ES2445185T3 - Biomarcadores de cáncer - Google Patents
Biomarcadores de cáncer Download PDFInfo
- Publication number
- ES2445185T3 ES2445185T3 ES07848631.3T ES07848631T ES2445185T3 ES 2445185 T3 ES2445185 T3 ES 2445185T3 ES 07848631 T ES07848631 T ES 07848631T ES 2445185 T3 ES2445185 T3 ES 2445185T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- fragment
- peptide
- seq
- prostate cancer
- cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000107 tumor biomarker Substances 0.000 title description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 108
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims abstract description 81
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 49
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 44
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 102000009331 Homeodomain Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108010048671 Homeodomain Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 101100285412 Gallus gallus EN2 gene Proteins 0.000 claims abstract 5
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 claims abstract 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 75
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims description 43
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 34
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 16
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 claims description 3
- 238000000672 surface-enhanced laser desorption--ionisation Methods 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 102100031680 Beta-catenin-interacting protein 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101000993469 Homo sapiens Beta-catenin-interacting protein 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 claims description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 claims description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 claims description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 claims description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 claims description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 241001378740 Mugil liza Species 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- 101001002994 Homo sapiens Homeobox protein Hox-C4 Proteins 0.000 description 42
- 102100020759 Homeobox protein Hox-C4 Human genes 0.000 description 41
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 40
- 102100025056 Homeobox protein Hox-B6 Human genes 0.000 description 26
- 101001077542 Homo sapiens Homeobox protein Hox-B6 Proteins 0.000 description 26
- 101000840553 Homo sapiens Homeobox protein Hox-B5 Proteins 0.000 description 21
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 21
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 21
- 102100029240 Homeobox protein Hox-B5 Human genes 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 102100039541 Homeobox protein Hox-A3 Human genes 0.000 description 19
- 101000962622 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A3 Proteins 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 102100034864 Homeobox protein Hox-D9 Human genes 0.000 description 18
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 18
- 101001019766 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D9 Proteins 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 17
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 10
- 108700005856 engrailed 2 Proteins 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 102100027695 Homeobox protein engrailed-2 Human genes 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 102100030309 Homeobox protein Hox-A1 Human genes 0.000 description 4
- 102100025116 Homeobox protein Hox-A4 Human genes 0.000 description 4
- 102100022650 Homeobox protein Hox-A7 Human genes 0.000 description 4
- 101001083156 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A1 Proteins 0.000 description 4
- 101001077578 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A4 Proteins 0.000 description 4
- 101001045116 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A7 Proteins 0.000 description 4
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 4
- 206010071019 Prostatic dysplasia Diseases 0.000 description 4
- 208000037842 advanced-stage tumor Diseases 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 102100030339 Homeobox protein Hox-A10 Human genes 0.000 description 3
- 102100030308 Homeobox protein Hox-A11 Human genes 0.000 description 3
- 102100030307 Homeobox protein Hox-A13 Human genes 0.000 description 3
- 102100039542 Homeobox protein Hox-A2 Human genes 0.000 description 3
- 102100025110 Homeobox protein Hox-A5 Human genes 0.000 description 3
- 102100022649 Homeobox protein Hox-A6 Human genes 0.000 description 3
- 102100021090 Homeobox protein Hox-A9 Human genes 0.000 description 3
- 102100040229 Homeobox protein Hox-D1 Human genes 0.000 description 3
- 102100039544 Homeobox protein Hox-D10 Human genes 0.000 description 3
- 102100039545 Homeobox protein Hox-D11 Human genes 0.000 description 3
- 102100040205 Homeobox protein Hox-D12 Human genes 0.000 description 3
- 102100040227 Homeobox protein Hox-D13 Human genes 0.000 description 3
- 102100040228 Homeobox protein Hox-D3 Human genes 0.000 description 3
- 102100021086 Homeobox protein Hox-D4 Human genes 0.000 description 3
- 102100034858 Homeobox protein Hox-D8 Human genes 0.000 description 3
- 101001083164 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A10 Proteins 0.000 description 3
- 101001083158 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A11 Proteins 0.000 description 3
- 101000962636 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A2 Proteins 0.000 description 3
- 101001077568 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A5 Proteins 0.000 description 3
- 101001045083 Homo sapiens Homeobox protein Hox-A6 Proteins 0.000 description 3
- 101001037162 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D1 Proteins 0.000 description 3
- 101000962573 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D10 Proteins 0.000 description 3
- 101000962591 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D11 Proteins 0.000 description 3
- 101001037169 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D12 Proteins 0.000 description 3
- 101001037168 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D13 Proteins 0.000 description 3
- 101001037158 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D3 Proteins 0.000 description 3
- 101001041136 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D4 Proteins 0.000 description 3
- 101001019776 Homo sapiens Homeobox protein Hox-D8 Proteins 0.000 description 3
- 230000009227 antibody-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000010408 film Substances 0.000 description 3
- 108010021685 homeobox protein HOXA13 Proteins 0.000 description 3
- 108010027263 homeobox protein HOXA9 Proteins 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 238000003819 low-pressure liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 101100290354 Arabidopsis thaliana AMC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100456241 Arabidopsis thaliana AMC2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100456248 Arabidopsis thaliana AMC3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000754798 Calophyllum brasiliense Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 101150040523 EN gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 101150033506 HOX gene Proteins 0.000 description 1
- 108700005087 Homeobox Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100028411 Homeobox protein Hox-B3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029433 Homeobox protein Hox-B9 Human genes 0.000 description 1
- 101000839775 Homo sapiens Homeobox protein Hox-B3 Proteins 0.000 description 1
- 101000989000 Homo sapiens Homeobox protein Hox-B9 Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 201000004009 Neurogenic arthrogryposis multiplex congenita Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000003452 antibody preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000005773 cancer-related death Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 101150003074 hoxa5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000053283 human HOXB5 Human genes 0.000 description 1
- 102000048380 human HOXC4 Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000006517 limb development Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000000683 nonmetastatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000030147 nuclear export Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005267 prostate cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57434—Specifically defined cancers of prostate
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
Un método de diagnóstico o monitorización de la progresión de cáncer de próstata que comprende cuantificar odetectar la cantidad de al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o un fragmento del mismo,en orina y compararlo con la cantidad de dicho al menos un péptido en una muestra de ensayo de orina con lacantidad presente en una muestra de orina de control normal procedente de un sujeto normal sin cáncer, donde elfactor de transcripción que contiene homeodominio es un péptido EN-2 que comprende la SEQ ID NO: 4, y donde elfragmento tiene al menos un 80% de homología de secuencia con respecto a la SEQ ID NO: 4, más preferiblementeun 85%, más preferiblemente un 90%, más preferiblemente un 95%, más preferiblemente un 97%, máspreferiblemente un 99% y lo más preferiblemente un 99,9% de homología de secuencia con respecto a dicha SEQID NO: 4, donde un aumento del nivel del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o de unfragmento del mismo, que se observe en la muestra de ensayo es indicativo de que la enfermedad está en progresoo de que se ha iniciado.
Description
Biomarcadores de cáncer
La presente invención se refiere al uso de al menos un homeodominio que contiene factor de transcripción, tal como péptido HOX o péptido EN-2, como biomarcador para cáncer de próstata.
El cáncer de próstata es actualmente la principal causa de muerte relacionada con cáncer entre los hombres, siendo responsable de la muerte de 10.000 hombres al año solo en el Reino Unido. Sin embargo, la disponibilidad actual de biomarcadores para la detección no invasiva del cáncer de próstata está limitada esencialmente al Antígeno Específico de Próstata (PSA, del inglés “Prostate Specific Antigen”). Los niveles en suero de PSA se ven incrementados significativamente en pacientes con cáncer de próstata, y actualmente se usa el test de PSA para seguir la evolución de la enfermedad y su respuesta frente a un tratamiento.
Desafortunadamente, existe una serie de desventajas significativas con el test de PSA. Puesto que los niveles de PSA se ven incrementados significativamente en otras afecciones no cancerígenas de la próstata, tal como la prostatitis y la hipertrofia benigna, no siempre es seguro que la detección de un aumento de los niveles de PSA sea realmente indicativa de un cáncer de próstata en un paciente. Adicionalmente, los niveles de PSA no se correlacionan necesariamente con el volumen de la enfermedad o con el desarrollo de metástasis nodal u ósea.
Recientes intentos de usar otros indicios como la relación de PSA libre a PSA total y la “velocidad de PSA” han demostrado no ser válidos, debido al muy alto nivel de falsos positivos, que da como resultado un gran número de biopsias invasivas innecesarias.
De hecho, se cree que los niveles de PSA se elevan solo de forma muy lenta en el cáncer de próstata, de tal modo que la enfermedad a menudo está muy avanzada antes de obtener un resultado positivo, cuando se miden los niveles de PSA. Además, los niveles de PSA deben ser normalizados, ya que puede variar con la edad y el tamaño de la próstata.
También existe una serie de marcadores químicos potenciales adicionales del cáncer de próstata, que incluyen las calicreínas, y más recientemente, los fragmentos de 80 kDa de la e-caderina (Kuefer et al., 2005). Nuevamente, dichos biomarcadores tienden a presentar muchas de las desventajas significativas discutidas anteriormente en relación al PSA.
Morgan et al. (Proc. Amer. Cancer Res. Vol. 47, 2006, p. 622) describe que EN-2 se transcribe tanto en la línea celular derivada de cáncer de próstata (LNCaP), como en las células de cáncer de próstata primarias. La proteína EN-2 también está presente dentro de dichas células, y en el medio de cultivo, en concurrencia con estudios previos que demuestran que la EN-2 es secretrada.
Bose et al. (Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. Vol. 48, 2007, p. 503) describen que EN-2 se expresa de forma aberrante en células de cáncer humano en comparación con células de próstata normales.
Por lo tanto, existe una necesidad en la técnica de un biomarcador de cáncer de próstata fiable.
Sorprendentemente, hemos descubierto que el factor de transcripción homeótico, HOXC4, es secretado desde tumores de próstata y su concentración en suero es significativamente elevada en pacientes de cáncer de próstata. Por tanto, la presencia de HOXC4 en fluidos corporales, tales como el suero, es un indicador útil de cáncer de próstata tanto en etapa temprana como en etapa avanzada.
También hemos descubierto que una segunda proteína HOX, la HOXB6, y una tercera proteína HOXB5, también presentan resultados similares. La HOXA3 y la HOXD9 también son consideradas útiles como biomarcadores.
Además hemos identificado el factor de transcripción que contiene homeodominio Engrailed 2 (EN-2) como expresado tanto a nivel de ARN como de proteína en las líneas celulares derivadas de cáncer de próstata LNCaP y PC3, y también en células de cáncer de próstata primarias. Además, la proteína EN-2 puede ser secretada en el medio circundante de las células.
Sorprendentemente, se podrían detectar niveles elevados de todos estos marcadores de cáncer en pacientes de cáncer de próstata incluso cuando se obtenían niveles normales de PSA. Esto ilustra adicionalmente que los marcadores de la presente invención son más fiables en la diagnosis de cáncer de próstata que otros marcadores, tales como PSA.
Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente invención proporciona el uso de al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o un fragmento del mismo, como biomarcador para cáncer de próstata. Los ejemplos de factores de transcripción que contienen homeodominio incluyen péptidos de EN-2. La invención también se refiere a un método para diagnosticar la enfermedad de cáncer de próstata que comprende detectar al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio en una muestra procedente de un paciente.
Se prefiere particularmente que el al menos un péptido EN-2, o fragmento del mismo, sea detectable en un fluido corporal.
Preferiblemente, el biomarcador es solo EN-2. Sin embargo, también se prefieren combinaciones. Dichas combinaciones incluyen EN-2 y HOXC4; EN-2 y HOXB5; EN-2 y HOXB6; EN-2, HOXC4 y HOXB5; EN-2, HOXC4 y HOXB6; EN-2, HOXB5 y HOXB6; EN-2, HOXC4, HOXB5 y HOXB6. Dichas combinaciones también pueden comprender adicionalmente uno o ambos de HOXA3 y/o HOXD9. Combinaciones adicionales incluyen HOXA3 y HOXD9; HOXA3 y HOXC4; HOXA3 y HOXB5; HOXA3 y HOXB6; HOXA3 y EN-2; HOXD9 y HOXC4; HOXD9 y HOXB5; HOXD9 y HOXB6 y EN-2. Una combinación particularmente preferida de marcadores comprende uno o más, preferiblemente todos, de HOXC4, HOXB5, HOXB6 y EN-2.
Preferiblemente, el fluido corporal es suero u orina.
Los genes HOX son una familia de factores de transcripción que contienen homeodominio que determinan la identidad de células y tejidos durante el desarrollo inicial (revisión de Morgan, 2006). Publicaciones recientes, que incluyen Miller et al 2003, han identificado de manera eficaz todas las proteínas que se expresan, y que son retenidas intracelularmente, en una célula tumoral de cáncer de próstata. Por supuesto, esto significa que se identificaron un total de entre 10.000 y 12.000 proteínas, incluyendo los péptidos HOX.
Sin embargo, sorprendentemente hemos descubierto que, entre estos miles de proteínas expresadas en las células de cáncer de próstata, la proteína HOXC4, por ejemplo, se encuentra extracelularmente y es un excelente biomarcador para el cáncer de próstata.
Esto es sorprendente por una serie de razones. En primer lugar, HOXC4 es un factor de transcripción y, por tanto, no sería esperable encontrarlo en el suero. En segundo lugar, aunque se conocen otros biomarcadores para el cáncer de próstata, encontrar un biomarcador fiable ha sido una misión infructuosa, véanse por ejemplo los problemas descritos anteriormente en relación al PSA. De hecho, HOXC4 es un biomarcador tanto de etapa temprana como, en particular, de etapa avanzada, tal como se muestra en la Figura 1.
Por tanto, esta proteína no ha sido identificada como biomarcador para el cáncer de próstata antes, aunque se sabe que se expresa en células de cáncer de próstata, junto con muchos miles de otras proteínas, muchas de las cuales no podrían ser descritas como biomarcadores para el cáncer de próstata. Esto también se aplica a otros péptidos HOX, que incluyen HOXB5 y HOXB6.
Como los péptidos HOX, las proteínas Engrailed (En) también son factores de transcripción que contienen homeodominio que muestran un grado muy elevado de conservación funcional durante el desarrollo (revisado por Morgan, 2006). El gen En original fue caracterizado en Drosophila, donde el mutante En no consigue formar una frontera entre el ala anterior y posterior (Garcia-Bellido y Santamaria, 1972). Del mismo modo, los homólogos de vertebrados de En presentan roles reguladores durante el desarrollo, que incluye el desarrollo de miembros y la especificación temprana y las migraciones axonales subsiguientes del sistema nervioso (Morgan, 2006).
Además de la regulación transcripcional, las proteínas EN tienen una serie de propiedades adicionales, aparentemente no relacionadas, que son importantes funcionalmente. La primera de ellas es la capacidad para ser secretadas desde las células, y para ser internalizadas por parte de otras (Cosgaya et al, 1998; Joliot et al, 1998, revisado por Morgan, 2006). La base mecanística exacta para este fenómeno es desconocida, aunque está claro que depende de la secuencia de exportación nuclear conservada localizada en el homeodominio (Maizel et al, 1999; Chatelin et al, 1996; Derossi et al, 1996; Joliot et al, 1997).
Además de su función en el desarrollo, recientemente se ha demostrado que EN-2 es un oncogén potencial en el cáncer de mama (Martin et al, 2005). Líneas celulares mamarias murinas no tumorogénicas forzadas a expresar EN2 exhiben posteriormente una serie de características de malignidad que incluyen un acortamiento del ciclo celular y una pérdida de contacto célula a célula. Además, el silenciamiento de ARNi de EN-2 indica que es requerido para el mantenimiento del fenotipo transformado en una línea celular de cáncer de mama humano.
Hemos descubierto que EN-2 está sobreexpresada y es secretada en la línea celular derivada de cáncer de próstata LNCaP y en muestras de tejido humano procedentes de Adenocarcinoma prostático. Adicionalmente, EN-2 es secretada desde células ductales y tumores de Adenocarcinoma y está presente en la orina de pacientes de cáncer de próstata. Esta es la primera vez que se ha sugerido EN-2 como marcador de cáncer de próstata.
Preferiblemente, se detecta la presencia o la ausencia de el al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, tal como un péptido EN-2, o fragmento del mismo.
En la presente memoria también se describe que el al menos un péptido HOX se selecciona entre cualquier péptido HOX de los enumerados más adelante, siempre que el péptido HOX, o fragmento del mismo, sea detectable en un fluido corporal tal como suero u orina.
También se describe en la presente memoria que el al menos un péptido HOX, o fragmento del mismo, procede de la subfamilia HOXA, HOXB, HOXC ó HOXD. Si se usa más de un péptido HOX, entonces éstos pueden proceder de
la misma familia o de una combinación de familias. También se contemplan las combinaciones de fragmentos, tanto fragmentos de la misma proteína como fragmentos de diferentes proteínas. Las combinaciones de péptidos diferentes pueden proporcionar un diagnóstico más preciso. Se prefiere que el péptido HOX no sea HOXA4, HOXA1, HOXA7, HOXB3 ó HOXB9.
También se describe en la presente memoria que el péptido HOX es el péptido HOXC4, y/o el péptido HOBX6 y/o el péptido HOXB5, y/o el péptido HOXA3, y/o el péptido HOXD9, o fragmentos de los mismos.
También se describe en la presente memoria que el péptido HOXC4 es el proporcionado en la SEQ ID NO. 1 (nº de acceso NBCI P09017, gi: 123279), o un fragmento de la misma. También se describe en la presente memoria que el péptido HOXB6 es el proporcionado en la SEQ ID NO. 2 (nº de acceso NBCI P17509, gi: 116242515), o un fragmento de la misma. También se describe en la presente memoria el péptido HOXB5, que es proporcionado en la SEQ ID NO. 3 (nº de acceso NBCI P09067, gi: 400000), o un fragmento de la misma. Preferiblemente, el péptido EN-2 es el proporcionado por la SEQ ID NO. 4 (nº de acceso NCBI P19622, gi: 21903415), o un fragmento de la misma. También se describe en la presente memoria que el péptido HOXA3 es el proporcionado en la SEQ ID NO. 5 (nº de acceso NBCI de ARNm NM_030661, gi: 84043946), o un fragmento de la misma. También se describe en la presente memoria que el péptido HOXD9 es el proporcionado en la SEQ ID NO. 6 (nº de acceso NBCI de ARNm NM_014213, gi: 23397673), o un fragmento de la misma.
Cuando se hace referencia a HOXC4, péptido HOXC4 o un fragmento del mismo, debe entenderse que dichos términos pueden usarse de forma intercambiable, a menos que la evidencia indique lo contrario. Lo mismo es aplicable para los otros péptidos HOX y EN-2.
Adicionalmente, cuando se hace referencia en la presente memoria a HOXC4, HOXB6, HOXB5, HOXA3 ó HOXD9, esto también se aplica a otros péptidos de HOX, o combinaciones de los mismos, a menos que la evidencia indique lo contrario.
De forma similar, cuando se haga referencia en la presente memoria a una secuencia particular, tal como una secuencia de referencia o una SEQ ID NO, esto se aplica a todas las SEQ ID NO y a cualquiera de las secuencias de HOX proporcionadas más adelante, a menos que la evidencia indique lo contrario.
Preferiblemente, el fragmento comprende al menos un 80% de homología de secuencia con la secuencia de referencia (p. ej., EN-2), más preferiblemente un 85%, más preferiblemente un 90%, más preferiblemente un 95%, más preferiblemente un 97%, más preferiblemente un 99% y lo más preferiblemente un 99,9% de homología de secuencia con la secuencia de referencia, o tan cerca de ello como sea apropiado. Los métodos adecuados para establecer la homología de secuencia incluyen el programa BLAST.
Preferiblemente, el fragmento comprende al menos un 80% de identidad de secuencia con la secuencia de referencia (p. ej., EN-2), más preferiblemente un 85%, más preferiblemente un 90%, más preferiblemente un 95%, más preferiblemente un 97%, más preferiblemente un 99% y lo más preferiblemente un 99,9% de identidad de secuencia con la secuencia de referencia, o tan cerca de ello como sea apropiado. Los métodos adecuados para establecer la identidad de secuencia incluyen el programa BLAST.
Se dice que dos polipéptidos son “homólogos”, tal como se usa el término en la presente memoria, si la secuencia de uno de los polipéptidos tiene un grado suficientemente elevado de identidad o de similitud con respecto a la secuencia del otro polipéptido. “Identidad” indica que en cualquier posición concreta de las secuencias alineadas, el residuo de aminoácido es idéntico entre las secuencias. “Similitud” indica que, en cualquier posición concreta de las secuencias alineadas, el residuo de aminoácido es de un tipo similar entre las secuencias. Los grados de identidad y de similitud se pueden calcular fácilmente (Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing, Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Parte 1, Griffin, A.M., y Griffin, H.G., eds., Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M Stockton Press, Nueva York, 1991). El porcentaje de identidad, tal como es referido en la presente memoria, es tal cual se determina mediante BLAST versión 2.1.3 usando los parámetros por defecto especificados por el NCBI (National Center for Biotechnology Information; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) [Blosum 62 matrix; penalización de abertura de hueco = 11 y penalización de extensión de hueco = 1].
Preferiblemente, el fragmento comprende al menos cuatro aminoácidos consecutivos de la secuencia de referencia, más preferiblemente al menos 5, más preferiblemente al menos 6, más preferiblemente al menos 7, más preferiblemente al menos 8 aminoácidos consecutivos de la secuencia de referencia, tal como las SEQ ID NO. 1, 2, 3, 4, 5 ó 6, aunque también se prefieren fragmentos más largos de al menos 10, 15, 20, 25, 30, 50, 75, 100, 150, 200, 225 y hasta al menos 250 aminoácidos. Los fragmentos también incluyen péptidos truncados que tengan x aminoácidos eliminados del extremo N y/o del extremo C. En dichas eliminaciones, x puede ser 1 ó más (es decir, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ó más), pero preferiblemente menos de 150.
Sin pretender establecer ninguna teoría, se cree que HOXC4 es secretado a través de una ruta no clásica, sin requerir una secuencia señal. Por lo tanto, se cree que la secuencia proporcionada en la SEQ ID NO. 1 es la misma que la proteína encontrada en el suero. Esto se corrobora mediante la observación de que la banda detectada es de un tamaño correspondiente (Mw) al tamaño predicho en base a la secuencia génica. Las proteínas HOX también pueden abandonar células a través de otros mecanismos, p. ej. lisis celular.
El término “biomarcador” se usa en la técnica y significa un indicador biológico o derivado biológicamente distintivo de un proceso, suceso o afección. En otras palabras, un biomarcador es indicativo de un estado biológico concreto, tal como la presencia de tejido canceroso. En algunos casos, diferentes formas de biomarcadores pueden ser indicativas de determinados estados de enfermedad pero, sin pretender establecer ninguna teoría, se cree que meramente la presencia de niveles elevados de un péptido HOXC4, o de un fragmento del mismo, en fluidos corporales tales como el suero, es indicativa de cáncer de próstata. Aunque actualmente no se contempla que se secreten diferentes glicoformas, por ejemplo, del péptido HOXC4, no obstante éstas son contempladas por la presente invención. Por ejemplo, todavía pueden determinarse glicoformas diferentes, tales como una estructura de glicoforma alterada o un contenido de sacáridos, para el HOXC4, pero éstas son contempladas y también pueden incluso ser indicativas del progreso del cáncer de próstata. Las truncaciones, mutaciones o eliminaciones, o las ligaciones practicadas al péptido HOXC4, o a un fragmento del mismo, también son contempladas.
Sin embargo, el principal descubrimiento que apoya la presente invención es que existe un incremento significativo del nivel de HOXC4 detectable en fluidos corporales, tal como el suero. Se cree que el HOXC4 es secretado, pero también se contempla que pueda ser debido a proteína HOXC4 lixiviada desde células moribundas. De forma similar, se puede secretar EN-2 o puede ser detectable en fluidos corporales debido a lixiviación desde células dañadas o muertas. Dichos niveles incrementados son indicativos de cáncer de próstata tanto de etapa temprana como de etapa avanzada. Aunque se produce un incremento significativo entre los niveles de control o normales y el cáncer de próstata de etapa temprana, también existe un incremento muy significativo entre el cáncer de etapa temprana y el de etapa avanzada. De forma general, es una ventaja de la presente invención el que se pueda detectar la sustancia y también el estado del cáncer de próstata. Esto ayuda en la prognosis y en la provisión de terapias adecuadas.
También es una ventaja de la presente invención que es capaz de distinguir por encima de afecciones tales como la hiperplasia prostática benigna BTH (BPH, del inglés “benign prostatic hiperplasia”). Dichas afecciones, que conducen a un crecimiento de la glándula prostática, pueden ser malinterpretadas como cáncer de próstata cuando se usan las técnicas establecidas para determinar la presencia de cáncer de próstata, tal como el Examen Rectal Digital (ERD). Otra ventaja de la presente invención es que se puede proporcionar un diagnóstico preciso sin recurrir a procedimientos invasivos desagradables y potencialmente dañinos, que también pueden ser imprecisos. Además, la presente invención es particularmente sensible. Preferiblemente, los métodos de la presente invención pueden detectar el inicio del cáncer de próstata antes que cualquier otro método de detección y antes del inicio de los síntomas manifiestos del cáncer de próstata. Por lo tanto, el cáncer puede ser tratado en una etapa temprana, cuando es más susceptible a dicho tratamiento y es menos probable que haya entrado en la etapa metastásica.
Se conocen diferentes tipos de cáncer de próstata. El más común comienza en las células de la glándula prostática y se conoce como adenocarcinoma de próstata. Sin embargo, existen otras formas de cáncer de próstata, tales como sarcomas, carcinomas de célula pequeña y carcinomas de célula transicional. Los métodos de la invención pueden usarse para detectar el inicio de cualquiera de estos tipos de cáncer, aunque se prefiere la detección de adenocarcinoma.
La progresión del cáncer es monitorizada a través de un proceso por etapas. Éste indica cómo de desarrollado se encuentra el cáncer y si se ha extendido. La puntuación tiene un rango entre uno y cuatro, haciéndose la prognosis progresivamente peor en cada etapa.
Etapa Uno: las células malignas están confinadas en la próstata; no se han extendido a los nodos linfáticos o a otros órganos; las puntuaciones de Gleason van de dos a cuatro, y menos de un cinco por ciento de la próstata está compuesta por crecimiento tumoral.
Etapa Dos: las puntuaciones de Gleason están en cinco o superior, o más del cinco por ciento de la glándula muestra un crecimiento anormal; el cáncer todavía está restringido a la próstata.
Etapa Tres: las células malignas se han extendido a las vesículas seminales, pero no a los nodos linfáticos o a otros órganos.
Etapa Cuatro: los nodos linfáticos, el tejido pélvico u órganos más distantes están afectados.
Preferiblemente, los métodos de la invención detectan el inicio del cáncer de próstata antes o durante las etapas uno
o dos, más preferiblemente en la etapa uno.
Los biomarcadores de péptidos de la presente invención se pueden usar en métodos de diagnosis, por ejemplo en escrutinio clínico, y en métodos de determinación de prognosis, monitorizando los resultados de la terapia,
identificando pacientes con mayor probabilidad de responder a un tratamiento terapéutico particular, escrutinio de fármacos y desarrollo. Además, los biomarcadores de la presente invención y los usos de los mismos son valiosos para la identificación de nuevos tratamientos con fármacos y para el descubrimiento de nuevas dianas para el tratamiento con fármacos.
Por lo tanto, en un aspecto adicional, la invención proporciona un método para diagnosticar o monitorizar la progresión de cáncer de próstata, que comprende la detección y/o la cuantificación de al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio tal como péptido EN-2 o un fragmento del mismo. Preferiblemente, el péptido comprende o consta de la secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO 4. Preferiblemente, el al menos un péptido de EN-2, o un fragmento del mismo, está presente en una muestra biológica procedente de un sujeto evaluado, siendo dicha muestra biológica orina. También se prefiere que el fluido corporal esté sustancial o completamente libre de células enteras/intactas. Preferiblemente, el fluido corporal está libre de plaquetas y desechos celulares (tales como los producidos tras lisis de las células). Preferiblemente, el fluido corporal está libre tanto de células procarióticas como de células eucarióticas.
Dichos fluidos pueden obtenerse mediante una serie de medios conocidos en la técnica, tales como los evidentes para el especialista. Por ejemplo, una muestra de orina es fácil de obtener, mientras que las muestras de sangre o de suero pueden obtenerse parenteralmente usando una aguja y jeringa, por ejemplo. Las muestra libres de células
o sustancialmente libres de células pueden obtenerse sometiendo al fluido corporal a varias técnicas conocidas por los especialistas en la técnica que incluyen, aunque sin limitación, centrifugación y filtración.
Aunque generalmente se prefiere no usar técnicas invasivas para obtener la muestra, todavía puede ser preferible obtener muestras tales como homogenatos de tejido, secciones de tejido y especímenes para biopsia.
Los métodos de monitorización de la presente invención pueden usarse para detectar el inicio, la progresión, la estabilización, el alivio y/o la remisión de cáncer de próstata. Por tanto, la detección del al menos un péptido de EN2, o fragmento del mismo, puede usarse para determinar la progresión de la enfermedad, con el objetivo de orientar a un médico hacia un tratamiento particular.
Preferiblemente, se proporcionan al menos dos etapas de detección y/o cuantificación, preferiblemente separadas temporalmente, por ejemplo por unos días, semanas, años o, más preferiblemente, meses, para determinar si los niveles de el al menos un péptido de EN-2, o fragmento del mismo, han cambiado, indicando de este modo si ha habido un cambio en la progresión del cáncer. Esto permite realizar comparaciones entre un nivel del biomarcador en muestras tomadas en dos o más ocasiones, ya que un aumento del nivel del péptido con el tiempo es indicativo del inicio o la progresión del cáncer, mientras que un descenso del nivel del péptido puede indicar un alivio y/o una remisión del cáncer.
Preferiblemente, un método de diagnosis o de monitorización según la presente invención comprende comparar el nivel del péptido presente en una muestra de ensayo, con el nivel en uno o más controles. Preferiblemente, los controles pueden ser del mismo paciente de una muestra previa, para monitorizar así el inicio o la progresión. Sin embargo, también se prefiere que los controles puedan estar normalizados para una población, particularmente una población sana o normal, en la que no hay cáncer de próstata. En otras palabras, el control puede consistir en el nivel de un biomarcador observado en una muestra de control normal procedente de un sujeto normal.
Por lo tanto, se proporciona un método para diagnosticar cáncer de próstata que comprende cuantificar o detectar la cantidad de al menos un péptido de EN-2, o fragmento del mismo, y comparar la cantidad de dicho péptido en dicha muestra de ensayo con la cantidad presente en una muestra biológica de control normal procedente de un sujeto normal o del mismo sujeto bastante antes de la incidencia de la enfermedad. Si en la muestra de ensayo se observa un aumento significativo del nivel del al menos un péptido de EN-2, o fragmento del mismo, entonces es indicativo de que la enfermedad se encuentra en progresión o se ha iniciado.
Como se ha indicado anteriormente, este método de detección de al menos un péptido de EN-2, o fragmento del mismo, es particularmente útil para la detección de cáncer de próstata de etapa temprana, y es más sensible que el test tradicional para detectar niveles de PSA. Por tanto, los métodos de la invención son particularmente útiles para confirmar el cáncer cuando un paciente ha dado negativo para cáncer usando métodos convencionales, tal como la detección de PSA.
En general, el nivel de la secreción del al menos un péptido de EN-2 en los fluidos corporales se encuentra en los rangos descritos más adelante.
Debe entenderse que los términos “péptido” y “proteína” son intercambiables tal como se usan en la presente memoria, a menos que lo contrario sea evidente.
La Tabla 1 y la Figura 1, por ejemplo, muestran un aumento muy destacable en las concentraciones de proteína HOXC4 en suero. La Tabla 2 y la Figura 2 muestran resultados similares para HOXB6. También hemos demostrado que HOXB6 es un biomarcador para cáncer de próstata de etapa avanzada (datos no mostrados). HOXB5 también
es un biomarcador, pero es menos preferido que HOXB6 ó HOXC4 (Tabla 3 y Figura 7). Otros biomarcadores alternativos incluyen HOXA3 y HOXD9 (véase la Figura 8).
Preferiblemente, el incremento es estadísticamente significativo, determinado usando métodos estándar, tales como un “test t” que proporciona intervalos de confianza preferiblemente inferiores a al menos el 80%, más preferiblemente al menos el 85%, más preferiblemente al menos el 90%, más preferiblemente al menos el 95%, más preferiblemente al menos el 97%, más preferiblemente al menos el 99%, más preferiblemente al menos el 99,5%, más preferiblemente al menos el 99,95%, y lo más preferiblemente al menos 99,99%.
Preferiblemente, el aumento entre el control y una muestra indicativa de cáncer de próstata de etapa temprana está aproximadamente en 110-200%, más preferiblemente aproximadamente en 120-180%, más preferiblemente aproximadamente en 130-160%, más preferiblemente aproximadamente en 140-150%, más preferiblemente aproximadamente en 110-140%, más preferiblemente aproximadamente en 115-130%, más preferiblemente aproximadamente en 120-130%, más preferiblemente aproximadamente en 120-140%, y lo más preferiblemente aproximadamente 125%. También se contemplan otras combinaciones de los puntos finales anteriores.
Con respecto a la determinación de cáncer de etapa avanzada, el aumento entre el control y una muestra indicativa de dicho cáncer de próstata de etapa avanzada se encuentra aproximadamente en 400-800%, más preferiblemente aproximadamente en 450-750%, más preferiblemente aproximadamente en 500-700%, más preferiblemente aproximadamente en 520-680%, más preferiblemente aproximadamente en 540-640%, más preferiblemente aproximadamente en 550-620%, más preferiblemente aproximadamente en 560-600%, más preferiblemente aproximadamente en 570-590%, y lo más preferiblemente aproximadamente 580%. El aumento también puede encontrarse en el intervalo 550-800% ó 400-600%. También se contemplan otras combinaciones de los puntos finales anteriores.
Un aumento entre el cáncer de etapa temprana y el de etapa avanzada se puede medir respecto a un control normal (es decir, sin cáncer) o respecto a un control o muestra de etapa temprana del mismo paciente. Respecto a una muestra de etapa temprana se prefiere un incremento de aproximadamente entre 100% y 300%, más preferiblemente de aproximadamente entre 150% y 250%, más preferiblemente de aproximadamente entre 175% y 225%, más preferiblemente de aproximadamente entre 185% y 215%, más preferiblemente de aproximadamente entre 100% y 220%, más preferiblemente de aproximadamente entre 170% y 300%, y lo más preferiblemente de aproximadamente 200%.
Como se ha mencionado anteriormente, cuando se hace referencia en la presente memoria a al menos un péptido que contiene homeodominio, esto se aplica a péptidos HOX, tales como HOXC4, HOXB6, HOXB5, HOXA3 y HOXD9, y al péptido de EN-2, a menos que lo contrario sea evidente.
Cuando se hace referencia en la presente memoria a al menos un péptido HOX o péptidos HOX, esto se aplica a HOXC4, HOXB6, HOXB5, HOXA3 y HOXD9, en particular, así como a otros péptidos HOX enumerados más adelante, a menos que lo contrario sea evidente.
En términos de cantidades absolutas de al menos una proteína HOX ó EN-2 por mL de fluido corporal, preferiblemente suero, ésta está preferiblemente en aproximadamente 0,5-1,5 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 0,75-1,25 ng/mL, y lo más preferiblemente en aproximadamente 1,0 ng/mL para las muestras de control. Para las muestras de cáncer de etapa temprana, los intervalos preferidos se encuentran en aproximadamente 2,0-5,0 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 2,5-4,5 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 2,5-4,0 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 2,75-3,5 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 2,75-3,0 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 2,0-3,5 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 2,0-3,0 ng/mL, y lo más preferiblemente en aproximadamente 3,0 ng/mL.
Para las muestras de etapa avanzada, los intervalos preferidos se encuentran en aproximadamente 6,0-20 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 8,0-15 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 8,5-13 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 9,0-12 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 9,5-11 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 7-13 ng/mL, más preferiblemente en aproximadamente 8,5-16 ng/mL, y lo más preferiblemente en aproximadamente 10 ng/mL.
El término “diagnosis” abarca la identificación, la confirmación y/o la caracterización de la presencia o la ausencia de cáncer de próstata, junto con la etapa de desarrollo del mismo, tal como etapa temprana o etapa avanzada, o cáncer de próstata benigno o metastásico.
Cabe destacar que la naturaleza de la “etapa temprana” y de la “etapa avanzada” de los estados de enfermedad de cáncer pueden ser determinados por un médico. También se contempla que se puedan referir como no metastásico y metastásico, respectivamente.
La invención también proporciona un método para monitorizar la eficacia de un tratamiento para el cáncer de próstata, que comprende detectar y/o cuantificar el al menos un péptido de EN-2, o un fragmento del mismo, presente en una muestra biológica procedente de un sujeto. Como antes, puede ser preferible obtener dos
muestras, separadas temporalmente por, por ejemplo, un par de meses, a fin de determinar si ha habido algún progreso en el tratamiento, en otras palabras, si los niveles del al menos un péptido de EN-2, o fragmento del mismo, han aumentado o disminuido. Una disminución de los niveles de dicho al menos un péptido de EN-2 indica que la enfermedad está remitiendo y por tanto que el régimen de tratamiento está teniendo éxito. Dicha monitorización de una enfermedad mostrará rápidamente si un paciente está respondiendo a un tratamiento dado o si es refractario a un tratamiento dado. Si es lo último, entonces se puede proponer un tratamiento alternativo. Por lo tanto, dicho método proporciona una rápida indicación de si el régimen de tratamiento es efectivo y permite al médico alterar dicho régimen hasta que se observe un efecto en el paciente.
En el método de la presente invención, se prefiere que la cantidad del péptido, o de un fragmento del mismo, en una muestra de ensayo se compare con la cantidad presente en uno o más controles y/o en una o más muestras de ensayo previas tomadas con anterioridad a dicho mismo sujeto de ensayo. El periodo de tiempo entre las muestras anteriores y las posteriores a menudo puede ser de unos pocos días, pero puede llegar hasta varios meses o incluso varios años, y será determinado por el médico, en base a la progresión de la enfermedad y del historial médico del paciente. Alternativamente, el control puede ser una muestra de ensayo procedente de un paciente libre de enfermedad.
El péptido, o fragmento del mismo, se detecta confirmando la presencia de dicho biomarcador. La cuantificación de la cantidad de biomarcador presente en una muestra incluye preferiblemente la determinación de la concentración del péptido biomarcador en la muestra. Las etapas de detección y/o cuantificación pueden llevarse a cabo directamente sobre la muestra, o indirectamente sobre un extracto de las mismas, o una dilución de las mismas.
La presente invención se refiere a biomarcadores y cabe destacar que éstos deben ser detectables en el fluido corporal. Algunos miembros de la familia HOX pueden no ser detectables en fluidos corporales y, por tanto, no son biomarcadores según la presente invención.
Los niveles detectables del al menos un péptido HOX, el péptido EN-2, o los fragmentos de los mismos, se discuten en otras publicaciones, pero cabe destacar que puede haber una serie de razones por las que un péptido HOX, el péptido EN-2, o los fragmentos de los mismos, no sean detectables. Sin pretender establecer ninguna teoría, una razón puede ser que el péptido se degrade en el fluido corporal, es decir que no sea “estable”.
Por lo tanto, se prefiere que el al menos un péptido EN-2, o fragmentos del mismo, no se degrade sustancialmente y/o siga siendo detectable (es decir, esté presente en concentraciones detectables) en la periferia del cuerpo, es decir una vena cercana a la superficie de la piel, preferiblemente en el brazo, donde se pueda extraer una muestra con facilidad.
El péptido puede ser liberado en el fluido corporal, tanto por ruptura o lixiviación celular, como por secreción.
La detección y/o cuantificación del al menos un péptido EN-2, o fragmentos del mismo, pueden realizarse mediante cualquier método adecuado para detectar la presencia y/o la cantidad de una proteína o péptido específicos en una muestra biológica. Esto puede ser por detección directa del biomarcador, por ejemplo mediante MALDI-TOF o SELDI.
Sin embargo, también se prefiere que el al menos un péptido EN-2, o fragmento del mismo, sea detectado directa o indirectamente a través de la interacción con un ligando o ligandos. Dichos ligandos pueden incluir un anticuerpo anti-EN-2 o un fragmento de unión del mismo, un aptámero, o un oligonucleótido. Cabe destacar que dichos ligandos deben ser capaces de unirse específicamente al péptido EN-2, o a un fragmento del mismo. Puede estar marcado de forma adecuada y comprender una etiqueta de afinidad. Las etiquetas adecuadas pueden ser fluorescentes, radiactivas o luminiscentes. Las etiquetas pueden unirse directamente al anticuerpo, a través de un elemento de unión.
Por ejemplo, la detección y/o la cuantificación se pueden llevar a cabo mediante uno o más métodos seleccionados del grupo que consiste en: MALDI-TOF, SELDI, sistemas de análisis basados en gel de 1D o de 2D, cromatografía de líquidos, que combina técnicas de cromatografía de líquidos y de espectrometría de masas. Estas últimas pueden incluir, preferiblemente, ICAT® ó iTRAQ® (ambas disponibles en Applied Biosystems, EE.UU.).
Las técnicas de cromatografía de líquidos pueden incluir HPLC (cromatografía de líquidos de alta presión) o incluso cromatografía de líquidos de baja presión (LPLC). Adicionalmente, también se prefieren métodos tales como cromatografía de capa fina, espectroscopia de RMN y cualquier otro método descrito en la presente memoria.
El péptido, o fragmento del mismo, puede ser detectado y/o cuantificado usando métodos inmunológicos, tal como inmunoensayos sándwich, por ejemplo un ensayo inmunoadsorbente ligado a enzima (ELISA), radio-inmunoensayos (RAI), inmunoensayos enzimáticos (EIA), ensayos de transferencia Western, inmunoprecipitación. También se prefieren los inmunoensayos basados en partículas, que pueden incluir, por ejemplo, el uso de partículas de oro, plata o látex, partículas magnéticas o puntos-Q. Dichos métodos pueden llevarse a cabo, por ejemplo, en formato de placa de microtitulación o de tira o sobre un “chip”.
Son particularmente preferidos los ELISAs que comprenden anticuerpos específicos para el al menos un péptido EN-2. El anticuerpo o anticuerpos anti-EN-2 son ligados preferiblemente, bien directamente o a través de un ligando, a una molécula indicadora, tal como un radioisótopo, una molécula fluorescente, una molécula luminiscente o una enzima. Un ejemplo de una enzima preferida es la fosfatasa alcalina, disponible en Invitrogen, R.U., aunque en la técnica se conocen otros indicadores.
Un ejemplo de anticuerpo anti-HOXC4 humano está disponible en Abcam, R.U., nº de catálogo ab24338. Se trata de un anticuerpo anti-HOXC4 humano de conejo y, por tanto, puede ser preferible usar un anticuerpo de IgG anticonejo secundario ligado a un indicador, tal como fosfatasa alcalina, para detectar el complejo de anticuerpo de HOXC4. Un ejemplo de un anticuerpo anti-HOXB6 procede de Abcam, nº de catálogo ab26077. Un ejemplo de anticuerpo anti-HOXB5 procede de Abcam, nº de catálogo ab26079. Un ejemplo de anticuerpo anti-HOXA3 procede de Abcam, nº de catálogo ab28771. Un ejemplo de un anticuerpo anti-HOXA3 procede de Abcam, nº de catálogo ab28771. Un ejemplo de un anticuerpo anti-HOXD9 procede de Abcam, nº de catálogo ab60708. Se conocen ejemplos de otros anticuerpos anti-HOX. Un ejemplo de un anticuerpo anti-EN-2 procede de Abcam, nº de catálogo ab45867.
También se prefieren los métodos de transferencia Western, particularmente porque pueden proporcionar datos de densitometría.
Los niveles comparativos adecuados para la presencia del al menos un péptido EN-2 suficientes para distinguir entre el control, los cánceres de etapa temprana y de etapa avanzada, o combinaciones de los mismos, se han discutido anteriormente.
Cuando se emplean anticuerpos, éstos pueden ser anticuerpos policlonales, monoclonales, biespecíficos, humanizados o quiméricos. Los anticuerpos pueden consistir en una única cadena, pero preferiblemente consistirán en al menos una cadena ligera o una cadena pesada, pero cabe destacar que se requiere al menos una Región Determinante de la Complementariedad (CDR) a fin de unir un epítopo de HOX o un epítopo de EN-2.
Por supuesto, también cabe destacar que el epítopo o epítopos deben estar disponibles para la unión o el reconocimiento por parte del ligando, tal como un anticuerpo. Los anticuerpos anti-HOX y anti-EN-2 ya son conocidos, pero si se requieren otros anticuerpos o ligandos de unión, con diferentes especificidades, entonces podrían obtenerse. Los métodos de preparación de anticuerpos son conocidos en la técnica. Por ejemplo, si se desean anticuerpos policlonales, entonces se puede inmunizar un mamífero seleccionado, tal como un ratón, conejo, cabra o caballo con el antígeno seleccionado, tal como HOX ó EN-2 humanos. A continuación, el suero procedente del animal inmunizado es recolectado y tratado para obtener el anticuerpo, por ejemplo mediante cromatografía de inmunoafinidad. El HOX ó EN-2 humanos podrían, por ejemplo, ser inyectados en conejos disparando una respuesta inmune en el conejo, activando anticuerpos anti-HOX o anti-EN-2, que podrían ser aislados usando métodos estándar.
Por supuesto, los anticuerpos monoclonales podrían ser producidos mediante métodos conocidos en la técnica, y generalmente son preferidos. La metodología general para preparar anticuerpos monoclonales usando tecnología de hibridoma es bien conocida (véase, por ejemplo, Kohler, G. y Milstein, C., Nature 256: 495-497 (1975); Kozbor et al, Immunology Today 4: 72 (1983); Cole et al, 77-96 en Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985).
Por lo tanto, un anticuerpo, tal como son considerados en la presente memoria, debe consistir en una región de unión a epítopo, tal como CDR. Tal como se usa en la presente memoria, el término “anticuerpo” se refiere a moléculas intactas, así como a sus fragmentos, tal como Fab, Fab’, F(ab’)2 y Fv, que son capaces de unirse a un epítopo. Preferiblemente, el anticuerpo también comprende una porción efectora, tal como la región Fc.
El anticuerpo puede ser de cualquier clase adecuada, que incluye IgE, IgM, IgD, IgA y, en particular, IgG. También se contemplan las diversas subclases de estos anticuerpos.
Por tanto, también se prefiere que se use un biosensor para detectar el al menos un péptido biomarcador, o fragmento del mismo. El biosensor puede incorporar un método inmunológico, tal como se ha descrito anteriormente, por ejemplo, para la detección del biomarcador, o un medio o tecnología eléctrica, térmica, magnética, óptica, por ejemplo un holograma, o acústica. Al usar dichos biosensores, se contempla que el biomarcador sea detectado y/o cuantificado. Por tanto, es un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un biosensor para detectar y/o cuantificar el péptido, o un fragmento del mismo.
Preferiblemente, el al menos un biomarcador de EN-2 puede ser detectado usando un biosensor en base al uso de hologramas “inteligentes”, o sistemas acústicos de alta frecuencia, particularmente porque dichos sistemas son susceptibles de disponer configuraciones. Por ejemplo, con sensores de hologramas inteligentes, disponibles en Smart Holograms Limited, Cambridge, R.U., se almacena una imagen holográfica en una película polimérica delgada que es sensibilizada para reaccionar específicamente con el biomarcador. Al ser expuesto, el biomarcador reacciona con el polímero dando lugar a una alteración de la imagen mostrada por el holograma. El resultado de lectura del
test puede ver un cambio en el brillo óptico, la imagen, el color y/o la posición de la imagen. Esto puede ser leído incluso por el ojo.
Cabe destacar que se prefiere que los biosensores capaces de detectar y/o cuantificar el al menos un biomarcador de EN-2, combinen reconocimiento biomolecular con los medios apropiados para convertir la detección de la presencia, o la cuantificación, de dicho biomarcador en una muestra en una señal detectable. Por ejemplo, preferiblemente se pueden emplear elementos de reconocimiento imprimados, tecnología de transistor de película delgada, dispositivos resonantes acústicos magnéticos y otros sistemas acusto-eléctricos novedosos en el presente biosensor para la detección y/o la cuantificación del al menos un biomarcador de EN-2. Preferiblemente, un biosensor según la invención detectará uno o más, preferiblemente dos, tres, cuatro, cinco o los seis de HOXC4, HOXB5, HOXB6, HOXA3, HOXD9 y EN-2. Otros biosensores adicionales preferidos también pueden detectar adicionalmente otros biomarcadores de HOX, como se ha referido anteriormente.
Preferiblemente, el biosensor incluye un ligando y/o un anticuerpo, tal como se ha discutido anteriormente. El biosensor puede ser proporcionado en un sistema o “chip” adecuado, de tal modo que el biosensor sea capaz de unirse específicamente a el al menos un péptido de EN-2, o fragmento del mismo, se proporciona un medio de detección. Los medios de detección adecuados se han discutido anteriormente, pero pueden incluir sistemas indicadores, tales como fosfatasa alcalina, u hologramas inteligentes, capaces de proporcionar una señal detectable para el usuario para indicar que se ha alcanzado la unión específica del al menos un péptido de HOX o EN-2, o un fragmento de los mismos, y, preferiblemente, una indicación de la concentración de HOX o EN-2 o del número de eventos de unión específica que se han producido en dicho sistema o chip.
La presente invención proporciona además kits para dicha detección y/o cuantificación. Dichos kits son útiles en la diagnosis y/o monitorización del cáncer de próstata. Por tanto, dichos kits preferiblemente comprenderán un biosensor tal como un ligando, preferiblemente un anticuerpo, capaz de unirse específicamente a al menos un péptido, o un fragmento del mismo, y un medio para indicar dicha unión específica para el usuario, por ejemplo usando un sistema indicador como se ha descrito anteriormente. Los kits particularmente preferidos incluyen un sistema o un chip.
En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de un biosensor, preferiblemente un ligando y lo más preferiblemente un anticuerpo, capaz de unirse y reconocer específicamente al menos un péptido de EN-2, o un fragmento del mismo, para identificar una sustancia capaz de suprimir la generación del al menos un péptido de EN2, o un fragmento del mismo. Preferiblemente, dicha sustancia es capaz de suprimir la producción del biomarcador por el cáncer de próstata. En otras palabras, el ligando puede ser usado para determinar la eficacia de un tratamiento anti-cáncer de próstata establecido o putativo.
Por lo tanto, un método para detectar la eficacia de un tratamiento anticancerígeno putativo puede incluir las etapas de:
- (a)
- incubar una célula entera que exprese un péptido HOX o un péptido EN-2 y detectar la cantidad de péptido HOX
- o péptido EN-2 liberada,
- (b)
- tratar la célula con un tratamiento anticancerígeno putativo,
- (c)
- detectar la cantidad de péptido HOX o péptido EN-2 liberada después del tratamiento, y
- (d)
- comparar la cantidad de péptido HOX o péptido EN-2 liberada tanto antes como después del tratamiento para ver si el tratamiento anticancerígeno putativo tiene efecto sobre la cantidad de péptido liberada.
Alternativamente, un método puede comprender las etapas de:
- (a)
- incubar un ligando marcado con una célula entera que exprese un péptido HOX o un péptido EN-2 sobre la superficie celular, o una membrana celular que contiene un péptido HOX o un péptido EN-2,
- (b)
- medir la cantidad de ligando marcado unido a la célula entera o a la membrana celular;
- (c)
- añadir un agente anticancerígeno putativo a una mezcla de ligando marcado y la célula entera o la membrana celular de la etapa (a) y dejar que la mezcla alcance el equilibrio;
- (d)
- medir la cantidad de ligando marcado unido a la célula entera o a la membrana celular después de la etapa (c); y
- (e)
- comparar la diferencia de ligando marcado unido en las etapas (b) y (d), de tal modo que el compuesto que provoca la reducción de unión en la etapa (d) se considera un inhibidor de la expresión de HOX o EN-2 y por tanto un agente anticancerígeno.
Por ejemplo, en dicho ensayo se podría usar una línea celular tal como la línea celular de carcinoma de próstata LNCaP. Las células LNCaP podrían cultivarse en presencia o ausencia de un agente anticancerígeno putativo o establecido, y se compararía la expresión relativa de EN-2. Un menor nivel de expresión de EN-2 indicaría una mejor
actividad anticancerígena. Los niveles de expresión podrían detectarse detectando la proteína producida (es decir, el producto final) o detectando el ARN producido (es decir, un producto intermedio). Los métodos de predicción del producto proteínico se han discutido anteriormente. El ARN puede detectarse usando, por ejemplo, PCR cuantitativa
o un sistema de oligonucleótidos.
Lo anterior también se refiere a los métodos y kits de la presente invención.
Otros métodos o kits para uso según la presente invención serán evidentes para el especialista en la técnica. Éstos pueden incluir, por ejemplo, sistemas de detección de biomarcador, que se describen en las solicitudes de patente US-2006-014301, US-2004-063216, WO 01/92879 y WO 02/054936.
Por tanto, la presente invención puede usarse para identificar nuevos tratamientos contra el cáncer de próstata, donde se detectan y/o cuantifican los niveles de al menos un péptido de EN-2, o de un fragmento del mismo, en presencia o en ausencia del agente anticancerígeno putativo, con el objetivo de determinar su eficacia. La presente invención también puede usarse en un método de tecnología de escrutinio de alto rendimiento, por ejemplo en un formato de sistema configurado, tal como sobre un chip o un sistema multipocillo.
Como el cáncer de próstata es una enfermedad masculina, cabe destacar que el sujeto o paciente es un hombre.
Descripción de las figuras
Figura 1: un ejemplo de un ensayo de transferencia Western en busca de proteína HOXC4 en suero. Los resultados también fueron analizados por densitometría, y se muestran como la media de las seis muestras de cada grupo. Las barras de error muestran el error estándar de la media. Estos datos indican que HOXC4 es potencialmente un marcador diagnóstico específico y preciso para el cáncer de próstata, tanto en la etapa temprana como en la etapa avanzada de la enfermedad.
Figura 2: detección de HOXB6 en seis pacientes con cáncer de próstata de etapa temprana, donde los tumores son pequeños y están confinados a la próstata, y de seis controles de la misma edad.
Figura 3: (a) análisis RT-QPCR de la expresión de EN-2 en LNCaP y células tumorales primarias (nivel de tránscrito como una proporción de β-actina). (b,c) Biopsia de núcleo de un adenocarcinoma prostático teñido con anticuerpo anti-En2. La tinción positiva de En2 (marrón) está presente en el citoplasma de las células tumorales, con una tinción más fuerte en el borde luminal (1). Las masas positivas de En2 son visibles y están unidas al borde luminal (2) o están libres en el lumen (3). Los núcleos son teñidos de azul. Aumentos: (a) x100, (b) x60.
Figura 4: secciones a través de biopsias de núcleo de TMA de (a) tejido de próstata normal, (b) hipertrofia benigna de la próstata, y (c y d) tumor de próstata maligno. La tinción de EN-2 (marrón) está presente en las células estromales (flecha blanca) y en las glándulas con la tinción aparente más fuerte en el borde luminal (cabezas de flecha). Los núcleos son teñidos de azul. Aumentos: (a-c) x60, (d) x100.
Figura 5: detección mediante transferencia Western de proteína EN-2 en medio de cultivo.
Figura 6: proteína EN-2 en orina. Se recolectó orina de individuos que estaban siendo examinados en busca de síntomas consistentes con cáncer de próstata, y que estaban siendo escrutados para determinar la presencia de proteína EN-2. La presencia o la ausencia de cáncer se evaluaron mediante biopsia. El PM predicho de la EN-2 es de 30 kDa pero también se detectó una segunda banda de 33 kDa en el control positivo (extracto de cerebelo de ratón). La banda de 30 kDa está presente exclusivamente en la orina del 50% de los pacientes que tenían células de cáncer de próstata en su biopsia (C Pa), no estaba presente en los pacientes con biopsias negativas o con hipertrofia benigna de la próstata (BHP) o con neoplasia intraepitelial prostática de grado alto (HGPIN).
Figura 7: detección de HOXB5 en tres pacientes con cáncer de próstata de etapa temprana donde los tumores son pequeños y están confinados a la próstata, tres pacientes con cáncer de próstata de etapa avanzada y tres controles de la misma edad.
Figura 8: se comparan los niveles de expresión de varios genes HOXA y HOXD en tejido tumoral con tejido normal adyacente. DU145 y PC3 son líneas celulares derivadas de tumores de próstata.
Ejemplo 1
HOXC4
Se obtuvo suero de seis pacientes con cáncer de próstata avanzado, refractario a hormonas, seis pacientes con cáncer de próstata de etapa temprana donde los tumores son pequeños y están confinados a la próstata, y seis controles de la misma edad. Éste fue desalinizado y fraccionado usando un gel PAGE/SDS al 12,5%. Se detectó proteína HOXC4 humana (UniProtKB / Swiss-Prot número de entrada P09017) usando ensayos de transferencia western con un anticuerpo anti-HOXC4 humano de conejo (Abcam, R.U., número de catálogo ab24338), junto con un anticuerpo secundario IgG anti-conejo ligado a fosfatasa alcalina (Invitrogen, R.U.). Usando este método, detectamos niveles elevados de proteína HOXC4 en el suero de todos los pacientes de cáncer de próstata, pero solo niveles muy bajos en el suero de control de la misma edad (Figura 1).
Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 1.
Se pudo usar HOXC4 como base de un ensayo diagnóstico y/o prognóstico para cáncer de próstata usando una
5 técnica de ensayo estándar tal como ELISA. Esto implicaría el uso de un anticuerpo anti-HOXC4 ligado a un indicador tal como fosfatasa alcalina con el objetivo de cuantificar la cantidad de proteína HOXC4 en muestras de suero de pacientes. También podrían usarse otras metodologías, que incluyen los ensayos de transferencia western. La cantidad de proteína HOXC4 proporcionaría una indicación de si la enfermedad está presente y de qué etapa se ha alcanzado.
Nombre de gel: HOXC4 blot 131006 (Imagen 1D sin refinar) Índice Nombre Paciente Diagnosis Volumen Vol. Ady. % Vol. Ady.
DO*mm2 DO*mm2 1 U1 HR29 Cáncer 6,844796 0,272431 24,320686 2 U2 HR28 Cáncer 6,460027 0,092836 8,2877258 3 U3 HR27 Cáncer 9,731784 0,393355 35,115964 4 U4 SR5 Cáncer 6,108735 0,086538 7,7255409
temprano 5 U5 SR2 Cáncer 6,26387 0,01121 1,0007083 temprano 6 U6 SR1 Cáncer 8,427193 0,15222 13,589161
temprano 7 U7 VR30 Sano 6,459172 0,045458 4,0581642 8 U8 VR23 Sano 9,760506 0,062926 5,6175665 9 U9 VR21 Sano 6,740683 0,003187 0,2844833
- NB. Membranas probadas con anticuerpo primario solo durante 1 hora.
- Valores medios
- % de incremento
- sd
- sem
- 15
- Control 0,037190112 0,030716 0,0177548 0
- Cáncer temprano
- 0,08332277 0,07056 0,0407864 124,0455
- Cáncer avanzado
- 0,252873795 0,151211 0,0874053 579,949
- Tabla 1
- 20
- SEQ ID NO. 1:
- HOXC4 nº de acceso NCBI P09017
Ejemplo 2
HOXB6
5 La detección de HOXB6 en estas muestras se realizó exactamente como para el HOXC4, excepto en que el anticuerpo primario era HOXB6 humano anti-conejo (de Abcam, nº cat. Ab26077). Los valores relativos para proteína HOXB6 fueron determinados mediante densitometría de la película de rayos-X (usando las bandas localizadas en su peso molecular predicho). Estos valores son la densidad óptica de la banda referidos a los del ruido de fondo local. Por lo tanto, cabe destacar que es posible un valor de densitometría comparativa negativo, tal
10 como se muestra en los Controles de la misma edad (AMCs, del inglés “Age Matched Controls”), aunque cabe destacar que esto no se traduce en una cantidad negativa de proteína HOXB6.
Estos datos se muestran gráficamente en la Figura 2.
Tabla 2
HOXB6 en suero Los valores son densidad óptica relativa de las bandas
media sd sem AMC1 -0,02671 AMC -0,09016 0,064043 0,036977 AMC2 -0,08899 Cáncer temprano 0,261033 0,076253 0,044026 AMC3 -0,15478 Temprano 1 0,182775 Temprano 2 0,33511 Temprano 3 0,265214
Ejemplo 3
Se evaluaron los niveles de expresión de EN-2 usando PCR cuantitativa (QPCR) en la línea celular de carcinoma de próstata humano LNCaP (Horoszewicz et al., 1983). Esta es una línea celular derivada de una lesión metastásica de un adenocarcinoma de próstata humana, y se usa ampliamente como modelo in vitro de dicho cáncer. Además, se evaluó la expresión de EN-2 en tejido obtenido de biopsias de tumores de próstata. Ambas muestras expresaron EN-2. Las células tumorales primarias también expresaron EN-2 como proteína. Ésta pudo detectarse en secciones de adenocarcinomas prostáticos (Figura 3a). La tinción de EN-2 en estas secciones está presente tanto en los compartimentos citoplasmáticos como en los nucleares, pero tiene la máxima intensidad en los bordes luminales y en los bulbos secretores que entran en el lumen (Figura 3b,c).
Para examinar con más detalle el grado de presencia de EN-2 en tejido procedente de próstata normal, hipertrofia benigna y tumores malignos, se tiñó un microsistema de tejidos (TMA, del inglés “tissue microarray”) que contenía secciones representativas de cada uno con un anticuerpo anti-EN-2. Esto confirmó que EN-2 se expresa fuertemente en glándulas con malignidad, especialmente en los bordes luminales (Figura 4), aunque hay algo de tinción en glándulas procedentes de tejido normal e hipertrófico. Todos los tejidos mostraron tinción de EN-2 en las células estromales (Figura 4). Con el objetivo de cuantificar la tinción en las glándulas, se puntuó cada tejido entre 0 y 3, donde 0 representa que no hay tinción y 3 la tinción más fuerte. En base a esto, las glándulas de tejido normal (Figura 4a) obtuvieron una puntuación media de 0,5 (n=10, sd=0,52), de hiperplasia benigna (Figura 4b) 0,67 (n=6, sd=0,51), y de tumores malignos (Figura 4c-d) 2,3 (n=6, sd=0,52).
Estos datos demuestran claramente que EN-2 se expresa en dichas células de cáncer de próstata.
Ejemplo 4
El medio que rodea a LNCaP y las células de tumor de próstata primarias fue examinado para establecer si EN-2 puede ser secretada desde dichas células. El medio, usado para cultivar ambos tipos de células durante dos horas, fue desalinizado y concentrado. Las proteínas contenidas dentro de dicho concentrado fueron resueltas a continuación sobre un gel de acrilamida. La tinción western reveló la presencia de bandas específicas de EN-2 en el medio que rodea a ambos tipos de células (Figura 5), y la cuantificación usando cantidades estándar de proteína EN-2 transcrita in vitro indicó que la cantidad de EN-2 en el medio usado para cultivar células LNCaP fue de 3 ng/mL, mientras que las células tumorales primarias produjeron 1,75 ng/mL en 48 horas.
Ejemplo 5
Se obtuvieron muestras de orina de 17 individuos, que habían sido sometidos recientemente a biopsia y masaje prostático. De estos individuos, se observó que 10 tenían cáncer a través de la biopsia. De los demás, dos presentaban neoplasia intraepitelial prostática de grado elevado (HGPIN), tres mostraban signos de hipertrofia benigna y dos no tenían células cancerosas en la sección biopsiada. Cinco de los pacientes diagnosticados con cáncer presentaban grandes cantidades de EN-2 en su orina, mientras que ninguna de las muestras de orina de los individuos no diagnosticados con cáncer contenía una cantidad significativa de proteína EN-2 (Figura 6).
Ejemplo 6
HOXB5
La detección de HOXB5 en estas muestras fue realizada exactamente como para HOXC4 y HOXB6, excepto en que el anticuerpo primario fue HOXB5 humano anti-conejo (de Abcam, nº cat. Ab26079). Los valores relativos correspondientes a proteína HOXB5 fueron determinados mediante densitometría de la película de rayos-X (usando las bandas localizadas en su peso molecular predicho). Estos valores son la densidad óptica de la banda relativa al ruido de fondo local.
- Tabla 3
- Valores medios
- sd sem % de aumento
- AMC
- 0,006597 0,005948 0,003438 0
- Cáncer temp.
- 0,244012 0,055004 0,031794 3598,808
- Cáncer avanz.
- 0,471597 0,154221 0,089145 7048,621
Estos datos se representan gráficamente en la Figura 7
Ejemplo 7
Se obtuvieron muestras de orina de 17 individuos, sospechosos de padecer cáncer de próstata y que posteriormente habían sido diagnosticados con la enfermedad. Se determinaron los niveles proteicos de EN2 en las muestras de orina tal como se ha descrito anteriormente. Las muestras de orina de 8 (47%) de estos individuos mostraron niveles elevados de EN2. Por el contrario, en muestras de orina obtenidas de 15 pacientes sospechosos de padecer cáncer de próstata, pero en los que no se había confirmado posteriormente el cáncer, ninguno (0%) presentó niveles elevados de EN2. Cabe resaltar que 3 de los pacientes diagnosticados con cáncer de próstata, que mostraron niveles elevados de EN2 en sus muestras de orina, no presentaban niveles elevados de PSA. Esto ilustra que los
5 métodos de la invención son efectivos en la detección de cáncer donde los métodos de detección convencionales han fallado.
Ejemplo 8
Detección de la expresión de genes HOX en tejido normal y tumoral.
Extracción de ARN: el ARN de tejido tumoral y normal adyacente fue adquirido a Ambion, EE.UU.
10 El ARN procedente de cultivos celulares fue extraído usando el Mini Kit RNeasy (Qiagen, R.U.).
Síntesis de ADNc: primero se desnaturalizó ARN calentando a 65ºC durante cinco minutos. Se incubaron 1-5 mg de ARN en un volumen de 50 mL a 37ºC durante una hora con concentraciones finales de DTT 10 mM, dNTPmix 1 mM, así como 100 mg/mL de cebadores polyT, 200 unidades de transcriptasa inversa (Invitrogen, EE.UU.) y 40 unidades de RNASEout (Invitrogen, EE.UU.). La reacción de síntesis de ADNc fue detenida colocando los tubos a 65ºC
15 durante cinco minutos.
PCR en tiempo real: se llevó a cabo RT-PCR semi cuantitativa usando la máquina de PCR en tiempo real MX4000 de Stratagene. El Stratagene MX4000 mide la acumulación de producto de PCR durante la fase exponencial de la reacción, antes de que la amplificación se vuelva vulnerable a la limitación de reactivos y la variabilidad de los ciclos. La fluorescencia aumenta de acuerdo al aumento de los niveles de producto de PCR. La cantidad relativa de cada
20 tránscrito se determinó como una relación con la cantidad de tránscrito de Beta-actina en cada muestra.
Los cebadores usados se muestran en la Tabla 4 mostrada a continuación.
- Gen
- Cebador directo Cebador inverso
- HOXA1
- CTGGCCCTGGCTACGTATAA (SEQ ID NO: 7) TCCAACTTTCCCTGTTTTGG (SEQ ID NO: 8)
- HOXA2
- TTCAGCAAAATGCCCTCTCT (SEQ ID NO: 9) TAGGCCAGCTCCACAGTTCT (SEQ ID NO: 10)
- HOXA3
- ACCTGTGATAGTGGGCTTGG (SEQ ID NO: 11) ATACAGCCATTCCAGCAACC (SEQ ID NO: 12)
- HOXA4
- CCCTGGATGAAGAAGATCCA (SEQ ID NO: 13) AATTGGAGGATCGCATCTTG (SEQ ID NO: 14)
- HOXA5
- CCGGAGAATGAAGTGGAAAA (SEQ ID NO: 15) ACGAGAACAGGGCTTCTTCA (SEQ ID NO: 16)
- HOXA6
- AAAGCACTCCATGACGAAGG (SEQ ID NO: 17) TCCTTCTCCAGCTCCAGTGT (SEQ ID NO: 18)
- HOXA7
- TGGTGTAAATCTGGGGGTGT (SEQ ID NO: 19) TCTGATAAAGGGGGCTGTTG (SEQ ID NO: 20)
- HOXA9
- AATAACCCAGCAGCCAACTG (SEQ ID NO: 21) ATTTTCATCCTGCGGTTCTG (SEQ ID NO: 22)
- HOXA10
- ACACTGGAGCTGGAGAAGGA (SEQ ID NO: 23) GATCCGGTTTTCTCGATTCA (SEQ ID NO: 24)
- HOXA11
- CGCTGCCCCTATACCAAGTA (SEQ ID NO: 25) GTCAAGGGCAAAATCTGCAT (SEQ ID NO: 26)
- HOXA13
- GGATATCAGCCACGACGAAT (SEQ ID NO: 27) ATTATCTGGGCAAAGCAACG (SEQ ID NO: 28)
- HOXD1
- TTCAGCACCAAGCAACTGAC (SEQ ID NO: 29) TAGTGGGGGTTGTTCCAGAG (SEQ ID NO: 30)
- HOXD3
- CAGCCTCCTGGTCTGAACTC (SEQ ID NO: 31) ATCCAGGGGAAGATCTGCTT (SEQ ID NO: 32)
- HOXD4
- TCAAATGTGCCATAGCAAGC (SEQ ID NO: 33) TCCATAGGGCCCTCCTACTT (SEQ ID NO: 34)
- HOXD8
- TCAAATGTTTCCGTGGATGA (SEQ ID NO: 35) GCTCTTGGGCTTCCTTTTTC (SEQ ID NO: 36)
- HOXD9
- TCCCCCATGTTTCTGAAAAG (SEQ ID NO: 37) GGGCTCCTCTAAGCCTCACT (SEQ ID NO: 38)
- HOXD10
- GCTCCTTCACCACCAACATT (SEQ ID NO: 39) AAATATCCAGGGACGGGAAC (SEQ ID NO: 40)
- HOXD11
- GGGGCTACGCTCCCTACTAC (SEQ ID NO: 41) GCTGCCTCGTAGAACTGGTC (SEQ ID NO: 42)
- HOXD12
- CGCTTCCCCCTATCTCCTAC (SEQ ID NO: 43) CTTCGGGCGCATAGAACTTA (SEQ ID NO: 44)
- Gen
- Cebador directo Cebador inverso
- HOXD13
- GGGATGTGGCTCTAAATCA (SEQ ID NO: 45) AACCTGGACCACATCAGGAG (SEQ ID NO: 46)
Los resultados se muestran en la Figura 8. Usando este método, se identificaron HOXA3 y HOXD9 como biomarcadores potenciales para cáncer de próstata, ya que dichos genes se sobreexpresan claramente en muestras de tejido tumoral.
SEQ ID NO. 5 (polipéptido HOXA3)
SEQ ID NO. 6 (polipéptido HOXD9)
Referencias
10 Chatelin, L., Volovitch, M., Joliot, A.H., Perez, F. y Prochiantz, A. (1996) Transcription factor hoxa-5 is taken up by cells in culture and conveyed to their nuclei. Mech. Dev. 55, 111-117.
Cosgaya, J.M., Aranda, A., Cruces, J. y Martin-Blanco, E. (1998) Neuronal differentiation of PC12 cells induced by engrailed homeodomain is DNA-binding specific and independent of MAP kinases. J. Cell Sci. 111 (Pt 16), 23772384.
15 Derossi, D., Calvet, S., Trembleau, A, Brunissen, A., Chassaing, G. y Prochiantz, A. (1996) Cell internalization of the third helix of the Antennapedia homeodomain is receptor-independent. J. Biol. Chem. 271, 18188-18193.
Garcia-Bellido, A. y Santamaria, P. (1972) Developmental analysis of the wing disc in the mutant Engrailed of Drosophila melanogaster. Genetics 72, 87-104.
Joliot, A., Maizel, A., Rosenberg, D., Trembleau, A., Dupas, S., Volovitch, M. y Prochiantz, A. (1998) Identification of 20 a signal sequence necessary for the unconventional secretion of Engrailed homeoprotein. Curr. Biol. 8, 856-863.
Kuefer R., Hofer M.D., Zorn C.S., Engel O., Volkmer B.G., Juarez-Brito M.A., Eggel M., Gschwend J.E., Rubin M.A., Day M.L. Assessment of a fragment of e-cadherin as a serum biomarker with predictive value for prostate cancer. Br.
J. Cancer. 2005 Jun 6; 92(11): 2018-23.
Maizel, A., Bensaude, O., Prochiantz, A. y Joliot, A. (1999) A short region of its homeodomain is necessary for 25 engrailed nuclear export and secretion. Development 126, 3183-3190.
Martin, N.L., Saba-El-Leil, M.K., Sadekova, S., Meloche, S. y Sauvageau, G. (2005) EN-2 is a candidate oncogene in human breast cancer. Oncogene 24, 6890-6901.
Miller G.J., Miller H.L., van Bokhoven A., Lambert J.R., Werahera P.N., Schirripa O., Lucia M.S., Nordeen S.K. Aberrant HOXC expression accompanies the malignant phenotype in human prostate. Cancer Res. 2003 Sep 15; 30 63(18): 5879-88.
Morgan R. Hox genes: a continuation of embryonic patterning? Trends Genet. 2006 Feb; 22(2): 67-9.
Morgan R. Engrailed: complexity and economy of a multi-functional transcription factor. FEBS Lett. 2006 May 15; 580(11): 2531-3.
Petricoin E.F., Ardekani A.M., Hitt B.A., Levine P.J., Fusaro V.A., Steinberg S.M., Mills G.B., Simone C., Fishman D.A., Kohn E.C., Liotta L.A. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet. 2002 Feb 16; 359(9306): 572-7.
- LISTA DE SECUENCIAS
- <110> The University of Surrey
- 5
- <120> Cancer Biomarkers
- <130> P048286WO
- 10
- <150> GB0625321.5 <151>
- <150> GB0719792.4 <151>
- 15
- <160> 46
- <170> SeqWin99, versión 1.02
- 20
- <210> 1 <211> 264 <212> PRT <213> Homo sapiens
- 25
- <400> 1
<210> 2
<211> 224
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
<210> 3
<211> 269
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
<210> 4
<211> 333
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
<210> 5
<211> 443
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
<210> 6
<211> 342
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
- 5
- <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 10
- <220> <223> Cebador HOXA1 directo <400> 7 ctggccctgg ctacgtataa 20
- 15
- <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 20
- <220> <223> Cebador HOXA1 inverso
- <400> 8 tccaactttc cctgttttgg
- 20
- 25
- <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 30
- <220> <223> Cebador HOXA2 directo
- 35 40
- <400> 9 ttcagcaaaa tgccctctct <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial <220> <223> Cebador HOXA2 inverso 20
- 45
- <400> 10 taggccagct ccacagttct 20
- 50
- <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA3 directo
- <400> 11 acctgtgata gtgggcttgg
- 20
- 5
- <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA3 inverso
- <400> 12 atacagccat tccagcaacc
- 20
- 15
- <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA4 directo
- 25
- <400> 13 ccctggatga agaagatcca <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial 20
- <220> <223> Cebador HOXA4 inverso
- 35
- <400> 14 aattggagga tcgcatcttg 20
- <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA5 directo
- 45
- <400> 15 ccggagaatg aagtggaaaa 20
- <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 55
- <220> <223> Cebador HOXA5 inverso <400> 16 acgagaacag ggcttcttca 20
- <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 65
- <220> <223> Cebador HOXA6 directo
- <400> 17 aaagcactcc atgacgaagg
- 20
- 5
- <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA6 inverso
- 15
- <400> 18 tccttctcca gctccagtgt <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial 20
- <220> <223> Cebador HOXA7 directo
- 25
- <400> 19 tggtgtaaat ctgggggtgt 20
- <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA7 inverso
- 35
- <400> 20 tctgataaag ggggctgttg 20
- <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 45
- <220> <223> Cebador HOXA9 directo <400> 21 aataacccag cagccaactg 20
- <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 55
- <220> <223> Cebador HOXA9 inverso
- <400> 22 attttcatcc tgcggttctg
- 20
- <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 65
- <220>
- <223> Cebador HOXA10 directo
- 5
- <400> 23 acactggagc tggagaagga <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial 20
- <220> <223> Cebador HOXA10 inverso
- 15
- <400> 24 gatccggttt tctcgattca 20
- <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXA11 directo
- 25
- <400> 25 cgctgcccct ataccaagta 20
- <210> 26 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 35
- <220> <223> Cebador HOXA11 inverso <400> 26 gtcaagggca aaatctgcat 20
- <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 45
- <220> <223> Cebador HOXA13 directo
- <400> 27 ggatatcagc cacgacgaat
- 20
- <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 55
- <220> <223> Cebador HOXA13 inverso
- <400> 28 attatctggg caaagcaacg
- 20
- 65
- <210> 29 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXD1 directo
- 5
- <400> 29 ttcagcacca agcaactgac 20
- <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXD1 inverso
- 15
- <400> 30 tagtgggggt tgttccagag 20
- <210> 31 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 25
- <220> <223> Cebador HOXD3 directo <400> 31 cagcctcctg gtctgaactc 20
- <210> 32 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 35
- <220> <223> Cebador HOXD3 inverso
- <400> 32 atccagggga agatctgctt
- 20
- <210> 33 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 45
- <220> <223> Cebador HOXD4 directo
- <400> 33 tcaaatgtgc catagcaagc
- 20
- 55
- <210> 34 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial <220> <223> Cebador HOXD4 inverso
- <400> 34 tccatagggc cctcctactt
- 20
- 65
- <210> 35 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXD8 directo
- 5
- <400> 35 tcaaatgttt ccgtggatga 20
- <210> 36 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 15
- <220> <223> Cebador HOXD8 inverso <400> 36 gctcttgggc ttcctttttc 20
- <210> 37 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 25
- <220> <223> Cebador HOXD9 directo
- <400> 37 tcccccatgt ttctgaaaag
- 20
- <210> 38 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 35
- <220> <223> Cebador HOXD9 inverso
- <400> 38 gggctcctct aagcctcact
- 20
- 45
- <210> 39 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial <220> <223> Cebador HOXD10 directo
- <400> 39 gctccttcac caccaacatt
- 20
- 55
- <210> 40 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXD10 inverso
- <400> 40 aaatatccag ggacgggaac
- 20
- 65
- <210> 41 <211> 20 <212> DNA
- <213> Secuencia Artificial
- 5
- <220> <223> Cebador HOXD11 directo <400> 41 ggggctacgc tccctactac 20
- 10
- <210> 42 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 15
- <220> <223> Cebador HOXD11 inverso
- <400> 42 gctgcctcgt agaactggtc
- 20
- 20
- <210> 43 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 25
- <220> <223> Cebador HOXD12 directo
- 30 35
- <400> 43 cgcttccccc tatctcctac <210> 44 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial <220> <223> Cebador HOXD12 inverso 20
- 40
- <400> 44 cttcgggcgc atagaactta 20
- 45
- <210> 45 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- <220> <223> Cebador HOXD13 directo
- 50
- <400> 45 ggggatgtgg ctctaaatca 20
- 55
- <210> 46 <211> 20 <212> DNA <213> Secuencia Artificial
- 60
- <220> <223> Cebador HOXD13 inverso <400> 46 aacctggacc acatcaggag 20
Claims (8)
- REIVINDICACIONES1. Un método de diagnóstico o monitorización de la progresión de cáncer de próstata que comprende cuantificar o detectar la cantidad de al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o un fragmento del mismo, en orina y compararlo con la cantidad de dicho al menos un péptido en una muestra de ensayo de orina con la cantidad presente en una muestra de orina de control normal procedente de un sujeto normal sin cáncer, donde el factor de transcripción que contiene homeodominio es un péptido EN-2 que comprende la SEQ ID NO: 4, y donde el fragmento tiene al menos un 80% de homología de secuencia con respecto a la SEQ ID NO: 4, más preferiblemente un 85%, más preferiblemente un 90%, más preferiblemente un 95%, más preferiblemente un 97%, más preferiblemente un 99% y lo más preferiblemente un 99,9% de homología de secuencia con respecto a dicha SEQ ID NO: 4, donde un aumento del nivel del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o de un fragmento del mismo, que se observe en la muestra de ensayo es indicativo de que la enfermedad está en progresoo de que se ha iniciado.
-
- 2.
- Un método según la reivindicación 1, donde (A) el aumento es significativo estadísticamente, determinado usando un “test-t” que proporciona intervalos de confianza de preferiblemente al menos el 80%, más preferiblemente al menos el 85%, más preferiblemente al menos el 90%, más preferiblemente al menos el 95%, más preferiblemente al menos el 99%, más preferiblemente al menos el 99,5%, más preferiblemente al menos el 99,95%, y lo más preferiblemente al menos el 99,99%. y/o (B) (i) un aumento entre el control y la muestra indicativo de cáncer de próstata en etapa temprana oscila aproximadamente entre 110 y 200%, y lo más preferiblemente está alrededor de 125%, o (ii) un aumento entre el control y una muestra indicativo de cáncer de próstata de etapa avanzada oscila aproximadamente entre 550 y 620%, más preferiblemente oscila aproximadamente entre 560 y 600%, más preferiblemente oscila aproximadamente entre 570 y 590%, y lo más preferiblemente está alrededor de 580%, o (iii) un aumento, relativo a una muestra o control de etapa temprana, que oscila aproximadamente entre 100 y 300%, y preferiblemente de aproximadamente 200%, es indicativo de progresión del cáncer desde una etapa temprana a una etapa avanzada.
-
- 3.
- Un método según la reivindicación 1 ó 2, para detectar el inicio, la progresión, la estabilización, el alivio y/o la remisión de cáncer de próstata o la eficacia de un tratamiento para cáncer de próstata, donde opcionalmente se proporcionan al menos dos etapas de detección y/o cuantificación, espaciadas temporalmente.
-
- 4.
- Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la detección y/o la cuantificación del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o un fragmento del mismo, detectable en orina se realiza mediante uno o más del grupo que consiste en: MALDI-TOF, SELDI, por interacción con un ligando o ligandos, sistemas de análisis basados en gel 1D ó 2D, Cromatografía de Líquidos que combine cromatografía de líquidos y técnicas de espectrometría de masas, incluyendo ICAT® o iTRAQ®, cromatografía de capa fina, y espectroscopía de RMN.
-
- 5.
- Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la detección y/o la cuantificación del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o de un fragmento del mismo, se realiza mediante uno o más del grupo que consiste en: inmunoensayos tipo sándwich, ensayos inmunosorbentes ligados a enzima (ELISAs), radio-inmunoensayos (RAI), inmunoensayos enzimáticos (EIA), ensayos de transferencia Western, inmunoprecipitación, e inmunoensayos basados en partículas, que incluyen partículas de oro, plata ó látex, partículas magnéticas o puntos-Q, donde opcionalmente la detección y/o la cuantificación del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o de un fragmento del mismo, se lleva a cabo sobre una placa de microtitulación, en formato de tira, sistema o sobre un chip, donde opcionalmente la detección y/o la cuantificación del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o de un fragmento del mismo, se realiza mediante un ELISA que comprende anticuerpos específicos para el al menos un péptido EN-2, o un fragmento del mismo, preferiblemente unido a un indicador.
-
- 6.
- Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la detección y/o la cuantificación del al menos un péptido de EN-2, o de un fragmento del mismo, se realiza mediante un biosensor.
-
- 7.
- Un uso in vitro del al menos un factor de transcripción que contiene homeodominio, o de un fragmento del mismo, como biomarcador para cáncer de próstata, donde el factor de transcripción que contiene homeodominio es un péptido de EN-2 que comprende la SEQ ID NO: 4, y donde el fragmento tiene al menos un 80% de homología de secuencia con respecto a la SEQ ID NO: 4, más preferiblemente un 85%, más preferiblemente un 90%, más preferiblemente un 95%, más preferiblemente un 97%, más preferiblemente un 99% y lo más preferiblemente un 99,9% de homología de secuencia con respecto a dicha SEQ ID NO: 4, donde el uso comprende la detección de la cantidad del factor de transcripción que contiene homeodominio, o de un fragmento del mismo, en orina.
-
- 8.
- El uso según la reivindicación 7, donde dicho uso es en un método seleccionado del grupo que consiste en: escrutinio clínico, métodos de determinación de prognosis, monitorización de resultados de terapia, método de identificación de pacientes con mayor probabilidad de responder a un tratamiento terapéutico particular, y escrutinio y desarrollo de fármacos, donde opcionalmente dichos pacientes han sido diagnosticados previamente como negativos para cáncer usando un ensayo que detecta PSA.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0625321 | 2006-12-19 | ||
| GBGB0625321.5A GB0625321D0 (en) | 2006-12-19 | 2006-12-19 | Cancer biomarker |
| GB0719792 | 2007-10-10 | ||
| GBGB0719792.4A GB0719792D0 (en) | 2006-12-19 | 2007-10-10 | Cancer biomarkers |
| PCT/GB2007/004902 WO2008075056A1 (en) | 2006-12-19 | 2007-12-19 | Cancer biomarkers |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2445185T3 true ES2445185T3 (es) | 2014-02-28 |
Family
ID=39265269
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES07848631.3T Active ES2445185T3 (es) | 2006-12-19 | 2007-12-19 | Biomarcadores de cáncer |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8460882B2 (es) |
| EP (1) | EP2115472B1 (es) |
| JP (1) | JP5683108B2 (es) |
| CN (1) | CN101675341B (es) |
| AU (1) | AU2007335999B2 (es) |
| BR (1) | BRPI0720371B8 (es) |
| CA (1) | CA2671939C (es) |
| CY (1) | CY1115178T1 (es) |
| DK (1) | DK2115472T3 (es) |
| ES (1) | ES2445185T3 (es) |
| GB (2) | GB0625321D0 (es) |
| IL (1) | IL199241A (es) |
| MX (1) | MX2009006378A (es) |
| NZ (1) | NZ577548A (es) |
| PL (1) | PL2115472T3 (es) |
| PT (1) | PT2115472E (es) |
| RU (1) | RU2460075C2 (es) |
| SI (1) | SI2115472T1 (es) |
| WO (1) | WO2008075056A1 (es) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8461126B2 (en) | 2005-10-14 | 2013-06-11 | Phigenix, Inc. | Targeting EN2, PAX2, and/or DEFB1 for treatment of prostate conditions |
| DE102006047617B4 (de) | 2006-10-09 | 2008-11-27 | Clariant International Limited | Verfahren zur Herstellung basischer (Meth)acrylamide |
| DE102008017216B4 (de) | 2008-04-04 | 2013-08-14 | Clariant International Ltd. | Kontinuierliches Verfahren zur Herstellung von Fettsäureamiden |
| GB0823445D0 (en) | 2008-12-23 | 2009-01-28 | Univ Surrey | Biomarker |
| DE102009031059A1 (de) | 2009-06-30 | 2011-01-05 | Clariant International Ltd. | Vorrichtung zur kontinuierlichen Durchführung chemischer Reaktionen bei hohen Temperaturen |
| RU2012100903A (ru) * | 2009-07-13 | 2013-08-20 | Зе Юниверсити Оф Саррей | Терапевтические пептиды, полипептиды и последовательности нуклеиновых кислот |
| GB0912175D0 (en) * | 2009-07-13 | 2009-08-26 | Univ Surrey | Biomarker |
| GB0912190D0 (en) * | 2009-07-13 | 2009-08-26 | Univ Surrey | Biomarker |
| DE102009042523B4 (de) | 2009-09-22 | 2012-02-16 | Clariant International Ltd. | Vorrichtung und Verfahren zur kontinuierlichen Durchführung heterogen katalysierter chemischer Reaktionen bei hohen Temperaturen |
| DE102009042522A1 (de) | 2009-09-22 | 2011-04-07 | Clariant International Ltd. | Kontinuierliches Umesterungsverfahren |
| GB0921329D0 (en) * | 2009-12-04 | 2010-01-20 | Univ Surrey | Biomarker |
| DE102010056565A1 (de) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Clariant International Ltd. | Verfahren zur Modifizierung Hydroxylgruppen tragender Polymere |
| US20140106363A1 (en) * | 2011-05-12 | 2014-04-17 | Noviogendix Research B.V. | Molecular markers in prostate cancer |
| WO2012152800A1 (en) * | 2011-05-12 | 2012-11-15 | Noviogendix Research B.V. | Molecular markers in prostate cancer |
| CN103797120B (zh) * | 2011-09-16 | 2017-04-12 | 上海长海医院 | 前列腺癌的生物学标志物、治疗靶点及其用途 |
| CN104114189A (zh) * | 2011-12-05 | 2014-10-22 | 菲吉尼克斯公司 | 用于治疗前列腺病的靶向en2、pax2和/或defb1 |
| WO2014005138A1 (en) * | 2012-06-29 | 2014-01-03 | Kerschensteiner Daniel A | Colorimetric gelatinase assay |
| WO2014025961A1 (en) * | 2012-08-10 | 2014-02-13 | Analiza, Inc. | Methods and devices for analyzing species to determine diseases |
| CA2910327A1 (en) * | 2013-05-09 | 2014-11-13 | Rui Li | Method and system for assessing health condition |
| WO2016102560A1 (en) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | The University Of Surrey | Glycosylated biomarker |
| KR101698654B1 (ko) * | 2014-12-24 | 2017-01-20 | 포항공과대학교 산학협력단 | En2에 특이적으로 결합하는 dna 압타머 및 이의 용도 |
| US11827938B2 (en) * | 2015-05-29 | 2023-11-28 | Koninklijke Philips N.V. | Methods of prostate cancer prognosis |
| CA2999209A1 (en) * | 2015-09-23 | 2017-05-04 | Centre National De La Recherche Scientifique | Homeoproteins for use in the treatment of neurodegenerative disorders |
| CN106282347A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-01-04 | 中南大学 | HoxC11作为生物标志物在制备肺腺癌的预诊断试剂中的应用 |
| WO2018119715A1 (zh) * | 2016-12-28 | 2018-07-05 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种获得t细胞的方法及应用 |
| KR101777085B1 (ko) | 2017-02-23 | 2017-09-11 | 주식회사 성균바이오텍 | En2 단백질의 면역원성 단편 펩타이드 또는 이를 특이적으로 인식하는 항체 조성물 |
| KR101777259B1 (ko) | 2017-07-14 | 2017-09-13 | 주식회사 무진메디 | En2 단백질을 특이적으로 인식하는 단클론 항체 또는 이를 함유하는 전립선암 진단용 조성물 |
| KR101777254B1 (ko) | 2017-07-14 | 2017-09-13 | 주식회사 무진메디 | En2 단백질을 특이적으로 인식하는 특정 항원으로부터 얻어진 단클론 항체 또는 이를 함유하는 전립선암 진단용 조성물 |
| CN107894507A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-04-10 | 南宁科城汇信息科技有限公司 | 一种发现和鉴定肝癌血清差异表达蛋白和验证标志物蛋白方法 |
| CN107727729A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-02-23 | 南宁科城汇信息科技有限公司 | 一种oa候选标志物诊断模型的建立方法 |
| KR101923199B1 (ko) | 2018-04-25 | 2018-11-28 | 주식회사 무진메디 | 펩스타틴 a를 함유하는 소변 내 en2 진단용 조성물 |
| CN111363817B (zh) * | 2018-12-26 | 2024-02-02 | 广州康立明生物科技股份有限公司 | 基于hoxd12基因的肺癌诊断剂及试剂盒 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999000498A1 (en) * | 1997-06-27 | 1999-01-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Human nk-3 related prostate specific gene-1 |
| RU2234942C2 (ru) * | 1998-07-14 | 2004-08-27 | Корикса Корпорейшн | Выделенный опухолевый полипептид предстательной железы и кодирующий его полинуклеотид |
| WO2000023111A1 (en) * | 1998-10-19 | 2000-04-27 | Diadexus Llc | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating prostate cancer |
| US20040029208A1 (en) | 2000-05-30 | 2004-02-12 | Ravn Helle Weber | Assay method and kit for testing biological material for exposure to stress using biomarkers |
| EP1294947A2 (en) * | 2000-06-30 | 2003-03-26 | Epigenomics AG | Method and nucleic acids for pharmacogenomic methylation analysis |
| WO2002022884A2 (en) * | 2000-09-12 | 2002-03-21 | Transgenetics Incorporated | Microarrayed organization of transcription factor target genes |
| US20040063216A1 (en) | 2000-12-24 | 2004-04-01 | Iser Lubocki | Method for detecting biomarkers |
| NZ527180A (en) | 2000-12-24 | 2007-02-23 | Iser Lubocki | A method for detecting biomarkers |
| EP1364069B1 (en) * | 2001-03-01 | 2009-04-22 | Epigenomics AG | Method for the development of gene panels for diagnostic and therapeutic purposes based on the expression and methylatoin status of the genes |
| US6949342B2 (en) * | 2001-12-21 | 2005-09-27 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Prostate cancer diagnosis and outcome prediction by expression analysis |
| CA2469089A1 (en) * | 2003-07-08 | 2005-01-08 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal | En-2 gene, disgnostic and therapeutic uses thereof |
| US20060014301A1 (en) | 2004-07-13 | 2006-01-19 | Power3 Medical Products, Inc. | Antibody-based system for detection of differential protein expression patterns |
| ATE438740T1 (de) * | 2004-12-02 | 2009-08-15 | Epigenomics Ag | Verfahren und nukleinsäuren zur analyse von mit der prognose von störungen der proliferation von prostatazellen assoziierter genexpression |
| WO2006089091A2 (en) * | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Methods for detecting minimum residual disease |
-
2006
- 2006-12-19 GB GBGB0625321.5A patent/GB0625321D0/en not_active Ceased
-
2007
- 2007-10-10 GB GBGB0719792.4A patent/GB0719792D0/en not_active Ceased
- 2007-12-19 CN CN200780051417.9A patent/CN101675341B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2007-12-19 CA CA2671939A patent/CA2671939C/en active Active
- 2007-12-19 SI SI200731399T patent/SI2115472T1/sl unknown
- 2007-12-19 PL PL07848631T patent/PL2115472T3/pl unknown
- 2007-12-19 US US12/518,708 patent/US8460882B2/en active Active
- 2007-12-19 AU AU2007335999A patent/AU2007335999B2/en not_active Ceased
- 2007-12-19 DK DK07848631.3T patent/DK2115472T3/da active
- 2007-12-19 WO PCT/GB2007/004902 patent/WO2008075056A1/en active Application Filing
- 2007-12-19 NZ NZ577548A patent/NZ577548A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-12-19 ES ES07848631.3T patent/ES2445185T3/es active Active
- 2007-12-19 RU RU2009127774/15A patent/RU2460075C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-12-19 JP JP2009542216A patent/JP5683108B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-12-19 MX MX2009006378A patent/MX2009006378A/es active IP Right Grant
- 2007-12-19 EP EP07848631.3A patent/EP2115472B1/en not_active Not-in-force
- 2007-12-19 BR BRPI0720371A patent/BRPI0720371B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-12-19 PT PT78486313T patent/PT2115472E/pt unknown
-
2009
- 2009-06-08 IL IL199241A patent/IL199241A/en active IP Right Grant
-
2014
- 2014-02-05 CY CY20141100091T patent/CY1115178T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL2115472T3 (pl) | 2014-05-30 |
| CY1115178T1 (el) | 2016-12-14 |
| DK2115472T3 (da) | 2014-02-10 |
| CA2671939C (en) | 2017-10-03 |
| IL199241A (en) | 2014-03-31 |
| RU2009127774A (ru) | 2011-01-27 |
| US8460882B2 (en) | 2013-06-11 |
| PT2115472E (pt) | 2014-02-14 |
| RU2460075C2 (ru) | 2012-08-27 |
| JP5683108B2 (ja) | 2015-03-11 |
| NZ577548A (en) | 2012-03-30 |
| BRPI0720371B1 (pt) | 2019-05-28 |
| CN101675341B (zh) | 2017-08-08 |
| AU2007335999B2 (en) | 2013-09-05 |
| CN101675341A (zh) | 2010-03-17 |
| CA2671939A1 (en) | 2008-06-26 |
| JP2010513901A (ja) | 2010-04-30 |
| GB0719792D0 (en) | 2007-11-21 |
| GB0625321D0 (en) | 2007-01-24 |
| EP2115472A1 (en) | 2009-11-11 |
| MX2009006378A (es) | 2009-08-24 |
| BRPI0720371A2 (pt) | 2013-12-31 |
| US20100093558A1 (en) | 2010-04-15 |
| WO2008075056A1 (en) | 2008-06-26 |
| EP2115472B1 (en) | 2013-11-06 |
| AU2007335999A1 (en) | 2008-06-26 |
| SI2115472T1 (sl) | 2014-05-30 |
| BRPI0720371B8 (pt) | 2021-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2445185T3 (es) | Biomarcadores de cáncer | |
| EP1996940B1 (en) | Detection of cancer by elevated levels of bcl-2 | |
| CA2532722C (en) | Cystatin sn (cst1) and other markers for detection of gastric cancer | |
| ES2538504T3 (es) | Marcadores en la orina para la detección del cáncer de vejiga | |
| US20110251097A1 (en) | Diagnostic kit of colon cancer using colon cancer related marker and diagnostic method thereof | |
| US20090081685A1 (en) | Methods and compositions for the detection of ovarian disease | |
| KR102047502B1 (ko) | 포타슘 채널 단백질을 이용한 암 진단용 조성물 | |
| US9562906B2 (en) | Methods for detection of gastric cancer | |
| US20140186837A1 (en) | Methods For Diagnosing Cancer | |
| KR20130046457A (ko) | 신규한 대장암 진단용 마커 및 이를 이용한 대장암 진단 키트 | |
| KR101388711B1 (ko) | 암 진단 마커로서의 보체 ｃ９ | |
| US20220127679A1 (en) | Composition for cancer diagnosis | |
| KR101289454B1 (ko) | 소세포폐암 및 비소세포폐암 진단 마커로서의 보체 ｃ９ | |
| EP4052039A1 (en) | Methods for determining the invasive and/or metastatic potential of a tumour | |
| ES2363669B1 (es) | Metodo para determinar el riesgo de desarrollar metastasis cerebral y un kit para llevar a cabo dicho procedimiento | |
| ES2628150T3 (es) | Métodos y productos para pronosticar la evolución clínica o predecir el riesgo de recidiva de una lesión papilar de mama | |
| KR101007570B1 (ko) | 위암 진단 마커로서의 디씨씨원 | |
| KR100980004B1 (ko) | 위암 진단 마커로서의 엠이엘케이 | |
| KR101007568B1 (ko) | 위암 진단 마커로서의 씨케이에스투 |