ES2548210T3 - Derivados de pirazol útiles como inhibidores de la aldosterona sintasa - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** en la que n es 0, 1 o 2; m es 1 o 2; R1 y R2 son seleccionados independientemente entre hidrógeno, -CH3, y -CH2CH3; R3 es -CN, -F, -Cl, -CH3,-OCH3 o -CF3; R4 es seleccionado en cada caso independientemente entre -F, -Cl, -Br, -CH3, -OCH3, -CF3 y -CN; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Un compuesto especialmente preferido adicional de la presente invención es 4-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1Hciclopenta[c]pirazol-4-il)-3-fluoro-benzonitrilo, Isómero 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Un compuesto especialmente preferido adicional de la presente invención es 4-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1Hciclopenta[c]pirazol-4-il)-3-fluoro-benzonitrilo.

Un compuesto especialmente preferido adicional más de la presente invención es 4-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1Hciclopenta[c]pirazol-4-il)-3-fluoro-benzonitrilo, Isómero 1.

Los compuestos de la invención son inhibidores de la aldosterona sintasa. Por tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para inhibir la aldosterona sintasa que comprende administrar a un paciente que tenga necesidad de dicho tratamiento una cantidad de un compuesto de la presente invención que inhiba la aldosterona sintasa. Se prefiere que el paciente que se trate mediante la administración de los compuestos de la presente invención sea un mamífero, preferentemente humano.

Como inhibidores de la aldosterona sintasa, se cree que los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de la enfermedad renal crónica, la nefropatía diabética, la insuficiencia cardíaca congestiva y la hipertensión.

En una realización preferida, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de la enfermedad renal crónica.

En otra realización preferida, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de la nefropatía diabética.

En otra realización preferida más, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de la enfermedad renal crónica que comprende la coadministración de un compuesto de la invención y un inhibidor de la ECA a un paciente que tenga necesidad del mismo.

En una realización preferida adicional la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de enfermedades renales crónicas que comprende la coadministración de un compuesto de la invención y un ARA a un paciente que tenga necesidad del mismo.

Los compuestos de la presente invención, o las sales de los mismos, pueden prepararse mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, algunos de los cuales se ilustran en los esquemas, preparaciones y ejemplos a continuación. Las etapas sintéticas específicas para cada una de las vías descritas pueden combinarse de diferentes maneras, o junto con etapas de diferentes esquemas, para preparar compuestos de la presente invención o sales de los mismos. Los productos de cada etapa de los esquemas a continuación pueden recuperarse mediante procedimientos convencionales, incluyendo extracción, evaporación, precipitación, cromatografía, filtración, trituración o cristalización.

Ciertos centros estereoquímicos se han dejado sin especificar y ciertos sustituyentes se han eliminado de los siguientes esquemas para mayor claridad y no se pretende que limiten la enseñanza de los esquemas de ninguna manera. Además, los isómeros, enantiómeros o diastereómeros individuales pueden separarse en cualquier punto conveniente de la síntesis de compuestos de la presente invención por procedimientos tales como la cromatografía quiral. Adicionalmente, los intermedios descritos en los siguientes esquemas contienen varios grupos protectores de nitrógeno. El grupo protector variable puede ser el mismo o diferente cada vez que esté presente dependiendo de las condiciones de reacción particulares y las transformaciones particulares que se realicen. Las condiciones de protección y desprotección son bien conocidas por el experto en la materia y se describen en la bibliografía. Véase, por ejemplo, Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, tercera edición, capítulo 7, John Wiley and Sons Inc., (1999).

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como THF con alcohol isopropílico, dioxano y agua o un ácido tal como ácido acético puede utilizarse para facilitar la reacción para proporcionar un compuesto de fórmula (3, etapa 1). La cetona después puede alquilarse con el acetal dimetílico de la dimetilformamida o t-butoxi bis(dimetilamino)metano (reactivo de Bredereck) para proporcionar el aducto dimetilaminometileno, el compuesto (4, etapa 2) que después puede ciclarse para formar el pirazol utilizando

5 hidrazina, hidrato de hidrazina o clorhidrato de hidrazina para proporcionar compuestos de la presente invención en la etapa 4. Como alternativa, un compuesto de fórmula (3) puede conducirse directamente a los compuestos de la presente invención sin aislamiento del compuesto intermedio (4) mediante reacción con el reactivo de Bredereck y después la reacción in situ con el reactivo de hidracina para proporcionar compuestos de la presente invención, etapa 3.

10 Como alternativa, cuando R1 y R2 son hidrógeno los dos, puede introducirse una función gem dialquilo utilizando un reactivo de yodo-alquilo en presencia de una base, tal como hexametildisililazida de litio.

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Como alternativa, el tetrahidroindazol-4-ona apropiadamente protegido como una mezcla de regioisómeros de

pirazol puede separarse cromatográficamente o hacerse reaccionar como una mezcla. El grupo protector pirazol 15 puede residir en cualquier átomo de nitrógeno y se asignó arbitrariamente. Un experto en la materia reconocerá que

la posición de la protección de pirazol puede intercambiarse sin afectar el resultado de las reacciones posteriores

que se muestran. "GP" es un grupo protector del grupo amino. Dichos grupos protectores son bien conocidos y

apreciados en la técnica. El compuesto 5 puede alquilarse con un reactivo de Grignard que se prepara mediante el

tratamiento del análogo de 4-yodofenol apropiadamente sustituido con cloruro o bromuro de isopropilmagnesio en un 20 disolvente apropiado tal como THF para proporcionar el 5,6-dihidro-2H-indazol-4-ol (6, etapa 5). En una realización,

los carbinoles (6) pueden deshidratarse y desprotegerse en una única transformación para proporcionar el alqueno

(7, etapa 6) mediante tratamiento con un ácido tal como HCl o ATF en un disolvente alcohólico tal como etanol. El

compuesto (7) después puede reducirse mediante hidrogenación para proporcionar el compuesto (8, etapa 7). Como

alternativa, la secuencia puede realizarse por etapas mediante el tratamiento de (6) con ATF en DCM, la olefina 25 resultante puede reducirse mediante hidrogenación utilizando catalizadores tales como Pt(OH)2, y desprotegerse con

una base tal como KOH en MeOH para proporcionar el compuesto (8)

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El esquema III representa la alquilación de un compuesto apropiado de fórmula (9) con un ácido arilborónico para proporcionar el compuesto (10) que después de la hidrogenación y la desprotección proporciona un compuesto de la presente invención. Un experto en la materia puede reconocer que el orden de la etapa 10 puede transponerse para

5 proporcionar un compuesto de fórmula (8).

Por ejemplo, los regioisómeros tetrahidroindazol-4-ona protegidos (5) pueden separarse cromatográficamente o hacerse reaccionar como una mezcla con una base adecuada tal como LiHMDS en un disolvente aprótico polar tal como THF y el enolato resultante inactivarse con N-fenilbis(trifluorometanosulfonamida) para proporcionar el triflato de enol (9, etapa 8) como una mezcla de regioisómeros que puede separarse cromatográficamente o hacerse 10 reaccionar como una mezcla. El compuesto 9 puede hacerse reaccionar con un ácido borónico apropiado (2) en condiciones de acoplamiento cruzado de Suzuki-Miyaura para proporcionar el compuesto 10, etapa 9. El experto en la materia reconocerá que existe una variedad de condiciones útiles para facilitar este tipo de reacciones de acoplamiento cruzado. Por consiguiente, un reactivo de paladio adecuado incluye tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) con triciclohexilfosfina, cloruro de (1,1'

15 bis(difenilfosfino)ferroceno)paladio(II) o acetato paladio (II). Una base adecuada incluye carbonato de cesio, carbonato de sodio, carbonato de potasio o monohidrato tribásico de fosfato de potasio. El compuesto (10) puede hidrogenarse y el producto resultante desprotegerse para proporcionar un compuesto de fórmula (I, etapa 10). Un experto en la materia puede reconocer que las dos últimas transformaciones pueden transponerse para proporcionar un compuesto de fórmula (8).

20 Preparaciones y ejemplos

Las siguientes preparaciones y ejemplos ilustran adicionalmente la invención. La preparación 40 y el ejemplo 43 se proporcionan con fines de referencia solamente.

A menos que se indique lo contrario, los compuestos ilustrados en el presente documento se nombran y se numeran utilizando Symyx® Draw versión 3.2 (Symyx Solutions, Inc.) o IUPACNAME ACDLABS.

25 Preparación 1

5,5-Dimetilciclopent-2-en-1-ona

Se añade 2,2-dimetilciclopentanona (50,0 g, 445,75°mmol) a una solución de fosfato de alildietilo (165,4 g, 846,92 mmol) en alcohol t-amílico (557 ml). Se añaden carbonato de potasio (75,5 g, 537,12°mmol) y Pd(OAc)2 (5 g, 22,29°mmol) y la mezcla se calienta a 80°ºC durante 12 horas. La mezcla se enfría a temperatura ambiente, se 30 diluye con acetona, (500 ml) se filtra a través de tierra de diatomeas y se concentra a sequedad. El material en bruto

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(continuación)

Prep.

Nombre químico RMN 1H (300 MHz) δ o EN/EM

10

(+/-)4-(4,5-difluoro-2-metil-fenil)-2,2dimetilciclopentanona (m/z) 238

11

(+/-)-2-fluoro-4-(3,3-dimetil-4-oxociclopentilo)benzonitrilo 7,59-7,64 (m, 1H), 07,13-07,20 (m, 2H), 3,46-3,53 (m, 1H), 2,75-2,82 (m, 1H), 2,28-2,43 (m, 2H), 1.88-1,91 (m, 1H), 1,151,20 (m, 6H).

12

(+/-)3-(4-clorofenil)ciclopentanona 7,28-7,31 (m, 2H), 7,16-7,20 (m, 2H), 3,36-3,39 (m, 1H), 2,612,69 (m, 1H), 2,23-2,48 (m, 4H), 1,93-2,03 (m, 1H),

13

(+/-)4-(3-oxociclopentil)benzonitrilo 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,54-3,42 (m, 1H), 2,74-2,66 (m, 1H), 2,54-2,43 (m, 2H), 2,37-2,27 (m, 2H), 2,02-1,91 (m, 1H).

14

(+/-)3-(4-fluorofenil)ciclopentanona 7,25-7,18 (m, 2H), 7,05-7,00 (t, 2H), 3,48-3,31 (m, 1H), 2,67 (dd, 1H), 2,51-2,22 (m, 4H), 2,02-1,85 (m, 1H).

15

(+/-)4-(4-clorofenil)-2,2dimetilciclopentanona (m/z) 223 (M+1)

17

(+/-)-4-(4-cloro-3-fluoro-fenil)-2,2dimetilciclopentanona (m/z) 239,0 (M-1)

18

(+/-)-4-(4-cloro-2-fluoro-fenil)-2,2dimetilciclopentanona (m/z) 241,0

20

(+/-)-4-(3,4-difluorofenil)-2,2dimetilciclopentanona (m/z) 224,0

21

(+/-)-4-(4-fluorofenil)-2,2dimetilciclopentanona (m/z) 205,0 (M-1)

23

(+/-)4-(3-cloro-4-fluoro-fenil)-2,2dimetilciclopentanona 7,25 (d, 1H), 07,15-07,05 (m, 2H), 3,4-3,3 (m, 1H), 2,74 (dd, 1H), 2,3 (dd, 1H), 02,25-02,19 (m, 1H), 1,8 (t, 1H), 1,11 (s, 3H), 1,05 (s, 3H)

Preparación 26

(+/-)-(2Z)-3-(3,4-difluorofenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanona

5 A (+/-)-3-(3,4-difluorofenil)ciclopentanona (6,9 g, 35°mmol) se le añade acetal dietílico de N,N-dimetilformamida (80 ml) y se agita a 80°ºC durante la noche. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, eluyendo con metanol al 2 % en cloroformo, para proporcionar la mezcla en bruto en forma de un aceite de color amarillo (8,5 g, 96 %). CL/EM (M+H) 234.

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente como se ha descrito para la (+/-)-(2Z)-3-(3,4-difluorofenil)-210 ((dimetilamino)metilen)ciclopentanona

Tabla 2

Prep.

Nombre químico EN/EM (m/z) (M+1)

27

(+/-)-(2Z)-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanona 268

28

(+/-)-(2Z)-3-(3,4-diclorofenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanonaa 284

29

(+/-)-2-cloro-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilene)-3-oxo-ciclopentil]benzonitrilob 275

30

(+/-)-(2Z)-3-(4-trifluorometilfenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanona

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(continuación)

Prep.

Nombre químico EN/EM (m/z) (M+1)

31

(+/-)-3-cloro-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-4,4-dimetil-3-oxociclopentil]benzonitrilo 303

32

(+/-)-(5Z)-4-(4,5-difluoro-2-metil-fenil)-5-(dimetilaminometilen)-2,2-dimetilciclopentanona

33

(+/-)-2-fluoro-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-4,4-dimetil-3-oxociclopentil]benzonitrilo 287

34

(+/-)-(2Z)-3-(4-clorofenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanonac 250

35

(+/-)-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-3-oxo-ciclopentil]benxonitrile 241

36

(+/-)-(2Z)-3-(4-fluorofenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanona 234

37

(+/-)-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-4,4-dimetil-3-oxo-ciclopentil]benzonitriloa 269

a. Después de que la reacción se concentre al vacío, el residuo se diluye con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separe y la acuosa se extrae tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinan y se lavan con salmuera, se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. La cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 50 % y éter de petróleo, seguida de metanol/diclorometano al 2 % proporciona el compuesto del título. b. El mismo procedimiento que en (a). La cromatografía ultrarrápida eluyendo con acetato de etilo al 50 %y éter de petróleo, seguida de metanol/diclorometano al 4 % proporciona el compuesto del título. c. La reacción se realiza con butoxi-N,N,N',N'-tetrametilmetanodiamina en tolueno y se calienta a 60°ºC, durante la noche. El procedimiento se describe en (a) y la cromatografía utiliza metanol/diclorometano al 2 %.

Preparación 38

(+/-)-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-4,4-dietil-3-oxo-ciclopentil]benzonitrilo

5 Se añade hexametildisililazida de litio (40 ml, 40°mmol) a una solución de (+/-)-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-3-oxociclopentil]benzonitrilo (0,96 g, 4°mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml), gota a gota a -30°ºC, en una atmósfera de argón y se agita durante una hora. A la misma temperatura, se añade yodoetano (12,48 g, 80°mmol) gota a gota a la mezcla y la mezcla de reacción se deja calentar a temperatura ambiente y se agita durante la noche. La reacción se inactiva mediante la adición de cloruro de amonio saturado (100 ml). La mezcla resultante se extrae con

10 acetato de etilo (100 ml 3 veces). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra al vacío para proporcionar el producto en bruto en forma de un sólido de color negro (0,99 g, 83,4 %). Éste se utiliza en la siguiente etapa sin purificación adicional. EN/EM (m/z) 297 (M+1.)

El siguiente compuesto se prepara esencialmente como se ha descrito para (+/-)-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-4,4dietil-3-oxo-ciclopentil]benzonitrilo.

15 Tabla 3

Prep.

Nombre químico EN/EM (m/z) (M+1)

39

(+/-)-4-[(2Z)-2-(dimetilaminometilen)-4-metil-3-oxo-ciclopentil]benzonitrilo 255

Preparación 40 (REF)

(3S)-3-(3-clorofenil)ciclopentanona

Se disuelven tetrafluoroborato de bis(norbornadieno)rodio(I) (0,20 g, 0,53°mmol) y (S)-(-)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'

20 binaftilo (0,30 g, 0,48°mmol) en 1,4-dioxano (18 ml). La solución se desgasifica con nitrógeno durante 2 horas. Se disuelve ácido 3-clorofenilborónico (4,95 g, 31,67°mmol) en dioxano (24 ml) y agua (6 ml). La mezcla se desgasifica durante otras 2 horas. Las dos soluciones se combinan y se agitan durante dos horas en una corriente de nitrógeno. Se añaden 2-ciclopentenona (2,0 g, 24,36°mmol) y trietilamina (2,1 ml, 15,07°mmol) secuencialmente a la reacción, por medio de una jeringa. Se agita hasta la terminación en una corriente de nitrógeno. La reacción se filtra a través

25 de un lecho de tierra de diatomeas y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida

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residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con hexanos al 60 %/acetato de etilo para proporcionar los compuestos del título. Esta reacción se realiza por segunda vez a la misma escala y los productos de ambas realizaciones se combinan para proporcionar los compuestos del título como una mezcla de regioisómeros (8,98 g, 53 %). EN/EM m/z 394 (M+H).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento de 4-[4-hidroxi-1-(p-tolilsulfonil)6,7-dihidro-5H-indazol-4-il]benzonitrilo y 4-[4-hidroxi-2-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-il]benzonitrilo utilizando el haluro de arilo apropiado.

Tabla 5

Prep.

Haluro de arilo Nombre químico EN/EM (m/z) (M+1)

49

Bromuro de 4tolilmagnesio (2,0 eq) 4-(p-tolil)-1-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-ol y 4-(ptolil)-2-(p-tolilsultonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-ol 383, 364 (M-18)

50

p-yodo anisol (2,0 eq) 4-(4-metoxifenil)-2-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-ol y 4-(4-metoxifenil)-1-p-)(tolilsulfonil-6,7-dihidro-5H-indaxol-4ol 399, 381 (M-18)

51

Bromuro de 4clorofenilmangnesio (2,0 eq) 4-(4-clorofenil)-1-p-)(tolilsulfonil-6,7-dihidro-5H-indazol-4-ol y 4-(4-clorofenil)-2-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-ol 405, 404

10 Preparación 52

4-(6,7-dihidro-2H-indazol-4-il)benzonitrilo

Una mezcla de 4-[4-hidroxi-1-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-il]benzonitrilo y 4-[4-hidroxi-2-(p-tolilsulfonil)6,7-dihidro-5H-indazol-4-il]benzonitrilo (8,56 g, 21,7°mmol) se añade a HCl 4,0 M en dioxano (20,0 ml, 80,0°mmol), se calienta a 80°ºC durante 2,0 h y se concentra a sequedad. El residuo se disuelve en diclorometano/agua, se

15 separa y los extractos orgánicos se secan sobre Na2SO4, se filtran y se evaporan. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice con acetato de metilo al 80 %/hexanos para proporcionar el compuesto del título (3,21 g, 67 %). EN/EM m/z 222 (M+H), 220 (M-H).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento del 4-(6,7-dihidro-2H-indazol-4il)benzonitrilo.

20 Tabla 6

Prep.

Nombre químico EN/EM (m/z) (M+1)

53

4-(p-tolil)-6,7-dihidro-1H-indazol 211

54

4-(4-metoxifenil)-6,7-dihidro-1H-indazol 227

Preparación 55

4-(4-clorofenil)-2-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidroindazol

Se añade 4-(4-clorofenil)-2-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidro-5H-indazol-4-ol (0,76 g, 1,89°mmol) a diclorometano (20,0 ml),

25 trietilsilano (6,04 ml, 37,7°mmol) y ATF (0,16 ml, 2,07°mmol) y se agitan a temperatura ambiente durante 2,0 h. La reacción se inactiva con NaHCO3 saturado, se separa, los extractos orgánicos se lavan con salmuera, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se evaporan a sequedad para proporcionar el compuesto del título (0,622 g, 86 %). RMN 1H (CDCl3) δ 2,42 (s, 3H), 2,55 (m, 2H), 2,82 (t, 2H), 5,98 (t, 1H), 7,37-7,31 (m, 6H), 7,81 (s, 1H), 7,87 (d, 2H).

Preparación 56

30 4-(4-clorofenil)-2-(p-tolilsulfonil)-4,5,6,7-tetrahidroindazol

Se añade 4-(4-clorofenil)-2-(p-tolilsulfonil)-6,7-dihidroindazol (0,62 g, 1,89°mmol) a etanol (20,0 ml) y acetato de etilo (10 ml). Se añade óxido de platino(IV) (0,22 g) y la reacción se agita en 275,79 kPa de hidrógeno a temperatura ambiente durante 6,0 h. La mezcla se filtra a través de un lecho de tierra de diatomeas y se evapora a presión

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dihidroindazol-4-il)benzonitrilo (0,492 g, 1,54°mmol) y Pd/C al 5 % % peso/peso (0,15 g) a EtOH (20,0 ml) y la mezcla se agita en 310,25 a 241,32 kPa de hidrógeno durante 72 horas. La mezcla se filtra a través de un lecho de tierra de diatomeas y se concentra a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con hexanos/acetato de etilo 7:3 para proporcionar uno de los compuestos del título (0,162 g, 33 %) como un único regioisómero. EN/EM m/z 322 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara esencialmente mediante el procedimiento de 3-metil-4-(1-tetrahidropiran-2-il4,5,6,7-tetrahidroindazol-4-il)benzonitrilo o 3-metil-4-(2-tetrahidropiran-2-il-4,5,6,7-tetrahidroindazol-4-il)benzonitrilo.

Tabla 8

Prep.

Nombre químico EN/EM (m/z) (M+1)

62

2-metoxi-4-(1-tetrahidropiran-2-il-4,5,6,7-tetrahidroindazol-4-il)benzonitrilo o 2-metoxi4-(2-tetrahidropiran-2-il-4,5,6,7-tetrahidroindazol-4-il)benzonitrilo 338

Preparación 63

2-fluoro-4-(1-tetrahidropiran-2-il-6,7-dihidroindazol-4-il)benzonitrilo y 2-fluoro-4-(2-tetrahidropiran-2-il-6,7-dihidroindazol-4-il)benzonitrilo

Se añaden (1-tetrahidropiran-2-il-6,7-dihidroindazol-4-il)trifluorometanosulfonato, (2-tetrahidropiran-2-il-6,7dihidroindazol-4-il)trifluorometanosulfonato (0,201 g, 0,57°mmol) y ácido (4-ciano-3-fluorofenil)borónico (0,103 g, 0,63°mmol) a dioxano (7,0 ml) y Na2CO3 (0,12 mg, 1,14°mmol, 2,0 M) y la mezcla se desgasifica con una corriente de nitrógeno. La solución se trata con tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,07 g, 0,06°mmol) y se calienta a 80°ºC en nitrógeno durante 6 horas y 72 horas adicionales a temperatura ambiente. La reacción se inactiva con agua, se diluye con acetato de etilo, la capa orgánica se separa, se lava con NaHCO3 saturado, salmuera, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a sequedad. El residuo, se lleva a la siguiente reacción sin purificación adicional (0,231 g, 125 %).

Preparación 64

4-(6,7-dihidro-1H-indazol-4-il)-2-fluoro-benzonitrilo

Se añaden 2-fluoro-4-(1-tetrahidropiran-2-il-6,7-dihidroindazol-4-il)benzonitrilo y 2-fluoro-4-(2-tetrahidropiran-2-il-6,7dihidroindazol-4-il)benzonitrilo (0,23 g, 0,71°mmol) y H2SO4 (0,08 ml, 1,43°mmol) a CH3CN (5,0 ml) y la solución se agita a temperatura ambiente durante 6,0 horas. Se añade de Na2CO3 acuoso para basificar la reacción, que después se diluye con acetato de etilo, se separan las capas y la fase acuosa se extrae de nuevo con acetato de etilo (3 veces). Los extractos orgánicos se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice eluyendo con CH2Cl2/MeOH 99:1 para proporcionar el compuesto del título (0,102 g, 60 %). ES/EM m/z 240 (M+H).

Preparación 65

(+/-)-(trans)-4-(4-metil-3-oxo-ciclohexil)benzonitrilo y

Preparación 66

(+/-)-(cis)-4-(4-metil-3-oxo-ciclohexil)benzonitrilo

Se añaden bis(cloruro de 1,5-ciclooctadieno-rodio) (0,06 g, 0,12°mmol) y 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo racémico (0,18 g, 0,29°mmol) a tetrahidrofurano (40 ml) y la mezcla se agita en una atmósfera de nitrógeno durante 30 minutos. Esta solución se añade a una mezcla de ácido 4-cianofenilborónico (2,31 g, 15,69°mmol), 6metilciclohex-2-en-1-ona (Journal of Organic Chemistry, 1,980 45 (10), 1852-1863) (1,28 g, 11,62°mmol), carbonato de potasio (2,19 g, 15,69°mmol) y alcohol isopropílico (1,1 ml) a 60°ºC. La mezcla se agita a 60°ºC durante 16 horas y después se concentra a sequedad. La mezcla en bruto se vierte en agua (10 ml) y se extrae con acetato de etilo (20 ml 2 veces). Los extractos orgánicos se secan sobre MgSO4, se filtran a través de gel de sílice y se concentran a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, eluyendo con EtOAc al 20 %/hexano para proporcionar (trans)-4-(4-metil-3-oxo-ciclohexil)benzonitrilo (0,55 g, 22 %) en forma del primer isómero en eluir y (cis)-4-(4-metil-3-oxo-ciclohexil)benzonitrilo (0,55 g, 22 %) en forma del segundo isómero en eluir. EN/EM m/z 2,14 (M+H).

Preparación 67

(+/-)-(cis/trans)-4-[7-metil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-4-il]benzonitrilo

5

10

15

20

25

30

35

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Se añade (cis)-4-(4-metil-3-oxo-ciclohexil)benzonitrilo (0,55 g, 2,58°mmol) a tolueno (10,0 ml) y terc-butoxibis(dimetilamino)metano (0,67 ml, 3,22°mmol) y se agita a 120°ºC durante 16 horas. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se añade a MeOH (10,0 ml) e hidrazina (0,07 ml, 2,32°mmol) y se agita a 80°ºC durante 1,0 hora. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 35 %-55 %/hexanos) para proporcionar (+/-)-(cis/trans)-4-[7-metil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-4-il]benzonitrilo (0,360 g, 58 %). EN/EM m/z 238 (M+H).

Preparación 68

(+/-)-4-(4,4-dimetil-3-oxo-ciclohexil)-3-metil-benzonitrilo

Se añaden ácido 4-ciano-2-metilfenilborónico (0,81 g, 5°mmol), 6,6-dimetilciclohex-2-enona (Canadian Journal of Chemistry, 1981, 59, 2096-2115) (0,55 g, 5°mmol), SbCl3 (0,11 g, 0,5°mmol), acetato de sodio (0,82 g, 10°mmol) y acetato de paladio (0,11 g, 0,5°mmol) a ácido acético (30 ml) en una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante tres días. La mezcla se filtra y el filtrado se vierte en agua (150 ml). La fase orgánica se separa y la fase acuosa se extrae con acetato de etilo (100 ml 3 veces). Las capas orgánicas combinadas se lavan con solución saturada de bicarbonato de sodio (100 ml 3 veces), salmuera (50 ml 3 veces), se secan sobre sulfato de sodio anhidro y se concentran al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:EtOAc = 10:1 para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro (0,6 g, 50 %). CG/EM 241 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento del (+/-)-4-(3-oxo-ciclohexil-4,4dimetil)-3-metil-benzonitrilo.

Tabla 9

Prep.

Nombre químico CG/EM (m/z) (M+1)

69

(+/-)-4-(4,4-dimetil-3-oxo-ciclohexil)-3-fluoro-benzonitrilo 245

70

(+/-)-4-(4,4-dimetil-3-oxo-ciclohexil)-2-fluoro-benzonitrilo a

a. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 7,60-7,56 (m, 1H), 7,14-7,7 (m, 2H), 3,08-3,00 (m, 1H), 2,73-2,67 (m, 1H), 2,51-2,46 (m , 1H), 2,03-1,60 (m, 4H), 1,25 (s, 3H), 1,12 (s, 3H).

Preparación 71

(+/-)-4-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol

Se disuelve 4-(4-metoxifenil)-6,7-dihidro-1H-indazol (0,141 g, 0,62°mmol) en EtOH (10 ml) y THF (4 ml) y se añade Pd/C al 5 % (0,090 g). La mezcla se agita en hidrógeno (275,79 kPa) durante 4 horas. La mezcla se filtra a través de tierra de diatomeas y el filtrado se evapora a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con CH2Cl2:MeOH 98:2 para proporcionar el compuesto del título (0,121 g, 85 %). EN/EM m/z 229 (M+1).

Ejemplo 1

4-[(4R)-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol-4-il)]benzonitrilo

[

imagen14

Se añade DMF-DMA (46,26 g, 388,22°mmol) a (+/-)-4-{3,3-dimetil-4-oxo-ciclopentil)benzonitrilo (46 g, 213,52°mmol) y la mezcla se agita a 100°ºC durante 16 horas. El exceso de DMF-DMA se retira mediante vacío. Se añade alcohol isopropílico (248 ml) seguido de monohidrato de hidrazina (10,69 g, 324,61°mmol) y ácido acético (11,12 ml). La mezcla se calienta a 80°ºC durante 12 horas. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y el disolvente se evapora

5

10

15

20

25

30

35

40

45

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a sequedad. Se añade agua (50 ml) y la mezcla se extrae con DCM (50 ml 3 veces). Los extractos orgánicos se secan sobre MgSO4, se filtran y se concentran a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, eluyendo con hexano-acetato de etilo 1:1. La mezcla de enantiómeros se purifica mediante HPLC quiral Chiralpak AD utilizando AIP al 40 %/n-hexano al 60 % (DMEA al 2 %), tamaño de la columna, 20°µm, 8×25°cm, caudal de 300 ml/min, detección UV a 254 nm y carga de 5 g/5 min. El enantiómero R (isómero 1) se obtiene mediante la recogida de la fracción que eluye a los 5,53 minutos

El enantiómero R se purifica adicionalmente mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice eluyendo con hexano-acetona 4:1 para proporcionar el compuesto del título (9,2 g, 38,77°mmol) en forma de un sólido de color amarillo. EN/EM (m/z) 238 (M+1), RMN 1H (300,16 MHz,CDCl3) δ 7,60-7,58 (m, 2H), 7,36 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,17 (s, 1H), 4,36 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,74 (dd, J = 7,7, 12,6 Hz, 1H), 2,23-2,16 (m, 1H), 1,40 (s, 3H), 1,35 (s, 3H).

Ejemplo 1a

Hemihidrato de 4-[(4R)-6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol-4-il]benzonitrilo

imagen15

Se suspende 4-[(4R)-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol-4-il)]benzonitrilo (45 mg, 0,190°mmol) en agua (1 ml) y se suspende a temperatura ambiente durante 1 hora. Los sólidos se filtran al vacío y se secan al aire para proporcionar el compuesto del título (35 mg, 76 %).

Difracción de rayos X de polvo

Los patrones de RXP de los sólidos cristalinos se obtienen en un difractómetro de rayos X de polvo Bruker D4 Endeavor, equipado con una fuente CuKa (λ = 1,54060 Å) y un detector Vantec, que opera a 35 kV y 50 mA. La muestra se explora entre los 4 y los 40 º en 2θ, con un tamaño de etapa de 0,0087 º en 2θ y una velocidad de barrido de 0,5 segundos/etapa y con 0,6°mm de divergencia, anti-dispersión fijada a 5.28°mm y rendijas de detector de 9,5°mm. El polvo seco se envasa en un soporte de muestra de cuarzo y se obtiene una superficie lisa utilizando un portaobjetos de vidrio. Es bien conocido en la técnica cristalográfica que, para cualquier forma cristalina dada, las intensidades relativas de los picos de difracción pueden variar debido a la orientación preferida que resulta de factores tales como la morfología y el hábito cristalinos. Cuando los efectos de la orientación preferida están presentes, las intensidades de pico se alteran, pero las posiciones de los picos característicos del polimorfo se mantienen sin cambios. Véase, por ejemplo, la U.S. Pharmacopeia 33 National Formulary 28 Chapter <941> Characterization of Crystalline Solids by X-ray Powder Diffraction (XRPD) Official, 1 de octubre de 2010 -1 de febrero de 2011. Además, también es bien conocido en la técnica cristalográfica que para cualquier forma cristalina dada las posiciones angulares de los picos pueden variar ligeramente. Por ejemplo, las posiciones de los picos pueden desplazarse debido a una variación en la temperatura o la humedad a la que se analiza una muestra, al desplazamiento de la muestra o a la presencia o ausencia de un patrón interno. En el caso del presente documento, una variabilidad de la posición del pico de 0,2 en 2θ tendrá en cuenta estas variaciones potenciales sin obstaculizar la identificación inequívoca de la forma cristalina indicada. La confirmación de una forma cristalina puede hacerse en base a cualquier combinación única de picos característicos (en unidades de º 2θ), típicamente los picos más prominentes. Los patrones de difracción de la forma cristalina, recogidos a temperatura ambiente y a la humedad relativa, se ajustan en base a los picos estándar NIST 675 a 8,85 y a 26,77 grados 2-theta.

Una muestra preparada del compuesto del título se caracteriza, mediante un patrón de RXP utilizando radiación CuKa, por tener picos de difracción (valores 2-theta) como se describen en la tabla 1 a continuación. Específicamente, el patrón contiene un pico a 23,75 en combinación con uno o más de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 12,19, 15,53, 17,23, 17,78 y 20,61, con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0,2 grados.

Pico

Ángulo (º 2-Theta) Intensidad (%)

1

6,06 25

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(continuación)

Pico

Ángulo (º 2-Theta) Intensidad (%)

2

12,19 65

3

15,53 71

4

15,77 33

5

17,23 58

6

17,78 95

7

18,31 20

8

19,00 24

9

20,61 98

10

21,62 26

11

22,31 45

12

23,75 100

13

24,55 19

14

25,01 21

15

26,09 27

16

26,41 44

17

27,96 43

Ejemplo 1b Ácido fosfórico 4-[(4R)-6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol-4-il]benzonitrilo

imagen16

5

Se disuelve 4-[(4R)-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol-4-il)]benzonitrilo (445 mg) en acetato de isopropilo (1 ml). A esta mezcla se le añade ácido fosfórico 15 M (150 µl, 1,2 eq) gota a gota. Se observa cristalización rápida localizada y una breve sonicación en un baño de agua precipita un gran lecho de sólidos de color blanco brillante. Este lecho se rompe mediante la adición de acetato de isopropilo (3 ml) para proporcionar una suspensión suelta.

10 Los sólidos después se filtran al vacío y se secan al aire para proporcionar el compuesto del título (585 mg, 93 %).

Difracción de rayos X de polvo

Los patrones de RXP de los sólidos cristalinos se preparan como se ha descrito en el ejemplo 1a.

El compuesto del título se caracteriza, mediante un patrón de RXP utilizando radiación CuKa, por tener picos de difracción (valores 2-theta) como se describen en la tabla 1 a continuación. Específicamente, el patrón contiene un

15 pico a 5,56 en combinación con uno o más de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 12,69, 16,97, 18,25, 19,39 y 22,92, con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0,2 grados.

imagen17

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mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 20 % en hexanos para obtener el compuesto del título (0,035 g, 13 %) en forma de una película de color amarillo. EN/EM (m/z) 247,0 (M+1).

Los siguientes ejemplos se prepararon esencialmente como se ha descrito para el (+/-)-4-(4-clorofenil)-6,6-dimetil4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol.

Tabla 10

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+H)

5

(+/-)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol 265

6

(+/-)-4-(4-cloro-2-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol 265

8

(+/-)-4-(3,4-Difluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol imagen18 249

9

(+/-)-4-(4-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol 231

11

(+/-)-4-(3-cloro-4-fluoro-fenil)-2,2-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol imagen19 265

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Ejemplo 14 (+/-)-4-(3,4-difluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol

imagen20

A la mezcla de (+/-)-(2Z)-3-(3,4-difluorofenil)-2-((dimetilamino)metilen)ciclopentanona (8,5 g, 34°mmol) en etanol

5 (200 ml) se le añade hidrato de hidrazina (15 ml) y la mezcla se calienta a 80°ºC, durante la noche. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante HPLC preparatoria utilizando un instrumento CXTH con una columna Daiso 10 µC18 250×50°mm, una inyección de 9 ml, un caudal de 70 ml/min, una longitud de onda de 214 nm y una fase móvil de acetonitrilo al 10-80 % en ATF al 0,1 %/H2O para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (2,1 g, 28 %). EN/EM m/z 221 (M+H).

10 Los siguientes ejemplos se prepararon esencialmente como se ha descrito para el (+/-)-4-(3,4-difluorofenil)-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol.

Tabla 11

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

15

(+/-)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol 237

16

Clorhidrato de (+/-)-4-(3,4-diclorofenil)-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazola 254

17

Clorhidrato de (+/-)-2-cloro-4-(1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pyrazol-4-il)benzonitriloa 244

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(continuación)

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

18

(+/-)-4-(4-trifluorometilfenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol 253

19

(+/-)-3-cloro-4-(6,6-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pyrazol4-il)benzonitrilob 272

20

(+/-)-4-(4,5-difluoro-2-metilfenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazolc 263

21

Clorhidrato de (+/-)-4-(6,6-dietil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pyrazol-4-il)benzonitriloa, c 266

22

Clorhidrato de (+/-)-4-(6-metil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol-4-il)benzonitriloa,c 224

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23-09-2015

(continuación)

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

23

Clorhidrato de (+/-)-2-fluoro-4-(6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pyrazol-4-il)benzonitriloa 256

24

(+/-)-4-(4-clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol 219

25

(+/-)-4-(1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pyrazol-4-il)benzonitrilo 210,2

26

(+/-)-4-(4-fluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazolc 203.2

a. Después de la terminación y la concentración al vacío, el residuo se diluye con solución de bicarbonato de sodio saturado y se extrae con acetato de etilo (3 veces). Los extractos orgánicos se combinan, se lavan con salmuera, se secan sobre sulfato de sodio y se concentran al vacío. Esto se purifica mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con éter de petróleo:etil acetato 2:1. El producto en bruto después se somete a las condiciones de HPLC preparatoria antes mencionados y se acidifica con HCl en acetato de etilo, para proporcionar un sólido de color blanco como el compuesto del título. b. Se utiliza una cantidad catalítica de ácido acético. La reacción se realiza a temperatura ambiente durante doce horas. c. Se utiliza clorhidrato de hidrazina en lugar de hidrato de hidrazina.

Ejemplo 27 4-(3,4-difluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1

26

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imagen21

El material racémico se somete a cromatografía quiral utilizando una columna Chiralcel® OJ-H de 4,6×150°mm con EtOH 3A al 20 %:CO2 al 80 %, un caudal de 5,0 ml/min a UV de 230 nm para proporcionar el enantiómero puro, isómero 1. Éste después se repurifica mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente escalonado, desde acetato de etilo al 25 %-50 %/tolueno, para proporcionar el compuesto del título (0,121 g, 6,1 %). EN/EM (m/z) 221,2 (M+1).

Los siguientes ejemplos se preparan esencialmente como se ha descrito para el 4-(3,4-difluorofenil)-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1.

Tabla 12

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

28

4-(4-fluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1a imagen22 203,2

29

4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1b imagen23 237,2

30

4-(3,4-cloro-3-fluorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 2b imagen24 237,2

E12727984

23-09-2015

(continuación)

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

31

2-fluoro-4-(6,6-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol-4il)benzonitrilo, isómero 1c imagen25 256

32

4-(4-clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1d imagen26 219

33

4-(1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol-4-il)benzonitrilo, isómero 1e 210

34

4-(4-clorofenil)-6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol, isómero 1f imagen27 247

36

4-(4-cloro-3-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1h imagen28 265

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23-09-2015

(continuación)

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

37

4-(4-cloro-2-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1i imagen29 265

38

4-(4-cloro-2-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 2i imagen30 265

39

4-(4-fluorofenil)-6,6-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol, isómero 1k imagen31 231

a. Columna Chiralcel® OJ-H, MeOH al 20 %/CO2, 5 ml/min, 225 nm. b. Columna Chiralcel® OJ-H, AIP al 20 % (isopropilamina al 0,2 %/CO2, 5 ml/min, 225 nm. c. Columna Chiralpak® AD-H, DMEA al 0,2 %/metanol, 30 ml/min, 225 nm. d. Columna Chiralcel® OJ-H, EtOH al 20 %/CO2, 5 ml/min, 225 nm. e. Columna Chiralpak® IC, AIP al 30 %/CO2, 5 ml/min, 230 nm. Después de la cromatografía quiral, el producto se somete a cromatografía en un gradiente escalonado con MeOH al 1-3 %/cloroformo, una 2ª cromatografía con MeOH al 2 %/cloroformo y se cristaliza con éter para proporcionar el producto final. f. Columna Chiralpak® AD-H, MeOH al 100 %, 30 ml/min, 225 nm. g. Columna Chiralpak® AD-H, MeOH al 100 %, 30 ml/min, 225 nm. h. Columna Chiralpak® AD-H, MeOH al 15 %/CO2, 70 ml/min, 225 nm. i. Columna Chiralpak® OD-H, MeOH al 10 %/CO2, 70 ml/min, 225 nm. k. Columna Chiralpak® AD-H, etanol al 100 %, 18 ml/min, 225 nm. l. Columna Chiralpak® AD-H, AIP al 20 %/CO2, 70 ml/min, 225 nm. m. Columna Chiralpak® AD-H, etanol al 20 %/CO2, 70 ml/min, 225 nm. n. Columna Chiralpak® AD-H, etanol/ACN 4/1, 25 ml/min, 225 nm.

Ejemplo 43 (REF) (4R)-4-(3-clorofenil)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol

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imagen32

Se disuelve (3S)-3-(3-Clorofenil)ciclopentanona (1,5 g, 7,71°mmol) en isopropanol (20 ml) y se agita. Se añade tercbutoxibis(dimetilamino)metano (1,91 ml, 9,25°mmol) gota a gota a la reacción. La reacción se calienta a 125°ºC durante 12 horas. Después se enfría a temperatura ambiente y se concentra a sequedad. El residuo se diluye con 5 isopropanol (20 ml). Se añade hidrato de hidrazina (0,37 ml, 11,56°mmol) a la reacción y la reacción se calienta a 100°ºC durante 5 horas. La reacción se concentra al vacío y el residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 20 % en hexanos para obtener el producto del título (1,099 g) en forma de una película de color amarillo. Este material se purifica adicionalmente mediante cromatografía quiral, empleando una columna Chiralpak AD-H, eluyendo con metanol al 20 %/CO2, un caudal de 70 ml/min y detección UV a 225 nm.

10 El compuesto del título (0,442 g, 26,2 %) se aísla en forma de un aceite claro. EN/EM (m/z) 219,0 (M+1).

Los siguientes ejemplos se preparan esencialmente como se ha descrito para el (4R)-4-(3-clorofenil)-1,4,5,6tetrahidro-ciclopenta[c]pirazol.

Tabla 13

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+H)

45

(4R)-4-[3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil]-1,4,5,6tetrahidrociclopenta[c]pirazol 271,0

47

2-fluoro-4-[(4R)-1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazol-4il]benzonitriloa imagen33 228,0

a. Columna Chiralpak AD-H, MeOH al 100 %, 30 ml/min, 225 nm.

15 Ejemplo 48 (+/-)-4-(6,6-dimetil-4,5-dihidro-1H-ciclopenta[c]pirazol-4-il)-3-fluoro-benzonitrilo

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Tabla 14

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

54

4-(p-tolil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol, isómero 2a 213

55

4-(4-metoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol, isómero 2b 229

a. Condiciones de cromatografía quiral:(4,6×150°mm, Chiralcel® OJ-H, MeOH al 100 %, DMEA al 0,2 %, 1,0 ml/min, 225 nm, segundo enantiómero en eluir, Tr = 3,726 min) b. Condiciones de cromatografía quiral:(4,6×150°mm, Chiralcel® AD-H, EtOH al 100 %, DMEA al 0,2 %, 1,0 ml/min, 225 nm, segundo enantiómero en eluir, Tr = 3,289 min)

Ejemplo 56 4-(4-clorofenil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol, isómero 2

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Se añade 4-(4-clorofenil)-2-(p-tolilsulfonil)-4,5,6,7-tetrahidroindazol (0,4 g, 1.04°mmol) a una solución de KOH (0,29 g, 5,21°mmol) en MeOH (25 ml) y la solución se calienta a 65°ºC durante 2 horas. La solución se enfría a temperatura ambiente, el disolvente se retira a presión reducida y el sólido resultante se diluye con agua. Se añade HCl hasta pH 4, la mezcla se extrae con acetato de etilo, las capas se separan y la capa acuosa se re-extrae con

10 acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía quiral (Chiralpak AD-H, 4,6×150°mm, EtOH al 100 %, DMEA al 0,2 %, 225°nm, Tr = 3,318 min) para proporcionar el compuesto del título (93 mg, 38 %) en forma del segundo isómero en eluir. EN/EM m/z 234 (M+H).

Ejemplo 57

15 3-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)benzonitrilo, isómero 2

imagen37

Se añaden 3-metil-4-(1-tetrahidropiran-2-il-4,5,6,7-tetrahidroindazol-4-il)benzonitrilo o 3-metil-4-(2-tetrahidro-piran-2il-4,5,6,7-tetrahidroindazol-4-il)benzonitrilo (0,16 g, 0,5°mmol) y N2SO4 (0,11 ml, 1,99°mmol) a CH3CN (5,0 ml) y la solución se agita a temperatura ambiente durante 24 horas. Se añade Na2CO3 acuoso hasta pH básico. Se diluye 20 con acetato de etilo, las capas se separan y la capa acuosa se extrae de nuevo con acetato de etilo (3 veces). Los extractos orgánicos se combinan, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a sequedad. El residuo se

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purifica mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice eluyendo con hexanos/acetato de etilo 6:4 para proporcionar la mezcla racémica (0,088 g, 73 %). El enantiómero individual se obtiene mediante cromatografía quiral (Chiralpak AD-H, 4,6×150°mm, EtOH al 100 %, DMEA al 0,2 %, 225°nm, Tr = 4,168 min) para proporcionar el compuesto del título (0,032 g, 27 %) en forma del segundo isómero en eluir. EN/EM m/z 238 (M+H).

5 El siguiente ejemplo se prepara esencialmente mediante el procedimiento del 3-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidro-1Hindazol-4-il)benzonitrilo, isómero 2.

Tabla 15

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

58

2-metoxi-4-(4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)benzonitrilo, isómero 2a 254

a. Purificación de enantiómeros mediante cromatografía quiral (Chiralcel® AD-H, 4,6×150°mm, MeOH al 100 %, DMEA al 0,2 %, 1,0 ml/min, 225 nm, segundo enantiómero en eluir, Tr = 3,608 min)

Ejemplo 59 10 (+/-)-2-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazol-4-il)benzonitrilo

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Se añaden 4-(6,7-dihidro-1H-indazol-4-il)-2-fluoro-benzonitrilo (0,102 g, 0,43°mmol) y Pd/C al 5 % % p/p (0,04 g) a MeOH (5,0 ml) y la mezcla se agita en 310,25 a 241,32 kPa de hidrógeno durante 3 horas. La mezcla se filtra a través de un lecho de tierra de diatomeas y se concentra a sequedad. El residuo se purifica mediante cromatografía

15 en gel de sílice eluyendo con hexanos/acetato de etilo 1:1 para proporcionar el compuesto del título (0,021 g, 18 %). EN/EM m/z 242 (M+H).

Ejemplo 60

(+/-)-(trans)-4-[7-metil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-4-il]benzonitrilo

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20 Se añade (+/-)-(trans)-4-(4-metil-3-oxo-ciclohexil)benzonitrilo (0,55 g, 2,58°mmol) a tolueno (10,0 ml) y terc-butoxibis (dimetilamino)metano (0,67 ml, 3,22°mmoles) y se agita a 120°ºC durante 16 horas. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se añade a MeOH (10,0 ml) e hidrazina (0,07 ml, 2,32°mmol) y se agita a 80°ºC durante 1,0 hora. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 35 %-55 %/hexanos) para

25 proporcionar (+/-)-(trans)-4-[7-metil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-4-il]benzonitrilo (0,18 g, 29 %).

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El enantiómero individual se obtiene mediante cromatografía quiral (Chiralpak AD-H, 4,6×150°mm, MeOH/CH3CN 3:2, isopropilamina al 0,2 %, 225°nm; 1,0 ml/min, Tr = 3,503 min) para proporcionar el compuesto del título (0,038 g, 31 %) en forma del segundo isómero en eluir. EN/EM m/z 266 (M+H).

Los siguientes ejemplos se preparan esencialmente mediante el procedimiento del 3-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidro-1Hindazol-4-il)benzonitrilo.

Tabla 16

Ej. Nº

Nombre químico Estructura EN/EM (m/z) (M+1)

65

Clorhidrato de (+/-)-4-(7,7-dimetil-2,4,5,6-tetrahidroindazol-4-il)-3fluoro-benzonitrilo 270

66

4-(7,7-dimetil-2,4,5,6-tetrahidroindazol-4-il)-3-fluoro-benzonitrilo, isómero 2a 270

67

(+/-)-4-(7,7-dimetil-2,4,5,6-tetrahidroindazol-4-il)-2-fluoro-benzonitrilob imagen42 270

a. Purificación de enantiómeros mediante cromatografía quiral (Chiralcel® AD-H, 4,6×150°mm, MeOH al 100 %, isopropilamina al 0,2 %, 1,0 ml/min, 225 nm, 2º enantiómero en eluir, Tr = 4,175 min). b. Etapa 1 – Uso de terc-butoxibis(dimetilamino)metano (1,0 eq) en tolueno a 120°ºC durante 26 horas.

Los reactivos empleados en los siguientes ensayos están fácilmente disponibles de fuentes comerciales o pueden

10 sintetizarse fácilmente por un experto en materia. Los compuestos comparativos utilizados en el presente documento son fadrozol y LCI699. El fadrozol es un inhibidor de la aromatasa comercializado por Novartis Corporation en Japón para el tratamiento del cáncer de mama con el nombre comercial AFEMA® (marca comercial de Novartis Corporation); (www.righthealth.com/topic/Fadrozole visitado el 26 mayo de 2011). El LCI699 es un fármaco en investigación que está desarrollando Novartis Corporation (Thompson Neuters Pharma Drug Report

15 LCI699, ©Thompson Reuters 2011). Las representaciones estructurales del fadrozol y del LCI699 se muestran a continuación.

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5

10

15

20

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Inhibición de la aldosterona sintasa en ratas

El efecto de los compuestos sobre la producción de aldosterona en ratas se evalúa utilizando la rata modelo de dieta deficiente en sodio. Los estudios se realizan utilizando ratas Sprague Dawley macho, con edades de entre 6-7 semanas y aproximadamente 175-190 gramos (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, EE.UU.). Las ratas se alojan individualmente con un ciclo normal de luz (12 horas de luz y 12 horas de oscuridad) y reciben dieta (dieta deficiente en sodio 90228 de Harlan Teklad) y agua a demanda. Las ratas se aleatorizan por el peso corporal y se sitúan en Teklad 90228 durante 7 días. En el día 7 las ratas se dosifican con 10 ml/kg de vehículo (hidroxietilcelulosa (HEC) al 1 %/Tween 80 al 0,25 %/antiespumantes (AF) al 0,05 % o goma arábiga al 10 % p/v/Antiespumante 1510-US al 0,05 % v/v en agua desionizada (DIW)), control positivo (1 mg/kg, Fadrozol) o compuesto de ensayo. A las 3 horas después de la dosis las ratas se sangran (~0,5 ml) por la órbita ocular bajo anestesia con isoflurano. A las 6 horas después de la dosis las ratas se sacrifican con CO2 y se sangran por punción cardiaca. Las muestras de sangre se coagulan al menos durante 30 minutos y el suero se prepara y se almacena a aproximadamente a -80°ºC hasta el ensayo. La aldosterona, los esteroides y la exposición al compuesto se analizan mediante espectroscopia de masas.

El efecto de los ejemplos 1 y 49 en la producción de aldosterona en la rata modelo de dieta deficiente en Na se ilustra en la tabla 18 a continuación.

Tabla 18

Aldosterona (pg/ml)

% de Inhibición

Ejemplo

Dosis (mg/kg) 3 horas 6 horas 3 horas 6 horas

vehículo

0,0 1.881,7 2.556,7 0,0 0,0

1

10,0 973 1.380 48 46

49

30,0 1,008 1,704 46 33

Fadrozol

1,0 669,8 1144,2 64,4 55,2

Los datos muestran que los ejemplos 1 y 49 inhiben la producción de aldosterona in vivo.

Ensayo de inhibición de cortisol

Las células de fibroblastos de hámster chino (V79) que expresan constitutivamente el cyp11B1 humano se constituyen mediante la transfección con un vector de expresión de mamífero que alberga el ADNc del cyp11B2 humano en un promotor CMV y un gen resistente al antibiótico neomicina para la selección en células de mamífero. Las células V79 se transfectan en matraces T225 cm2 con el reactivo de transfección lipofectamina y el ADNc del cyp11B1 humano. Los clones positivos se seleccionan con el antibiótico de selección geneticina a 1 mg/ml. La producción de cortisol en células transfectadas se inicia mediante la adición de 11-desoxicortisol 1°µm en el medio. Después de 24 horas de incubación, el medio de cultivo se recoge y la concentración de cortisol en el medio se determina utilizando un procedimiento de cromatografía líquida-espectrometría de masas (CL-EM). El medio celular (100 µl) se transfiere a una nueva placa de 96 pocillos de pocillos profundos. Un sistema de manejo de líquidos Beckman Coulter FX (modificado para su uso con disolventes orgánicos) con una cabeza de 96 puntas se utiliza para añadir una solución de PI a cada pocillo (10 µl de d4-cortisol 200 ng/ml). Los pocillos después se extraen 3 veces con EtOAc (300 ml) utilizando el FX, combinando las capas orgánicas en una nueva placa de 96 pocillos de pocillos profundos. El disolvente se seca a continuación en un GeneVac HT-4 o en atmósfera de nitrógeno. El FX se utiliza después para reconstituir las muestras en MeOH al 50 %/agua (100 µl) y las placas se sellan por calor.

Una HPLC con dos bombas produce un gradiente de agua (que contiene ácido fórmico al 0,1 %) y MeOH con un caudal de 0,6 ml/min a través de una columna XBridge Shield RP18, 3,5 micrómetros, 2,1×50°mm con una precolumna de 2,1×10°mm del mismo material con un tamaño de partícula de 5 micrómetros. Se inyecta una parte alícuota de 40 µl de la muestra y se inicia un gradiente de MeOH al 20-100 % en 0,95°min. El cortisol eluye a los 0,8 min. Las condiciones iniciales después se mantuvieron durante 1 minuto para volver a equilibrar la columna. Un espectrómetro de masas en tándem ABI QTRAP 4000 se utiliza para el análisis de EM/EM en el modo de iones positivos. Los procedimientos EM/EM monitorizan las transiciones para el cortisol y el PI a 363,0/121,0 y 367,3/121,0 respectivamente. Estas se integran respectivamente para proporcionar las áreas de los picos. La relación de área cortisol/PI se utiliza para determinar la concentración de cortisol por comparación con una curva estándar. El límite de detección para el cortisol es de 1 ng/mL.

Para determinar la inhibición de la producción de cortisol por un compuesto de ensayo, las células V79-cyp11B1 humano se siembran en una placa de 96 pocillos a 20.000 células por pocillo. Se añaden 11-desoxicortisol y diversas concentraciones de compuestos de ensayo en incrementos de dilución 1:3 al medio de cultivo celular.

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Tabla 20*

Ejemplo

Testosterona CI50 (µM) Estradiol CI50 (µM) Relación de selectividad para aldosterona en comparación con testosterona Relación de selectividad para aldosterona en comparación con estradiol

1>

>30, n = 4 13,2, n = 3 >6.000 2640

49>

>30, n = 5 22,0 >4285 3143

Fadrozol

1,54 <0,0015 82 0,08

Novartis LCI699

5,01, n = 2 0,123, n = 2 663 16,3

* Los ensayos no se realizaron simultáneamente para los ejemplos de la tabla 20 y los compuestos comparativos.

Ensayo de inhibición de aldosterona en macaco

Las células de fibroblastos de hámster chino (V79) que expresan constitutivamente el cyp11B2 de macaco se

5 constituyen mediante la transfección con un vector de expresión de mamífero que alberga el ADNc de cyp11B2 de macaco. Esta línea celular se utilizó para medir la actividad de los compuestos en la inhibición de la producción de aldosterona por la enzima del macaco. El acondicionamiento del cultivo celular y el procedimiento de detección de aldosterona se realizan siguiendo el mismo protocolo descrito en el "ensayo de inhibición de aldosterona". El ejemplo 1 y el ejemplo 49 presentan valores de CI50 relativa de 0,00246 y 0,0041°µm en el ensayo de inhibición de

10 aldosterona en macaco, respectivamente (n = 1).

Ensayo de inhibición de cortisol en macaco

Las células de fibroblastos de hámster chino (V79) que expresan constitutivamente el cyp11B1 de macaco se constituyen mediante la transfección con un vector de expresión de mamífero que alberga el ADNc de cyp11B1 de macaco. Esta línea celular se utilizó para medir la actividad de los compuestos en la inhibición de la producción de

15 cortisol por la enzima del macaco. El acondicionamiento del cultivo celular y el procedimiento de detección de cortisol se realizan siguiendo el mismo protocolo descrito en el "ensayo de inhibición de cortisol". El ejemplo 1 y el ejemplo 49 presentan valores de CI50 relativa de 0,209 y 0,579°µm en el ensayo de inhibición de cortisol en macaco, respectivamente (n = 1).

Claims (1)

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