ES2544060T3 - Fabricación selectiva de polipéptidos de neurotoxina recombinantes - Google Patents

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Abstract

Un polinucleótido que codifica un polipéptido de neurotoxina que comprende una cadena ligera, un enlazador y una cadena pesada, en donde el enlazador es un enlazador modificado que comprende una secuencia heteróloga de aminoácidos que confiere al menos una propiedad fisicoquímica al polipéptido que permite la separación de polipéptidos de neurotoxina parcialmente procesados o sin procesar de polipéptidos de neurotoxina procesados, siendo dicha secuencia heteróloga de aminoácidos flanqueada en el terminal N y C por un sitio de reconocimiento y escisión de proteasa, en donde la neurotoxina es una neurotoxina botulínica.

Description

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E11743526
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como se usa aquí se lleva a cabo antes de poner en contacto el polipéptido de neurotoxina procesado, sin procesar y/o parcialmente procesado con la matriz de purificación. Debido a esta medición, el riesgo de reactividad cruzada potencial o de enlazamiento inespecífico durante la cromatografía de afinidad puede ser además evitada y reducida.
El método de la presente invención permite la fabricación de polipéptido de neurotoxina activo procesado esencialmente libre del polipéptido precursor sin procesar o parcialmente procesado y, por lo tanto, la obtención de mayores cantidades del polipéptido de neurotoxina activo procesado. Tales polipéptidos de neurotoxina pueden ser utilizados para la formulación de medicamentos o composiciones cosméticas. Esencialmente libre en este contexto significa que la neurotoxina sin procesar y/o parcialmente procesada está por debajo de un cierto umbral, en un aspecto, menor al 2,5%, menor al 1%, menor al 0,5% o menor al 0,1% de la neurotoxina total contenida en una muestra dada.
Por lo tanto, la presente invención también se relaciona con un método para la fabricación de un medicamento que comprende las etapas del método mencionado anteriormente y la etapa adicional de formulación del polipéptido de neurotoxina proteolíticamente procesado como medicamento.
El término "medicamento" como se usa aquí, se refiere, en un aspecto, a una composición farmacéutica que contiene al polipéptido de neurotoxina biológicamente activo (procesado proteolíticamente) como un compuesto farmacéutico activo, en donde la composición farmacéutica se puede utilizar para terapia humana o no humana de diversas enfermedades o trastornos en una dosis terapéuticamente efectiva.
Una composición farmacéutica como la utilizada aquí comprende al polipéptido Neurotoxina biológicamente activo (procesado proteolíticamente), y en un aspecto, uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. La neurotoxina activa puede estar presente en forma líquida o liofilizada. En un aspecto, dicho compuesto puede estar presente junto con glicerol, estabilizadores de proteína (por ejemplo, albúmina de suero humana (HAS)) o sin estabilizadores de proteína.
La composición farmacéutica es, en un aspecto, administrada en forma tópica. La administración de un fármaco usado convencionalmente se realiza en forma intramuscular, subcutánea (cerca a las glándulas). Sin embargo, dependiendo de la naturaleza y del modo de acción de un compuesto, se puede administrar la composición farmacéutica también mediante otras rutas.
El compuesto, es decir, el polipéptido de neurotoxina biológicamente activo (procesado proteolíticamente) es el ingrediente activo de la composición, y es en un aspecto administrado en formas de dosificación convencionales preparadas mediante la combinación del fármaco con portadores farmacéuticos estándar de acuerdo con procedimientos convencionales. Estos procedimientos pueden implicar mezcla, granulación, y compresión, o disolución de los ingredientes según sea conveniente para la preparación deseada. Se apreciará que la forma y el carácter del portador o diluyente farmacéuticamente aceptable están dictados por la cantidad de ingrediente activo con la cual se combinan, la ruta de administración y otras variables bien conocidas.
El (los) portador(es) debe(n) ser aceptable(s) en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no ser perjudiciales para el receptor de los mismos. El portador farmacéutico empleado puede incluir un sólido, un gel, o una líquido. Los ejemplos de portadores sólidos son lactosa, terra alba, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares. Ejemplos de portadores líquidos son una solución salina regulada con fosfato, jarabe, aceite, agua, emulsiones, diversos tipos de agentes humectantes, y similares. En forma similar, el portador o diluyente puede incluir material de retardo bien conocido en la técnica, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solos o con una cera. Dichos portadores adecuados comprenden aquellos mencionados anteriormente y otros bien conocidos en la técnica, véase, por ejemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania.
El (los) diluyente(s) es/son seleccionados para no afectar la actividad biológica de la combinación. Los ejemplos de tales diluyentes son agua destilada, solución salina fisiológica, soluciones de Ringer, solución de dextrosa, y solución de Hank. Además, la composición o formulación farmacéutica pueden incluir también otros portadores, adyuvantes, o estabilizadores no tóxicos, no terapéuticos, no inmunogénicos y similares.
Una dosis terapéuticamente efectiva se refiere a una cantidad del compuesto que se utiliza en una composición farmacéutica que previene, mejora o trata los síntomas que acompañan a una enfermedad o condición mencionada en esta memoria descriptiva. La eficacia terapéutica y toxicidad del compuesto se puede determinar por procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos de células o animales experimentales, por ejemplo, ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en 50% de la población) y LD50 (la dosis letal para 50% de la población). La
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