN MÜLLER bajo la denominación comercial HSP3®; el extracto de Saccharomyces cerevisiae disponible especialmente de la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Firmalift® o de la sociedad LSN bajo la denominación comercial Cytovitin®; un extracto de Laminaria ochroleuca tal como la Laminaína® de Secma; la esencia de mamaku de Lucas Meyer; el extracto de lupina comercializado por la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Structurine®; el extracto de brotes de haya Fagus sylvatica comercializado por la sociedad GATTEFOSSE bajo la denominación comercial Gatuline® RC.

Agentes que estimulan la proliferación de los fibroblastos o de los queratinocitos y/o la diferenciación de los queratinocitos

Los agentes que estimulan la proliferación de los fibroblastos, utilizables en la composición según la invención se pueden seleccionar, por ejemplo, entre las proteínas o polipéptidos vegetales, los extractos especialmente de soja (por ejemplo un extracto de soja comercializado por la sociedad LSN bajo la denominación Eleseryl SH-VEG 8® o comercializado por la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Raffermine®)¸ un extracto de proteínas hidrolizadas de soja tal como la RIDULISSE® de SILAB; y las hormonas vegetales tales como las giberelinas y las citoquininas; un extracto peptídico de avellana tal como el comercializado por la sociedad Solabia bajo la denominación NutelineC®.

Preferentemente, se utilizará un agente que favorezca la proliferación y/o la diferenciación de los queratinocitos.

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Los agentes que estimulan la proliferación de los queratinocitos, utilizables en la composición según la invención, comprenden especialmente; el floroglucinol, el extracto de hojas de hydrangea macrophylla como el Arnacha liquid E® de Ichimaru Pharcos, un extracto de levadura tal como el Stimoderm® de CLR; el extracto de Larrea divaricata tal como el Capislow® de Sederma, las mezclas de extractos de papaya, de hojas de olivo y de limonero tal como la Xyleina® de Vincience, el extracto de hojas de hydrangea macrophylla como la Arnacha liquid E® de Ichimaru Pharcos, el retinol y sus ésteres de los cuales el palmitato de retenilo, los extractos de tortas de nuez comercializados por Gattefosse y los extractos de solanum tuberosum tal como Dermolectine® comercializado por Sederma.

Entre los agentes que estimulan la diferenciación de los queratinocitos están comprendidos, por ejemplo, los minerales tales como el calcio; un extracto peptídico de lupina tal como el comercializado por la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Structurine®; el beta-sitosterilsulfato de sodio tal como el comercializado por la sociedad SEPORGA bajo la denominación comercial Phytocohesine®; y un extracto hidrosoluble de maíz tal como el comercializado por la sociedad SOLABIA bajo la denominación comercial Phytovityl®; un extracto peptídico de Voandzeia subterranea tal como el comercializado por la sociedad Laboratoires Sérobiologicos bajo la denominación comercial Filladyn LS 9397®; y los lignanos tales como el secoisolariciresinol, el retinol y sus ésteres, de los cuales el palmitato de retinilo.

Como agentes que estimulan la proliferación y/o la diferenciación de queratinocitos , se pueden citar también los estrógenos tal como el estradiol y homólogos; las citoquinas.

Como activos que estimulan la proliferación de los fibroblastos o de los queratinocitos y/o la diferenciación de los queratinocitos preferidos, se citarán las proteínas o polipéptidos vegetales, extractos especialmente de soja (por ejemplo un extracto de soja comercializado por la sociedad LSN bajo la denominación Eleseryl SH-VEG 8® o comercializado por la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Raffermine®); un extracto de proteínas hidrolizadas de soja tal como la RIDULISSE® de SILAB; un extracto peptídico de avellana tal como el comercializado por la sociedad Solabia bajo la denominación Nuteline C®; la adenosina, el floroglucinol, un extracto de levadura tal como el Stimoderm® de CLR; un extracto peptídico de lupina tal como el comercializado por la sociedad SILAB bajo la denominación comercial Structurine®; un extracto hidrosoluble de maíz tal como el comercializado por la sociedad SOLABIA bajo la denominación comercial Phytovityl®; un extracto peptídico de Voandzeia subterranea tal como el comercializado por la sociedad Laboratoires Sérobiologiques bajo la denominación comercial Filladyn LS 9397®; el retinol y sus ésteres, de los cuales el palmitato de retinilo.

Agentes que favorecen la maduración de la envolvente córnea

En las composiciones de la invención se podrán utilizar agentes que intervienen en la maduración de la envolvente córnea, que se altera con la edad e induce una disminución de la actividad de las transglutaminasas. Se pueden citar por ejemplo la urea y sus derivados y en particular el Hydrovance® de National Starch y los demás activos mencionados en la solicitud de L’OREAL FR2877220.

Inhibidores de NO-sintasas

El agente que tiene una acción inhibidora de la NO-sintasa se puede seleccionar entre las OPC (oligómeros procianidólicos); los extractos de vegetales de la especie Vitis vinifera especialmente comercializados por la sociedad Euromed bajo la denominación Leucocianidinas de uvas extra, o también por la sociedad Indena bajo la denominación Leucoselect®, o por último por la sociedad Hansen bajo la denominación Extracto de pulpa de uva; los extractos de vegetales de la especie Olea europaea preferentemente obtenidos a partir de hojas de olivo y especialmente comercializados por la sociedad VINYALS en forma de extracto seco, o por la sociedad Biologia & Technologia bajo la denominación comercial Eurol® BT; los extractos de un vegetal de la especie Gingko biloba, de preferencia un extracto acuoso seco de este vegetal vendido por la sociedad Beaufour bajo la denominación comercial Ginkgo biloba extracto estándar y sus mezclas.

Agentes que estimulan el metabolismo energético de las células

El activo que estimula el metabolismo energético de las células se puede seleccionar, por ejemplo entre la biotina, un extracto de Saccharomices cerevisiae tal como el Phosphovital® de Sederma, la mezcla de sales de sodio, de manganeso, de cinc y de magnesio del ácido pirrolidoncarboxílico como el Physiogenyl® de Solabia, una mezcla de gluconato de cinc, de cobre y de magnesio tal como el Sepitonic M3® de Seppic y sus mezclas; y un beta-glucano procedente de Saccharomices cerevisiae tal como el comercializado por la sociedad Mibelle AG Biochemistry.

La invención se refiere igualmente a un procedimiento de tratamiento cosmético de la piel destinado a diminuir o prevenir los signos de envejecimiento de la piel o de sus anexos (cabello, cejas, uñas,…), que comprende al menos una etapa consistente en aplicar sobre la piel al menos una composición tal como la definida anteriormente.

El procedimiento según la invención comprende más específicamente al menos una etapa que consiste en aplicar sobre la piel de personas que presentan una piel que presenta al menos uno de los signos de envejecimiento cutáneo mencionados anteriormente, al menos una composición tal como la definida anteriormente.

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El elemento de cierre puede estar acoplado al recipiente par atornillamiento.

Alternativamente, el acoplamiento entre el elemento de cierre y el recipiente se hace de otro modo que por atornillamiento, especialmente por medio de un mecanismo de bayoneta, por encliquetado, ajuste, soldadura, encolado o por atracción magnética. Por “encliquetado” se entiende en particular todo sistema que implique el paso de un burlete o cordón de material por deformación elástica de una porción, especialmente del elemento de cierre, que retorna después a la posición no forzada elásticamente de dicha porción después del paso del burlete o del cordón.

El recipiente se puede realizar, al menos en parte, de un material termoplástico, como polipropileno o polietileno.

Alternativamente, el recipiente está realizado de material no termoplástico, especialmente de vidrio o metal (o aleación).

El recipiente puede ser de paredes rígidas o de paredes deformables, especialmente en forma de un tubo o de un frasco tubular. El recipiente puede comprender medios destinados a provocar o facilitar la distribución de la composición. A título de ejemplo, el recipiente puede ser de paredes deformables, de manera a provocar la salida de la composición en respuesta a una sobrepresión en el interior del recipiente, siendo producida esta sobrepresión por aplastamiento elástico (o no elástico) de las paredes del recipiente.

Los contenidos de las patentes o solicitudes de patente citadas anteriormente están incorporadas por referencia en la presente solicitud.

Según un modo particular, la invención se refiere a un conjunto cosmético que comprende:

-una composición A que contiene floretina como agente antioxidante,

-una composición B, acondicionada por separado de la composición A, que comprende al menos un monosacárido seleccionado entre manosa, ramnosa y su mezcla.

La invención se refiere por último a un procedimiento de tratamiento cosmético o dermatológico que comprende al menos una etapa de administración, en particular de aplicación tópica sobre la piel y/o sus anexos, de la composición A, y al menos una etapa de administración, en particular de aplicación tópica sobre la piel y/o sus anexos, de la composición B.

La administración de la composición A según la invención se puede realizar simultáneamente a, o antes o después de, la administración de la composición B. Tal como se ha especificado anteriormente, la administración de la composición A y de la composición B se puede realizar por vía tópica, oral o por inyección.

Según una alternativa, en primer lugar se administra la composición A y en segundo lugar la composición B. Según otra alternativa, se administra en primer lugar la composición B y en segundo lugar la composición A.

Las composiciones A y B pueden estar acondicionadas por separado en el interior de dos compartimentos, formados ya sea por dos recipientes distintos, ya sea en el interior de un dispositivo unitario. Por “dispositivo unitario” se entiende un dispositivo por el cual los dos compartimentos son solidarios uno del otro. Tal dispositivo se puede obtener por un procedimiento de moldeado en una sola pieza de los dos compartimentos, especialmente de un material termoplástico. Igualmente, puede ser el resultado de cualquier forma de unión, especialmente por encolado, soldadura o también encliquetado.

Según un primer modo de realización, los dos recipientes son independientes uno del otro. Estos recipientes se pueden presentar en diversas formas. Se puede tratar especialmente de tubos, frascos o bidones.

Uno y/u otro de los recipientes puede llevar superpuesta una bomba de accionamiento manual que lleva superpuesto un botón pulsador para el accionamiento de la bomba y la distribución de la composición por al menos un orificio de distribución.

Alternativamente, uno y/u otro de los recipientes están presurizados, especialmente por medio de un agente propulsor, en particular un gas propulsor. En este caso, el o los recipientes está(n) equipados de una válvula a la que se superpone un botón pulsador equipado de una boquilla o de cualquier medio de difusión para la distribución del producto.

El propulsor puede estar mezclado con la composición a distribuir o separado de ella, especialmente por medio de un pistón apto para deslizarse en el interior del recipiente, o por medio de las paredes flexibles de una bolsa en el interior de la cual se dispone la composición.

Los recipientes pueden estar constituidos por materiales diversos: plástico, vidrio o metal.

También alternativamente, los dos compartimentos están formados por dos compartimentos concéntricos formados en el interior de un tubo, y están superpuestos por una bomba sin toma de aire, equipada de un botón pulsador con

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Ejemplo 2: Proliferación de los fibroblastos

Protocolo

La ramnosa fue estudiada en un modelo de piel reconstruida completa con el fin de medir su eficacia anti-edad a nivel del compartimento dérmico.

Brevemente, el modelo de piel reconstruida utilizada es el descrito por Bell et al, (Bell E. et al, The reconstitution of living skin, J Invest Dermatol, 1983, jul; 81): comprende un equivalente dérmico sobre el cual se reconstruye una epidermis pluriestratificada; el equivalente dérmico se fabrica a partir de colágeno ácido, soluble, medio de cultivo que contiene suero y fibroblastos humanos adultos normales. Al cabo de 5 días de retracción, este equivalente se siembra con queratinocitos, después se cultiva durante 6 días en inmersión y 7 días en emersión con objeto de obtener una epidermis pluriestratificada y diferenciada, que presente una capa córnea.

La piel reconstruida se trata con ramnosa 5 mM durante 2 días, y 5 días en el medio de cultivo; al final del tratamiento, las pieles reconstruidas se incluyen en el Tissue Tek con objeto de seccionarlos en estado congelado en el criostato con un espesor de 7 μM. Los cortes realizados se marcan a continuación con yoduro de propidio para marcar el ADN de los núcleos de los fibroblastos con objeto de su numeración. En cada piel reconstruida se realizan aleatoriamente 3 cortes congelados; en cada corte se analizan 2 campos microscópicos (objetivo x 25) con microscopio de fluorescencia y se fotografían. La numeración de los fibroblastos dérmicos se realiza por lo tanto para cada piel reconstruida en un total de 6 imágenes, que representan los 6 campos microscópicos considerados. El número de fibroblastos dérmicos se compara con la piel testigo y la tratada con la ramnosa en dos tiempos de la cinética.

Resultados

Los resultados se indican en la figura 3.

Se ha comprobado que la ramnosa induce la estimulación del crecimiento de los fibroblastos dérmicos de la piel reconstruida después de 48 horas de tratamiento, estimulación confirmada a 120 h de tratamiento, con entre 30 a 35% de células más (véase figura 3). Cabe advertir que esta estimulación va acompañada de una estimulación de la síntesis de procolágeno de 1 a 5 mM, así como a 1 mM, lo que puede ser igualmente el resultado del número incrementado de los fibroblastos responsables de la secreción de esta proteína mayor de la matriz extracelular.

Estos dos efectos completan la actividad anti-edad de la ramnosa ya medida en el compartimento epidérmico, que viene a estimular la proliferación y el metabolismo del fibroblasto, célula mayor del compartimento dérmico.

Ejemplo 3: Síntesis del procolágeno 1

Se ha procedido igualmente en otras series de cortes en congelación para la detección clásica por inmunofluorescencia indirecta del procolágeno de tipo I a nivel de la dermis de la piel reconstruida (Anticuerpos anti procoll 1 (MAB 1912 Millipore) + conjugado acoplado a FITC (112-095-068 Jackson Immunoresearch)). Con objeto de situarse en el seno de la arquitectura cutánea durante el examen microscópico de los cortes, los núcleos celulares de los queratinocitos y de los fibroblastos se localizan gracias a su marcado con yoduro de propidio, como se ha descrito anteriormente. En cada piel reconstruida se realizan aleatoriamente 3 cortes en estado congelado y en cada corte se analizan 2 campos microscópicos (objetivo x 25) con microscopio de fluorescencia, y se fotografían. Los niveles de fluorescencia, proporcionales a la cantidad de procolágeno de tipo I, se comparan con la piel testigo y la piel tratada con ramnosa.

En la imagen 1, figura 4, que corresponde a un corte de la piel testigo reconstruida a 120 h de cultivo, se materializa la presencia de procolágeno de tipo 1 sintetizado por los fibroblastos dérmicos por la fluorescencia verde situada en la parte inferior de la imagen. En la parte superior de la imagen se adivina la parte basal de epidermis, tejido muy celular, visualizable por los numerosos núcleos de los queratinocitos. En la dermis se visualiza igualmente tejido mucho menos celular, la distribución aleatoria de los fibroblastos en el seno de la matriz extracelular dérmica. En la imagen 2, figura 4, correspondiente por ejemplo a un corte de la piel reconstruida tratada con ramnosa 1 mM durante 120 horas, se constata un claro aumento de la fluorescencia verde en comparación a la observada en la piel testigo (imagen 1), así como una distribución de la señal fluorescente que materializa bien el aspecto fibrilar del procolágeno de tipo I sintetizado de nuevo. Este lncremento de la fluorescencia general indica que el tratamiento con ramnosa ha estimulado fuertemente la síntesis de procolágeno de tipo I por los fibroblastos.

Estos resultados muestran bien la capacidad de la ramnosa de estimular el metabolismo del fibroblasto, metabolismo que en el curso del envejecimiento se desequilibra más hacia la degradación de la matriz extracelular que hacia su renovación.

La ramnosa, estimulando a la vez el metabolismo y el crecimiento de los fibroblastos dérmicos, demuestra bien su eficacia anti-edad sobre la dermis, eficacia complementaria a la medida frente al compartimento dérmico.

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Ejemplo 4: Asociación de ramnosa y de un antioxidante (floretina): evidencia de la acción complementaria anti-edad de la ramnosa y de un antioxidante (floretina)

Evaluación de la protección de la asociación ramnosa/floretina frente a la mortalidad celular inducida por los UVA:

Brevemente, los fibroblastos humanos normales se siembran en placas de 24 pocillos a razón de 3.104 células/pocillo en medio de base MEM con Glutamax 1, (Gibco cat nº 41090-028) + 10% SVF, (Gibco cat nº 10270098) + Péni/Strepto (Gibco cat nº 15070-063) + Fungizone Ampb B (Gibco cat nº 15290081).

Las células se incuban a continuación en presencia de la asociación de ramnosa 1 y/o 5 mM + floretina 10 μM durante 24 horas antes de la exposición a los UV. Las células se pueden tratar igualmente con la asociación en un tratamiento posterior, o bien ulteriormente a la exposición a los UV.

Los queratinocitos tratados con la asociación de ramnosa + floretina se someten a continuación a la exposición UV por medio de un simulador solar ORION de marca Oriel, provisto de un filtro WG335 que libera el conjunto del espectro de los UVA y del visible. Las células son expuestas a los UVA en efecto dosificado tal como, por ejemplo, a 5, 10 y 18 J/cm2. Las células testigo se conservan en oscuridad.

24h después de la exposición a los UV, se mide la viabilidad de las células mediante el ensayo al Rouge Neutre (rojo neutro). El rojo neutro es un colorante de inclusión específica de los lisosomas. La acumulación de este colorante depende de la integridad de la membrana de las células. Así, es posible distinguir las células vivas (incorporación del rojo neutro) de las células muertas o dañadas, y cuantificarlas. Las células se incuban entonces en presencia de rojo neutro durante 1 hora a 37ºC y 5% de CO2. El colorante se extrae a continuación de las células por adición de una solución de etanol al 50% y NaH2PO4 0,05M. La lectura de la absorción se realiza en el espectrofotómetro a 540 nm.

Evaluación de la prevención por la asociación ramnosa/floretina de la liberación de MMP1 por losfibroblastos dérmicos, inducida por los UVA:

Brevemente, los fibroblastos humanos normales se siembran en placas de 24 pocillos a razón de 3.104 células/pocillo en medio de base MEM con Glutamax 1, (Gibco cat nº 41090-028) + 10% SVF, (Gibco cat nº 10270098) + Péni/Strepto (Gibco cat nº 15070-063) + Fungizone Ampb B (Gibco cat nº 15290081).

Las células se incuban en la confluencia durante 24 horas con la asociación ramnosa + floretina directamente en el medio de cultivo. Las células se aclaran a continuación con PBS+, después se exponen a los UVA en PBS+ por medio de un simulador solar ORION de marca Oriel provisto del filtro WG335 que libera el conjunto del espectro de los UVA y del visible. Las células son expuestas a los UVA con dosis de 4 J/cm2. Las células testigo se conservan en oscuridad. A continuación de la exposición a los UVA, las células se incuban de nuevo en presencia de la asociación de ramnosa + floretina durante 48 horas a 37ºC, 5% de CO2. La MMP1 se dosifica a continuación en el medio de cultivo por Dosificación Elisa (kit Biotrak Amersham RPN 2610).

Resultados

Evaluación de la protección de la asociación ramnosa/floretina frente a la mortalidad celular inducida por los UVA:

La asociación ramnosa y floretina protege los fibroblastos de la mortalidad celular inducida por los UVA y, por lo tanto, de los efectos nocivos del estrés oxidativo.

Evaluación de la prevención por la asociación ramnosa/floretina de la liberación de MMP1 por los fibroblastos dérmicos, inducida por los UVA:

La asociación ramnosa y floretina previene la liberación de MMP1 por las células dérmicas, inducida por los UVA, limitando así la degradación de la matriz dérmica.

Cremas ANTI-edad: emulsión aceite en agua

Poliacrildimetiltauramida de amonio (Hostacerin AMPS de Clariant)

1,00%

Ciclohexasiloxano

5,0%

Aceite de yoyoba

5%

Aceite de aguacate

2%

Triglicérido cáprico/caprílico

4%

Glicerina

1,70%

Glicerilestearato / PEG 100 estearato

0,70%

Dimiristil tartrato / alcohol cetearílico / / C12-15 pareth-7 / PPG-25 laureth-25

0,50%

Tocoferol

1%

Goma de xantano

0,20%

Ramnosa

5%

Conservantes

0,3%

Agua

qsp 100

Crema anti-edad: emulsión aceite en agua

Poliacrildimetiltauramida de amonio (Hostacerin AMPS de Clariant)

1,00%

Ciclohexasiloxano

5,0%

Eldew SL 205 (Ajinomoto)

7%

Aceite de almendra de albaricoque

7%

Alcohol estearílico

0,30%

Gliceril estearato / PEG-100 estearato

0,70%

Dimiristil tartrato / alcohol cetearílico / C12-15 pareth-7 / PPG-25 laureth-25

0,50%

Éster diisopropílico del ácido N,N’-Bis(bencil)etilendiamina-N,N’-diacético

0,5%

Goma de xantano

0,20%

Manosa

5%

Conservantes

0,50%

Agua

qsp 100

Poliacrildimetiltauramida de amonio (Hostacerin AMPS de Clariant)

1,00%

Ciclohexasiloxano

5,0%

Aceite de pepita de uva

3%

Aceite de yoyoba

4%

Fracción líquida de manteca de karité

3%

Glicerina

1,70%

Alcohol estearílico

0,30%

Gliceril estearato / PEG-100 estearato

0,70%

Dimiristil tartrato / alcohol cetearílico / C12-15 pareth-7 / PPG-25 laureth-25

0,50%

Pygnogenol® (*)

0,3%

Goma de xantano

0,20%

Manosa

2,5%

Conservantes

0,50%

Agua

qsp 100

(*) PYGNOGENOL® : extracto de pino marítimo comercial

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Claims (1)

1. imagen1