ES2448500T3 - Aminopurinas haloarilo-sustituidas para su uso en tratamiento - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula (I): o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1 es alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o nosustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido; R2 es H, alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido,heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido; y R3 es arilo sustituido con uno o más halógenos o heteroarilo C3-10 sustituido con uno o más halógenos, en donde elgrupo arilo o heteroarilo C3-10 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo C1-C6, hidroxilo,hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino,alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo, en donde el término "sustituido" denota la sustitución mediante cualquiera de los sustituyentes descritos o mediantehalógeno; alquilo C1-6; alquenilo C2-6; aIquinilo C2-6; hidroxilo; alcoxilo C1-6; amino; nitro; tiol; tioéter; imina; ciano; amido; fosfonato; fosfina; carboxilo; tiocarbonilo; sulfonilo; sulfonamida; cetona; aldehído; éster; oxígeno (>=O); haloalquilo; B(OH)2, cicloalquilo que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; heterocicloalquilo, que puedeser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; arilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclicofusionado o no fusionado; amino primario, secundario, o terciario; O- alquilo C1-6; O-arilo, arilo; arilalquilo C1-6; CO2CH3;CONH2; OCH2CONH2; NH2; SO2NH2; OCHF2; CF3 u OCF3. para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis.

Description

Aminopurinas haloarilo-sustituidas para su uso en tratamiento

En la presente se proporcionan ciertos compuestos de purina amino-sustituidos para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis.

5 Hace más de 20 años que se conoce la relación entre la fosforilación anormal de proteínas y la causa o las consecuencias de enfermedades. Por lo tanto, las proteínas quinasas se han convertido en un grupo muy importante de objetivos de fármacos. Ver Cohen, Nature, 1:309-315 (2002). Se han utilizado distintos inhibidores de proteínas quinasas clínicamente en el tratamiento de una amplia gama de enfermedades tales como cáncer y enfermedades inflamatorias crónicas, incluida la diabetes y los accidentes cerebrovasculares. Ver Cohen, Eur. J. Biochem.,

10 268:5001-5010 (2001).

Las proteínas quinasas constituyen una gran y diversa familia de enzimas que catalizan la fosforilación proteica y desempeñan un papel fundamental en la señalización celular. Las proteínas quinasas pueden tener efectos reguladores positivos o negativos, dependiendo de su proteína objetivo. Las proteínas quinasas participan en vías de señalización específicas que regulan funciones celulares tales como, a modo no taxativo, metabolismo, evolución del 15 ciclo celular, adhesión celular, función vascular, apoptosis y angiogénesis. El mal funcionamiento de la señalización celular se ha relacionado con muchas enfermedades, de las cuales las mayormente descritas incluyen cáncer y diabetes. La regulación de la transducción de señales por parte de citoquinas y la asociación de moléculas de señales a protooncogenes y genes supresores tumorales han sido bien documentadas. De manera similar, se ha demostrando la conexión entre la diabetes y afecciones relacionadas y la desregulación de los niveles de proteínas quinasas. Ver,

20 por ejemplo, Sridhar et al. Pharmaceutical Research, 17(11):1345-1353 (2000). Las infecciones virales y afecciones relacionadas con las mismas también se han asociado con la regulación de las proteínas quinasas. Park et al. Cell 101 (7), 777-787 (2000).

Las proteínas quinasas pueden dividirse en grupos amplios según la identidad del o los aminoácidos a los que apuntan (serina/treonina, tirosina, lisina e histidina). Por ejemplo, las tirosina quinasas incluyen tirosina quinasas receptoras 25 (RTKs), tal como factores de crecimiento y tirosina quinasas no receptoras tales como la familia de quinasas src. También existen proteínas quinasas doblemente específicas que apuntan tanto a la tirosina como a la serina/treonina, tal como quinasas dependientes de ciclina (CDKs) y proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPKs). Toda célula contiene muchas proteínas quinasas, algunas de las cuales fosforilan otras proteínas quinasas. Algunas proteínas quinasas fosforilan muchas proteínas diferentes, mientras que otras fosforilan solamente una única proteína.

30 No es de sorprender que haya entonces un gran número de clases de proteínas quinasas. Al recibir una señal, algunas proteínas también pueden auto-fosforilarse.

Las proteínas tirosina quinasas (PTKs) constituyen una amplia familia de quinasas que regulan las señales entre las células que participan en el crecimiento, la diferenciación, la adhesión, la motilidad y la muerte celular. Robinson et al., Oncogene 19:5548-5557 (2000). Entre estas tirosina quinasas se incluyen, a modo no taxativo, Yes, BMX, Syk, 35 EphA1, FGFR3, RYK, MUSK, JAK1 y EGFR. Las tirosina quinasas se dividen en dos clases, es decir, en tirosina quinasas de tipo receptoras y de tipo no receptoras. Curiosamente, toda la familia de tirosina quinasas es bastante grande, ya que consiste en al menos 90 quinasas descritas con al menos 58 quinasas de tipo receptoras y al menos 32 quinasas de tipo no receptoras que comprenden al menos 30 subfamilias totales. Robinson et al., Oncogene 19:5548-5557 (2000). Las tirosina quinasas se han vinculado a distintas enfermedades en humanos, incluida la

40 diabetes y el cáncer. Robinson et al. en página 5548. Las tirosina quinasas a menudo participan en la mayoría de las malignidades humanas y se las ha relacionado con una amplia variedad de síndromes congénitos, Robertson et al., Trends Genet. 16:265-271 (2000).

Las tirosina quinasas no receptoras representan un grupo de enzimas intracelulares que carecen de secuencias extracelulares y transmembrana. Actualmente se han identificado más de 32 familias de tirosina quinasas no 45 receptoras. Robinson et al., Oncogene 19:5548-5557 (2000). Ejemplos de las mismas son las familias Src, Btk, Csk, ZAP70 y Kak. En particular, la familia Src de tirosina quinasas no receptoras es la más grande y consiste en las proteínas tirosina quinasas Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr e Yrk. La familia Src de quinasas se ha relacionado con la oncogénesis, la proliferación celular y el avance tumoral. En Oncogene 8:2025-2031 (1993) puede encontrarse una descripción detallada de las proteínas tirosina quinasas no receptoras. Se ha encontrado que muchas de estas

50 proteínas tirosina quinasas participan en vías de señalización celular que participan en afecciones patológicas entre las que se incluyen, a modo no taxativo, cáncer y trastornos hiperproliferativos y trastornos inmunológicos.

Las quinasas dependientes de ciclina (CDKs) representan un grupo de enzimas intracelulares que controlan el avance a través del ciclo celular y desempeñan papeles esenciales en la proliferación celular. Ver Cohen, Nature, 1:309-315 (2002). Ejemplos de CDKs incluyen, a modo no taxativo, la quinasa dependiente de ciclina 2 (CDK2), quinasa 55 dependiente de ciclina 7 (CDK7), quinasa dependiente de ciclina 6 (CDK6) y la proteína de control de la división celular 2 (CDC2). Se ha relacionado a las CDKs con la regulación de transiciones entre distintas fases del ciclo celular, tales como el pasaje de una etapa inactiva en G1 (el espacio entre la mitosis y el comienzo de la replicación del ADN para una nueva ronda de división celular) a S (el período de síntesis de ADN activa), o el pasaje de G2 a la fase M, en la que se producen la mitosis activa y la división celular. Ver, por ejemplo, los artículos compilados en Science, vol. 274

(1996), páginas 1643-1677; y Ann. Rev. Cell Dev Biol., vol. 13 (1997), páginas 261-291. Los complejos de CDKs se forman a través de la asociación de una subunidad reguladora de ciclinas (por ejemplo, las ciclinas A, B1, B2, D1, D2, D3 y E) y una subunidad catalítica de quinasas (por ejemplo, cdc2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5 y CDK6). Como su nombre indica, las CDKs exhiben una absoluta dependencia de la subunidad ciclina para poder fosforilar sus sustratos

5 objetivo y distintos pares de quinasa/ciclina funcionan para regular el avance a través de porciones específicas del ciclo celular. Las CDKs se han relacionado en varios estados de enfermedades, incluidos, a modo no taxativo, los que exhiben el fenotipo del cáncer, distintos trastornos neoplásicos y en trastornos neurológicos. Hunter, Cell 100:113-127 (2000).

Las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAP) participan en la transducción de señales al núcleo de la célula

10 en respuesta a los estímulos extracelulares. Ejemplos de MAP quinasas incluyen, a modo no taxativo, proteína quinasa 3 activada por mitógenos (MAPK3), proteína quinasa 1 activada por mitógenos (ERK2), proteína quinasa 7 activada por mitógenos (MAPK7), proteína quinasa 8 activada por mitógenos (JNK1), proteína quinasa 14 activada por mitógenos (p38 alfa), proteína quinasa 10 activada por mitógenos (MAPK10), proteína quinasa JNK3 alfa, proteína quinasa JNK2 activada por estrés y proteína quinasa 14 activada por mitógenos (MAPK14). Las MAP

15 quinasas son una familia de serina/treonina quinasas dirigidas a prolina que median la transducción de señales desde receptores extracelulares o choque de calor o radiación UV. Ver Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000). Las MAP quinasas se activan a través de la fosforilación de treonina y tirosina por parte de proteínas quinasas de especificidad dual, incluidas tirosina quinasas tales como factores de crecimiento. Se ha demostrado que la proliferación y la diferenciación celular se encuentran bajo el control regulador de múltiples

20 cascadas de MAP quinasas. Ver Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000). Como tal, la vía de las MAP quinasas desempeña papeles fundamentales en distintos estados de enfermedad. Por ejemplo, se ha demostrado que los defectos en las actividades de las MAP quinasas conducen a una proliferación celular aberrante y a carcinogénesis. Ver Hu et al., Cell Growth Differ. 11:191-200 (2000); y Das et al., Breast Cancer Res. Treat. 40:141 (1996). Más aun, también se ha relacionado la actividad de las MAP quinasas con la resistencia a la insulina asociada

25 a la diabetes tipo 2. Ver Virkamaki et al., J. Clin. Invest. 103:931-943 (1999).

Las quinasas S6 ribosómicas p90 (Rsk) son serina/treonina quinasas. Los integrantes de la familia de las Rsk funcionan en el crecimiento y en la proliferación, diferenciación y supervivencia celular activados por mitógenos. Ejemplos de integrantes de la familia de quinasas Rsk incluyen, a modo no taxativo, la proteína quinasa S6 ribosómica, 90Kda, polipéptido 2 (Rsk3), la proteína quinasa S6 ribosómica, 90kDa, polipéptido 6 (Rsk4), la proteína quinasa S6 30 ribosómica, 90kDa, polipéptido 3 (Rsk2) y la proteína quinasa S6 ribosómica, 90kDa, polipéptido 1 (Rsk1/p90Rsk). Los integrantes de la familia Rsk son activados por las quinasas 1/2 relacionadas con las señales extracelulares y por la proteína quinasa 1 dependiente de fosfoinosítidos. Frodin y Gammeltoft, Mol. Cell. Endocrinol. 151:65-77 (1999). En condiciones basales, las quinasas RSK se localizan en el citoplasma de las células y, con la estimulación de los mitógenos, la RSK activada (fosforilada por quinasa relacionada con la señal extracelular) se traslada transitoriamente 35 a la membrana plasmática en donde se activa completamente. La RSK totalmente activada fosforila sustratos que participan en el crecimiento, la proliferación, la diferenciación y la supervivencia celular. Richards et al., Curr. Biol. 9:810-820 (1999); Richards et al., Mol. Cell. Biol. 21:7470-7480 (2001). Las vías de señalización de las RSK también se han relacionado con la modulación del ciclo celular. Gross et al., J. Biol. Chem. 276(49):46099-46103 (2001). Los datos actuales sugieren que las pequeñas moléculas que inhiben las Rsk pueden ser agentes terapéuticos útiles para

40 la prevención y el tratamiento de cáncer y enfermedades inflamatorias.

Los integrantes de la familia de proteínas quinasas de punto de control son serina/treonina quinasas que desempeñan un papel importante en el avance del ciclo celular. Ejemplos de integrantes de la familia de proteínas quinasas de punto de control incluyen, a modo no taxativo, CHK1 y CHK2. Los puntos de control son sistemas que coordinan el avance del ciclo celular mediante su influencia en la formación, activación y posterior inactivación de las quinasas 45 dependientes de ciclinas. Los puntos de control evitan que el ciclo celular avance en momentos inapropiados, mantienen el equilibrio metabólico de las células mientras la célula se detiene y, en algunos casos, pueden inducir a la apoptosis (muerte celular programada) cuando no se han cumplido los requisitos del punto de control. Ver, por ejemplo, O'Connor, Cancer Surveys, 29: 151-182 (1997); Nurse, Cell, 91: 865-867 (1997); Hartwell et al., Science, 266: 1821-1828 (1994); Hartwell et al., Science, 246: 629-634 (1989). Se ha relacionado a los integrantes de la familia de

50 quinasas de punto de control con trastornos proliferativos celulares, fenotipos de cáncer y otras enfermedades relacionadas con daños y reparación del ADN. Kohn, Mol. Biol Cell 10:2703-2734 (1999); Ohi y Gould, Curr. Opin. Cell Biol. 11:267-273 (1999); Peng, et al., Science 277:1501-1505 (1997).

Las aurora quinasas son una familia de serina-treonina quinasas mitóticas multigénicas que funciona como una clase de oncogenes novedosos. Estas quinasas comprenden a los integrantes aurora-A y aurora-B. Las aurora quinasas se 55 hiperactivan y/o sobreexpresan en distintos tumores sólidos, incluidos a modo no taxativo, cáncer de mama, ovario, próstata, páncreas y colorrectal. En particular, la aurora-A es una quinasa centrosomal que desempeña un papel importante en el avance del ciclo celular y la proliferación celular. La aurora-A se encuentra en la región cromosómica 20q13 que a menudo se amplifica en distintos tipos de tumores malignos tales como cáncer colorrectal, de mama y de vejiga. Existe también una alta correlación entre la aurora-A y la aneuploidía de alto grado histopronóstico, lo que

60 convierte a la quinasa en un posible vehículo de pronóstico. La inhibición de la actividad de la aurora quinasa podría ayudar a reducir la proliferación celular, el crecimiento tumoral y posiblemente la tumorigénesis. En Oncogene 21:6175-6183 (2002) puede encontrarse una descripción detallada de la función de la aurora quinasa.

Se cree que las serina/treonina quinasas que contienen doble hélice asociadas a Rho ROCK-1 y ROCK-II desempeñan un papel muy importante en la dinámica citoesquelética ya que hacen de efectores corriente abajo de la familia Rho/Rac de GTPasas pequeñas activadas por citoquinas y factores de crecimiento. Las ROCK fosforilan varios sustratos, incluidos, a modo no taxativo, la fosfatasa de cadena liviana de la miosina, la cadena liviana de la miosina, 5 proteínas de ezrina-radixina-moesina y las quinasas LIM (por Lin11, Isl1 y Mec3). Las ROCK también median la formación de las fibras de estrés en actina y adhesiones focales en distintos tipos de células. Las ROCK desempeñan un papel importante en la migración celular porque mejoran la contractilidad celular. Son necesarias para la retracción de la cola de los monocitos y células cancerosas, y se ha utilizado un inhibidor de ROCK para reducir la diseminación de células tumorales in vivo. Experimentos recientes han definido nuevas funciones de las ROCKs en células, incluidos el posicionamiento de los centrosomas y la regulación del tamaño celular, que pueden contribuir a distintos estados fisiológicos y patológicos. Ver Nature Reviews Mol. Cell Biol. 4, 446-456 (2003). Los integrantes de la familia de ROCKs son objetivos de intervención atractivos para una variedad de patologías, incluidas el cáncer y enfermedades cardiovasculares. Por ejemplo, los inhibidores de Rho quinasa pueden ser agentes terapéuticos útiles para la hipertensión, la angina de pecho y el asma. Más aun, se espera que la Rho participe en trastornos de la

15 circulación periférica, arteriosclerosis, inflamación y una enfermedad autoinmune y, como tal, sea un objetivo útil para terapia.

La quinasa S6 ribosómica de 70 kDa (p70S6K) es activada por numerosos mitógenos, factores de crecimiento y hormonas. La activación de la p70S6K se produce a través de la fosforilación en distintos sitios y el objetivo principal de la quinasa activada es la proteína S6 ribosómica 40S, un componente importante de la maquinaria que participa en la síntesis proteica en células de mamífero. Además de su participación en la regulación de la traducción, la activación de la p70S6K se ha relacionado con el control del ciclo celular, la diferenciación de células neuronales, la regulación de la motilidad celular y una respuesta celular que es importante en metástasis tumorales, inmunidad y reparación tisular. La modulación de la actividad de la p70S6 quinasa puede tener implicaciones terapéuticas en trastornos tales como cáncer, inflamación y distintas neuropatías. Puede encontrarse una descripción detallada de

25 las p70S6K quinasas en Prog. Cell Cycle Res. 1:21-32 (1995) e Immunol Cell Biol. 78(4);447-51 (2000).

La glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK-3) es una serina/treonina constitutivamente activa muy expresada que fosforila sustratos celulares y, de esta forma, regula una amplia variedad de funciones celulares tales como el desarrollo, el metabolismo, la transcripción de genes, la traducción de proteínas, la organización citoesquelética, la regulación del ciclo celular y la apoptosis. La GSK-3 se describió inicialmente como una enzima clave que participaba en el metabolismo del glucógeno, pero ahora se sabe que regula una diversa selección de funciones celulares. Se han definido dos formas de la enzima: la GSK-3α y la GSK-3β. La actividad de la GSK-3β es regulada negativamente por la proteína quinasa B/Akt y por la vía de señalización de Wnt. Por lo tanto, los inhibidores de moléculas pequeñas de GSK-3 pueden tener distintos usos terapéuticos, incluidos el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, diabetes tipo II, trastornos bipolares, accidente cerebrovascular, cáncer y enfermedad inflamatoria crónica. Reseñado

35 en Role of glycogen synthase kinase-3 in cancer: regulation by Wnts and other signaling pathways (Adv Cancer Res.; 84:203-29, 2002); Glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) inhibitors as new promising drugs for diabetes, neurodegeneration, cancer and inflammation (Med Res Rev.; 22(4):3-84, 2002); Role of glycogen synthase kinase-3 in the phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt cell survival pathway. (J. Biol Chem., 273(32):19929-32, 1998).

Dado que regulan casi todos los procesos celulares, incluidos el metabolismo, la proliferación celular, la diferenciación celular y la supervivencia celular, las proteínas quinasas son objetivos atractivos para la intervención terapéutica de distintos estados de enfermedad. Por ejemplo, el control del ciclo celular y la angiogénesis, en los que las proteínas quinasas desempeñan un papel fundamental, son procesos celulares asociados a numerosas afecciones, tales como, a modo no taxativo, cáncer, enfermedades inflamatorias, angiogénesis anormal y enfermedades relacionadas con la misma, aterosclerosis, degeneración macular, diabetes, obesidad y dolor.

45 Las proteínas quinasas se han convertido en objetivos atractivos para el tratamiento de cánceres. Fabbro et al., Pharmacology & Therapeutics 93:79-98 (2002). Se ha propuesto que la participación de las proteínas quinasas en el desarrollo de células cancerosas humanas puede ocurrir mediante: (I) reorganizaciones genómicas (por ejemplo, BCR-ABL en leucemia mielógena crónica), (2) mutaciones que conducen a actividad quinasa constitutivamente activa, tal como leucemia mielógena aguda y tumores gastrointestinales, (3) desregulación de la actividad quinasa mediante activación de oncogenes o pérdida de funciones supresoras tumorales tales como en cánceres con RAS oncogénicos,

(4) desregulación de la actividad quinasa mediante sobreexpresión, como en el caso del EGFR y (5) expresión ectópica de factores de crecimiento que pueden contribuir al desarrollo y mantenimiento del fenotipo neoplásico. Fabbro et al., Pharmacology & Therapeutics 93:79-98 (2002).

Ciertos cánceres se asocian a la angiogénesis. La angiogenésis es el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos

55 capilares a partir de la vasculatura ya existente. Risau, W., Nature 386:671-674 (1997). Se ha demostrado que las proteínas quinasas pueden contribuir al desarrollo y mantenimiento del fenotipo neoplásico. Fabbro et al., Pharmacology & Therapeutics 93:79-98 (2002). Por ejemplo, se ha relacionado el VEGF A-D y sus cuatro receptores con fenotipos que implican la neovascularización y la permeabilidad vascular mejorada, tal como angiogénesis y linfoangiogénesis tumoral. Matter, A., Drug Discov. Today 6:1005-1023 (2001).

Las enfermedades cardiovasculares constituyen la causa de casi una cuarta parte del total de muertes anuales en todo el mundo. Los trastornos vasculares tales como aterosclerosis y restenosis son el resultado del crecimiento

desregulado de las paredes de los vasos y de la restricción del flujo sanguíneo hacia los órganos vitales. Distintas vías de quinasa, por ejemplo, JNK, son activadas por estímulos aterogénicos y desreguladas a través de la producción local de citoquinas y factores de crecimiento en células vasculares. Yang et al., Immunity 9:575 (1998). La isquemia y la isquemia conjuntamente con reperfusión en el corazón, riñón o cerebro resultan en muerte celular y formación de cicatrices, lo que a la postre puede provocar insuficiencia cardíaca congestiva, insuficiencia renal o disfunción cerebral. En los transplantes de órganos, la reperfusión de órganos donantes previamente isquémicos resulta en lesión tisular mediada por leucocitos aguda y retraso de la función del injerto. Las vías de la isquemia y la reperfusión son mediadas por distintas quinasas. Por ejemplo, la vía de la JNK se ha relacionado con el daño tisular mediado por leucocitos. Li et al., Mol. Cell. Biol. 16:5947-5954 (1996). Finalmente, la apoptosis mejorada en tejidos cardíacos también se ha vinculado con la actividad de las quinasas. Pombo et al., J. Biol. Chem. 269:26546-26551 (1994).

La dilucidación de lo intrincado de las vías de las proteínas quinasas y la complejidad de las relaciones e interacciones entre las distintas proteínas quinasas y vías de las quinasas pone de relieve la importancia de desarrollar agentes farmacéuticos capaces de actuar como moduladores, reguladores o inhibidores de las proteínas quinasas que tengan una actividad beneficiosa en múltiples quinasas o en múltiples vías de las quinasas.

Se ha sugerido, por lo tanto, que, debido a la complejidad de las cascadas de señalización intracelulares de las vías de las proteínas quinasas, es posible que sean necesarios agentes que afecten múltiples vías simultáneamente para obtener una actividad clínica significativa. En efecto, se sabe que algunos fármacos para quinasas, tales como Gleevec®, apuntan a más de una quinasa a la vez. El Gleevec® apunta principalmente a una proteína de fusión mutante que contiene la quinasa abl, que se crea mediante un evento de translocación cromosómica 9:22. El Gleevec® también apunta a c-kit, una tirosina quinasa relacionada con los tumores estromales gastrointestinales (GIST). Sin embargo, en recientes pruebas clínicas, los pacientes han desarrollado una resistencia al Gleevec® o han demostrado tener una respuesta incompleta al tratamiento.

Por lo tanto, aún existe la necesidad de nuevos moduladores de quinasas.

El documento EP 201 289 describe ciertos compuestos de purina que se dice tienen actividad antiviral.

En la presente invención se proporcionan compuestos que tienen la siguiente fórmula (I):

y sales y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde R1, R2 y R3 son tal como se definen en la presente invención, para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis.

Un compuesto de fórmula (I) o una sal, clatrato, solvato, hidrato o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo (cada uno denominado "compuesto de aminopurina" en la presente invención) es útil también para el tratamiento o prevención de cáncer, una enfermedad cardiovascular, una enfermedad renal, una afección autoinmune, una afección inflamatoria, degeneración macular, lesión por isquemia-reperfusión, dolor y síndromes relacionados, desgaste relacionado con enfermedades, una afección relacionada con el amianto, hipertensión pulmonar, lesión/daño del sistema nervioso central (SNC) o una afección tratable o prevenible mediante la inhibición de una vía de la quinasa, que en una realización es la vía de la JNK.

Además, en la presente invención se describen composiciones que comprenden una cantidad efectiva de un compuesto de aminopurina y composiciones que comprenden una cantidad efectiva de un compuesto de aminopurina y un vehículo sólido o líquido farmacéuticamente aceptable. Las composiciones son útiles para el tratamiento o prevención de cáncer, una enfermedad cardiovascular, una enfermedad renal, una afección autoinmune, una afección inflamatoria, degeneración macular, lesión por isquemia-reperfusión, dolor y síndromes relacionados, desgaste relacionado con enfermedades, una afección relacionada con el amianto, hipertensión pulmonar, lesión/daño del sistema nervioso central (SNC) o una afección tratable o prevenible mediante la inhibición de una vía de la quinasa, que en una realización es la vía de la JNK.

Asimismo, en la presente invención se describen usos para el tratamiento o prevención de cáncer, una enfermedad cardiovascular, una enfermedad renal, una afección inflamatoria, una afección metabólica, una afección autoinmune, degeneración macular, lesión por isquemia-reperfusión, dolor y síndromes relacionados, desgaste relacionado con enfermedades, una afección relacionada con el amianto, hipertensión pulmonar, lesión/daño del sistema nervioso central (SNC) o una afección tratable o prevenible mediante la inhibición de una vía de la quinasa, que en una realización es la vía de la JNK.

En una realización, el compuesto de aminopurina apunta a dos o más de las siguientes: quinasas de la familia de quinasas src, quinasas de la familia de quinasas Rsk, quinasas de la familia de quinasas CDK, quinasas de la familia 5 de quinasas MAPK y tirosina quinasas tales como Fes, Lyn y Syk quinasas. El agente puede apuntar a dos o más quinasas de la misma familia o puede apuntar a quinasas que representan dos o más familias o clases de quinasas.

Además, en la presente invención se describen stents (por ejemplo, injerto de stent) que contienen o están recubiertos con un compuesto de aminopurina eficaz para el tratamiento o prevención de una enfermedad cardiovascular o una enfermedad renal.

10 Las presentes realizaciones podrán comprenderse más cabalmente con la descripción detallada y los ejemplos, los cuales pretenden ejemplificar a modo no taxativo las realizaciones.

Definiciones

Un grupo "alquilo C1-6" es un hidrocarburo saturado de cadena recta o ramificada no cíclico que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. -(Alquilos C1-6) representativos incluyen -metilo, -etilo, -n-propilo, -n-butilo, -n-pentilo y -n-hexilo; mientras 15 que los alquilos saturados ramificados incluyen -isopropilo, -sec-butilo, -isobutilo, -terc-butilo, -isopentilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 2,3-dimetilbutilo y similares. Un grupo -(alquilo C1-6) puede estar sustituido

o no sustituido.

Un grupo "alcoxi" es un grupo -O-(alquilo C1-6), en donde alquilo C1-6 se define anteriormente, incluidos -OCH3, -OCH2CH3, -O(CH2)2CH3, -O(CH2)3CH3,-O(CH2)4CH3, -O(CH2)5CH3 y similares.

20 Un grupo "alcoxialquilo" es un grupo -(alquileno C1-6)-O-(alquilo C1-6), en donde cada alquilo C1-6 es independientemente un grupo alquilo C1-6 definido anteriormente, incluidos -CH2OCH3, -CH2OCH2CH3, -(CH2)2OCH2CH3, -(CH2)2O(CH2)2CH3 y similares.

Un grupo "alquilamino" es un grupo mono-alquilamino o di-alquilamino, tal como -NH(alquilo C1-6), -N(alquilo C1-6)(alquilo C1-6), -NH(cicloalquilo C3-10), -N(cicloalquilo C3-10)(cicloalquilo C3-10) o -N(alquilo C1-6)(cicloalquilo C3-10) en

25 donde cada alquilo C1-6 y cicloalquilo C3-10 es independientemente tal como se define en la presente, incluidos, a modo no taxativo, -NHCH3, -NHCH2CH3, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)3CH3, -NH(CH2)4CH3, -NH(CH2)5CH3, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, -N((CH2)2CH3)2 y -N(CH3)(CH2CH3).

Un grupo "aminocarbonilo" es un grupo -C(O)NR2, en donde cada R es independientemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-6 definido anteriormente, en donde cada grupo alquilo C1-6 puede estar opcionalmente sustituido.

30 Un grupo "aminoalquilo" es un grupo -C(O)NR2, en donde cada R es independientemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-6 definido anteriormente, en donde cada grupo alquilo C1-6 puede estar opcionalmente sustituido.

Un grupo "acilamino" es un grupo alquilo C1-6 sustituido con uno o más grupos NR2, en donde R es hidrógeno o un grupo alquilo C1-6 definido anteriormente, en donde cada grupo alquilo C1-6 puede estar opcionalmente sustituido en forma adicional.

35 Un grupo "alcanosulfonilamino" es un grupo -NR-SO2-alquilo C1-6, en donde R es hidrógeno o un grupo alquilo C1-6 definido anteriormente, en donde cada grupo alquilo C1-6 puede estar opcionalmente sustituido.

Un grupo "cicloalquilo C3-10" es un grupo alquilo cíclico de 3 a 10 átomos de carbono que tiene un solo anillo cíclico o múltiples anillos condensados o con puente que pueden estar opcionalmente sustituidos por 1 a 3 grupos alquilo. Dichos grupos cicloalquilo incluyen, a modo de ejemplo, estructuras de un solo anillo tales como ciclopropilo,

40 ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, 1-metilciclopropilo, 2-metilciclopentilo, 2-metilciclooctilo y similares, o estructuras de múltiples anillos o con puente tales como adamantanilo y similares. Un grupo -(cicloalquilo C3-10) puede estar sustituido o no sustituido. Dichos grupos cicloalquilo sustituidos incluyen, a modo de ejemplo, ciclohexanona y similares.

Un "carboxilo" o "carboxi" es un grupo -COOH.

45 Un "halógeno" es flúor, cloro, bromo o yodo.

Un grupo "arilo" es un grupo carbocíclico aromático insaturado de 6 a 14 átomos de carbono que tiene un solo anillo (por ejemplo, fenilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, naftilo o antrilo). Arilos particulares incluyen fenilo, bifenilo, naftilo y similares. Un grupo arilo puede estar sustituido o no sustituido.

Un grupo "heteroarilo C3-10" es un sistema anular arilo que tiene uno a cuatro heteroátomos como átomos del anillo en

50 un sistema anular heteroaromático, en donde el resto de los átomos son átomos de carbono. Heteroátomos adecuados incluyen oxígeno, azufre y nitrógeno. En algunas realizaciones, el sistema anular heterocíclico es monocíclico o bicíclico. Ejemplos no taxativos incluyen los siguientes:

en donde Q es CH2, C=CH2, O, S o NH. Un grupo -(heteroarilo C3-10) puede estar sustituido o no sustituido.

Un grupo "heterociclo C3-10" es un cicloalquilo aromático o no aromático que tiene de 3 a 10 átomos del anillo en el cual uno a cuatro de los átomos de carbono del anillo se reemplazan independientemente con un heteroátomo del grupo que consiste en O, S y N. Ejemplos representativos de un heterociclo incluyen, a modo no taxativo, azetidina, benzofuranilo, benzotiofeno, indolilo, benzopirazolilo, coumarinilo, isoquinolinilo, morfolinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, tiofenilo, furanilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, quinolinilo, pirimidinilo, piridinilo, piridonilo, pirazinilo, piridazinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, (1,4)-dioxano, (1,3)-dioxolano, 4,5-dihidro-1H-imidazolilo, tetrahidropirano, tetrahidrofurano y tetrazolilo. Ejemplos no taxativos adicionales incluyen los siguientes:

incluidos estereoisómeros y enantiómeros de los mismos, en donde cada X es independientemente CH2, O, S o N y R4 es H, alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido

o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido. Un grupo -(heteroarilo C3-10) puede estar sustituido o no sustituido. . Un grupo -(heterociclo C3-10) puede estar sustituido o no sustituido.

Un grupo "heterociclocarbonilo" es un grupo -C(O)-heterociclo C3-10, en donde heterociclo C3-10 es como se describe en la presente invención, en donde el grupo heterociclo C3-10 puede estar opcionalmente sustituido.

5 Un grupo "hidroxialquilo" es un grupo alquilo como se describe anteriormente sustituido con uno o más grupos hidroxi.

En una realización, cuando se dice que los grupos descritos en la presente invención "están sustituidos" estos pueden estar sustituidos con cualquier sustituyente o sustituyentes que no afecten de manera adversa la actividad del compuesto de aminopurina. Ejemplos de sustituyentes son los que se encuentran en los compuestos de los ejemplos y realizaciones descritos en la presente invención, así como halógeno (cloro, yodo, bromo, o fluoro); alquilo C1-6; 10 alquenilo C2-6; alquinilo C2-6; hidroxilo; alcoxilo C1-6; amino; nitro; tiol; tioéter; imina; ciano; amido; fosfonato; fosfina; carboxilo; tiocarbonilo; sulfonilo; sulfonamida; cetona; aldehído; éster; oxígeno (=O); haloalquilo (por ejemplo, trifluorometilo); B(OH)2, cicloalquilo carbocíclico, que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado (por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, o ciclohexilo), o un heterocicloalquilo, que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado (por ejemplo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo o tiazinilo); arilo

15 policíclico carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o fusionado o no fusionado (por ejemplo, fenilo, naftilo, pirrolilo, indolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, piridinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, acridinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, benzimidazolilo, benzotiofenilo o benzofuranilo); amino (primario, secundario, o terciario); O-alquilo inferior; O-arilo, arilo; arilalquilo inferior; CO2CH3; CONH2; OCH2CONH2; NH2-; SO2NH2; OCHF2; CF3; OCF3.

20 "JNK" significa una proteína o una isoforma de la misma expresada mediante un gen JNK 1, JNK 2 o JNK 3 (Gupta, S., Barrett, T., Whitmarsh, A. J., Cavanagh, J., Sluss, H. K., Derijard, B. and Davis, R. J, The EMBO J. 15:2760-2770 (1996)).

Tal como se utiliza en la presente invención, la expresión "sal(es) farmacéuticamente aceptable(s)" se refiere a una sal preparada a partir de un ácido o base no tóxicos farmacéuticamente aceptables incluidos una base y un ácido 25 inorgánico y una base y un ácido orgánico. Sales de adición de base farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo sales metálicas obtenidas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc o sales orgánicas obtenidas de lisina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procaína. Ácidos no tóxicos adecuados incluyen, a modo no taxativo, ácidos inorgánicos y orgánicos tales como ácido acético, algínico, antranílico, bencenosulfónico, 30 benzoico, camforsulfónico, cítrico, etenosulfónico, fórmico, fumárico, furoico, galacturónico, glucónico, glucurónico, glutámico, glicólico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fosfórico, propiónico, salicílico, estearico, succínico, sulfanílico, sulfúrico, tartárico y ácido p-toluenosulfónico. Ácidos no tóxicos específicos incluyen ácidos clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, sulfúrico y metanosulfónico. Por lo tanto, ejemplos de sales específicas incluyen sales hidrocloruro y mesilato. Otros

35 son bien conocidos en la técnica, ver por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990) o Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th eds., Mack Publishing, Easton PA (1995).

Tal como se utiliza en la presente invención, el término "polimorfo(s)" y términos relacionados en la presente invención se refiere a formas sólidas de los compuestos de aminopurina que tienen diferentes propiedades físicas como 40 resultado del orden de las moléculas en la red cristalina. Las diferencias en las propiedades físicas exhibidas por las formas sólidas afectan los parámetros farmacéuticos tales como la estabilidad durante el almacenamiento, compresibilidad y densidad (importante en la formulación y la fabricación del producto) y tasas de disolución (un factor importante para determinar la biodisponibilidad). Las diferencias en la estabilidad pueden ser el resultado de cambios en la reactividad química (por ejemplo, oxidación diferencial, de forma tal que una forma de dosificación se decolora 45 más rápidamente cuando está compuesta por una forma sólida que cuando está compuesta por otra forma sólida) o cambios mecánicos (por ejemplo, los comprimidos se deshacen cuando están almacenados cuando un polimorfo cinéticamente favorecido se convierte en una forma sólida termodinámicamente más estable) o ambos (por ejemplo, comprimidos de una forma sólida son más susceptibles a la desintegración con humedad alta). Como resultado de las diferencias de solubilidad/disolución, en un caso extremo, algunas transiciones de las formas sólidas pueden resultar

50 en la falta de potencia o, en el extremo opuesto, en toxicidad. Además, las propiedades físicas del cristal pueden ser importantes en el procesamiento. Por ejemplo, una forma sólida puede ser más proclive a formar solvatos o puede ser más difícil de filtrar y lavar para que no contenga impurezas (es decir, la forma y la distribución del tamaño de las partículas puede ser diferente en una forma sólida con respecto a otra).

Tal como se utiliza en la presente invención y a menos que se indique de otra forma, el término "clatrato" significa un

55 compuesto de aminopurina, o una sal del mismo, en forma de red cristalina que contiene espacios (por ejemplo, canales) que tienen una molécula huésped (por ejemplo, un disolvente o agua) atrapada dentro de ella o una red cristalina en donde un compuesto de aminopurina es una molécula huésped.

Tal como se utiliza en la presente invención y a menos que se indique de otra forma, el término "hidrato" significa un compuesto de aminopurina, o una sal del mismo, que además incluye una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de agua unida por fuerzas intermoleculares no covalentes.

Tal como se utiliza en la presente invención y a menos que se indique de otra forma, el término "solvato" significa un 5 compuesto de aminopurina, o una sal del mismo, que además incluye una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de un disolvente unido por fuerzas intermoleculares no covalentes.

Tal como se utiliza en la presente invención y a menos que se indique de otra forma, el término "profármaco" significa un derivado de compuesto de aminopurina que puede hidrolizarse, oxidarse o hacerse reaccionar de otra forma en condiciones biológicas (in vitro o in vivo) para proporcionar un compuesto activo, particularmente un compuesto de 10 aminopurina. Ejemplos de profármacos incluyen, a modo no taxativo, derivados y metabolitos de un compuesto de aminopurina que incluyen restos biohidrolizables tales como amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos biohidrolizables, ureidas biohidrolizables y análogos de fosfato biohidrolizables. En ciertas realizaciones, los profármacos de compuestos con grupos funcionales carboxilo son los ésteres de alquilo inferior del ácido carboxílico. Los ésteres de carboxilato se forman convenientemente mediante la

15 esterificación de cualquiera de los restos de ácido carboxílico presentes en la molécula. Los profármacos pueden prepararse típicamente utilizando métodos conocidos tales como los descritos en Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) y Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).

Tal como se utiliza en la presente invención, y a menos que se indique de otra forma, el término "estereoisómero" o

20 "estereoméricamente puro" significa un estereoisómero de un compuesto de aminopurina que es sustancialmente libre de otros estereoisómeros de ese compuesto. Por ejemplo, un compuesto estereoméricamente puro que tiene un centro quiral estará sustancialmente libre del enantiómero opuesto del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro que tiene dos centros quirales estará sustancialmente libre de otros diastereómeros del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro típico comprende más de aproximadamente 80% en peso de un

25 estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 20% en peso de otros estereoisómeros del compuesto, más de aproximadamente 90% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 10% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, más de aproximadamente 95% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 5% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, o más de aproximadamente 97% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 3% en peso de

30 los otros estereoisómeros del compuesto. Los compuestos de aminopurina pueden tener centros quirales y pueden aparecer como racematos, enantiómeros individuales o diastereómeros y mezclas de los mismos. Todas esas formas isoméricas se incluyen en las realizaciones descritas en la presente invención, incluidas mezclas de los mismos.

Varios compuestos de aminopurina contienen uno o más centros quirales y pueden existir como mezclas racémicas de enantiómeros, mezclas de diastereómeros o compuestos enantioméricamente u ópticamente puros. El uso de formas 35 estereoméricamente puras de dichos compuestos de aminopurina, así como el uso de mezclas de dichas formas se encuentran incluidas en las realizaciones descritas en la presente invención. Por ejemplo, pueden utilizarse mezclas que comprenden cantidades iguales o desiguales de los enantiómeros de un compuesto de aminopurina en particular en los métodos y las composiciones descritos en la presente invención. Estos isómeros pueden sintetizarse asimétricamente o resolverse utilizando técnicas convencionales tales como columnas quirales o agentes de

40 resolución quiral. Ver, por ejemplo, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).

Cabe señalar también que los compuestos de aminopurina incluyen isómeros E y Z, o una mezcla de los mismos, e

45 isómeros cis y trans, o una mezcla de los mismos. En ciertas realizaciones, los compuestos de aminopurina se aíslan como el isómero E o como el isómero Z. En otras realizaciones, los compuestos de aminopurina son una mezcla de los isómeros E y Z.

La expresión "cantidad efectiva" con relación a un compuesto de aminopurina puede significar una cantidad capaz de tratar o prevenir una enfermedad descrita en la presente invención, tal como cáncer, una enfermedad cardiovascular,

50 una enfermedad renal, una afección autoinmune, una afección inflamatoria, degeneración macular, lesión por isquemia-reperfusión, dolor y síndromes relacionados, desgaste relacionado con enfermedades, una afección relacionada con el amianto, hipertensión pulmonar, lesión/daño del sistema nervioso central (SNC) o una afección tratable o prevenible mediante la inhibición de una vía de la quinasa, que en una realización es la vía de la JNK.

Tal como se utiliza en la presente invención, la expresión "degeneración macular" abarca todas las formas de

55 enfermedades degenerativas maculares, independientemente de la edad del paciente, aunque algunas enfermedades degenerativas maculares son más comunes en ciertos grupos etarios. Éstas incluyen, a modo no taxativo, enfermedad de Best o viteliforme (más común en pacientes menores de aproximadamente siete años de edad); enfermedad de Stargardt, distrofia macular juvenil o fundus flavimaculatus (más común en pacientes entre aproximadamente cinco y aproximadamente 20 años de edad); enfermedad de Behr, enfermedad de Sorsby, enfermedad de Doyne o distrofia en

60 panal de abejas (más común en pacientes entre aproximadamente 30 y aproximadamente 50 años de edad); y degeneración macular relacionada con la edad (más común en pacientes de aproximadamente 60 años de edad o mayores). En una realización, la causa de la enfermedad degenerativa macular es genética. En otra realización, la causa de la enfermedad degenerativa macular es un traumatismo físico. En otra realización, la causa de la enfermedad degenerativa macular es la diabetes. En otra realización, la causa de la enfermedad degenerativa macular es la

5 desnutrición. En otra realización, la causa de la enfermedad degenerativa macular es una infección.

Tal como se utiliza en la presente invención, la expresión "lesión por isquemia-reperfusión" incluye lesiones que se producen durante una cirugía o como resultado de la misma, incluidas, a modo no taxativo, cirugía de bypass de arteria coronaria con injerto, angioplastia coronaria transluminal percutánea, cirugía ortopédica, cirugía de órganos/vasos, cirugía de extirpación de placas/tumores o cirugía de transplante de órganos/tejidos (en donantes o receptores). La

10 frase "lesión por isquemia-reperfusión" también incluye lesiones que se producen en un órgano o tejido ex vivo antes de un transplante.

Tal como se utiliza en la presente invención, la frase "dolor y síndromes relacionados" incluye dolor nociceptivo, tal como el que resulta de un traumatismo físico (por ejemplo, un corte o contusión de la piel; o una quemadura química o térmica), osteoartritis, artritis reumatoide o tendinitis; dolor miofascial; dolor neuropático, tal como el que se asocia con 15 accidentes cerebrovasculares, neuropatía diabética, neuropatía luética, neuralgia postherpética, neuralgia del trigémino, fibromialgia o neuropatía dolorosa iatrogénicamente inducida por fármacos tales como vincristina, velcade o talidomida; o dolor mixto (es decir, dolor con componentes tanto nociceptivos como neuropáticos). Otros tipos de dolor que pueden tratarse o prevenirse mediante la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de aminopurina a un paciente que lo necesite incluyen, a modo no taxativo, dolor visceral; dolor de cabeza (por ejemplo, 20 dolor de cabeza por migraña); SDRC; SDRC tipo I; SDRC tipo II; DSR; distrofia neurovascular refleja; distrofia refleja; síndrome doloroso simpáticamente mantenido; causalgia; atrofia ósea de Sudeck; algoneurodistrofia; síndrome hombro-mano; distrofia post-traumática; disfunción autonómica; dolor relacionado con el cáncer; dolor del miembro fantasma; síndrome de fatiga crónica; dolor post-operatorio; dolor por lesión de médula espinal; dolor central posterior al accidente cerebrovascular; radiculopatía; sensibilidad a la temperatura, dolor por leve roce o cambio de color en la

25 piel (alodinia); dolor de afecciones hipertérmicas o hipotérmicas; y otras afecciones dolorosas (por ejemplo, neuropatía diabética, neuropatía luética, neuralgia postherpética, neuralgia del trigémino).

La expresión "desgaste relacionado con enfermedades" significa desgaste (por ejemplo, una pérdida de masa física a través de la desintegración del tejido corporal) asociado con una enfermedad tal como VIH, SIDA, cáncer, enfermedad renal en etapa terminal, insuficiencia renal, enfermedades cardíacas crónicas, enfermedad pulmonar obstructiva,

30 tuberculosis, artritis reumatoide, una enfermedad inflamatoria crónica (por ejemplo, esclerodermia o enfermedad mixta del tejido conjuntivo) o una enfermedad infecciosa crónica (por ejemplo, osteoartritis o endocarditis bacteriana).

La expresión "enfermedad relacionada con el amianto" incluye enfermedades y trastornos tales como mesotelioma maligno, asbestosis, efusión pleural maligna, efusión pleural benigna, placa pleural, calcificación pleural, engrosamiento pleural difuso, atelectasia redonda y carcinoma broncogénico, así como síntomas de enfermedades y

35 trastornos relacionados con el amianto tales como disnea, obliteración del diafragma, recubrimiento tipo lámina radiolucente de la pleura, efusión pleural, engrosamiento pleural, tamaño reducido del pecho, molestia en el pecho, dolor de pecho, predisposición a la fatiga, fiebre, sudoraciones y pérdida de peso.

La expresión "hipertensión pulmonar" incluye enfermedades caracterizadas por elevaciones sostenidas de la presión arterial pulmonar, así como síntomas asociados a la hipertensión pulmonar tales como disnea, fatiga, debilidad, dolor

40 de pecho, síncope recurrente, convulsiones, aturdimiento, déficits neurológicos, edema de pierna y palpitaciones.

La expresión "lesión/daño del sistema nervioso central (SNC)" incluye, a modo no taxativo, lesión cerebral primaria, lesión cerebral secundaria, lesión cerebral traumática, lesión cerebral focal, lesión axonal difusa, lesión de la cabeza, conmoción cerebral, síndrome de post-conmoción cerebral, contusión y laceración cerebral, hematoma subdural, hematoma en la piel, epilepsia postraumática, estado vegetativo crónico, lesión completa de la médula 45 espinal, lesión incompleta de la médula espinal, lesión aguda de la médula espinal, lesión subaguda de la médula espinal, lesión crónica de la médula espinal, síndrome centromedular, síndrome de Brown-Sequard, síndrome medular anterior, síndrome del cono medular, síndrome de cauda equina, shock neurogénico, shock medular, nivel alterado de conciencia, dolor de cabeza, náuseas, emesis, pérdida de memoria, mareos, diplopía, visión borrosa, labilidad emocional, alteraciones del sueño, irritabilidad, dificultad de concentración, nerviosismo, deterioro conductual, déficit

50 cognitivo y ataque epiléptico.

El término "paciente" incluye un animal, incluido, a modo no taxativo, un animal tal como vaca, mono, caballo, oveja, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, ratón, rata, conejo o conejillo de Indias, en una realización un mamífero, en otra realización un humano.

Compuestos de aminopurina

55 En la presente invención se proporcionan compuestos de aminopurina que tienen la siguiente fórmula (I): y sales y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis,

en donde:

5 R1 es alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido;

R2 es H, alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido; y

R3 es arilo sustituido con uno o más halógenos o heteroarilo C3-10 sustituido con uno o más halógenos, en donde el

10 grupo arilo o heteroarilo C3-10 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo C1-C6, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo.

En una realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido, en 15 una realización fenilo sustituido con alcoxi, en una realización fenilo sustituido con p-alcoxi y en una realización fenilo sustituido con p-metoxi.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con m-alcoxi, en una realización fenilo sustituido con m-metoxi.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con 20 trifluorometilo, en una realización fenilo sustituido con p-trifluorometilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es alquilo C1-6, en una realización isopropilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con p-halo, en una realización fenilo sustituido con p-fluoro.

25 En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con p-alquilo C1-6, en una realización fenilo sustituido con p-metilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con o-halo; en una realización fenilo sustituido con o-fluoro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido 30 con m,p-dihalo, en una realización fenilo sustituido con m,p-dicloro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con m-ciano.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con p-heterociclo C3-10, en una realización fenilo sustituido con p-morfolino.

35 En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es fenilo sustituido con p-sulfonilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es heteroarilo C3-10, en una realización piridina o piridinona.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es heterociclo C3-10, en 40 una realización piperidina, piperidin-2-ona, pirrolidinona o tetrahidropirano.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es piperidina N-sustituida, en una realización piperidina sustituida por N-sulfonilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es cicloalquilo C3-10, en una realización ciclohexilo, ciclopentilo o ciclopropilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es cicloalquilo C3-10 sustituido, en una realización cicloalquilo C3-10 sustituido con uno o más grupos alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, heterociclocarbonilo, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es cicloalquilo C3-10 sustituido, en una realización cicloalquilo C3-10 sustituido con uno o más grupos alquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, aminoalquilo, amido, amidoalquilo, carboxi, heterociclocarbonilo, sulfonamida o sulfonaminoalquilo. Ciclohexilo y ciclopentilo son grupos cicloalquilo C3-10 particulares.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es ciclohexilo sustituido con uno o más grupos alquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, aminoalquilo, amido, amidoalquilo, carboxi, heterociclocarbonilo, sulfonamida o sulfonaminoalquilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es alquilo C1-6, en una realización metilo, etilo, propilo (por ejemplo, n-propilo o isopropilo) o butilo (por ejemplo isobutilo).

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es alquilo C1-6 sustituido, en una realización fenilo, hidroxi, cicloalquilo C3-10 o alquilo C1-6 sustituido con oxirano.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es bencilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R1 es alquilo C1-6 sustituido, en una realización heterociclo C3-10 (por ejemplo, alquilo C1-6 sustituido con piperidina o pirrolidina).

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, en una realización ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo o ciclopropilo. Ciclohexilo y ciclopentilo son grupos específicos cicloalquilo C3-10. En una realización, los sustituyentes de cicloalquilo C3-10 incluyen grupos alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, aminoalquilo, amido, amidoalquilo, carboxi, heterociclocarbonilo, sulfonamida y sulfonaminoalquilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es ciclohexilo o ciclopentilo sustituido con uno o más grupos alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, aminoalquilo, amido, amidoalquilo, carboxi, heterociclocarbonilo, sulfonamida o sulfonaminoalquilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es ciclohexilo o ciclopentilo sustituido con uno o más grupos alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, heterociclocarbonilo, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo

o imidazolilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es alquilo C1-6, en una realización butilo (por ejemplo, n-butilo, isobutilo o t-butilo), propilo (por ejemplo, isopropilo), etilo o metilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es alquilo C1-6 sustituido, en una realización ciano, heterociclo C3-10 o alquilo C1-6 sustituido con hidroxi.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es alquilo C1-6 sustituido, en una realización heterociclo C3-10 (por ejemplo, piperidina o pirrolidina) alquilo C1-6 sustituido con hidroxi

o amido.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es arilo, en una realización fenilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es heterociclo C3-10, en una realización piperidina, piperidin-2-ona, tetrahidropirano, tetrahidrofurano o azetidina.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es heterociclo C3-10, en una realización un azufre conteniendo heterociclo C3-10, incluidos a modo no taxativo, 4-(1,1-dioxo)tiopirianilo y

3-(1,1-dioxo)tiofuranilo. En una realización particular, R2 es un heterociclo C3-10 que contiene azufre, sulfonilo o sulfonamido.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es heterociclo C3-10 sustituido, en una realización piperidina sustituida por acetilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 es 3-oxetanilo, 3-tetrahidrofuranilo, 4-tetrahidropiranilo, 4-piperidinilo, 4-(3-acil)-piperidinilo, 4-(1-alcanosulfonil)piperidinilo, 3-pirrolidinilo, 3-(1-acil)pirrolidinilo o 3-(1-alcanosulfonil)pirrolidinilo sustituido o no sustituido.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con o-halo, en una realización fenilo sustituido con o-fluoro o cloro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con m-halo, en una realización fenilo sustituido con m-fluoro o cloro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con p-halo, en una realización fenilo sustituido con p-fluoro o cloro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con m,p-dihalo, en una realización fenilo sustituido con m,p-difluoro o dicloro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con o,m-dihalo, en una realización fenilo sustituido con o,m-difluoro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con o,p-dihalo, en una realización fenilo sustituido con o,p-difluoro, fenilo sustituido con o-fluoro p-bromo o fenilo sustituido con o-fluoro p-cloro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con o,o-dihalo, en una realización fenilo sustituido con o,o-difluoro o fenilo sustituido con o-cloro-o-fluoro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con 2,4,6-trihalo, en una realización fenilo sustituido con trifluoro.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es fenilo sustituido con o-halo, en una realización sustituido con o-fluoro o cloro y sustituido con m-trifluorometilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es heteroarilo C3-10 sustituido con halo, en una realización piridina sustituida con halo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 no es aminoetilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 no es un anillo heterocíclico de cinco miembros.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 no es un anillo heterocíclico de cinco miembros que contiene N.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 no es un anillo heterocíclico de cinco miembros que contiene O.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 no es 2-tetrahidrofuranilo.

En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R2 no es 2-pirrolidinilo.

En una realización adicional, en la presente invención se proporcionan compuestos de aminopurina de fórmula (I) y sales, polimorfos, clatratos, solvatos, hidratos, estereoisómeros y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde:

R1 es alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido;

R2 es:

R3 es arilo o heteroarilo C3-10, estando cada uno sustituido con uno o más halógenos; X es en cada caso independientemente CH2, O, S o N; R4 y R5 son en cada caso independientemente H, alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido,

cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido; o R4 y R5 tomados junto con el átomo de N al que están unidos forman un heterociclo de 5-7 miembros sustituido o no sustituido; y

n es en cada caso independientemente un número entero de 0 a 3. En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (I) son aquellos en los cuales R3 es:

en donde: X es en cada caso independientemente F, CI, Br o I; R6 es alquilo C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano,

acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo;

m es un número entero de 1 a 5; y p es un número entero de 0 a 4. En una realización adicional, p es un número entero de 1 a 4. En una realización adicional, en la presente invención se proporcionan compuestos de aminopurina que tienen la

siguiente fórmula (II):

y sales y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis, en donde:

10 X es en cada caso independientemente F, CI, Br o I; R2 es:

R4 y R5 son en cada caso independientemente H, alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido; o R4 y R5 tomados junto con el átomo de N al que están unidos forman un heterociclo de 5-7 miembros sustituido o no sustituido;

5 R6 es alquilo C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo; m es un número entero de 1 a 5; n es en cada caso independientemente un número entero de 0 a 3; y p es un número entero de 0-4. 10 En una realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (II) son aquellos en los cuales X es fluoro. En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (II) son aquellos en los cuales X es fluoro y m es 3. En otra realización, p es 0. En otra realización, p es un número entero de 1 a 4. En una realización adicional, en la presente invención se proporcionan compuestos de aminopurina que tienen la 15 siguiente fórmula (III):

y sales y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis, en donde: 20 X es en cada caso independientemente F, CI, Br o I; m es un número entero de 1 a 5; p es un número entero de 0-4; R1 es:

; y

R6 es alquilo C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo; En una realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (III) son aquellos en los cuales X es fluoro. En otra realización, los compuestos de aminopurina de fórmula (III) son aquellos en los cuales X es fluoro y m es 3. En otra realización, p es 0.

En otra realización, p es un número entero de 1 a 4. En una realización, en la presente invención se proporcionan compuestos de aminopurina que tiene la siguiente fórmula (IV):

10 y sales y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis, en donde: R3 es:

15 Se utilizaron los siguientes métodos de HPLC para caracterizar los compuestos de la Tabla 1 que figura a continuación. Método A = 5→70% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 20 minutos. Método B = 20→100% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 20 minutos. Método C = 5→50% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 20 minutos.

20 Método D = 0→75% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 20 minutos. Método E = 0→75% acetonitrilo/agua (0,1% ácido fórmico) durante 5 minutos después mantenido a 75% acetonitrilo/agua (0,1% ácido fórmico) durante 2 minutos.

Método F = 10% acetonitrilo/agua (0,1% ácido fórmico) durante los primeros dos minutos, 10-100% acetonitrilo/agua (0,1% ácido fórmico) de 2 minutos a 25 minutos.

En la Tabla 1 que figura a continuación se establecen compuestos de aminopurina representativos. Tabla 1

Los compuestos de la Tabla 1 se purificaron mediante HPLC utilizando una de las condiciones A-F descritas anteriormente. También se establecen los datos de la espectrometría de masas (ión M+1) para cada compuesto.

Los compuestos de aminopurina establecidos en la Tabla 1 se evaluaron en los ensayos de inhibidores de JNK 5 descritos en la presente invención y se encontró que presentaban actividad como inhibidores de JNK.

Métodos para preparar compuestos de aminopurina

Los compuestos de aminopurina pueden elaborarse utilizando síntesis orgánicas convencionales. A modo de ejemplo no taxativo, un compuesto de aminopurina puede prepararse como se describe en los Esquemas 1 y 2 que figuran a continuación así como en los Ejemplos 5.1 a 5.53.

10 Esquema 1 Esquema 2

Las reacciones en fase sólida pueden llevarse a cabo en, por ejemplo, botellas de polipropileno de 250 mL para grandes reacciones (>50 mL) o en jeringas de polipropileno sinterizado de 20 mL (<20 mL). Todos los disolventes utilizados para los lavados son de grado HPLC a menos que se indique de otra forma. Cada ciclo de lavado se lleva a cabo con 100 mL de disolvente para los recipientes más grandes o 10 mL de disolvente para recipientes pequeños durante 3-5 minutos, a menos que se indique de otra forma. Las reacciones se agitan utilizando un agitador de placas Titer Plate Shaker de Lab-Line Instruments.

Síntesis de (2-Cloro-5-nitropirimidin-4-il)-R2aminas

Se agrega lentamente N,N-diisopropiletilamina a una solución de 2,4-dicloro-5-nitropirimidina en THF a -78ºC. La amina R2 deseada se disuelve en THF y se agrega por goteo a la mezcla de reacción a -78ºC. La reacción se agita durante aproximadamente 1 hora a -78ºC y después se deja entibiar lentamente hasta alcanzar la temperatura ambiente durante toda la noche. Se agrega diclorometano y los productos orgánicos se lavan con agua (500 mL) y

15 después con NaHCO3 (sat. ac., 2 x 500 mL). Los productos orgánicos se secan (MgSO4), se filtran y el disolvente se retira al vacío para proporcionar la (2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)-R2amina bruta. Los productos brutos se utilizan sin purificación adicional.

Aminación Reductiva con Aminas R1

20 Se agrega una solución de amina R1 y HCI (una solución 4 M en dioxano) en 5% AcOH/DMF a resina 4-(4-formil-3-metoxifenoxi)butirilo AM en, por ejemplo, un tubo de polipropileno de 250 mL. La suspensión de resina se agita en un agitador durante aproximadamente 3 h y se agrega triacetoxiborohidruro de sodio. Después de agitar durante aproximadamente 1 h con ventilación periódica, la resina se lava dos veces con 5% AcOH/DMF utilizando, por ejemplo, un tubo de dispersión de gas de polipropileno al vacío para retirar por aspiración el disolvente. Se agrega una segunda solución de amina R1 y después se agita durante 1 h. Se agrega triacetoxiborohidruro de sodio y la suspensión se agita durante toda la noche a temperatura ambiente con ventilación del recipiente de reacción durante aproximadamente la primera hora. El recipiente de reacción se vacía y la resina se lava con DMF (2X), 50% MeOH/DMF (2X), DMF (3X) y CH2Cl2 (4X). La resina después se divide en cinco, por ejemplo, jeringas de polipropileno sinterizado de 20 mL utilizando una suspensión en DMF.

N-Arilación con (2-Cloro-5-nitropirimidin-4-il)-R2amina

Se agrega una solución de (2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)-R2amina bruta y N,N-diisopropiletilamina en CH2Cl2 a cada jeringa que contiene una amina R1 secundaria unida a resina diferente. Después de agitar la mezcla durante toda la noche, la solución de la reacción se escurre y la resina se lava con DMF (5X) y CH2Cl2 (7X).

Nitro reducción

Se prepara una solución de dihidrato de SnCl2 en DMF purgado con nitrógeno en, por ejemplo, una botella de vidrio

graduada de 1 L. Se agrega N,N-diisopropiletilamina, el volumen se ajusta hasta alcanzar 1 L con DMF saturado con

nitrógeno y la solución se purga durante aproximadamente 30 min, con una suave corriente de nitrógeno. La solución

de SnCl2 se agrega a cada 5-nitropirimidina unida a resina en, por ejemplo, una jeringa de polipropileno sinterizado de 20 20 mL. Las reacciones se tapan y agitan durante toda la noche. Las soluciones de la reacción se expelen, la resina se

lava con DMF purgado con nitrógeno (3X) y se agrega solución de SnCl2 recién preparada. Después de agitar

durante toda la noche, las soluciones de la reacción se expelen y la resina se lava con DMF purgado con nitrógeno

(3X). Después de un tercer tratamiento con solución de SnCl2 durante toda la noche, las soluciones de la reacción se

expelen, la resina se lava con DMF (3X) y después se realizan lavados alternativos con 50% DMF/H2O y DMF (3X 25 cada uno). Luego se lava la resina con MeOH (2X), DMF (2X) y CH2CI2 (7X). Cada resina se divide en cuatro, por

ejemplo, jeringas de polipropileno sinterizado de 20 mL utilizando una suspensión en DMF.

Formación de Aminopurina

El isotiocianato deseado se agrega a una suspensión de cada 5-aminopirimidina unida a resina en DMF y CH2Cl2. Las

30 jeringas de polipropileno sinterizado de 20 mL que contienen la suspensión de resina se tapan y agitan durante toda la noche. Las soluciones de la reacción se expelen y después se agrega una solución de DIC en CH2Cl2. Las reacciones se agitan durante aproximadamente 4 días, las soluciones de la reacción se expelen y la resina se lava con DMF (5X) y CH2Cl2 (7X). Las aminopurinas unidas a resina resultantes se secan al vacío.

Escisión de resina

Se agrega una solución 50% v/v de TFA/CH2Cl2 a las aminopurinas unidas a resina en, por ejemplo, jeringas de polipropileno sinterizado de 20 mL. Las suspensiones de resina resultantes se dejan agitar durante toda la noche, las soluciones de la reacción se recogen y se secan al vacío. Los residuos se dividen entre EtOAc y Na2CO3 saturado ac. Después de extraer adicionalmente con EtOAc (2 x 4 mL) las capas orgánicas se recogen, se pasan por fritas de polietileno y se secan al vacío. Los residuos se disuelven en DMSO, se pasan a través de un lecho de sílice y se purifican utilizando HPLC preparativa para proporcionar la aminopurina deseada.

En los Ejemplos 5.1 a 5.14 que figuran a continuación se describen ejemplos ilustrativos de los Esquemas 1 y 2.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de aminopurina pueden formarse mediante técnicas conocidas y convencionales tales como hacer reaccionar un compuesto de aminopurina con un ácido adecuado como se describe anteriormente. Dichas sales se forman típicamente en rendimientos altos a temperaturas moderadas y a menudo se preparan solamente aislando el compuesto de un lavado ácido adecuado en la etapa final de la síntesis. El ácido formador de sal puede disolverse en un disolvente orgánico apropiado, o disolvente orgánico acuoso, tal como un alcanol, cetona o éster. Por otro lado, si se desea obtener el compuesto de aminopurina en forma de base libre, puede aislarse de la etapa de lavado final básico, de acuerdo con técnicas conocidas. Por ejemplo, una técnica típica para preparar sal hidrocloruro es disolver la base libre en un disolvente adecuado y secar la solución completamente, como por ejemplo en tamices moleculares, antes de burbujear gas de cloruro de hidrógeno a través de la misma.

Usos

Los compuestos de aminopurina son productos farmacéuticos útiles para curar o prevenir enfermedades en animales

o humanos. Adicionalmente, los compuestos de aminopurina son activos contra las proteínas quinasas incluidas las que se relacionan con cáncer, enfermedad cardiovascular, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes y trastornos metabólicos. Por lo tanto, en la presente invención se proporcionan compuestos de aminopurina para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis.

Las afecciones autoinmunes representativas para cuyo tratamiento o prevención son útiles los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis, esclerosis múltiple, lupus, enfermedad del intestino inflamatoria, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, miastenia grave, enfermedad de Grave y diabetes (por ejemplo, diabetes tipo I).

Las afecciones inflamatorias representativas para cuyo tratamiento o prevención son útiles los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, asma y rinitis alérgica, bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, enfermedad del intestino inflamatoria, enfermedad del intestino irritable, enfermedad de Crohn, colitis mucosa, colitis ulcerosa, (por ejemplo, diabetes tipo I y diabetes tipo II) y obesidad.

Las afecciones metabólicas representativas para cuyo tratamiento o prevención son útiles los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, obesidad y diabetes (por ejemplo, diabetes tipo II).

Las enfermedades cardiovasculares representativas para cuyo tratamiento o prevención son útiles los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, accidente cerebrovascular, infarto de miocardio o daño isquémico al corazón, pulmón, intestino, riñón, hígado, páncreas, bazo o cerebro.

Las enfermedades cardiovasculares y renales representativas para cuyo tratamiento o prevención es útil un stent o injerto de stent que contiene o está recubierto por un compuesto de aminopurina incluyen aterosclerosis y el tratamiento o prevención de restenosis después de una intervención vascular tal como angioplastia.

Un stent o injerto de stent que contiene o está recubierto por un compuesto de aminopurina adicionalmente puede comprender una cantidad efectiva de otro agente activo útil para el tratamiento o prevención de una enfermedad cardiovascular o renal, incluidos, a modo no taxativo, un agente anticoagulante, un agente antimetabolito, un agente antiinflamatorio, un agente antiplaquetario, un agente antitrombina, un agente antimitótico, un agente cistostático o un agente antiproliferativo.

Los compuestos de aminopurina también son útiles para el tratamiento o prevención de lesión por isquemia-reperfusión en general. Por lo tanto, los compuestos de aminopurina son útiles para el tratamiento o prevención de rechazo agudo o crónico de transplante de órganos y para la conservación de tejidos y órganos.

Los cánceres representativos para el tratamiento o prevención de los cuales son útiles los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, cánceres de la cabeza, cuello, ojo, garganta, esófago, bronquio, laringe, faringe, pecho, huesos, pulmón, colon, recto, estómago, próstata, vejiga urinaria, útero, cuello de útero, mama, ovarios, testículos u otros órganos reproductivos, piel, tiroides, sangre, nódulos linfáticos, riñón, hígado, páncreas y cerebro o sistema nervioso central.

Los cánceres incluyen aquellos asociados con BCR-ABL y mutantes o isoformas de las mismas, así como quinasas de la familia de quinasas src, quinasas de la familia de quinasas Rsk, quinasas de la familia de quinasas CDK, quinasas de la familia de quinasas MAPK y tirosina quinasas tales como Fes, Lyn y Syk quinasas y mutantes o isoformas de las mismas.

Enfermedades representativas que pueden tratarse o prevenirse con los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, una enfermedad o trastorno asociado con la modulación, por ejemplo, la inhibición, de una quinasa, incluidas, a modo no taxativo, tirosina-proteína quinasa (SYK), tirosina-proteína quinasa (ZAP-70), proteína tirosina quinasa 2 beta (PYK2), quinasa de adhesión focal 1 (FAK), quinasa de linfocitos B (BLK), quinasa de célula hematopoyética (HCK), homólogo de oncogén relacionado con sarcoma de Yamaguchi v-yes-1 viral (LYN), proteína-tirosina quinasa específica de células T (LCK), tirosina-proteína quinasa protooncogénica (YES), tirosina-proteína quinasa protooncogénica (SRC), tirosina-proteína quinasa protooncogénica (FYN), tirosina-proteína quinasa protooncogénica (FGR), tirosina-proteína quinasa protooncogénica (FER), tirosina-proteína quinasa protooncogénica (FES), quinasa C-SRC, proteína-tirosina quinasa (CYL), tirosina proteína quinasa (CSK), tirosina-proteína quinasa asociada a megacariocitos (CTK), receptor tirosina-proteína quinasa (EPH), receptor 1 de efrina tipo A, receptor 4 de efrina tipo A (EPHA4), receptor 3 de efrina tipo B (EPHB3), receptor 8 de efrina tipo A (EPHA8), receptor neurotrófico tirosina quinasa (NTRK1), proteína-tirosina quinasa (PTK2), tirosina quinasa relacionada con syk (SRK), proteína tirosina quinasa (CTK), proteína tirosina quinasa tyro3 (TYRO3), tirosina quinasa de agammaglobulinemia de Bruton (BTK), tirosina quinasa de leucocitos (LTK), proteína-tirosina quinasa (SYK), proteína-tirosina quinasa (STY), tirosina quinasa tek (TEK), tirosina quinasa relacionada con elk (ERK), tirosina quinasa con dominios de inmunoglobulina y factor de egf (TIE), proteína tirosina quinasa (TKF), receptor neurotrófico tirosina quinasa tipo 3 (NTRK3), proteína quinasa de linaje múltiple 3 (MLK3), proteína quinasa 4 activada por mitógenos (PRKM4), proteína quinasa 1 activada por mitógenos (PRKM1), proteína tirosina quinasa (PTK7), proteína tirosina quinasa (EEK), homólogo de Minibrain (Drosophila) (MNBH), quinasa de médula ósea unida a x (BMX), tirosina quinasa 1 similar a eph (ETK1), receptor estimulador de macrófagos 1 (MST1R), proteína asociada a btk, proteína tirosina quinasa específica de linfocitos de 135 kd (LCK), receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 2 (FGFR2), proteína tirosina quinasa-3 (TYK3), proteína tirosina quinasa (TXK), proteína tirosina quinasa tec (TEC), proteína tirosina quinasa-2 (TYK2), ligando del receptor tirosina quinasa relacionado con eph 1 (EPLG1), tirosina quinasa de células T (EMT), tirosina quinasa eph 1 (EPHT1), receptor tirosina quinasa de la zona pelúcida de 95 kd (ZRK), quinasa 1 de proteína quinasa activada por mitógenos (PRKMK1), tirosina quinasa eph 3 (EPHT3), gen específico de la detención del crecimiento 6 (GAS6), receptor con dominio inserto quinasa (KDR), receptor tirosina quinasa axl (AXL), receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 1 (FGFR1), homólogo de oncogén viral de leucemia eritroblástica aviar v-erb-b2 2 (ERBB2), tirosina quinasa 3 similar a fms (FLT3), tirosina quinasa neuroepitelial (NEP), receptor tirosina quinasa neurotrófico 3 (NTRKR3), ligando 5 de receptor tirosina quinasa relacionado con eph (EPLG5), receptor tirosina quinasa neurotrófico tipo 2 (NTRK2), receptor tirosina quinasa (RYK), tirosina quinasa específica para linfocitos b (BLK), tirosina quinasa eph 2 (EPHT2), ligando 2 del receptor tirosina quinasa relacionado con eph (EPLG2), enfermedad del almacenamiento de glucógeno VIII, ligando 7 de receptor tirosina quinasa relacionado con eph (EPLG7), quinasa janus 1 (JAK1), tirosina quinasa-1 relacionada con fms (FLT1), proteína quinasa, dependiente de camp, reguladora, tipo 1, alfa (PRKAR1A), tirosina quinasa wee-1 (WEE1), tirosina quinasa 2 similar a eph (ETK2), receptor tirosina quinasa musk, receptor de insulina (INSR), quinasa janus 3 (JAK3), proteína quinasa c de ligando de tirosina quinasa-3 relacionada con fms, beta 1 (PRKCB1), receptor de superficie celular tipo tirosina quinasa (HER3), quinasa janus 2 (JAK2), quinasa 1 de dominio lim (LIMK1), fosfatasa de especificidad dual 1 (DUSP1), quinasa de célula hematopoyética (HCK), proteína de activación de tirosina 3-monooxigenasa/triptófano 5-monooxigenasa, polipéptido eta (YWHAH), protooncogén ret (RET), proteína de activación de tirosina 3-monooxigenasa/triptófano 5-monooxigenasa, polipéptido zeta (YWHAZ), proteína de activación de tirosina 3-monooxigenasa/triptófano 5-monooxigenasa, polipéptido beta (YWHAB), quinasa transmembrana de hepatoma (HTK), map quinasa quinasa 6, fosfatidilinositol 3-quinasa, catalítica, polipéptido alfa (PIK3CA), inhibidor de quinasa 3 dependiente de ciclinas (CDKN3), diacilglicerol quinasa, proteína-tirosina fosfatasa no receptora tipo 13 delta de 130 kd, (PTPN13), homólogo de oncogén viral de leucemia murina de Abelson 1 (ABL1), diacilglicerol quinasa, alfa (DAGK1), quinasa de adhesión focal 2, receptor del dominio discoidina epitelial 1 (EDDR1), quinasa de linfoma anaplásico (ALK), fosfatidilinositol 3-quinasa, catalítica, polipéptido gamma (PIK3CG); subunidad regulatoria de fosfatidilinositol 3-quinasa, (PIK3R1), quinasa-1 de homología de eph (EHK1), homólogo de oncogén viral de sarcoma felino v-kit Hardy-Zuckerman 4 (KIT), receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR3), factor de crecimiento endotelial vascular de crecimiento endotelial vascular c (VEGFC), receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), oncogén (TRK), proteína 7 unida al receptor del factor de crecimiento (GRB7), activador de proteína p 21 ras (RASA2), protooncogén met (MET), adaptador similar a sec (SLA), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR), receptor del factor de crecimiento nervioso (NGFR), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR), receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas beta (PDGFRB), quinasa 2 regulada por fosforilación de tirosina (Y) de especificidad dual (DYRK2), quinasa 3 regulada por fosforilación de tirosina (Y) de especificidad dual (DYRK3), quinasa 4 regulada por fosforilación de tirosina (Y) de especificidad dual (DYRK4), quinasa 1A regulada por fosforilación de tirosina (Y) de especificidad dual (DYRK1A), quinasa 1B regulada por fosforilación de tirosina (Y) de especificidad dual (DYRK1B), quinasa 1 similar a CDC (CLK1), proteína tirosina quinasa STY, quinasa 4 similar a CDC (CLK4), quinasa 2 similar a CDC (CLK2) o quinasa 3 similar a CDC (CLK3).

Enfermedades representativas que pueden tratarse o prevenirse con los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, una enfermedad o trastorno asociado con la modulación, por ejemplo, la inhibición, de serina/treonina quinasas o moléculas relacionadas, entre las que se incluyen, a modo no taxativo, quinasa 7 dependiente de ciclinas (CDK7), serina/treonina proteína quinasa rac, serina/treonina proteína quinasa n (PKN), serina/treonina proteína quinasa 2 (STK2), proteína quinasa cremallera (ZPK), proteína-tirosina quinasa (STY); tirosina quinasa de agammaglobulinemia de Bruton (BTK), quinasa mkn28, proteína quinasa unida a x (PRKX), tirosina quinasa relacionada con elk (ERK), proteína quinasa s6 ribosómica de 90 kd, polipéptido 3 (RPS6KA3), enfermedad del almacenamiento de glucógeno VIII, proteína quinasa asociada con la muerte 1 (DAPK1), proteína quinasa pctaire 1 (PCTK1), proteína quinasa dependiente de arn de doble hebra inducible por interferón (PRKR), quinasa 1 similar al receptor de activina tipo II (ACVRLK1), proteína quinasa dependiente de camp catalítica alfa (PRKACA), proteína quinasa unida a y (PRKY), quinasa 2 de receptores acoplados a la proteína G (GPRK21), proteína quinasa c, forma theta (PRKCQ), quinasa 1 de dominio lim (LIMK1), fosfoglicerato quinasa 1 (PGK1), quinasa 2 de dominio lim (LIMK2), quinasa c-jun, quinasa 2 similar al receptor de activina tipo II (ACVRLK2), quinasa janus 1 (JAK1), quinasa del motivo elk1 (EMK1), quinasa asociada a las células germinales (MAK), caseína quinasa 2, subunidad alfa principal (CSNK2A2), caseína quinasa 2, polipéptido beta (CSNK2B), caseína quinasa 2, polipéptido alfa 1 (CSNK2A1), protooncogén ret (RET), quinasa progenitora hematopoyética 1, quinasa ubicua hélice-bucle-hélice conservada (CHUK), caseína quinasa 1, delta (CSNK1D), caseína quinasa 1, épsilon (CSNK1E), homólogo de oncogén viral de timoma murino v-akt 1 (AKT1), proteína tumoral p53 (TP53), proteína fosfatasa 1, subunidad reguladora (inhibidora) 2 (PPP1R2), oncogén pim-1 (PIM1), receptor del factor de crecimiento transformante beta tipo II (TGFBR2), receptor del factor de crecimiento transformante beta tipo I (TGFBR1), homólogo de oncogén viral de sarcoma v-raf murino b1 (BRAF), receptor morfogenético óseo tipo II (BMPR2), homólogo de oncogén viral 3611 de sarcoma murino v-raf 1 (ARAF1), homólogo de oncogén viral 3611 de sarcoma murino v-raf 2 (ARAF2), proteína quinasa C (PKC), homólogo de oncogén viral de sarcoma felino v-kit Hardy-Zuckerman 4 (KIT) o receptor c-KIT (KITR).

Enfermedades representativas que pueden tratarse o prevenirse con los compuestos de aminopurina incluyen, a modo no taxativo, una enfermedad o trastorno asociado con la modulación, por ejemplo la inhibición, de una MAP quinasa, entre las que se incluyen, a modo no taxativo, proteína quinasa 3 activada por mitógenos (MAPK3), proteína quinasa 3 activada por mitógenos p44erk1, p44mapk, (MAP quinasa 3; p44), ERK1, PRKM3, P44ERK1, P44MAPK, proteína quinasa 1 activada por mitógenos (MAPK1), proteína quinasa quinasa 1 activada por mitógenos (MEK1), proteína tirosina quinasa MAP2K1 ERK2, proteína quinasa 2 activada por mitógenos, quinasa 2 regulada por señales extracelulares, proteína tirosina quinasa ERK2, proteína quinasa 2 activada por mitógenos, quinasa regulada por señales extracelulares 2, ERK, p38, p40, p41, ERK2, ERT1, MAPK2, PRKM1, PRKM2, P42MAPK, p41mapk, proteína quinasa 7 activada por mitógenos (MAPK7), quinasa BMK1, quinasa regulada 5 por señales extracelulares, BMK1, ERK4, ERK5, PRKM7, quinasa similar a nemo (NLK), probable ortólogo de quinasa similar a nemo de ratón, proteína quinasa 8 activada por mitógenos (MAPK8), proteína quinasa JNK1, proteína quinasa JNK1 beta, proteína quinasa JNK1 alfa, quinasa c-Jun N-terminal 1, proteína quinasa JNK1 activada por estrés, JNK, JNK1, PRKM8, SAPK1, JNK1A2, JNK21B1/2, proteína quinasa 10 activada por mitógenos (MAPK10), quinasa c-Jun 3, proteína quinasa alfa JNK3, quinasa c-Jun N-terminal 3, proteína quinasa JNK3 activada por estrés, proteína quinasa beta activada por estrés, proteína quinasa 9 activada por mitógenos (MAPK9), MAP quinasa 9, quinasa c-Jun 2, quinasa c-Jun N-terminal 2, proteína quinasa JNK2 activada por estrés, JNK2, JNK2A, JNK2B, PRKM9, JNK-55, JNK2BETA, p54aSAPK, JNK2ALPHA, proteína quinasa 14 activada por mitógenos (MAPK14), MAP quinasa p38, MAP quinasa Mxi2, proteína de unión de Csaids, proteína de interacción con MAX 2, proteína quinasa 2A activada por estrés, proteína quinasa p38 activada por mitógenos, proteína de unión a fármacos antiinflamatorios supresores de citoquina, RK, p38, EXIP, Mxi2, CSBP1, CSBP2, CSPB1, PRKM14, PRKM15, SAPK2A, p38ALPHA, proteína quinasa 11 activada por mitógenos (MAPK11), proteína quinasa 2 activada por estrés, proteína quinasa 2b activada por estrés, proteína quinasa p38-2 activada por mitógenos, proteína quinasa p38beta activada por mitógenos, P38B, SAPK2, p38-2, PRKM11, SAPK2B, p38Beta, P38BETA2, proteína quinasa 13 activada por mitógenos (MAPK13), proteína quinasa 4 activada por estrés, proteína quinasa activada por mitógenos p38 delta, SAPK4, PRKM13, p38delta, proteína quinasa 12 activada por mitógenos (MAPK12), p38gamma, proteína quinasa 3 activada por estrés, proteína quinasa 3 activada por mitógenos, ERK3, ERK6, SAPK3, PRKM12, SAPK-3, P38GAMMA, proteína quinasa 6 activada por mitógenos (MAPK6), isoforma p97 de MAP quinasa, proteína quinasa 5 activada por mitógenos, activada por mitógenos 6 proteína quinasa, quinasa 3 regulada por señales extracelulares, quinasa regulada por señales extracelulares, p97, ERK3, PRKM6, p97MAPK, proteína quinasa 4 activada por mitógenos (MAPK4), proteína quinasa relacionada con Erk3, proteína quinasa 4 activada por mitógenos (MAP quinasa 4; p63), PRKM4, p63MAPK, relacionada con ERK3 o quinasa 8 regulada por señales extracelulares (ERK7).

Más particularmente, los cánceres y trastornos relacionados que pueden tratarse o prevenirse incluyen, a modo no taxativo, los siguientes: leucemias tales como, a modo no taxativo, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemias mielocíticas agudas tales como leucemias mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica y eritoleucemia y síndrome mielodisplásico (o un síntoma de los mismos tales como anemia, trombocitopenia, neutropenia, bicitopenia o pancitopenia), anemia refractaria (AR), AR con sideroblastos en anillo (ARSA), AR con exceso de blastos (AREB), AREB en transformación (AREB-T), preleucemia y leucemia mielomonocítica crónica (LMMC), leucemias crónicas tales como, a modo no taxativo, leucemia mielocítica (granulocítica) crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células vellosas; policitemia vera; linfomas tales como, a modo no taxativo, enfermedad de Hodgkin, enfermedad de no Hodgkin; mielomas múltiples tales como, a modo no taxativo, mieloma múltiple quiescente, mieloma no secretor, mieloma osteoesclerótico, leucemia de células plasmáticas, plasmacitoma solitario y plasmacitoma extramedular; macroglobulinemia de Waldenström; gamopatía monoclonal de significado indeterminado; gamopatía monoclonal benigna; enfermedad de las cadenas pesadas; sarcomas óseos y de tejidos conjuntivos tales como, a modo no taxativo, sarcomas óseos, osteosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, tumor maligno de células gigantes, fibrosarcoma óseo, cordoma, sarcoma perióstico, sarcomas de tejido blando, angiosarcoma (hemangiosarcoma), fibrosarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiosarcoma, liposarcoma, linfangiosarcoma, cánceres metastásicos, neurilemoma, rabdomiosarcoma, sarcoma sinovial; tumores cerebrales tales como, a modo no taxativo, glioma, astrocitoma, glioma de tronco cerebral, ependimoma, oligodendroglioma, tumor no glial, neurinoma del acústico, craniofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pineocitoma, pineoblastoma, linfoma cerebral primario; cáncer de mama, incluidos, a modo no taxativo, adenocarcinoma, carcinoma lobular (de células pequeñas), carcinoma intraductal, cáncer de mama medular, cáncer de mama mucinoso, cáncer de mama tubular, cáncer de mama papilar, cánceres primarios, enfermedad de Paget y cáncer de mama inflamatorio, cáncer adrenal tal como, a modo no taxativo, feocromocitoma y carcinoma adrenocortical; cáncer de tiroides tal como, a modo no taxativo, cáncer papilar o folicular de tiroides, cáncer medular de tiroides y cáncer anaplásico de tiroides; cáncer pancreático tal, como a modo no taxativo, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, vipoma, tumor secretor de somatostatina y tumor carcinoide o de células de los islotes; cánceres pituitarios tales como, a modo no taxativo, enfermedad de Cushing, tumor secretor de prolactina, acromegalia y diabetes insípida; cánceres oculares tales como, a modo no taxativo, melanoma ocular, tal como melanoma de iris, melanoma coroidal y melanoma de cuerpo ciliar y retinoblastoma; cánceres vaginales tales como carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma y melanoma; cáncer de la vulva tal como carcinoma de células escamosas, melanoma, adenocarcinoma, carcinoma de células basales, sarcoma y enfermedad de Paget; cánceres de cuello de útero tales como, a modo no taxativo, carcinoma de células escamosas y adenocarcinoma; cánceres uterinos tales como, a modo no taxativo, carcinoma de endometrio y sarcoma de útero; cánceres de ovarios tales como, a modo no taxativo, carcinoma epitelial de ovario, tumor borderline, tumor de células germinales y tumor estromal; cánceres esofágicos tales como, a modo no taxativo, cáncer escamoso, adenocarcinoma, carcinoma quístico adenoide, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescamoso, sarcoma, melanoma, plasmacitoma, carcinoma verrugoso y carcinoma de células en avena (células pequeñas); cánceres de estómago tales como, a modo no taxativo, adenocarcinoma, fungoide (polipoide), ulcerante, de extensión superficial, de extensión difusa, linfoma maligno, liposarcoma, fibrosarcoma y carcinosarcoma; cánceres de colon; cánceres rectales; cánceres de hígado tales como, a modo no taxativo, carcinoma hepatocelular y hepatoblastoma, cánceres de vesícula tales como adenocarcinoma; colangiocarcinomas tales como, a modo no taxativo, papilar, nodular y difuso; cánceres de pulmón tales como cáncer de pulmón de células no pequeñas, carcinoma de célula escamosa (carcinoma epidermoide), adenocarcinoma, carcinoma de células grandes y cáncer de pulmón de células pequeñas; cánceres testiculares tales como, a modo no taxativo, tumor germinal, seminoma, anaplásico, clásico (típico), espermatocítico, no seminoma, carcinoma embrionario, teratoma, carcinoma, coriocarcinoma (tumor de saco vitelino), cánceres de próstata tales como, a modo no taxativo, adenocarcinoma, leiomiosarcoma y rabdomiosarcoma; cánceres de pene; cánceres orales tales como, a modo no taxativo, carcinoma de células escamosas; cánceres basales; cánceres de las glándulas salivares tales como, a modo no taxativo, adenocarcinoma, carcinoma mucoepidermoide y carcinoma adenoide quístico; cánceres de faringe tales como, a modo no taxativo, cáncer de células escamosas y verrugoso; cánceres de piel tales como, a modo no taxativo, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas y melanoma, melanoma de extensión superficial, melanoma nodular, melanoma maligno lentiginoso, melanoma lentiginoso acral; cánceres de riñón tales como, a modo no taxativo, cáncer de células renales, adenocarcinoma, hipernefroma, fibrosarcoma, cáncer de células transicionales (pelvis renal y/o uréter); tumor de Wilms; cánceres de vejiga tales como, a modo no taxativo, carcinoma de células transicionales, cáncer de células escamosas, adenocarcinoma, carcinosarcoma. Además, cánceres incluyen mixosarcoma, sarcoma osteogénico, endoteliosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar y adenocarcinomas papilares (para una reseña de dichos trastornos, ver Fishman et al., 1955, Medicine, 2d Ed., J. B. Lippincott Co., Philadelphia y Murphy et al., 1997, Informed Decisions; The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books U.S.A., Inc., United States of America).

Por lo tanto, los usos y las composiciones descritos en la presente invención son también útiles en el tratamiento o la prevención de distintos cánceres u otras enfermedades proliferativas anormales, entre las que se incluyen (a modo no taxativo) las siguientes: carcinoma, incluidos de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, ovario, páncreas, estómago, cuello de útero, tiroides y piel; incluidos carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, incluidos leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Berkett; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluidas leucemias mielógenas agudas y crónicas y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluidos fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; otros tumores, incluidos melanoma, seminoma, tetratocarcinoma, neuroblastoma y glioma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluidos astrocitoma, glioblastoma multiforme, neuroblastoma, glioma y schwannomas; tumores sólidos y sanguíneos; tumores de origen mesenquimal, incluidos fibrosarcoma, rabdomiosarcoma y osteosarcoma; y otros tumores, incluidos melanoma, xeroderma pigmentosa, queratoacantoma, seminoma, cáncer folicular de tiroides y teratocarcinoma. Se prevé también que los cánceres causados por aberraciones en la apoptosis puedan tratarse también con los métodos y las composiciones descritos en la presente invención. Estos cánceres pueden incluir, a modo no taxativo, linfomas foliculares, carcinomas con mutaciones en p53, tumores de mama, próstata y ovario dependientes de hormonas y lesiones precancerosas tales como poliposis adenomatosa familiar y síndromes mielodisplásicos. En realizaciones específicas se tratan o previenen malignidades o cambios profliferativos anormales (tales como metaplasias y displasias) o trastornos hiperproliferativos en ovario, vejiga, mama, colon, pulmón, piel, páncreas o útero. En otras realizaciones específicas se trata o previene sarcoma, melanoma o leucemia.

Los usos y composiciones descritos en la presente invención son también útiles para la administración a pacientes que necesitan un transplante de médula ósea para tratar una enfermedad maligna (por ejemplo, pacientes que sufren de leucemia linfocítica aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, síndrome mielodisplásico ("preleucemia"), síndrome de monosomía 7, linfoma no Hodgkin, neuroblastoma, tumores cerebrales, mieloma múltiple, tumores testiculares de células germinales, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, melanoma, glioma, sarcoma u otros tumores sólidos), aquellos que necesitan un transplante de médula ósea para tratar una enfermedad benigna (por ejemplo, pacientes que sufren de trastornos hematológicos, inmunodeficiencias congénitas, mucopolisacaridosis, lipidosis, osteoporosis, histiocitosis de células de Langerhans, síndrome de Lesch-Nyhan o enfermedades del almacenamiento de glucógeno), aquellos que están siendo sometidos a quimioterapia o radioterapia, aquellos que se prepararan para someterse a quimioterapia o radioterapia y aquellos que ya se han sometido a quimioterapia o radioterapia.

El compuesto de aminopurina o una composición del mismo también es útil para el tratamiento de trastornos mieloproliferativos o síndromes mielodisplásicos. Por ejemplo, el trastorno mieloproliferativo es policitemia rubra vera; trombocitemia primaria; leucemia mielógena crónica; leucemia granulocítica aguda o crónica; leucemia mielomonocítica aguda o crónica; mielofibro-eritroleucemia; o metaplasia mieloide agnogénica.

El compuesto de aminopurina o una composición del mismo también es útil para el tratamiento de cáncer o tumores resistentes a otros inhibidores de quinasa tales como el tratamiento con mesilato de imatinib (STI-571 o GleevecTM). El compuesto de aminopurina o una composición del mismo también es útil para el tratamiento de leucemias, incluidos, a modo no taxativo, tumor estromal gastrointestinal (GIST), leucemia linfocítica aguda o leucemia mielocítica crónica resistentes al tratamiento con mesilato de imatinib (STI-571 o GleevecTM).

El compuesto de aminopurina también es útil para el tratamiento o prevención de una enfermedad o trastorno tratable o prevenible mediante la modulación de una vía de la quinasa, que en una realización es la vía de la JNK. Enfermedades particulares que son tratables o prevenibles mediante la modulación, por ejemplo, la inhibición, de una vía de la quinasa, que en una realización es la vía de la JNK, incluyen, a modo no taxativo, artritis reumatoide; espondilitis reumatoide; osteoartritis; gota; asma, bronquitis; rinitis alérgica; enfermedad pulmonar obstructiva crónica; fibrosis quística; enfermedad del intestino inflamatoria; enfermedad del intestino irritable; colitis mucosa; colitis ulcerosa; enfermedad de Crohn; enfermedad de Huntington; gastritis; esofagitis; hepatitis; pancreatitis; nefritis; esclerosis múltiple; lupus eritematoso; diabetes tipo II; obesidad; aterosclerosis; restenosis después de angioplastia; hipertrofia de ventrículo izquierdo; infarto de miocardio; accidente cerebrovascular; lesiones isquémicas del corazón, pulmón, intestino, riñón, hígado, páncreas, bazo y cerebro; rechazo agudo o crónico de transplante de órganos; preservación del órgano para el transplante; insuficiencia de órganos o pérdida de extremidades (por ejemplo, incluidas, a modo no taxativo, las que resultan de lesión por isquemia-reperfusión, traumatismo, lesión corporal grave, accidente automovilístico, lesión por aplastamiento o insuficiencia de transplante); enfermedad injerto contra huésped; choque endotóxico; insuficiencia múltiple de órganos; psoriasis; quemaduras por exposición al fuego, productos químicos o radiación; eczema; dermatitis; injerto de piel; isquemia; afecciones isquémicas asociadas con cirugía o lesiones traumáticas (por ejemplo, accidentes vehiculares, heridas de bala o aplastamiento de extremidades); epilepsia; enfermedad de Alzheimer; enfermedad de Parkinson; respuesta inmunológica a una infección bacteriana o viral; caquexia; enfermedades angiogénicas y proliferativas; tumor sólido; y cánceres de distintos tejidos tales como colon, recto, próstata, hígado, pulmón, bronquio, páncreas, cerebro, cabeza, cuello, estómago, piel, riñón, cuello de útero, sangre, laringe, esófago, boca, faringe, vejiga urinaria, ovario o útero.

Composiciones farmacéuticas y vías de administración

Los compuestos de aminopurina pueden administrarse a un paciente oralmente o parenteralmente en la forma convencional de preparaciones tales como cápsulas, microcápsulas, comprimidos, gránulos, polvo, pastillas, píldoras, supositorios, inyecciones, suspensiones y jarabes. Formulaciones adecuadas pueden prepararse mediante métodos empleados comúnmente utilizando aditivos orgánicos o inorgánicos convencionales tales como un excipiente (por ejemplo, sacarosa, almidón, manitol, sorbitol, lactosa, glucosa, celulosa, talco, fosfato de calcio o carbonato de calcio), un aglutinante (por ejemplo, celulosa, metilcelulosa, hidroximetilcelulosa, polipropilpirrolidona, polivinilpirrolidona, gelatina, goma arábiga, polietilenglicol, sacarosa o almidón), un desintegrador (por ejemplo, almidón, carboximetilcelulosa, almidón hidroxipropílico, hidroxipropilcelulosa poco sustituida, bicarbonato de sodio, fosfato de calcio o citrato de calcio), un lubricante (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido silícico anhidro ligero, talco o laurilsulfato de sodio), un agente saborizante (por ejemplo, ácido cítrico, mentol, glicina o polvo naranja), un conservante (por ejemplo, benzoato de sodio, bisulfito de sodio, metilparabeno o propilparabeno), un estabilizador (por ejemplo, ácido cítrico, citrato de sodio o ácido acético), un agente de suspensión (por ejemplo, metilcelulosa, polivinilpirrolidona o estearato de aluminio), un agente de dispersión (por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa), un diluyente (por ejemplo, agua) y cera de base (por ejemplo, manteca de cacao, vaselina blanca o polietilenglicol). La cantidad efectiva de los compuestos de aminopurina en la composición farmacéutica puede ser tal que produzca el efecto deseado; por ejemplo, aproximadamente 0,005 mg/kg del peso corporal de un paciente a aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal de un paciente en dosificación unitaria para administración oral y parenteral.

La dosis de un compuesto de aminopurina a ser administrada a un paciente es muy variable y puede estar sujeta al criterio del médico tratante. En general, los compuestos de aminopurina pueden administrarse una a cuatro veces a día en una dosis de aproximadamente 0,005 mg/kg del peso corporal de un paciente a aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal de un paciente en un paciente, pero la dosificación precedente podrá variar adecuadamente en función de la edad, peso corporal y afección médica del paciente y el tipo de administración. En una realización, la dosis es aproximadamente 0,01 mg/kg del peso corporal de un paciente a aproximadamente 5 mg/kg del peso corporal de un paciente, aproximadamente 0,05 mg/kg del peso corporal de un paciente a aproximadamente 1 mg/kg del peso corporal de un paciente, aproximadamente 0,1 mg/kg del peso corporal de un paciente a aproximadamente 0,75 mg/kg del peso corporal de un paciente o aproximadamente 0,25 mg/kg del peso corporal de un paciente a aproximadamente 0,5 mg/kg del peso corporal de un paciente. En una realización, se administra una dosis por día. En cualquier caso, la cantidad del compuesto de aminopurina administrada dependerá de factores tales como la solubilidad del componente activo, la formulación que se utilizó y la vía de administración.

En otra realización, en la presente invención se proporcionan usos para el tratamiento o prevención de una enfermedad o trastorno que comprende la administración de aproximadamente 0,375 mg/día a aproximadamente 750 mg/día, aproximadamente 0,75 mg/día a aproximadamente 375 mg/día, aproximadamente 3,75 mg/día a aproximadamente 75 mg/día, aproximadamente 7,5 mg/día a aproximadamente 55 mg/día o aproximadamente 18 mg/día a aproximadamente 37 mg/día de un compuesto de aminopurina a un paciente que lo necesite.

En otra realización, en la presente invención se proporcionan usos para el tratamiento o prevención de una enfermedad o trastorno que comprende la administración de aproximadamente 1 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día, aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día, aproximadamente 100 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día, aproximadamente 400 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día, aproximadamente 600 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día, aproximadamente 400 mg/día a aproximadamente 800 mg/día o aproximadamente 600 mg/día a aproximadamente 800 mg/día de un compuesto de aminopurina a un paciente que lo necesite. En una realización particular, los métodos descritos en la presente invención comprenden la administración de 400 mg/día, 600 mg/día u 800 mg/día de un compuesto de aminopurina a un paciente que lo necesite.

En la presente invención se describen adicionalmente formulaciones de dosificación unitaria que comprenden entre aproximadamente 1 mg y 200 mg, aproximadamente 35 mg y aproximadamente 1400 mg, aproximadamente 125 mg y aproximadamente 1000 mg, aproximadamente 250 mg y aproximadamente 1000 mg, o aproximadamente 500 mg y aproximadamente 1000 mg de un compuesto de aminopurina.

En la presente invención se describe adicionalmente una formulación de dosificación unitaria que comprende aproximadamente 100 mg o 400 mg de un compuesto de aminopurina.

En la presente invención se describen adicionalmente formulaciones de dosificación unitaria que comprenden 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 30 mg, 35 mg, 50 mg, 70 mg, 100 mg, 125 mg, 140 mg, 175 mg, 200 mg, 250 mg, 280 mg, 350 mg, 500 mg, 560 mg, 700 mg, 750 mg, 1000 mg o 1400 mg de un compuesto de aminopurina.

Un compuesto de aminopurina puede administrarse una, dos, tres, cuatro o más veces al día. En una realización particular, se administran dosis de 600 mg o menos en una dosis una vez al día y se administran dosis de más de 600 mg dos veces al día en una cantidad igual a la mitad de la dosis diaria total.

Un compuesto de aminopurina puede administrarse oralmente por razones de conveniencia. En una realización, cuando se administra oralmente, un compuesto de aminopurina se administra con una comida y agua. En otra realización, el compuesto de aminopurina se dispersa en agua o jugo (por ejemplo, jugo de manzana o jugo de naranja) y se administra oralmente como una suspensión.

El compuesto de aminopurina también puede administrarse intradérmicamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, percutáneamente, intravenosamente, subcutáneamente, intranasalmente, epiduralmente, sublingualmente, intracerebralmente, intravaginalmente, transdérmicamente, rectalmente, mediante inhalación, o tópicamente en las orejas, nariz, ojos o piel. El modo de administración se deja a criterio del médico tratante y depende en parte del sitio de la afección médica.

En la presente invención se describen adicionalmente cápsulas que contienen un compuesto de aminopurina sin un vehículo sólido, excipiente o vehículo líquido adicional.

En la presente invención se describen adicionalmente composiciones que comprenden una cantidad efectiva de un compuesto de aminopurina y un vehículo sólido o líquido farmacéuticamente aceptable, en donde un vehículo sólido o líquido farmacéuticamente aceptable puede comprender un excipiente, diluyente o una mezcla de los mismos. En una realización, la composición es una composición farmacéutica.

5 Las composiciones pueden encontrarse en forma de comprimidos, comprimidos masticables, cápsulas, soluciones, soluciones parenterales, pastillas, supositorios y suspensiones y similares. Las composiciones pueden formularse para contener una dosis diaria, o una fracción conveniente de una dosis diaria, en una unidad de dosificación, que puede ser un sólo comprimido o cápsula o un volumen conveniente de un líquido. En una realización, la soluciones se preparan a partir de sales solubles en agua tales como la sal hidrocloruro. En general, todas las composiciones se

10 preparan de acuerdo con métodos conocidos en química farmacéutica. Las cápsulas pueden prepararse mezclando un compuesto de aminopurina con un vehículo o diluyente adecuado y llenando la cantidad apropiada de la mezcla en cápsulas. Los portadores y diluyentes comunes incluyen, a modo no taxativo, sustancias en polvo inertes tales como almidón de muchos tipos diferentes, celulosa en polvo, especialmente celulosa cristalina y microcristalina, azúcares tales como fructosa, manitol y sacarosa, harinas de granos y polvos comestibles similares.

15 Los comprimidos pueden prepararse mediante compresión directa, mediante granulación húmeda o mediante granulación seca. Sus formulaciones comúnmente incorporan diluyentes, aglutinantes, lubricantes y desintegradores así como el compuesto. Diluyentes típicos incluyen, por ejemplo, varios tipos de almidón, lactosa, manitol, caolina, fosfato o sulfato de calcio, sales inorgánicas tales como cloruro de sodio y azúcar en polvo. También son útiles los derivados de celulosa en polvo. Los aglutinantes de comprimidos típicos son sustancias tales como almidón, gelatina y

20 azúcares tales como lactosa, fructosa, glucosa y similares. También resultan convenientes las gomas sintéticas y naturales, incluidas acacia, alginatos, metilcelulosa, polivinilpirrolidina y similares. Polietilenglicol, etilcelulosa y ceras también pueden servir como aglutinantes.

Puede ser necesario un lubricante en una formulación en comprimidos para prevenir que el comprimido y los punzones se peguen en el molde. El lubricante puede seleccionarse de sólidos deslizantes tales como talco, estearato de 25 magnesio y calcio, ácido esteárico y aceites vegetales hidrogenados. Los desintegradores de comprimidos son sustancias que se hinchan cuando se humedecen para desintegrar el comprimido y liberar el compuesto. Estos incluyen almidones, arcillas, celulosas, alginas y gomas. Más particularmente, pueden utilizarse, por ejemplo, almidones de maíz y papa, metilcelulosa, agar, bentonita; celulosa de madera, esponja natural en polvo, resinas de intercambio catiónico, ácido algínico, goma guar, pulpa de cítricos y carboximetilcelulosa, así como laurilsulfato de 30 sodio. Los comprimidos pueden recubrirse con azúcar como saborizante y sellador, o con agentes protectores que forman películas para modificar las propiedades de disolución del comprimido. Las composiciones también pueden formularse como comprimidos masticables, por ejemplo, utilizando sustancias tales como manitol en la formulación.

Cuando se desea administrar un compuesto de aminopurina como un supositorio pueden utilizarse bases típicas. La manteca de cacao es una base de supositorio tradicional que puede modificarse mediante la adición de ceras para

35 aumentar levemente su punto de fusión. Son ampliamente utilizadas las bases de supositorios miscibles en agua que comprenden, particularmente, polietilenglicoles de varios pesos moleculares.

El efecto del compuesto de aminopurina puede retardarse o prolongarse mediante la formulación apropiada. Por ejemplo, puede prepararse un gránulo lentamente soluble del compuesto de aminopurina e incorporarse en un comprimido o cápsula o como un dispositivo implantable de liberación lenta. La técnica también incluye hacer gránulos

40 de diferentes tasas de disolución y rellenar cápsulas con una mezcla de los gránulos. Los comprimidos o cápsulas pueden recubrirse con una película que resista la disolución durante un período de tiempo predecible. Aun las preparaciones parenterales pueden hacerse de acción prolongada, disolviendo o suspendiendo el compuesto de aminopurina en vehículos aceitosos o emulsificados que permitan que se disperse lentamente en el suero.

Ejemplos

45 Los siguientes ejemplos se presentan meramente a modo ilustrativo.

Ejemplo 5.1. Síntesis de 4-({8-[(2,6-Difluorofenil)amino]-9-ciclopentilpurin-2-il} amino) trans-ciclohexan-1-ol

1. (2-Cloro-5-nitropirimidin-4-il)ciclopentilamina

Se disolvió 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (10,31 mmol, 2 g) y ciclopentilamina (10,31 mmol, 1,02 mL) en THF (60 mL) y se enfrió hasta alcanzar -78ºC. Se agregó N,N-diisopropiletilamina (10,31 mmol, 1,8 mL) por goteo. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante aproximadamente 45 minutos. El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas. Después de eliminar el disolvente el

5 residuo se disolvió nuevamente en EtOAc y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y el disolvente se evaporó. El residuo se purificó utilizando cromatografía en columna (SiO2, 9:1 n-hexanos/ acetato de etilo) para proporcionar el producto deseado (2,11 g, 84% de rendimiento). ES-MS: 242 (M+1). Cuando la sal hidrocloruro de una amina se utiliza en lugar de la ciclopentilamina descrita anteriormente, se utilizan 2 a 3 equivalentes de N,N-diisopropiletilamina y diclorometano como disolvente.

10 2. 4-{[4-(Ciclopentilamino)-5-nitropirimidin-2-il]amino}trans-ciclohexan-1-ol

Se mezclaron (2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)ciclopentilamina (6,18 mmol, 1,5 g) y trans-4-aminociclohexan-1-ol (7,42 mmol, 854 mg mL) en DMF (18 mL) y se agregó N,N-diisopropiletilamina (7,42 mmol, 1,29 mL). La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó utilizando cromatografía en columna (SiO2, 1:1 n-hexanos/ acetato de etilo → 7:3 n-hexanos/ acetato de etilo → acetato de etilo) para

15 proporcionar el producto deseado (1,75 g, 88% de rendimiento). ES-MS: 322 (M+1). Cuando la sal hidrocloruro de una amina se utiliza en lugar del trans-4-aminociclohexan-1-ol descrito anteriormente, se utilizaron como disolvente 2 a 3 equivalentes de N,N-diisopropiletilamina o bicarbonato de sodio y tetrahidrofurano o acetonitrilo.

3. 4-{[5-Amino-4-(ciclopentilamino)pirimidin-2-il]amino}-trans-ciclohexan-1-ol Se disolvió 4-{[4-(ciclopentilamino)-5-nitropirimidin-2-il]amino}-trans-ciclohexan-1-ol (2,18 mmol, 700 mg) en 20 ml de EtOH y se 20 hidrogenó durante toda la noche a 1bar con Pd/C (10%) como catalizador. El catalizador se filtró y el disolvente se evaporó para proporcionar el producto deseado (635 mg, 100% de rendimiento) que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional. ES-MS: 292 (M+1). Esta reducción también se puede lograr utilizando el siguiente procedimiento: se disuelve Na2S2O4 (140,0 mmol, 14 eq.) en 150 mL de agua y se agregan 75 ml de dioxano y 7,5 mL de solución NH4OH. Se agrega el compuesto nitro correspondiente (10,0 mmol, 1 eq.) y la mezcla de reacción se agita

25 durante 12 a 72 horas. Se evapora el dioxano y el producto se extrae utilizando EtOAc o salmuera/THF. La fase orgánica se seca sobre MgSO4 y se evapora para proporcionar el producto deseado.

4. 4-({8-[(2,6-Difluorofenil)amino]-9-ciclopentilpurin-2-il}amino) trans-ciclohexan-1-ol

Se disolvió 4-{[5-amino-4-(ciclopentilamino)pirimidin-2-il}amino) trans-ciclohexan-1 -ol (1,13 mmol, 330 mg) en DMF (8,5 mL) y se agregó 2,6-difluorofenil-isotiocianato (1,13 mmol, 0,146 mL). La mezcla de reacción se agitó a 30 temperatura ambiente durante aproximadamente 90 minutos. Se agregó etanol (2,5 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 30 minutos adicionales. Se agregó N,N-diisopropilcarbodiimida (3,40 mmol, 0,532 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. El disolvente se retiró y el residuo se purificó utilizando cromatografía en columna (SiO2, 1:1 n-hexanos/ acetato de etilo → acetato de etilo → 1% metanol/ acetato de etilo) para proporcionar el producto deseado (222,5 mg, 46% de rendimiento). ES-MS: 429 (M+1). También se utilizó

35 tetrahidrofurano como disolvente en esta etapa.

Ejemplo 5.2 Síntesis de trans-(4-Aminociclohexil) {8-(2,4-difluorofenil)amino]-9-ciclopentilpurin-2-il} amina

1. trans-(4-Aminociclohexil) {8-(2,4-difluorofenil)amino]-9 -ciclopentilpurin-2-il} amina

Se disolvió N-[4-({8-[(2,4-difluorofenil)amino]-9-ciclopentilpurin-2-il}amino) trans-ciclohexil](terc-butoxi)carboxamida

40 (0,71 mmol, 375 mg) en etanol (6 mL) y se enfrió hasta alcanzar 0ºC. Se agregó cloruro de acetilo (3 mL) por goteo y la reacción se dejó alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. El precipitado se retiró mediante filtración, se lavó con éter etílico y se secó al alto vacío para proporcionar 372 mg (98% de rendimiento) como la sal trihidrocloruro. ES-MS: 428 (M+1).

De forma alternativa, puede disolverse

45 N-[4-({8-[(2,4-difluorofenil)amino]-9-ciclopentilpurin-2-il}amino)trans-ciclohexil](terc-butoxi)carboxamida en 9 mL de cloruro de metileno y después agregarse 2,25 mL de TFA. La mezcla de reacción se agita durante aproximadamente 2 horas. El disolvente se retira al vacío, el residuo se vuelve a disolver en cloruro de metileno y se neutraliza con hidróxido de amonio. La solución después se lava con una solución saturada de carbonato de sodio. La capa orgánica se separa y la capa acuosa se extrae adicionalmente con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio, se filtran y el disolvente se retira al vacío para proporcionar la amina.

Ejemplo 5.3 Síntesis de 8-(2-Fluorofenilamino)-2-(4-metoxifenilamino)-9-(trans-4-(metilamino)ciclohexil)-9H-purina

Se disolvió amina protegida por Boc (481 mg, 0,88 mmol) en THF (6 mL) y se agregó hidruro de aluminio y litio (solución 1,0 M en THF, 2,64 mL, 2,64 mmol). La mezcla de reacción se calentó a aproximadamente 65ºC durante toda la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta alcanzar 0ºC y se aplacó por goteo con agua hasta que no se observó más desprendimiento de hidrógeno. El precipitado se retiró mediante filtración y se lavó exhaustivamente con acetato

10 de etilo. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó utilizando HPLC semi-preparativa (20% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) → 80% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 30 min) para proporcionar 191 mg del producto.

Ejemplo 5.4 Síntesis de 9-(trans-4-(Dimetilamino)ciclohexil)-8-(2-fluorofenil)- 2-(4-metoxifenil)-9H-purina

Se disolvió amina (200 mg, 0,359 mmol) en una mezcla 1:1 de THF/ cloruro de metileno (4 mL) y se agregó por goteo

15 una solución de formaldehído (37% en agua, 53 μL, 0,718 mmol) en THF (1 mL) y después triacetoxiborohidruro de sodio (761 mg, 3,59 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se disolvió en DMSO/metanol (mezcla 1:1) y se purificó mediante HPLC semipreparativa (20→70% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 30min). Las fracciones que contenían el producto se aplacaron con hidróxido de amonio. Después de reposar durante toda la noche, se formó un precipitado y se filtró y se secó al alto

20 vacío, para proporcionar 108 mg del compuesto de dimetilamino (63% de rendimiento).

Ejemplo 5.5 Síntesis de (4-{8-[(2-Fluorofenil)amino]-2-[(4-metoxifenil)amino]purin-9-il}trans-ciclohexil)metan-1-ol

Se disolvió 4-{8-[(2-fluorofenil)amino]-2-[(4-metoxifenil)amino] purin-9-il}-trans-ciclohexanocarboxilato de etilo (0,28 g, 0,55 mmol) en 9 mL de THF y se enfrió hasta alcanzar 0ºC (bajo atmósfera de nitrógeno). Se agregó por goteo 1,38 mL de LiAlH4 1,0M en THF. La solución se volvió de color anaranjado oscuro a medida que se agregó el LiAIH4. La mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 5 h y se aplacó mediante la adición de 40 mL de agua. La reacción se

5 extrajo tres veces con acetato de etilo. Los productos orgánicos se combinaron y se secaron con sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se retiró al vacío. La mezcla de reacción bruta después se purificó utilizando HPLC preparativa de fase inversa (20-80% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 30min) para obtener 0,126 g del producto deseado (50% de rendimiento) después de la neutralización de la sal de TFA. ES-MS: 463 (M+1).

Ejemplo 5.6 Síntesis de trans-4-{8-[(2-Fluorofenil)amino]-9-[cis-410 (1-hidroxi-isopropil)ciclohexil]purin-2-il}amino)ciclohexan-1-ol

Se disolvió cis-4-{8-[(2-fluorofenil)amino]-2-[trans-(4-hidroxiciclohexil) amino]purin-9-il} ciclohexano carboxilato de etilo (0,200g, 0,4 mmol) en 4 mL de THF seco. Se agregó por goteo bromuro de metilmagnesio (0,6 mL, solución 3,0M en éter dietílico, 4,0 equivalentes) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se volvió amarilla fuerte y se agitó a

15 temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. La finalización de la reacción se monitoreó mediante LC-MS. Se agregaron 4 equivalentes adicionales de la solución de Grignard de metil magnesio y la mezcla de reacción se calentó durante toda la noche a aproximadamente 30ºC.

La mezcla de reacción después se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se aplacó lentamente con solución acuosa saturada de cloruro de amonio. El producto bruto se extrajo en acetato de etilo y los extractos se secaron sobre

20 Na2SO4. El producto se purificó utilizando cromatografía en columna sobre gel de sílice con 1-4% (etanol/hidróxido de amonio: 8:1) en diclorometano. El compuesto se aisló como un sólido rosado claro (57 mg, 29% de rendimiento).

Ejemplo 5.7 Síntesis de N-(4-metilpiperazinil)amida de ácido cis-4-[8-[(2,6-Difluorofenil)amino]-2-trans-({4-[4-metilpiperazinil)carbonil]ciclohexil)amino)purin-9-ilciclohexanocarb oxílico

Se disolvió diéster (10,0 mmol, 1 eq.) en 100 mL de THF y se agregó LiOH (200,0 mmol, 20 eq.) (como una solución acuosa 1M). La mezcla de reacción se calentó a aproximadamente 60ºC durante toda la noche. Después de enfriar hasta alcanzar la temperatura ambiente, el pH se ajustó hasta alcanzar 4 mediante adición de HCI 6N. Se agregó salmuera y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con THF y las fases orgánicas combinadas se secaron

30 sobre MgSO4. El disolvente se evaporó para proporcionar el producto deseado.

Se mezclaron diácido (10,0 mmol, 1 eq.), HOBT (20,0 mmol, 2 eq.) y EDCI (24,0 mmol, 2,4 eq.) en 100 mL de DMF y se agitaron durante 15 minutos. Se agregó amina (24,0 mmol, 2,4 eq.) y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó utilizando HPLC.

Ejemplo 5.8 Síntesis de 35 4-({9-[cis-4-(aminometil)ciclohexil]-8-{(2,6-difluorofenil)amino]purin-2-il)trans-amino)ciclohexan-1-ol

1. Ácido cis-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]ciclohexano carboxílico

Se disolvió ácido cis-4-aminociclohexil carboxílico (2,0g, 13,96 mmol) en 40 mL de 1,4-dioxano. Se agregaron dos equivalentes de di-terc-butil-dicarbonato (6,094g, 27,92 mmol) y después 3 equivalentes de bicarbonato de sodio (4,06g, 41,88 mmol) disueltos en 40 mL de agua. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 12 horas. La finalización de la reacción se monitoreó mediante LC-MS. Se agregó por goteo KHSO4 saturado acuoso hasta que se detuvo el desprendimiento de gas. El disolvente después se retiró a presión reducida y el producto bruto se extrajo en acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con KHSO4 saturado acuoso y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se retiró a presión reducida, lo que proporcionó 2,6 g del producto. Según indicó la 1H NMR, el producto era puro y se utilizó en las siguientes etapas sin purificación adicional. ES-MS (m/z) 244.

2. cis-(terc-Butoxi)-N-[4-(hidroximetil)ciclohexil]carboxamida

Se disolvió ácido cis-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]ciclohexano carboxílico (2,6g, 10,68 mmol) en THF (20 mL) y se enfrió hasta alcanzar -10ºC (MeOH-hielo). Se agregó N-metilmorfolina y después cloroformiato de isobutilo (1,175mL, 10,68 mmol). Después de 10 min, se agregó NaBH4 como un sólido en una porción (1,213g, 32,06 mmol). La mezcla de reacción se entibió hasta alcanzar 0ºC y se agregó metanol por goteo (13,35 mL). Después de 30 min, la reacción se aplacó con KHSO4 acuoso al 5%. La reacción se monitoreó mediante LC-MS hasta que se completó. El producto bruto se extrajo con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron sobre Na2SO4. Se obtuvo un aceite incoloro y se solidificó lentamente a temperatura ambiente. El producto y su pureza se evaluaron mediante LC-MS y 1H-NMR. No fue necesario purificar adicionalmente. No fue necesaria la purificación adicional. (Rendimiento cuantitativo) ES-MS (m/z) 230.

3.

cis-(terc-Butoxi)-N-{4[(1,3-dioxobenzo[c]azolidin-2-il)metil]ciclohexil} carboxamida

Se suspendieron cis-(terc-butoxi)-N-[4-(hidroximetil)ciclohexil]carboxamida (0,5g, 2,18 mmol) y trifenilfosfina unida a resina (1,453g, 4,36 mmol, 3 mmol/g resina) en 15 mL de THF seco. Se agregó ftalimida en 5 mL de THF y después azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD) (0,858 mL, 4,36 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente y se monitoreó mediante LC-MS. Después de agitar durante toda la noche a temperatura ambiente, la resina se retiró mediante filtración y se lavó varias veces con porciones de 5 mL de THF. El filtrado combinado con los lavados se concentró a presión reducida. El producto se purificó utilizando cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 10% acetato de etilo en hexanos como eluyente. El producto se aisló como un sólido blanco (0,486g, 1,35 mmol, 62% de rendimiento). ES-MS (m/z) 359.

4.

cis-2-[(4-Aminociclohexil)metil]benzo[c]azolidina-1,3-diona

Se suspendió cis-(terc-butoxi)-N-{4-[(1,3-dioxobenzo[c]azolidin-2-il)-metil]ciclohexil}carboxamida (0,486g, 1,35 mmol) en etanol (5 mL) y se hizo reaccionar con cloruro de acetilo (1 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 4 horas. La finalización de la desprotección se monitoreó mediante LC-MS. El disolvente se retiró a presión reducida y el producto se aisló como su sal HCl como un sólido blanco y se utilizó sin purificación adicional en la siguiente adición a 2,4-dicloro-5-nitropirimidina: ES-MS (m/z) 259.

5. -({9-[cis-4-(Aminometil)ciclohexil]-8-{(2,6-difluorofenil)amino]purin-2-il}trans-amino)ciclohexan-1-ol

Se disolvió 2-[(4-{8-[(2,6-difluorofenil)amino]-2-[trans-(4-hidroxiciclohexil)-amino)purin9-il}ciclohexilmetil]benzo[c]azolidina-1,3-dio na (0,318g, 0,52 mmol) en etanol (4,5 mL) y se hizo reaccionar con hidrazina (42 μL, 2,4 eq) a temperatura de reflujo durante aproximadamente 5 horas. Se formó un precipitado blanco que se retiró mediante filtración. El filtrado, combinado con los lavados del precipitado, se concentró a presión reducida. El producto se purificó utilizando cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 5-10% (etanol/NH4OH: 8/1) en diclorometano como el eluyente. El producto se aisló como un sólido blanco (198 mg, 80% de rendimiento).

Ejemplo 5.9 Síntesis de ácido 3-((trans-4-(8-(2,6-difluorofenilamino)-9-ciclopentil-9H-purin-2-ilamino)ciclohexiloxi)carbonil)propanoico

Se mezclaron trans-4-(8-(2,6-difluorofenilamino)-9-ciclopentil-9H-purin-2-ilamino)ciclohexanol (1 mmol, 1 eq.) y anhídrido succínico (10 mmol, 10 eq.) en 25 mL de piridina y se agitaron a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla se calentó a 50ºC durante aproximadamente 10 horas y a continuación se evaporó el disolvente. El residuo se recristalizó a partir de acetona/MeOH para proporcionar el producto deseado.

Ejemplo 5.10 Síntesis de trans-4-(8-(2,6-difluorofenilamino)-9-ciclopentil-9H-purin-2-ilamino)ciclohexil] 2-aminoacetato

Se mezclaron trans-4-(8-(2,6-difluorofenilamino)-9-ciclopentil-9H-purin-2-ilamino)ciclohexanol (1 mmol, 1 eq.) DCC

10 (2 mmol, 2 eq.), BOC-glicina (1,12 mmol, 1,12 eq.) y DMAP (1,12 mmol, 1,12 eq.) en 20 mL de DCM y se agitaron a temperatura ambiente durante 2 días Se agregaron agua y EtOAc, las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre MgSO4. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó utilizando cromatografía en columna para proporcionar el producto protegido por Boc deseado.

El producto protegido por Boc (1 mmol, 1 eq.) se disolvió en 15 mL de DCM y se agregaron 4 ml de TFA. La mezcla de

15 reacción se agitó durante aproximadamente una hora y se evaporó el disolvente. Se agregaron EtOAc y solución de NaHCO3 sat. y las fases se separaron. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se evaporó el disolvente. El residuo se purificó utilizando cromatografía en columna/HPLC para proporcionar el producto deseado.

Eemplo 5.11 Síntesis de 3-(8-(2-fluorofenilamino)-9-ciclopentil-9H-purin-2-ilamino)benzamida

20 A una solución enfriada (0ºC) del compuesto de ciano (100 mg, 0,24 mmol) en etanol (1 mL), se agregaron hidróxido de sodio (18 mg, 0,46 mmol) y peróxido de hidrógeno (30%, 53 μL, 0,48 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente 4 h a temperatura ambiente. Mediante LCMS solamente se observó material de partida. Se agregaron otros 18 mg de hidróxido de sodio y 53 μL de peróxido de hidrógeno y la mezcla de reacción se agitó durante aproximadamente otras 8 h. Aún se observaba solamente material de partida. La reacción se calentó hasta

25 alcanzar 60ºC durante aproximadamente 4 h. La formación del producto se observó junto con trazas de ácido carboxílico. La reacción se aplacó hasta alcanzar pH = 7 con HCl 6N. La mezcla de reacción bruta se purificó utilizando HPLC de fase inversa semi-preparativa (15% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) → 80% acetonitrilo/agua (0,1 % TFA) durante 30 min) para proporcionar 35 mg de amida como un sólido después de la neutralización de la sal TFA. LRMS (ES) m/e 432 [MH]+.

30 Ejemplo 5.12 Síntesis de 2-((3-(2-(piperidin-1-il)etoxi)fenil)amino)-9-ciclopentil-8-((2-fluorofenil)amino)-9H-purina En un matraz de fondo redondo se disolvió hidróxido de sodio (0,585g, 14,6 mmol) en 10 mL de agua. Se agregaron THF (20 mL), 3-{[4-(ciclopentilamino)-5-nitropirimin-2-il]amino}fenol (1,15g, 3,66 mmol) e hidrocloruro de cloruro de piperidil etilo (0,81g, 4,39 mmol). La mezcla de reacción se calentó a aproximadamente 55ºC durante toda la noche. La reacción se monitoreó mediante LC-MS. La mezcla de reacción se vertió en solución acuosa de bicarbonato de sodio y el producto bruto se extrajo en acetato de etilo. Las orgánicas combinadas /sic/ se secaron sobre sulfato de sodio y se evaporaron hasta secarse. El producto deseado se aisló como un sólido (1,538g, 98% de rendimiento) ES-MS (m/z) 427,3.

Ejemplo 5.13. Síntesis de 8-((2-fluorofenil)amino)-2-((4-metoxifenil)amino)-9H-purina

El compuesto cianoetilo sustituido (0,17 mmol) se disolvió en una mezcla de THF:H2O (8:2, 10 mL) y se agregó hidróxido de litio (1,05 mmol). La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 50ºC durante aproximadamente 72

h. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó utilizando cromatografía en columna (SiO2) o HPLC de fase inversa

15 Ejemplo 5.14 Síntesis de 4-({9-(2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il)-8-[(2,4-difluorofenil)amino]purin-2-il}amino)tiano-1,1-diona

2H-3,4,5,6-Tetrahidropiran-4-il[5-nitro-2-(tian-4-ilamino)pirimidin-4-il]amina

Se disolvieron 2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il(2-cloro-5-nitropirimidin-4-il)amina (3,14 mmol, 810,6 mg, obtenido a partir

20 de 2,4-dicloro-5-nitropirimidina y 4-aminotetrahidropirano siguiendo el método descrito en el Ejemplo 5.1) y 4-aminotetrahidrotiopirano (3,77 mmol, 441 mg, obtenido siguiendo el procedimiento descrito en la Solicitud Internacional de Patente PCT WO 2002083642) en DMF (20 mL). Se agregó N,N-diisopropiletilamina (3,77 mmol, 0,67 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La DMF se retiró al vacío y el producto bruto se sonicó con acetato de etilo. El precipitado se filtró para proporcionar el compuesto del título (992 mg, 93% de

25 rendimiento). ES-MS: 340 (M+1).

2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il[5-amino-2-(tian-4-ilamino)pirimidin-4-ilamina

El compuesto del título (760 mg, 93% de rendimiento) se obtuvo a partir de 2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il[5-nitro-2-(tian-4-ilamino)pirimidin-4-il]amina (2,63 mmol, 892 mg) mediante hidrogenación catalítica siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 5.1, etapa 3. ES-MS: 310 (M+1).

[9-(2H-3,4,5,6-Tetrahidropiran-4-il)-2-(tian-4-ilamino)purin-8-il](2,4-difluorofenil)amina

El compuesto del título (577,1 mg, 71% de rendimiento) se obtuvo a partir de 2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il[5-amino-2-(tian-4-ilamino)pirimidin-4-il]amina (1,81 mmol, 560 mg) y 2,4-difluorofenilisotiocianato siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 5.1 etapa 4. ES-MS: 447 (M+1).

5 4-({9-(2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il)-8-[(2,4-difluorofenil)amino]purin-2-il}amino)tiano-1,1-diona

Se disolvió [9-(2H-3,4,5,6-tetrahidropiran-4-il)-2-(tian-4-ilamino)purin-8-il](2,4-difluorofenil)amina (1,2 mmol, 537 mg) en cloruro de metileno (15 mL) y se agregó ácido 3-cloroperoxibenzoico (2,64 mmol, 591 mg). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se lavó con solución de bicarbonato de sodio saturada (10 mL) y se extrajo con cloroformo (3. x 15 mL). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se

10 filtró. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, 10% Metanol/ acetato de etilo) y HPLC de fase inversa (20% acetonitrilo/ agua (0,1% TFA) a 100% acetonitrilo/ agua (0,1% TFA) durante 30 min) para proporcionar el compuesto del título (146 mg, 25% de rendimiento). ES-MS: 479 (M+1).

Ejemplo 5.15 Síntesis de 4-[8-[(2,4-difluorofenil)amino]-2-[(4-trans-hidroxiciclohexil)amino]purin-9-il}tiano-1,1-diona

Se disolvieron 4-({8-[(2,4-difluorofenil)amino]-9-tian-4-ilpurin-2-il}amino)-trans-ciclohexan-1-ol (0,49 mmol, 225 mg), obtenido a partir de 4-aminotetrahidrotiopirano (Solicitud Internacional de Patente PCT WO 2002083642), trans-4-aminociclohexanol e isotiocianato de 2,4-difluorofenilo siguiendo el Procedimiento General descrito en el Ejemplo 5.1, en cloruro de metileno (5 mL) y se agregó ácido 3-cloroperoxibenzoico (1,08 mmol, 241mg). La reacción 20 se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se lavó con solución de bicarbonato de sodio saturada (5 mL) y se extrajo con cloroformo (3. x 10 mL). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, acetato de etilo a 2% metanol/ acetato de etilo) y HPLC de fase inversa (20% acetonitrilo/ agua (0,1% TFA) a 100% acetonitrilo/ agua (0,1% TFA) durante 30 min) para proporcionar el compuesto del título (88,4 mg, 36% de rendimiento). ES-MS:

25 493 (M+1).

Ejemplo 5.16 Elemento base que participa en la síntesis de:

Hidrocloruro de (5S)-5-aminopiperidin-2-ona

Ácido (2S)-2-[(terc-butoxi)carbonilamino]-4-(metoxicarbonil)butanoico

Se agregó éster 5-metílico de ácido L-glutámico (91,3 mmol, 14,7 g) a una solución de trietilamina (274 mmol, 38 mL) en DMF (350 mL). Se agregó dicarbonato de di-t-butilo (183 mmol, 40g) y la reacción se agitó a 50ºC durante 1 hora y después a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se retiró al vacío y el material bruto se purificó

5 mediante cromatografía en columna (SiO2, 1:1 n-hexanos/ acetato de etilo a acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (20,36 g, 85% de rendimiento). ES-MS: 262 (M+1).

(4S)-4-[(terc-Butoxi)carbonilamino]-5-hidroxipentanoato de metilo

En un matraz de fondo redondo se disolvió ácido (2S)-2-[(terc-butoxi)carbonilamino]-4-(metoxicarbonil)butanoico (78 mmol, 20,36 g) en THF (300 mL). La solución se enfrió hasta alcanzar -10ºC y se agregaron N-metilmorfolina (78 10 mmol, 8,58 mL) y cloroformiato de etilo (78 mmol, 7,48 mL), y después borohidruro de sodio (234 mmol, 8,85 g). La reacción se agitó durante 30 min a esta temperatura y después se aplacó mediante adición lenta de solución saturada de cloruro de amonio hasta que no se observó más desprendimiento de hidrógeno. La mezcla de reacción después se extrajo con acetato de etilo y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la filtración, el disolvente se evaporó y el material bruto se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, 1:1 n-hexanos/ acetato de etilo) para proporcionar

15 el compuesto del título (11,68g, 61% de rendimiento). ES-MS: 248 (M+1).

(4S)-4-[(terc-Butoxi)carbonilamino]-5-[(4-metilfenil)sulfoniloxi]pentanoato de metilo

Se disolvió (4S)-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]-5-hidroxipentanoato de metilo (9,11 mmol, 2,25 g) en 30 mL de cloruro de metileno. Se agregaron cloruro de p-toluenosulfonilo (9,1 mmol, 1,7 g) y trietilamina (27,33 mmol, 3,8 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se retiró al vacío y el producto bruto se

20 purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, 4:1 n-hexanos/ acetato de etilo a 7:3 n-hexanos/ acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1,98 g, 54% de rendimiento). ES-MS: 402 (M+1).

(4S)-5-Azido-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]pentanoato de metilo

Se disolvió (4S)-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]-5-[(4-metilfenil)sulfoniloxi]pentanoato de metilo (4,93 mmol, 1,98 g) en DMF (15 mL) y se agregó azida de sodio (14,8 mmol, 0,961 g). La reacción se calentó a 50ºC durante 3 horas. La

25 mezcla de reacción se filtró y el disolvente se retiró al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía instantánea (SiO2, acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1,07 g, 80% de rendimiento). ES-MS: 273 (M+1).

N-{(3S)-6-oxo(3-piperidil))(terc-butoxi)carboxamida

Se disolvió (4S)-5-azido-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]pentanoato de metilo (3,9 mmol, 1,07 g) en metanol (10 mL) y se

30 agregó 10% paladio sobre carbono (0,1 g). La reacción se agitó durante toda la noche bajo 1 atm de hidrógeno. La reacción se filtró y el disolvente se retiró al vacío para proporcionar el compuesto del título (0,83 g, 99% de rendimiento). ES-MS: 215 (M+1).

Hidrocloruro de (5S)-5-aminopiperidin-2-ona

Se disolvió N-((3S)-6-oxo(3-piperidil))(terc-butoxi)carboxamida (3,9 mmol, 0,93 g) en etanol (10 mL) y se enfrió hasta

35 alcanzar 0ºC. Se agregó cloruro de acetilo (2 mL) y la reacción se dejó alcanzar la temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 1 hora después de lo cual el disolvente se retiró al vacío para proporcionar el compuesto del título (725 mg, 99% de rendimiento) como la sal dihidrocloruro. ES-MS: 115 (M+1).

Ejemplo 5.17 Elemento base utilizado para la síntesis de:

y

40 Hidrocloruro de (5R)-5-aminopiperidin-2-ona El compuesto del título se preparó como se describe en el Ejemplo 5.15, comenzando a partir de éster 5-metílico de ácido D-glutámico.

Ejemplo 5.18 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de 6-cloro-2-fluorobencenoisotiocianato

Una solución de 2-cloro-6-fluoroanilina (767 mg, 5,29 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml) se agregó por goteo con agitación a una solución de tionocarbonato de di-2-piridilo (2,46 g, 10,58 mmol) en tetrahidrofurano (7 mL) a

10 temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 60 horas a temperatura ambiente y después el disolvente se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice de fase normal con pentano. Las fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (167 mg, 17%): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,19-7,23 (m, 1H), 7,12-7,19 (m, 1H), 7,04-7,10 (m, 1H).

15 Ejemplo 5.19 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de 3-fluoropiridin-2-isotiocianato

Se agregó por goteo una solución de 3-fluoro-piridin-2-ilamina (928 mg, 8,28 mmol) en diclorometano (3 mL) con 20 agitación a una solución de tiofosgeno (1,9 mL, 24,83 mmol) en diclorometano (6 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con diclorometano y bicarbonato de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se separó y la solución acuosa se extrajo 3 veces con diclorometano. Se combinaron las capas orgánicas y el disolvente se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice de fase normal con 10% acetato de etilo en hexanos. Las fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (479 mg, 37%): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,22-8,23 (m, 1H), 7,48-7,52 (m, 1H), 7,21-7,26 (m, 1H).

Ejemplo 5.20 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de hidrocloruro de (2E)(4S)-4-aminopent-2-enoato de metilo

(2S)-2-[(terc-Butoxi)carbonilamino]-N-metoxi-N-metilpropanamida

A una solución de Boc-alanina (20 gramos, 105,7 mmol) en diclorometano (170 ml) se agregó HOBT (14,28 g, 105,7 mmol) e hidrocloruro de N,O-dimetilhidroxilamina (10,31 g, 105,7 mmol). La mezcla se enfrió con un baño de hielo-agua, después se agregaron trietilamina (30 ml, 211,4 mmol) y 1,3-diciclohexilcarbodiimida (21,81 g, 105,7 15 mmol). La reacción se agitó en el baño de hielo-agua durante 1 hora y después se dejó entibiar hasta alcanzar la temperatura ambiente durante toda la noche. Luego la reacción bruta se enfrió en un baño de hielo-agua y se filtró el precipitado. La solución orgánica resultante después se lavó dos veces con hidróxido de sodio acuoso 1N (50 mL), dos veces con ácido cítrico acuoso al 10% (50 mL) y una vez con salmuera. La solución después se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el disolvente se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en una

20 columna de gel de sílice de fase normal con 30-100% acetato de etilo en hexanos. Las fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (20 g, 81%); ES-MS (m/z) 233,2 [M+1]+.

(2E)(4S)-4-[(terc-Butoxi)carbonilamino]pent-2-enoato de metilo

Una solución de (2S)-2-[(terc-butoxi)carbonilamino]-N-metoxi-N-metilpropanamida (13,05 g, 56,18 mmol) en éter

25 etílico (560 mL) se enfrió con un baño de hielo-agua y después se agregó hidruro de aluminio y litio al 95% (2,80 g, 70,23 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se agregó una solución de sulfato de hidrógeno de potasio acuoso (300 mL, 0,33M). La mezcla resultante se extrajo tres veces con éter etílico. Las capas orgánicas combinadas se lavaron tres veces con cloruro de hidrógeno 1N, tres veces con hidrogenocarbonato de sodio saturado acuoso y una vez con salmuera. La solución después se secó sobre sulfato de

30 sodio anhidro, se filtró y el disolvente se evaporó. El sólido resultante se disolvió en tetrahidrofurano anhidro (430 mL) y después se agregó a una solución fría de fosfonoacetato de trimetilo (27,3 mL, 168,5 mmol) e hidruro de sodio (112 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (130 mL) que se había agitado previamente a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se agitó durante 5 minutos en un baño de hielo-agua a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se agregó agua (500 mL). La mezcla de reacción se diluyó con salmuera y acetato de etilo, se agitó y las

35 capas se separaron. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el disolvente se evaporó. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice de fase normal con 0-30% acetato de etilo en hexanos. Las fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (8,85 g, 69%): ES-MS (m/z) 230,4 [M+1]+.

Hidrocloruro de (2E)(4S)-4-aminopent-2-enoato de metilo Se agitó una solución de (2E)(4S)-4-((terc-butoxi)carbonilamino}pent-2-enoato de metilo (3,083 g, 13,45 mmol) en cloruro de hidrógeno 4N en dioxano a temperatura ambiente durante 1 hora. Los productos volátiles se evaporaron para proporcionar el compuesto del título (2,2 g, 98%): ES-MS (m/z) 130,3 [M+1]+.

(4S)-4-({5-Amino-2-[(metiletil)amino}pirimidin-4-il]amino)pentanoato de metilo

5 Una solución de hidrocloruro de (2E)(4S)-4-aminopent-2-enoato de metilo (1,7 g, 10,31 mmol) en tetrahidrofurano (7 mL) se agregó por goteo a una solución de 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (2,0 g,10,31 mmol) y diisopropiletilamina (3,6 mL, 20,6 mmol) en tetrahidrofurano (17 mL) enfriado a -78ºC. La reacción se agitó a -78ºC durante 1 hora y después a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se evaporó y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice de fase normal con 0-20% de acetato de etilo en hexanos. Las

10 fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y el disolvente se evaporó para proporcionar 2,35 g de un sólido blanco. Al sólido se agregaron N,N-dimetilformamida anhidra (40 mL), diisopropiletilamina (1,44 mL, 8,25 mmol) e isopropilamina (0,70 mL, 8,25 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 70 horas, se diluyó con agua y se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se evaporó el disolvente. Al aceite resultante se agregó etanol anhidro (50 mL) y 10% paladio

15 sobre carbono (200 mg). La solución se trató con gas hidrógeno de un balón y se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla de reacción se filtró y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (2,24 g, 77%): ES-MS (m/z) 282 [M+1]+.

(4S)-4-{2-[(metiletil)amino]-8-((2,4,6-trifluorofenil)aminopurin-9-il}pentanamida

Se saturó una solución de (4S)-4-(2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}pentanoato de metil (500

20 mg, 1,15 mmol) en metanol anhidro (25 mL) a -78ºC con gas amoníaco. La solución se selló en un tubo de reacción y se dejó entibiar hasta alcanzar la temperatura ambiente y después se calentó a 40ºC durante 2 días. El disolvente se evaporó y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en una columna de gel de sílice de fase normal con 70-100 % acetato de etilo en hexanos. Las fracciones que contenían el producto limpio se combinaron y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (223 mg, 46%): ES-MS (m/z) 422,3 [M+1]+.

25 Ejemplo 5.21 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de hidrocloruro de (2E)(4R)-4-aminopent-2-enoato de metilo

(2R)-2-[(terc-Butoxi)carbonilamino]-N-metoxi-N-metilpropanamida

30 El compuesto del título se preparó como (2S)-2-[(terc-butoxi)carbonilamino]-N-metoxi-N-metilpropanamida con boc-D-alanina (20 gramos, 105,7 mmol) para proporcionar el compuesto del título (21,7 g, 88%): ES-MS (m/z) 233,2 [M+1]+.

(2E)(4R)-4-((terc-butoxi)carbonilamino]pent-2-enoato de metilo

El compuesto del título se preparó como (2E)(4S)-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]pent-2-enoato de metilo con

35 (2R)-2-[(terc-butoxi)carbonilamino]-N-metoxi-N-metilpropanamida (13,05 gramos, 56,18 mmol) para proporcionar el compuesto del título (10,2 g, 79%): ES-MS (m/z) 230 [M+1]+.

Hidrocloruro de (2E)(4i)-4-aminopent-2-enoato de metilo Se agitó una solución de (2E)(4R)-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]pent-2-enoato de metilo (3,61 g, 15,75 mmol) en cloruro de hidrógeno 4N en dioxano a temperatura ambiente durante 1 hora. Los productos volátiles se evaporaron para proporcionar el compuesto del título (2,6 g, 98%): ES-MS (m/z) 130,3 [M+1]+.

(4R)-4-({5-Amino-2-[(metiletil)amino)pirimidin-4-il}amino)pentanoato de metilo

5 El compuesto del título se preparó como (4S)-4-({5-amino-2-[(metiletil)amino]pirimidin-4-il)amino)pentanoato de metilo con hidrocloruro de (2E)(4R)-4-aminopent-2-enoato de metilo (1,7 g, 10,31 mmol) para proporcionar el compuesto del título (2,17 g, 75%): ES-MS (m/z) 282 [M+1]+.

(4R)-4-{2-[(Metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il} pentanamida

El compuesto del título se preparó como

10 (4S)-4-(2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il)pentanamida con (4R)-4-{2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}pentanoato de metilo (500 mg, 1,15 mmol) para proporcionar el compuesto del título (273 mg, 57%): ES-MS (m/z) 422,3 [M+1]+.

Ejemplo 5.22 Elemento base utilizado para la síntesis de:

15 Síntesis de 4-Aminopiperidil pirrolidinil cetona

(terc-Butoxi)-N-[1-(pirrolidinilcarbonil)(4-piperidil)carboxamida

Se disolvió carbonilcloruro de 1-pirrolidina (1,10 g, 9,99 mmol) en 400 ml de diclorometano bajo N2. Se agregaron (terc-butoxi)-N-(4-piperidil)carboxamida (2,0 g, 9,99 mmol) y trietilamina (1,40 mL, 9,99 mmol) y la mezcla de reacción

20 se agitó durante tres días. La reacción se aplacó con solución de NaHCO3 saturada y se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y el disolvente se evaporó para proporcionar el producto como un sólido blanco. (2,63 g, 8,84 mmol, 89%).

4-Aminopiperidil pirrolidinil cetona

Se disolvió (terc-butoxi)-N-[1-(pirrolidinilcarbonil)(4-piperidil)]carboxamida (2,0 g, 6,73 mmol) en 40 mL de

25 diclorometano y se agregó ácido trifluoroacético (15 mL, 201,94 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas. El disolvente se evaporó para proporcionar el producto como un semi-sólido marrón claro, que se utilizó directamente para la siguiente etapa. (2,09 g, 6,73 mmol, 100%).

Ejemplo 5.23 Síntesis de 4-[(R)-8-(2,4-difluoro-fenilamino)-9-(4-hidroxi-ciclohexil)-7H-purin-2-ilamino]-ciclohexanona Se disolvió 4-[(R)-8-(2,4-difluoro-fenilamino)-2-(1,4-dioxa-espiro[4,5]dec-8-ilamino)-7H-purin-9-il]-ciclohexanol (0,62 g,

1,7 mmol) en 25 mL de cloruro de metileno bajo una atmósfera de N2. Después se agregó por goteo ácido

trifluoroacético (5 mL) mediante un embudo de adición. Después de agitar durante 24 h la mezcla de reacción

5 resultante se concentró a presión reducida. Se agregó bicarbonato de sodio saturado al residuo resultante hasta

alcanzar pH 12. Luego la capa acuosa básica se extrajo utilizando cloroformo (2 x 75 mL). Las capas orgánicas

combinadas se secaron con MgSO4. El producto bruto después se purificó en la HPLC preparativa utilizando un

procedimiento de 5-70% CH3CN/H2O durante 39 minutos. Se combinaron y concentraron las fracciones de una pureza

mayor a 98% detectada mediante HPLC analítica. Se retiró el exceso de ácido trifluoroacético mediante lavado del 10 producto con carbonato de potasio 1,75 M (3 x 100 mL). Las capas orgánicas después se concentraron hasta secarse

bajo vacío para proporcionar la cetona (0,015g 0,033 mmol, 12%) como un polvo fino: LC-MS (m/z) 457,1 [M+1]+.

Ejemplo 5.24 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de (S)-(-)-4-amino-2-pirrolidinona

(S)-(-)-4-azido-2-pirrolidinona

A una solución enfriada con hielo de (R)-(+),4-hidroxi-2-pirrolidinona (25,0 g, 247 mmol) en diclorometano (300 mL) se

agregó trietilamina (17,0 g, 168,7 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (21 mL, 272 mmol) por goteo. La solución se

agitó a temperatura ambiente durante una hora. La reacción se monitoreó mediante TLC (acetato de etilo al 100% 20 utilizando mancha de permanganato). La solución después se condensó a presión reducida para proporcionar un

sólido. El sólido se diluyó con DMF (300 mL) y después se agregó de azida de sodio (48,24 g, 742 mmol). La solución

se calentó hasta alcanzar 60ºC durante 3 horas. La reacción se monitoreó mediante TLC (acetato de etilo al 100%

utilizando mancha de permanganato). La solución después se condensó a presión reducida y el aceite resultante se

purificó mediante cromatografía en gel de sílice (50-80% acetato/hexanos y después 12% metanol/diclorometano) 25 para proporcionar el compuesto del título (10,2 g, 32%). 1H-NMR (CD3OD) δ 4,43 (m, 1H), 3,71 (dd, 1H), 3,34 (m, 1H),

2,75 (dd,1H), 2,29 (dd, 1H).

(S)-(-)-4-amino-2-pirrolidinona:

A una solución de (S)-(-)-4-azido-2-pirrolidinona (10,2 g, 80,8 mmol) en THF (450 mL) se agregó trifenilfosfina unida a

resina (40,5 g, 3mmol comp/1,0g resina). La solución se calentó hasta alcanzar 60ºC durante dos horas. El 30 desprendimiento del gas nitrógeno a partir de la solución es un indicador del desarrollo de la reacción. La reacción se

monitoreó mediante TLC y mancha de permanganato para verificar que se hubiera completado. La solución se filtró a

través de una frita de vidrio y el producto unido a la resina después se agregó a otro recipiente de reacción y se diluyó con agua (500mL). La solución se calentó hasta alcanzar 70ºC durante dieciséis horas. La solución se filtró a través de una frita de vidrio y el filtrado acuoso se condensó a presión reducida y se agregó tolueno (3X) para proporcionar el compuesto del título al vacío (5,62 g., 62%). 1H-NMR (CD3OD) δ 3,68 (m, 1H), 3,56 (en, 1H), 3,04 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 2,05 (m, 1H).

Ejemplo 5.25 Síntesis de 5-[9-ciclopentil-8-(2,4,6-trifluorofenilamino)-9H-purin-2-ilamino]piridina-2-ol

Se disolvió 9-ciclopentil-N2-(6-metoxipiridin-3-il)-N8-(2,4,6-trifluorofenil)-9H-purina2,8-diamina (0,350 g, 0,769 mmol) en 30% HBr/ácido acético en un tubo sellado y se calentó hasta alcanzar 80ºC durante 16 horas. El producto se confirmó mediante LC-MS. La solución se dividió entre carbonato de potasio 1,75 M y acetato de etilo (3X). Los productos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El sólido resultante se purificó mediante HPLC preparativa (5-55% acetonitrilo/agua, 20mL/min.) para proporcionar el compuesto del título (0,212 g, 34%). ES-MS (m/z) 442 [M+1]+. Punto de fusión 257-260ºC.

Ejemplo 5.26 Elemento base utilizado para la síntesis de (S)-3-[8-(2,4-trifluoro-fenilamino)-2-isopropilamino-purin-9-il]-butiramida

Hidrocloruro de (S)-(-)-3-aminobutiramida

A una solución de ácido (3S)-3-[terc-butoxicarbonil)amino]butanoico (2 g, 9,8 mmol) en acetonitrilo (10 mL) se agregó HBTU (4,8 g, 12,7 moral) y cloruro de amonio (2,6 g, 49 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió hasta alcanzar 0ºC y diisopropiletilamina (10,0 g, 78 mmol). Se retiró el baño de hielo-agua y la mezcla marrón se agitó bajo nitrógeno durante 12 horas. El disolvente se retiró al vacío y el residuo se disolvió en diclorometano (100 mL). La fase orgánica se lavó con solución de carbonato de sodio acuoso (saturado). La fase orgánica se secó con salmuera y después sulfato de sodio, que a continuación se filtró. La fase orgánica se concentró y se purificó mediante cromatografía en fase normal en gel de sílice (50% acetato de etilo/hexano y luego 10% metanol/diclorometano) para proporcionar fracciones parcialmente purificadas, que se combinaron y se utilizaron en la siguiente reacción. La amida bruta se disolvió en 10 mL de dioxano seco y se enfrió hasta alcanzar 0ºC en un baño de hielo/agua. Se agregó por goteo HCl 4N en solución de dioxano (12,2 mL, Aldrich) y la mezcla se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retiró al vacío para proporcionar un sólido aceitoso que no se purificó adicionalmente pero se suspendió en THF (5 mL). Se agregó diisopropiletilamina (2,53 g, 19,6 mmol) para crear una suspensión.

(S)-3-(2-Cloro-5-nitro-pirimidin-4-ilamino)-butiramida

Se agregó 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (1,9 g, 9,8 mmol) a un matraz de fondo redondo de 100 ml secado en horno y se agregó THF (27 mL) para proporcionar una solución. La mezcla se enfrió hasta alcanzar -78ºC bajo atmósfera de nitrógeno y la suspensión (Etapa A) se agregó por goteo. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 30 minutos y después se entibió hasta alcanzar la temperatura ambiente durante 3 h. Se agregó agua (10 mL) a la mezcla y el disolvente orgánico se retiró al vacío. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL) y la fase orgánica resultante se secó con salmuera. La fase orgánica se concentró hasta proporcionar un residuo. La cromatografía en fase normal en gel de sílice (5-50% acetato de etilo/hexano) del residuo proporcionó el compuesto del título (761 mg, 30% total): ES-MS (m/z/) 260,0 [M+1]+. El intermediario se empleó de acuerdo con el procedimiento estándar para proporcionar (S)-3-[8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-2-isopropilamino-purin-9-il]-butiramida.

Ejemplo 5.27 Elemento base utilizado para la síntesis de (R)-3-[8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-2-isopropilamino-purin-9-il]-butiramida

Se preparó (R)-3-(2-cloro-5-nitro-pirimidin-4-ilamino)-butiramida de manera similar (586 mg, 23% rendimiento total): ES-MS (m/z/) 260,0 [M+l]+. El intermediario se empleó de acuerdo con el procedimiento estándar para proporcionar (R)-3-[8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-2-isopropilamino-purin9-il]-butiramida.

Ejemplo 5.28 Elemento base utilizado para la síntesis de 4-[9-(R)-1,1-dioxo-tetrahidro-1λ6-tiofen-3-il)-8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]-ciclohexanol

10 Preparación de hidrocloruro de (R)-tetrahidro-3-tiofenoamina

La síntesis de compuesto del título se llevó a cabo de acuerdo con Dehmlow, E. V. et al. Synthesis 1992, 10, 947-9. Se empleó hidrocloruro de amina de manera usual para proporcionar 4-[(R)-9-tetrahidro-tiofen-3-il-8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino) -9H-purin-2-ilamino]ciclohexanol.

Síntesis de 4-[9-(R)-1,1-dioxo-tetrahidro-1λ6-tiofen-3-il)-8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]-ciclohexanol

15 Se disolvió 4-[(R)-9-tetrahidro-tiofen-3-il-8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]ciclohexanol (100 mg, 0,21 mmol) en MeOH (1 mL) y la mezcla se enfrió hasta alcanzar 0ºC con baño de hielo/agua. Se disolvió oxono (338 mg, 0,52 mmol) en agua (1 mL) y la solución se agregó por goteo a la primera mezcla a 0ºC con agitación vigorosa. Posteriormente, el baño se retiró y la mezcla turbia se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla se agregó a diclorometano (100 mL) y la fase orgánica se lavó con carbonato de sodio (acuoso), salmuera y se secó

20 sobre sulfato de sodio. Después de la filtración, el disolvente se retiró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (5-10% cloruro de metileno/metanol) para proporcionar sulfona (59 mg, 57%): ES-MS (m/z) 497,0 [M+1]+.

Ejemplo 5.29 Elemento base utilizado para la síntesis de 4-[9-(S)-1,1-dioxo-tetrahidro-1λ6-tiofen-3-il)-8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]ciclohexanol

Preparación de hidrocloruro de (S)-tetrahidro-3-tiofenoamina

La síntesis de compuesto del título se llevó a cabo de acuerdo con Dehmlow, E. V.; Westerheide, R.; Synthesis 1992, 10, 947-9. Se empleó hidrocloruro de amina de manera usual para proporcionar 4-[(S-9-tetrahidro-tiofen-3-il-8(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]ciclohexanol.

5 Síntesis de 4-[9-(S)-1,1-dioxo-tetrahidro-1λ6-tiofen-3-il)-8(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]-ciclohexanol

La síntesis de sulfona se realizó de manera similar para proporcionar 4-[9-(S)-1,1-dioxo-tetrahidro-1λ6-tiofen3-il)-8-(2,4,6-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]-ciclohexanol (51 mg, 49%): ES-MS (m/z/) 497,0 [M+1]+.

10 Ejemplo 5.30 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de 4-[9-((1S,2R)-2-metil-ciclopentil)-8-(2,4,6,--trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]-ciclohexanol Preparación de ciclopentanamina, 2-metil-, hidrocloruro, (1S,2R)- (9CI) La síntesis del compuesto del título se llevó a cabo de acuerdo con Wiehl, W.; Frahm, A. W.; Chemische Berichte 1986

15 119(8), 2668-77. Se empleó hidrocloruro de amina de manera usual. Ejemplo 5.31 Elemento base utilizado para la síntesis de 4-[9-((1R,2S)-2-metil-ciclopentil)-8-(2,4,6,-trifluoro-fenilamino)-9H-purin-2-ilamino]-ciclohexanol

Preparación de ciclopentanamina, 2-metil-, hidrocloruro, (1R,2S)- (9CI)

20 La síntesis del compuesto del título se llevó a cabo de acuerdo con Wiehl, W.; Frahm, A. W.; Chemische Berichte 1986 119(8), 2668-77. Se empleó hidrocloruro de amina de manera usual. Ejemplo 5.32 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de hidrocloruro de 4-amino-1-hidroxiciclohexanocarboxilato de metilo

((1S)-1-Feniletil)(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-8-il)amina

Se disolvió 1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-ona (10g, 64,03 mmol) en dicloroetano seco (300 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó (1S)-1-feniletilamina (8,96 mL, 70,43 mmol) pura a temperatura ambiente y luego triacetoxiborohidruro de sodio (20,36 g, 96,04 mmol) puro en pequeñas porciones. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La reacción se aplacó mediante adición de agua destilada (200 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio. El filtrado se concentró a presión reducida. Se obtuvo un aceite amarillo de pureza satisfactoria en base a (11,2g, 67% de rendimiento). M+1: 262.

N-((1S)-1-Feniletil)-N-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-8-il)-2,2,2-trifluoroacetamida

Se disolvió ((1S)-1-feniletil)(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-8-il)amina (11,2g, 42,85 mmol) en diclorometano (135 mL) a temperatura ambiente. La solución se trató con piridina (3,81 mL, 47,14 mmol) y anhídrido trifluoroacético (7,15 mL, 51,42 mmol). La reacción se agitó durante el fin de semana a temperatura ambiente. Mediante LC-MS se determinó la finalización de la reacción. La reacción se lavó con cloruro de amonio saturado. Después de secarse sobre sulfato de sodio, los extractos orgánicos se concentraron hasta proporcionar un aceite amarillo. El producto bruto se utilizó sin purificación adicional.

N-((1S)-1-Feniletil)-2,2,2-trifIuoro-N-(4-oxociclohexil)acetamida

Se disolvió N-((1S)-1-feniletil)-N-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-8-il)-2,2,2-trifluoroacetamida (15,31 g, 42,84 mmol) en tetrahidrofurano (30 mL). La solución se trató con 30 mL de HCl acuoso 3,0N. La reacción se calentó hasta alcanzar 50-60ºC durante 48h. La reacción se enfrió hasta alcanzar temperatura ambiente. El THF se retiró a presión reducida. El producto bruto se extrajo con diclorometano y se purificó mediante columna de gel de sílice (eluyente 15-20% acetato de etilo en hexanos). El producto se aisló como un aceite amarillo (5,49 g, 41% de rendimiento) M+1: 314.

N-((1S)-1-Feniletil)-N-[4-(1,1-dimetil-1-silaetoxi)-4-cianociclohexil]-2 2,2-trifluoroacetamida

Se disolvió N-((1S)-1-feniletil)-2,2,2-trifuoro-N-(4-oxociclohexil)acetamida (3.8g, 12,13 mmol) en 30 mL de diclorometano. Se agregó ZnI2 (0,774g, 2,42 mmol) a la solución como un sólido a temperatura ambiente y después cloruro de trimetilsililo (3,25 mL, 24,25 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta alcanzar la temperatura de reflujo. La conversión se monitoreó mediante LC-MS. Después de 4h, el calentamiento se detuvo y el disolvente se retiró a presión reducida. Se agregaron 50 mL de éter dietílico seco. La suspensión turbia resultante se evaporó hasta secarse. El aceite anaranjado resultante se volvió a suspender en 100 mL de éter dietílico. Una pequeña cantidad de sólido blanco se retiró mediante filtración y se lavó con un pequeño volumen de éter dietílico. Los filtrados combinados se evaporaron hasta secarse y el residuo se mantuvo al alto vacío durante toda la noche. El producto se utilizó sin purificación adicional (5,64g). M+1: 413.

4-[N-((1S)-1-Feniletil)-2,2,2-trifluoroacetilamino]-1-hidroxiciclohexanocarboxamida Se suspendió N-((1S)-1-feniletil)-N-[4-(1,1-dimetil-1-silaetoxi)-4-cianociclohexil]-2,2,2-trifluoroacetamida (5,64 g, 13,67 mmol) en 15 mL de ácido clorhídrico concentrado. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 días, lo que resultó en la formación de una suspensión de color anaranjado oscuro. El sólido se recogió mediante filtración, se disolvió en 10 mL de metanol a temperatura moderada y lentamente se precipitó con agua. (Un sólido levemente de

5 color se separó de la solución anaranjada). El agua madre se recogió concentrada y se reprodujeron las condiciones de precipitación. Esta etapa de aislamiento proporcionó un total de 2,6 g de un sólido amarillo claro (53%) limpio mediante 1H y 19F NMR. M+1: 359.

Hidrocloruro de -cis-4-amino-1-hidroxiciclohexanocarboxilato de metilo

Se suspendió 4-[N-((1S)-1-feniletil)-2,2,2-trifluoroacetilamino]-1-hidroxiciclohexanocarboxamida (2,6 g, 725 mmol) en

10 30 mL de ácido clorhídrico concentrado y la mezcla de reacción se calentó hasta alcanzar 80ºC durante 6h (solución de color amarillo claro). La finalización de la reacción se evaluó mediante LC-MS. La mezcla de reacción se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se agregaron 40 mL de metanol. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 36 h. Se retiró metanol a presión reducida. Los subproductos orgánicos se retiraron mediante extracción en éter dietílico. La solución acuosa se concentró a presión reducida y el residuo se secó durante toda la noche. Se aisló

15 hidrocloruro de metil-cis-4-amino-1-hidroxiciclohexanocarboxilato como un sólido y se utilizó sin purificación adicional. (Rendimiento cuantitativo).

Ejemplo 5.33 Síntesis de ácido 1-hidroxi-4-{2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}ciclohexanocarboxílico

20 Se isolvió 1-hidroxi-4-{2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}ciclohexanocarboxilato de metilo (1,858 g, 3,858 mmol) en 27 mL de solución de ácido clorhídrico acuosa 4,0 N. La mezcla de reacción se calentó hasta alcanzar 60ºC durante 24 h. La mezcla después se concentró a presión reducida hasta proporcionar un aceite y se purificó mediante HPLC preparativa (20-80% acetonitrilo-agua, 0,1% TFA). El producto se aisló como un sólido blanco mediante filtración después de evaporar acetonitrilo de las fracciones combinadas y neutralizar con hidróxido

25 de amonio concentrado (1,325 g, 73% de rendimiento).

Ejemplo 5.34 Elemento base utilizado para la síntesis de N-ciclopentil(1-hidroxi-4-{2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}ciclohexil)carboxamida

Se disolvió ácido 1-hidroxi-4-{2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il)ciclohexanocarboxílico (0,200

30 g, 0,4 mmol) en 4 mL de THF seco. Se agregó ciclopentilamina (0,079 mL, 0,8 mmol) pura y después di-isopropilamina (0,105 mL, 0,6 mmol). Por último se agregó hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio (BOP), como un sólido en una porción a temperatura ambiente (0,177 g, 0,4 mmol). La reacción se completó en 10 min como se confirmó mediante LC-MS. Se retiró DMF a presión reducida. El residuo se trituró en bicarbonato de sodio acuoso saturado. El sólido beige resultante se recogió mediante filtración y se lavó con agua. El producto bruto se recristalizó a partir de metanol caliente-agua. Los cristales se secaron en un horno de vacío (141 mg, 66% de rendimiento) M+1:

532.

5 Ejemplo 5.35 Elemento base utilizado para la síntesis de 1-(hidroximetil)-4-{(2-[(metiletil)amino]-8-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}ciclohexan-1-ol

Se disolvió 1-hidroxi-4-(2-[(metiletil)amino]-g-[(2,4,6-trifluorofenil)amino]purin-9-il}ciclohexanocarboxilato de metilo (0,300 g, 0,6 mmol) en 3 mL de metanol seco. La solución se enfrió hasta alcanzar 0ºC antes de agregar borohidruro

10 de sodio sólido (0,300 g, 7,92 mmol). Después de 1h a baja temperatura, la reacción se entibió hasta alcanzar la TA y se agitó durante toda la noche. La reacción se aplacó con 5 mL de una solución saturada de cloruro de amonio. El producto bruto se extrajo con diclorometano (cuatro veces). El producto se purificó mediante cromatografía en columna (75% acetato de etilo en hexanos) y después HPLC semi-preparativa. Las fracciones se neutralizaron utilizando una columna con resina de intercambio. (0,101 g, 37% de rendimiento). M+1: 451.

15 Ejemplo 5.36 Elemento base utilizado para la síntesis de:

Síntesis de (3R}-3-aminobutanol

(3R)-3-{Bencil[(1R)-1-feniletilamino]butanoato de terc-butilo

20 Se agregó n-BuLi (29,5 mL, 47,3 mmol) mediante una cánula a una solución de (R)-(N-bencil)[N-(1-fenil)etil]amina (10,0 g, 47,3 mmol) en THF (75 mL) a 0ºC bajo N2. La reacción se agitó durante 20 minutos y a continuación se enfrió hasta alcanzar -78ºC. Se agregó crotonato de terc-butilo (3,5g, 24,6 mmol) disuelto en THF (30 mL) a la mezcla de reacción enfriada durante 20 minutos. Después de 75 minutos, la reacción se aplacó con NH4Cl saturado acuoso y después se agregó salmuera. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con

25 Et2O. Los productos orgánicos se combinaron, se secaron con MgSO4, se filtraron y concentraron hasta proporcionar un aceite bruto amarillo. El producto bruto se disolvió en hexanos (100 mL) y se lavó con solución acuosa de ácido cítrico al 10% (3 x 25 mL). Los productos orgánicos se juntaron, se secaron con MgSO4, se filtraron y condensaron para proporcionar 6,2 g (17,55 mmol, 37%) del compuesto del título.

(3R)-3-(bencil[(1R)-1-feniletil]amino}butanol Se disolvió (3R)-3-{bencil[(1R)-1-feniletil]amino)butanoato de terc-butilo (6,2 g, 17,6 mmol) en THF (100 mL). El matraz de 1L se purgó con N2 y se enfrió hasta alcanzar 0ºC. Se agregó lentamente hidruro de aluminio y litio (2,7 g, 69,8 mmol) durante 5 minutos. La reacción se dejó agitar a 0ºC durante 1 hora y después se calentó hasta alcanzar 60ºC durante 1 hora. La reacción se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se diluyó con Et2O (500 mL). Esta

5 solución se aplacó con una mezcla de celite:Na2SO4 10 H2O (1:1) agregada durante 15 minutos. La solución después se filtró y el agua madre se condensó para proporcionar 3,9g (13,8 mmol, 78%) del compuesto del título.

(3R)-3-Aminobutanol

Se disolvió (3R)-3-[bencil[(1R)-1-feniletil]amino}butanol (3,9g, 13,8 mmol) en metanol (60 mL). Se agregó catalizador de Pearlman a la reacción y a continuación se presurizó a 30 psi con H2 en un agitador Parr. Después de 24 horas, 10 la reacción se filtró a través de celite y se lavó adicionalmente con metanol (150 mL). Esta mezcla se condensó para proporcionar 1,2 g (13,4 mmol) del producto del título.

Ejemplo 5.37 Elemento base utilizado para la síntesis de:

15 Síntesis de trans-4-amino-1-metilciclohexanol

trans-4-Dibencilaminociclohexanol

A una solución de trans-4-aminociclohexanol (7,90 g., 68,5 mmol) en acetonitrilo (150 mL) se agregó carbonato de cesio (51,4 g., 157,5 mmol) y bromuro de bencilo (18,2 g., 143,8 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente

20 durante 16 horas. La solución se completó según la LC-MS y la mezcla se filtró a través una frita, se lavó con acetonitrilo adicional y se condensó a presión reducida. El sólido se dividió entre agua y diclorometano (500 mL) y se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y el disolvente se retiró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (17,14 g, 85%). ES-MS (m/z) 296,5 [M+1]+.

trans-4-Dibencilaminociclohexanona

25 Se enfrió cloruro de oxalilo (12,89 g., 101,1 mmol) en diclorometano (200 mL) hasta alcanzar -78ºC. Se agregó DMSO (14,5mL) en diclorometano (25 mL) mediante embudo de adición lentamente durante 10 minutos hasta que se detuvo el burbujeo. Después se agregó lentamente trans-4-dibencilaminociclohexanol (17,14 g., 58,10 mmol) en diclorometano (150 mL). Después de 30 minutos, se agregó trietilamina (56 mL) por goteo y después la solución se agitó a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó mediante TLC para asegurar que el material de partida se

30 hubiera consumido. Posteriormente, la solución se condensó a presión reducida y se dividió entre agua y acetato de etilo. Los productos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El aceite resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (30% acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el compuesto del título (13,71 g., 81%). ES-MS (m/z) 294 [M+l]\

trans-4-Dibencilamino-1-metilciclohexanol:

35 A una solución de trans-4-dibencilaminociclexanona (1,40 g, 4,77 mmol) en THF a 0ºC (40 mL) se agregó una solución de bromuro de metilmagnesio 3,0 M en THF (6,36 mL, 19,1 mmol) por goteo. La solución se dejó entibiar hasta alcanzar la temperatura ambiente y se dejó agitar durante 16 horas. La solución se aplacó con solución de cloruro de amonio saturado y se dividió entre agua y acetato de etilo (tres veces). Los productos orgánicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se retiró a presión reducida. El aceite resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (15% acetato de etilo/hexanos) para proporcionar el compuesto del título (2,21 g, 17%). ES-MS (m/z) 310,6 [M+1]+.

trans-4-Amino-1-metilciclohexanol:

A una solución de trans-4-dibencilamino-1-metilciclohexanol (2,21 g, 7,15 mmol) en etanol (50 mL) se agregó hidróxido de paladio (0,663 g, 30% en peso). La solución se enjuagó con gas hidrógeno reciente y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas. Se confirmó que se consumió el material de partida mediante LC-MS. La solución se filtró a través de celite y se lavó con acetato de etilo adicional. El filtrado se condensó a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (cuantitativo). ES-MS (m/z) 130,4 [M+1]+.

Ejemplo 5.38 Acoplamiento de amida

Las reacciones de acoplamiento de amida como se describen anteriormente pueden lograrse mediante los Métodos A-C descritos a continuación.

Método A: HATU

Se disolvieron 0,164g (0,30 mmol) de A en 5ml de DMF y se agregaron 0,140g (1,2 eq.) de HATU en un lote. La

15 reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 0,5h bajo una atmósfera nitrógeno, se agregaron 0,040 g (1,2 eq.) de N-metilpiperazina y se continuó agitando durante toda la noche. La mezcla de reacción se purificó utilizando cromatografía preparativa con un gradiente de 15-40% acetonitrilo/agua (0,1% TFA). Después de analizar las fracciones mediante TLC, las fracciones puras se combinaron y concentraron hasta proporcionar la sal TFA. El TFA se intercambió utilizando HCI 1N y se extrajo (10x10 ml) utilizando éter. Después de la neutralización de la capa

20 acuosa, la fase libre se precipitó y se recogió y se secó para proporcionar 0,020g de B en 10% de rendimiento.

Método B: HATU/HBTU

Se trató una solución de A (1 mmol) en 10ml de DMF (0,1 M) con 1,2 eq. de HATU o HBTU (1,2 mmol) y se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante aproximadamente 0,5 h y se agregaron 1,2 eq de N-metilpiperazina (1,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Después

25 de concentrarse, la mezcla de reacción se purificó utilizando cromatografía preparativa. Las fracciones limpias se combinaron y concentraron hasta proporcionar la sal TFA. La TFA se intercambió utilizando HCI 1N y la TFA se extrajo con éter. Finalmente, la sal HCl se obtuvo después de la concentración de la capa acuosa.

Método C: HOBT/EDCI

Una solución de A (1 mmol) en 10ml de DMF (0,1 M) se trató con 2,0 eq. de HOBT (2,0mmol), 2,4 eq de EDCI

30 (2,4mmol), 2,4 eq de N-metilpiperazina (2,4mmol) y se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante toda la noche. Después de concentrarse, la mezcla de reacción se purificó utilizando cromatografía preparativa. Las fracciones limpias se combinaron y concentraron hasta proporcionar la sal TFA. El TFA se intercambió utilizando HCl 1N y se extrajo con éter. Finalmente, la sal HCl se obtuvo después de la concentración de la capa acuosa.

35 Ciertos intermediarios y reactivos útiles en la preparación de los compuestos de aminopurina pueden prepararse como se describe en los Ejemplos 5.15 a 5.29.

Ejemplo 5.39 Anilinas con deficiencia de electrones El ccmpuesto de cloropirimidina se disuelve en ácido acético y se agrega la correspondiente anilina. La reacción se agita durante toda la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua a la mezcla de reacción hasta que se forma un precipitado. El precipitado se retiró por filtración y se secó al alto vacío.

5 Ejemplo 5.40 Acilación/mesilación/cloroformilación de aminas

Se suspende una amina en cloruro de metileno y se agrega trietilamina. La mezcla se agita a temperatura ambiente hasta obtener una solución clara. Se agrega el correspondiente cloruro de arilo, cloruro de metanosulfonilo o cloroformiato de metilo y la mezcla de reacción se agita durante aproximadamente 2 h. Normalmente se obtienen los compuestos mono y diacilados. El producto monoacilado deseado se obtiene en forma pura después de la purificación

10 utilizando HPLC semi-preparativa.

Ejemplo 5.41 Hidrocloruro de cis-etil-4-aminociclohexanocarboxilato

Se agregaron 19,3 mL de ácido clorhídrico concentrado (2,8 eq) a una solución de ácido cis-4-aminociclohexano carboxílico (10 g, 69,93 mmol) en alcohol etílico anhidro (250 mL). La mezcla se agitó durante toda la noche a

15 aproximadamente 60ºC y después se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente. El disolvente se evaporó al vacío. El material bruto después se volvió a disolver en acetonitrilo, se sonicó y se concentró hasta proporcionar un sólido al vacío. Este lavado con acetonitrilo se repitió tres veces para obtener 11,5 g de un sólido blanco (96% de rendimiento). Puede prepararse hidrocloruro de 4-aminociclohexanocarboxilato de trans-etilo siguiendo el mismo procedimiento utilizando ácido trans-4-aminociclohexano carboxílico.

20 Ejemplo 5.42 Hidrólisis de éster (condiciones básicas)

El éster apropiado se agrega a una solución de 10 equivalentes de LiOH en THF/H2O 1:1. Gradualmente, la mezcla de reacción se calienta hasta alcanzar aproximadamente 60ºC y se agita durante toda la noche. Después de aproximadamente 12 h, la presencia del compuesto deseado se verifica mediante LCMS. La mezcla de reacción se concentra y se agrega HCl 1N por goteo. La capa acuosas se extraen con 2-butanona (3 x 100 ml) y se secan con

25 MgSO4. Después de retirar por filtración el MgSO4, el compuesto se concentra a presión reducida y se purifica utilizando cromatografía en columna o HPLC de fase inversa.

Ejemplo 5.43 Hidrólisis de éster (condiciones ácidas)

Se disuelve éster etílico de ácido carboxílico en ácido clorhídrico 2N. La solución resultante se calienta hasta alcanzar aproximadamente 75ºC y se agita durante aproximadamente tres horas. Después de enfriar hasta alcanzar la

30 temperatura ambiente, se agrega exceso de hidróxido de amonio acuoso y el disolvente se evapora a presión reducida. La trituración del residuo con etanol, y la posterior filtración, proporciona el correspondiente ácido carboxílico.

Ejemplo 5.44 Formación de carboxamida

Se agrega cloruro de oxalilo, bajo una atmósfera de N2 (g), por goteo a una solución del ácido carboxílico apropiado en

35 DCM. Luego se agrega DMF a la solución y se observa un burbujeo. Después de aproximadamente 6h, la mezcla de reacción se concentra a presión reducida y se agregan DCM y NH4OH (conc). La mezcla de reacción se agita durante aproximadamente 4 h adicionales antes de concentrarse y se purifica mediante HPLC de fase inversa preparativa (20-80% acetonitrilo/agua (0,1% TFA)).

Ejemplo 5.45 trans-(4-Aminociclohexil)metan-1-ol Se agregó hidrocloruro de ácido trans-4-aminociclohexano carboxílico (2,00g, 14,3 mmol) en pequeñas porciones a una solución agitada caliente (70-85ºC) de Red-Al (27,0 g) durante 2 h (se formó un semisólido) y se continuó calentando durante toda la noche. Después de 24 h, la mezcla de reacción se enfrió hasta alcanzar la temperatura

5 ambiente y se trató con una solución de NaOH (3,8 g) en H2O (34 ml). Después de la adición, la reacción gradualmente se calentó hasta alcanzar 80ºC y se enfrió. La capa de tolueno se separó y la capa acuosa se extrajo con CHCl3 (3 x 100 ml). Las capas orgánicas se secaron con MgSO4 y después se concentraron a presión reducida para proporcionar el compuesto deseado (1,81 g, 14,0 mmol) como un sólido blanco puro en 50% de rendimiento. ES-MS: 130 (M+1).

10 Ejemplo 5.46 trans-2-(4-Aminociclohexil)propan-2-ol

4-[N,N-Dibencilamino]ciclohexanocarboxilato de trans-fenilmetilo

A una mezcla calentada a 80ºC de ácido trans-4-aminociclohexanocarboxílico (8g, 55,97 mmol) y K2CO3 (23,48) en 112 mL de CH3CN, se agregó por goteo una solución de BnBr (23,3 mL, 195,5 mmol) en 70 mL de CH3CN mediante 15 embudo de adición. La reacción se agitó durante toda la noche a 80ºC. La reacción se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se filtró. El precipitado no se formó en el filtrado como lo hizo con el isómero cis de manera que el filtrado se concentró hasta proporcionar un aceite y se procedió a la siguiente etapa (23,01 g, 99% de rendimiento).

trans-2-{4-[N,N-Dibisbencilamino]ciclohexil}propan-2-ol

Se combinó 4-[bisbencilamino]ciclohexanocarboxilato de fenilmetilo (6 g, 14,50 mmol) con 460 mL de THF, se enjuagó

20 con N2 y se enfrió hasta alcanzar 0ºC. Se agregó bromuro de metilmagnesio (48 ml, 145,08 mmol) a la reacción y se dejó agitar durante toda la noche. La reacción se aplacó con 600 mL de NH4Cl saturado. Las capas se separaron y los productos orgánicos se lavaron con NaHCO3 saturado y salmuera (100 mL). Los productos orgánicos se secaron con Na2SO4 y se concentraron al vacío. La mezcla se secó durante toda la noche al alto vacío para proporcionar 3,89g de un producto sólido (80% de rendimiento).

25 trans-2-(4-Aminociclohexil)propan-2-ol

Se combinaron 3,85 g de trans-2-{4-[N,N-dibencilamino]ciclohexil]propan-2-oI (11,40 mmol) con 3,3 g de 20%p de hidróxido de paladio y se disolvieron con 100 mL de alcohol etílico anhidro. La mezcla se enjuagó con H2 (4X) antes de que se insertara un balón de H2 a la reacción y se dejó agitar durante toda la noche. Se burbujeó N2 durante aproximadamente 20 minutos y el catalizador se retiró por filtración. La reacción se lavó con metanol. El filtrado se

30 concentró al vacío y se volvió a disolver en acetonitrilo y se sonicó lo que produjo un sólido blanco. La mezcla se filtró y se obtuvieron 0,67 g de un producto blanco (37% de rendimiento).

Ejemplo 5.47 trans-4-(N N-Dibencilamino)ciclohexanol

En un matraz de fondo redondo de 1L equipado con agitación magnética, entrada de nitrógeno y embudo de goteo se cargó hidrocloruro de trans-4-aminociclohexanol (50,0 g, 0,33 mol), carbonato de sodio (139,9 g, 1,32 mol) y DMF

35 anhidra (400 mL). Se inició la agitación y se agregó bromuro de bencilo (82,3 mL, 0,69 mol) mediante embudo de goteo durante un período de aproximadamente 15 minutos. Se observó una exotermia leve después de la adición de bromuro de bencilo. La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante aproximadamente 18 h, después se tomó una muestra para análisis mediante LCMS. La LCMS indicó la conversión completa del material de partida en este momento.

40 La mezcla de reacción se filtró a través de una frita media al vacío para retirar las sales y el filtrado se diluyó con agua (400 mL) y MTBE (400 mL). La mezcla se agitó en un embudo separador y después se escurrió la capa acuosa inferior. La capa orgánica se decantó, después la capa acuosa se extrajo con MTBE (200 mL). Se combinaron las capas orgánicas y se extrajeron dos veces con agua (300 mL), después se extrajeron con salmuera saturada (100 mL). La capa orgánica se secó (sulfato de sodio), se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar un sólido

45 blanco. El sólido se secó adicionalmente a 50ºC al vacío. Al sólido seco se agregó ciclohexano (400 mL) y la mezcla se agitó en un baño de agua a 80o C hasta que la mayoría de los sólidos estuvieron en solución. La solución se filtró

rápidamente utilizando celite y un embudo con frita al vacío. La suspensión resultante se calentó hasta alcanzar la ebullición para volver a disolver los sólidos y se agitó mientras se enfriaba lentamente. Los cristales blancos finos se filtraron en una frita, después se lavaron con dos porciones de ciclohexano (50 mL). Los cristales después se secaron durante aproximadamente 18 h a 60o C al vacío para proporcionar 58,4g (60%) de material puro. LRMS (ES) m/e 296,2 [MH]+; HPLC (5→70% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 20 minutos) TR = 9,55 min.

Ejemplo 5.48 trans-N,N-Dibencil-4-(2-(piperidin-1-il etoxi)ciclohexanamina

En un matraz de fondo redondo de 250 mL enjuagado con nitrógeno se cargó una suspensión de hidruro de potasio al 35% en aceite (16,27 g, 142 mmol) y hexanos (60 mL). La mezcla se agitó brevemente, después se dejó asentar. El sobrenadante se retiró mediante una jeringa, después se agregaron trans-4-(dibencilamino)ciclohexanol (10,0 g, 33,9 mmol), hidrocloruro de 1-(2-cloroetil)piperidina (18,72 g, 101,7 mmol) y dioxano (120 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. La mezcla de reacción tendió a espesarse. Una vez que se detuvo el desprendimiento de hidrógeno la mezcla se llevó hasta 90-100ºC durante aproximadamente 2 h, después se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente. Se agregó metanol (20 mL) y la mezcla se agitó hasta que se detuvo el desprendimiento de hidrógeno. Los disolventes se evaporaron a presión reducida y el residuo se dividió entre solución de carbonato de sodio al 5% (100 mL) y diclorometano (200 mL) Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (100 mL). Los extractos orgánicos se combinaron y se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se cromatografió (gel de sílice, 330 g, utilizando un gradiente de cloroformo-etanol-solución de amoníaco concentrado (98:2:0) a (92:8:2)) para proporcionar 4,7 g de un aceite (61%). LRMS (ES) m/e 407,3 [MH]+; HPLC (5→70% acetonitrilo/agua (0,1% TFA) durante 20 minutos) TR = 9,23 min.

Ejemplo 5.49 trans-4-(2-(Piperidin-1-il)etoxi)ciclohexanamina

Se cargaron trans-N,N-dibencil-4-(2-(piperidin-1-il)etoxi)ciclohexanamina (4,7 g, 11,6 mmol), 20% Pd(OH)2/C (0,94 g) y metanol (40 mL) en un matraz sellado con septo. La mezcla de reacción se colocó bajo presión de balón de hidrógeno durante 18 h a temperatura ambiente, momento en el cual la LCMS indicó la desbencilación completa para formar la amina libre. El catalizador se retiró mediante filtración y el filtrado se evaporó a presión reducida para proporcionar 2,42 g de un material cristalino (93%). En algunos casos fue necesaria una porción adicional de catalizador (50% aprox. de la carga inicial) para completar la reacción. LRMS (ES) m/e 227,2 [MH]+;1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 3,51 (t, 2H), 3,12 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 2,42 (t, 2H), 2,18 (m, 4H), 1,93 (m, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,50 (m, 4H),1,33 (m, 2H), 1,12 (m, 4H).

Ejemplo 5.50 Hidrocloruro de 1-metilsulfonilpirrolidin-3S-amina

Se disolvió (3S)-3-(terc-butilcarbonilamino)pirrolidina (10,0 mmol, 1eq.) y N,N-diisopropiletilamina (25,0 mmol, 2,5 eq.) en 20 ml de DCM. Se agregó por goteo metanosulfonilcloruro (10,0 mmol, 1 eq.) y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a TA. Después de agregar agua las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se evaporó para proporcionar el producto deseado. Este compuesto se disolvió en 12 ml de dioxano y se agregaron 23 ml de HCI 4N en dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. La evaporación del disolvente y la coevaporación adicional con tolueno proporcionaron el producto deseado. Esta reacción también puede llevarse a cabo con el enantiómero R.

Ejemplo 5.51 cis-4-[(2-piperidiIetoxi)metil]ciclohexilamina

cis-4-[N,N-Dibencilamino]ciclohexano carboxilato de bencilo

Se disolvió ácido cis-4-aminociclohexanocarboxílico (10,0 g, 67,48 mmol) en 140 mL de acetonitrilo seco. Se agregó carbonato de potasio sólido (28,0g, 202,6 mmol). La suspensión se calentó hasta alcanzar aproximadamente 80ºC. A esta solución se agregó bromuro de bencilo (28,09 mL, 236,2 mmol) en 70 mL de acetonitrilo por goteo mediante un embudo de adición. La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 80ºC bajo nitrógeno durante aproximadamente 2 horas y después a aproximadamente 40ºC durante toda la noche. La reacción se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se filtró la suspensión. El filtrado se concentró a presión reducida. El compuesto se purificó utilizando cromatografía en columna sobre gel de sílice (100% de hexanos para retirar el exceso de bromuro de bencilo, después acetato de etilo al 10% en hexanos). El producto se aisló como un sólido blanco (14,35 g, 51% de

5 rendimiento) : ES-MS (m/z) 414.

cis-{4-[N,N-Dibencilamino]ciclohexil]metan-1-ol

Se preparó una solución de cis-4-[N,N-dibencilamino]ciclohexano carboxilato de bencilo (14,35g, 34,70 mmol) en THF seco (180 mL) y después se enfrió hasta alcanzar -78ºC. Se agregó por goteo una solución de hidruro de aluminio y litio (104,0 mL, solución 1,0 M en éter dietílico). Al final de la adición, la temperatura de reacción aumentó hasta 10 alcanzar aproximadamente -50ºC (acetonitrilo/hielo seco) y la temperatura se mantuvo durante aproximadamente 3 horas. La finalización de la reacción se monitoreó mediante LC-MS. La reacción se aplacó mediante adición por goteo de sulfato de sodio saturado acuoso. Luego se agregaron bicarbonato de sodio acuoso saturado (10 mL) y éter dietílico (50 mL). Se formó un sólido blanco y se retiró mediante filtración y se lavó con THF. La fase orgánica se separó y se concentró a presión reducida. El producto se purificó mediante precipitación lenta. El residuo se disolvió

15 en 5 mL de éter dietílico y la solución se dividió en capas con 50 mL de hexanos. Se obtuvieron cristales grandes claros después de difusión durante toda la noche. (7,279g, 67% de rendimiento) ES-MS (m/z) 310.

cis-N,N-Dibencil-N-{4-[(2-piperidiletoxi)metil]ciclohexil}amina

Se suspendieron cis-{4-[N,N-dibencilamino]ciclohexil}metan-1-ol (2,851g, 9,21 mmol) e hidrocloruro de (2-cloroetil)piperidina en 50 mL de dioxano. Se agregó por goteo hidruro de potasio (3,16g, 35% en peso en aceite 20 mineral) en suspensión en 20 mL de dioxano. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. La mezcla de reacción después se entibió hasta alcanzar aproximadamente 70ºC y se agregó por goteo un equivalente de hidruro de potasio (1,05g, 35% en peso en aceite mineral). La temperatura se mantuvo durante aproximadamente 2 horas, después de lo cual se completó la conversión. La reacción se enfrió hasta alcanzar la temperatura ambiente y se aplacó con metanol. Los disolventes se retiraron a presión reducida. Se agregó

25 acetonitrilo (200 mL) y el sólido marrón grisáceo se retiró mediante filtración. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 3% (etanol/hidróxido de amonio = 8:1) en diclorometano. El producto se aisló como un aceite naranja que se solidificó al vacío. (2,84g, 72% de rendimiento): ES-MS (m/z) 421.

cis-4-[(2-Piperidiletoxi)metil]ciclohexilamina

Se disolvió cis-N,N-dibencil-N-{4-[(2-piperidiletoxi)metil]ciclohexil}amina (2,84g, 6,65 mmoI) en 20 mL de etanol. Se

30 agregó hidróxido de paladio (20% en peso) (50 mg) y la reacción se agitó durante toda la noche bajo una atmósfera de hidrógeno. El catalizador se retiró mediante filtración y se lavó con pequeñas porciones de etanol. El filtrado se concentró y se utilizó sin purificación adicional. (Rendimiento cuantitativo): ES-MS (m/z) 241.

Ejemplo 5.52 cis-4-(Metoximetil)ciclohexilamina

35 Ácido cis-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]ciclohexano carboxílico

Se disolvió ácido cis-4-aminociclohexil carboxílico (2,0g, 13,96 mmol) en 40 mL de 1,4-dioxano. Se agregaron dos equivalentes de di-terc-butil-dicarbonato (6,094g, 27,92 mmol) y después 3 equivalentes de bicarbonato de sodio (4,06g, 41,88 mmol) disueltos en 40 mL de agua. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 12 horas. La finalización de la reacción se monitoreó mediante LC-MS. Se agregó por goteo KHSO4

40 saturado acuoso hasta que se detuvo el desprendimiento de gas. El disolvente después se retiró a presión reducida y el producto bruto se extrajo en acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con KHSO4 saturado acuoso y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se retiró a presión reducida, lo que proporcionó 2,6 g del producto. Según indicó la 1H NMR, el producto era puro y se utilizó en las siguientes etapas sin purificación adicional ES-MS (m/z) 244.

45 cis-(terc-Butoxi)-N-[4-(hidroximetil)ciclohexil]carboxamida

Se disolvió ácido cis-4-[(terc-butoxi)carbonilamino]ciclohexano carboxílico (2,68, 10,68 mmol) en THF (20 mL) y se enfrió hasta alcanzar -10ºC (MeOH-hielo). Se agregó N-metilmorfolina y después cloroformiato de isobutilo (1,175mL, 10,68 mmol). Después de 10 min, se agregó NaBH4 como un sólido en una porción (1,213g, 32,06 mmol). La mezcla de reacción se entibió hasta alcanzar 0ºC y se agregó metanol por goteo (13,35 mL). Después de 30 min, la reacción se aplacó con KHSO4 acuoso al 5%. Se completó la reacción monitoreada mediante LC-MS. El producto bruto se extrajo con acetato de etilo y los extractos combinados se secaron sobre Na2SO4. Se obtuvo un aceite incoloro y se

5 solidificó lentamente a temperatura ambiente. El producto y su pureza se evaluaron mediante LC-MS y 1H-NMR. No fue necesaria la purificación adicional. (Rendimiento cuantitativo) ES-MS (m/z) 230.

cis-4-(Metoximetil)ciclohexil amina

Se lavó tres veces hidruro de sodio (72 mg, 1,78 mmol, 60% en peso suspendido en aceite mineral) con porciones de 10 mL de hexanos y se suspendió en THF seco (12 mL). La suspensión se enfrió hasta alcanzar 0ºC. A esta 10 suspensión, se agregaron cis-(terc-butoxi)-N-[4-(hidroximetil)ciclohexil]carboxamida (0,2738, 1,20 mmol) y 15-corona-5 (0,250 mL, 1,25 mmol). Después la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante aproximadamente 30 min. Posteriormente se agregó por goteo yoduro de metilo (75 μL, 1,20 mmol). Dado que la reacción no se completó después de agitar durante toda la noche a temperatura ambiente, la mezcla se enfrió hasta alcanzar 0ºC y se hizo reaccionar con 100 mg de hidruro de sodio y 0,250 mL de 15-corona-5. La reacción se aplacó mediante adición lenta 15 de agua y el producto bruto se extrajo con acetato de etilo. La purificación se efectuó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 20% acetato de etilo en hexanos como el eluyente. ES-MS (m/z) 244. Se disolvió cis-(terc-butoxi)-N-[4-(metoximetil)ciclohexil]carboxamida en etanol (5 mL) y la solución se trató con 1 mL de cloruro de acetilo a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se retiró a presión reducida y el sólido resultante se utilizó sin purificación adicional. (79% de rendimiento)

20 ES-MS (m/z) 144.

Ejemplo 5.53 trans-4-Metoxiciclohexilamina

trans-(terc-Butoxi)-N-(4-metoxiciclohexil)carboxamida

Se suspendió hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 278 mg, 6,96 mmol) en THF (5 mL) y se enfrió hasta alcanzar

25 0ºC. Se agregaron trans-terc-butoxi-N-(4-hidroxiciclohexil)carboxamida (1 g, 4,64 mmol) y 15-corona-5 (0,965 mL, 4,88 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante aproximadamente 30 minutos. Se agregó yodometano (0,289 mL, 4,64 mmol) y la reacción se agitó a 0ºC durante aproximadamente 1 hora, después de lo cual la LCMS indicó que se había completado. La reacción se aplacó con metanol, los disolventes se retiraron al vacío y el producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, 8:2 n-hexanos/ acetato de etilo) para proporcionar 642 mg

30 del éter metílico. ES-MS: 230 (M+1).

trans-4-Metoxiciclohexilamina

Se disolvió trans-(terc-butoxi)-N-(4-metoxiciclohexil)carboxamida (642 mg, 2,80 mmol) en etanol (5 mL) y se enfrió hasta alcanzar 0ºC. Se agregó cloruro de acetilo (1,5 mL) y la reacción se dejó alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. El disolvente se retiró al vacío para proporcionar el producto deseado (458 mg,

35 rendimiento cuantitativo) como una sal hidrocloruro. ES-MS: 130 (M+1).

Los compuestos de aminopurina pueden ensayarse para evaluar su actividad de acuerdo con los siguientes procedimientos.

Ensayo de JNK1

A 10 !L de un compuesto de aminopurina en tampón de dilución de 20% DMSO/80% que consistía en HEPES 20

40 mM (pH 7,6), EDTA 0,1 mM, cloruro de magnesio 2,5 mM, 0,004% Triton x 100, 2 !g/mL de leupeptina, β-glicerolfosfato 20 mM, vanadato de sodio 0,1 mM y DTT 2 mM en agua se agregan 30 !L de 50 ng His6-JNK1 en el mismo tampón de dilución. La mezcla se incuba previamente durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregan 60 microlitros de 10 !g GST-c-Jun(1-79) en tampón de ensayo que consiste en HEPES 20 mM (pH 7,6), cloruro de sodio 50 mM, EDTA 0,1 mM, cloruro de magnesio 24 mM, DTT 1 mM, PNPP 25 mM, 0,05% Triton x100,

45 ATP 11 !M y 0,5 !Ci γ-32P ATP en agua y se deja que la reacción se lleve a cabo durante 1 hora a temperatura ambiente. La fosforilación de c-Jun se interrumpe mediante la adición de 150 !L de ácido tricloroacético al 12,5%. Después de 30 minutos, el precipitado se cosecha en una placa de filtración, se diluye con 50 !L de fluido de centelleo y se cuantifica mediante un contador. Los valores de CI50 se calculan como la concentración del compuesto de aminopurina a la que la fosforilación de c-Jun se reduce al 50% del valor testigo. Algunos compuestos tienen un valor de CI50 en el intervalo de 0,01 - 10 !M en este ensayo.

Ensayo de JNK2

A 10 !L de un compuesto de aminopurina en tampón de dilución de 20% DMSO/80% que consistía en HEPES 20 mM (pH 7,6), EDTA 0,1 mM, cloruro de magnesio 2,5 mM, 0,004% Triton x 100, 2 !g/mL de leupeptina, β-glicerolfosfato 20 mM, vanadato de sodio 0,1 mM y DTT 2 mM en agua se agregan 30 !L de 50 ng His6-JNK2 en el mismo tampón de dilución. La mezcla se incuba previamente durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregan 60 microlitros de 10 !g GST-c-Jun(1-79) en tampón de ensayo que consiste en HEPES 20 mM (pH 7,6), cloruro de sodio 50 mM, EDTA 0,1 mM, cloruro de magnesio 24 mM, DTT 1 mM, PNPP 25 mM, 0,05% Triton x100, ATP 11 !M y 0,5 !Ci γ-32P ATP en agua y se deja que la reacción se lleve a cabo durante 1 hora a temperatura ambiente. La fosforilación de c-Jun se interrumpe mediante la adición de 150 !L de ácido tricloroacético al 12,5%. Después de 30 minutos, el precipitado se cosecha en una placa de filtración, se diluye con 50 !L de fluido de centelleo y se cuantifica mediante un contador. Los valores de CI50 se calculan como la concentración del compuesto de aminopurina a la que la fosforilación de c-Jun se reduce al 50% del valor testigo. Algunos compuestos tienen un valor de CI50 en el intervalo de 0,01 - 10 !M en este ensayo.

Ensayo de JNK3

A 10 !L de un compuesto de aminopurina en tampón de dilución de 20% DMSO/80% que consistía en HEPES 20 mM (pH 7,6), EDTA 0,1 mM, cloruro de magnesio 2,5 mM, 0,004% Triton x 100, 2 !g/mL de leupeptina, β-glicerolfosfato 20 mM, vanadato de sodio 0,1 mM y DTT 2 mM en agua se agregan 30 !L de 200 ng His6-JNK3 en el mismo tampón de dilución. La mezcla se incuba previamente durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregan 60 microlitros de 10 !g GST-c-Jun(1-79) en tampón de ensayo que consiste en HEPES 20 mM (pH 7,6), cloruro de sodio 50 mM, EDTA 0,1 mM, cloruro de magnesio 24 mM, DTT 1 mM, PNPP 25 mM, 0,05% Triton x100, ATP 11 !M y 0,5 !Ci γ-32P ATP en agua y se deja que la reacción se lleve a cabo durante 1 hora a temperatura ambiente. La fosforilación de c-Jun se interrumpe mediante la adición de 150 !L de ácido tricloroacético al 12,5%. Después de 30 minutos, el precipitado se cosecha en una placa de filtración, se diluye con 50 !L de fluido de centelleo y se cuantifica mediante un contador. Los valores de CI50 se calculan como la concentración del compuesto de aminopurina a la que la fosforilación de c-Jun se reduce al 50% del valor testigo. Algunos compuestos tienen un valor de CI50 en el intervalo de 0,01 - 10 !M en este ensayo.

Ensayo de p38∀

El ensayo de quinasa p38∀ se lleva a cabo en formato de placa de 96 pocillos con un volumen final de 100 !l. Se utiliza ATP a una concentración final de 340 !M, es decir, el triple del valor aparente de Km. La quinasa se diluye en tampón de dilución (HEPES 20 mM pH 7,6, EDTA 0,1 mM, MgCl2 2,5 mM, 0,004% (p/v) Triton X100, 2 !g/ml Leupeptina, 20 mM de B-glicerol fosfato, Na3VO4 0,1 mM, ditiotreitol 2 mM) y se mezcla previamente con MBP diluida en tampón de solución de sustrato (HEPES 20 mM pH 7,6, NaCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, MgCl2 2,5 mM, 0,05% (p/v) Triton X100) para proporcionar concentraciones finales de ensayo de 50 ng/pocillo (7,8 nM) para p38∀ y 30 !g/pocillo (16!M, 2X Km,) para MBP. La mezcla p38∀/MBP (85 !l) se agrega a un compuesto de aminopurina (5 !l) diluido en DMSO al 100% para proporcionar una concentración de ensayo de DMSO de 5% (v/v). Se deja que la enzima, el sustrato y el compuesto de aminopurina se equilibren a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos. La reacción se inicia con la adición de 10 !l 10X ATP en tampón de quinasa (MgCl2 130 mM, ditiotreitol 6 mM, para-nitrofenilfosfato 150 mM, 100 !Ci/ml γ-[33P]-ATP). Se deja que las reacciones se desarrollen durante 60 minutos antes de la precipitación de la proteína mediante ácido tricloroacético (7,2% de TCA final). Después de una incubación de 30 minutos con TCA, los productos de la reacción se recogen en placas de microfiltración de vidrio de 96 pocillos (Millipore MAHF CIH60) utilizando un Packard Filtermate. El precipitado se lava con solución salina tamponada con fosfato y la cantidad de fosfato incorporado a la MBP se cuantifica mediante conteo de centelleo utilizando un Packard Topcount-NXT.

Ensayo de producción de IL-2 en células T Jurkat

Se compran células T Jurkat (clon E6-1) en la American Tissue Culture Collection y se mantienen en medios de cultivo que consisten en medio RPMI 1640 que contiene L-glutamina 2 mM (Mediatech), con suero fetal bovino al 10% (Hyclone) y penicilina/estreptomicina. Todas las células se cultivan a 37ºC en 95% de aire y 5% de CO2. Las células se colocan en placas a una densidad de 0,2 x 106 células por pocillo en 200 μL de medio. El stock de compuesto de aminopurina (20 mM) se diluye en medio de cultivo y se agrega a cada pocillo como solución concentrada 10x en un volumen de 25 !L, mezclada, y se deja incubar previamente con células durante 30 minutos. El vehículo de compuesto (dimetilsulfóxido) se mantiene a una concentración final de 0,5% en todas las muestras. Después de 30 minutos, las células se activan con PMA (acetato de forbol miristato; concentración final de 50 !g/mL) y PHA (fitohemaglutinina; concentración final de 2 !g/mL). El PMA y la PHA se agregan como una solución concentrada 10x hecha en medio de cultivo y se agregan en un volumen de 25 !L por pocillo. Las placas celulares se cultivan durante 10 horas. Las células se reducen a un sedimento mediante centrifugación y el medio se retira y almacena a -20ºC. Se analizan alícuotas del medio mediante ELISA sándwich para verificar la presencia de IL-2 según las instrucciones del fabricante (Endogen). Los valores de CI50 se calculan como la concentración del compuesto de aminopurina en la que la producción de IL-2 se reduce al 50% del valor testigo. Algunos compuestos tienen un valor de CI50 en el intervalo de 0,01 - 10 !M en este ensayo.

Ensayo de producción de TNF-∀ inducida por LPS in vivo en ratas

Se permite que ratas CD macho de 7 semanas de edad obtenidas en Charles River Laboratories se aclimaten durante una semana antes de utilizarlas. Se coloca una cánula percutáneamente en una vena lateral de la cola con un catéter sobre aguja calibre 22 bajo el efecto de una breve anestesia con isoflurano. Se administra a las ratas un compuesto de aminopurina ya sea mediante inyección intravenosa o a través del catéter de la vena de la cola o por alimentación oral forzada 15 a 180 min antes de la inyección de 0,05 mg/kg de LPS (E. Coli 055:BS). Los catéteres se lavan con 2,5 mg/kg de solución salina normal inyectable. Se recoge sangre mediante punción cardíaca 90 minutos después de la infección con LPS. Se prepara plasma utilizando tubos de separación de heparina de litio y se congela a -80ºC hasta su análisis. Los niveles de TNF-∀ se determinan utilizando un kit de ELISA para TNF-∀ específico para ratas (Biosource). Se calcularon los valores de DE50 como la dosis del compuesto de aminopurina con la que la producción de TNF-∀ se reduce al 50% del valor testigo. Algunos compuestos tienen un valor de DE50 en el intervalo de 1-30 mg/kg en este ensayo.

Ensayo de tirosina quinasa Abl con LANCE HTRF

El día antes de realizar el ensayo se prepara lo siguiente:

(1)

2 mg/ml BSA/0,4% Triton X100/ HEPES 50 mM pH 7,6 (mantenido a 4ºC);

(2)

Estreptavidina-APC (PerkinElmer Life Sciences CR130-100) diluida en nH2O de acuerdo con las instrucciones (mantenida a 4ºC, hasta 2 semanas como máximo);

(3)

Sustrato peptídico 2 biotinilado con tirosina quinasa (Pierce 29914) diluido en nH2O (mantenido a 4º);

(4)

Diluciones de compuesto de aminopurina en DMSO.

El día en el que el ensayo se lleva a cabo se preparan las siguientes mezclas:

(5)

DTT 2 mM/ HEPES 50 mM pH 7,6;

(6)

Estaurosporina 2 mM para testigo de fondo y diluciones seriadas 1:3 para testigo de referencia en DMSO;

(7)

Mezcla LANCE en 2 mg/ml BSA/0,2% Triton X100/HEPES 50 mM pH 7,6 preparada como se describe a continuación: estreptavidina-APC 250 nM (PerkinElmer Life Sciences CR130-100), sustrato peptídico 2 biotinilado con tirosina quinasa 250 nM (Pierce 29914) y 250 ng/ml de Eu-anti-fosfo tirosina (PerkinElmer Life Sciences AD0066);

(8)

Mezcla de detección/quinasa preparada como se describe a continuación: 18,7 ng/ml AbI (Calbiochem 102555), MgCl2 5,9 mM y 58,8% Mezcla LANCE de (7), llevada al volumen final con DTT 2 mM/HEPES 2 mM pH 7,6;

(9)

ATP 240 !M en DTT 2 mM/HEPES 25 mM pH 7,4.

A una placa de microtitulación negra de 384 pocillos (Corning 3710) se agregan 2,5 !l/pocillo de diluciones de compuesto/DMSO y 42,5 !l/pocillo de mezcla de detección/quinasa. La placa se incuba durante 5 minutos en un agitador y después se incuba estáticamente durante 10 minutos a temperatura ambiente.

Se agregan 5 !l/pocillo de ATP a la placa y ésta se incuba durante 5 minutos en agitador y después se incuba estáticamente durante 55 minutos a temperatura ambiente.

Se agregan 30 !l/pocillo de EDTA 16,7 mM a la placa y ésta se incuba durante al menos 2 minutos en un agitador y luego se incuba estáticamente durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después la placa se lee (TR-FRET) en un instrumento Packard Fusion.

Algunos compuestos tienen un valor de CI50 en el intervalo de 0,01 - 10 !M en este ensayo.

Ensayo de azul Alamar para células K562

Se mantiene de forma rutinaria leucemia mielógena crónica K562 en RPMI 1640 con FBS inactivado por calor al 10% y Penicilina-Estreptomicina al 1%. Para el ensayo de proliferación celular, las células K562 se colocan en placas de fondo redondo de 96 pocillos. Las células se tratan con un compuesto de aminopurina el mismo día de la colocación en las placas. Para los experimentos de respuesta a la dosis, se diluye una solución 30 mM de un compuesto de aminopurina para proporcionar concentraciones finales de 30 !M, 3 !M, 0,3 !M, 0,03 !M y 0,003 !M. La concentración final de DMSO es de 0,2% en cada pocillo. Se utiliza azul Alamar para cuantificar la cantidad de células después de una incubación de 72 horas con un compuesto de aminopurina. Algunos compuestos tienen un valor de CI50 en el intervalo de 0,1 - 10 !M en este ensayo.

El alcance de las realizaciones descritas en la presente invención no ha de quedar limitado por las realizaciones específicas descritas en los ejemplos, las cuales pretenden ser ilustraciones de algunos aspectos de las realizaciones descritas, y toda realización que sea funcionalmente equivalente queda comprendida dentro del alcance de la presente invención. En efecto, distintas modificaciones de las realizaciones aquí descritas, complementarias a las ilustradas y descritas en la presente invención, serán evidentes para los expertos en la técnica y se pretende que las mismas queden incluidas dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que tiene la fórmula (I):

   o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo,

   5 en donde:

   R1 es alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido;

   R2 es H, alquilo C1-6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-10 sustituido o no sustituido, heterociclo C3-10 sustituido o no sustituido o heteroarilo C3-10 sustituido o no sustituido; y

   10 R3 es arilo sustituido con uno o más halógenos o heteroarilo C3-10 sustituido con uno o más halógenos, en donde el grupo arilo o heteroarilo C3-10 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo C1-C6, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo,

   en donde el término "sustituido" denota la sustitución mediante cualquiera de los sustituyentes descritos o mediante

   15 halógeno; alquilo C1-6; alquenilo C2-6; aIquinilo C2-6; hidroxilo; alcoxilo C1-6; amino; nitro; tiol; tioéter; imina; ciano; amido; fosfonato; fosfina; carboxilo; tiocarbonilo; sulfonilo; sulfonamida; cetona; aldehído; éster; oxígeno (=O); haloalquilo; B(OH)2, cicloalquilo que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; heterocicloalquilo, que puede ser monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; arilo carbocíclico o heterocíclico, monocíclico o policíclico fusionado o no fusionado; amino primario, secundario, o terciario; O-alquilo C1-6; O-arilo, arilo; arilalquilo C1-6; CO2CH3;

   20 CONH2; OCH2CONH2; NH2; SO2NH2; OCHF2; CF3 u OCF3.

   para su uso en el tratamiento o prevención de esofagitis, hepatitis, pancreatitis o nefritis.
2. 2. El compuesto para su uso de la reivindicación 1 en donde R1 es cicloalquilo C3-10 sustituido con uno o más grupos alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo.

   25 3. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde R2 es ciclohexilo sustituido con uno o más grupos alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo.
3. 4. El compuesto para su uso en la reivindicación 1 en donde R2 es ciclopentilo sustituido con uno o más grupos

   alquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, 30 alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo.
4. 5. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde R2 es 3-oxetanilo, 3-tetrahidrofuranilo, 4-tetrahidropiranilo, 4-piperidinilo, 4-(1-acil)-piperidinilo, 4-(1-alcanosulfonil)piperidinilo, 3-pirrolidinilo, 3-(1-acil)pirrolidinilo y 3-(1-alcanosulfonil)pirrolidinilo sustituido o no sustituido.
5. 6. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde R2 es heterociclo C3-10 que contiene azufre sustituido 35 o no sustituido.

6. 7.

   El compuesto para su uso de la reivindicación 6, en donde el heterociclo C3-10 que contiene azufre es 4-(1,1-dioxo)tiopiranilo o 3-(1,1-dioxo)tiofuranilo.

7. 8.

   El compuesto para su uso de la reivindicación 1 en donde R3 es arilo sustituido con halógeno o heteroarilo C3-10 sustituido con halógeno.

   40 9. El compuesto para su uso de la reivindicación 8 en donde R3 es arilo sustituido con fluoro o heteroarilo C3-10 sustituido con fluoro.
8. 10. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde R3 es

   en donde: X es en cada caso independientemente F, CI, Br o I;

   5 R6 es alquilo C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, amino, alquilamino, carboxi, aminocarbonilo, ciano, acilamino, alcanosulfonilamino, tetrazolilo, triazolilo o imidazolilo; m es un número entero de 1 a 5; y p es un número entero de 1 a 4.
9. 11. El compuesto para su uso de la reivindicación 10 en donde X es F, Cl o Br. 10 12. El compuesto para su uso de la reivindicación 10 en donde m es 1, 2 o 3 y X es F o Cl.

10. 13.

    El compuesto de la reivindicación 10 en donde m es 2 o 3 y al menos un X es F y al menos un X es Cl.

11. 14.

    El compuesto para su uso de la reivindicación 1 en donde el compuesto tiene una fórmula seleccionada de la lista que consiste en:

    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.