ES2532112T3 - EPSPS mutantes - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento de producción de una planta no transgénica, resistente o tolerante a herbicida que comprende: introducir en células vegetales una oligonucleobase recombinagénica con una mutación dirigida en el gen EPSPS para producir células vegetales con un gen de EPSPS mutante que exprese una proteína EPSPS que esté mutada en las posiciones de aminoácidos Thr179 y Pro183 en una proteína EPSPS de Arabidopsis (AF360224) o en un resto de aminoácido análogo en una proteína EPSPS de otra especie en la que Thr179 es cambiado a Ile y Pro183 es cambiado a Ala; seleccionar una célula vegetal que muestre una tolerancia mejorada al glifosato en comparación con una célula vegetal de tipo silvestre correspondiente; y regenerar una planta no transgénica resistente o tolerante a herbicida que tenga un gen de EPSPS mutado de dicha célula vegetal seleccionada.
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La invención puede ponerse en práctica con oligonucleobases recombinagénicas que tienen las conformaciones y químicas descritas en las patentes Kmiec I y Kmiec II. Kmiec I enseña un procedimiento para introducir alteraciones genéticas específicas en un gen diana. Las oligonucleobases recombinagénicas en Kmiec I y/o Kmiec II contienen dos hebras complementarias, una de las cuales contiene al menos un segmento de nucleótidos de tipo ARN (un "segmento de ARN") que está emparejado por bases a nucleótidos de tipo ADN de la otra hebra.
Kmiec II desvela que los no nucleótidos que contienen bases de purina y pirimidina pueden sustituirse por nucleótidos. Las Patentes de los Estados Unidos Nº 5.756.325; 5.871.984; 5.760.012; 5.888.983; 5.795.972; 5.780.296; 5.945.339; 6.004.804; y 6.010.907 y la Patente Internacional Nº PCT/US00/23457; y las Publicaciones Internacionales de Patente Nº WO 98/49350; WO 99/07865, WO 99/58723, WO 99/58702, WO 99/40789, US 6.870.075; y la Solicitud de Patente Publicada de los Estados Unidos 20030084473 desvelan moléculas recombinagénicas adicionales que pueden usarse para la presente invención. La expresión "oligonucleobase recombinagénica" se usa en el presente documento para indicar las moléculas que pueden usarse en los procedimientos de la presente invención e incluyen oligonucleótidos en doble hélice mixtos, moléculas que contienen no nucleótidos enseñadas en Kmiec II, oligodesoxinucleótidos monocatenarios y otras moléculas recombinagénicas enseñadas en las patentes y publicaciones de patentes anteriormente mencionadas.
En una realización, la oligonucleobase recombinagénica es un oligonucleótido de doble hélice mixto en el que los nucleótidos de tipo ARN del oligonucleótido de doble hélice mixto se hacen resistentes a RNasa reemplazando el 2'-hidroxilo con una funcionalidad fluoro, cloro o bromo o poniendo un sustituyente en el 2'-O. Los sustituyentes adecuados incluyen los sustituyentes enseñados por Kmiec II. Los sustituyentes alternativos incluyen los sustituyentes enseñados por la Patente de los Estados Unidos Nº 5.334.711 (Sproat) y los sustituyentes enseñados por las Publicaciones de Patente EP 629 387 y EP 679 657 (de manera colectiva, las Solicitudes Martin). Como se usa en el presente documento, un derivado 2'-fluoro, cloro o bromo de un ribonucleótido o un ribonucleótido que tiene un sustituyente 2'-OH con un sustituyente descrito en las Solicitudes Martin o Sproat se denomina "Ribonucleótido 2'-sustituido". Tal como se usa en el presente documento, la expresión "nucleótido de tipo ARN" significa un nucleótido 2'-hidroxilo o 2'-sustituido que está enlazado a otros nucleótidos de un oligonucleótido de doble hélice mixto por un enlace fosfodiéster no sustituido o cualquiera de los enlaces no naturales enseñados por Kmiec I o Kmiec II. Tal como se usa en el presente documento, la expresión nucleótido de tipo desoxirribo" significa un nucleótido que tiene un 2'-H, que puede enlazarse a otros nucleótidos de un MDON mediante un enlace fosfodiéster no sustituido o cualquiera de los enlaces no naturales enseñados por Kmiec I o Kmiec II.
En una realización de la presente invención, la oligonucleobase recombinagénica es un oligonucleótido de doble hélice mixto que está enlazado únicamente por enlaces fosfodiéster no sustituidos. En realizaciones alternativas, el enlace es mediante fosfodiésteres sustituidos, derivados fosfodiéster y enlaces no basados en fósforo tal como se enseña por Kmiec II. En otra realización más, cada molécula de tipo ARN en el oligonucleótido de doble hélice mixto es un nucleótido 2'-sustituido. Las realizaciones particularmente preferidas de ribonucleótidos 2'-sustituidos son ribonucleótidos sustituidos con 2'-fluoro, 2'-metoxi, 2'-propiloxi, 2'-aliloxi, 2'-hidroxiletiloxi, 2'-metoxietiloxi, 2'-fluoropropiloxi y 2'-trifluoropropiloxi. Las realizaciones más preferidas de ribonucleótidos 2'-sustituidos son nucleótidos sustituidos en 2'-fluoro, 2'-metoxi, 2'-metoxietiloxi, y 2'-aliloxi. En otra realización, el oligonucleótido de doble hélice mezclado se enlaza mediante enlaces fosfodiéster no sustituidos.
Aunque se sintetizan de manera más conveniente los oligonucleótidos de doble hélice mixto que tienen un solo tipo de nucleótido de tipo ARN 2'-sustituido, los procedimientos de la invención pueden ponerse en práctica con oligonucleótidos de doble hélice que tienen dos o más tipos de nucleótidos de tipo ARN. La función de un segmento de ARN puede no verse afectada por una interrupción causada por la introducción de un desoxinucleótido entre dos trinucleótidos de tipo ARN, por consiguiente, la expresión segmento de ARN abarca dicho "segmento de ARN interrumpido". Un segmento de ARN no interrumpido se cita como un segmento de ARN contiguo. En una realización alternativa, un segmento de ARN puede contener nucleótidos resistentes a RNasa y 2'-OH no sustituidos alternos. Los oligonucleótidos de doble hélice mixtos tienen preferentemente menos de 100 nucleótidos y más preferentemente menos de 85 nucleótidos, pero más de 50 nucleótidos. La primera y la segunda hebra están emparejadas por emparejamiento de bases de Watson-Crick. En una realización, las hebras del oligonucleótido de doble hélice mixtos están unidos covalentemente mediante un enlazante, tal como por un hexa, penta o tretranucleótido monocatenario de tal forma que la primera y la segunda hebra son segmentos de una sola cadena de oligonucleótido que tiene un solo extremo 3' y un solo extremo 5'. Los extremos 3' y 5' pueden protegerse mediante la adición de una "tapa en horquilla" en la que los nucleótidos 3' y 5' terminal están emparejados por emparejamiento de Watson-Crick a nucleótidos adyacentes. Una tapa en horquilla secundaria puede, además, situarse en la unión entre la primera y la segunda hebra distantes de los extremos 3' y 5', de tal forma que se estabiliza el emparejamiento de Watson-Crick entre la primera y la segunda hebra.
La primera y la segunda hebra contienen dos regiones que son homólogas a dos fragmentos del gen de EPSPS diana, es decir, tienen la misma secuencia que los genes diana. Una región homóloga contiene los nucleótidos de un segmento de ARN y pueden contener uno o más nucleótidos de tipo ADN de segmento de ADN conector y también pueden contener nucleótidos de tipo ADN que no se encuentran en el segmento de ADN interviniente. Las dos regiones de homología se separan mediante, y cada una es adyacente a, una región que tiene una secuencia que difiere de la secuencia del gen diana, citada como una "región heteróloga". La región heteróloga puede contener uno, dos o tres nucleótidos desemparejados. Los nucleótidos desemparejados pueden ser contiguos o, como alternativa,
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separarse mediante uno o dos nucleótidos que son homólogos con el gen diana. Como alternativa, la región heteróloga también puede contener una inserción de uno, dos, tres o de cinco o menos nucleótidos. Como alternativa, la secuencia del oligonucleótido de doble hélice mixto puede diferir de la secuencia del gen diana solo por la eliminación de uno, dos, tres, o cinco o menos nucleótidos del oligonucleótido de doble hélice mixto. La longitud y posición de la región heteróloga, en este caso, se considera la longitud de la eliminación, aunque ningún nucleótido del oligonucleótido de doble hélice mixto se encuentre dentro de la región heteróloga. La distancia entre los fragmentos del gen diana que son complementarios a las dos regiones homólogas es de manera idéntica la longitud de la región heteróloga cuando se pretende una sustitución o sustituciones. Cuando la región heteróloga contiene una inserción, las regiones se separan de este modo en el oligonucleótido de doble hélice mixto más allá de lo que lo están sus fragmentos homólogos complementarios en el gen, y lo contrario es aplicable cuando la región heteróloga codifica una eliminación.
Los segmentos de ARN de los oligonucleótidos de doble hélice mixtos son cada uno parte de una región homóloga, es decir, una región que es idéntica en secuencia a un fragmento del gen diana, conteniendo dichos segmentos juntos al menos 13 nucleótidos de tipo ARN y preferentemente de 16 a 25 nucleótidos de tipo ARN o aún más preferentemente 18-22 nucleótidos de tipo ARN o lo más preferentemente 20 nucleótidos. En una realización, los segmentos de ARN de las regiones de homología se separan mediante y son adyacentes a, es decir, "conectadas por" un segmento de ADN interviniente. En una realización, cada nucleótido de la región heteróloga es un nucleótido del segmento de ADN interviniente. Un segmento de ADN interviniente que contiene la región heteróloga de un oligonucleótido de doble hélice mixto se denomina un "segmento mutador".
El cambio a introducir en el gen de EPSPS diana se codifican por la región heteróloga. El cambio a introducir en el gen de EPSPS puede ser un cambio en una o en más bases de la secuencia del gen de EPSPS que cambia en el aminoácido nativo en esa posición al aminoácido deseado.
En otra realización de la presente invención, la oligonucleobase recombinagénica es un vector mutacional de oligodesoxinucleótido monocatenario o SSOMV, que se desvela en la Solicitud Internacional de Patente PCT/US00/23457. La secuencia de SSOMV se basa en los mismos principios que los vectores mutacionales descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nº 5.756.325; 5.871.984; 5.760.012; 5.888.983; 5.795.972; 5.780.296; 5.945.339; 6.004.804; y 6.010.907 y en las Publicaciones Internacionales Nº WO 98/49350; WO 99/07865, WO 99/58723, WO 99/58702, WO 99/40789, US 6.870.075; y en la Solicitud de Patente Publicada 20030084473. La secuencia del SSOMV contiene dos regiones que son homólogas con la secuencia diana separadas por una región que contiene la alteración genética deseada citada como región mutadora. La región mutadora puede tener una secuencia que tiene la misma longitud que la secuencia que separa a las regiones homólogas en la secuencia diana, pero que tiene una secuencia diferente. Dicha región mutadora causará una sustitución.
Los nucleótidos del SSOMV son desoxirribonucleótidos que están unidos mediante enlaces fosfodiéster no modificados excepto que el enlace internucleótido 3' terminal y/o 5' terminal o como alternativa, los dos enlaces internucleótido 3' terminal y/o 5' terminal pueden ser un fosforotioato o fosfoamidato. Tal como se usa en el presente documento, un enlace internucleótido es el enlace entre nucleótidos del SSOMV y no incluye el enlace entre el nucleótido 3' final o el nucleótido 5' final y un sustituyente bloqueante, véase más arriba. En una realización específica, la longitud del SSOMV es de entre 21 y 55 desoxinucleótidos y las longitudes de las regiones de homología tienen, por consiguiente, una longitud total de al menos 20 desoxinucleótidos y al menos dos regiones de homología deben tener cada una longitudes de al menos 8 desoxinucleótidos.
El SSOMV puede diseñarse para ser complementario con la hebra codificante o la no codificante del gen diana. Cuando la mutación deseada es una sustitución de una sola base, se prefiere que los dos nucleótidos mutadores sean una pirimidina. Hasta el punto en que sea coherente con lograr el resultado funcional deseado, se prefiere que tanto el nucleótido mutador como el nucleótido diana en la hebra complementaria sean pirimidinas. Se prefieren particularmente SSOMV que codifiquen mutación por transversión, es decir, un nucleótido mutador de C o T se desempareja, respectivamente, con un nucleótido C o T en la hebra complementaria.
Además del oligodesoxinucleótido, el SSOMV puede contener un sustituyente bloqueante en 5' que está unido a los carbonos 5' terminales a través de un enlazante. La química del enlazante no es crítica más allá de su longitud, pero debe ser preferentemente de 6 átomos de longitud y el enlazante debe ser flexible. Puede usarse una variedad de sustituyentes no tóxicos, tales como biotina, colesterol u otros esteroides o un colorante fluorescente catiónico no intercalante. Los reactivos vendidos como Cy3™ y Cy5™ por Glen Research, Sterling VA, se prefieren particularmente como reactivos para preparar el SSOMV, que son fosforamiditas bloqueadas que tras la incorporación en un oligonucleótido producen indomonocarbocianina sustituida con 3,3,3',3'-tetrametilo y N,N'-isopropilo y colorantes de indodicarbocianina, respectivamente. Cy3 es el más preferido. Cuando la indocarbocianina está sustituida por N-oxialquilo, puede unirse convenientemente al 5' terminal del oligodesoxinucleótido mediante un fosfodiéster con un fosfato 5' terminal. La química del enlazante colorante entre el colorante y el oligodesoxinucleótido no es crítica y se selecciona por conveniencia sintética. Cuando la fosforamidita Cy3 disponible comercialmente se usa según se indica, la modificación 5' resultante consiste en un sustituyente bloqueante y enlazante juntos que son un una indomonocarbocianina de N-hidroxipropilo, N'-fosfatidilpropilo y 3,3,3',3'-tetrametilo.
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En una realización preferida, el colorante de indocarbocianina está tetrasustituido en las posiciones 3 y 3' de los anillos de indol. Sin limitación en cuanto a la teoría, estas sustituciones evitan que el colorante sea un colorante intercalante. La identidad de los sustituyentes en estas posiciones no es críticas. El SSOMV puede además tener un sustituyente 3' bloqueante. Nuevamente, la química del sustituyente 3' bloqueante no es crítica.
En otra realización preferida, el oligonucleótido recombinagénico es un oligodesoxinucleótido monocatenario que tiene un nucleótido 3' terminal, un nucleótido 5' terminal, que tiene al menos 25 desoxinucleótidos y no más de 65 desoxinucleótidos, y que tiene una secuencia que comprende al menos dos regiones de al menos 8 desoxinucleótidos cada una que son cada una, respectivamente, idénticas a al menos dos regiones del gen cromosomal diana, teniendo dichas regiones juntas al menos 24 nucleótidos de longitud, y estando dichas regiones separadas por al menos un nucleótido en la secuencia del gen cromosomal diana o en la secuencia del oligodesoxinucleótido o ambas de tal forma que la secuencia del oligodesoxinucleótido no es idéntica a la secuencia del gen cromosomal diana. Véase la Patente de Estados Unidos 6.271.360.
Microtransportadores y microfibras
El uso de microtransportadores metálicos (microesferas) para introducir grandes fragmentos de ADN en células vegetales que tienen paredes celulares de celulosa mediante penetración de proyectiles se conoce bien por los expertos en la técnica relevante (en lo sucesivo administración biolística). Las Patentes de los Estados Unidos Nº 4.945.050; 5.100.792 y 5.204.253 describen técnicas generales para seleccionar microtransportadores y dispositivos para proyectarlos. Las Patentes de los Estados Unidos Nº 5.484.956 y 5.489.520 describen la preparación de maíz transgénico fértil usando bombardeo con microproyectiles en tejido calloso de maíz. Las técnicas biolísticas también se usan para transformar embriones de maíz inmaduros.
Las condiciones específicas para usar microtransportadores en los procedimientos de la presente invención se describen en la Publicación Internacional WO 99/07865. En una técnica ilustrativa, se añaden por orden microtransportadores enfriados en hielo (60 mg/ml), oligonucleótido en doble hélice mixto (60 mg/ml) CaCl2 2,5 M y espermidina 0,1 M, la mezcla se agita suavemente, por ejemplo, por agitación vorticial, durante 10 minutos y se deja reposar a temperatura ambiente durante 10 minutos, tras los cuales los microtransportadores se diluyen en 5 volúmenes de etanol, se centrifugan y se resuspenden en etanol al 100 %. Pueden obtenerse buenos resultados con una concentración en la solución adherente de 8-10 μg/μl de microtransportadores, 14-17 μg/ml de oligonucleótido de doble hélice mixto, CaCl2 1,1-1,4 M y espermidina 18-22 mM. Se observaron resultados óptimos en las condiciones de 8 μg/μl de microtransportadores, 16,5 μg/ml de oligonucleótido de doble hélice mixto, CaCl2 1,3 M y espermidina 21 mM.
Las oligonucleobases recombinagénicas también pueden introducirse en células vegetales para la práctica de la presente invención usando microfibras para penetrar la pared celular y la membrana celular. La Patente de los Estados Unidos Nº 5.302.523 de Coffee y col. describe el uso de carburo de silicio 30 veces 0,5 μm y 10 veces 0,3 μm para facilitar la transformación de cultivos de maíz en suspensión de la variedad Black Mexican Sweet. Puede usarse cualquier técnica mecánica que pueda usarse para introducir ADN para la transformación de una planta usando microfibras para administrar oligonucleobases recombinagénicas para su uso en la preparación de los presentes mutantes de EPSPS. El procedimiento desvelado por Coffee y col en la Patente de los Estados Unidos Nº 5.302.523 puede emplearse con materiales de células vegetales regenerables para introducir las presentes oligonucleobases recombinagénicas para efectuar la mutación del gen EPSPS mediante el cual puede recuperarse una planta mutada completa que muestre el fenotipo resistente a glifosato.
Una técnica ilustrativa para la administración con microfibras de una oligonucleobase recombinagénica es del modo siguiente: Se suspenden microfibras estériles (2 μg) en 150 μl de medio de cultivo de plantas que contiene aproximadamente 10 mu.g de un oligonucleótido de doble hélice mixto. Se deja reposar un cultivo en suspensión y se agitan vorticialmente volúmenes iguales de células empaquetadas y de la suspensión de fibra estéril/nucleótido durante 10 minutos y se emplacan. Se aplica medio selectivo inmediatamente o con un retraso de hasta 120 horas según sea necesario para el rasgo particular.
Electroporación
En una realización alternativa, las oligonucleobases recombinagénicas pueden administrarse a la célula vegetal mediante electroporación de un protoplasto derivado de una parte de una planta de acuerdo con técnicas que son bien conocidas para un experto habitual en la técnica. Véase, por ejemplo, Gallois y col., 1996, en Methods in Molecular Biology 55:89-107, Humana Press, Totowa, N.J.; Kipp y col., 1999, en Methods in Molecular Biology 133:213-221, Humana Press, Totowa, N.J.
Las oligonucleobases recombinagénicas también pueden introducirse en microesporas mediante electroporación. Tras la liberación de la tétrada, la microespora es unicelular y de paredes estrechas. Comienza a alargarse y desarrolla un poro germinativo antes de que se forme la exina. Una microespora en este estado es potencialmente más susceptible de transformación con ADN exógeno que otras células vegetales. Además, el desarrollo de la microespora puede alterarse in vitro para producir embriones haploides o callos embriogénicos que puedan regenerarse en plantas (Coumans y col., Plant Cell Rep. 7:618-621, 1989; Datta y col., Plant Sci. 67:83-88, 1990; Maheshwari y col., Am. J Bot.
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69:865-879, 1982; Schaeffer, Adv. en Cell Culture 7:161-182, 1989; Swanson y col., Plant Cell Rep. 6:94-97, 1987). Por lo tanto, las microesporas transformadas pueden regenerarse directamente en plantas haploides o en plantas dihaploides fértiles tras la duplicación de cromosomas mediante procedimientos estándar. Véase la solicitud de los mismos autores de los Estados Unidos con número de serie 09/680.858 titulada "Compositions and Methods for Plant Genetic Modification".
La electroporación de microesporas puede ponerse en práctica con cualquier especie de planta para la que sea posible el cultivo de microesporas, incluyendo, pero sin limitación, plantas en las familias Graminae, Leguminoceae, Cruciferaceae, Solanaceac, Cucurbitaceae, Rosaccae, Poaceae, Lilaceae, Rutaceae, Vitaceae, incluyendo especies tales como maíz (Zea mays), trigo (Triticum aestivum), arroz (Oryza sativa), avena, cebada, canola(Brassica napus, Brassica rapa, Brassica oleracea, y Brassica juncea), algodón (Gossypium hirsuitum L.), varias especies leguminosas (por ejemplo, soja [Glycine max], guisante [Pisum sativum], etc.), uvas [Vitis vinifera], y un hospedador de otras plantas de cultivo importantes. La embriogénesis de microesporas, tanto desde anteras y cultivo de microesporas, se ha descrito en más de 170 especies, que pertenecen a 68 géneros y 28 familias de dicotiledóneas y monocotiledóneas (Raghavan, Embryogenesis in Agniosperms: A Developmental and Experimental Study, Cambridge University Press, Cambridge, Inglaterra, 1986; Rhagavan, Cell Differentiation 21:213-226, 1987; Raemakers y col., Euphytica 81:93-107, 1995). Para una discusión detallada del aislamiento de microesporas, su cultivo, y la regeneración de plantas dobles haploides a partir de embriones derivados de microesporas [MDE] en Brassica napus L., véase Nehlin, The Use of Rapeseed (Brassica napus L.) Microspore as a Tool for Biotechnological Applications, Tesis doctoral, Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala, Suecia, 1999; también Nehlin y col., Plant Sci. 111:219-227, 1995, y Nehlin y col., Plant Sci. 111:219-227, 1995). La duplicación de cromosomas a partir de microesporas u otro cultivo es una técnica bien establecida para la producción de líneas de plantas homozigóticas dobles haploides en varios cultivos (Heberle-Bors y col., In vitro pollen cultures: Progress and perspectives. En: Pollen Biotechnology. Gene expression and allergen characterization, vol. 85-109, ed. Mohapatra, S. S., y Knox, R. B., Chapman y Hall, Nueva York, 1996).
Los procedimientos de electroporación de microesporas se describen en Jardinaud y col., Plant Sci. 93:177-184, 1993, y Fennell y Hauptman, Plant Cell Reports 11:567-570, 1992. Los procedimientos para la electroporación de MDON en protoplastos de plantas también pueden adaptarse para su uso en electroporación de microesporas.
Patillas y microinyección
En otra realización alternativa más, la oligonucleobase recombinagénica puede administrarse a la célula vegetal por medio de patillas o microinyección de la célula vegetal. La técnica denominada de patillas se lleva a cabo esencialmente tal como se describe en Frame y col., 1994, Plant J. 6:941-948. La oligonucleobase recombinagénica se añade a las patillas y se usa para transformar las células vegetales. La oligonucleobase recombinagénica puede incubarse conjuntamente con plásmidos que comprenden secuencias que codifican proteínas capaces de formar complejos de recombinasa en células vegetales de tal forma que la recombinación está catalizada entre el oligonucleótido y la secuencia diana en el gen de EPSPS.
Selección de plantas resistentes a glifosato
Puede ensayarse la resistencia o tolerancia de las plantas o células vegetales a un herbicida de fosfonometilglicina usando procedimientos conocidos de manera común en la técnica, por ejemplo, creciendo la planta o célula vegetal en presencia de un herbicida de fosfonometilglicina y midiendo la velocidad de crecimiento en comparación con la velocidad de crecimiento de plantas de control en ausencia de herbicida. En el caso de glifosato se usan concentraciones de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 mM en el medio de selección.
Los siguientes ejemplos ilustran la práctica de la presente invención pero no deben entenderse como limitantes de su ámbito.
Ejemplo 1: Mutantes P178A en Brassica napus (colza) (No según la invención)
Se preparó el siguiente genoplasto (oligonucleobase recombinagénica) para hacer un cambio P178A en germoplasma de Brassica napus (colza):
SEC ID 1: VATGCAGGAACAGCCATGCGTTCACTTACGGCTGCAGTTACTH
en el que V es un colorante fluorescente (V=Cy3) y H es un nucleótido reverso o base reversa (H=3’DMTdCCPG). Las nucleobases subrayadas representan una región heteróloga (codon) donde la mutación sucede en el genoma de la colza, es decir, A. El genoplasto se prepara según técnicas bien conocidas y el genoplasto se administra preferentemente en una célula de planta de colza mediante bombardeo de micropartículas, es decir, biolísticamente. Las plantas de colza regeneradas que contienen al mutante P178 A son resistentes al glifosato cuando se aplican velocidades comerciales.
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Families Citing this family (72)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2441366C2 (ru) * | 2006-01-12 | 2012-02-10 | Сайбас Юроп Б.В. | Мутанты epsps |
| JP5924773B2 (ja) | 2009-12-21 | 2016-05-25 | キージーン・エン・フェー | プロトプラストを形質移入するための改善された技術 |
| US9303270B2 (en) | 2011-07-22 | 2016-04-05 | Ricetec Aktiengesellschaft | Rice resistant to HPPD and accase inhibiting herbicides |
| KR20140068008A (ko) | 2011-07-22 | 2014-06-05 | 리체텍 악티엔게젤샤프트 | ACCase 억제인자에 대해 저항성인 벼를 생산하는 조성물 및 방법 |
| US9540654B2 (en) | 2012-02-01 | 2017-01-10 | Dow Agrosciences Llc | Synthetic brassica-derived chloroplast transit peptides |
| AU2013205557B2 (en) * | 2012-04-17 | 2016-04-21 | Corteva Agriscience Llc | Synthetic brassica-derived chloroplast transit peptides |
| KR102339732B1 (ko) * | 2013-03-15 | 2021-12-15 | 시버스 유에스 엘엘씨 | 올리고뉴클레오타이드 매개 유전자 보수를 사용한 표적화된 유전자 변형의 효율을 증가시키기 위한 방법 및 조성물 |
| US9957515B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-05-01 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for targeted gene modification |
| WO2015026887A1 (en) | 2013-08-22 | 2015-02-26 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | A soybean u6 polymerase iii promoter and methods of use |
| CN105874062B (zh) | 2013-10-18 | 2021-07-20 | 先锋国际良种公司 | 草甘膦-n-乙酰转移酶(glyat)序列以及使用方法 |
| CA2942407C (en) | 2014-03-14 | 2023-09-26 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for increasing efficiency of targeted gene modification using oligonucleotide-mediated gene repair |
| WO2015164457A1 (en) | 2014-04-22 | 2015-10-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Plastidic carbonic anhydrase genes for oil augmentation in seeds with increased dgat expression |
| CN107567499A (zh) | 2015-03-27 | 2018-01-09 | 纳幕尔杜邦公司 | 大豆u6核小rna基因启动子及其在植物小rna基因的组成型表达中的用途 |
| CN107873057B (zh) | 2015-05-11 | 2022-08-05 | 双刃基金会 | 用于转移对亚洲大豆锈病抗性的多核苷酸和方法 |
| WO2016186946A1 (en) | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Rapid characterization of cas endonuclease systems, pam sequences and guide rna elements |
| WO2016205445A1 (en) | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| AU2016288257B2 (en) * | 2015-07-02 | 2020-01-30 | Arcadia Biosciences, Inc. | Wheat having resistance to glyphosate due to alterations in 5-enol-pyruvylshikimate-3 phosphate synthase |
| WO2021257206A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Generating maize plants with enhanced resistance to northern leaf blight |
| MX2018004808A (es) | 2015-10-20 | 2018-08-01 | Pioneer Hi Bred Int | Funcion restauradora para un producto genico no funcional mediante sistemas cas guiados y metodos de uso. |
| ES2881392T3 (es) | 2015-10-30 | 2021-11-29 | Pioneer Hi Bred Int | Métodos y composiciones para transformación de plantas rápida |
| BR112018009270A2 (pt) | 2015-11-06 | 2018-11-06 | Pioneer Hi Bred Int | vetor, método de transformação de uma planta, kit |
| EP3387134B1 (en) | 2015-12-11 | 2020-10-14 | Danisco US Inc. | Methods and compositions for enhanced nuclease-mediated genome modification and reduced off-target site effects |
| DK3390631T3 (da) | 2015-12-18 | 2020-07-13 | Danisco Us Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger til t-rna-baseret guide-rna-ekspression |
| EP3390632A1 (en) | 2015-12-18 | 2018-10-24 | Danisco US Inc. | Methods and compositions for polymerase ii (pol-ii) based guide rna expression |
| US11104911B2 (en) | 2015-12-22 | 2021-08-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Embryo-preferred Zea mays promoters and methods of use |
| BR112018015348A2 (pt) | 2016-01-26 | 2018-12-18 | Pioneer Hi Bred Int | método para obter uma planta de milho ceroso, planta, semente, polinucleotídeo-guia e método para produzir uma planta híbrida de milho ceroso |
| WO2017138986A1 (en) * | 2016-02-09 | 2017-08-17 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for increasing efficiency of targeted gene modification using oligonucleotide-mediated gene repair |
| WO2017155715A1 (en) | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
| WO2017155717A1 (en) | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
| WO2017155714A1 (en) | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
| EP3960863A1 (en) | 2016-05-04 | 2022-03-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CA3022858A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| EP4083215A1 (en) | 2016-06-24 | 2022-11-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| MX2018015906A (es) | 2016-07-01 | 2019-04-04 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas de plantas y metodos para sus usos. |
| US20210292778A1 (en) | 2016-07-12 | 2021-09-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| WO2018024906A1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-08 | Ricetec Aktiengesellschaft | Methods and compositions for combinations of mutations associated with herbicide resistance/tolerance in rice |
| EP3535285B1 (en) | 2016-11-01 | 2022-04-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN110088123B (zh) | 2016-12-14 | 2023-10-20 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| US11213028B2 (en) | 2016-12-22 | 2022-01-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN106636025B (zh) * | 2016-12-28 | 2017-11-14 | 四川天豫兴禾生物科技有限公司 | 一种水稻epsps突变体及其编码基因和应用 |
| WO2018140214A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nematicidal protein from pseudomonas |
| MX2019013321A (es) | 2017-05-11 | 2020-02-10 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| CN111373046A (zh) | 2017-09-25 | 2020-07-03 | 先锋国际良种公司 | 组织偏好性启动子和使用方法 |
| CN111465321B (zh) | 2017-10-13 | 2022-12-06 | 先锋国际良种公司 | 用于植物细胞的细胞重编程的系统和方法 |
| BR112020012477A2 (pt) | 2017-12-19 | 2020-11-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | polipeptídeo recombinante; polipeptídeo inseticida recombinante; composição agrícola; construto de dna; célula hospedeira; planta transgênica; método para inibir o crescimento ou exterminar uma praga de inseto ou população de praga; método para controlar a infestação de praga; e método para melhorar o rendimento de uma cultura |
| WO2019133371A1 (en) | 2017-12-27 | 2019-07-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Transformation of dicot plants |
| WO2019169150A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-09-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant health assay |
| CN111902547B (zh) | 2018-03-23 | 2024-06-14 | 先锋国际良种公司 | 鉴定、选择和产生疾病抗性作物的方法 |
| WO2019203942A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of identifying, selecting, and producing bacterial leaf blight resistant rice |
| US11702668B2 (en) | 2018-05-22 | 2023-07-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| US11851668B2 (en) | 2018-06-06 | 2023-12-26 | Huazhong Agricultural University | Methods of identifying, selecting, and producing southern corn rust resistant crops |
| US20210277409A1 (en) | 2018-06-28 | 2021-09-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for selecting transformed plants |
| WO2020011985A1 (en) | 2018-07-12 | 2020-01-16 | Keygene N.V. | Type v crispr/nuclease-system for genome editing in plant cells |
| MX2021002290A (es) | 2018-08-29 | 2021-04-28 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| CA3111090A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for ochrobactrum-mediated plant transformation |
| WO2020089448A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Keygene N.V. | Dual guide rna for crispr/cas genome editing in plants cells |
| BR112021017998A2 (pt) | 2019-03-11 | 2021-11-16 | Pioneer Hi Bred Int | Métodos para a produção de plantas clonais |
| CA3128376A1 (en) | 2019-03-27 | 2020-10-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant explant transformation |
| WO2020198496A1 (en) | 2019-03-28 | 2020-10-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Modified agrobacterium strains and use thereof for plant transformation |
| BR112021020770A2 (pt) | 2019-04-18 | 2022-01-04 | Pioneer Hi Bred Int | Fatores de embriogênese para reprogramação celular de uma célula vegetal |
| US20220282338A1 (en) | 2019-08-23 | 2022-09-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of identifying, selecting, and producing anthracnose stalk rot resistant crops |
| WO2021076346A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Maize event dp-202216-6 and dp-023211-2 stack |
| CN111153974A (zh) | 2020-01-15 | 2020-05-15 | 华中农业大学 | 玉米抗病基因和分子标记及其应用 |
| BR112022020714A2 (pt) | 2020-04-15 | 2022-12-20 | Pioneer Hi Bred Int | Identificação de gene efetor de patógeno vegetal e de resistência à doença, composições e métodos de uso |
| US20230235352A1 (en) | 2020-07-14 | 2023-07-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN116096903A (zh) | 2020-08-10 | 2023-05-09 | 先锋国际良种公司 | 植物调节元件及其使用方法 |
| JP2023544016A (ja) | 2020-09-30 | 2023-10-19 | パイオニア ハイ－ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド | 単子葉外植片の迅速な形質転換 |
| WO2022087616A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Parthenogenesis factors and methods of using same |
| US20230407324A1 (en) | 2020-10-21 | 2023-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Doubled haploid inducer |
| CN115216554A (zh) | 2021-04-16 | 2022-10-21 | 华中农业大学 | 植物病原体效应子和疾病抗性基因鉴定、组合物和使用方法 |
| CN118019447A (zh) | 2021-08-06 | 2024-05-10 | Kws蔬菜有限责任公司 | 菠菜对霜霉病的持久抗性 |
| WO2023183918A1 (en) | 2022-03-25 | 2023-09-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of parthenogenic haploid induction and haploid chromosome doubling |
Family Cites Families (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4545060A (en) | 1983-09-19 | 1985-10-01 | Northern Telecom Limited | Decision feedback adaptive equalizer acting on zero states following a non-zero state |
| US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
| US5100792A (en) | 1984-11-13 | 1992-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues |
| US5145783A (en) * | 1987-05-26 | 1992-09-08 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
| US5312910A (en) * | 1987-05-26 | 1994-05-17 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
| US4971908A (en) * | 1987-05-26 | 1990-11-20 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
| JPH0651777B2 (ja) * | 1989-02-21 | 1994-07-06 | 株式会社日立製作所 | 熱硬化性樹脂組成物及びそれを用いたコイル、パネル |
| US5302523A (en) | 1989-06-21 | 1994-04-12 | Zeneca Limited | Transformation of plant cells |
| US5310667A (en) | 1989-07-17 | 1994-05-10 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases |
| US5550318A (en) | 1990-04-17 | 1996-08-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
| US5484956A (en) | 1990-01-22 | 1996-01-16 | Dekalb Genetics Corporation | Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin |
| US5204253A (en) * | 1990-05-29 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method and apparatus for introducing biological substances into living cells |
| US5633435A (en) * | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
| US5866775A (en) | 1990-09-28 | 1999-02-02 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases |
| DE4216134A1 (de) | 1991-06-20 | 1992-12-24 | Europ Lab Molekularbiolog | Synthetische katalytische oligonukleotidstrukturen |
| US5593874A (en) * | 1992-03-19 | 1997-01-14 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants |
| IT230274Y1 (it) | 1993-06-11 | 1999-06-02 | Silc Spa | Pannolone assorbente sagomato per incontinenza |
| CA2178729A1 (en) | 1993-12-09 | 1995-06-15 | Eric B. Kmiec | Compounds and methods for site-directed mutations in eukaryotic cells |
| DK0679657T3 (da) * | 1994-04-27 | 2003-10-27 | Novartis Ag | Nukleosider og oligonukleotider med 2'-ethergrupper |
| US5454060A (en) * | 1994-08-03 | 1995-09-26 | Mcdermott; Neal J. | Foot dryer |
| US5780296A (en) * | 1995-01-17 | 1998-07-14 | Thomas Jefferson University | Compositions and methods to promote homologous recombination in eukaryotic cells and organisms |
| FR2736926B1 (fr) | 1995-07-19 | 1997-08-22 | Rhone Poulenc Agrochimie | 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene |
| FR2736929B1 (fr) | 1995-07-19 | 1997-08-22 | Rhone Poulenc Agrochimie | Sequence adn isolee pouvant servir de zone de regulation dans un gene chimere utilisable pour la transformation des plantes |
| US5760012A (en) | 1996-05-01 | 1998-06-02 | Thomas Jefferson University | Methods and compounds for curing diseases caused by mutations |
| US5731181A (en) | 1996-06-17 | 1998-03-24 | Thomas Jefferson University | Chimeric mutational vectors having non-natural nucleotides |
| US5888983A (en) | 1996-05-01 | 1999-03-30 | Thomas Jefferson University | Method and oligonucleobase compounds for curing diseases caused by mutations |
| FR2751347B1 (fr) | 1996-07-16 | 2001-12-07 | Rhone Poulenc Agrochimie | Gene chimere a plusieurs genes de tolerance herbicide, cellule vegetale et plante tolerantes a plusieurs herbicides |
| AU6882298A (en) | 1997-04-03 | 1998-10-22 | Dekalb Genetics Corporation | Glyphosate resistant maize lines |
| US6524613B1 (en) | 1997-04-30 | 2003-02-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Hepatocellular chimeraplasty |
| WO1998049350A1 (en) | 1997-04-30 | 1998-11-05 | Regents Of The University Of Minnesota | In vivo use of recombinagenic oligonucleobases to correct genetic lesions in hepatocytes |
| GB9711015D0 (en) | 1997-05-28 | 1997-07-23 | Zeneca Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| WO1999007865A1 (en) | 1997-08-05 | 1999-02-18 | Kimeragen, Inc. | The use of mixed duplex oligonucleotides to effect localized genetic changes in plants |
| US6010907A (en) | 1998-05-12 | 2000-01-04 | Kimeragen, Inc. | Eukaryotic use of non-chimeric mutational vectors |
| US6004804A (en) | 1998-05-12 | 1999-12-21 | Kimeragen, Inc. | Non-chimeric mutational vectors |
| KR100834991B1 (ko) * | 1999-06-25 | 2008-06-05 | 백광산업 주식회사 | 대사 경로 단백질을 코딩하는 코리네박테리움 글루타미쿰유전자 |
| US6271360B1 (en) | 1999-08-27 | 2001-08-07 | Valigen (Us), Inc. | Single-stranded oligodeoxynucleotide mutational vectors |
| AR025996A1 (es) * | 1999-10-07 | 2002-12-26 | Valigen Us Inc | Plantas no transgenicas resistentes a los herbicidas. |
| AU2002322435A1 (en) | 2001-08-09 | 2003-02-24 | Cibus Genetics | Non-transgenic herbicide resistant plants |
| US7045684B1 (en) * | 2002-08-19 | 2006-05-16 | Mertec, Llc | Glyphosate-resistant plants |
| KR100524818B1 (ko) | 2003-12-24 | 2005-10-31 | 한국생명공학연구원 | 한세눌라 폴리모파의 시키메이트 경로 다기능 효소를코딩하는 유전자 및 이를 이용한 코리스메이트의 생합성방법 |
| SI2319932T2 (sl) * | 2004-04-30 | 2017-02-28 | Dow Agrosciences Llc | Nov gen z rezistenco na herbicide |
| RU2441366C2 (ru) * | 2006-01-12 | 2012-02-10 | Сайбас Юроп Б.В. | Мутанты epsps |
| JP5467999B2 (ja) | 2007-06-22 | 2014-04-09 | キージーン・エン・フェー | 改善された修飾オリゴヌクレオチドを用いた標的ヌクレオチドの交換 |
| DK2235187T3 (en) | 2007-12-21 | 2014-03-03 | Keygene Nv | Enhanced mutagenesis using mutagenic introduction of polyethylenglycolmedieret nucleobases in plant protoplasts |
| MX2011003266A (es) | 2008-09-26 | 2011-07-20 | Basf Agrochemical Products Bv | Mutantes de acetohidroxiacido sintasa resistentes a herbicidas y metodos de uso. |
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