ES2432141T3 - Procedimientos para tratar carcinoma de células renales - Google Patents

Abstract

IL-2 para su uso en el tratamiento de un paciente humano renalmente insuficiente que tiene carcinoma de células renales, en el que a) una dosis de 9-18 MUI de IL-2 por día se administra subcutáneamente, en 1-3 dosis al día, durante 3-6 días a la semana, repetida durante 1-24 semanas; y b) no se administra IL-2 durante 1-4 semanas.

Description

Procedimientos para tratar carcinoma de celulas renales.

CAMPO TECNICO

La presente invencion se refiere generalmente a procedimientos para tratar carcinoma de celulas renales con IL-2. En particular, la invencion se refiere a procedimientos para tratar carcinoma de celulas renales en pacientes que son renalmente insuficientes o intolerantes a terapia con IL-2 a alta dosis.

ANTECEDENTES

La interleucina-2 (IL-2) es un potente estimulante de la proliferacion y funcion de linfocitos citoliticos espontaneos (NK) y T (Morgan y col. (1976) Science 193:1007-1011). Se ha mostrado que estas linfocinas que se producen naturalmente tienen actividad antitumoral contra una variedad de tumores malignos tanto solas como cuando se combinan con linfocitos citoliticos activados por linfocinas (LAK) o linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) (vease, por ejemplo, Rosenberg y col., N. Engl. J. Med. (1987) 316:889-897; Rosenberg, Ann. Surg. (1988) 208:121-135; Topalian y col., J. Clin. Oncol. (1988) 6:839-853; Rosenberg y col., N. Engl. J. Med. (1988) 319:1676-1680; y Weber y col., J. Clin. Oncol. (1992) 10:33-40). La actividad antitumoral de IL-2 se ha descrito mejor en pacientes con melanoma metastasico y carcinoma de celulas renales usando Proleukin®, una formulacion de IL-2 comercialmente disponible de Chiron Corporation, Emeryville, CA. Otras enfermedades, que incluyen linfoma, tambien parece que responden a tratamiento con IL-2 (Gisselbrecht y col., Blood (1994) 83:2020-2022). Sin embargo, altas dosis de IL-2 usadas para lograr resultados terapeuticos positivos con respecto a crecimiento tumoral frecuentemente producen graves efectos secundarios, que incluyen fiebre y escalofrios, hipotension y fuga capilar (sindrome de fuga vascular

o SFV), y cambios neurologicos (vease, por ejemplo, Duggan y col., J. Immunotherapy (1992) 12:115-122; Gisselbrecht y col., Blood (1994) 83:2081-2085; y Sznol y Parkinson, Blood (1994) 83:2020-2022). El carcinoma de celulas renales metastasico (CCR) es generalmente resistente a quimioterapia, tanto con agentes individuales como con multiples agentes en combinacion. Se ha observado mayor exito con inmunoterapia, particularmente con el uso de IL-2. La terapia con IL-2 intravenosa a alta dosis ha producido respuestas tumorales objetivas en aproximadamente el 15% de los pacientes, algunas con durabilidad larga. Sin embargo, la administracion de IL-2 a alta dosis esta asociada a sindrome de fuga capilar, que produce hipotension y reducida perfusion de organos, que puede ser grave y algunas veces mortal. Estas toxicidades se han limitado generalmente al uso de IL-2 a un grupo altamente seleccionado de pacientes administrados por medicos con experiencia significativa en su administracion. El uso de menores dosis y pautas subcutaneamente administradas de IL-2 sola o en combinacion con otros agentes biologicos, tales como interferon-a, se ha explorado en un esfuerzo por desarrollar una terapia mas ampliamente aplicable para esta enfermedad (vease, por ejemplo, Nieken y col., Cancer Biother. Radiopharm. (1996) 11:289-295; Sleijfer y col., J. Clin. Oncol. (1992) 10:1119-1123; Lessoni y col., Anticancer Res. (2002) 22:1061-1-1064; Tourani y col., J. Clin. Oncol. (1998) 16:2505; y Schiller y col. Cancer Res. (1993) 53:1286-1292). Sigue existiendo la necesidad de una terapia mejorada para tratar pacientes que tienen carcinoma de celulas renales que reduzca la toxicidad y mejore la eficacia terapeutica.

RESUMEN DE LA INVENCION

La presente invencion proporciona un procedimiento eficaz para tratar carcinoma de celulas renales con IL-2. El procedimiento utiliza una dosis relativamente baja de IL-2 en comparacion con dosificaciones previamente usadas en terapias con IL-2 a alta dosis con el fin de reducir la toxicidad. Como se muestra en los ejemplos en el presente documento, esta pauta terapeutica inhibe significativamente el crecimiento tumoral con efectos secundarios adversos reducidos y proporciona un tratamiento alternativo para pacientes que no pueden tolerar la terapia con IL-2 a alta dosis. El objetivo de la invencion se define en las reivindicaciones. En un aspecto, la invencion proporciona un procedimiento para tratar un paciente humano que tiene carcinoma de celulas renales. En ciertas realizaciones, el paciente es renalmente insuficiente. En ciertas realizaciones, el carcinoma de celulas renales es metastasico. En ciertas realizaciones, el paciente es intolerante a tratamiento con IL-2 a alta dosis. En otro aspecto, el procedimiento comprende: a) administrar una dosis de 9-18 MUI de IL-2 por dia, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 1-24 semanas; b) no administrar IL-2 durante 1-4 semanas; c) administrar una dosis de 9 MUI de IL-2 por dia, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 124 semanas; y d) no administrar IL-2 durante 1-4 semanas. En otro aspecto mas, el procedimiento comprende: a) primero, administrar una dosis de 18 MUI de IL-2 por dia durante 5 dias durante una semana; b) segundo, administrar una dosis de 9 MUI de IL-2 por dia durante 2 dias, seguido de administrar una dosis de 18 MUI de IL-2 por dia durante 3 dias durante cada semana, repetida durante 5 semanas; c) tercero, no administrar IL-2 durante 3 semanas; d) cuarto, administrar una dosis de 9 MUI de IL-2 por dia durante 5 dias de cada semana, repetida durante 6 semanas; y e) quinto, no administrar IL-2 durante 3 semanas.

En cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento, la IL-2 puede ser IL-2 recombinantemente producida. La IL-2 puede incluir IL-2 humana o variantes de la misma que comprenden una secuencia que tiene al menos aproximadamente el 70-100% de identidad de secuencias con la secuencia de IL-2 humana (SEC ID N°: 1), que incluye cualquier identidad en porcentaje dentro de estos intervalos, tales como el 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% de identidad de secuencias con la misma. En ciertas realizaciones, la IL-2 es una muteina de IL-2, por ejemplo, pero no se limita a, Ala104 Ser125 IL-2; des-Ala1 des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 Ala104 Ser125 IL-2; y des-Ala1 des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 des-Ser5 des-Ser6 IL-2. En una realizacion preferida, la muteina de IL-2 es des-alanil-1, serina-125-interleucina-2 humana (aldesleucina).

En ciertas realizaciones, la IL-2 esta conjugada con un polietilenglicol. Polietilenglicoles a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, un polietilenglicol que tiene un peso molecular promedio de 1.000 a 40.000 daltons, un polietilenglicol que tiene un peso molecular promedio de 2.000 a 20.000 daltons y un polietilenglicol que tiene un peso molecular promedio de 3.000 a 12.000 daltons.

En otras realizaciones, la IL-2 esta covalentemente conjugada con un poliol polioxietilado. Polioles polioxietilados a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada y glicerol polioxietilado. En ciertas realizaciones, el poliol polioxietilado es un glicerol polioxietilado que tiene un peso molecular promedio de

1.000 a 40.000.

En cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento, multiples ciclos del procedimiento de tratamiento pueden administrarse al sujeto durante un periodo de tiempo suficiente para efectuar al menos una respuesta tumoral parcial. En ciertas realizaciones, el periodo de tiempo es al menos 6 meses. En ciertas realizaciones, el periodo de tiempo es al menos 12 meses. En ciertas realizaciones, el periodo de tiempo es suficiente para efectuar una respuesta tumoral completa.

En ciertos aspectos, el procedimiento de tratamiento comprende ademas multiples ciclos de un tratamiento que comprende: a) administrar una dosis de 9 MUI de IL-2 por dia, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 1-24 semanas; y b) no administrar IL-2 durante 1-4 semanas; administrada a dicho sujeto durante un periodo de tiempo suficiente para efectuar al menos una respuesta tumoral parcial.

En cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento, la IL-2 puede administrarse por administracion subcutanea, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, oral, pulmonar, nasal, topica o transdermica,

o por infusion o supositorios. En una realizacion preferida, la IL-2 se administra subcutaneamente.

Estas y otras realizaciones de la invencion objeto se produciran facilmente para aquellos expertos en la materia en vista de la divulgacion en el presente documento.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

La Figura 1 compara la eficacia relativa de IL-2 a baja dosis en pacientes con carcinoma de celulas renales metastasico que tienen funcion renal normal (creatinina en suero (SCr) : 1,5 mg/dl) y alterada (SCr >1,5 mg/dl) tras la administracion de las pautas descritas en el Ejemplo 3. La Figura 1 muestra una representacion del porcentaje de sujetos que presentan supervivencia libre de progresion (SLP) frente al tiempo en aros y una representacion del porcentaje de sujetos supervivientes frente al tiempo en aros. La Figura 2 muestra un grafico de barras que representa las tasas de respuesta global para pacientes con carcinoma de celulas renales metastasico que tienen funcion renal normal (SCr : 1,5 mg/dl) y alterada (SCr >1,5 mg/dl) tratados con IL-2 a baja dosis tras la administracion de las pautas descritas en el Ejemplo 3. El porcentaje de sujetos que muestran una respuesta completa (RC) se muestra con sombreado claro. El porcentaje de sujetos que muestran una respuesta parcial (RP) se muestra con sombreado oscuro. La Figura 3 compara las caracteristicas del paciente (PS, nefrectomia previa) de la poblacion tratada en el estudio clinico de fase IV de IL-2 a baja dosis descrito en el presente documento con grupos de control historicos. Veanse Pyrhonen y col. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2859-2867; Motzer y col. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2530-40; Ritchie y col. (1999) Lancet 353:14-17; Kriegmair y col. (1995) Urology 45:758-762; y Jones y col. (1993) Cancer Biother. 8:275-288; Gleave y col. (1998) New Engl. J. Med. 338:1265-1271; Steineck y col. (1990) Acta Oncol. 29:155-162; y Osband y col. (1990) Lancet 335:994-998 para una descripcion de grupos de control historicos de estudios clinicos de pacientes con carcinoma de celulas renales. La Figura 4 compara los desenlaces de los pacientes (ORR, SLP, OS a 1 aro, OS a 2 aros) de la poblacion tratada en el estudio clinico de fase IV de IL-2 a baja dosis descrito en el presente documento con grupos de control historicos. La Figura 5 compara la tasa de supervivencia de pacientes tratados con IL-2 a baja dosis tras la administracion de las pautas descritas en el Ejemplo 3 con la de un grupo de control historico de pacientes tratados con quimioterapia en lugar de IL-2 (Jones y col. (1993) J. Clin. Oncol. 12:2714-2722). Los pacientes se subdividieron en grupos de riesgo segun el sistema de Jones de estratificacion del factor de riesgo del siguiente modo: riesgo asumible (0-1 factores de riesgo), riesgo moderado (2 factores de riesgo) y mal pronostico (los 3 factores de riesgo). La Figura 5 muestra representaciones separadas del porcentaje de sujetos supervivientes frente al tiempo en aros para cada uno de los grupos de riesgo. Los datos para sujetos tratados con IL-2 a baja dosis se muestran con una linea continua. Los datos para sujetos tratados con quimioterapia se muestran con una linea discontinua.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

La practica de la presente invencion empleara, a menos que se indique lo contrario, procedimientos convencionales de farmacologia, quimica, bioquimica y tecnicas de ADN recombinante e inmunologia, dentro de la experiencia en la materia. Tales tecnicas se explican completamente en la bibliografia. Veanse, por ejemplo, Handbook of Experimental Immunology, vol. I-IV (D.M. Weir y C.C. Blackwell eds., Blackwell Scientific Publications); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., edicion actual); Sambrook, y col., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a edicion, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick y N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.).

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en el presente documento, tanto arriba como mas adelante, se incorporan en este documento por referencia en sus totalidades.

I. DEFINICIONES

En la descripcion de la presente invencion se emplearan los siguientes terminos, y pretenden definirse como se indica a continuacion.

Debe observarse que, como se usa en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "una", "el" y "la" incluyen referentes plurales, a menos que el contenido dicte claramente de otro modo. Asi, por ejemplo, referencia a "un agente quimioterapeutico" incluye una mezcla de dos o mas de tales agentes, y similares.

El termino "IL-2" como se usa en el presente documento es una proteina derivada de una linfocina que es producida por linfocitos de sangre periferica normal y esta presente en el cuerpo a bajas concentraciones. La IL-2 se describio por primera vez por Morgan y col. (1976) Science 193:1007-1008 y originariamente la llamo factor de crecimiento de linfocitos T debido a su capacidad para inducir la proliferacion de linfocitos T estimulados. Es una proteina con un peso molecular informado en el intervalo de 13.000 a 17.000 (Gillis y Watson (1980) J. Exp. Med. 159:1709) y tiene un punto isoelectrico en el intervalo de 6-8,5. Tanto las proteinas IL-2 de longitud completa como los fragmentos biologicamente activos de las mismas estan englobados por la definicion. El termino tambien incluye modificaciones post-expresion de la IL-2, por ejemplo, glucosilacion, acetilacion, fosforilacion y similares. Ademas, para los fines de la presente invencion, el termino "IL-2" se refiere a una proteina que incluye modificaciones tales como deleciones, adiciones y sustituciones (generalmente conservativas en la naturaleza), a la secuencia nativa, mientras que la proteina mantenga la actividad biologica, es decir, actividad antitumoral. Estas modificaciones pueden ser deliberadas, como mediante mutagenesis dirigida a sitio, o pueden ser accidentales, tal como mediante mutaciones de huespedes que producen las proteinas o errores debidos a amplificacion por PCR.

El termino "derivada de" se usa en el presente documento para identificar la fuente original de una molecula, pero no pretende limitar el procedimiento por el que la molecula se prepara, que puede ser, por ejemplo, por sintesis quimica

o medios recombinantes.

Los terminos "variante", "analogo" y "muteina" se refieren a derivados biologicamente activos de la molecula de referencia que retienen la actividad deseada, tal como actividad antitumoral en el tratamiento de carcinoma de celulas renales descrito en el presente documento. En general, los terminos "variante" y "analogo" se refieren a compuestos que tienen una secuencia y estructura de polipeptidos nativa con una o mas adiciones, sustituciones (generalmente conservativas en la naturaleza) y/o deleciones de aminoacidos, con respecto a la molecula nativa, mientras que las modificaciones no destruyan la actividad biologica y sean "sustancialmente homologas" a la molecula de referencia como se define mas adelante. En general, las secuencias de aminoacidos de tales analogos tendran un alto grado de homologia de secuencias con la secuencia de referencia, por ejemplo, homologia de secuencias de aminoacidos superior al 50%, generalmente superior al 60%-70%, incluso mas particularmente del 80%-85% o mas, tal como al menos el 90%-95% o mas, cuando las dos secuencias estan alineadas. Frecuentemente, los analogos incluiran el mismo numero de aminoacidos, pero incluiran sustituciones, como se explica en el presente documento. El termino "muteina" incluye adicionalmente polipeptidos que tienen una o mas moleculas similares a aminoacido que incluyen, pero no se limitan a, compuestos que comprenden solo moleculas amino y/o imino, polipeptidos que contienen uno o mas analogos de un aminoacido (incluyendo, por ejemplo, aminoacidos no naturales, etc.), polipeptidos con enlaces sustituidos, ademas de otras modificaciones conocidas en la tecnica, tales como moleculas que se producen naturalmente y que no se producen naturalmente (por ejemplo, sinteticas), cicladas, ramificadas y similares. El termino tambien incluye moleculas que comprenden uno o mas residuos de glicina N-sustituidos (un "peptoide") y otros aminoacidos o peptidos sinteticos (veanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n° 5.831.005; 5.877.278; y 5.977.301; Nguyen y col., Chem Biol. (2000) 7:463-473; y Simon y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89:9367-9371 para descripciones de peptoides). Preferentemente, el analogo

o muteina tiene al menos la misma actividad antitumoral que la molecula nativa. Procedimientos para preparar analogos de polipeptidos y muteinas se conocen en la tecnica y se describen adicionalmente mas adelante.

Como se ha explicado anteriormente, los analogos generalmente incluyen sustituciones que son conservativas en la naturaleza, es decir, aquellas sustituciones que tienen lugar dentro de una familia de aminoacidos que estan relacionados en sus cadenas laterales. Especificamente, los aminoacidos se dividen generalmente en cuatro familias: (1) acidos --aspartato y glutamato; (2) basicos --lisina, arginina, histidina; (3) no polares --alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano; y (4) polares sin carga --glicina, asparagina, glutamina, cisteina, serina treonina, tirosina. La fenilalanina, triptofano y tirosina se clasifican algunas veces como aminoacidos aromaticos. Por ejemplo, es razonablemente predecible que una sustitucion aislada de leucina con isoleucina o valina, un aspartato con un glutamato, una treonina con una serina, o una sustitucion conservativa similar de un aminoacido con un aminoacido estructuralmente relacionado, no tenga un mayor efecto sobre la actividad biologica. Por ejemplo, el polipeptido de interes puede incluir hasta aproximadamente 5-10 sustituciones de aminoacidos conservativas o no conservativas, o incluso hasta aproximadamente 15-25 sustituciones de aminoacidos conservativas o no conservativas, o cualquier numero entero entre 5-25, mientras que la funcion deseada de la molecula permanezca intacta. Un experto en la materia puede determinar facilmente regiones de la molecula de interes que pueden tolerar el cambio por referencia a representaciones de Hopp/Woods y Kyte-Doolittle, muy conocidos en la tecnica.

Por "derivado" esta prevista cualquier modificacion adecuada del polipeptido nativo de interes, de un fragmento del polipeptido nativo, o de sus analogos respectivos, tales como glucosilacion, fosforilacion, conjugacion de polimeros (tal como con polietilenglicol), u otra adicion de restos extraros, mientras que se retenga la actividad biologica deseada del polipeptido nativo. Los procedimientos para preparar fragmentos de polipeptidos, analogos y derivados estan generalmente disponibles en la materia.

Por "fragmento" esta prevista una molecula que consiste en solo una parte de la secuencia y estructura de longitud completa intacta. El fragmento puede incluir una delecion del extremo C, una delecion del extremo N y/o una delecion interna del polipeptido nativo. Fragmentos activos de una proteina particular generalmente incluiran al menos aproximadamente 5-10 residuos de aminoacidos contiguos de la molecula de longitud completa, preferentemente al menos aproximadamente 15-25 residuos de aminoacidos contiguos de la molecula de longitud completa, y lo mas preferentemente al menos aproximadamente 20-50 o mas residuos de aminoacidos contiguos de de la molecula de longitud completa, o cualquier numero entero entre 5 aminoacidos y la secuencia de longitud completa, a condicion de que el fragmento en cuestion retenga la actividad biologica, tal como actividad antitumoral, como se define en el presente documento.

"Sustancialmente purificado" generalmente se refiere al aislamiento de una sustancia (compuesto, polinucleotido, proteina, polipeptido, composicion de polipeptido) de forma que la sustancia comprenda la mayoria del porcentaje de la muestra en la que reside. Normalmente, en una muestra, un componente sustancialmente purificado comprende el 50%, preferentemente el 80%-85%, mas preferentemente el 90-95% de la muestra. Tecnicas para purificar polinucleotidos y polipeptidos de interes son muy conocidas en la tecnica e incluyen, por ejemplo, cromatografia de intercambio ionico, cromatografia de afinidad y sedimentacion segun densidad.

Por "aislado" se indica, cuando se refiere a un polipeptido, que la molecula indicada esta separada y discreta del organismo completo con el que la molecula se encuentra en la naturaleza o esta presente en ausencia sustancial de otras macromoleculas biologicas del mismo tipo. El termino "aislado" con respecto a un polinucleotido es una molecula de acido nucleico que carece, por completo o en parte, de secuencias normalmente asociadas al mismo en la naturaleza; o una secuencia, como existe en la naturaleza, pero que tiene secuencias heterologas en asociacion con el mismo; o una molecula disociada del cromosoma.

"Homologia" se refiere a la identidad en porcentaje entre dos restos de polinucleotidos o dos restos de polipeptidos. Dos secuencias de acidos nucleicos o dos de polipeptidos son "sustancialmente homologas" entre si cuando las secuencias presentan al menos aproximadamente el 50%, preferentemente al menos aproximadamente el 75%, mas preferentemente al menos aproximadamente el 80%-85%, preferentemente al menos aproximadamente el 90%, y lo mas preferentemente al menos aproximadamente el 95%-98% de identidad de secuencias sobre una longitud definida de las moleculas. Como se usa en el presente documento, sustancialmente homologo tambien se refiere a secuencias que muestran identidad completa con la secuencia especificada.

En general, "identidad" se refiere a una correspondencia nucleotido a nucleotido o aminoacido a aminoacido exacta de dos polinucleotidos o secuencias de polipeptidos, respectivamente. La identidad en porcentaje puede determinarse por una comparacion directa de la informacion de secuencias entre dos moleculas (la secuencia de referencia y una secuencia con % de identidad desconocido con la secuencia de referencia) alineando las secuencias, contando el numero exacto de coincidencias entre las secuencias alineadas, dividiendo entre la longitud de la secuencia de referencia y multiplicando el resultado por 100. Pueden usarse programas informaticos facilmente disponibles para ayudar en el analisis, tales como ALIGN, Dayhoff, M.O. En Atlas of Protein Sequence and Structure

M.O. Dayhoff ed., 5 Suppl. 3:353-358, National biomedical Research Foundation, Washington, DC, que adapta el algoritmo de homologia local de Smith y Waterman Advances in Appl. Math. 2:482-489, 1981, para el analisis de peptidos. Programas para determinar la identidad de secuencias de nucleotidos estan disponibles en the Wisconsin Sequence Analysis Package, version 8 (disponible de Genetics Computer Group, Madison, WI), por ejemplo, los programas BESTFIT, FASTA y GAP, que tambien se basan en el algoritmo de Smith y Waterman. Estos programas se utilizan facilmente con los parametros por defecto recomendados por el fabricante y descritos en the Wisconsin Sequence Analysis Package citado anteriormente. Por ejemplo, la identidad en porcentaje de una secuencia de nucleotidos particular con una secuencia de referencia puede determinarse usando el algoritmo de homologia de Smith y Waterman con una tabla de puntuacion por defecto y una penalizacion por hueco de seis posiciones de nucleotidos.

Otro procedimiento de establecimiento de la identidad en porcentaje en el contexto de la presente invencion es para usar el paquete MPSRCH de programas protegidos por derechos de autor por la Universidad de Edimburgo, desarrollados por John F. Collins y Shane S. Sturrok, y distribuidos por IntelliGenetics, Inc. (Mountain View, CA). A partir de este paquete de aplicaciones, el algoritmo de Smith-Waterman puede emplearse cuando los parametros por defecto se usen para la tabla de puntuacion (por ejemplo, penalizacion por apertura de hueco de 12, penalizacion por extension de hueco de uno, y un hueco de seis). A partir de los datos generados, el valor "coincidencia" refleja la "identidad de secuencias". Otros programas adecuados para calcular la identidad en porcentaje o similitud entre secuencias se conocen generalmente en la tecnica, por ejemplo, otro programa de alineamiento es BLAST, usado con parametros por defecto. Por ejemplo, BLASTN y BLASTP pueden usarse usando los siguientes parametros por defecto: codigo genetico = estandar; filtro = ninguno; cadena = ambas; corte = 60; esperado = 10; matriz =BLOSUM62; descripciones = 50 secuencias; clasificar por = MAYOR PUNTUACION; bases de datos = no redundantes, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + GenBank CDS translations + Swiss protein + Spupdate + PIR. Detalles de estos programas estan facilmente disponibles.

Alternativamente, la homologia puede determinarse por hibridacion de polinucleotidos en condiciones que forman duplex estables entre regiones homologas, seguido de digestion con nucleasa(s) especifica(s) monocatenaria(s), y determinacion del tamaro de los fragmentos digeridos. Las secuencias de ADN que son sustancialmente homologas pueden identificarse en un experimento de hibridacion Southern bajo, por ejemplo, condiciones rigurosas, como se define para ese sistema particular. La definicion de condiciones de hibridacion apropiadas esta dentro de la experiencia en la materia. Vease, por ejemplo, Sambrook y col., arriba; DNA Cloning, arriba; Nucleic Acid Hybridization, arriba.

"Recombinante" como se usa en el presente documento para describir una molecula de acido nucleico significa un polinucleotido de origen genomico, de ADNc, viral, semisintetico o sintetico que, en virtud de su origen o manipulacion, no esta asociado a todo o una parte del polinucleotido con el que esta asociado en la naturaleza. El termino "recombinante" como se usa con respecto a una proteina o polipeptido significa un polipeptido producido por expresion de un polinucleotido recombinante. En general, el gen de interes se clona y luego se expresa en organismos transformados, como se describe adicionalmente mas adelante. El organismo huesped expresa el gen extraro para producir la proteina bajo condiciones de expresion.

"Renalmente insuficiente" como se usa en el presente documento se refiere a un paciente que tiene una tasa de filtracion glomerular insuficiente. Un paciente tal se caracteriza en el presente documento por un nivel de creatinina en suero (SCr) superior a 1,5 mg/dl.

Por "actividad antitumoral" esta prevista una reduccion en la tasa de proliferacion celular, y de ahi una disminucion en la tasa de crecimiento de un tumor existente o en un tumor que aparece durante terapia, y/o destruccion de celulas neoplasicas (tumorales) existentes o celulas neoplasicas recientemente formadas, y de ahi una disminucion en el tamaro global de un tumor durante la terapia. Tal actividad puede evaluarse usando modelos animales, tales como modelo de xenoinjertos de carcinoma de celulas renales humano. Vease, por ejemplo, Pulkkanen y col., In Vivo (2000) 14:393-400 y Everitt y col., Toxicol. Lett. (1995) 82-83:621-625 para una descripcion de modelos animales.

Por "dosis o cantidad terapeuticamente eficaz" de IL-2 o una variante de la misma esta prevista una cantidad que, cuando se administra como se describe en el presente documento, provoca una respuesta terapeutica positiva, tal como actividad antitumoral.

El termino "respuesta tumoral" como se usa en el presente documento significa una reduccion o eliminacion de todas las lesiones medibles. Los criterios para respuesta tumoral se basan en los criterios de informacion de la OMS [WHO Offset Publication, 48-World Health Organization, Ginebra, Suiza (1979)]. Idealmente, todas las lesiones uni- o bidimensionalmente medibles deben medirse en cada evaluacion. Si estan presentes multiples lesiones en cualquier organo, tales mediciones pueden no ser posibles y, bajo tales circunstancias, hasta 6 lesiones representativas deben seleccionarse, si esta disponible.

El termino "respuesta completa" (RC) como se usa en el presente documento significa una desaparicion completa de toda enfermedad maligna clinicamente detectable, determinada por 2 evaluaciones separadas al menos 4 semanas.

El termino "respuesta parcial" (RP) como se usa en el presente documento significa una reduccion del 50% o superior del nivel inicial en la suma de los productos de los diametros perpendiculares mas largos de toda la enfermedad medible sin progresion de enfermedad evaluable y sin pruebas de ninguna nueva lesion como se ha determinado por al menos dos evaluaciones consecutivas separadas al menos cuatro semanas. Las evaluaciones deben mostrar una disminucion parcial en el tamaro de lesiones liticas, recalcificaciones de lesiones liticas o densidad disminuida de lesiones blasticas. Es usual que IL-2 produzca inflamacion transitoria en sitios de enfermedad metastasica. Lesiones individuales que parece que aumentan en tamaro no descalifican necesariamente una RP a menos que el aumento este documentado en dos mediciones secuenciales tomadas separadas al menos 28 dias.

El termino "enfermedad progresiva" (EP) como se usa en el presente documento se refiere a un aumento del 25% o mayor en el tamaro de al menos una lesion bidimensionalmente (producto de los diametros perpendiculares mas largos) o unidimensionalmente medible; claro empeoramiento de cualquier lesion evaluable; reaparicion de cualquier lesion que habia desaparecido; o la aparicion de nuevas lesiones; como se ha determinado por al menos dos evaluaciones consecutivas separadas al menos 28 dias.

El termino "enfermedad estable" (EE) o "sin cambio" como se usa en el presente documento en referencia a (a) enfermedad bidimensionalmente medible significa menos de aproximadamente el 50% de disminucion o inferior a aproximadamente el 25% de aumento en la suma de los productos de los diametros perpendiculares mas largos de todas las lesiones medibles y (b) enfermedad unidimensionalmente medible significa menos de aproximadamente el 50% de disminucion o inferior a aproximadamente el 25% de aumento en la suma de los diametros de todas las lesiones. No deben aparecer nuevas lesiones. Es la ausencia de una respuesta completa, respuesta parcial o progresion. Debido a la lenta respuesta de lesiones oseas al tratamiento, la designacion "sin cambio" no debe aplicarse hasta que hayan pasado al menos ocho semanas desde el inicio de la terapia.

El termino "paciente que no responde al tratamiento" como se usa en el presente documento significa pacientes con enfermedad estable o respuestas menores (superiores al 25% pero inferiores al 50% de reduccion en la carga tumoral).

El termino "progresion" como se usa en el presente documento significa un aumento del 25% en la suma de los productos de todas las lesiones medibles con respecto a la suma mas pequera observada, o con respecto al nivel inicial si no hay disminucion desde el nivel inicial; claro empeoramiento de cualquier lesion evaluable; reaparicion de cualquier lesion que habia desaparecido; aparicion de cualquier nueva lesion o sitios, que incluyen nuevos sitios de enfermedad no evaluable; y/o en casos en los que pueda producirse un recrudecimiento del tumor inicial (hipercalcemia, dolor oseo, eritema de lesiones de la piel), los sintomas deben tanto persistir mas alla de cuatro semanas como debe haber pruebas adicionales de progresion.

El termino "respuesta global" como se usa en el presente documento significa la respuesta como se ha determinado a partir de considerar todos los sitios de enfermedad maligna. En sujetos con enfermedad medible, la respuesta mas pobre debe ser la respuesta global. Cualquier cambio en lesiones no medibles distraera de una respuesta parcial en lesiones medibles; es decir, la respuesta global sera una respuesta parcial. Ningun cambio en lesiones no medibles reducira una respuesta completa en lesiones medibles; es decir, la respuesta global sera una respuesta parcial.

El termino "duracion de la respuesta" como se usa en el presente documento significa el tiempo desde la primera documentacion de la mejor respuesta tumoral objetiva hasta el tiempo de progresion.

El termino "supervivencia" como se usa en el presente documento significa el tiempo desde la primera dosis de IL-2 hasta el momento de la muerte.

El termino "supervivencia libre de progresion" (SLP) como se usa en el presente documento significa para pacientes que responden al tratamiento el tiempo desde la primera dosis de IL-2 hasta el momento de progresion tumoral, muerte o la ultima visita a la clinica por el paciente si todavia responde.

II. Modos de llevar a cabo la invenci6n

Antes de describir la presente invencion en detalle, debe entenderse que la presente invencion no se limita a formulaciones o parametros de procedimiento particulares ya que tales pueden, por supuesto, variar. Tambien debe entenderse que la terminologia usada en el presente documento es solo con el fin de describir realizaciones particulares de la invencion, y no pretende ser limitante.

Aunque pueden usarse varios procedimientos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en el presente documento en la practica de la presente invencion, los materiales y procedimientos preferidos se describen en el presente documento.

La presente invencion se basa en el descubrimiento de una metodologia terapeutica novedosa para tratar con seguridad y eficazmente carcinoma de celulas renales por la administracion de bajas dosis de IL-2. La pauta de tratamiento descrita en el presente documento inhibio significativamente el crecimiento tumoral con menor toxicidad y efectos secundarios adversos reducidos en comparacion con tratamientos con IL-2 a alta dosis.

Aunque la invencion se refiere al tratamiento de un tumor existente, se reconoce que los procedimientos puedan ser utiles en prevenir excrecencias tumorales adicionales que se producen durante la terapia. Los procedimientos de la invencion son particularmente utiles en el tratamiento de sujetos que tienen carcinoma de celulas renales metastasico, que tienen funcion renal alterada y/o no pueden tolerar tratamiento con altas dosis de IL-2.

La IL-2 para su uso en la invencion puede ser nativa u obtenerse por tecnicas recombinantes, y puede ser de cualquier fuente, que incluye fuentes de mamifero tales como, por ejemplo, raton, rata, conejo, primate, cerdo y ser humano. Las secuencias de IL-2 de varias especies son muy conocidas en la tecnica e incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: IL-2 humana (Homo sapiens; secuencia precursora, acceso de GenBank n° AAH66254; secuencia madura representada por los residuos 21-153 de acceso de GenBank n° AAH66254); IL-2 de mono rhesus (Macaca mulatto; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P51498; secuencia madura representada por los residuos 21154 de la secuencia de acceso a GenBank n° P51498); IL-2 de babuino verde oliva (Papio anubis; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 0865Y1; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de acceso a GenBank n° 0865Y1); IL-2 de mangabeye fuliginoso (Cercocebus torquatus atys; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P46649; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de acceso a GenBank n° P46649); IL-2 de macaco cangrejero (Macaca fascicularis; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 029615; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de acceso a GenBank n° 029615); IL-2 de gibon comun (Hylobates lar; secuencia precursora, acceso de GenBank n° ICGI2; secuencia madura representada por los residuos 21-153 de la secuencia de acceso a GenBank n° ICGI2); IL-2 de mono ardilla comun (Saimiri sciureus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 08MKH2; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de acceso a GenBank n° 08MKH2); IL-2 de vaca (8os taurus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P05016; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de acceso a GenBank n° P05016; vease tambien la secuencia precursora de variante informada en acceso de GenBank n° NP-851340; secuencia madura representada por los residuos 24-158 de la secuencia de acceso a GenBank n° NP-851340); IL-2 de bufalo de agua (8ubalus bubalis; secuencia precursora, GenBank 095KP3; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de GenBank n° 095KP3); IL-2 de caballo (Equus caballus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P37997; secuencia madura representada por los residuos 21-149 de la secuencia de acceso a GenBank n° P37997); IL-2 de cabra (Capra hircus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P36835; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de acceso a GenBank n° P36835); IL-2 de oveja (Oris aries; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P19114; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de acceso a GenBank n° P19114); IL-2 de cerdo (Sus scrofa; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P26891; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de acceso de GenBank n° P26891); IL-2 de ciervo rojo (Cerrus elaplaus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P51747; secuencia madura representada por los residuos 21-162 de la secuencia de acceso a GenBank n° P51747); IL-2 de perro (Canis familiaris; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 029416; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de la secuencia de acceso a GenBank n° 029416); IL-2 de gato (Felis catus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 007885; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de acceso a GenBank n° 007885); IL-2 de conejo (Oryctolagus cuniculus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 077620; secuencia madura representada por los residuos 21-153 de la secuencia de acceso a GenBank n° O77620); IL-2 de orca (Orcinus orca; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 097513; secuencia madura representada por los residuos 21-152 de la secuencia de acceso a GenBank n° 097513); IL-2 de elefante marino del norte (Mirounga angustirostris; secuencia precursora, acceso de GenBank n° O62641; secuencia madura representada por los residuos 21-154 de la secuencia de acceso a GenBank n° 062641); IL-2 de raton domestico (Mus musculus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° NP 032392; secuencia madura representada por los residuos 21-169 de la secuencia de acceso a GenBank n° NP 032392); IL-2 de raton moruno (Mus spretus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° 008867; secuencia madura representada por los residuos 21-166 de la secuencia de acceso a GenBank n° 008867); IL-2 de rata de Noruega (Rattus norregicus; secuencia precursora, acceso de GenBank n° P17108; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de acceso a GenBank n° P17108); IL-2 de jerbo de Mongolia (Meriones unguiculatus; secuencia precursora, acceso a GenBank n° 008081; secuencia madura representada por los residuos 21-155 de acceso a GenBank n° 008081); cualquiera de los polipeptidos de IL-2 de variante desvelados en estos numeros de acceso a GenBank anteriores; incorporandose cada uno de los informes de GenBank en el presente documento por referencia en su totalidad. Aunque puede utilizarse cualquier fuente de IL-2 para poner en practica la invencion, preferentemente la IL-2 se deriva de una fuente humana, particularmente cuando el sujeto que recibe terapia es un ser humano. En algunas realizaciones, la IL-2 para su uso en los procedimientos de la invencion se produce recombinantemente, por ejemplo, proteinas IL-2 humanas recombinantes, que incluyen, pero no se limitan a, aquellas obtenidas de huespedes microbianos.

Las composiciones utiles en los procedimientos de la invencion pueden comprender variantes biologicamente activas de IL-2, que incluyen variantes de IL-2 de cualquier especie. Tales variantes deben retener la actividad biologica deseada del polipeptido nativo de forma que la composicion farmaceutica que comprende el polipeptido de variante tenga el mismo efecto terapeutico que la composicion farmaceutica que comprende el polipeptido nativo cuando se administra a un sujeto. Es decir, el polipeptido de variante servira de componente terapeuticamente activo en la composicion farmaceutica de un modo similar al observado para el polipeptido nativo. En la materia estan disponibles procedimientos para determinar si un polipeptido de variante retiene o no la actividad biologica deseada, y de ahi que sirva de componente terapeuticamente activo en la composicion farmaceutica. La actividad biologica puede medirse usando ensayos especificamente diserados para medir la actividad del polipeptido nativo o proteina, que incluye ensayos descritos en la presente invencion. Adicionalmente, anticuerpos producidos contra un polipeptido nativo biologicamente activo pueden probarse para su capacidad para unirse al polipeptido de variante, siendo la union eficaz indicativa de un polipeptido que tiene una conformacion similar a la del polipeptido nativo.

Variantes biologicamente activas adecuadas de IL-2 nativa o que se produce naturalmente pueden ser fragmentos, analogos y derivados de ese polipeptido, como se ha definido anteriormente.

Por ejemplo, las variantes de secuencias de aminoacidos del polipeptido pueden prepararse por mutaciones en la secuencia de ADN clonada que codifica el polipeptido nativo de interes. Los procedimientos para mutagenesis y alteraciones de secuencias de nucleotidos son muy conocidos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Walker y Gaastra, eds. (1983) Techniques of Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, Nueva York); Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492; Kunkel y col. (1987) Methods Enzymol. 154:367-382; Sambrook y col. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, New York); la patente de EE.UU. n° 4.873.192; y las referencias citadas en su interior. Orientacion en cuanto a sustituciones apropiadas de aminoacidos que no afectan la actividad biologica del polipeptido de interes pueden encontrarse en el modelo de Dayhoff y col. (1978) en Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), incorporado en el presente documento por referencia. Pueden preferirse sustituciones conservativas, tales como intercambiar un aminoacido con otro que tiene propiedades similares. Ejemplos de sustituciones conservativas incluyen, pero no se limitan a,

Tyr.
֞ Trp
֞ Gln, y Phe
֞ Arg, Asn
֞ Lys
֞ Glu,
֞ Leu, Asp
֞ Ile
֞ Ala, Val
֞ 4Gly

Orientacion en cuanto a regiones de la proteina IL-2 que pueden alterarse tanto mediante sustituciones, deleciones como inserciones de residuos pueden encontrarse en la materia. Vease, por ejemplo, las relaciones de estructura/funcion y/o estudios de union tratados en Bazan (1992) Science 257:410-412; McKay (1992) Science 257:412; Theze y col. (1996) Immunol. Today 17:481-486; Buchli y Ciardelli (1993) Arch. Biochem. Biophys. 307:411-415; Collins y col. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 85:7709-7713; Kuziel y col. (1993) J. Immunol. 150:5731; Eckenberg y col. (1997) Cytokine 9:488-498; cuyos contenidos se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad.

En la construccion de variantes del polipeptido IL-2 de interes se hacen modificaciones de forma que las variantes continuen poseyendo la actividad deseada. Obviamente, cualquier mutacion hecha en el ADN que codifica el polipeptido de variante no debe colocar la secuencia fuera del marco de lectura y preferentemente no creara regiones complementarias que pudieran producir estructura de ARNm secundaria. Vease la publicacion de solicitud de patente EP n° 75.444.

Las variantes biologicamente activas de IL-2 generalmente tendran al menos aproximadamente el 70%, preferentemente al menos aproximadamente el 80%, mas preferentemente al menos aproximadamente del 90% al 95% o mas, y lo mas preferentemente al menos aproximadamente el 98%, 99% o mas de identidad de secuencias de aminoacidos con la secuencia de aminoacidos de la molecula de polipeptido IL-2 de referencia, tal como IL-2 humana nativa, que sirve de base para la comparacion. El porcentaje de identidad de secuencias se determina usando el algoritmo de busqueda de homologia de Smith-Waterman usando una busqueda de huecos afines con una penalizacion por abertura por hueco de 12 y una penalizacion por extension de hueco de 2, matriz BLOSUM de

62. El algoritmo de busqueda de homologia de Smith-Waterman se ensera en Smith y Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489. Una variante puede diferenciarse por tan solo 1 a 15 residuos de aminoacidos, tan solo 1 a 10 residuos de aminoacidos, tales como 6-10, tan solo 5, tan solo 4, 3, 2, o incluso 1 residuo de aminoacido.

Con respecto al alineamiento optimo de dos secuencias de aminoacidos, el segmento contiguo de la secuencia de aminoacidos de las variantes puede tener el mismo numero de aminoacidos, residuos de aminoacidos adicionales o residuos de aminoacidos delecionados con respecto a la secuencia de aminoacidos de referencia. El segmento contiguo usado para la comparacion con la secuencia de aminoacidos de referencia incluira al menos 20 residuos de aminoacidos contiguos, y puede tener 30, 40, 50 o mas residuos de aminoacidos. Pueden hacerse correcciones para identidad de secuencias asociada a sustituciones de residuos conservativos o huecos (vease el algoritmo de busqueda de homologia de Smith-Waterman). Una variante biologicamente activa de un polipeptido IL-2 nativo de interes puede diferenciarse del polipeptido nativo por tan solo 1-15 aminoacidos, tan solo 1-10, tal como 6-10, tan solo 5, tan solo 4, 3, 2, o incluso 1 residuo de aminoacido.

La estructura quimica precisa de un polipeptido que tiene actividad de IL-2 depende de varios factores. Como estan presentes grupos amino y carboxilo ionizables en la molecula, un polipeptido particular puede obtenerse como un sal acida o basica, o en forma neutra. Todas aquellas preparaciones que retienen su actividad biologica cuando se ponen en condiciones medioambientales adecuadas estan incluidas en la definicion de polipeptidos que tienen actividad de IL-2 como se usa en el presente documento. Ademas, la secuencia de aminoacidos primaria del polipeptido puede aumentarse por derivatizacion usando restos de azucar (glucosilacion) o por otras moleculas suplementarias tales como lipidos, fosfato, grupos acetilo y similares. Tambien puede aumentarse por conjugacion con sacaridos. Ciertos aspectos de tal aumento se llevan a cabo mediante sistemas de procesamiento posttraduccional del huesped productor; otras modificaciones tales pueden introducirse in ritro. En cualquier caso, tales modificaciones estan incluidas en la definicion de un polipeptido IL-2 usado en el presente documento mientras que la actividad de IL-2 del polipeptido no se destruya. Se espera que tales modificaciones puedan afectar cuantitativamente o cualitativamente la actividad, tanto potenciando como disminuyendo la actividad del polipeptido, en los diversos ensayos. Ademas, residuos de aminoacidos individuales en la cadena pueden modificarse por oxidacion, reduccion u otra derivatizacion, y el polipeptido puede escindirse para obtener fragmentos que retienen actividad. Tales alteraciones que no destruyen la actividad no eliminan la secuencia de polipeptidos de la definicion de polipeptidos IL-2 de interes como se usa en el presente documento.

La materia proporciona orientacion sustancial referente a la preparacion y uso de variantes de polipeptido. En la preparacion de variantes de IL-2, un experto en la materia puede determinar facilmente que modificaciones a la secuencia de nucleotidos o de aminoacidos de la proteina nativa produciran una variante que sea adecuada para su uso como un componente terapeuticamente activo de una composicion farmaceutica usada en los procedimientos de la presente invencion.

La IL-2 o variantes de la misma para su uso en los procedimientos de la presente invencion pueden ser de cualquier fuente, pero preferentemente se produce recombinantemente. Por "IL-2 recombinante" o "variante de IL-2 recombinante" esta previsto interleucina-2 o variante de la misma que tiene actividad biologica comparable con IL-2 de secuencia nativa y que ha sido preparada por tecnicas de ADN recombinante como se describen, por ejemplo, por Taniguchi y col. (1983) Nature 302:305-310 y Devos (1983) Nucleic Acids Research 11:4307-4323 o IL-2 mutacionalmente alterada como se describe por Wang y col. (1984) Science 224:1431-1433. En general, el gen que codifica IL-2 se clona y luego se expresa en organismos transformados, preferentemente un microorganismo, y lo mas preferentemente E. coli, como se describe en el presente documento. El organismo huesped expresa el gen extraro para producir IL-2 bajo condiciones de expresion. La IL-2 recombinante sintetica tambien puede prepararse en eucariotas, tales como celulas de levadura o humanas. Procedimientos para cultivar, recolectar, romper o extraer la IL-2 de celulas se describen sustancialmente en, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n° 4.604.377; 4.738.927; 4.656.132; 4.569.790; 4.748.234; 4.530.787; 4.572.798; 4.748.234; y 4.931.543, incorporadas en el presente documento por referencia en sus totalidades.

Para ejemplos de proteinas IL-2 de variante vease la publicacion de patente europea (EP) n° EP 136.489 (que desvela una o mas de las siguientes alteraciones en la secuencia de aminoacidos de IL-2 que se produce naturalmente: Asn26 a Gln26; Trp121 a Phe121; Cys58 a Ser58 o Ala58, Cys105 a Ser105 o Ala105; Cys125 a Ser125 o Ala125; delecion de todos los siguientes residuos Arg 120; y las formas Met-1 de los mismos); y las muteinas recombinantes de IL-2 descritas en la solicitud de patente europea n° 83306221.9, presentada el 13 de octubre de 1983 (publicada el 30 de mayo de 1984 bajo la publicacion n° EP 109.748), que es el equivalente a la patente belga n° 893.016 y la patente de EE.UU. del mismo solicitante n° 4.518.584 (que desvela muteina de IL-2 recombinante humana en la que la cisteina en la posicion 125, numerada segun IL-2 humana nativa, esta delecionada o sustituida con un aminoacido neutro; alanil-ser125-IL-2; y des-alanil-ser125-IL-2). Vease tambien la patente de EE.UU. n° 4.752.585 (que desvela las siguientes proteinas IL-2 de variante: ala104 ser125 IL-2, ala104 IL-2, ala104 ala125 IL-2, val104 ser125 IL-2, val104 IL-2, val104 ala125 IL-2, des-ala1 ala104 ser125 IL-2, des-alal ala104 IL-2, des-ala1 ala104 ala125 IL-2, des-ala1 val104 ser125 IL-2, des-ala1 val104 IL-2, des-ala1 val104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 ala104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 ala104 IL-2, des-ala1 des-pro2 ala104 ala125 IL-2, des-alal des-pro2 val104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 val104 IL-2, des-ala1 des-pro2 val104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 ala104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 ala104 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 alga104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 val104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 val104 IL-2, des-ala1 despro2 des-thr3 val104 ala125 IL-2, des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 ala104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 desthr3 des-ser4 ala104 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 ala104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 desser4 val104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 val104 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 val104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 ala104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 ala104 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 ala104 ala125 IL-2, des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 val104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 val104 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 val104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 ala104 ala125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 ala104 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 ala104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 val104 ser125 IL-2, des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 val104 IL-2 y des-ala1 des-pro2 des-thr3 desser4 des-ser5 des-ser6 val104 ala125 IL-2) y la patente de EE.UU. n° 4.931.543 (que desvela la muteina de IL-2 des-alanil-1, IL-2 humana de serina-125 usada en los ejemplos en el presente documento, ademas de las otras muteinas de IL-2).

Vease tambien la publicacion de patente europea n° EP 200,280 (publicada el 10 de diciembre de 1986), que desvela muteinas de IL-2 recombinante en las que la metionina en la posicion 104 se ha sustituido con un aminoacido conservativo. Ejemplos incluyen las siguientes muteinas: ser4 des-ser5 ala104 IL-2; des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 ala104 ala125 IL-2; des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 glu104 ser125 IL-2; des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 glu104 IL-2; des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 glu104 ala125 IL-2; des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 ala104 ala125 IL-2; des-ala1 des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 ala104 IL-2; des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 ala104 ser125 IL-2; des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 glu104 ser125 IL-2; des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 desser5 des-ser6 glu104 IL-2; y des-alal des-pro2 des-thr3 des-ser4 des-ser5 des-ser6 glu104 ala125 IL-2. Vease tambien la publicacion de patente europea n° 118.617 y la patente de EE.UU. n° 5.700.913, que desvelan variantes de IL-2 humana sin glucosilar que llevan alanina en lugar de metionina como aminoacido del extremo N como se encuentra en la molecula nativa; una IL-2 humana sin glucosilar con la metionina inicial delecionada de forma que la prolina sea el aminoacido del extremo N; y una IL-2 humana sin glucosilar con una alanina insertada entre la metionina del extremo N y aminoacidos de prolina.

Otras muteinas de IL-2 incluyen las desveladas en el documento WO 99/60128 (sustituciones de aspartato en la posicion 20 con histidina o isoleucina, la asparagina en la posicion 88 con arginina, glicina o isoleucina, o la glutamina en la posicion126 con leucina o acido glutamico), que supuestamente tienen actividad selectiva para receptores de IL-2 a alta afinidad expresados por celulas que expresan receptores de linfocito T en preferencia a celulas NK y toxicidad de IL-2 reducida; las muteinas desveladas en la patente de EE.UU. n° 5.229.109 (sustituciones de arginina en la posicion 38 con alanina, o sustituciones de fenilalanina en la posicion 42 con lisina), que presentan union reducida a receptor de IL-2 a alta afinidad cuando se compara con IL-2 nativa, mientras que mantenga la capacidad para estimular celulas LAK; las muteinas desveladas en la publicacion internacional n° WO 00/58456 (alterar o delecionar una secuencia de (x)D(y) que se produce naturalmente en IL-2 nativa en la que D es acido aspartico, (x) es leucina, isoleucina, glicina o valina, y (y) es valina, leucina o serina), que se reivindican que reducen sindrome de fuga vascular; el peptido p1-30 de IL-2 desvelado en la publicacion internacional n° WO 00/04048 (correspondiente a los 30 primeros aminoacidos de IL-2, que contienen la a-helice A entera de IL-2 e interacciona con la cadena b del receptor de IL-2), que supuestamente estimula celulas NK y la induccion de celulas LAK; y una forma mutante del peptido p1-30 de IL-2 tambien desvelado en el documento WO 00/04048 (sustitucion de acido aspartico en la posicion 20 con lisina), que supuestamente no puede inducir hemorragias vasculares, pero que sigue pudiendo generar celulas LAK. Adicionalmente, IL-2 puede modificarse con polietilenglicol para proporcionar solubilidad potenciada y un perfil farmacocinetico alterado (vease la patente de EE.UU. n° 4.766.106).

Ejemplos adicionales de muteinas de IL-2 con toxicidad reducida predicha se desvelan en la solicitud provisional de EE.UU. n° de serie 60/550.868, presentada el 5 de marzo de 2004, incorporada en el presente documento por referencia en su totalidad. Estas muteinas comprenden la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana madura con una serina sustituida por cisteina en la posicion 125 de la secuencia de IL-2 humana madura y al menos una sustitucion de aminoacidos adicional dentro de la secuencia de IL-2 humana madura de forma que la muteina tenga las siguientes caracteristicas funcionales: 1) mantenga o potencie la proliferacion de linfocitos citoliticos espontaneos (NK), y 2) induzca un nivel reducido de produccion de citocinas pro-inflamatorias por celulas NK; en comparacion con una cantidad similar de des-alanil-1, IL-2 humana de C125S o IL-2 humana de C125S bajo condiciones de ensayo comparables. En algunas realizaciones, la sustitucion adicional esta seleccionada del grupo que consiste en T7A, T7D, T7R, K8L, K9A, K9D, K9R, K9S, K9V, K9W, T10K, T10N, 011A, 011R, 011T, E15A, H16D, H16E, L19D, L19E, D20E, I24L, K32A, K32W, N33E, P34E, P34R P34S, P34T, P34V, K35D, K35I, K35L, K35M, K35N, K35P, K350, K35T, L36A, L36D, L36E, L36F, L36G, L36H, L36I, L36K, L36M, L36N, L36P, L36R, L36S, L36W, L36Y, R38D, R38G, R38N, R38P, R38S, L40D, L40G, L40N, L40S, T41E, T41G, F42A, F42E, F42R, F42T, F42V, K43H, F44K, M46I, E61K, E61M, E61R, E62T, E62Y, K64D, K64E, K64G, K64L, K640, K64R, P65D, P65E, P65F, P65G, P65H, P65I, P65K, P65L, P65N, P650, P65R, P65S, P65T, P65V, P65W, P65Y, L66A, L66F, E67A, L72G, L72N, L72T, F78S, F78W, H79F, H79M, H79N, H79P, H790, H79S, H79V, L80E, L80F, L80G, L80K, L80N, L80R, L80T, L80V, L80W, L80Y, R81E, R81K, R81L, R81M, R81N, R81P, R81T, D84R, S87T, N88D, N88H, N88T, V91A, V91D, V91E, V91F, V91G, V91N, V910, V91W, L94A, L94I, L94T, L94V, L94Y, E95D, E95G, E95M, T102S, T102V, M104G, E106K, Y107H, Y107K, Y107L, Y1070, Y107R, Y107T, E116G, N1190, T123S, T123C, 0126I y 0126V; en las que la posicion del residuo de aminoacido es con respecto a la numeracion de la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana madura. En otras realizaciones, estas muteinas comprenden la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana madura con una alanina sustituida por cisteina en la posicion 125 de la secuencia de IL-2 humana madura y al menos una sustitucion adicional de aminoacidos dentro de la secuencia de IL-2 humana madura de forma que la muteina tenga estas mismas caracteristicas funcionales. En algunas realizaciones, la sustitucion adicional esta seleccionada del grupo que consiste en T7A, T7D, T7R, K8L, K9A, K9D, K9R, K9S, K9V, K9W, T10K, T10N, 011A, 011R, 011T, E15A, H16D, H16E, L19D, L19E, D20E, I24L, K32A, K32W, N33E, P34E, P34R, P34S, P34T, P34V, K35D, K35I, K35L, K35M, K35N, K35P, K350, K35T, L36A, L36D, L36E, L36F, L36G, L36H, L36I, L36K, L36M, L36N, L36P, L36R, L36S, L36W, L36Y, R38D, R38G, R38N, R38P, R38S, L40D, L40G, L40N, L40S, T41E, T41G, F42A, F42E, F42R, F42T, F42V, K43H, F44K, M46I, E61K, E61M, E61R, E62T, E62Y, K64D, K64E, K64G, K64L, K640, K64R, P65D, P65E, P65F, P65G, P65H, P65I, P65K, P65L, P65N, P650, P65R, P65S, P65T, P65V, P65W, P65Y, L66A, L66F, E67A, L72G, L72N, L72T, F78S, F78W, H79F, H79M, H79N, H79P, H790, H79S, H79V, L80E, L80F, L80G, L80K, L80N, L80R, L80T, L80V, L80W, L80Y, R81E, R81K, R81L, R81M, R81N, R81P, R81T, D84R, S87T, N88D, N88H, N88T, V91A, V91D, V91E, V91F, V91G, V91N, V910, V91W, L94A, L94I, L94T, L94V, L94Y, E95D, E95G, E95M, T102S, T102V, M104G, E106K, Y107H, Y107K, Y107L, Y1070, Y107R, Y107T, E116G, N1190, T123S, T123C, 0126I y 0126V; en las que la posicion del residuo de aminoacido es con respecto a la numeracion de la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana madura. En realizaciones alternativas, estas muteinas comprenden la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana madura con al menos una sustitucion adicional de aminoacidos dentro de la secuencia de IL-2 humana madura de forma que la muteina tenga estas mismas caracteristicas funcionales. En algunas realizaciones, la sustitucion adicional esta seleccionada del grupo que consiste en T7A, T7D, T7R, K8L, K9A, K9D, K9R, K9S, K9V, K9W, T10K, T10N, 011A, 011R, 011T, E15A, H16D, H16E, L19D, L19E, D20E, I24L, K32A, K32W, N33E, P34E, P34R, P34S, P34T, P34V, K35D, K35I, K35L, K35M, K35N, K35P, K350, K35T, L36A, L36D, L36E, L36F, L36G, L36H, L36I, L36K, L36M, L36N, L36P, L36R, L36S, L36W, L36Y, R38D, R38G, R38N, R38P, R38S, L40D, L40G, L40N, L40S, T41E, T41G, F42A, F42E, F42R, F42T, F42V, K43H, F44K, M46I, E61K, E61M, E61R, E62T, E62Y, K64D, K64E, K64G, K64L, K640, K64R, P65D, P65E, P65F, P65G, P65H, P65I, P65K, P65L, P65N, P650, P65R, P65S, P65T, P65V, P65W, P65Y, L66A, L66F, E67A, L72G, L72N, L72T, F78S, F78W, H79F, H79M, H79N, H79P, H790, H79S, H79V, L80E, L80F, L80G, L80K, L80N, L80R, L80T, L80V, L80W, L80Y, R81E, R81K, R81L, R81M, R81N, R81P, R81T, D84R, S87T, N88D, N88H, N88T, V91A, V91D, V91E, V91F, V91G, V91N, V910, V91W, L94A, L94I, L94T, L94V, L94Y, E95D, E95G, E95M, T102S, T102V, M104G, E106K, Y107H, Y107K, Y107L, Y1070, Y107R, Y107T, E116G, N1190, T123S, T123C, 0126I y 0126V; en las que la posicion del residuo de aminoacido es con respecto a la numeracion de la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana madura. Muteinas adicionales desveladas en la solicitud provisional de EE.UU. n° de serie 6.0/550.868 incluyen las anteriores muteinas identificadas, con la excepcion de las que tienen el residuo de alanina inicial en la posicion 1 de la secuencia de IL-2 humana madura delecionada.

El termino IL-2 como se usa en el presente documento tambien esta previsto que incluya fusiones o conjugados de IL-2 que comprenden IL-2 fusionada con una segunda proteina o covalentemente conjugada con poliprolina o un polimero soluble en agua para reducir las frecuencias de dosificacion o para mejorar la tolerabilidad de IL-2. Por ejemplo, la IL-2 (o una variante de la misma como se define en el presente documento) puede fusionarse con albumina humana o un fragmento de albumina usando procedimientos conocidos en la tecnica (vease el documento WO 41/79258). Alternativamente, la IL-2 puede conjugarse covalentemente con poliprolina u homopolimeros de polietilenglicol y polioles polioxietilados, estando el homopolimero sin sustituir o sustituido en un extremo con un grupo alquilo y el poliol esta sin sustituir, usando procedimientos conocidos en la tecnica (veanse, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n° 4.766.106, 5.206.344, 4.894.226 y 5.830.452).

Cualquier composicion farmaceutica que comprenda IL-2 como componente terapeuticamente activo puede usarse en los procedimientos de la invencion. Tales composiciones farmaceuticas se conocen en la tecnica e incluyen, pero no se limitan a, las desveladas en las patentes de EE.UU. n° 4.745.180; 4.766.106; 4.816.440; 4.894.226; 4.931.544; y 5.078.997; incorporadas en el presente documento por referencia. Asi, composiciones liquidas, liofilizadas o secadas por pulverizacion que comprenden IL-2 o variantes de la misma que se conocen en la tecnica pueden prepararse como una disolucion o suspension acuosa o no acuosa para posterior administracion a un sujeto segun los procedimientos de la invencion. Cada una de estas composiciones comprendera IL-2 o variantes de la misma como un componente terapeuticamente o profilacticamente activo. Por "componente terapeuticamente o profilacticamente activo" esta previsto que la IL-2 o variantes de la misma se incorporen especificamente en la composicion para provocar una respuesta terapeutica o profilactica deseada con respecto al tratamiento o prevencion de una enfermedad o afeccion dentro de un sujeto cuando la composicion farmaceutica se administra a ese sujeto. Preferentemente, las composiciones farmaceuticas comprenden agentes estabilizantes apropiados, agentes de carga, o ambos, para minimizar los problemas asociados a la perdida de estabilidad de la proteina y actividad biologica durante la preparacion y almacenamiento.

En realizaciones preferidas de la invencion, la IL-2 que contiene composiciones farmaceuticas utiles en los procedimientos de la invencion son composiciones que comprenden IL-2 monomerica estabilizada o variantes de la misma, composiciones que comprenden IL-2 multimerica o variantes de la misma, y composiciones que comprenden IL-2 liofilizada o secada por pulverizacion estabilizada o variantes de la misma.

Composiciones farmaceuticas que comprenden IL-2 monomerica estabilizada o variantes de la misma se desvelan en la solicitud PCT n° PCT/US00/27156, presentada el 3 de octubre de 2000, cuya divulgacion se incorpora en el presente documento por referencia. Por IL-2 "monomerica" estan previstas las moleculas de proteina que estan sustancialmente presentes en su forma monomerica, no en una forma agregada, en las composiciones farmaceuticas descritas en el presente documento. De ahi que no esten presentes oligomeros covalentes o hidrofobos o agregados de IL-2. Brevemente, la IL-2 o variantes de la misma en estas composiciones liquidas se formulan con una cantidad de una base de aminoacido suficiente para reducir la formacion de agregados de IL-2 o variantes de la misma durante almacenamiento. La base de aminoacido es un aminoacido o una combinacion de aminoacidos, estando presente cualquier aminoacido dado tanto en su forma de base libre como en su forma de sal. Aminoacidos preferidos se seleccionan del grupo que consiste en arginina, lisina, acido aspartico y acido glutamico. Estas composiciones comprenden ademas un agente de tamponamiento para mantener el pH de las composiciones liquidas dentro de un intervalo aceptable para estabilidad de IL-2 o variantes de la misma, siendo el agente de tamponamiento un acido sustancialmente libre de su forma de sal, un acido en su forma de sal, o una mezcla de un acido y su forma de sal. Preferentemente, el acido esta seleccionado del grupo que consiste en acido succinico, acido citrico, acido fosforico y acido glutamico. Tales composiciones se denominan en el presente documento composiciones farmaceuticas de IL-2 monomericas estabilizadas.

La base de aminoacido en estas composiciones sirve para estabilizar la IL-2 o variantes de la misma contra la formacion de agregados durante el almacenamiento de la composicion farmaceutica liquida, mientras que el uso de un acido sustancialmente libre de su forma de sal, un acido en su forma de sal, o una mezcla de un acido y su forma de sal como agente de tamponamiento, produce una composicion liquida que tiene una osmolaridad que es casi isotonica. La composicion farmaceutica liquida puede incorporar adicionalmente otros agentes estabilizantes, mas particularmente metionina, un tensioactivo no ionico tal como polisorbato 80, y EDTA, para aumentar adicionalmente la estabilidad del polipeptido. Se dice que tales composiciones farmaceuticas liquidas estan estabilizadas, ya que la adicion de base de aminoacido en combinacion con un acido sustancialmente libre de su forma de sal, un acido en su forma de sal, o una mezcla de un acido y su forma de sal, produce composiciones que tienen elevada estabilidad durante el almacenamiento con respecto a composiciones farmaceuticas liquidas formuladas en ausencia de la combinacion de estos dos componentes.

Estas composiciones farmaceuticas liquidas que comprenden IL-2 monomerica estabilizada o variantes de la misma pueden tanto usarse en una forma de liquido acuoso como guardarse para usarse despues en un estado congelado,

o en una forma seca para reconstituir despues en una forma liquida u otra forma adecuada para administracion a un sujeto segun los procedimientos de la presente invencion. Por "forma seca" esta previsto que la composicion farmaceutica liquida o formulacion se seque tanto por secado por congelacion (es decir, liofilizacion; vease, por ejemplo, Williams y Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59), secado por pulverizacion (vease Masters (1991) en Spray-Drying Handbook (5a ed; Longman Scientific y Technical, Essez, RU), pag. 491-676; Broadhead y col. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; y Mumenthaler y col. (1994) Pharm. Res. 11:12-20), o secado por aire (Carpenter y Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; y Roser (1991) Biopharm. 4:47-53).

Otros ejemplos de formulaciones de IL-2 que comprenden IL-2 en su estado monomerico no agregado incluyen aquellos descritos en Whittington y Faulds (1993) Drugs 46(3):446-514. Estas formulaciones incluyen el producto de IL-2 recombinante en el que la muteina de IL-2 recombinante Teceleukin (IL-2 humana sin glucosilar con un residuo de metionina aradido al extremo amino) se formula con 0,25% de albumina de suero humano en un polvo liofilizado que se reconstituye en solucion salina isotonica, y la muteina de IL-2 recombinante Bioleukin (IL-2 humana con un residuo de metionina aradido al extremo amino, y una sustitucion del residuo de cisteina en la posicion 125 de la secuencia de IL-2 humana con alanina) se formula tal que 0,1 a 1,0 mg/ml de IL-2 muteina se combine con acido, teniendo la formulacion un pH de 3,0 a 4,0, ventajosamente sin tampon, y una conductividad inferior a 1000 mmhos/cm (ventajosamente inferior a 500 mmhos/cm). Veanse el documento EP 373,679; �hang y col. (1996) Pharmaceut. Res. 13(4):643-644; y Prestrelski y col. (1995) Pharmaceut. Res. 12(9):1250-1258.

Ejemplos de composiciones farmaceuticas que comprenden IL-2 multimerica o variantes de la misma se desvelan en la patente de EE.UU. del mismo solicitante n° 4.604.377, cuya divulgacion se incorpora en el presente documento por referencia. Por "multimerica" esta previsto que las moleculas de proteina esten presentes en la composicion farmaceutica en una forma microagregada que tiene una asociacion molecular promedio de 10-50 moleculas. Estos multimeros estan presentes como moleculas de IL-2 fisicamente asociadas unidas de forma suelta. Una forma liofilizada de estas composiciones esta disponible comercialmente bajo la marca comercial Proleukin® (Chiron Corporation, Emeryville, California). Las formulaciones liofilizadas desveladas en esta referencia comprenden IL-2 recombinante microbianamente producida selectivamente oxidada en la que la IL-2 recombinante se mezcla con un vehiculo soluble en agua tal como manitol que proporciona masa, y una cantidad suficiente de dodecilsulfato de sodio para garantizar la solubilidad de la IL-2 recombinante en agua. Estas composiciones son adecuadas para reconstitucion en inyecciones acuosas para administracion parenteral y son estables y bien toleradas en pacientes humanos. Cuando se reconstituyen, la IL-2 o variantes de la misma retienen su estado multimerico. Tales composiciones liofilizadas o liquidas que comprenden IL-2 multimerica o variantes de la misma estan englobadas por los procedimientos de la presente invencion. Tales composiciones se denominan en el presente documento composiciones farmaceuticas de IL-2 multimerica.

Los procedimientos de la presente invencion tambien pueden usar composiciones farmaceuticas liofilizadas o secadas por pulverizacion estabilizadas que comprenden IL-2 o variantes de la misma, que pueden reconstituirse en un liquido u otra forma adecuada para administracion segun procedimientos de la invencion. Tales composiciones farmaceuticas se desvelan en la solicitud de EE.UU. pendiente de tramitacion n° de serie 09/724.810, presentada el 28 de noviembre de 2000 y la solicitud internacional PCT/US00/35452, presentada el 27 de diciembre de 2000, incorporadas en el presente documento por referencia en sus totalidades. Estas composiciones pueden comprender ademas al menos un agente de carga, al menos un agente en una cantidad suficiente para estabilizar la proteina durante el procedimiento de secado, o ambos. Por "estabilizado" esta previsto que la proteina IL-2 o variantes de la misma retengan su forma monomerica o multimerica, ademas de sus otras propiedades clave de calidad, pureza y potencia tras la liofilizacion o secado por pulverizacion para obtener la forma solida o de polvo seco de la composicion. En estas composiciones, materiales de vehiculo preferidos para su uso como agente de carga incluyen glicina, manitol, alanina, valina, o cualquier combinacion de los mismos, lo mas preferentemente glicina. El agente de carga esta presente en la formulacion en el intervalo del 0% a aproximadamente el 10% (peso/volumen), que depende del agente usado. Materiales de vehiculo preferidos para su uso como agente estabilizante incluyen cualquier azucar o alcohol de azucar o cualquier aminoacido. Azucares preferidos incluyen sacarosa, trehalosa, rafinosa, estaquiosa, sorbitol, glucosa, lactosa, dextrosa o cualquier combinacion de los mismos, preferentemente sacarosa. Si el agente estabilizante es un azucar, esta presente en el intervalo de aproximadamente el 0% a aproximadamente el 9,0% (peso/volumen), preferentemente de aproximadamente el 0,5% a aproximadamente el 5,0%, mas preferentemente de aproximadamente el 1,0% a aproximadamente el 3,0%, lo mas preferentemente de aproximadamente el 1,0%. Si el agente estabilizante es un aminoacido, esta presente en el intervalo de aproximadamente el 0% a aproximadamente el 1,0% (peso/volumen), preferentemente de aproximadamente el 0,3% a aproximadamente el 0,7%, lo mas preferentemente de aproximadamente el 0,5%. Estas composiciones liofilizadas

o secadas por pulverizacion estabilizadas pueden comprender opcionalmente metionina, acido etilendiaminatetracido (EDTA) o una de sus sales tales como EDTA de disodio u otro agente quelante, que protegen la IL-2 o variantes de la misma contra la oxidacion de metionina. El uso de estos agentes de este modo se describe en la solicitud provisional de EE.UU. en tramitacion junto con la presente n° de serie 60/157696, incorporada en el presente documento por referencia. Las composiciones liofilizadas o secadas por pulverizacion estabilizadas pueden formularse usando un agente de tamponamiento, que mantiene el pH de la composicion farmaceutica dentro de un intervalo aceptable, preferentemente entre aproximadamente pH 4,0 y aproximadamente pH 8,5, cuando esta en una fase liquida, tal como durante el procedimiento de formulacion o tras la reconstitucion de la forma secada de la composicion. Los tampones se eligen de forma que sean compatibles con el procedimiento de secado y no afecten la calidad, pureza, potencia y estabilidad de la proteina durante el procesamiento y tras el almacenamiento.

Las composiciones farmaceuticas de IL-2 monomericas estabilizadas, multimericas y liofilizadas o secadas por pulverizacion estabilizadas previamente descritas representan composiciones adecuadas para su uso en los procedimientos de la invencion. Sin embargo, cualquier composicion farmaceutica que comprenda IL-2 o variante de la misma como componente terapeuticamente activo esta englobada por los procedimientos de la invencion.

Administraci6n

Se administrara al menos un ciclo de tratamiento terapeuticamente eficaz con bajas dosis de IL-2 o una variante de la misma. Por "ciclo de tratamiento terapeuticamente eficaz" esta previsto un ciclo de tratamiento que, cuando se administre, provoque una respuesta terapeutica positiva con respecto al tratamiento de un individuo para carcinoma de celulas renales, particularmente carcinoma de celulas renales metastasico. De particular interes es un ciclo de tratamiento con bajas dosis de IL-2 que proporciona un efecto antitumoral, como se define en el presente documento. Por "respuesta terapeutica positiva" esta previsto que el individuo que se someta al tratamiento segun la invencion presente una mejora en uno o mas sintomas de carcinoma de celulas renales para los que el individuo esta recibiendo terapia.

Asi, por ejemplo, una "respuesta terapeutica positiva" seria una mejora en la enfermedad en asociacion con la terapia, y/o una mejora en uno o mas sintomas de la enfermedad en asociacion con la terapia. Por tanto, por ejemplo, una respuesta terapeutica positiva se referiria a una o mas de las siguientes mejoras en la enfermedad: (1) reduccion en el tamaro del tumor; (2) reduccion en el numero de celulas cancerosas; (3) inhibicion (es decir, ralentizamiento a cierto grado, preferentemente detencion) del crecimiento tumoral; (4) inhibicion (es decir, ralentizamiento a cierto grado, preferentemente detencion) de la infiltracion de celulas cancerosas en organos perifericos; (5) inhibicion (es decir, ralentizamiento a cierto grado, preferentemente detencion) de metastasis tumoral; y (6) algun grado de alivio de uno o mas sintomas asociados al cancer. Tales respuestas terapeuticas pueden caracterizarse adicionalmente en cuanto al grado de mejora. Asi, por ejemplo, una mejora puede caracterizarse como una respuesta completa. Por "respuesta completa" esta prevista la documentacion de la desaparicion de todos los sintomas y signos de toda enfermedad medible o evaluable confirmada por examen fisico, estudios de laboratorio, nucleares y radiograficos (es decir, TC (tomografia computerizada) y/o RMN (resonancia magnetica nuclear)), y otros procedimientos no invasivos repetidos para todas las anomalias iniciales o sitios positivos en el momento de entrar en el estudio. Alternativamente, una mejora en la enfermedad puede clasificarse como que es una respuesta parcial. Por "respuesta parcial" esta prevista una reduccion superior al 50% en la suma de los productos de los diametros perpendiculares de todas las lesiones medibles cuando se comparan con mediciones de pretratamiento, y ninguna progresion de enfermedad evaluable, ni formacion de ninguna nueva lesion, durante al menos 28 dias.

En ciertas realizaciones de la invencion, la composicion farmaceutica que comprende IL-2 o una variante de la misma es una formulacion de liberacion sostenida, o una formulacion que se administra usando un dispositivo de liberacion sostenida. Tales dispositivos son muy conocidos en la tecnica e incluyen, por ejemplo, parches transdermicos y bombas implantables en miniatura que pueden proporcionar la administracion del farmaco con el tiempo en un modo en estado estacionario continuo a una variedad de dosis para lograr un efecto de liberacion sostenida con una composicion farmaceutica de no liberacion sostenida.

Composiciones farmaceuticas que comprenden IL-2 o una variante de la misma pueden administrarse segun cualquier procedimiento medicamente aceptable conocido en la tecnica. Vias de administracion adecuadas incluyen administracion parenteral, tal como subcutanea (SC), intraperitoneal (IP), intramuscular (IM), intravenosa (IV) o infusion, oral y pulmonar, nasal, topica, transdermica y supositorios. Si la composicion se administra por administracion pulmonar, la dosis terapeuticamente eficaz se ajusta de forma que el nivel soluble del agente, tal como la IL-2 o variante de la misma, en la circulacion sanguinea sea equivalente al obtenido con una dosis terapeuticamente eficaz que se administra parenteralmente, por ejemplo SC, IP, IM o IV. En algunas realizaciones de la invencion, la composicion farmaceutica que comprende IL-2 o una variante de la misma se administra por inyeccion IM o SC, particularmente por inyeccion IM o SC, localmente a la region en la que se administran el agente terapeutico o agentes usados en el protocolo de terapia contra el cancer.

Factores que influyen en la cantidad de IL-2 que va a administrarse incluyen, pero no se limitan a, el modo de administracion, la frecuencia de administracion, la enfermedad particular que se somete a terapia, la gravedad de la enfermedad, la historia de la enfermedad, si el individuo esta recibiendo o no terapia simultanea con otro agente terapeutico, y la edad, altura, peso, salud y condicion fisica del individuo que recibe la terapia. Generalmente, se prefiere una mayor dosificacion de este agente con peso creciente del sujeto que recibe la terapia.

Con el fin de lograr eficacia, el nivel de IL-2 en sangre debe estar por encima de un nivel especifico durante un tiempo especifico. La eficacia es dependiente de la dosis, y niveles mayores de IL-2 contribuyen a mayores efectos antitumorales. Con el fin de minimizar la toxicidad, el nivel de IL-2 en sangre debe estar por debajo de un cierto nivel dentro de un tiempo especifico y durante un tiempo especifico (debe haber un "periodo de descanso" para permitir la eliminacion de IL-2). Es decir, el farmaco debe estar por debajo de un cierto nivel un cierto tiempo antes de que se administre la siguiente dosis. Descansos mas cortos entre dosis contribuyen a mayor toxicidad.

En ciertos aspectos, el tratamiento de un paciente que tiene carcinoma de celulas renales comprende un ciclo de tratamiento con IL-2 a baja dosis seguido de un periodo de descanso para permitir que el paciente se "recupere" de los efectos no deseables de la IL-2. Pueden administrarse multiples dosis de IL-2 o una variante de la misma segun una pauta de dosificacion diaria, preferentemente se administran 9-18 MUI de IL-2 por dia en una a tres dosis por dia, durante tres a seis dias a la semana, durante 1-24 semanas, seguido de un periodo de descanso. Preferentemente, el periodo de descanso es de una a cuatro semanas entre pautas de dosificacion. Despues puede administrarse un nuevo programa de dosificacion de IL-2 para proveer al sistema inmunitario de otro refuerzo. En ciertas realizaciones, el segundo ciclo de tratamiento comprende administrar 9 MUI en una a tres dosis por dia, durante tres a seis dias a la semana, durante 1-24 semanas, seguido de un periodo de descanso.

En ciertas realizaciones, el procedimiento de tratamiento de un paciente que tiene carcinoma de celulas renales comprende un ciclo de tratamiento que consiste en seis semanas de tratamiento con IL-2 a baja dosis (9-18 MUI), una vez al dia durante cinco dias a la semana (qd x 5d), seguido de un "periodo de descanso" de una a cuatro semanas en el que no se administra IL-2 y un ciclo de tratamiento posterior que consiste en seis semanas de tratamiento con IL-2 a una dosis de 9 MUI una vez al dia durante cinco dias a la semana, seguido de un periodo de descanso de una a cuatro semanas en el que no se administra IL-2. En ciertas realizaciones, el posterior ciclo de tratamiento que consiste en seis semanas de tratamiento con IL-2 a una dosis de 9 MUI una vez al dia durante cinco dias a la semana, seguido de un periodo de descanso de una a cuatro semanas en el que no se administra IL-2, se repite multiples veces.

En una realizacion preferida, un paciente que tiene carcinoma de celulas renales se trata primero, administrando una dosis de 18 MUI de IL-2 por dia durante 5 dias durante una semana; segundo, administrando una dosis de 9 MUI de IL-2 por dia durante 2 dias seguido de administrar una dosis de 18 MUI de IL-2 por dia durante 3 dias durante cada semana, repetida durante 5 semanas; tercero, no administrando IL-2 durante 3 semanas; cuarto, administrando una dosis de 9 MUI de IL-2 por dia durante 5 dias de cada semana, repetida durante 6 semanas; y quinto, no administrando IL-2 durante 3 semanas.

En ciertos aspectos, la IL-2 usada para el tratamiento de un paciente que tiene carcinoma de celulas renales esta covalentemente conjugada con polietilenglicol o poliol polioxietilado.

En ciertas realizaciones, multiples ciclos de tratamiento por cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento se administran a un paciente durante un periodo de tiempo suficiente para efectuar al menos una respuesta tumoral parcial, por ejemplo, el periodo de tiempo puede ser al menos 6 meses o al menos 12 meses. Preferentemente, el periodo de tiempo es suficiente para efectuar una respuesta tumoral completa.

En ciertas realizaciones, un paciente que tiene carcinoma de celulas renales es renalmente insuficiente (SCr > 1,5 mg/dl), intolerante o inelegible para el tratamiento con IL-2 a alta dosis. Un paciente tal puede tratarse con IL-2 a baja dosis por cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento.

Si un sujeto que recibe terapia segun las pautas de dosificacion previamente mencionadas presenta una respuesta parcial, o una recaida tras un periodo de remision prolongado, pueden necesitarse ciclos de terapia posteriores para lograr la remision completa de la enfermedad. Asi, posterior a un periodo de tiempo libre desde un primer periodo de tratamiento, un sujeto puede recibir uno o mas periodos de tratamiento adicionales de terapia con IL-2. Un periodo de tiempo libre tal entre periodos de tratamiento se denomina en el presente documento un periodo de tiempo de suspension. Se reconoce que la longitud del periodo de tiempo de suspension depende del grado de respuesta tumoral (es decir, completa frente a parcial) conseguida con cualquier periodo de tratamiento previo de terapia con IL-2.

III. Parte experimental

A continuacion hay ejemplos de realizaciones especificas para llevar a cabo la presente invencion. Los ejemplos se ofrecen para fines ilustrativos solo, y no pretenden limitar el alcance de la presente invencion de ningun modo.

Se han hecho esfuerzos para garantizar la precision con respecto a los numeros usados (por ejemplo, cantidades, temperaturas, etc.), pero debe, por supuesto, permitirse algun error experimental y desviacion.

Ejemplo 1 Composici6n farmaceutica de IL-2 para ensayo clinico humano de fase IV

La formulacion de IL-2 usada se fabrico por Chiron Corporation de Emeryville, California, bajo el nombre comercial Proleukin®. La IL-2 en esta formulacion es una muteina de IL-2 humana recombinantemente producida, sin glucosilar, llamada aldesleucina, que se diferencia de la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana nativa en que tiene el residuo de alanina inicial eliminado y el residuo de cisteina en la posicion 125 sustituido por un residuo de serina (denominado des-alanil-1, serina-125-interleucina-2 humana). Esta muteina de IL-2 se expresa en E. coli, y posteriormente se purifica por diafiltracion y cromatografia de intercambio cationico como se describe en la patente de EE.UU. n° 4.931.543, incorporada en el presente documento por referencia en su totalidad. La formulacion de IL2 comercializada como Proleukin® se suministra como un polvo liofilizado sin conservantes de blanco a blanquecino esteril en viales que contienen 1,3 mg de proteina (22 MUI).

Ejemplo 2

Criterios de selecci6n para pacientes con carcinoma de celulas renales metastasico para el tratamiento con IL-2 en ensayo clinico humano de fase IV

Los siguientes criterios de seleccion se aplicaron a pacientes con carcinoma de celulas renales metastasico: Criterios de inclusion:

El paciente tiene carcinoma de celulas renales histologicamente documentado (tumores mixtos o sarcomatoides papilares de celulas claras) con evidencia de enfermedad metastasica; El paciente tiene enfermedad neoplasica medible o evaluable que se determina en el plazo de cuatro

semanas desde la entrada en el estudio;

La escala de rendimiento de Karnofsky del paciente es �60, correspondiente a una escala de rendimiento (ER) del grupo oncologico cooperativo del este (ECOG) de 0-2; Los pacientes deben tener mas de 18 aros de edad; Los pacientes deben tener funcion renal adecuada como se demuestra por un nivel de creatinina en suero

inferior a 1,8 mg/dl; Hemoglobina �10 gm/dl; leucocitos �4.000/ml; plaquetas �100.000/ml; Nivel normal de hormona estimulante tiroidea (TSH); y El paciente esta dispuesto y puede dar consentimiento informado por escrito para participar en este estudio,

que incluye todos los procedimientos de estudio requeridos y visitas de seguimiento. Criterios de exclusion:

El paciente ha tenido tratamiento previo con Proleukin®;

Pacientes con enfermedad activa en el sistema nervioso central detectada por tomografia computerizada

(TC) o resonancia magnetica nuclear (RMN); El paciente tiene hipersensibilidad conocida a cualquiera de los componentes de Proleukin®; El paciente esta en ensayos clinicos simultaneos que implican agentes en investigacion, o el paciente ha

recibido agentes en investigacion en el plazo de las cuatro semanas precedentes; el paciente ha tenido

terapia sistemica previa para carcinoma de celulas renales (los pacientes que se han sometido a cirugia para

carcinoma de celulas renales son elegibles para inclusion; los pacientes que han recibido radioterapia para

una lesion de no referencia son elegibles para el estudio dos semanas despues de completarse la radiacion);

El paciente tiene enfermedad cardiaca de clase III o IV de la Asociacion cardiaca de Nueva York (NYHA);

El paciente tiene enfermedades autoinmunitarias conocidas tales como enfermedad de Crohn;

La paciente esta embarazada o dando el pecho; y

El paciente tiene enfermedad metastasica sin signos de enfermedad tras la reseccion quirurgica de las metastasis.

Ejemplo 3

Estudio clinico de fase IV de IL-2 a baja dosis administrada a seres humanos

Disero y objetivos del estudio clinico

El estudio clinico de fase IV de interleucina-2 en una dosis alternativa (ILIAD) se disero como un estudio prospectivo, multicentro, de un solo brazo de etiqueta abierta para evaluar la eficacia y seguridad de Proleukin® a baja dosis administrada subcutaneamente en pacientes con carcinoma de celulas renales metastasico. El criterio de valoracion primario fue una tasa de respuesta objetiva (TRO) 16%. Los criterios de valoracion secundarios incluyeron tasas de respuesta completa (RC) y respuesta parcial (RP), duracion de la respuesta, supervivencia libre de progresion (LP), supervivencia global (SG) e incidencia de acontecimientos adversos (AA). Los participantes incluyeron investigadores clinicos de tanto entornos de la comunidad como academicos, con un predominio de profesionales clinicos de la comunidad. El estudio ILIAD cribo a 270 pacientes, de los cuales se enrolaron 267.

Las evaluaciones de pretratamiento incluyeron una historia completa, examen fisico, hemograma completo (CBC), panel de quimica del suero, nivel de hormona estimulante tiroidea (TSH) y estudios radiograficos apropiados para documentar sitios de enfermedad metastasica. Las evaluaciones durante el tratamiento incluyeron un CBC, panel de quimica del suero, TSH y examen fisico antes del inicio de cada nuevo ciclo de tratamiento, un CBC antes de la semana cuatro en cada ciclo de tratamiento, y evaluacion de AE en cada contacto con el paciente. Antes de empezar cada nuevo ciclo de tratamiento despues del ciclo 2 se requirieron evaluaciones radiograficas de sitios previamente detectados de enfermedad metastasica. Los cuadernos de recogida de datos documentaron areas evaluables de enfermedad metastasica y los procedimientos usados para hacer tal determinacion.

Pauta de tratamiento de ILIAD

Todos los pacientes recibieron Proleukin® en el siguiente programa de tratamiento:

Marco de tiempo

Tratamiento Proleukin®

Ciclo 1, Semana 1

18 MIU qd x 5 dias

Ciclo 1, Semana 2-6

9 MIU qd x 2 dias + 18 MIU qd x 3 dias

Ciclo 1, Semana 7-9

resto

1-6

9 MIU qd x 5 dias

Ciclos posteriores Semanas 7-9

resto

Proleukin® se administro a 18 millones de unidades internacionales (MUI)/dia durante 5 dias (semana 1, ciclo 1), 9 MUI/dia durante 2 dias, seguido de 18 MUI/dia durante 3 dias (semanas 2-6, ciclo 1) y 9 MUI/dia durante 5 dias (semanas 1-6; ciclos 2). Todos los ciclos de tratamientos fueron de nueve semanas de duracion con seis semanas de tratamiento y tres semanas sin tratamiento. Se pretendio que la duracion del tratamiento continuara durante al menos dos ciclos. Los pacientes con enfermedad progresiva se sacaron del estudio, mientras que los pacientes que respondieron al tratamiento podrian continuar el tratamiento a criterio del investigador. La respuesta tumoral se evaluo cada nueve semanas hasta la progresion de la enfermedad durante hasta dos aros. Los pacientes se evaluaron para supervivencia a uno y dos aros. La poblacion por intencion de tratar (ITT) de ILIAD (n=263 pacientes) recibio al menos una dosis del farmaco en estudio.

Las modificaciones de dosis para toxicidades se hicieron segun pautas estipuladas en el protocolo. Los pacientes que experimentaron grado 3 o superior fueron retirados del tratamiento hasta que se resolvieron los sintomas, y tuvieron dosis posteriores reducidas a la mitad. Si fue tolerado, se implemento un aumento de dosis gradual para ajustar de nuevo la dosis especificada del protocolo. La tasa de aumento de dosis y la dosis final se dejaron a criterio del investigador. Segun el protocolo, cualquier dosis diana deberia ser suficiente para permitir que el paciente recibiera Proleukin® como un paciente ambulatorio, pero suficientemente alta para garantizar la absorcion sistemica (en general esta esta en el intervalo de 5-10 MUI/dia por administracion subcutanea). Las toxicidades que persistieron durante mas de dos semanas produjeron la eliminacion de ese paciente del estudio.

Se recogieron datos para un total de 270 pacientes. Tres de los 270 pacientes fueron fallos del cribado y 4 se enrolaron, pero nunca fueron dosificados. Los 263 pacientes restantes tomaron al menos una dosis de la medicacion del estudio y fueron elegibles para analisis (la poblacion por intencion de tratar). Segun los registros de dosificacion de los 263 pacientes, 142 pacientes recibieron dos ciclos del farmaco en estudio (la poblacion por protocolo). El sesenta y cinco por ciento de los pacientes por intencion de tratar y el 70,4% de los pacientes por protocolo se retiraron debido a una progresion de la enfermedad o recaida.

5 Eficacia

Despues de dos ciclos de tratamiento, los pacientes se evaluaron para progresion o respuesta por el investigador (vease la tabla mas adelante). Las categorias de respuesta fueron "respuesta completa" (RC), "respuesta parcial" (RP), "enfermedad progresiva" (EP), "enfermedad estable" (EE) e "indeterminado" (ID).

10 Seis de los 263 pacientes por intencion de tratar (2,3%) se evaluaron como pacientes que responden completamente al tratamiento por el investigador y 12 (4,6%) como pacientes que responden parcialmente al tratamiento. Cuarenta y ocho pacientes por intencion de tratar (18,3%) tuvieron enfermedad estable y 156 (59,3%) tuvieron estado de enfermedad progresiva. Treinta y ocho pacientes por intencion de tratar (14,4%) fueron considerados

15 indeterminables y a 3 (1,1%) les faltaron evaluaciones. La tasa de respuesta global (respuesta completa mas parcial) fue del 6,8% con un intervalo de confianza (IC) del 95% del 4,1-10,6%.

Seis de los 142 pacientes por protocolo (es decir, recibieron dos ciclos del farmaco en estudio) (4,2%) se evaluaron como pacientes que responden completamente al tratamiento por el investigador y 11 (7,7%) como pacientes que 20 responden parcialmente al tratamiento. La tasa de respuesta global (respuesta completa mas parcial) fue del 12,0% con un intervalo de confianza del 95% del 7,1 - 18,5%.

Evaluaci6n del investigador de la mejor respuesta

Intencion de tratar (N=263)

Por protocolo (N=142)

Respuesta completa

6 (2.3%) 6 (4.2%)

Respuesta parcial

12 (4.6%) 11 (7.7%)

Enfermedad estables

48 (18.3%) 37 (26.1%)

Enfermedad progresiva

156 (59.3%) 87 (61.3%)

No se puede determinar

38 (14.4%) 0

Perdida

3 (1.1%) 1 (0.7%)

Tasa de respuesta global (95% CI)

6.8 (4.1 -10.6) 12.0 (7.1-18.5)

25 Entre los 263 pacientes por intencion de tratar, se produjeron 169 (64,3%) muertes durante el periodo de seguimiento de dos aros. Entre los 142 pacientes por protocolo se produjeron 73 (51,4%) muertes. La siguiente tabla resume los resultados del analisis de supervivencia.

30 Supervivencia

Intent-to-treat (N=263)

Per-protocol (N=142)

Numero de muertes

169 (64.3%) 73 (51.4%)

Supervivencia media en aros (95% C.I.)

1.08 (0.97,1.27) 1.65 (1.39,2.11)

Tasa de superviviencia un aro (95% C.I.)

0.54 (0.48,0.60) 0.74 (0.67,0.81)

Tasa de supervivencia dos aros (95% C.I.)

0.32 (0.26,0.38) 0.45 (0.36,0.55)

Subgrupos de funcion renal

35 Se realizo un analisis de subgrupos de los datos del estudio de ILIAD comparando pacientes con funcion renal normal (creatinina en suero (SCr) :1,5 mg/dl) con pacientes con funcion renal alterada (SCr >1,5 mg/dl). Una comparacion de los subgrupos normales y renalmente insuficientes muestra una frecuencia similar de nefrectomia (73 frente al 70%), PS=0 (28 frente al 23%), PS=1 (59 frente al 60%) y PS=2-3 (13 frente al 17%), respectivamente. Vease la siguiente tabla.

40 Comparacion de eficacia para pacientes con funcion renal normal y alterada

ILIAD (ITT)

ILIAD (SCr:1.5 mg/dL) ILIAD (SCr>1.5 mg/dL)

Pacientes evaluables

n=263 n=209 n=53

Nefrectomia, %

72 73 70

PS=O,%

27 28 23

PS=1, %

59 59 60

PS=2-3, %

14 13 17

Se encontro que los pacientes con funcion renal normal y alterada tenian desenlaces similares. Las Figuras 1-3

5 representan graficas que comparan la eficacia relativa de IL-2 a baja dosis en pacientes con carcinoma de celulas renales metastasico que tienen funcion renal normal (creatinina en suero (SCr) : 1,5 mg/dl) y alterada (SCr >1,5 mg/dl) tras la pauta de administracion descrita anteriormente. En comparacion con pacientes con funcion renal normal, los pacientes renalmente insuficientes tuvieron incidencias similares o mayores de RP (5,7 frente al 4,3%), TRO (7,6 frente al 6,7%), mediana de SLP (0,34 frente a 0,33 aros), SLP-1 aro (28 frente al 18%), SLP-2 aros (16

10 frente al 10%) y SG-2 aros (39 frente al 31%). RC (1,9 frente al 2,4%). La mediana de la supervivencia (1,0 frente a 1,1 aros) y SG-1 aro (52 frente al 55%) fueron ligeramente inferiores para el subgrupo renalmente insuficiente. Vease la siguiente tabla para una comparacion de la eficacia de tratamiento para los subgrupos renales.

ILIAD (ITT)

ILIAD (SCr:1.5 mg/dL) ILIAD (SCr>1.5 mg/dL)

Pacientes evaluables

n=263 n=209 n=53

CR %

2.3 2.4 1.9

PR %

4.6 4.3 5.7

ORR %

6.8 (4.1-10.6) 6.7 (3.7-11.0) 7.6 (2.1-18.2)

Duraci6n media de la respuesta, anos

1.7 (1.1-1.9) 1.5 (1.0-1.7) NE

Media PFS, anos

0.33 (0.31-0.34) 0.33 (0.30-0.34) 0.34 (0.28-0.66)

PFS 1 yr, %

20 (15-25) 18 28

PFS -2 yr, %

11 (7-15) 10 16

Tiempo de supervivencia medio, anos

1.1 (1.0-1.3) 1.1 (0.9-1.3) 1.0 (0.9-2.5)

OS-1 yr, %

54 (48-60) 55 52

OS-2 yr, %

32 (26-38) 31 39

15 Cuando los subgrupos renales se controlaron para nefrectomia previa y escala de rendimiento, SLP y SG permanecieron comparables. Se generaron modelos de regresion logistica incondicional monofactorial usando programas de SAS convencionales para estimar cocientes de probabilidades e intervalos de confianza del 95% de Wald 95 para TRO. Para pacientes renalmente insuficientes, la TRO fue numericamente inferior que para pacientes con funcion renal normal cuando los subgrupos se controlaron para nefrectomia (cociente de probabilidades = 0,52),

20 PS=0 (cociente de probabilidades = 0,57) y PS=1 (cociente de probabilidades = 0,63). Sin embargo, estas diferencias no fueron estadisticamente significativas y deberian interpretarse con cuidado debido al pequero numero de pacientes que responden al tratamiento en los subgrupos renales de funcion normal (n=14) y alterada (n=4). Se usaron modelos de regresion de riesgos proporcionales de Cox para obtener cocientes de riesgos instantaneos e intervalos de confianza del 95% para SLP y SG. La SLP para pacientes renalmente insuficientes fue similar a la de

25 pacientes con funcion renal normal cuando los subgrupos se controlaron para nefrectomia (cociente de riesgos instantaneos = 0 86), no nefrectomia (cociente de riesgos instantaneos = 1 09), PS=0 (cociente de riesgos instantaneos = 1,15) y PS=1 (cociente de riesgos instantaneos = 0,71). La supervivencia para pacientes renalmente insuficientes tambien fue similar a la de pacientes con funcion renal normal cuando los subgrupos se controlaron para nefrectomia (cociente de riesgos instantaneos = 0,92), no nefrectomia (cociente de riesgos instantaneos =1,03),

30 PS=0 (cociente de riesgos instantaneos =1,11) y PS=1 (cociente de riesgos instantaneos = 0,82). Vease la siguiente tabla.

Evaluaci6n monofactorial de subgrupos de ILIAD (SCr>1,5 frente a :15 mg/dl)

ORR

Ratio Odds �ald IC �5% N� de Pacientes

Nefrectomia

0.52 0.11-2.39 189

Sin nefrectomia

NE NE 73

PS=0

0.57 0.06-5.02 70

PS=1

0.63 0.07-5.42 155

PFS

Ratio riesgo IC �5% N� de Pacientes

Nefrectomia

0.86 0.58-1.27 189

Sin nefrectomia

1.09 061-1.93 73

PS=0

1.15 058-2.29 70

PS=1

0.71 047-1.07 155

OS

Ratio riesgo IC �5% N� de Pacientes

Nefrectomia

0.92 0.58-1.46 189

Sin nefrectomia

1.03 0.54-1.95 73

PS=0

1.11 0.46-2.68 70

PS=1

0.82 0.51-1.31 155

NE= No estimable

Comparacion con controles historicos

5 Una busqueda bibliografica identifico ocho publicaciones que usaron grupos de control de placebo o pseudo-placebo en estudios de pacientes con carcinoma de celulas renales no previamente tratados con inmunoterapia (Pyrhonen y col. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2859-2867; Motzer y col. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2530-40; Ritchie y col. (1999) Lancet 353:14-17; Kriegmair y col. (1995) Urology 45:758-762; y Jones y col. (1993) Cancer Biother. 8:275-288; Gleave y

10 col. (1998) New Engl. J. Med. 338:1265-1271; Steineck y col. (1990) Acta Oncol. 29:155-162; Osband y col. (1990) Lancet 335:994-998). Los resultados para grupos de control en estos estudios publicados vario enormemente, lo mas probablemente debido a diferencias en el tratamiento del control (ninguno, hormonal o quimioterapia), disero del estudio, criterios de seleccion de pacientes y tratamiento previo del paciente. Vease la siguiente tabla.

15 Datos de control hist6rico

Ritchie 1���

Pyrhonen 1��� Mot�er 1��� Gleave 1��� �riegmair 1��5 �ones 1��3 Steineck 1��O Osband 1��O

Paciente evaluados

n=168 n=81 n=274 n=90 n=35 n=377 n=30 n=45

Control

MPA VLB 0uimio u hormonales placebo MPA 0uimio MPA CIM

PS=O

UK UK 0 36 UK 37 UK 54

PS=1

UK UK 71 55 medio 63 UK UK

PS>2

UK UK 29 9 UK 0 UK UK

Nefrectomia %

57 88 65 78 UK 79 90 75

Edad media

55-65 62 [39-77] 58 [18-82] 62 66 [47-79] 58 [2282] 62 [40-77] 63 (3484)

CR %

0 1.2 UK 3:3 0 0.80 3.3 (0-17) 0

PR %

7.1 1.2 UK 3.3 0 4.2 0 4.8

ORR%

7.1 2.4 UK 6.6 (2.714.5) 0 5.0 (37) 3.3 (0-17) 4.8

Media PFS, anos

0.25 0.17 UK 0.16 (0.140.32) UK UK UK UK

PFS 1 ano, %

10 4.1 UK 4.0 UK UK UK UK

PFS-2 anos, %

1.1 4.1 UK NE UK UK UK UK

Tiempo medio de supervivencia, anos

0.54 0.73 0.53 (0.430.63) 1.3 (0.51.5) 0.83 0.63 0.58 0.73

OS-1 ano, %

31 38 UK 54 30 32 26 45

OS-2 anos, %

12 19 UK 9 20 11 16 NE

IC del 95% se da entre parentesis, los rangos se dan entre corchetes UK = Desconocido, NE = No estimable MPA = medroxiprogesterona, VLB = vinblastina, CIM = cimetidina

Los desenlaces para el subgrupo de funcion renal normal, subgrupo de funcion renal alterada y poblacion ITT de ILIAD fueron mas favorables que la mayoria de los desenlaces medidos en los grupos de control historicos. El porcentaje de pacientes con PS = 0, PS = 1 y nefrectomia previa para los subgrupos renales de ILIAD y poblacion 5 ITT estuvo proximo a la mediana del intervalo para los grupos de control historicos, sugiriendo que la poblacion de pacientes de ILIAD es comparable a la de los controles historicos (vease la Figura 3). A diferencia, la poblacion ITT de ILIAD y los subgrupos renales fueron numericamente mas favorables que los controles historicos para una mayoria (43/50, 86%) de los desenlaces de eficacia (vease la Figura 4). Los resultados para los subgrupos renales y poblacion por ITT fueron los mismos o numericamente inferiores en comparacion con 7/50 (14%) de los desenlaces

10 de eficacia de controles historicos: RC en el estudio de Steineck (1990); RP en el estudio de Osband (1990); RP y TRO en el estudio de Ritchie (1999); y RC, mediana de la supervivencia y SG-1 aro en el estudio de Gleave (1998). Cuando se compararon por criterios de valoracion, el estudio de ILIAD fue mas favorable que los controles historicos para una mayoria de respuesta (16/21, 76%), SLP (8/8, 100%) y desenlaces de supervivencia (19/21, 90%).

15 Ademas, los pacientes de ILIAD estratificados por grupos de riesgo tuvieron una mayor tasa de supervivencia que los controles historicos. La tasa de supervivencia de pacientes tratados con IL-2 a baja dosis se comparo con la de un grupo de control historico (descrito en Jones y col., arriba) de pacientes tratados con quimioterapia en lugar de IL

2. Los pacientes se subdividieron en grupos de riesgo segun el sistema de Jones de estratificacion de factores de riesgo, que se basa en una combinacion de factores de riesgo identificados: PS de ECOG > 1, tiempo desde el 20 diagnostico hasta el tratamiento � 2 aros, y metastasis en mas de un sitio. Los pacientes se subdividieron en los siguientes grupos de riesgo de Jones: riesgo asumible (0-1 factores de riesgo), riesgo moderado (2 factores de riesgo) y mal pronostico (los 3 factores de riesgo). La Figura 5 muestra representaciones separadas del porcentaje de sujetos supervivientes frente al tiempo en aros para cada uno de los grupos de riesgo. Los pacientes tratados con IL-2 a baja dosis segun la pauta descrita en el Ejemplo 3 tuvieron una tasa de supervivencia numericamente

25 mayor en los tres grupos de riesgo de Jones en comparacion con controles historicos. Sin embargo, la diferencia en la supervivencia entre los pacientes de ILIAD y los controles historicos parece reducirse a medida que los grupos de riesgo se vuelven menos favorables. Vease la siguiente tabla.

Grupo de riesgo

ILIAD (Bueno) Control (Bueno) ILIAD (Moderado) Control (Moderado) ILIAD (Pobre) Control (Pobre)

Pacientes evaluados

n=70 n=118 n=125 n=140 n=63 n=94

Tiempod de supervivencia medio, anos

2.0 (1.3-2.2) 0.96 1.1 (0.93-1.5) 0.55 0.61 (0.46-0.80) 0.43

OS-1 ano, %

71 (60-82) 46 55 (46-64) 27 33 (21-45) 14

OS-2 anos, %

47 (34-61) 17 32 (22-41) 10 17 (7-28) 8

IC del 95% se da entre parentesis

Toxicidad

Se determino que los acontecimientos adversos estaban "no relacionados", "posiblemente relacionados" o "probablemente relacionados" con el tratamiento en estudio por el investigador. El efecto adverso que se produjo mas frecuentemente fue fatiga (41,1% de los pacientes), seguido de escalofrios (36,9%), nauseas (36,5%), pirexia (32,7%), vomitos, sin especificar (22,1%) y anorexia (20,9%). Se observaron los siguientes acontecimientos adversos relacionados con el tratamiento en al menos el 10% de los pacientes (vease la siguiente tabla):

Intenci6n de tratar (N=263)

Termino preferido

Pacientes (%)

Fatiga

108 (41.1)

Escalofiros

97 (36.9)

Nauseas

96 (36.5)

Pirexia

86 (32.7)

Vomitos , sin especificar

58 (22.1)

Anorexia

55 (20.9)

Diarrea, sin especificar

49 (18.6)

Reaccion en el lugar de la inyeccion

48 (18.3)

Dermatitis sin especificar

41 (15.6)

Mialgia

28 (10.6)

La terapia con Proleukin® a baja dosis es menos nefrotoxica que Proleukin® a alta dosis. Se ha mostrado que la terapia con Proleukin® a alta dosis produce toxicidad renal significativa, como se mide por la SCr pico media > 4 mg/dl en los primeros ciclos de tratamiento y > 6 mg/dl durante el segundo ciclo de terapia para pacientes con elevada SCr en el nivel inicial (Belldegrun y col. 1987). Se observo un aumento mas pequero, pero todavia espectacular, en la SCr pico media (hasta 3 mg/dl) para pacientes con SCr normal en el nivel inicial. Los niveles de SCr volvieron al nivel inicial en el plazo de 30 dias para el 60% de los pacientes con funcion renal alterada en comparacion con el 98% de pacientes con funcion renal normal. Estos resultados sugieren que Proleukin® a alta dosis produce mayor nefrotoxicidad en pacientes renalmente insuficientes que en pacientes con funcion renal normal. A diferencia, Proleukin® a baja dosis solo produjo pequeros aumentos en SCr durante el tratamiento (generalmente � 2 mg/dl), que fueron comparables entre los subgrupos renales de funcion normal y alterada. Las elevaciones en SCr > 3 mg/dl fueron raras para cualquier subgrupo. No cabria esperar que los pacientes con desplazamientos de SCr en este intervalo (� 3 mg/dl) tuvieran sintomas graves o requisitos de tratamiento especificos.

La frecuencia y grado de acontecimientos adversos (AE) fueron generalmente comparables entre subgrupos de pacientes con funcion renal normal y alterada. En comparacion con el subgrupo normal, el subgrupo renalmente insuficiente tuvo un numero ligeramente menor de acontecimientos adversos graves totales (AEG) (26 frente al 30%), AE (77 frente al 89%) y AE relacionados con el farmaco (76 frente al 81%). El numero de AE que llevaron a la interrupcion fue ligeramente mayor en el subgrupo renalmente insuficiente (30 frente al 25%). En tanto los subgrupos normales como renalmente insuficientes, el mayor porcentaje de AE fue grado 3 (42 frente al 34%), seguido de grado 2 (33 frente al 23%), grado 4 (9 frente al 13), grado 1 (4 frente al 8%) y grado 5 (1 frente al 0%), respectivamente.

Los acontecimientos adversos mas comunes (informados en >10% de los pacientes en cualquier subgrupo) fueron generalmente comparables entre los subgrupos normales y renalmente insuficientes e incluyeron fatiga (43 frente al 45%), escalofrios (38 frente al 36%), pirexia (39 frente al 23%), reaccion en el inyeccion sitio (18 frente al 21%), nauseas (39 frente al 36%), vomitos (25 frente al 19%), diarrea (20 frente al 19%), dermatitis, sin especificar (18 frente al 11%), anorexia (23 frente al 19%), tos (20 frente al 9%), disnea, sin especificar (13 frente al 26%), insomnio (9 frente al 17%), artralgia (12 frente al 13%), mialgia (11 frente al 9%), edema de las extremidades inferiores (8 frente al 17%), peso reducido (11 frente al 4%) e hipotension, sin especificar (6 frente al 11%), respectivamente.

La nefrotoxicidad de Proleukin® a baja dosis fue similar entre subgrupos renales. La nefrotoxicidad de la terapia con Proleukin® a baja dosis se evaluo comparando niveles de SCr durante cada ciclo de tratamiento con mediciones del nivel inicial. Aunque los niveles de SCr pico aumentaron ligeramente durante el tratamiento para un gran numero de pacientes, SCr pico > 2,0 mg/dl se observo en solo cinco pacientes en el subgrupo renalmente insuficiente y ocho pacientes en el subgrupo de funcion renal normal. SCr pico > 3,0 mg/dl fue poco comun y se observo en solo un paciente en el subgrupo renalmente insuficiente y dos pacientes en el subgrupo de funcion renal normal.

Conclusion

La interleucina-2 a baja dosis parece ser segura y eficaz para tratar pacientes renalmente insuficientes con carcinoma de celulas renales metastasico, que no son elegibles para terapia con IL-2 a alta dosis. Los resultados del estudio clinico de fase IV indican que Proleukin® a baja dosis produce tasa de respuesta, supervivencia libre de progresion (SLP) y supervivencia global (SG) similares en tanto pacientes normales como renalmente insuficientes. Los desenlaces de eficacia para pacientes normales y renalmente insuficientes tratados con Proleukin® a baja dosis fueron generalmente superiores a los informados para grupos de control historicos. La nefrotoxicidad con Proleukin® a baja dosis fue similar entre los subgrupos renales, y espectacularmente menor a la observada con Proleukin® a alta dosis en pacientes renalmente insuficientes.

Ejemplo 4

Tratamiento de carcinoma de celulas renales metastasico por administraci6n de IL-2 a baja dosis

Se administra una formulacion de IL-2 a pacientes con un diagnostico histologico de carcinoma de celulas renales metastasico. La concentracion de IL-2 en la formulacion es aproximadamente 22 MUI. La formulacion de IL-2 se administra por inyeccion subcutanea. El tratamiento comprende dos ciclos de 9 semanas. El primer ciclo comprende seis semanas de tratamiento con IL-2 a baja dosis a 9-18 MUI, una vez al dia durante cinco dias a la semana (qd x 5d), seguido de un periodo de descanso de tres semanas. El segundo ciclo comprende seis semanas de tratamiento con IL-2 a baja dosis a 9 MUI, una vez al dia durante cinco dias a la semana (qd x 5d), seguido de un periodo de descanso de tres semanas. Los ciclos de tratamiento se repiten en pacientes que responden al tratamiento.

Aunque las realizaciones preferidas de la invencion se han ilustrado y descrito, se apreciara que pueden hacerse diversos cambios en su interior sin apartarse del alcance de la invencion.

LISTADO DE SECUENCIAS

�110> Chiron Corporation

�120> Procedimientos para tratar carcinoma de celulas renales

�130> PP023880.0003

�150> 60/647.496

�151> 27/01/2005

�160> 1

�170> PatentIn version 3.3

�210> 1

�211> 133

�212> PRT

�213> Homo sapiens

�400> 1

Claims (17)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   IL-2 para su uso en el tratamiento de un paciente humano renalmente insuficiente que tiene carcinoma de celulas renales, en el que

   a) una dosis de 9-18 MUI de IL-2 por dia se administra subcutaneamente, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 1-24 semanas; y b) no se administra IL-2 durante 1-4 semanas.

2. 2.

   IL-2 para su uso en el tratamiento de un paciente humano renalmente insuficiente que tiene carcinoma de celulas renales, en el que:

   a) una dosis de 9-18 MUI de IL-2 se administra subcutaneamente por dia, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 1-24 semanas; b) no se administra IL-2 durante 1-4 semanas; c) una dosis de 9 MUI de IL-2 se administra subcutaneamente por dia, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 1-24 semanas; y d) no se administra IL-2 durante 1-4 semanas.

3. 3.

   IL-2 para su uso segun la reivindicacion 2, en el que:

   a) primero, 2 una dosis de 18 MUI de IL-2 se administra subcutaneamente por dia durante 5 dias durante una semana; b) segundo, una dosis de 9 MUI de IL-2 se administra subcutaneamente por dia durante 2 dias seguido de administracion subcutanea de una dosis de 18 MUI de IL-2 por dia durante 3 dias durante cada semana, repetida durante 5 semanas; c) tercero, no se administra IL-2 durante 3 semanas; d) cuarto, una dosis de 9 MUI de IL-2 se administra subcutaneamente por dia durante 5 dias de cada semana, repetida durante 6 semanas; y e) quinto, no se administra IL-2 durante 3 semanas.

4. 4.

   IL-2 para su uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que dicha IL-2 es IL-2 recombinantemente producida que comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos el 70% de identidad de secuencias con la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana.

5. 5.

   IL-2 para su uso segun la reivindicacion 4, en el que dicha IL-2 comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos el 80% de identidad de secuencias con la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana.

6. 6.

   IL-2 para su uso segun la reivindicacion 5, en el que dicha IL-2 comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos el 90% de identidad de secuencias con la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana.

7. 7.

   IL-2 para su uso segun la reivindicacion 6, en el que dicha IL-2 comprende una secuencia de aminoacidos que tiene al menos el 95% de identidad de secuencias con la secuencia de aminoacidos de IL-2 humana.

8. 8.

   IL-2 para su uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que dicha IL-2 es una muteina de IL-2.

9. 9.

   IL-2 para su uso segun la reivindicacion 8, en el que dicha IL-2 es des-alanil-1, serina-125-interleucina-2 humana (aldesleucina).

10. 10.

    IL-2 para su uso segun la reivindicacion 8, en el que dicha IL-2 esta seleccionada del grupo que consiste en Ala104 Ser125 IL-2; des-Ala1 des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 Ala104 Ser125 IL-2; y des-Ala1 des-Pro2 des-Thr3 des-Ser4 des-Ser5 des-Ser6 IL-2.

11. 11.

    IL-2 para su uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que dicho carcinoma de celulas renales es metastasico.

12. 12.

    IL-2 para su uso segun la reivindicacion 2, en el que se administran multiples ciclos de tratamiento a dicho sujeto durante un periodo de tiempo suficiente para efectuar al menos una respuesta tumoral parcial.

13. 13.

    IL-2 para su uso segun la reivindicacion 2, que comprende ademas multiples ciclos de un tratamiento que comprende:

    a) una dosis de 9 MUI de IL-2 se administra subcutaneamente por dia, en 1-3 dosis al dia, durante 3-6 dias a la semana, repetida durante 1-24 semanas; y b) no se administra IL-2 durante 1-4 semanas; administrada a dicho sujeto durante un periodo de tiempo suficiente para efectuar al menos una respuesta tumoral parcial.
14. 14. IL-2 para su uso como se reivindica en cualquier reivindicacion 12 o 13, en el que el periodo de tiempo es al 5 menos 6 meses.
15. 15. IL-2 para su uso como se reivindica en cualquier reivindicacion 12 o 13, en el que el periodo de tiempo es al menos 12 meses.

    10 16. IL-2 para su uso como se reivindica en cualquier reivindicacion 12 o 13, en el que se efectua una respuesta tumoral completa.
16. 17. IL-2 para su uso segun la reivindicacion 2, en el que dicho paciente es intolerante al tratamiento con IL-2 a alta

    dosis. 15
17. 18. Uso de IL-2 en la fabricacion de un medicamento para tratar un paciente humano renalmente insuficiente que tiene carcinoma de celulas renales segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.