ES2564821T3

ES2564821T3 - Lactasa purificada

Info

Publication number: ES2564821T3
Application number: ES02759791.3T
Authority: ES
Inventors: Rudolf Franciscus Wilhelmus C. Van Beckhoven; Petrus Andreas Van Paridon
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2001-04-04
Filing date: 2002-04-03
Publication date: 2016-03-29
Anticipated expiration: 2022-04-03
Also published as: PT1373491E; JP2004534527A; EP2280065A1; US20150359239A1; JP2016000058A; DK2280065T3; ES2858527T3; US9149048B2; US20040121041A1; US20110212221A1; JP2009034116A; PT2280065T; DK1373491T3; WO2002081673A1; CN100447242C; JP2013099364A; CN1500143A; EP1373491A1; EP2280065B1; US7955831B2

Abstract

Un procedimiento para producir una leche que contiene lactasa, según el cual una solución de lactasa, que comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacáridos, es esterilizada antes de la adición a la leche y según el cual la esterilización se lleva a cabo en por lo menos un filtro que está colocado en línea con el procedimiento de producción de leche.

Description

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DESCRIPCION

Lactasa purificada

Campo del invento

El presente invento se refiere a un procedimiento para producir una leche que contiene lactasa, segun el cual una solucion de lactasa, que comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos, es esterilizada antes de su adicion a la leche, y segun el cual la esterilizacion se lleva a cabo en por lo menos un filtro que esta colocado en lmea con el proceso de produccion de la leche.

Antecedentes del invento

La lactasa o beta-galactosidasa (EC: 3.2.1.23) es una enzima que puede convertir a la lactosa (con disacaridos) en los monosacaridos glucosa y galactosa. La lactosa esta presente en los productos lacteos y mas particularmente en la leche, la leche desnatada, la nata y otros productos lacteos. La descomposicion de la lactosa se realiza en la pared intestinal del cuerpo humano (y en otros mairnferos) por medio de la presencia natural de la lactasa.

Muchos seres humanos (y otros mamnferos) padecen de una intolerancia a la lactosa, cuando la lactasa esta ausente o parcialmente ausente en su sistema digestivo. En el caso de que la lactosa sea una parte constituyente del alimento o de la alimentacion, una digestion disminuida de lactosa puede conducir a un trastorno intestinal.

Hoy en dfa, la lactasa es anadida a la leche con el fin de descomponer a la lactosa que esta presente. La lactasa puede ser anadida a la leche o bien antes o bien despues de una pasterizacion o esterilizacion. En general la lactasa sera desactivada durante un tratamiento de pasterizacion o esterilizacion. Cuando la lactasa es anadida antes de la esterilizacion, se puede requerir una gran cantidad de lactasa con el fin de reducir el penodo de tiempo de almacenamiento que transcurre entre la adicion y la pasterizacion o esterilizacion. Aunque la lactasa es una enzima activa, ha de tenerse en cuenta que la leche es tratada y almacenada generalmente a unas temperaturas comprendidas entre 0 y 8 °C.

La otra posibilidad es la adicion de la enzima despues de una pasterizacion o esterilizacion de la leche y antes de envasarla. En este caso, la lactasa puede ser anadida en una cantidad menor, igual a como lo puede ser por lo menos 10 a 24 horas antes de que la leche sea consumida. La enzima puede digerir a la lactosa, que puede estar presente durante el transporte y el almacenamiento en la factona, en la tienda de venta y en el frigonfico del consumidor.

Hay varias maneras de esterilizar a la lactasa, por ejemplo por medio de un tratamiento qmmico y/o termico. Sin embargo, a causa de su aplicacion en los alimentos o en la alimentacion, la filtracion en condiciones esteriles es una opcion preferida.

En la revista Voedingsmiddelentechnologie 13 (1980), 23, se ilustra adicionalmente un metodo que ha sido descrito tambien en la memoria de patente britanica 1477087. La lactasa, que usualmente es usada por la industria de tratamiento de productos lacteos en forma de una solucion acuosa, a la que se le pueden anadir uno o mas agentes estabilizadores tales como el glicerol, es filtrada antes de su uso. La solucion de enzima filtrada es bombeada a traves de un filtro esteril y luego inyectada, por intermedio de un dispositivo de dosificacion, dentro de una instalacion de produccion de una leche previamente esterilizada o pasterizada, y luego mezclada con la leche, que subsiguientemente es envasada en condiciones asepticas dentro de unos envases uniformes.

Sin embargo, en la practica, el filtro esteril se bloquea con frecuencia debido a la protema degradada, quedando unos poli- y oligosacaridos en la solucion de enzima a pesar de haber filtrado. De acuerdo con el documento de patente europea EP 145092, dicha degradacion aumenta generalmente cuanto mas largo sea el tiempo durante el cual la enzima es almacenada antes del uso y puede ser activada por el considerable penodo de tiempo que transcurre entre la produccion de la enzima y su uso en la industria de tratamiento de productos lacteos. La limpieza o el reemplazo de manera repetida de los filtros esteriles no es una opcion, puesto que el hecho de detener todo el proceso requiere una esterilizacion antes de comenzar de nuevo.

El documento EP 145092 describe un procedimiento para la filtracion de lactasa en condiciones esteriles dentro del penodo de tiempo de 14 dfas desde que ella habfa sido producida. El documento EP 145092 describe que la lactasa debena ser filtrada en condiciones esteriles despues de la recuperacion y purificacion de la lactasa producida por fermentacion, pero antes de la formacion de unos productos de degradacion que son suficientes para obstruir el filtro esteril. No obstante, el planteamiento de filtrar en condiciones esteriles una solucion de lactasa recientemente producida no satisface la necesidad de una solucion de lactasa que pueda ser filtrada en lmea y que pueda ser anadida a la leche esterilizada o pasterizada. La lactasa que se ha descrito en el documento EP 145092 se deriva de la levadura Kluyveromyces que se usa ampliamente en la industria de productos lacteos. Los polisacaridos son

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probablemente unas partes constituyentes de las paredes celulares de la anfitriona, que se forman durante el proceso de recuperacion.

Sumario del invento

El presente invento proporciona un procedimiento para producir una leche que contiene lactasa, segun el cual una solucion de lactasa que comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos, es esterilizada antes de la adicion a la leche y la esterilizacion se lleva a cabo en por lo menos un filtro, que esta colocado en lmea con el procedimiento de produccion de leche.

El presente invento describe tambien un procedimiento para la produccion de una solucion de lactasa, segun el cual los poli- y oligosacaridos que estan presentes en una solucion sin tratar son separados desde la solucion de lactasa.

El presente invento describe tambien una solucion de lactasa esterilizada y tambien unos productos lacteos que comprenden la solucion de lactosa esterilizada.

Descripcion detallada del invento

El presente invento se refiere a un procedimiento para producir una leche que contiene lactasa, segun el cual una solucion de lactasa, que comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos, es esterilizada antes de su adicion a la leche y segun el cual la esterilizacion se lleva a cabo en por lo menos un filtro que esta colocado en lmea con el procedimiento de produccion de la leche y en particular describe unos nuevos procedimientos para la produccion de una lactasa libre de poli- y oligosacaridos. La retirada de los poli- y oligosacaridos permite una mas facil esterilizacion en filtros de la solucion de lactasa, puesto que el filtro no resulta bloqueado con poli- y oligosacaridos. Como resultado de ello, una lactasa purificada puede ser esterilizada en filtros “en lmea” con un procedimiento de produccion de leche, anulando de esta manera la necesidad de que dicho filtro tenga que ser repetidamente desbloqueado.

El presente invento proporciona un procedimiento para producir una leche que contiene lactasa, segun el cual una solucion de la lactasa, que comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos, es esterilizada antes de su adicion a la leche y segun el cual la esterilizacion se lleva a cabo en por lo menos un filtro que esta colocado en lmea con el procedimiento de produccion de leche,

segun el cual se puede almacenar dicha lactasa y que, despues del almacenamiento, todavfa esta libre de compuestos obstructores tales como poli- y/o oligosacaridos. Preferiblemente, esta solucion puede ser almacenada despues de una recuperacion y una purificacion a partir del proceso de fermentacion durante por lo menos 15 dfas, de manera preferible durante mas de 30 dfas, y de manera todavfa mas preferible durante mas de 120 dfas.

El concepto de libre de poli- y oligosacaridos significa que estan presentes en la solucion de lactasa menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos. Preferiblemente, estan presentes en la solucion de lactasa menos que 5 g/kg, mas preferiblemente menos que 2 g/kg y de manera sumamente preferible menos que 1 g/kg de poli- y oligosacaridos.

La solucion de lactasa destinada a su uso en un procedimiento del presente invento es de manera muy apropiada de filtracion en condiciones esteriles, puesto que la baja concentracion de unos compuestos tales como poli- y oligosacaridos, permite que la solucion de lactasa sea filtrada en condiciones esteriles con menos posibilidad de obstruir al filtro. El filtro se puede usar durante un largo penodo de tiempo, preferiblemente por lo menos durante uno que es cuatro veces mas largo que en el caso del uso de una solucion de lactasa que no esta sustancialmente libre de polisacaridos.

La solucion de lactasa destinada a su uso en un procedimiento del invento es preferiblemente una solucion acuosa de lactasa. La solucion de lactasa contendra en general de 10 a 100.000 ULN/g, de manera preferible de 100 a 10.000 ULN/g (ULN es el acronimo de Unidades de Lactasa Normales).

La solucion de lactasa destinada a su uso en un procedimiento del invento puede comprender uno o mas disolventes u otros aditivos, que llevan a la actividad de la enzima hasta el nivel deseado y que ademas pueden estabilizar a la enzima. Unos disolventes apropiados son, por ejemplo, sorbitol y glicerol. Estos disolventes pueden ser anadidos en una concentracion de 10 a 70 % p/p (= peso/peso) o mas preferiblemente de 30 a 70 % p/p, de la solucion de lactasa. Unos aditivos apropiados, que estabilizan a la enzima, son por ejemplo una lactosa hidrolizada, glucosa, manitol y unos tampones salinos. La solucion de lactasa destinada a su uso en un procedimiento del invento, que esta generalmente libre de compuestos obstructores, tales como unos polisacaridos, se puede obtener purificando a una solucion de lactasa sin tratar en un proceso de cromatograffa, en el cual todos los compuestos responsables de la obstruccion de un filtro son separados a partir de la solucion de lactasa.

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Incluso en los casos en los que la solucion de lactasa sin tratar es almacenada durante por lo menos 15 dfas o incluso durante mas de 30 dfas antes de realizar el proceso de cromatograffa, la solucion de lactasa purificada puede todavfa ser filtrada en condiciones esteriles sin que el filtro resulte obstruido.

Inesperadamente, el uso de una cromatograffa hace posible retirar todos los compuestos (poli- y oligosacaridos, protemas, peptidos, etc.) que pueden obstruir al filtro esteril. Sorprendentemente se encontro que se requena solamente una etapa de cromatograffa para retirar todos los polisacaridos y todos los otros compuestos no protemicos desconocidos, que son responsables de obstruir al filtro esteril. Se ha de tener en cuenta que la solucion de lactasa, aunque haya sido recuperada y purificada a partir del caldo de fermentacion, contendra por lo menos unos polisacaridos, que son convertidos, por lo menos parcialmente, en unos productos de degradacion. Una concentracion tfpica de polisacaridos en unas soluciones de lactasa sin tratar es la de 10 a 100 g/kg.

Las preparaciones comerciales de lactasa pueden contener de 40 a 60 % p/p (peso/peso) de glicerol. Se espera, por lo tanto, que la viscosidad de la preparacion de lactasa este relacionada con la cantidad de glicerol que este presente. Sin embargo, los autores del invento hemos encontrado que la viscosidad de una preparacion de lactasa puede ser reducida de una manera significativa por medio de la retirada de polisacaridos a partir de la preparacion de lactasa. Esta reduccion de la viscosidad hace posible hacer pasar a la preparacion de lactasa a traves del filtro esteril con una reducida diferencia de presiones o con una similar diferencia de presiones en el filtro, con el fin de permitir que pase a traves del filtro mas cantidad de la solucion de lactasa, en comparacion con una solucion de lactasa que no haya sido purificada de acuerdo con el presente procedimiento. El invento proporciona unas soluciones de lactasa destinadas a su uso en un procedimiento del invento, que comprenden de 10 a 70 % p/p de glicerol, de manera preferible de 30 a 70 % p/p y mas preferiblemente de 40 a 70 % p/p de glicerol que tiene una viscosidad de menos que 100 mPa, preferiblemente de menos que 80 mPa e incluso mas preferiblemente de menos que 60 mPa.

Una separacion de los compuestos obstructores a partir de la solucion de lactasa se puede conseguir fijando a la lactasa en una resina cromatografica apropiada. Unas resinas apropiadas, que se pueden usar para separar los compuestos obstructores a partir de una solucion de lactasa, son, por ejemplo, unas resinas intercambiadoras de aniones y de cationes. Los intercambiadores de aniones, por ejemplo el Q-sepharose, se pueden usar cuando una solucion de lactasa, a un pH situado por encima del punto isoelectrico, es aplicada a un intercambiador de iones equilibrado en el mismo pH. La lactasa, pero no los componentes obstructores, esta fijada a la resina. La lactasa fijada puede ser eluida (desorbida), liberada de compuestos obstructores, a partir de la resina aumentando la fuerza ionica y/o cambiando el pH de la resina intercambiadora de aniones. El cambio en la fuerza ionica y/o en el pH durante una desorcion o elucion puede tener lugar bajo un gradiente escalonado o continuo.

La misma separacion se puede conseguir con un intercambiador de cationes, por ejemplo el SP-sepharose, segun la cual la preparacion de lactasa es aplicada a la resina por debajo de su punto isoelectrico. Los autores del invento hemos encontrado que una cromatograffa con HAP (hidroxiapatito) no proporciona ninguna separacion de los poli- y oligosacaridos a partir de la lactasa. Una posible explicacion de esto puede consistir en que los poli- y oligosacaridos estan tambien fijados a la matriz de HAP,

Unas resinas preferidas son unos medios de interaccion hidrofobica (HIC, acronimo de Hydrophobic Interaction Chromatography). En un medio de HIC, la separacion se puede obtener basandose en las diferencias en cuanto a hidrofobicidad. Estan disponibles diferentes resinas de HIC que contienen diferentes ligandos, por ejemplo etilo, propilo, butilo, fenilo y octilo. Por aplicacion de una solucion acuosa de lactasa en unas condiciones que permiten la fijacion de lactasa a la resina, es posible separar a la lactasa con respecto de los compuestos obstructores.

Un protocolo tfpico para favorecer la fijacion o absorcion a una resina de HIC consiste en aplicar una solucion acuosa de lactasa bajo un pH no desnaturalizante y con una fuerza ionica relativamente alta a la resina. La alta fuerza ionica se puede obtener anadiendo ciertas sales a la solucion de lactasa. Unas apropiadas sales son, por ejemplo, el sulfato de amonio, el cloruro de sodio y el sulfato de sodio.

Despues de la etapa de fijacion o absorcion, la lactasa puede ser eluida o desorbida disminuyendo la fuerza ionica. El cambio en fuerza ionica y/o en pH durante la elucion o desorcion puede tener lugar bajo un gradiente escalonado o continuo. Otras resinas apropiadas son, por ejemplo, unos medios de filtracion a traves de un gel y unos medios hidrofobicos de induccion de cargas electricas (por una combinacion de una HIC y una cromatograffa con intercambio de iones).

La lactasa destinada a su uso en un procedimiento del invento se produce mediante una levadura, preferiblemente una cepa de Kluyveromyces, mas preferiblemente K. lactis o K. fragilis. Dicha lactasa se purifica dando como resultado una solucion de lactasa que es facil de esterilizar. La retirada de todos los compuestos que son responsables de obstruir al filtro esteril es muy sorprendente, puesto que, despues del proceso de fermentacion, la lactasa, que esta siendo recuperada y purificada, puede contener unos polisacaridos, que son convertidos por lo menos parcialmente en unos productos de degradacion. Por lo tanto, se cree que la proteasa y otras protemas contaminantes tambien presentes en una solucion de lactasa se retiran en la etapa de cromatograffa. El filtro esteril,

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preferiblemente usado para esterilizar a la solucion de lactasa, esta presente por lo general en el procedimiento de produccion en lmea de leche. El tratamiento de filtracion en condiciones esteriles se lleva a cabo preferiblemente en lmea con respecto al procedimiento de produccion de leche, segun el cual se usan uno o mas filtros de membranas. Un apropiado filtro esteril es, por ejemplo, un filtro de membranas que tiene un tamano de poros de 0,22 pm.

La solucion de lactasa destinada a su uso en un procedimiento del invento se usa ventajosamente en la preparacion de una leche pasterizada o higienizada.

Ejemplo 1

El ejemplo describe un tfpico proceso cromatografico de purificacion de lactasa usando la fenil sepharose LS como resina cromatografica.

El producto comercial Maxilact® 5000 LX (obtenible DSM, Pafses Bajos) que contiene 5.000 ULN/g se diluyo en 5 veces con agua desmineralizada, se anadio sulfato de amonio hasta una concentracion final de 1 M despues de lo cual el pH fue corregido a 7,5.

Una muestra de 20 ml fue aplicada a una columna HiPrep phenyl 16/10 con una capacidad de 20 ml que tema un diametro de 16 mm y una longitud de 10 cm, con un caudal lineal de 150 cm/h. La columna se equilibro con sulfato de amonio 1 M en un Tris 100 mM de pH 7,5. Despues de haberla cargado, la columna se lavo con un tampon de equilibracion con un caudal de 150 cm/h hasta que se alcanzo la lmea de base. Una elucion de lactasa se realizo bajo un gradiente escalonado de 150 cm/h (en un Tris 100 mM de pH 7,5). Despues de una elucion de la lactasa, la solucion de lactasa fue desalinizada y concentrada hasta una llegar a una actividad final de aproximadamente 10.000 ULN/g. Despues de un proceso de concentracion, la solucion de lactasa se formulo con glicerol a una concentracion final de 50 % p/p, la actividad final de lactasa despues de un proceso de formulacion era de aproximadamente 5.000 ULN/g.

La actividad de lactasa se determino mediante la hidrolisis del substrato o-nitrofenil-U-galactopiranosido (ONPG) para dar o-nitrofenilo y galactosa. La reaccion se termino mediante la adicion de carbonato de sodio. La absorbancia del o-nitrofenilo formado, que era de color amarillo en un medio alcalino, se uso para medir la actividad de la enzima (que se expresa como ULN/g). El proceso ha sido publicado en la obra FCC, cuarta edicion, 1 de Julio de 1996, paginas 801 hasta 802 /Actividad de lactasa (neutra) (&-galactosidasa). Los resultados se presentan en la Tabla 1:

Tabla 1

Muestra: Actividad ULN/g g/kg de azucares Poli- y oligosacaridos g/kg

antes de la inversion: despues de la inversion

Maxilact LX 5000: 5.000 1 57,6 56,6

Lactasa purificada: 5.000 < 1 2,21 < 2

El contenido de poli- y oligosacaridos se determino midiendo la cantidad de azucar libre y la cantidad de azucar que estaba presente despues de la inversion con un acido de los polisacaridos.

Los contenidos de polisacaridos se determinaron por medio de una cromatograffa de fase lfquida de alto rendimiento (HPLC acronimo de High Performance Liquid Chromatography). La deteccion se realizo usando un detector del RI (acronimo de Refraction Index = mdice de refraccion). La columna usada fue una de BioRad Aminex HPX 87N, con una longitud de 30 cm y un diametro interno de 7,8 mm, regulada termostaticamente a 85 °C. La fase movil era una solucion de 0,71 g de sulfato de sodio en 1 litro de agua con un caudal de 0,68 ml por minuto.

Se realizaron unos tratamientos previos de dos diferentes muestras, con y sin inversion mediante un acido. El tratamiento previo de una muestra sin ninguna inversion se realizo pesando inicialmente una muestra de 5 g dentro de un matraz volumetrico con una capacidad de 50 ml, disolviendola en una fase movil e inyectando 5 pl de ella sobre la columna.

El tratamiento previo de una muestra con inversion se realizo pesando inicialmente 2 g de una muestra dentro de un tubo de centnfuga, anadiendo 3,00 ml de agua y 2,50 ml de acido clorfudrico de 2,58 mol/l, calentandola durante 75 minutos a 100 °C y anadiendo 2,50 ml de hidroxido de sodio de 2,58 mol/l. Se inyectaron 5 pl de la resultante solucion sobre la columna.

El contenido de glucosa se calculo usando una solucion patron que tema una concentracion de 400 mg de glucosa en 50 ml de una fase movil. Las concentraciones de trisacaridos, disacaridos y fructosa se calcularon usando un factor de respuesta, en relacion con la glucosa.

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Ejemplo 2

El ejemplo describe la filtracion en condiciones esteriles de unas soluciones de lactasa.

Se lleno una jeringa con 1 ml de Maxilact LX 5000, y se coloco un filtro esteril de Millex GV 0.22 pm procedente de Millipore con un area de superficie de 4,91 cm2, sobre la parte superior de la jeringa. Despues de haber aplicado una presion manual, no era posible filtrar el producto a traves del filtro, el hecho de aumentar la presion dio lugar a que el filtro se rompiese.

Otra jeringa se lleno con 1 ml de lactasa purificada formulada con 50 % p/p de glicerol (concentracion final), preparada tal como se ha descrito en el Ejemplo 1, y se coloco un filtro esteril de Millex GV 0.22 pm procedente de Millipore con un area de superficie de 4,91 cm2, sobre la parte superior de la jeringa. Despues de haber aplicado una presion manual. era sorprendentemente facil filtrar en condiciones esteriles por lo menos 1 ml de la solucion de lactasa a traves del filtro.

Por lo tanto, el uso de una cromatograffa permitio que se retirasen todos los compuestos que pudieran haber obstruido al filtro esteril, y no era problematica una filtracion en condiciones esteriles del resultado.

Ejemplo 3

Este ejemplo describe unas mediciones de la viscosidad de unas soluciones de lactasa formuladas.

Se midio la viscosidad tanto del Maxilact LX 5000 comercialmente disponible como de la lactasa purificada que se habfa formulado con 50 % p/p de glicerol (concentracion final), tal como se describe en el Ejemplo 1. El Maxilact comercialmente disponible tambien contiene 50 % p/p de glicerol.

La viscosidad se midio con un Physica UDS 200 a 25 °C, usando una sonda conica de MK 21.

La Tabla 2 muestra que la viscosidad de la lactasa purificada que se habfa formulado a razon de 5.000 ULN/g con 50 % de glicerol (concentracion final) disminuye significativamente como resultado de la purificacion en la que se retiran todos los compuestos obstructores.

Tabla 2: Resultados de las mediciones de la viscosidad

Producto: Viscosidad mPa velocidad de cizalladura = 100 (s-1)

Maxilact LX 5000 comercial: 170

Lactasa purificada formulada con 50 % de glicerol: 40

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REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para producir una leche que contiene lactasa, segun el cual una solucion de lactasa, que comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos, es esterilizada antes de la adicion a la leche y segun el cual la esterilizacion se lleva a cabo en por lo menos un filtro que esta colocado en lmea con el procedimiento de produccion de leche.
2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1, segun el cual la leche es una leche pasterizada o esterilizada.
3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, segun el cual dicha lactasa, despues de un almacenamiento durante por lo menos 15 dfas, de manera preferible durante 30 dfas, comprende menos que 10 g/kg de poli- y oligosacaridos.
4. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 3, segun el cual dicha solucion de lactasa es una solucion acuosa.
5. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 4, segun el cual dicha lactasa comprende ademas un disolvente estabilizador.
6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 5, segun el cual el disolvente estabilizador es sorbitol o glicerol.
7. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las precedentes reivindicaciones, segun el cual dicha lactasa comprende ademas un aditivo estabilizador.
8. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 7, en la que el aditivo se selecciona entre una lactosa hidrolizada, glucosa, manitol y unos tampones salinos.
9. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las precedentes reivindicaciones, segun el cual la lactasa esta contenida en una cantidad de desde 10 a 100.000 ULN/g.
10. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, segun el cual la lactasa se produce en una cepa de Kluyveromyces.
11. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las precedentes reivindicaciones, segun el cual el filtro usado en la esterilizacion en filtros es un filtro de membranas que tiene un tamano de poros de 0,22 pm.
12. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las precedentes reivindicaciones, segun el cual la lactasa se obtiene por medio de un metodo para producir una solucion de lactasa, que comprende separar los poli- y oligosacaridos, que estan presentes en una solucion de lactasa sin tratar, desde la solucion de lactasa y anadir de 10 a 70 % p/p de glicerol a la solucion de lactasa obtenida, segun el cual los poli- y oligosacaridos son separados con respecto de la lactasa por aplicacion de una etapa cromatografica y segun el cual se usa una resina intercambiadora de aniones o una resina intercambiadora de cationes o un medio de interaccion hidrofobica.