ES2553583T3 - Biomasa enriquecida en cinc, método para la preparación de la misma y productos probióticos, cosméticos, dietéticos y nutracéuticos que comprenden la misma - Google Patents

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Abstract

Método de preparación de una biomasa enriquecida en cinc, caracterizado porque dicha biomasa se obtiene i) cultivando microorganismos seleccionados del grupo que consiste en Streptococcus thermophilus ST 16 BM, depositado según el Tratado de Budapest en la DSMZ, Braunschweig, Alemania, con el número de registro DSM 19526 el 13 de julio de 2007, y Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM, depositado según el Tratado de Budapest en la DSMZ, Braunschweig, Alemania, con el número de registro DSM 17850 el 23 de diciembre de 2005, y combinaciones de los mismos, en un medio de cultivo nutriente que comprende una sal de cinc, de modo que dichos microorganismos acumulan cinc; y ii) separando los microorganismos enriquecidos en cinc del medio de cultivo.

Description

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DESCRIPCION
Biomasa enriquecida en cinc, metodo para la preparacion de la misma y productos probioticos, cosmeticos, dieteticos y nutraceuticos que comprenden la misma
La presente invencion se refiere a una biomasa enriquecida en cinc, a un metodo para la preparacion de la misma, asf como a productos alimenticios, probioticos, dieteticos, nutraceuticos y cosmeticos que comprenden la misma. La invencion se refiere ademas a cepas bacterianas adecuadas para usarse en el metodo de la invencion.
El cinc es un mineral esencial que esta presente en los organismos en cantidades superiores a las de cualquier otro oligoelemento, con la excepcion del hierro. Esta asociado a la absorcion normal de vitaminas y a su actividad, particularmente las vitaminas del complejo B. Es un elemento constituyente de un enorme numero de enzimas que desempenan un papel en la digestion y el metabolismo, incluyendo la anhidrasa carbonica, requeridas para la respiracion tisular. En el cuerpo humano, el cinc se encuentra especialmente en huesos, dientes, piel, hfgado, musculos y cabello. El cinc se absorbe rapidamente en la parte superior del intestino delgado. El cinc tambien se deposita por sf mismo en determinadas estructuras oculares, la prostata, los espermatozoides, la piel, el cabello, las unas y se encuentra tambien en los globulos blancos. Estos aportes no son facilmente utilizables, por tanto el alimento tiene que contener cantidades suficientes del mismo con el fin de satisfacer las necesidades del organismo. Es indispensable para el crecimiento corporal, la reparacion tisular y para una respuesta inmunitaria normal. Tambien es importante para la digestion de hidratos de carbono y para el metabolismo del fosforo. Participa en la smtesis de acido nucleico que controla la creacion de diversas protemas en celulas, es importante para la absorcion de vitaminas, es util en procesos de cicatrizacion e inhibe las lipasas saprofitas de bacterias, levaduras y la piel. Muchas enzimas necesitan cinc para activarse, lo que es necesario para la smtesis de protemas, para determinados aspectos de las funciones hormonales, para las funciones cerebrales, la vista y el gusto. Ademas, la enzima alcohol dehidrogenasa (implicada en la descomposicion del alcohol) contiene cinc, por lo que el alcohol produce una perdida de cinc. El cinc se usa para reducir las secreciones sebaceas, en procesos de cicatrizacion para heridas internas y externas (acelera la cicatrizacion de heridas), en terapias para el acne y la dermatitis seborreica. Este metal puede promover el crecimiento de nuevo del cabello en personas que padecen alopecia areata total y puede usarse en terapia contra la diabetes, gracias a sus efectos reguladores sobre la insulina de la sangre. Se ha encontrado que anadir cinc a la insulina prolonga el efecto de la hormona sobre los niveles de azucar en sangre.
La deficiencia de cinc produce graves trastornos en todos los seres vivos. Se sabe que determinados farmacos pueden inducir una deficiencia de cinc, entre ellos los anticuerpos anti-MAO (anti-monoaminooxidasa), corticosteroides, diureticos. La deficiencia de cinc puede producir retraso en el crecimiento, maduracion sexual retardada y tiempos mas largos para la cicatrizacion de heridas. La deficiencia de cinc tambien puede conducir a aterosclerosis y aumento en la propension a infecciones. Las estnas y las manchas blancas en las unas pueden ser smtomas de deficiencia de cinc. Otros smtomas de la deficiencia de cinc son unas y cabello fragiles, falta de pigmento del cabello, ciclos menstruales irregulares en chicas adolescentes, impotencia en hombres jovenes y dolores en articulaciones de rodilla y cadera en adolescentes. La disminucion de cinc cronica puede incluso predisponer a las celulas del cuerpo a cancer. Incluso pequenas deficiencias de cinc son perjudiciales para el organismo, por ejemplo, pueden determinar una reduccion en la concentracion de espermatozoides e impotencia. Ademas, la deficiencia de cinc produce fatiga, probabilidades superiores de contraer infecciones o experimentar heridas, y agilidad mental reducida. De hecho, la deficiencia de cinc obstaculiza la produccion de energfa, la smtesis de protemas, la formacion de colageno y la tolerancia al alcohol.
En la tecnica anterior se describen composiciones alimenticias o dieteticas que contienen cinc en combinacion con agentes probioticos.
Por ejemplo, la solicitud de patente estadounidense 20070009502 A describe composiciones nutricionales para alimentacion animal, disenadas para la mejora o el mantenimiento de la microflora gastrointestinal, que comprenden agentes probioticos (tales como levaduras y/o bacterias, por ejemplo Bifidobacterium, Enterococcus o Lactobacillus), agentes prebioticos, glutamina o sus analogos, glucosa, glicina, electrolitos, vitaminas y minerales, incluyendo mineral cinc (100-200 mg/kg).
La solicitud de patente WO 2006/112998 describe un complemento nutricional lfquido que va a usarse en combinacion con leche humana, disenado para promover el crecimiento de bebes lactantes que padecen retraso en el crecimiento, que comprende numerosos componentes, entre ellos probioticos (tales como Lactobacillus y/o Bifidobacterium) y minerales, incluyendo cinc.
La solicitud de patente CA 2525342 A describe una preparacion alimenticia probiotica de amplio espectro util en complementos alimenticios, por ejemplo para mejorar la respuesta inmunitaria frente a enfermedades, que comprende cepas bacterianas espedficas de Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei sbp. pseudoplantarum, Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus casei, en combinacion con componentes auxiliares, ligadores y componentes vigorizantes adicionales, incluyendo cinc.
El documento WO 92/21749 A se refiere a un aditivo rico en oligoelementos, a un metodo para preparar el mismo, a
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la preparacion en la que se incluye el aditivo y al uso del mismo. El documento RU 2002 117254 A divulga la preparacion de un complejo.
Los documentos de la tecnica anterior citados anteriormente describen composiciones adecuadas para el suministro de cinc dentro del cuerpo humano o animal, en las que el cinc esta en forma de cinc inorganico y esta en combinacion con muchos otros componentes, incluyendo microorganismos probioticos.
Estas composiciones tienen la desventaja de que contienen cinc exclusivamente en forma inorganica, que es mas diffcil de absorber por el cuerpo humano que el cinc organico.
Los inventores han encontrado ahora que determinadas especies bacterianas que pertenecen a los generos Bifidobacterium y Streptococcus, especialmente las cepas Bifidobacterium animalis Subsp. lactis BBIBM y Streptococcus thermophilus ST 16 BM, cuando se hacen crecer en un medio de cultivo que contiene cinc inorganico, muestran la capacidad inesperada y ventajosa de acumular cantidades extremadamente altas de cinc dentro de la celula, sin que tales altas cantidades de cinc intracelular sean perjudiciales para la supervivencia de la propia biomasa. Tal capacidad para acumular cinc de manera intracelular hace que las especies bacterianas mencionadas anteriormente sean particularmente adecuadas para su uso como medios de suministro de cinc dentro del cuerpo humano o animal, particularmente utiles para la fabricacion de productos probioticos que, por definicion, deben contener una biomasa viva. La biomasa enriquecida en cinc de la invencion tambien puede usarse en aplicaciones cosmeticas, especialmente para la fabricacion de productos cosmeticos o cosmeceuticos. Para la fabricacion de productos cosmeticos, es necesario que la biomasa este constituida por microorganismos muertos, mientras que para la fabricacion de productos cosmeceuticos, es necesario que la biomasa este constituida por microorganismos vivos.
Por tanto, un objeto de la invencion es un metodo para la fabricacion de una biomasa enriquecida en cinc, caracterizado porque la biomasa se obtiene
(i) cultivando microorganismos seleccionados del grupo que consiste en Bifidobacterium animalis Subsp. lactis BBIBm, Streptococcus thermophilus ST 16 BM y combinaciones de los mismos, en un medio de cultivo nutriente que comprende una sal de cinc, de modo que dichos microorganismos acumulan cinc a nivel intracelular; y
(ii) separando los microorganismos enriquecidos en cinc del medio de cultivo.
Mediante el metodo de la invencion se logra una biomasa que comprende microorganismos vivos que contienen una alta cantidad de cinc acumulada dentro de las celulas, tal como resulta evidente a partir de los estudios notificados a continuacion en el presente documento.
El metodo para la fabricacion de la biomasa enriquecida en cinc de la invencion proporciona una primera etapa de fermentacion, en la que los microorganismos seleccionados de Bifidobacterium animalis Subsp. lactis BB1BM y Streptococcus thermophilus ST 16 BM se cultivan en un medio nutriente adecuado para hacer crecer microorganismos de los generos Bifidobacterium y Streptococcus complementado con una sal de cinc, preferiblemente sulfato de cinc (ZnSO4). El medio nutriente es preferiblemente un medio lfquido que contiene fuentes de carbono, por ejemplo glucosa y/o lactosa; fuentes de nitrogeno, por ejemplo peptonas, hidrolizados de casema, extractos de levadura; sales inorganicas; fuentes de vitaminas y microelementos.
La concentracion de la sal de cinc en el medio de cultivo es preferiblemente de entre 5 y 50 mM, incluso mas preferiblemente de entre 10 y 40 mM.
Se prefiere sulfato de cinc.
La fermentacion se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura de entre 25°C y 48°C, mas preferiblemente de entre 35°C y 45°C. El valor de pH del medio lfquido es preferiblemente de entre 2,5 y 8,0, mas preferiblemente de entre 3,5 y 7,5. La duracion del tiempo de fermentacion es preferiblemente de entre 6 y 40 horas, mas preferiblemente de entre 8 y 36 horas. La fermentacion puede llevarse a cabo en condiciones aerobias, microaerobias y/o anaerobias. Tras la etapa de fermentacion, durante la que se produce el crecimiento de biomasa y la acumulacion de cinc dentro de las celulas bacterianas, la biomasa obtenida se separa del medio de cultivo mediante cualquier metodo conocido per se adecuado, por ejemplo mediante centrifugacion o microfiltracion, de tal forma que no se compromete la viabilidad celular. Por tanto, el metodo de la invencion permite que se obtenga una biomasa de microorganismos enriquecida en cinc que comprende microorganismos vivos. Si se desea, la biomasa obtenida puede someterse entonces a liofilizacion, secado, microencapsulacion y/o congelacion, llevados a cabo segun procedimientos convencionales.
Los presentes inventores tambien han seleccionado dos cepas de microorganismos de las especies Streptococcus thermophilus y Bifidobacterium animalis, que estan dotadas particularmente de una capacidad particularmente alta para acumular cinc dentro de la celula. Tales cepas se han designado Streptococcus thermophilus ST 16 BM y Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM y se han depositado en la DSMZ (Deutsche Sammlung fur
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Mikroorganismen und Zellkulturen (Coleccion Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares), Braunschweig, Alemania), segun el Tratado de Budapest, como Streptococcus thermophilus ST 16 BM depositada el 13 de julio de 2007, con el numero de registro DSM 19526, y Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM depositada el 23 de diciembre de 2005, con el numero de registro DSM 17850, respectivamente.
Tal como se describio anteriormente, la biomasa enriquecida en cinc que puede lograrse mediante el metodo de la invencion es particularmente adecuada para su uso como agente probiotico, porque contiene altas concentraciones de cinc en forma organica.
Para este fin, la biomasa que comprende microorganismos visos, y por tanto que tiene actividad probiotica, puede prepararse de diferentes formas. Por ejemplo, puede anadirse a un producto alimenticio, preferiblemente a leche o a un producto lacteo tal como yogur, con el fin de obtener una preparacion alimenticia que tiene actividad probiotica. Alternativamente, puede usarse para la fabricacion de una composicion que tiene actividad probiotica, tal como por ejemplo un complemento alimenticio, un producto dietetico, un alimento funcional, o para la fabricacion de una preparacion no alimenticia para administracion oral, tal como por ejemplo un producto nutraceutico, en combinacion con vehfculos y/o excipientes adecuados. Para este fin, la biomasa se usa preferiblemente en forma de una composicion liofilizada o secada como tal y/o de una composicion microencapsulada.
La carga bacteriana del producto liofilizado o secado que va a usarse posteriormente en la composicion que tiene actividad probiotica es de al menos de 1010 -1011 UFC/g de producto.
Para la fabricacion del producto liofilizado o secado, se suspende la biomasa humeda en un medio lfquido, por ejemplo agua o una disolucion fisiologica esteril, con la inclusion de agentes protectores tales como por ejemplo leche desnatada, lactosa, glucosa, extracto de levadura, almidon de patata, glutamato de sodio, inositol, citrato de sodio, gelatina, maltodextrina, estearato de magnesio, acido ascorbico, acido estearico y combinaciones de los mismos.
El producto liofilizado o secado se diluye entonces para la fabricacion de probioticos con sustancias inertes seleccionadas por ejemplo de las indicadas anteriormente para la liofilizacion, tal como para obtener una carga bacteriana preferiblemente de al menos 109 UFC/g de producto. El producto liofilizado puede microencapsularse con el fin de aumentar la estabilidad a temperatura ambiente (18-24 meses).
Para la fabricacion de un producto en el que la biomasa debe estar muerta (por ejemplo, un producto cosmetico o algunos productos alimenticos, tales como productos de panadena), la biomasa enriquecida en cinc que puede lograrse mediante metodo de la invencion se somete a metodos conocidos per se, tales como secado, para obtener celulas muertas.
La siguiente seccion experimental se proporciona exclusivamente a modo de ilustracion y no se pretende que limite el alcance de la invencion tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.
Pruebas de captacion de cinc intracelular
Con el fin de comparar el contenido en cinc intracelular total y estimar la capacidad de acumulacion del metal a nivel citoplasmatico o de membrana, se llevo a cabo un examen de cepas de microorganismos probioticos crecidas en medios con o sin sulfato de cinc.
Se inocularon cultivos de Bifidobacterium almacenados en infusion de MRS en MRS lfquido y se incubaron de manera anaerobia a 37°C. Tras un periodo de crecimiento de 24 horas, se inocularon 120 ml (el 10% v/v) de MRS lfquido solo y 120 ml (el 10% v/v) de MRS lfquido complementado con ZnSO4 10 mM, respectivamente. Se incubaron estos cultivos en condiciones anaerobias a 37°C durante 48 horas. Se siguio el mismo procedimiento experimental para establecer pruebas de captacion intracelular en Streptococcus. En este caso, se uso un medio M17 lfquido y se incubaron los cultivos en condiciones anaerobias a 42°C durante 48 horas.
Al final del crecimiento, habiendo mantenido una pequena alfcuota para la determinacion del peso en seco, se procedio a separar la biomasa del medio de cultivo mediante centrifugacion y a mineralizar la biomasa recogida.
Mineralizacion de la biomasa
Con el fin de determinar el cinc intracelular total, se alteraron completamente las celulas bacterianas y entonces se mineralizo la biomasa segun el protocolo notificado a continuacion en el presente documento.
Se centrifugaron durante 30 minutos cien ml de cultivos crecidos a 4500 rpm (en una centnfuga enfriada hasta 4°C, centnfuga Beckman GS-15R) para recoger las celulas. Entonces se lavo el sedimento 4 veces, cada vez con 140 ml de agua destilada, con el fin de eliminar el cinc residual del sobrenadante. El cuarto lavado con agua se retuvo para analizar su contenido en cinc mediante la tecnica de ICP.
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Se mineralizo la biomasa resuspendiendo el sedimento en una razon de 1:1 (p/v) con una disolucion de acido mtrico HNO3. Durante la optimizacion del procedimiento de mineralizacion, con el fin de lograr la recuperacion total del cinc intracelular, se usaron concentraciones crecientes de disoluciones de acido nftrico, del 0,65%, el 6,5% y el 20%, respectivamente.
Se transfirio cada suspension celular asf obtenida a tubos con tapa de rosca y se almacenaron a -20°C durante al menos 2 horas. Entonces se descongelaron los tubos con tapa de rosca en un bano con termostato a 100°C durante 30 minutos bajo una campana qmmica: para evitar la evaporacion y presion excesivas dentro de los tubos, se sellaron estos con tapones dotados de una aguja de vado. Se enfriaron las disoluciones a temperatura ambiente, permitiendo que se desprendieran los vapores de la reaccion. Al final del procedimiento de mineralizacion, se centrifugaron las suspensiones celulares a 13000 rpm durante 30 minutos a 4°C con el fin de recoger el extracto mineralizado y de eliminar los desechos celulares.
Analisis de cinc total mediante ICP
Para el analisis mediante ICP, se acidificaron las muestras al 2% con HNO3 concentrado al 65% y luego se diluyeron con agua bidestilada hasta un volumen final de 5 ml. Estas operaciones se realizaron bajo una campana qmmica. Se filtraron las disoluciones asf obtenidas mediante el uso de filtros de acetato de celulosa de 0,8 |im (Millex-AA, Millipore) hasta que fueron completamente transparentes.
Se llevo a cabo la cuantificacion del cinc intracelular acumulado por las cepas en examen mediante la tecnica de ICP - AES (OES - OPTIMA 4200 DV, Perkin Elmer).
El sistema usa frecuencias de 40 MHz. La inyeccion de plasma esta automatizada y controlada por un sistema electronico conectado a un ordenador.
El argon usado debe ser puro al 99,99% y su flujo debe estar siempre en un intervalo de desde 0 hasta 20 litros/minuto, con aumentos variables de 1 litro/minuto. El flujo de muestra nebulizada debe producirse dentro de valores de flujo masico de desde 0 hasta 0,01 litros/minuto, con aumentos variables de 1 litro/minuto.
El nebulizador esta compuesto por materiales resistentes a la corrosion, por lo que el sistema puede resistir disoluciones con concentraciones de HCl, HNO3, H2SO4, H3PO4 del 50% (v/v), concentraciones de NaOH del 30% (v/v) y concentraciones de HF del 20% (v/v).
El espectrofotometro consiste en un policromador que se encuentra en un compartimento con termostato a 38°C. El metodo de deteccion usado es CCD y la lectura se realiza en el campo UV.
Parametros del analisis usados:
Resolucion: alta
Flujo de gas de purga: normal
Tiempo de retardo de lectura (s): 45
Repeticiones: 3
Tiempo de lectura: auto
Tiempo m^n.: 1.000 s - Tiempo max.: 10.000 s
Retardo de equilibrado de fuente: 15 s
Tipo de aerosol de plasma: humedo
Condiciones de puesta en marcha del nebulizador: instantanea
Con el fin de obtener la concentracion de cinc desconocida, se uso una lmea de calibracion construida con las siguientes disoluciones patron al 2% acidificadas con HNO3: 0,5 ppm, 1 ppm, 2 ppm y 10 ppm de cinc.
El cinc celular total se expresa en mg de metal por gramo de biomasa seca.
La concentracion intracelular total del metal acumulado se definio mediante la tecnica de ICP-AES descrita anteriormente acidificando las muestras obtenidas al 2% con HNO3.
La figura 1 notifica las concentraciones de cinc intracelular (expresadas como mg de cinc intracelular por gramo de peso celular seco) medidas en pruebas de captacion llevadas a cabo en cepas de diferentes especies de Bifidobacterium. Espedficamente, las pruebas se realizaron en cepas de B. infantis, B. breve, B. bifidum, B. animalis, B. longum. Todas las cepas analizadas muestran una concentracion de cinc intracelular muy baja, con valores que se encuentran entre 0,01 y 0,20 mg/gow, cuando se hacen crecer en medio MRS libre de cinc. La adicion al medio de cultivo MRS de sulfato de cinc 10 mM induce un aumento en la concentracion de cinc intracelular. Sin embargo, tal como puede observarse a partir de la figura 1, las concentraciones del metal internalizado son bastante bajas y se encuentran entre 0,72 mg/gow y 2,12 mg/gow en las cepas de todas las especies, excepto en la cepa Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM (numero de registro DSM 17850; fecha
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de presentacion 23 de diciembre de 2005) en la que la concentracion de cinc intracelular aumenta hasta 53,32 mg/gDW (un aumento de hasta 1.000 veces la concentracion basal).
Tal como puede observarse a partir de la figura 2, se han logrado valores de cinc intracelular comparables con la cepa Streptococcus thermophilus ST 16 BM (numero de registro DSM 19526; fecha de presentacion 13 de julio de 2007) crecida en medio M17 enriquecido con sulfato de cinc 10 mM cinc (concentracion de cinc intracelular =
59.31 mg/gDw) (serie 1). La figura 2 muestra ademas que las cepas que pertenecen a otras especies de Streptococcus, tales como S. salivarius, S. faecium y S. lactis, demuestran una capacidad mucho mas baja para acumular cinc intracelular cuando se hacen crecer en el mismo medio. Ademas, la figura muestra la comparacion con las concentraciones de cinc intracelular detectadas cuando las cepas se hacen crecer en el mismo medio M17 sin sulfato de cinc anadido (series 2).
Ejemplo 1
Se esterilizaron 200 ml de medio M17 (Merck), al que se ha anadido sulfato de cinc 10 mM, en un frasco de 500 ml. Se inoculo un cultivo de siembra de Streptococcus thermophilus ST 16 BM (numero de registro DSM 19526; fecha de presentacion 13 de julio de 2007), crecido previamente durante 24 horas a 42°C en condiciones anaerobias, en el frasco en la cantidad del 10% (v/v). Entonces se dejo crecer el cultivo durante 40 horas a 42°C en condiciones anaerobias. Se obtuvieron 2,73 x 109 UFC/ml al final del cultivo. Se recogio la biomasa mediante centrifugacion y se trato y se analizo segun los metodos descritos anteriormente. El cinc total acumulado por las celulas fue de
59.31 mg/gow. D.W. = peso seco.
Ejemplo 2
Igual que en el ejemplo 1, usando medio SBF31 + Zn2+ 15 mM esterilizado por separado por filtracion. Medio SBF31: triptona 23 g/l; peptona de soja 16 g/l; extracto de levadura 12 g/l; MgSO4 0,25 g/l; K2HPO4 2,5 g/l; acido ascorbico 0,5 g/l; glucosa 45 g/l; diglicerofosfato de Na 19 g/l.
Tiempo de fermentacion: 21 horas; produccion de celulas vivas: 5,3 x 1010 UFC/ml; cinc acumulado: 51,67 mg/gow. Ejemplo 3
Igual que en el ejemplo 1, usando medio SBF32 + Zn2+ 30 mM esterilizado por separado por filtracion. Tras 21 horas, se obtuvieron 2,1 g/litro de biomasa seca que tema una viabilidad de 3,15 x 1010 UFC/ml; cinc acumulado: 63,42 mg/gow. Medio SBF32: triptona 23 g/l; peptona de soja 16 g/l; extracto de levadura 12 g/l; MgSO4 0,25 g/l; K2HPO4 2,5 g/l; acido ascorbico 0,5 g/l; lactosa 45 g/l; glicerina 19 g/l.
Ejemplo 4
Se inocularon 71 ml de medio M17, al que se habfa anadido sulfato de cinc 10 mM (esterilizado por separado por filtracion) con 500 ml de lfquido de cultivo de siembra del mismo medio M17 + sulfato de cinc 10 mM en el que se habfa hecho crecer previamente Streptococcus thermophilus ST 16 BM (numero de registro DSM 19526; fecha de presentacion 13.7.2007) durante 24 horas a 42°C en condiciones anaerobias. Condiciones del fermentador: 150 rpm; 0,5 l de aire/l/min; temperatura: 42°C; pH ajustado a 4,8 (+ 0,2) con NaOH al 10%; tiempo de fermentacion: 21 horas. Se obtuvieron 2,75 x 1010 UFC/ml. El cinc total acumulado por las celulas fue de 57,2 mg/gow.
Ejemplo 5
Igual que en el ejemplo 4, pero se realizaron dos adiciones de Zn2+ 15 mM durante la fermentacion a log12 y log18. Tiempo de fermentacion: 24 horas. Viabilidad celular al final de la fermentacion: 2,25 x 1010 UFC/ml. El cinc total acumulado por las celulas fue de 91,3 mg/gow.
Ejemplo 6
Se mantuvieron 300 ml de medio MRS (Merck) + cistema, esterilizado a 120°C durante 30 minutos, al que se habfa anadido sulfato de cinc 10 mM esterilizado con filtro, en reduccion previa durante no menos de 24 horas en entorno aerobio. Se inoculo un lfquido de cultivo de siembra de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM (numero de registro oSM 17850; fecha de presentacion 23 de diciembre de 2005), crecido previamente durante 24 horas en el mismo medio en condiciones anaerobias a 37°C, en los 300 ml mencionados anteriormente al 10% (v/v) y se hizo crecer en condiciones anaerobias durante 24 horas a 37°C. Se obtuvieron 1 x 1011 UFC/ml al final del cultivo. El cinc total acumulado por las celulas fue de 53,32 mg/gow.
Ejemplo 7
Se preparo un fermentador anaerobio de 15 litros equipado con una placa de agitacion en lugar del eje con 10 litros de medio y en las mismas condiciones que en el ejemplo 6. Se ajusto el sulfato de cinc a 15 mM. Se inoculo el
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fermentador con el 10% v/v de un Ifquido de cultivo de siembra de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM (numero de registro DSM 17850; fecha de presentacion 23 de diciembre de 2005) de 24 horas y se incubo a 37°C durante 24 horas. La cantidad de celulas vivas fue de 1 x 1011 UFC/ml. El cinc total acumulado por las celulas fue de 67,1 mg/gDw.
Ejemplo 8
Se esterilizaron 90 ml de medio MRS que contema cistema al 0,05%, al que se habfa anadido sulfato de Zn 10 mM, en un frasco de 100 ml. Se inoculo un cultivo de siembra de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM, crecido previamente durante 24 horas a 37°C en condiciones anaerobias en el mismo medio, en el frasco en la cantidad del 10% v/v. Entonces se dejo crecer el cultivo durante 40 horas a 37°C en condiciones anaerobias. Se obtuvieron 3,12 x 109 UFC/ml al final del cultivo. Se recogio la biomasa mediante centrifugacion y se trato y se analizo segun el metodo dado a conocer. El Zn total acumulado por las celulas fue de 54,36 mg/g p.s.
Ejemplo 9
Se formularon 90 ml de medio basal mmimo (en gramos por litro) tal como sigue: Casaminoacidos (Difco Laboratories, Sparks, Md.), 15; base de nitrogeno de levadura (Difco Laboratories), 6,7; acido ascorbico, 10; acetato de sodio, 10; (NH4)2SO4, 5; urea, 2; MgSO4'7H2O, 0,2; Fe-SO4'7H2O, 0,01; MnSO4'7H2O, 0,007; NaCl, 0,01; Tween 80, 1; cistema, 0,5 (pH ajustado a 7,0 y esterilizado en autoclave durante 30 minutos a 110°C). Se esterilizo en autoclave por separado uno de los siguientes hidratos de carbono (glucosa, fructo-oligosacaridos, inulina, rafinosa, lactosa, galacto-oligosasacaridos, fructosa, galactosa o xilo-oligosacaridos) y se anadio al medio basal con el fin de lograr una concentracion de 10 g/l. Se anadio adicionalmente sulfato de Zn 10 mM. Se inoculo un cultivo de siembra de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM, crecido previamente durante 24 horas a 37°C en condiciones anaerobias en el mismo medio, en el frasco en la cantidad del 10% v/v. Entonces se dejo crecer el cultivo durante 40 horas a 37°C en condiciones anaerobias. Se obtuvieron concentraciones de biomasa en el intervalo de desde 1,5 x 108 UFC/ml hasta 3,2 x 109 UFC/ml al final del cultivo. Se recogio la biomasa mediante centrifugacion y se trato y se analizo segun el metodo descrito. El cinc total acumulado en las celulas estaba en el intervalo de desde 48,12 hasta 54,37 mg/g p.s.
Ejemplo 10
Se esterilizaron 2 litros de medio MRS que contema cistema al 0,05% y al que se anadio sulfato de Zn 10 mM, en un biorreactor de 3,6 litros y se inocularon al 10% con un cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM crecido durante 24 horas en el mismo medio. Se esterilizo el biorreactor in situ y se presurizo con nitrogeno. Las condiciones del procedimiento fueron: insuflacion de nitrogeno constante a 0,01, 150 rpm, 37°C, pH mantenido a 6,2 con NaOH 0,1 M. Tras 48 horas, la biomasa tema una a concentracion de 3,6 x 109 UFC/ml. Se recogio la biomasa y se analizo para determinar la cantidad de cinc. El cinc total acumulado en las celulas fue de 53,81 mg/g p.s.
Ejemplo 11
Se esterilizaron 2 litros de medio MRS que contema cistema al 0,05% en un biorreactor de 3,6 litros y se inocularon al 10% con un cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM crecido durante 24 horas en el mismo medio. Se esterilizo el biorreactor in situ y se presurizo con nitrogeno. Las condiciones del procedimiento fueron: insuflacion de nitrogeno constante a 0,01, 150 rpm, 37°C, pH mantenido a 6,2 con NaOH 0,1 M. Tas un periodo de crecimiento de 24 horas, se anadio sulfato de Zn al cultivo con el fin de lograr una concentracion final de 10 mM. 24 horas desde la adicion del metal, la biomasa tema una concentracion de 3,6 x 109 UFC/ml. Se recogio la biomasa y se analizo para determinar la cantidad de cinc. El cinc total acumulado en las celulas fue de 53,81 mg/g p.s.
Ejemplo 12
Se esterilizaron 10 litros de medio MRS que contema cistema 0,05% con una adicion de sulfato de Zn 10 mM, en un biorreactor de 3,6 litros y se inocularon al 10% con un cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM crecido durante 24 horas en el mismo medio. Se esterilizo el biorreactor in situ y se presurizo con nitrogeno. Las condiciones del procedimiento fueron: insuflacion de nitrogeno constante a 0,01, 150 rpm, 37°C, pH mantenido a 6,2 con NaOH 0,1 M. Una vez que el cultivo habfa terminado la acidificacion, tal como se indica por la terminacion de la atraccion de NaOH, se suministro al cultivo en modo semicontinuo disolucion de sulfato de Zn 10 mM y glucosa al 30%. Una vez alcanzado un volumen de 15 litros, la biomasa tema una concentracion de 1,2 x 1010 UFC/ml y se recogio y se analizo para determinar la cantidad de cinc. El cinc total acumulado en las celulas fue de 52,15 mg/g p.s.

Claims (19)

  1. 5
    10
    15 2.
  2. 3.
    20 4.
  3. 5. 25
  4. 6.
    30
  5. 7.
  6. 8.
    35
  7. 9. 40
  8. 10.
  9. 11.
    45
  10. 12.
  11. 13. 50
  12. 14.
  13. 15.
    55
  14. 16.
    60 17.
  15. 18.
  16. 19.
    REIVINDICACIONES
    Metodo de preparacion de una biomasa enriquecida en cinc, caracterizado porque dicha biomasa se obtiene
    i) cultivando microorganismos seleccionados del grupo que consiste en Streptococcus thermophilus ST 16 BM, depositado segun el Tratado de Budapest en la DSMZ, Braunschweig, Alemania, con el numero de registro DSM 19526 el 13 de julio de 2007, y Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM, depositado segun el Tratado de Budapest en la DSMZ, Braunschweig, Alemania, con el numero de registro DSM 17850 el 23 de diciembre de 2005, y combinaciones de los mismos, en un medio de cultivo nutriente que comprende una sal de cinc, de modo que dichos microorganismos acumulan cinc; y
    ii) separando los microorganismos enriquecidos en cinc del medio de cultivo.
    Metodo segun la reivindicacion 1, en el que los microorganismos separados del medio de cultivo se someten a liofilizacion, secado, microencapsulacion y/o congelacion.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que la sal de cinc es sulfato de cinc.
    Metodo segun la reivindicacion 3, en el que el medio de cultivo nutriente comprende una cantidad de sulfato de cinc en el intervalo de desde 5 hasta 50 mM, preferiblemente desde 10 hasta 40 mM.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el medio de cultivo es un medio lfquido.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el medio de cultivo comprende los nutrientes convencionales para el crecimiento de dichos microorganismos, seleccionados del grupo que consiste en sales inorganicas, fuentes de carbono, nitrogeno, vitaminas y micronutrientes, y mezclas de los mismos.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho medio de cultivo tiene un pH en el intervalo de desde 2,5 hasta 8,0, mas preferiblemente en el intervalo de desde 3,5 hasta 7,5.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dichos microorganismos se cultivan en dicho medio de cultivo a una temperatura en el intervalo de desde 25°C hasta 48°C, mas preferiblemente en el intervalo de desde 35°C hasta 45°C.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dichos microorganismos se cultivan en dicho medio de cultivo durante de 6 a 40 horas, mas preferiblemente de 8 a 36 horas.
    Metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dichos microorganismos se separan del medio de cultivo por centrifugacion o microfiltracion.
    Biomasa enriquecida en cinc que puede obtenerse mediante el metodo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.
    Biomasa segun la reivindicacion 11, que comprende microorganismos vivos.
    Biomasa segun la reivindicacion 12, como agente probiotico.
    Uso de la biomasa segun la reivindicacion 12, para la fabricacion de una composicion que tiene actividad probiotica.
    Uso segun la reivindicacion 14, en el que dicha composicion que tiene actividad probiotica se selecciona del grupo que consiste en complementos alimenticios, productos dieteticos, productos alimenticios funcionales, productos nutraceuticos y preparaciones alimenticias.
    Biomasa segun la reivindicacion 11, que comprende microorganismos muertos.
    Uso de la biomasa segun la reivindicacion 16, para la fabricacion de un producto cosmetico o un producto alimenticio.
    Composicion que tiene actividad probiotica que comprende una biomasa viva enriquecida en cinc segun la reivindicacion 12, en combinacion con vehfculos y/o excipientes adecuados.
    Composicion segun la reivindicacion 18, con una carga bacteriana de al menos 109 UFC/g.
    5
    10
  17. 20. Preparacion alimenticia, complemento alimenticio, producto dietetico, alimento funcional, producto nutraceutico o producto cosmeceutico, que comprende una composicion segun la reivindicacion 18 o 19.
  18. 21. Producto cosmetico o alimenticio que comprende una biomasa segun la reivindicacion 16.

  19. 22. Microorganismo seleccionado de la cepa Streptococcus thermophilus ST 16 BM, depositada segun el

    Tratado de Budapest en la DSMZ, Braunschweig, Alemania, con el numero de registro dSm 19526 el 13 de

    julio de 2007, y la cepa Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 1 BM, depositada segun el Tratado de
    Budapest en la DSMZ, Braunschweig, Alemania, con el numero de registro DSM 17850 el 23 de diciembre de 2005.
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITTO20070555A1 (it) * 2007-07-26 2009-01-27 Bioman S R L Biomassa arricchita in zinco, procedimento per la sua preparazione e prodotti probiotici, cosmetici, dietetici e nutraceutici comprendenti tale biomassa
ITMI20122270A1 (it) * 2012-12-31 2014-07-01 Giovanni Mogna Terapia di supporto ai trattamenti di chemioterapia per i tumori, per la sindrome da immunodeficienza acquisita e per le leucemie.
WO2015170159A1 (en) * 2014-05-05 2015-11-12 Giovanni Mogna A composition for use in treating or preventing viral or bacterial infections in a subject undergoing anti-tumor chemotherapy, leukemia treatment or aids therapy comprising l. reuteri ler03 and/or l. salivarius ls06.
CA2946463A1 (en) * 2014-05-05 2015-11-12 Giovanni Mogna Therapy for use in the treatment of tumors, acquired immunodeficiency syndrome and leukemias by dual immune biostimulation
WO2016084029A1 (en) * 2014-11-26 2016-06-02 Probiotical S.P.A. Strains of lactobacillus or bifidobacterium for maintaining homeostasis
DK3240426T3 (da) 2014-12-29 2019-07-22 Mofin S R L Fremstilling af en gærfri, meget fordøjelig pizza ved anvendelse af en dej indeholdende mælkesyrebakterier
KR102074384B1 (ko) * 2019-01-28 2020-02-06 주식회사 락토메이슨 신규한 비피도박테리움 애니멀리스 락티스 lm1017을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선 및 피부 탄력용 화장료 조성물
CN115197865B (zh) * 2022-02-10 2023-10-03 江南大学 一株可促进生长与生殖发育的富锌长双歧杆菌
CN115181683B (zh) * 2022-02-10 2023-10-03 江南大学 一株高富集有机锌的短双歧杆菌
CN115181682B (zh) * 2022-02-10 2023-10-03 江南大学 一株高富集有机锌的发酵乳杆菌
CN114573732A (zh) * 2022-02-27 2022-06-03 桂林理工大学 一种具有益生作用的木聚糖锌络合物的制备方法及应用
CN114574387B (zh) * 2022-03-03 2023-08-25 江南大学 一株促进生长与生殖发育的高富集有机锌动物双歧杆菌
CN115176866B (zh) * 2022-07-15 2023-08-22 西北工业大学 一种富集纳米硒和氧化锌的微生态饲料添加剂及制备方法
CN117070423B (zh) * 2023-10-08 2023-12-22 完美（广东）日用品有限公司 一株植物乳植杆菌LPPerfectus001及其应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3661713A (en) * 1970-06-18 1972-05-09 Commercial Solvents Corp Process for producing zearalenone
JPS6075279A (ja) 1983-10-03 1985-04-27 Ajinomoto Co Inc 微生物菌体の製造法
CZ283936B6 (cs) * 1991-06-03 1998-07-15 Innovi N.V. Způsob výroby přísady, zahrnující mikroorganismy se zvýšeným obsahem alespoň jednoho stopového pr vku
WO2000007606A2 (en) 1998-08-07 2000-02-17 Ganeden Biotech, Inc. Methods for increasing the solubility of nutritional materials using probiotic lactic acid-producing bacteria
KR100483080B1 (ko) 2001-09-21 2005-04-14 한인규 염산·베타인(betaine·HCl), 판크레아틴, 제2인산 칼슘, 크롬 피콜리네이트, 락토바실러스속·비피도박테리아속·스트렙토코커스속·프럭토 올리고당, 비타민, 미네랄을 유효성분으로 구성된 것을 특징으로 하는 증체개선용 영양강화 사료첨가제
JP2003250528A (ja) * 2002-03-06 2003-09-09 Yakult Honsha Co Ltd ビフィドバクテリウム属細菌の生残性改善剤、増殖促進剤、又は、同細菌含有醗酵物の製造方法
RU2228184C2 (ru) 2002-06-28 2004-05-10 Закрытое акционерное общество "Партнер" Комплексный препарат
EP1602716B1 (en) 2004-06-03 2008-08-20 BioMan S.r.l. Selenium-enriched biomass, method of preparing thereof and probiotic and nutraceutic products including said biomass
PL209992B1 (pl) 2004-11-04 2011-11-30 Ipc S R O Košice Probiotyczny szerokospektralny preparat pokarmowy w postaci proszku, płynu, pasty lub gazu
US20060233915A1 (en) 2005-04-15 2006-10-19 Bristol-Myers Squibb Company Liquid nutritional product to supplement human milk
US7595079B2 (en) 2005-07-08 2009-09-29 Bomac Vets Plus, Inc. Nutritional conjunctive support therapy for recovery in animals following stress or illness
CN101257910B (zh) * 2005-09-08 2012-05-23 株式会社益力多本社 胆固醇吸收抑制剂
ITTO20070555A1 (it) 2007-07-26 2009-01-27 Bioman S R L Biomassa arricchita in zinco, procedimento per la sua preparazione e prodotti probiotici, cosmetici, dietetici e nutraceutici comprendenti tale biomassa

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Publication number Publication date
US20170101621A1 (en) 2017-04-13
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