ES2557288T3

ES2557288T3 - Composiciones que contienen monoglicéridos de ácido orgánico de C1 a C7 y glicerol, su preparación y su uso como antibacterianos y agentes anti-moho

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Publication number: ES2557288T3
Application number: ES10719080.3T
Authority: ES
Inventors: Fernando Cantini
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2009-03-16
Filing date: 2010-03-16
Publication date: 2016-01-25
Anticipated expiration: 2030-03-16
Also published as: HRP20160091T1; WO2010106488A2; EP2410871A2; CN102340997B; PE20120646A1; RS54548B1; ME02350B; CL2011002276A1; CN102340997A; MY162647A; RU2011141840A; HUE026422T2; BRPI1006358A2; EP2410871B1; UA111464C2; PL2410871T3; IT1393045B1; SI2410871T1; DK2410871T3; ITFI20090050A1

Abstract

Composiciones que contienen monoglicéridos de ácido orgánico de C1 a C7 en porcentajes 10 % y 90 % en peso calculados sobre el peso total de la composición para su uso como composiciones antibacterianas y anti-moho para el tratamiento de animales caracterizadas por que dicha composición contiene glicerol en porcentajes entre 10 % y 90 % en peso calculados sobre el peso total de la composición.

Description

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Composiciones que contienen monogliceridos de acido organico de C1 a C7 y glicerol, su preparacion y su uso como antibacterianos y agentes anti-moho

Campo de la invencion

[0001] La presente invencion se refiere al campo de las composiciones para alimentos para animales.

Estado de la tecnica

[0002] El problema mas comun que se sabe que afecta a los animales de granja y de companfa es el dano causado por las infecciones bacterianas y micotoxinas producidas por mohos ingeridos con su alimentacion. En cuanto a las infecciones bacterianas y, en particular a las infecciones intestinales, estas a menudo se presentan con diarrea intensa que puede comprometer, incluso en un grado importante, la salud del animal y, por consiguiente, los ingresos de la granja como un todo.

[0003] En cuanto a las micotoxinas producidas por mohos, sus efectos toxicos sobre organos especfficos y sobre las funciones fisiologicas de los animales, y su capacidad para causar enfermedades tales como toxicosis, se conocen desde hace algunos anos. Tambien se sabe que las micotoxinas cancerfgenas, tales como aflatoxinas producidas por mohos de la cepa de Aspergillus, pueden transmitirse desde la leche de vaca o de cabra al ser humano debido a que son estables y no pueden eliminarse con los tratamientos de calor normales. La ocratoxina A es producida por especies de Aspergillus y Penicillium; si esta presente en la alimentacion, puede causar enfermedades renales graves en especies de cerdos y de aves.

[0004] La toxina T-2, producida por especies de Fusarium, puede causar necrosis del tracto digestivo de los animales.

[0005] Normalmente se trata de superar estos inconvenientes mediante el uso de acidos organicos de cadena corta, ya sea solos o en mezcla, tales como: acido formico (C1H2O2), acido acetico (C2H4O2), acido propionico (C3H5O2), acido lactico (C3H6O2), acido fumarico (C4H4O4), acido butfrico (C4H8O2), acido cftrico (C6H8O7) y acido benzoico (C7H6O2).

[0006] Entre las limitaciones del uso de dichos acidos organicos se encuentra su fuerte accion corrosiva que puede danar cualquier equipo con el que entran en contacto. Las formas salificadas con amonio, calcio, sodio o potasio tambien producen una accion corrosiva que, aunque mas limitada, no obstante esta presente.

[0007] Tambien hay ciertas restricciones fisiologicas a la accion de acidos organicos como tales o en forma salificada cuando se utilizan como agentes antibacterianos en las dietas de animales; a este respecto se sabe que los acidos organicos requieren un pH acido con el fin de realizar la accion antibacteriana real, porque en estas condiciones estan presentes en la forma no disociada RCOOH. Esta forma no disociada RCOOH pasa a traves de las paredes celulares de microorganismos y, una vez dentro, se disocia de acuerdo con el pH intracelular. Para mantener su pH intracelular del microorganismo expulsa H+; el nivel de acido organico disociado, por lo tanto, aumenta y, ya que no sale del microorganismo, lo mata.

[0008] En los intestinos, sin embargo, el pH es ligeramente basico (aproximadamente 7), por lo que la presencia de acido organico en forma no disociada es muy limitada, y, en consecuencia, la funcion antibacteriana es tambien muy limitada.

[0009] A la luz de lo anterior, por lo tanto, hay una necesidad evidente de desarrollar nuevas composiciones capaces de contrarrestar los efectos de los mohos y las bacterias presentes en los alimentos de origen animal, pero que no presenten los inconvenientes mencionados.

[0010] La tecnica de la microencapsulacion de acidos organicos con sustancias lipfdicas se desarrollo como un metodo para suministrar acido organico a los intestinos y disminuir el pH en los mismos, pero los resultados obtenidos son mas bien insatisfactorios debido a la accion de tamponamiento del bicarbonato de sodio producida por el pancreas como regulador intestinal del pH. Es mas, ademas de no ser muy eficaz, esta tecnologfa tambien es muy costosa.

[0011] La accion antibacteriana de ciertos monogliceridos de acido graso se ha investigado en una serie de estudios, por ejemplo:

1. J. Kabara, Dennis M. Swieczkowski, Anthony J, Conley, Joseph P. Truant 1972 FATTY ACIDS AND DERIVATES AS ANTIMICROBIAL AGENTS.

2. G. Bergsson, J. Arnfinnsson S. Karlsson, O. Steingrimsson, H. Thormar 1998. IN VITRO INACTIVATION OF CHLAMYDIA TRACHOMATIS BY FATTY ACIDS AND MONOGLYCERIDES.

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3. G. Bergsson, J. Arnfinnsson O. Steingrimsson, H. Thormar 2001. IN VITRO KILLING OF CANDIDA ALBICANS BY FATTY ACIDS AND MONOGLYCERIDES.

4. H. Thormar, H. Hilmarsson, G. Bergsson 2005. STABLE CONCENTRATED EMULSIONS OF THE 1- MONOGLYCERIDE OF CAPRIC ACID (MONOCAPRIN) WITH MICROBICIDAL ACTIVITIES AGAINST THE FOOD-BORNE BACTERIA CAMPYLOBACTER JEJUNI, SALMONELLA SPP AND ESHERICHIA COLI; PCT/IS2005/000026 "STABLE CONCENTRATED ANTI-BACTERIAL EMULSIONS OF MONOCAPRIN IN WATER".

5. Hilmarsson, H. Thormar, J. H. Thrainsson, E. Gunnarsson 2006 EFFECT OF GLYCEROL MONOCAPRATE (MONOCAPRIN) ON BROILER CHICKENS: AN ATTEMPT AT REDUCING INTESTINAL CAMPYLOBACTER INFECTION.

[0012] Estos estudios han puesto de relieve una direccion de investigacion prometedora, pero no exhaustiva. SU 701 631 describe la elevada potencia bactericida del monoglicerido de acidos propionicos y su actividad supresora de hongos.

[0013] Mauro Antongiovanni et al. " Effect of dietary butyric glycerides on immune response and Salmonella enteriditis in broiler chicks" en Proceedings of 16th European Symposium on poultry nutrition, 2007, XP002551416 Strasburg, Francia informa del efecto de modulacion inmune de los gliceridos butfricos sobre la inmunoglobulina serica y sobre la colonizacion por Salmonella enteritidis colonizacion; se describe el efecto neto de los gliceridos butfricos en el control de la infeccion por Salmonella.

[0014] Mauro Antongiovanni et al. "Butyric Acid glycerides in the diet of broiler chickens: effects on gut histology and carcass composition" en Ital. J. Anim. sci. Vol. 6, 19 - 25 (2007) describe los efectos de los acidos gliceridos butfricos como ingrediente complementario en la dieta sobre el rendimiento en vivo de pollos de engorde y sobre la morfologfa de su intestino delgado.

[0015] El documento CA 1 168 078 describe que monobutirina y monoproprionina se pueden utilizar en composiciones de alimentos de humedad intermedia, posiblemente con conservante habitual para prevenir el crecimiento de bacterias y mohos; no hay ninguna mencion de una premezcla de monobutirina o monoproprionina con glicerol antes de la aplicacion sobre los productos a tratar.

[0016] En la medida en que lo permiten los conocimientos actuales, no hay estudios que confirmen la accion especfficamente antibacteriana y anti-moho de composiciones de monogliceridos de acidos grasos de cadena corta combinados con glicerol.

Breve descripcion de las figuras

[0017]

La figura 1 es una suspension acuosa de una composicion de la invencion mostrada por microscopia electronica. La figura 2 muestra alimentos sin tratar inoculados con Fusarium.

La Figura 3 muestra alimentos inoculados con Fusarium y tratados con 0,7 % de monopropionina 43.

Sumario de la invencion

[0018] La presente invencion se refiere a composiciones que contienen monogliceridos de acidos grasos de C1 a C7 en porcentajes entre el 10 % y el 90 %, y glicerol entre 10 y 90 % en peso (calculado sobre el peso total de la composicion) como antibacterianos y agentes anti-moho que se anaden a cereales, piensos y a productos alimentarios en general y al agua de bebida destinados a la alimentacion de animales.

Descripcion detallada de la invencion

[0019] Sorprendentemente, se ha encontrado que las composiciones que contienen esteres de monogliceridos de acidos organicos de C 1 a C 7 combinados con glicerol tienen una fuerte potencia antibacteriana tanto a pH acido (4,5) como a pH neutro, como esta presente en los intestinos de los animales (es decir, pH 7).

[0020] En las composiciones de la invencion, los esteres de monogliceridos de acidos organicos como de han definido anteriormente estan presentes en cantidades entre 10 % y 90 % y el glicerol entre 10 y 90 % en peso (calculado sobre el peso total de la composicion); preferentemente dichas cantidades estan entre 40 % -90 %, y 10 % -60 %, respectivamente.

[0021] La expresion "acidos organicos de C1 a C7" de acuerdo con la invencion se refiere preferentemente a los siguientes acidos: acidos formico, acetico, propionico, lactico, butfrico, cftrico, fumarico y benzoico.

[0022] El acido butfrico y el acido propionico son particularmente preferidos.

[0023] Los ejemplos de las composiciones de acuerdo con la invencion son composiciones que consisten en:

(a)

(b)

ester monoglicerido de acido butfrico: 42 - - 47 %

ester diglicerido de acido butfrico: 5 - 8 %

ester triglicerido de acido butfrico: 0,5 - 2 %

glicerol: 45 - 50 %

ester monoglicerido de acido propionico: 45 - 50 %

ester diglicerido de acido propionico: 8 - 12 %

ester triglicerido de acido propionico: 1 - 3 %

glicerol: 36 - 40 %

5 Los ejemplos especfficos de las composiciones de acuerdo con la invencion son composiciones que consisten en:

(c): ester monoglicerido de acido butfrico 45 %

: ester diglicerido de acido butfrico 6 %

: ester triglicerido de acido butfrico 1 %

: glicerol 48 %

(d): monogliceridos de acido butfrico 43 %

: digliceridos de acido butfrico 6 %

: trigliceridos de acido butfrico 1 %

: glicerol 50 %

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(e): ester monoglicerido de acido propionico 49 %

: ester diglicerido de acido propionico 10 %

: ester triglicerido de acido propionico 2 %

: glicerol 39 %

(f): monogliceridos de acido propionico 43 %

: digliceridos de acido propionico 6 %

: trigliceridos de acido propionico 1 %

: glicerol 50 %

15 [0024] Los valores de potencia antibacteriana de acidos organicos solos comparados con los de las composiciones

de la invencion se dan a continuacion en la Tabla 1.

Tabla 1

PRODUCTO: CONC. USADA pH E. coli (ufc/ml) Salmonella typhimurium (ufc/ml) Campylobacter jejuni (ufc/ml)

Control positivo: 7 108x 105 120x10 431 x 10

Control positivo: 4,5 34 x 105 “96x10 001x10

Acido propionico: 1:909 7 54 x 104 01x10 03x10

Acido propionico: 1:909 4,5 13 x 104 “42x10 01x10

Acido butfrico: 1:1000 7 106x 104 “65x10 05x10

Acido butfrico: 1:1000 4,5 78 x 104 “25x10 0x10

Monopropionina 43: 1:109 7 110x 104 02x10 00x10

Monobutirina 43: 1:100 7 75 x 104 05x10 08x10

Monobutirina 43: 1:100 45 47 x 104 0x10 07x10

Nota: La monopropionina 43 se compone de: 43 % de monogliceridos de acido propionico 6 % de digliceridos de acido propionico 1 % de trigliceridos de acido propionico 50 % glicerol Nota: La monobutirina 43 se compone de: 43 % de monogliceridos de acido butfrico 6 % de digliceridos de acido butfrico 1 % de trigliceridos de acido butfrico 50 % glicerol

0025] La Tabla 2 compara la accion antibacteriana in vitro de acido butfrico puro, de monogliceridos de acido

20 butfrico sin glicerol libre y de una mezcla de monogliceridos de acido butfrico con glicerol libre, contra Clostridium

perfringens. Considerando que la mezcla de monogliceridos de acido butfrico y glicerol ya exhibe una potencia inhibidora (es decir, no hay crecimiento) en los tres duplicados a una concentracion de 1.000 ppm, los monogliceridos de acido butfrico no presentan ninguna potencia inhibidora frente a la bacteria, y el acido butfrico solamente exhibe accion inhibidora accion a partir de 3.000 ppm.

TABLA 2

Bacterias: Clostridium perfringens CP27

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

Tiempo de incubacion y aparicion de crecimiento; + para 24 h, ++ para 37 h y +++ para 96 h - 3 replicaciones para cada concentracion

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido butfrico Monobutirina 43 Monogliceridos de acido butfrico

: + 500 + + +

: + + + +

: + + + + +


: media


: 1000 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: media


: 1500 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: media

: 2000 2000 + + ausencia de crecimiento +



: + + ausencia de crecimiento +


: + + + + ausencia de crecimiento +


: media


: 2500 + + ausencia de crecimiento +



: + + ausencia de crecimiento +



: + + ausencia de crecimiento +


: media


: 3000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +


: media

: 4000 4000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +

Bacterias: Clostridium perfringens CP27

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido butfrico Monobutirina 43 Monogliceridos de acido butfrico



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +


: media

[0026] La Tabla 3 compara la accion antibacteriana in vitro de acido acetico puro, de monogliceridos de acido acetico sin glicerol libre y de una mezcla de monogliceridos de acido acetico con glicerol libre, contra Salmonella typhimurium porcina. Considerando que la mezcla de monogliceridos de acido acetico y glicerol (monoacetina 42) 5 exhibe una potencia inhibidora (es decir, no hay crecimiento) en los tres duplicados a una concentracion de 10.000 ppm, los monogliceridos de acido acetico presentan potencia inhibidora frente a la bacteria a partir de 25.000 ppm y el acido acetico exhibe accion inhibidora accion a partir de 20.000 ppm.

TABLA 3

Bacterias: Salmonella typhimurium porcina

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

Tiempo de incubacion y aparicion de crecimiento: + para 24 h, ++ para 37 h y +++ para 96 h - 3 replicaciones para cada concentracion

pH 6

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido acetico Monoacetina 42 Monogliceridos de acido acetico

: + 5000 + + +

: + + + +

: + + + + +


: Media


: 10000 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: Media


: 15000 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: Media


: 20000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +


: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +


: Media

Bacterias: Salmonella typhimurium porcina

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

pH 6

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido acetico Monoacetina 42 Monogliceridos de acido acetico


: 25000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media


: 30000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media


: 40000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media

Nota: La monoacetina 42 se compone de: 42 % de monogliceridos de acido acetico 7 % de digliceridos de acido acetico 1 % de trigliceridos de acido acetico 50 % de glicerol

[0027] La Tabla 4 compara la accion antibacteriana in vitro de acido formico puro, de monogliceridos de acido formico sin glicerol libre y de una mezcla de monogliceridos de acido formico con glicerol libre, contra Salmonella typhimurium porcina. Considerando que la mezcla de monogliceridos de acido formico y glicerol (monoformina 42) 5 exhibe una potencia inhibidora (es decir, no hay crecimiento) en los tres duplicados a una concentracion de 5.000 ppm, los monogliceridos de acido formico presentan potencia inhibidora frente a la bacteria a partir de 25.000 ppm y el acido formico exhibe accion inhibidora accion a partir de 15.000 ppm.

TABLA 4

Bacterias: Salmonella typhimurium porcina

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

pH 6

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido formico Monoformina 42 Monogliceridos de acido formico

+
+: 5000 + ausencia de crecimiento
+

+
+: + ausencia de crecimiento
+

: + + + ausencia de crecimiento +


: Media


: 10000 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: Media


: 15000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +


: Media

: 20000 20000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +



: ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento +


: Media


: Media


: Media

Bacterias: Salmonella typhimurium porcina

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

pH 6

Control: Control positivo

negativo: (CP) ppm Acido formico Monoformina 42 Monogliceridos de acido formico



: ausencia de ausencia de ausencia de crecimiento



: crecimiento crecimiento



: ausencia de ausencia de ausencia de crecimiento



: crecimiento crecimiento


: Media

Nota: La monoformina 42 se compone de: 42 % de monogliceridos de acido formico 7 % de digliceridos de acido formico 1 % de trigliceridos de acido formico

50 % de glicerol

[0028] La Tabla 5 compara la accion antibacteriana in vitro de acido fumarico puro, de monogliceridos de acido fumarico sin glicerol libre y de una mezcla de monogliceridos de acido fumarico con glicerol libre (Monofumarina 41) contra E. coli. Considerando que la mezcla de monogliceridos de acido fumarico y glicerol (monoformina 42) exhibe 5 una potencia inhibidora (es decir, no hay crecimiento) en los tres duplicados a una concentracion de 20.000 ppm, los monogliceridos de acido fumarico presentan potencia inhibidora frente a la bacteria a partir de 60.000 ppm y el acido fumarico exhibe accion inhibidora a partir de 90.000 ppm.

TABLA 5

Bacterias: E. coli

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

pH 5

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido fumarico Monofumarina 41 Monogliceridos de acido fumarico

: + 10000 + + +

: + + + +

: + + + + +


: Media

: 20000 20000 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: Media


: 40000 + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +



: + ausencia de crecimiento +


: Media

Bacterias: E. coli

Concentracion de inoculacion: 105

Medio: Infusion de cerebro corazon

pH 5

Control negativo: Control positivo (CP)

ppm: Acido fumarico Monofumarina 41 Monogliceridos de acido fumarico


: 60000 + + ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento



: + + ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento



: + + ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media

: 80000 80000 + + ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento



: + + ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento



: + + ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media


: 90000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media


: 100000 ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento ausencia de crecimiento


: Media

Nota: La monofumarina 41 se compone de: 41 % de monogliceridos de acido fumarico 8 % de digliceridos de acido fumarico 1 % de trigliceridos de acido fumarico 50 % de glicerol

[0029] Si se prefiere, las composiciones de la invencion tambien pueden contener principios activos de aceites esenciales (aldehfdo cinamico, timol, carvacrol) en porcentajes comprendidos entre 1 y 20 % (calculado en peso sobre el peso de la mezcla de otros componentes) como habitualmente se proporciona para tales productos para

5 alimentacion de animales, puesto que estos principios activos son solubles en lfpidos pero insolubles en glicerol.

[0030] Cabe senalar que cuando la composicion de la invencion se dispersa en agua, el glicerol rodea al propio monoglicerido para formar gotas que incorporan dicho monoglicerido, permaneciendo en suspension en agua (los otros principios activos anadidos opcionalmente se disuelven en el monoglicerido y tambien se incorporan dentro de

10 la gota de glicerol) (vease la figura 1).

[0031] Las composiciones de la invencion pueden prepararse de acuerdo con los procesos de esterificacion de acidos grasos habituales ampliamente descritos en la literatura, pero utilizando un gran exceso de glicerol (nunca menos de 200 % en peso sobre el peso de los acidos grasos utilizados) para obtener una gran cantidad de

15 monogliceridos con grandes cantidades de glicerol libre.

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[0032] Las composiciones de la invencion pueden anadirse a la alimentacion animal y / o a su agua de bebida en cantidades de 0,1 a 1,5 %, preferentemente de 0,3-0,6 % en peso calculado en peso del alimento o la bebida.

[0033] Las composiciones de la invencion estan particularmente indicadas para la dieta de cerdos, pollos, peces, ganado vacuno, ovejas y animales de companfa.

Ejemplo 1

[0034] La reaccion de esterificacion se lleva a cabo en lotes de 10.000 kg.

[0035] En un reactor se introducen 3.000 kg de acido butfrico y 7.000 kg de glicerol a temperatura ambiente.

[0036] La temperatura se aumenta a 140 °C, el acido butfrico que se evapora se recicla dentro del reactor por medio de un condensador de reflujo.

[0037] La elevacion posterior de la temperatura desde 140 a 170 °C debe ser muy lenta (durante aproximadamente 4 horas) y la temperatura del condensador de reflujo debe mantenerse a 120 °C con el fin de evaporar el agua derivada de la reaccion de esterificacion, mientras que el acido butfrico sigue reciclandose dentro del reactor.

[0038] En este punto, la temperatura se puede elevar a 180 °C (pero dejando la temperatura del condensador reflujo a 120 °C) y una vez se ha alcanzado esta temperatura se espera que la acidez de la mezcla alcance un valor de menos de 1 %.

[0039] Despues se aplica un vacfo para eliminar por destilacion cualquier acido butfrico sin reaccionar hasta que se alcance una acidez final de menos de 0,2 %.

[0040] La mezcla se descarga a traves de un refrigerador para llevarla a la temperatura ambiente.

[0041] De este modo se obtiene una mezcla que contiene 43 % de ester de monoglicerido, 6 % de ester de diglicerido, 1 % de ester de triglicerido y 50 % de glicerol.

[0042] Una vez que la reaccion de esterificacion se completa, el glicerol puede separarse si se desea mediante destilacion de los esteres de mono, di y trigliceridos obtenidos de este modo para llegar a una concentracion de monoglicerido del 90 %.

Ejemplo 2

[0043] Sesenta lechones DanBred de 5 semanas de edad fueron asignados a dos grupos de treinta lechones cada uno: A) - control, y B) tratados, divididos en 6 jaulas de diez animales cada una. Despues de los primeros 10 dfas de adaptacion en los recintos, se inoculo a todos los animales por via oral Salmonella typhimurium, aislada en el lnstituto Zooprofilattico de Forli (Italia) a partir de muestras fecales de cerdos infectados, con una dosis igual a 7 x 10 7 ufc.

[0044] Al dfa siguiente, algunos de los sujetos de cada jaula presentaron diarrea. Los sfntomas empeoraron y afectaron a todos los sujetos en los tres dfas siguientes tras la infeccion.

[0045] Se recogieron muestras fecales el tercer dfa despues de la infeccion; se encontro que el recuento de bacterias era igual a 165.000 ufc en el grupo control A) y 160.000 ufc en el grupo tratado B). El grupo B) del tercer dfa despues de la infeccion se trato con una mezcla compuesta por:

- Monogliceridos de acido butfrico = 45 %

- Digliceridos de acido butfrico = 6 %

- Trigliceridos de acido butfrico = 1 %

- Glicerol = 48 %

administrada en el agua de bebida a una dosis de 0,5 % durante tres dfas. El tercer dfa despues del tratamiento, las muestras fecales se recogieron de nuevo para analisis de recuento de bacterias. El grupo de control A) presento un numero medio de ufc de 160.000, mientras que en el grupo tratado B) el numero de ufc fue de 900. El uso de la mezcla de "esteres de acido butfrico y glicerol" en los porcentajes indicados redujo las ufc de Salmonella en 3 log 10, una administracion de 3 dfas. Este hecho confirma la eficacia bactericida de la mezcla.

Ejemplo 3

[0046] El presente ensayo de campo se llevo a cabo en una granja italiana con problemas de higiene tales como ileitis muy evidente causada por una infeccion por Lawsonia intracellularis, enteritis por Brachyspira Spp y enteritis

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45

necrotica causada por una infeccion por Treponema hyodysenteriae. 1.027 cerdos DanBred con un peso de aproximadamente 25 kg (de 71 dfas de edad) se dividieron en dos grupos: grupo control A) y grupo tratado B), compuestos por 511 y 516 animales, respectivamente.

[0047] Los dos grupos fueron alimentados con un pienso formulado de forma identica a excepcion de los siguientes componentes: el pienso del grupo de control tenia lincomicina anadida, 200 ppm, y doxiciclina, 250 ppm, durante los primeros 14 dfas del ensayo, y solo lincomicina durante el tiempo restante. El grupo B) tratado no recibio antibioticos en la alimentacion, solo una mezcla de "esteres de acido butirico y glicerol" compuesta de la siguiente manera:

- Monogliceridos de acido butirico = 45 %

- Digliceridos de acido butirico = 6 %

- Trigliceridos de acido butirico = 1 %

- Glicerol = 48 %

administrada en la alimentacion en una cantidad de 0,5 % para sustituir el 0,5 % de aceite de soja. El ensayo duro 63 dfas. Los resultados de eficiencia de crecimiento y de la alimentacion se resumen en la siguiente tabla.

Tabla

: Grupo A) - Control Grupo B) - Esteres de acido butirico y glicerol Delta

N° de animales: 511 516

Edad al inicio del ensayo (dfas): 71

Edad al final del ensayo (dfas): 134 134

Peso promedio al inicio del ensayo (kg): 25 25

Peso promedio al final del ensayo (kg): 62,13 63,61

N° de animales muertos: 5 2 -3

N° de animales rechazados: 3 2 -1

Aumento de peso promedio diario (kg): 0,59 0,61 + 0,02

Pienso total consumido (kg): 53,570 53,250 -320

Carne producida en kg: 19,340 20,200 +860

Indice de conversion del pienso: 2,76 2,64 -0,12

[0048] Aunque el analisis fecal del grupo de control A) mostro la presencia de Lawsonia, su presencia no se encontro en el grupo tratado B). Los episodios de diarrea tambien fueron muy reducidos en el grupo tratado B). Los parametros de crecimiento, el indice de conversion del pienso del grupo tratado B) fueron comparables, y con una tendencia mejor que en el grupo control A) cuya dieta contenfa los antibioticos mencionados La mezcla de "esteres de acido butirico y glicerol" permitio controlar las enfermedades indicadas, sin el uso de antibioticos. El ensayo ha demostrado el efecto antibacteriano de la mezcla de "esteres de acido butirico y glicerol" mezcla con la consiguiente mejora de la salud intestinal.

Ejemplo 4

Prueba de eficacia en Salmonella typhimurium en polios

Cepa de Salmonella

[0049] Para la prueba se uso una cepa de Salmonella typhimurium aislada e identificada en la seccion IZSLER de Forli.

Animales

[0050] Se utilizaron pollos SPF (libres de patogenos especfficos), 30 animales por prueba. Los pollos se incubaron en la seccion IZSLER de Forli. Los sujetos se introdujeron inmediatamente en unidades de aislamiento.

Dieta

[0051] Los animales recibieron agua de la red de suministro de agua y un pienso de iniciacion comercial ad libitum. El pienso contenfa monobutirina 43 anadida.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Protocolo experimental

[0052] Se prepararon 4 grupos de 30 sujetos cada uno. Las dietas diferfan en la diferente cantidad de Monobutirina 43 anadida al pienso desde el primer dfa de vida, y se identificaron del siguiente modo: grupo control sin tratar: 0 %, grupo 1: 1 % en el pienso, grupo 2: 0,3 % en el pienso. El grupo 3 recibio el mismo pienso que el grupo control hasta el dfa 14 de vida, es decir, hasta el 7° dfa tras la infeccion y solo recibio pienso suplementado con 1,4 % de monobutirina 43 tras ese dfa.

[0053] En mayores de 7 dfas, todos los sujetos fueron infectados por via esofagica con 107 ufc de Salmonella typhimurium. 24 horas despues de la infeccion, se tomaron hisopos de la cloaca de todos los sujetos para confirmar que la infeccion por Salmonella typhimurium habfa arraigado. A los 14, 24 y 35 dfas de vida, se sacrifico a 10 sujetos en cada grupo. Se recolectaron los ciegos de cada animal y se determino la carga de Salmonella typhimurium (expresada en ufc / g).

Pruebas de laboratorio

[0054] La ausencia de anticuerpos contra S. typhimurium se confirmo con una prueba de ELISA. Los hisopos cloacales se sembraron directamente sobre agar enterico Hektoen y se incubaron a 37 °C durante 24 horas. Un gramo del contenido intestinal se diluyo en 9 ml de lactato de Ringer y se sembro en agar enterico Hektoen (volumen del inoculo: 0,1 ml). El recuento de colonias se llevo a cabo despues de 24 horas de incubacion a 37 °C. Para cada coleccion, se calcularon las medias geometricas de las cargas bacterianas de los 10 sujetos sacrificados.

[0055] Se encontro que todos los sujetos, despues de un dfa de vida, eran seronegativos para Salmonella typhimurium. 24 horas despues de la infeccion, se encontro que todos los hisopos cloacales eran positivos para S. typhimurium. Los resultados de las cargas bacterianas de los ciegos determinadas se muestran en la siguiente tabla.

Tabla

UFC en el ciego de pollos infectados con Salmonella Typhimurium - 107

: Control Grupo 1 (1 % en el pienso) Grupo 2 (0,3 % en el pienso) Grupo 3 (1,4 % en el pienso desde el dfa 14 de vida)

Dfa de la infeccion (septimo dfa de vida): 0 0 0 0

Septimo dfa despues de la infeccion: 6.400.000 770.000 2.226.000 6.302.000 Inicio del tratamiento

17 dfa despues de la infeccion: 25.120.000 213.220 1.242.000 171.120

28 dfa despues de la infeccion: (alta mortalidad) >100 300 1.000

Ejemplo 5

Pruebas de sensibilidad in vitro frente a hongos filamentosos (mohos)

Materiales y metodos

[0056] Para la prueba se usaron cepas de Aspergillus spp, Penicillium spp y Fusarium spp aisladas e identificadas durante la actividad diagnostica en la seccion IZSLER de Forli de piensos completos usados en la industria avfcola. Para preparar el inoculo, se recogio el micelio de cultivos puros de las cepas analizadas utilizando un hisopo. El material recogido de este modo se disolvio en un caldo de cultivo (BHI - infusion de cerebro corazon). Se introdujeron 5 ml de la suspension fungica y una cantidad igual del producto que se va a analizar en contacto en un tubo de ensayo. El tubo de ensayo se incubo a 20 ± 4 °C durante 24 horas.

[0057] Despues de este perfodo de tiempo, la suspension fungica se sembro y se enumero. La suspension control se obtuvo introduciendo en un tubo de ensayo 5 ml de suspension de hongos + 5 ml de diluyente (lactato de Ringer). La lectura de las pruebas se llevo a cabo despues de un perfodo de incubacion de 5 dfas a 20 ± 4 °C.

[0058] Los resultados proporcionados en siguiente tabla se expresan como ufc / ml

Tabla

PRODUCTO: ASPERGILLUS spp. PENICILLIUM spp. FUSARIUM spp:

Control: 450000 97000 310000

Monopropionina 43: 20000 1500 90000

Monobutirina 43: 1000 700 3000

PRODUCTO: ASPERGILLUS spp. PENICILLIUM spp. FUSARIUM spp:

Acido propionico: 300 <100 300

Propionato amonico: 1000 100 500

Nota: La monopropionina 43 se compone de: 43 % de monogliceridos de acido propionico 12 % de digliceridos de acido propionico 1 % de trigliceridos de acido propionico 28 % de glicerol libre 16 % de H2O

Nota: La monobutirina 43 se compone de:

43 % de monogliceridos de acido butfrico 6 % de digliceridos de acido butfrico 1 % de trigliceridos de acido butfrico 50 % de glicerol

Ejemplo 6

Prueba de eficacia in vitro frente a PenicilLium spp y Fusarium spp

5

Materiales y metodos

[0059] Cepas: para la prueba se usaron cepas de mohos aisladas e identificadas por la seccion IZSLER en Forli. Las cepas se revitalizaron en caldo BHI, despues se enumeraron en agar OGYE (despues de incubar a 20 °C

10 durante 5 dfas)

[0060] Sustrato: se uso un pienso completo para pollos, esterilizado en un horno seco a 100 °C durante 4 horas.

[0061] Prueba de eficacia: en 10 g de pienso se inocularon 2 ml de suspension fungica (en agua destilada) a la 15 que se anadieron 70 pl del producto que se iba a analizar. La mezcla asf obtenida se mantuvo a temperatura

ambiente. Tambien se prepararon un control positivo (infectados y no tratados) y un control negativo (solo pienso + agua destilada). Los dfas 7 y 14 despues de la infeccion, se evaluaron las concentraciones de hongos en las muestras tratadas y las muestras control.

20 [0062] Los resultados se proporcionan en la siguiente tabla.

PRODUCTO: Concentracion de Fusarium spp. el dia 0 (ufc/g) Concentracion de Fusarium spp. 7 dias despues de la infeccion (ufc/g) Concentracion de Fusarium spp. 14 dias despues de la infeccion (ufc / g) Concentracion de Penicillium spp. el dia 0 (ufc/g) Concentracion de Penicillium spp. 7 dias despues de la infeccion (ufc / g)__ Concentracion de Penicillium spp. 14 dias despues de la infeccion (ufc / g)

Control positivo: 5.700.000 72.000.000 300.000.000 100.000 30.000.000 200.000.000

Control negativo: <100 <100 <100 <100 <100 <100

Monopropionina 43: 5.700.000 410.000 250.000 100.000 <100 <100

Nota: La monopropionina 43 se compone de: 43 % de monogliceridos de acido propionico 12 % de digliceridos de acido propionico 1 % de trigliceridos de acido propionico 28 % de glicerol libre

16 % de H20__________________________

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

1. Composiciones que contienen monogliceridos de acido organico de Ci a C7 en porcentajes 10 % y 90 % en peso calculados sobre el peso total de la composicion para su uso como composiciones antibacterianas y anti-moho para el tratamiento de animales caracterizadas por que dicha composicion contiene glicerol en porcentajes entre 10 % y 90 % en peso calculados sobre el peso total de la composicion.
2. Composiciones segun la reivindicacion 1, en las que dichas composiciones contienen monogliceridos de acido organico de C1 a C7 en porcentajes entre 40 %-90 % y glicerol en porcentajes entre 10 %-60 % en peso calculados sobre el peso total de la composicion.
3. Composiciones segun las reivindicaciones 1 y 2, en las que dichos acidos organicos se eligen de: acidos formico, acetico, propionico, lactico, butfrico, cftrico, fumarico y benzoico.
4. Composiciones segun la reivindicacion 3, en las que dichos acidos son acido butfrico y acido propionico.
5. Composiciones segun las reivindicaciones 1 - 4 que consisten en:

(a)

ester monoglicerido de acido butfrico ester diglicerido de acido butfrico ester triglicerido de acido butfrico glicerol

o

(b)

ester monoglicerido de acido propionico ester diglicerido de acido propionico ester triglicerido de acido propionico glicerol

o

(c)

ester monoglicerido de acido butfrico ester diglicerido de acido butfrico ester triglicerido de acido butfrico glicerol

o

(d)

monogliceridos de acido butfrico digliceridos de acido butfrico trigliceridos de acido butfrico glicerol

o

(e)

ester monoglicerido de acido propionico ester diglicerido de acido propionico ester triglicerido de acido propionico glicerol

o

(f)

monogliceridos de acido propionico digliceridos de acido propionico trigliceridos de acido propionico glicerol

en las que dichos porcentajes se expresan en peso.

42 - 47 % 5 - 8 % 0,5 - 2 % 45 - 50 %

45 - 50 % 8 - 12 %

1 - 3 %

36 - 40 %

45 % 6 %

1 % 48 %

43 % 6 %

1 % 50 %

49 % 10 % 2 % 39 %

43 % 6 %

1 % 50 %
6. Composiciones segun las reivindicaciones 1 - 5 que tambien contienen principios activos de aceites esenciales en porcentajes comprendidos entre 1 - 20 % (en peso).
7. Uso de composiciones segun las reivindicaciones 1 - 6 como composiciones antibacterianas y anti-moho para el tratamiento de cereales, piensos y productos alimentarios en general y el agua de bebida destinados a la

alimentacion de los animales.
8. Piensos o bebidas para animales, liquidos o solidos, que comprenden una composicion que contiene monogliceridos de acido organico de C1 a C7 en porcentajes 10 % y 90 % en peso calculados sobre el peso total de

5 la composicion para su uso como composiciones antibacterianas y anti-moho para el tratamiento de animales caracterizados por que dicha composicion contiene glicerol en porcentajes entre 10 % y 90 % en peso calculados sobre el peso total de la composicion.
9. Piensos o bebidas segun la reivindicacion 8, en los que dichas composiciones se anaden en una cantidad entre

10 0,1 y 1,5 %, preferentemente entre 0,3 y 0,5 % en peso sobre el peso total del pienso o la bebida.
10. Piensos segun las reivindicaciones 8 y 9, en los que dichos piensos son los usados para la alimentacion de cerdos, pollos, peces, ganado vacuno, ovejas y animales de companfa.