CN111528283B - 一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌x253的应用 - Google Patents

一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌x253的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌X253在制备食品、保健品、药物、药物组合物中的应用，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO.18404。本发明还公开了一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的配方奶粉，其以鼠李糖乳杆菌X253的菌液或菌粉为活性组分，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO.18404。本发明的鼠李糖乳杆菌X253，其耐酸能力强，对胃液及肠液具有很好的耐受性，能够到达肠道，从而发挥益生作用，同时，本发明的鼠李糖乳杆菌X253具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力，在食品领域应用广泛。

Description

一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳 杆菌X253的应用
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体的说，是关于一种具有抗疲劳作用和/或可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌X253的应用。
背景技术
运动持续一段时间后，机体不能维持原强度运动，即为运动性疲劳。运动性疲劳，在1982年第五届国际运动生化会议上才正式定义为“机体生理过程不能维持其机能在一定水平上或不能维持某一运动的特定强度。
运动疲劳是一个极其复杂的、综合性的生理反应，一定程度上这也是我们身体的一种保护机制。对于这方面的研究也有很多，对于运动性疲劳的产生机制提出了多种说法。大量研究证实，外源性抗氧化物质能与内源性自由基相互作用，增强机体抗氧化防御能力、减轻疲劳。同时运动性疲劳与乳酸堆积有关，当我们的运动强度增大后，身体摄氧量赶不上需氧量的需求，也就是氧气供应不足时，就会形成无氧代谢，虽然也会产生能量，但与此同时也会产生乳酸。
在运动强度较低的时候，人体主要使用有氧代谢来为身体提供能量，这时候可能也会有一些无氧代谢产生的乳酸，但一般都很少，人体可以轻松代谢掉。但当乳酸增加的速度加快，排出机制无法跟上时，乳酸就会开始大量堆积，造成运动疲劳。
因此，开发一款具有抗疲劳作用和可以提高机体疲劳耐受能力等的食品、保健品、药物、药物组合物等具有重要意义和应用价值。
发明内容
本案发明人从新疆发酵乳中分离筛选出来一株菌株，经鉴定为鼠李糖乳杆菌X253(Lactobacillus rhamnosus X253)，菌种保藏编号CGMCC NO.18404。在对其功能进行研究的过程中发现，该菌株具有抗疲劳作用，可以提高机体疲劳耐受能力。在小鼠负重游泳实验中，证实食用益生菌大豆肽复合奶粉的小鼠具有更好的运动能力和耐受能力。
因此，本发明的第一个目的是提供一种具有抗疲劳作用和/或可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌X253在制备食品、保健品、药物、药物组合物中的应用。本发明的第二个目的是提供一种配方奶粉，所述配方奶粉中含有所述的鼠李糖乳杆菌X253。本发明的第三个目的是提供一种配方奶粉的制备方法。
为了达到上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
作为本发明的第一个方面，一种具有抗疲劳作用和/或可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌X253在制备食品、保健品、药物、药物组合物中的应用，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO.18404。
根据本发明，所述食品包括配方奶粉、复合益生菌、乳制品、饮品等。
根据本发明，所述药物的剂型可以为胶囊、片剂、丸剂或粉末等。
作为本发明的第二个方面，一种具有抗疲劳作用和/或可提高机体疲劳耐受能力的生物制品，所述生物制品以鼠李糖乳杆菌X253的菌液或菌粉为活性组分，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO.18404。
根据本发明，所述生物制品中还包括大豆肽，所述鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比不小于1:1。
优选的，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比为1:1～3:1。
进一步的，鼠李糖乳杆菌X253菌粉的添加量≥1×107cfu/g，或者，鼠李糖乳杆菌X253菌液的添加量≥1×107cfu/mL。
根据本发明，所述的生物制品包括食品、保健品、药物及药物组合物。
根据本发明，所述鼠李糖乳杆菌X253的16SrRNA序列如SEQ ID NO：1所示。
根据本发明，所述鼠李糖乳杆菌X253的Phes基因序列如SEQ ID NO：2所示。
作为本发明的第三个发明，一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的配方奶粉，其以鼠李糖乳杆菌X253的菌液或菌粉为活性组分，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO.18404。
进一步的，所述配方奶粉还包括大豆肽，所述鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比不小于1:1。
优选的，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比为1:1～3:1。
根据本发明，鼠李糖乳杆菌X253菌粉的添加量≥1×107cfu/g，或者，鼠李糖乳杆菌X253菌液的添加量≥1×107cfu/mL。
根据本发明，所述配方奶粉包括如下重量份的组分：
Figure BDA0002485300400000031
其中，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO.18404。
优选的，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比为1:1～3:1。
根据本发明，鼠李糖乳杆菌X253菌粉的添加量≥1×107cfu/g，或者，鼠李糖乳杆菌X253菌液的添加量≥1×107cfu/mL。
作为本发明的五个发明，一种具有抗疲劳作用和可以提高机体疲劳耐受能力的配方奶粉的制备方法，包括如下步骤：
分别称取上述重量的生牛乳、脱盐乳清粉、大豆油、浓缩乳清蛋白粉、低聚半乳糖、低聚果糖、磷脂、白砂糖、无水奶油、乳糖，备用；
步骤二、分别称取上述重量的花生四烯酸粉剂、复合矿物质、复合维生素、DHA藻油粉、氯化胆碱、碳酸钙、菊粉、谷氨酰胺、核苷酸、鼠李糖乳杆菌X253，备用；
步骤三、混料：将步骤一与步骤二中称量好的物料混合均匀，得到组合物A；
步骤四、包装：将所述组合物A称量、袋装或听装、密封，获得配方奶粉。
根据本发明，鼠李糖乳杆菌X253的添加量≥1×107cfu/g。
本发明的有益效果是：鼠李糖乳杆菌X253具有良好的抗疲劳能力，可以提高机体疲劳耐受能力；因此可以用于制备食品、保健品、药物、药物组合物的等，具有广阔的市场应用价值。同时，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽复合后，其抗疲劳作用效果更好，对提高机体疲劳耐受能力具有协同增效的作用。
附图说明
图1为实施例1中的肠道上皮细胞体外粘附特性实验结果示意图。
图2为本发明的实施例2的发酵特性实验的发酵曲线示意图。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件进行。
1、本发明的鼠李糖乳杆菌X253(Lactobacillus rhamnosus X253)，又名：鼠李糖乳杆菌JMCC0026，是从新疆地区传统乳制品中筛选出来的，菌种保藏编号CGMCC NO.18404。菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2019年8月20日。
实施例1鼠李糖乳杆菌JMCC0026及其分离纯化方法
1、样品采集
取25mL新疆的发酵乳制品，加入200～250mL生理盐水中，充分混匀，得到采集样品；
2、样品富集
取2mL采集样品，加入到80～120mL的MRS液体培养基中，32～42℃培养64～80h，得到培养液；
其中，MRS液体培养基主要由以下原料组成：酪蛋白胨8～12g，牛肉膏8～12g，酵母膏4～6g，葡萄糖16～24g，乙酸钠4～6g，柠檬酸二胺1.5～2.5g，吐温-80 0.8～1.2g，K2HPO41.5～2.5g，MgSO4·7H2O 0.1～0.3g，MnSO4·7H2O 0.04～0.06g，蒸馏水1000mL。
3、菌株分离
取培养液1mL，用重量与体积百分比为0.9％的无菌生理盐水稀释10倍，继续用生理盐水分别做10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍的梯度稀释，得到菌悬液；
取MRS固体培养基，融化后，倒入灭菌的培养皿中制成无菌平板，待其冷却、完全凝固后，吸取0.1mL不同浓度的菌悬液分别涂布到无菌平板；
置32～42℃厌氧培养64～80h；
待平板出现典型菌落后，根据标准乳酸菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的单菌落，进行下一步菌株纯化；
4、菌株纯化
挑取选中的单菌落，将菌落培养物划线接种到无菌平板上，32～42℃有氧环境培养64～80h，然后挑取该无菌平板上的单菌落，继续划线接种到无菌平板上，32～42℃有氧环境培养64～80h，连续培养三次至培养基内菌落形态一致，显微镜观察菌株细胞形态单一后，即获得纯培养菌株，接种环挑取菌落接种至液体MRS培养基内，37℃培养24h，得到增殖后的纯培养菌株；
其中，MRS固体培养基主要由以下原料组成：酪蛋白胨8～12g，牛肉膏8～12g，酵母膏4～6g，葡萄糖16～24g，乙酸钠4～6g，柠檬酸二胺1.5～2.5g，吐温-80 0.8～1.2g，K2HPO41.5～2.5g，MgSO4·7H2O 0.1～0.3g，MnSO4·7H2O 0.04～0.06g，琼脂13～17g，蒸馏水1000mL；
5、菌株保存
取800μL纯培养菌株和无菌的50％甘油，置于菌种保存管内，混匀后在-70℃保存，同时接种MRS固体培养基试管斜面用于临时保存；
其中，MRS固体培养基主要由以下原料组成：酪蛋白胨8～12g，牛肉膏8～12g，酵母膏4～6g，葡萄糖16～24g，乙酸钠4～6g，柠檬酸二胺1.5～2.5g，吐温-80 0.8～1.2g，K2HPO41.5～2.5g，MgSO4·7H2O 0.1～0.3g，MnSO4·7H2O 0.04～0.06g，琼脂13～17g，蒸馏水1000mL。
实施例2鼠李糖乳杆菌JMCC0026的细菌学特性
1、基本特征
鼠李糖乳杆菌JMCC0026的基本特征如表1所示。
表1鼠李糖乳杆菌JMCC0026的基本特征
实验项目 结果 实验项目 结果 实验项目 结果
革兰氏染色 阳性 细胞形状 杆状 接触酶 -
氧化酶 形成芽孢 -
由表1可见，鼠李糖乳杆菌JMCC0026为革兰氏阳性、杆状、无芽孢、接触酶和氧化酶试验的阴性菌株。
2、糖发酵特性实验
将分离纯化的菌株挑取单菌落进行平板划线，37℃培养48h，分别挑取一接种环菌株接入糖发酵管中，37℃培养48h，观察颜色变化。具体结果如表2所示。
表2 JMCC0026的鉴定结果
甘油 - 肌醇 - 菊糖 -
赤藓醇 - 甘露醇 + 松三糖 +
D-阿拉伯糖 - 山梨醇 + 棉子糖 -
L-阿拉伯糖 - α-甲基-D-甘露糖甙 - 淀粉 -
D-核糖 + α-甲基-D-葡萄糖甙 + 糖原 -
D-木糖 - N-乙酰-葡糖胺 + 木糖醇 -
L-木糖 - 苦杏仁甙 + 龙胆二糖 -
阿东醇 - 熊果甙 + D-松二糖 +
β-甲基-D木糖甙 - 七叶最 + D-来苏糖 -
D-半乳糖 + 水杨苷 + D-塔格糖 +
D-葡萄糖 + 纤维二糖 + D-岩藻糖 -
D-果糖 + 麦芽糖 + L-岩藻糖 -
D-苷露糖 + 乳糖 + D-阿拉伯糖醇 -
L-山梨糖 + 蜜二糖 - L-阿拉伯糖醇 -
L-鼠李糖 + 蔗糖 + 葡萄糖酸盐 -
卫矛醇 - 海藻糖 + 2-酮基-葡萄糖酸盐 -
注：“+”表示发酵利用；“-”表示不发酵利用。
3、分子生物学鉴定
鼠李糖乳杆菌X253的16SrRNA序列如下：
CTTAGACGGCTCGCTCCCTAAAAGGGTTACGCCACCGGCTTCGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCGTGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAGTCCGAACTGAGAATGGCTTTAAGAGATTAGCTTGACCTCGCGGTCTCGCAACCTCGTTGTACCCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGGTCTTACTAGAGTGCCCAACTAAATGCTGGCAACTAGTCATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCATTTTGCCCCCGAAGGGGAAACCTGATCTCTCAGGTGATCAAAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCAGGCGGAATGCTTAATGCGTTAGCTGCGGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGCATTCATCGTTTACGGCATTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTTCACCAGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTTTCCCAGTTTCCGATGCACTTCCTCGGTTAAGCCGAGGGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGATAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTGGATACCGTCACGCCGACAACAGTTACTCTGCCGACCATTCTTCTCCACAACAGAGTTTTACGACCCGAAAGCCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAAATGTGGCCGATCAACCTCTCAGTTCGGCTACGTATCATTGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATACGCCGCGGGTCCATCCAAAAGCGATAGCTTACGCCATCTTTCAGCCAAGAACCATGCGGTTCTTGGATTTATGCGGTATTAGCATCTGTTTCCAAATGTTATCCCCCACTTAAGGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCGCCACTCGTTCAAAATTAAATCAAGATGCAAGCACCTTTCAATAATCAGAACTCGTTCGACTTGCATGTAT
SEQ ID NO:1
鼠李糖乳杆菌X253的Phes基因序列如下：
GGGGGAAAAATAGCCGCACGCAAACATTCGGATGCACCATGCCGGCACCGAGAACTTCAATCCAGCCGGTATACTTGCAAACAGGGCAACCCTTGCCACCGCAGCGGAAGCAGGAAACGTCCACTTCTACAGACGGTTCTGTAAACGGAAAATAGCTCGGGCGCAGGCGAATCGTCCGATCAGCGCCAAACACATGCTGACACATGGCGAGTAACGTCCCCTTAAGATCAGCCATTGTAATATGCTTGTCGATCACCAGACCTTCCATCTGATGGAACTGGTGGCTATGTGTGGCATCATCATCATCACGCCGATAAACCACGCCCGGACTGATCATTTTCAGCGGGCCCTTAGTAAAATCATGTTTCTCCATCGTCCGTGCCTGCATCGGGCTGGTTTGGGAACGCATCAGCAACTCATTGGTAATATAAAAAGTTTCCTGCATATCACGAGCATGGATGACGCCGA
SEQ ID NO:2
实施例3鼠李糖乳杆菌X253的肠道上皮细胞体外粘附特性试验
(一)实验方法
1、取活化好的鼠李糖乳杆菌JMCC0026菌株1ml以4000rmp离心5min，根据经验值，此时的菌悬液浓度在109CFU/ml，用PBS洗菌2次，后在5ml离心管内用1mlDMEM重悬。
2、将24孔板内的原有的细胞培养液吸出后，用PBS冲洗一遍。
3、加菌：每孔含1ml菌悬液，每个菌悬液浓度做2个重复。
4、孵育：放至37℃二氧化碳培养箱，孵育3h。
5、计本次粘附实验的初始菌悬液的菌落总数。
6、计数：孵育完成后，用PBS洗菌4次，用1ml灭菌的1％(v/v)Triton×100裂解。裂解完成后按照下表的稀释梯度，倒平板(稀释方法：取300μL至2.7ml盐水中)。置于37℃培养3天，计结果。
(二)肠道上皮细胞体外粘附特性实验的实验结果如图1所示。
实施例4菌株发酵特性
(一)实验方法
将活化好的鼠李糖乳杆菌JMCC0026菌株按1％接种量接种于MRS液体培养基中，37℃48h培养，将上述培养好的菌株经3 500r/min(4℃)离心10min，生理盐水清洗一次，用灭菌脱脂奶悬浮(灭菌条件115℃，15min)，作为种子液备用。将上述种子液按1％的接种量接入灭菌脱脂奶中(灭菌条件115℃，15min)，采用pH值在线监测鼠李糖乳杆菌JMCC0026在灭菌乳中的pH值变化情况。
(二)菌株发酵曲线如图2所示。
实施例5胃酸及肠液耐受实验
一、实验方法
(一)实验菌株：鼠李糖乳杆菌JMCC0026
(二)人工消化液的配制
人工胃液：NaCl 0.2g/100mL、胃蛋白酶(pepsin)0.35g/100mL，用浓度为1mol/L的HCl调整pH值为3.0后，过滤除菌备用。
人工肠液：将下述a液和b液以2∶1混合即为人工肠液。
a.胰腺液：重碳酸钠1.1g/100mL，NaCl 0.2g/100mL，胰蛋白酶(Trypsin)0.1g/100mL，调整pH值为8.0，过滤除菌备用。
b.胆汁液：Bile Salts(Difco)0.9g/100mL，调整pH值为8.0，过滤除菌备用。
(三)将待测菌株活化3代后取1mL，分别置于含9mL过滤除菌处理的pH值为3.0的人工胃液中，震荡均匀并在37℃培养，在开始和培养2h分别取样，测定其活菌数。然后取在pH值3.0的人工胃液中消化2h后的培养液1mL，分别接种于9mL过滤除菌的pH值为8.0的人工肠液中，继续置37℃下培养，并分别在0，4h测定活菌数。
存活率(％)＝(cfu N1/cfu N0)×100％
(四)实验结果如表3所示。
表3鼠李糖乳杆菌X253胃液及肠液耐受实验结果
菌株 0h 2h 6h 胃液存活率 肠液存活率 消化液存活率
JMCC0026 8.6×108 6.88×107 8.0×103 80％ 0.12％ 0.09％
实施例6羟自由基清除能力检测(Fenton法)
1、鼠李糖乳杆菌X253、大豆肽、以及大豆肽复合益生菌JMCC0026的羟自由基清除能力检测
(1)鼠李糖乳杆菌X253的菌液的制备
活化菌株，传代2次后，接种于MRS液体培养基中，37℃培养16h，收集菌液于4000rpm，4℃离心10min，收集菌体，生理盐水洗涤1次。重悬菌体，进行菌悬液分组。
a、活细胞菌悬液：用生理盐水将细胞浓度调整至1×109CFU/mL，备用；
b、灭活细胞菌悬液：将细胞浓度为1×109CFU/mL的MRS-菌液培养物在4000rpm离心10min，收集菌体，生理盐水洗涤1次。重悬菌体，于95℃水浴10min，备用。
(2)羟自由基清除率的检测
分别设置四组试验：
A组、对照组(活细胞组)：在10mL试管中依次加入1mL 5mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL 5mmol/L硫酸亚铁，1mL 3mmol/L过氧化氢和1mL生理盐水，混合均匀。用双蒸水补足10mL，37℃水浴15min，于4℃、6000rpm离心10min，取上清液在510nm处测定吸光度(以双蒸 水为参比)。
B组、大豆肽复合益生菌JMCC0026组(活细胞组)：在10mL试管中依次加入1mL5mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL 5mmol/L硫酸亚铁，1mL 3mmol/L过氧化氢，0.5g市售大豆肽和0.5mL活细胞菌悬液，混合均匀。用双蒸水补足10mL，37℃水浴15min，于4℃、6000rpm离心10min，取上清液在510nm处测定吸光度(以双蒸水为参比)。
大豆肽复合益生菌JMCC0026组(灭活细胞组)：在10mL试管中依次加入1mL 5mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL 5mmol/L硫酸亚铁，1mL 3mmol/L过氧化氢，0.5g市售大豆肽和0.5mL灭活细胞菌悬液，混合均匀。用双蒸水补足10mL，37℃水浴15min，于4℃、6000rpm离心10min，取上清液在510nm处测定吸光度(以双蒸水为参比)。
C组、大豆肽组：在10mL试管中依次加入1mL 5mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL5mmol/L硫酸亚铁，1mL 3mmol/L过氧化氢和1g大豆肽混，混合均匀。用双蒸水补足10mL，37℃水浴15min，于4℃、6000rpm离心10min，取上清液在510nm处测定吸光度(以双蒸水为参比)。
D组、鼠李糖乳杆菌X253活细胞组：在10mL试管中依次加入1mL 5mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL 5mmol/L硫酸亚铁，1mL 3mmol/L过氧化氢和1ml鼠李糖乳杆菌X253活细胞菌悬液，混合均匀。用双蒸水补足10mL，37℃水浴15min，于4℃、6000rpm离心10min，取上清液在510nm处测定吸光度(以双蒸水为参比)。
鼠李糖乳杆菌X253灭活细胞组：在10mL试管中依次加入1mL 5mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL 5mmol/L硫酸亚铁，1mL 3mmol/L过氧化氢和1ml鼠李糖乳杆菌X253灭活细胞菌悬液，混合均匀。用双蒸水补足10mL，37℃水浴15min，于4℃、6000rpm离心10min，取上清液在510nm处测定吸光度(以双蒸水为参比)
其中，清除率的公式如下：
HO·清除率(％)＝[(Ao-As)/Ao]×100％
Ao为无样品的OD值；As为有样品的OD值。
结果如表4所示。
表4羟自由基清除率
Figure BDA0002485300400000101
结论：鼠李糖乳杆菌X253具有良好的羟自由基清除能力，有助于缓解运动疲劳；同时，鼠李糖乳杆菌X253复合大豆肽后，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽组合的抗氧化能力出现了协同增效的效果。
2、大豆肽复合益生菌JMCC0026的羟自由基清除能力检测。
检测大豆肽与鼠李糖乳杆菌X253的复合比例分别为：1:1、1:2、2:1、1:3、3:1时的羟自由基清除能力。检测方法同上。结果如表5所示。
表5羟自由基清除率
Figure BDA0002485300400000111
结论：当鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽复合比例大于1:1时，抗氧化能力出现了协同增效的效果。且当鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽复合比例为3:1时，抗氧化能力良好。
实施例6鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽复合比例与抗氧化能力相关性试验
经实施例5研究发现，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽复合存在协同增效作用。因此本实施例通过研究不同的鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的配比试验，验证其抗氧化作用与配比的相关性。并将相应配比以0.02:99.98的比例添加至表6的基础配方奶粉中，获得JMCC0026复合大豆肽奶粉，验证其对小鼠抗疲劳作用。其中，鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的复合比例分别为：1:1、1:2、2:1、1:3、3:1。
表6基础配方奶粉
Figure BDA0002485300400000112
Figure BDA0002485300400000121
本实施例的复合矿物质的配方为钠125mg、钾330mg、铜270μg、镁29mg、铁3mg、锌3.2mg、锰32μg、钙340mg、磷210mg、碘85μg、氯265mg、硒12μg。
本实施例的复合维生素的配方为：维生素A 365μg、维生素D 8μg、维生素E5.5mng、维生素K1 45μg、维生素B1 390μg、维生素B2 950μg、维生素B6 240μg、维生素B121.2μg、烟酸1800μg、叶酸75μg、泛酸2800μg、维生素C 68mg、生物素11μg。
应理解，在实际生产加工时，复合矿物质、复合维生素的组分和含量可以根据实际调整，以满足产品需要。
上述JMCC0026复合大豆肽奶粉的制备方法如下：
步骤一、分别称取上述重量的生牛乳、脱盐乳清粉、大豆油、浓缩乳清蛋白粉、低聚半乳糖、低聚果糖、磷脂、白砂糖、无水奶油、乳糖，备用；
步骤二、分别称取上述重量的花生四烯酸粉剂、复合矿物质、复合维生素、DHA藻油粉、氯化胆碱、碳酸钙、菊粉、谷氨酰胺、核苷酸，按上述重量份称取鼠李糖乳杆菌X253和大豆肽，备用；
步骤三、混料：将步骤一与步骤二中称量好的物料混合均匀，得到组合物A；
步骤四、包装：将所述组合物A称量、袋装或听装、密封。
实施例7JMCC0026复合大豆肽奶粉的抗疲劳作用和提高机体疲劳耐受能力的动物试验
(1)实验小鼠48只，随机分成6批，8只/批，在相对湿度为40-70％，温度为20-25℃的实验室中饲养30d，进行负重游泳实验。
(2)小鼠灌喂
A组：小鼠每日灌喂10mL实施例6的JMCC0026复合大豆肽奶粉(鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽质量比为1:1)，续灌胃30d后测定运动耐力
B组：小鼠每日灌喂10mL实施例6的JMCC0026复合大豆肽奶粉(鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽质量比为1:2)，连续灌胃30d后测定运动耐力。
C组：小鼠每日灌喂10mL实施例6的JMCC0026复合大豆肽奶粉(鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽质量比为2:1)，连续灌胃30d后测定运动耐力。
D组：小鼠每日灌喂10mL实施例6的JMCC0026复合大豆肽奶粉(鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽质量比为1:3)，连续灌胃30d后测定运动耐力。
E组：小鼠每日灌喂10mL实施例6的JMCC0026复合大豆肽奶粉(鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽质量比为3:1)，连续灌胃30d后测定运动耐力。
F组：小鼠每日灌喂10mL实施例6的基础配方奶粉，连续灌胃30d后测定运动耐力。
(3)小鼠负重游泳时间测试
小鼠受试物喂养30d，末次灌胃30min后，让小鼠在游泳箱中游泳，水深约35cm，水温保持在25℃±1℃，在小鼠尾部负荷小鼠体重5％的铅块或铅丝。从小鼠游泳开始计时，直至小鼠死亡结束，记录小鼠负重游泳时间。结果如表7所示。
表7小鼠负重游泳时间
Figure BDA0002485300400000131
结果显示：JMCC0026复合大豆肽奶粉可提高小鼠的抗疲劳作用和提高机体疲劳耐受能力。当鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽的质量比越大，实验小鼠负重游泳时间越长。当鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽的质量比为3:1时，实验小鼠负重游泳时间越长。
结论：当鼠李糖乳杆菌X253菌粉与大豆肽复合时，起到协同增效的作用，可以提高小鼠的抗疲劳作用和提高机体疲劳耐受能力。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 石家庄君乐宝乳业有限公司
<120> 一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌X253的应用
<130> 201049
<141> 2020-05-08
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1451
<212> DNA
<213> 鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)
<400> 1
cttagacggc tcgctcccta aaagggttac gccaccggct tcgggtgtta caaactctca 60
tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcggcg tgctgatccg 120
cgattactag cgattccgac ttcgtgtagg cgagttgcag cctacagtcc gaactgagaa 180
tggctttaag agattagctt gacctcgcgg tctcgcaacc tcgttgtacc catccattgt 240
agcacgtgtg tagcccaggt cataaggggc atgatgattt gacgtcatcc ccaccttcct 300
ccggtttgtc accggcaggt cttactagag tgcccaacta aatgctggca actagtcata 360
agggttgcgc tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca 420
tgcaccacct gtcattttgc ccccgaaggg gaaacctgat ctctcaggtg atcaaaagat 480
gtcaagacct ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg 540
tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttc aaccttgcgg tcgtactccc aggcggaatg 600
cttaatgcgt tagctgcggc actgaagggc ggaaaccctc caacacctag cattcatcgt 660
ttacggcatt ggactaccag ggtatctaat cctgttcgct acccatgctt tcgagcctca 720
gcgtcagtta cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata tatctacgca 780
tttcaccagc tacacatgga gttccactgt cctcttctgc actcaagttt cccagtttcc 840
gatgcacttc ctcggttaag ccgagggctt tcacatcaga cttaaaaaac cgcctgcgct 900
cgctttacgc ccaataaatc cggataacgc ttgccaccta cgtattaccg cggctgctgg 960
cacgtagtta gccgtggctt tctggttgga taccgtcacg ccgacaacag ttactctgcc 1020
gaccattctt ctccacaaca gagttttacg acccgaaagc cttcttcact cacgcggcgt 1080
tgctccatca gacttgcgtc cattgtggaa gattccctac tgctgcctcc cgtaggagtt 1140
tgggccgtgt ctcagtccca aatgtggccg atcaacctct cagttcggct acgtatcatt 1200
gccttggtga gccgttacct caccaactag ctaatacgcc gcgggtccat ccaaaagcga 1260
tagcttacgc catctttcag ccaagaacca tgcggttctt ggatttatgc ggtattagca 1320
tctgtttcca aatgttatcc cccacttaag ggcaggttac ccacgtgtta ctcacccgtc 1380
gccactcgtt caaaattaaa tcaagatgca agcacctttc aataatcaga actcgttcga 1440
cttgcatgta t 1451
<210> 2
<211> 468
<212> DNA
<213> 鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)
<400> 2
gggggaaaaa tagccgcacg caaacattcg gatgcaccat gccggcaccg agaacttcaa 60
tccagccggt atacttgcaa acagggcaac ccttgccacc gcagcggaag caggaaacgt 120
ccacttctac agacggttct gtaaacggaa aatagctcgg gcgcaggcga atcgtccgat 180
cagcgccaaa cacatgctga cacatggcga gtaacgtccc cttaagatca gccattgtaa 240
tatgcttgtc gatcaccaga ccttccatct gatggaactg gtggctatgt gtggcatcat 300
catcatcacg ccgataaacc acgcccggac tgatcatttt cagcgggccc ttagtaaaat 360
catgtttctc catcgtccgt gcctgcatcg ggctggtttg ggaacgcatc agcaactcat 420
tggtaatata aaaagtttcc tgcatatcac gagcatggat gacgccga 468

Claims (6)

1.一种具有抗疲劳作用和/或可提高机体疲劳耐受能力的鼠李糖乳杆菌X253在制备生物制品中的应用，其特征在于，所述生物制品以鼠李糖乳杆菌X253的菌液或菌粉为活性组分，还包括大豆肽，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO .18404，所述鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比为1:1～3:1。
2.如权利要求1所述的生物制品，其特征在于，所述的生物制品包括食品、保健品、药物及药物组合物。
3.一种具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的配方奶粉，其特征在于，以鼠李糖乳杆菌X253的菌液或菌粉为活性组分，还包括大豆肽，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO .18404，所述鼠李糖乳杆菌X253与大豆肽的质量比为1:1～3:1。
4.如权利要求3所述的具有抗疲劳作用和可提高机体疲劳耐受能力的配方奶粉，其特征在于，鼠李糖乳杆菌X253菌粉的添加量≥1×107cfu/g，或者，鼠李糖乳杆菌X253菌液的添加量≥1×107cfu/mL。
5.如权利要求3所述的配方奶粉，其特征在于，所述配方奶粉包括如下重量份的组分：
Figure QLYQS_1
其中，所述鼠李糖乳杆菌X253的保藏编号为CGMCC NO .18404。
6.一种如权利要求5所述的具有抗疲劳作用和可以提高机体疲劳耐受能力的配方奶粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、分别称取上述重量的生牛乳、脱盐乳清粉、大豆油、浓缩乳清蛋白粉、低聚半乳糖、低聚果糖、磷脂、白砂糖、无水奶油、乳糖，备用；
步骤二、分别称取上述重量的花生四烯酸粉剂、复合矿物质、复合维生素、DHA藻油粉、氯化胆碱、碳酸钙、菊粉、谷氨酰胺、核苷酸、鼠李糖乳杆菌X253，备用；
步骤三、混料：将步骤一与步骤二中称量好的物料混合均匀，得到组合物A；
步骤四、包装：将所述组合物A称量、袋装或听装、密封，获得配方奶粉。
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