CN115197865B - 一株可促进生长与生殖发育的富锌长双歧杆菌 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株可促进生长与生殖发育的富锌长双歧杆菌，属于微生物技术领域。本发明筛选得到的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)CCFM1195能够将无机锌富集，转化为生物态锌，有机锌含量可达96.5％，可使锌被机体更好的吸收利用，且有效促进生长与生殖发育。经动物实验证明，富锌长双歧杆菌能够促进雄性大鼠幼鼠的生长与生殖发育，且在远低于日常膳食补充剂量的情况下，发挥较无机锌更高的生物活性，达到补充锌的生理要求。本发明提供的长双歧杆菌CCFM1195可用于制备促进生长与生殖发育的益生菌制剂，并在食品或医药领域具有巨大的应用前景。

Description

一株可促进生长与生殖发育的富锌长双歧杆菌
技术领域
本发明涉及一株可促进生长与生殖发育的富锌长双歧杆菌，属于微生物技术领域。
背景技术
锌(Zn)是生命必须的微量元素，在机体内的含量仅次于铁，广泛参与机体的生命代谢过程。锌对哺乳动物的生长发育必不可少，能够促进机体生长发育，特别是对生长旺盛的儿童及青少年，缺锌会引起生长发育迟缓。此外，锌缺乏与睾丸体积/重量减少、性腺机能减退、性腺功能障碍、人类第二性征发育不良、生精小管萎缩等有关。目前在我国一些贫困地区，由于动物性食物的摄入量低，对富锌的食物获取有限，出生后以植物性食物为主，植物性饮食中的植酸盐等会抑制锌的吸收，造成生长发育期长期锌缺乏，影响生长发育。
健康成人每天从膳食中摄入约10-15mg锌，吸收率一般为20-30％。目前人工添加的各类补锌产品主要分为无机锌、有机锌、人工合成锌和生物活性锌四代，无机锌主要为氧化锌、硫酸锌等，其吸收利用率低且与胃酸结合产生氯化锌，刺激胃肠道，引起恶心呕吐，副作用大，国内外多用于饲料使用。有机锌如柠檬酸锌、葡萄糖酸锌等吸收率较高于无机锌，但依然会对肠胃产生刺激，有一定副作用，且含锌量较高，能拮抗钙、铁等其他微量元素的吸收，长期服用会导致缺钙、贫血等症状。人工合成锌如蛋白锌是蛋白质和锌的结合物，是国内比较先进的一种补锌制剂，其无副作用且吸收比较好。生物活性锌如酵母锌是生物态锌，具有生物转化过程，吸收利用率高，无副作用可有效促进人体对各种营养素的吸收和利用，且不会拮抗钙铁等营养素的吸收，能够更好的达到补充各种营养素的效果。
长双歧杆菌是一种广泛应用于功能性食品中的益生菌。目前的报道研究，在富锌微生物方面研究较多的是酵母锌，然而与酵母菌相比，益生菌在许多生物活性方面更加具有优势，例如增加肠道内有益微生物的数量、调节肠道菌群、促进营养吸收等。富锌益生菌作为一种新型的含有活性益生菌的膳食锌源，其较益生菌及其他锌补充剂在促进生长与生殖发育方面是否更有优势值得探索。因此，与单独补充无机锌相比，有必要对富锌益生菌在促进生长与生殖发育的功效进行研究，开发出一种安全可靠且补锌更高效的锌补充剂。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一株可促进生长与生殖发育的高富集有机锌的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)CCFM1195，已于2021年09月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61958，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
本发明提供长双歧杆菌CCFM1195通过本发明提供的培养方法培养后具有以下特征：
(1)该菌株在MRS培养基上培养48h后呈小的、白色、不透明菌落；
(2)该菌株可将无机锌富集，转化为生物态锌，能够被机体更好的吸收利用，较无机锌具有更好的调节肠道菌群的功能；
(3)该菌株生产的有机锌能够在远低于日常膳食补充剂量的情况下，发挥较无机锌更高的生物活性，达到补充锌的生理要求；
(4)该菌株经过富锌发酵后，每克菌粉中锌含量可达到4.5mg以上，有机锌含量可达到96.5％。
本发明还提供了含有所述长双歧杆菌CCFM1195，或含有长双歧杆菌CCFM1195经富锌培养后所获得的细胞或含有机锌的细胞裂解物的益生菌制剂。
在一种实施方式中，每g或每mL所述益生菌制剂中的有机锌含量≥4340.29μg。
在一种实施方式中，每g或每mL益生菌制剂中含有≥1×109CFU所述长双歧杆菌CCFM1195或所述经富锌培养后所获得的细胞。
在一种实施方式中，所述细胞包括但不限于活细胞或死细胞；所述死细胞包括但不限于自然失去活性的细胞或经灭活处理后的细胞。
在一种实施方式中，所述富锌培养是将所述长双歧杆菌CCFM1195在富锌培养基中培养至菌体数量≥1×108CFU/mL。
在一种实施方式中，所述富锌培养基是含锌离子浓度200～500mg/L的培养基。
在一种实施方式中，所述长双歧杆菌CCFM1195经富锌培养后还经过干燥处理；干燥处理的方式包括但不限于：真空冷冻干燥、喷雾干燥、真空干燥、流化床干燥。
本发明还提供了高富集有机锌长双歧杆菌的制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述的长双歧杆菌CCFM1195在改良MRS固体培养基上划线，平板于37℃倒置培养36～48h；挑取单菌落接入到改良MRS液体培养基中于37℃培养24h；再以2％(v/v)的接种量接入到改良MRS液体培养基中37℃培养12～18h作为后续培养的种子菌液；
(2)将长双歧杆菌的种子菌液以2％(v/v)的接种量接种至富锌液体培养基中培养12～18h；
(3)发酵完成后将菌液在4℃条件下8000g/min离心20min，取湿菌体用纯水漂洗2次，得到富锌长双歧杆菌菌泥。
在一种实施方式中，所述步骤(2)中的富锌液体培养基中锌离子浓度为200～500mg/L。
在一种实施方式中，所述富锌长双歧杆菌菌泥还经干燥处理，得到高富集有机锌的长双歧杆菌菌粉。
在一种实施方式中，所述富锌长双歧杆菌菌泥还经过任意干燥处理；所述干燥包括但不限于喷雾干燥、真空干燥、流化床干燥或真空冷冻干燥。
在一种实施方式中，所述富锌长双歧杆菌菌泥经过灭活后再经任意干燥方式处理，得到无细胞活性的高富集有机锌的长双歧杆菌CCFM1195菌粉；所述干燥使用蛋白或糊精作填充剂，或不使用任何填充剂。
本发明还提供所述长双歧杆菌CCFM1195或所述益生菌制剂在制备食品、保健品或药物中的应用。
本发明还提供了所述富锌长双歧杆菌CCFM1195，或所述益生菌制剂在促进幼年哺乳动物生长和生殖发育方面的应用。
有益效果：
本发明提供了一株可促进生长与生殖发育的高富集有机锌的长双歧杆菌，经富锌培养后，每克菌粉锌含量能够达到达到4.5mg以上，活菌数能够达到1×109CFU/g以上，有机锌含量可达到96.5％。该菌株能够将无机锌富集吸收并在菌体内转化为生物态锌，无论有无活性，经该菌株富集生产的有机锌能够被机体更好的吸收利用，可有效促进哺乳动物的生长与生殖发育。
生物材料保藏
一株长双歧杆菌，分类命名为Bifidobacterium longum，已于2021年09月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61958，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1为缺锌组大鼠、无机锌低剂量组大鼠、灭活富锌长双歧低剂量组、富锌长双歧低剂量组大鼠照片对比；从左至右依次为缺锌组大鼠、无机锌低剂量组大鼠、灭活富锌长双歧低剂量组、富锌长双歧低剂量组大鼠；
图2为补锌对大鼠血清中ALP活性的影响；注：不同字母代表组别间具有显著性差异(p<0.05)；
图3为补锌对大鼠血清中生长激素和睾酮浓度的影响；注：不同字母代表组别间具有显著性差异(p<0.05)；
图4为不同处理组大鼠肠道菌群Alpha多样性；注：不同字母代表组别间具有显著性差异(p<0.05)；
图5为大鼠肠道菌群属水平分类结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的氧化锌(产品货号：10023918、CAS：1314-13-2)购自国药集团化学试剂有限公司；硫酸锌(产品货号：10024018、CAS：7446-20-0)购自国药集团化学试剂有限公司；硝酸(产品货号：yb2-308、CAS：7697-37-2)购于国药集团化学试剂有限公司；脱脂乳粉购自内蒙古伊利实业集团股份有限公司。
下述实施例中涉及的培养基如下：
改良MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4·7H2O 0.05g/L、吐温-80 1g/L、半胱氨酸0.5g/L、蒸馏水1000g/L。
改良MRS固体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4·7H2O 0.05g/L、吐温-80 1g/L、半胱氨酸0.5g/L、琼脂20g/L、蒸馏水1000g/L。
富锌液体培养基(g/L)：葡萄糖20-30g/L，氮源15-25g/L(酵母浸粉、蛋白胨的质量比为1:2)、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4·7H2O 0.05g/L、吐温-80 1g/L、半胱氨酸0.5g/L、蒸馏水1000g/L、硫酸锌(按锌离子浓度为200～500mg/L换算添加)。
实施例1：长双歧杆菌的筛选、菌种鉴定及保存
1、筛选
以来源于江苏省无锡市的婴儿粪便为样本，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6，然后分别取100μL稀释倍数为10-4、10-5、10-6的稀释液于改良MRS固体培养基上进行平板涂布，37℃培养48h，观察并记录菌落形态；挑取改良MRS固体培养基上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取改良MRS固体培养基上不同形态的单菌落进行划线分离，直至得到形态一致的纯的单菌落；挑取改良MRS固体培养基上的纯菌落接种于含有硫酸锌的富锌液体培养基中，37℃培养18h；将菌液转移至无菌离心管中，8000g/min离心10min后弃去上层培养基，得到的菌泥漂洗2遍后冷冻干燥，得到富锌菌粉。使用原子吸收分光光度计检测菌粉中的锌含量，选出富集锌能力较强的菌株。
2、鉴定
将分离得到的富集锌能力较强的菌株进行PCR扩增16S rDNA，PCR产物送至英潍捷基(上海)贸易有限公司进行测序，将测序得到的结果在NCBI中进行核酸序列比对，最终得到1株长双歧杆菌，命名为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)CCFM1195。
3、保存
将长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)CCFM1195接种于改良MRS液体培养基中，37℃培养18h；取1mL菌液于无菌离心管中，8000g/min离心10min后弃去上层培养基，菌泥重悬于30％甘油溶液中置于-80℃中保藏。
实施例2：富锌长双歧杆菌的制备方法
(1)将实施例1筛选获得的的长双歧杆菌CCFM1195在改良MRS固体培养基上划线，平板于37℃倒置培养48h；挑取单菌落接入改良MRS液体培养基中于37℃培养24h；以2％(v/v)的接种量接入到改良MRS液体培养基中37℃培养12-18h作为后续培养的种子菌液。
(2)将步骤(1)的长双歧杆菌的种子菌液以2％(v/v)的接种量接入含富锌液体培养基的发酵瓶中，于37℃培养12-18h。
(3)将步骤(2)发酵完成后将菌液在4℃条件下8000g/min离心20min，取湿菌体用纯水漂洗2次，以质量分数13％的脱脂乳作为冻干保护剂，将洗涤后的湿菌体与冻干保护剂以质量比1:1混匀，冷冻干燥，得到高富集锌的长双歧杆菌菌粉，活菌数为1×109CFU/g菌粉，菌粉中的有机锌含量可达4340.29μg以上。
可选地，还可将富锌长双歧杆菌灭活、经干燥处理制备菌粉，干燥方式可选用喷雾干燥或真空干燥或流化床干燥或真空冷冻干燥。
可选地，灭活高富集锌长双歧杆菌菌粉可按如下方法制备：将前述步骤(2)发酵完成后将菌液在4℃条件下8000g/min离心20min，取湿菌体用纯水漂洗2次，将洗涤后的湿菌体进行喷雾干燥或真空干燥或流化床或真空冷冻干燥，使用蛋白或糊精作填充剂(菌泥与填充剂溶液质量比为1:1，填充剂溶液为质量分数13％的乳清蛋白或胶原蛋白或大豆蛋白或糊精溶液)，得到无活性的高富集锌长双歧杆菌菌粉，菌粉中的有机锌含量可达4340.29μg以上。
实施例3：富锌长双歧杆菌锌含量及有机锌检测
1、富锌长双歧杆菌锌含量检测
(1)微波消解
称取实施例2制备的的长双歧杆菌CCFM1195菌粉样品0.1g～0.15g于微波消解罐中，加入5mL硝酸进行微波消解。冷却后取出消解罐，在电热板上于140℃～160℃赶酸至1mL左右。消解罐放冷后，将消化液转移至25mL容量瓶中，用少量水洗涤消解罐2次～3次，合并洗涤液于容量瓶中，用水定容至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。
(2)标准溶液配制
①锌标准储备液(1000mg/L)：准确称取1.2447g(精确至0.0001g)氧化锌，加少量体积分数50％的硝酸溶液，加热溶解，冷却后移入1000mL容量瓶，加水至刻度，混匀。
②锌标准中间液(10mg/L)准确吸取锌标准储备液(1000mg/L)0.5mL于50mL容量瓶中，加体积分数为5％的硝酸溶液至刻度，混匀。
③锌标准系列溶液：分别准确吸取锌标准中间液0mL、0.5mL、1mL、2mL、4mL、和5mL于50mL容量瓶中，加硝酸溶液(5+95)至刻度，混匀。此锌标准系列溶液的质量浓度分别为0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1mg/L。
参照中华人民共和国国家标准GB 5009.14-2017中的第一种方法火焰原子吸收光谱法测量样品中的锌含量，其检测结果为4.5mg/g。
2、富锌长双歧杆菌有机锌分析
准确称取0.5g的富锌长双歧杆菌CCFM1195菌粉于烧杯中，加入45ml的蒸馏水，然后用稀酸或稀碱调节蒸馏水pH值至6.5，调好后用50ml容量瓶定容，定容蒸馏水的pH值也调至6.5，定容毕，将富锌长双歧杆菌溶液转移至烧杯中，用玻璃棒缓慢匀速搅拌5～10min，搅拌毕，用8000r/min于室温离心15min。收集上清液用于测量富锌长双歧杆菌细胞表面水溶性锌(即无机锌)含量。向沉淀中加入45ml的10mmol/L EDTA溶液，然后用稀酸或稀碱调节EDTA溶液pH值至6.5，调好后用50ml容量瓶定容，定容的EDTA溶液pH值也调至6.5，定容毕，将富锌长双歧杆菌溶液转移至烧杯中，用玻璃棒缓慢匀速搅拌5～10min，搅拌毕，于8000r/min室温离心15min。收集上清液用于测量富锌长双歧杆菌细胞壁多糖及蛋白质络合的锌含量。第二次离心沉淀用于测量富锌长双歧杆菌细胞内有机大分子或小分子结合锌含量。
有机化程度＝(细胞壁多糖及蛋白质络合的锌含量+细胞内有机大分子或小分子结合锌含量)/总锌含量。
参照中华人民共和国国家标准GB 5009.14-2017中的第一种方法火焰原子吸收光谱法测量各组分中的锌含量，其检测结果如下：
表1富锌长双歧杆菌CCFM1195菌粉锌含量分析
由此可见，富锌长双歧杆菌CCFM1195菌粉总锌含量达4.5mg/g，有机锌含量达4340.29μg/g，表明该长双歧杆菌对锌的富集能力较强。无机态锌含量为3.5％，说明该长双歧杆菌对无机锌的同化效果较好。有18.5％的锌以有机体的形式结合在细胞壁的多糖和蛋白质等大分子上；77.9％的锌与长双歧杆菌细胞内有机大分子或小分子结合。采用相同方法检测无活性的高富集锌长双歧杆菌菌粉中有机锌含量，结果显示灭活后的菌泥制备的菌粉中总锌含量为4.5mg/g，无机态锌含量为3.5％，有机态锌含量为96.5％。
对比例1：不同富锌益生菌的富锌量和有机化程度
检索并收集不同来源的益生菌富锌培养后的锌含量。其中，两歧双歧杆菌O4、青春双歧杆菌W5、青春双歧杆菌HuNan-2016MRS 11-2、动物双歧杆菌HuNan-2016 22-3、短双歧杆菌HuNan-2016 49-7、短双歧杆菌GuXi-2016 6-7、鼠李糖乳杆菌CCFM237、罗伊氏乳杆菌CCFM795、植物乳杆菌CCFM8610、植物乳杆菌CCFM8661、植物乳杆菌CCFM242、植物乳杆菌CCFM259、干酪乳杆菌CCFM30、乳酸片球菌CCFM18、保加利亚乳杆菌MJ-1、消化乳杆菌CCFM636、清酒乳杆菌RS70-4、格氏乳杆菌AH-WH-7-4、嗜酸乳杆菌GuXi-8-2-GMM、罗伊氏乳杆菌138-1公开于论文《乳酸菌对锌的富集特性及富锌乳酸菌对小鼠结肠炎的缓解作用》；短双歧杆菌WC 0421、短双歧杆菌WC 0480、短双歧杆菌WC 0481、婴儿双歧杆菌WC 0460、假小链双歧杆菌WC 0455公开于论文《Zinc Uptake by Lactic Acid Bacteria》中；嗜热链球菌1M7和枯草芽孢杆菌NZ56公开于公开号为CN 108220208 B的专利中，嗜酸乳杆菌(自命名为7L5)和唾液乳杆菌(自命名为FXJCJ7M2)公开于公开号为CN 101971921 B的专利中，唾液乳杆菌L3公开于论文《唾液乳杆菌富锌工艺优化》中。
表2不同富锌益生菌的锌含量对比
按照实施例2相同的方法培养表3所示的菌株，并检测培养18h后的锌含量。其中，短双歧杆菌F-JS-ZJ-1-M5、鼠李糖乳杆菌DG11-1、植物乳杆菌NFM11、干酪乳杆菌RS-2-1为自行筛选的富锌菌株。
表3不同富锌益生菌有机化程度对比
以上菌株锌的富集含量和有机锌含量均相对较低，无法达到本发明菌株的高富锌量、高有机锌含量的理想效果。
实施例5：富锌长双歧杆菌对雄性大鼠幼鼠生长及生殖发育的影响
1、造模
选取3周龄雄性SD大鼠幼鼠40只，随机分为正常组、缺锌组、无机锌低剂量组、无机锌中剂量组、灭活富锌长双歧低剂量组、灭活富锌长双歧中剂量组、富锌长双歧低剂量组、富锌长双歧中剂量组8组，每组5只。缺锌组、无机锌低剂量组、无机锌中剂量组、灭活富锌长双歧低剂量组、灭活富锌长双歧中剂量组、富锌长双歧低剂量组、富锌长双歧中剂量组用缺锌饲料TP0690-01G(1ppm)(订购于南通特洛菲饲料科技有限公司)缺锌喂养一周进行缺锌造模，正常组喂食对照饲料。
2、干预
从第2周开始按照1.0mL的灌胃量进行灌胃。
无机锌低剂量组、中剂量组在饲喂缺锌饲料的同时按照每日0.2mg Zn/只、0.7mgZn/只剂量的氧化锌溶液进行灌胃；
富锌长双歧低剂量组和富锌长双歧中剂量组在饲喂缺锌饲料的同时分别按照每日0.2mg Zn/只、0.7mg Zn/只剂量的菌悬液(将按照锌含量计的实施例2制备的菌粉溶于生理盐水中)进行灌胃；
灭活富锌长双歧低剂量组和灭活富锌长双歧杆菌中剂量组在饲喂缺锌饲料的同时分别按照每日0.2mg Zn/只、0.7mg Zn/只剂量的菌悬液(将按照锌含量计的实施例2制备的菌粉溶于生理盐水中)进行灌胃；
缺锌对照组饲喂缺锌饲料并灌胃等体积的生理盐水；
正常对照组饲喂对照饲料并灌胃等体积的生理盐水，灌胃两周。
3、实验结果
饲养期间定期观察大鼠反应，活动情况，精神状况，毛发变化，拍照记录大鼠形态变化，最后一次灌胃后24小时收集粪便，然后夜间禁食。次日对大鼠实施安乐死，采集血液、肝脏、睾丸。肝脏、睾丸组织在液氮中速冻并保存在-80℃。将血样吸入促凝管，离心后收集血清。样品在-20℃冷冻保存直至分析。我们的结果表明缺锌对幼鼠的生长和生殖发育有负面影响。不同的锌补充剂由于吸收利用的差异，对身体各项指标的恢复能力也不同。无论是否具有细胞活性，富锌长双歧杆菌CCFM1195的生物利用度都要高于无机锌，尤其是在低剂量时能够被机体更好的吸收利用。对正常组、缺锌组、无机锌低剂量和中剂量组、富锌长双歧低剂量和中剂量组进行了肠道菌群分析，在缺锌组和锌处理组的肠道菌群中观察到很大差异。尽管单独补充锌似乎对肠道微生物丰度和多样性没有显着影响，但富锌长双歧杆菌CCFM1195显著增加了肠道菌群的多样性。在属水平上，补锌在调节乳杆菌属和布劳特氏菌属之间的平衡方面起着重要作用。
表4大鼠身长、身宽
注：不同字母代表组别间具有显著性差异(p<0.05)
表5大鼠睾丸重量
注：不同字母代表组别间具有显著性差异(p<0.05)
表6大鼠组织中的锌含量
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (11)

1.一株长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)CCFM1195，已于2021年09月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61958，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.一种益生菌制剂，其特征在于，含有(a)或(b)：
(a)权利要求1所述的长双歧杆菌CCFM1195；
(b)权利要求1所述长双歧杆菌CCFM1195经富锌培养后的细胞。
3.根据权利要求2所述的益生菌制剂，其特征在于，所述细胞为活细胞、自然失活的细胞或经灭活处理的细胞。
4.根据权利要求2或3所述的益生菌制剂，其特征在于，每g或每mL益生菌制剂中长双歧杆菌CCFM1195或经富锌培养后的细胞含量≥1×109CFU。
5.根据权利要求2所述的益生菌制剂，其特征在于，所述富锌培养是将所述长双歧杆菌CCFM1195在富锌培养基中培养至菌体数量≥1×108CFU/mL。
6.一种富集有机锌的长双歧杆菌的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述的长双歧杆菌CCFM1195在富锌培养基中培养至菌体数量≥1×108CFU/mL；所述富锌培养基是含锌离子浓度200～500mg/L的培养基。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述富锌培养基含有葡萄糖20-30g/L、氮源15-25g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O0.1g/L、MnSO4·7H2O 0.05g/L、吐温-80 1g/L、半胱氨酸0.5g/L、硫酸锌。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述氮源是质量比为1:2的酵母浸粉和蛋白胨。
9.根据权利要求6～8任一所述的方法，其特征在于，收集富锌培养后的长双歧杆菌菌泥，对菌泥进行干燥处理。
10.权利要求1所述的长双歧杆菌CCFM1195或权利要求2～5任一所述的益生菌制剂在制备食品、保健品或药物中的应用。
11.权利要求1所述的长双歧杆菌CCFM1195，或权利要求2～5任一所述的益生菌制剂在制备促进幼年哺乳动物生长和生殖发育的产品方面的应用。
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