ES2430377T3

ES2430377T3 - Composiciones de tratamiento cutáneo

Info

Publication number: ES2430377T3
Application number: ES06733149T
Authority: ES
Inventors: John Robert Tagg; Christopher Norman Chilcott; Mohammed Abdullah Ali Alqumber
Original assignee: BLIS Technologies Ltd
Current assignee: BLIS Technologies Ltd
Priority date: 2005-03-29
Filing date: 2006-03-29
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2026-03-29
Also published as: CN101163788B; CA2602108C; US20110189133A1; CA2602108A1; US8283136B2; DK1863899T3; CN101163788A; EP1863899A4; AU2006229563B2; EP1863899A1; WO2006104403A1; JP2008537549A; NZ539076A; EP1863899B1; JP5313659B2; PL1863899T3; AU2006229563A1

Abstract

Un cultivo biológicamente puro de la cepa Q24 de M. luteus en depósito en Deutsche Sammlung vonMikroorganisms Und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, con el número de acceso DSM 17172.

Description

Composiciones de tratamiento cutáneo

5 Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones que contienen Micrococcus luteus útiles para el control de trastornos cutáneos, más particularmente, la invención se refiere a composiciones destinadas a aplicación tópica para evitar o tratar los trastornos cutáneos en los cuales las bacterias son el componente etiológico, por ejemplo, el olor corporal, infecciones cutáneas y acné. También se proporciona una nueva cepa de Micrococcus luteus útil en estas composiciones.

Antecedentes de la invención

15 Con frecuencia los trastornos cutáneos que incluyen mal olor se pueden atribuir a la acción de microorganismos sobre la piel. Las glándulas cutáneas segregan una gama de productos que incluyen proteínas, lípidos, sales y ácidos. Mientras que las secreciones recientes con frecuencia carecen de olor, la descomposición microbiana de los productos segregados puede tener como resultado la producción de olores desagradables.

El control del olor corporal es el que se ha abordado de manera más común a través del uso de anti-transpirantes y desodorantes. Generalmente, los desodorantes están diseñados para enmascarar los olores desagradables o para evitar la producción de los mismos. Se pretende que los anti-transpirantes eviten o controlen la transpiración de la piel, y pueden también funcionar como desodorantes.

25 La mayoría de los productos desodorantes o anti-transpirantes hacen uso de sales de aluminio o sales de cinc. Estos compuestos pueden provocar irritación, prurito o escozor en individuos con piel sensible. Existe una preocupación de salud entre diferentes grupos de consumidores sobre los efectos que el uso de aluminio u otras sales metálicas tiene sobre la salud, en particular en desodorantes. Estudios tales como Graves et al., 1990 Journal of Clinical Epidemiology vol. 43, 35-44 y P.D. Dabre, 2003 Journal of Applied Toxicology vol 23, edición 2, 89-95 implican un vínculo entre aluminio y la enfermedad de Alzheimer, y aluminio y cáncer de pecho. Por consiguiente, el desarrollo de un producto desodorante o anti-transpirante libre de cinc o aluminio resulta deseable.

Las infecciones cutáneas pueden estar provocadas por una gama de bacterias que incluyen especies de Staphylococcus (en particular, S. aureus), Propionibacterium acnes, Corynebacterium sps y especies de

35 Streptococcus así como también difteroides aerobios. Ejemplos de dichas infecciones son infecciones en los dedos del pie, impétigo, foliculitis, celulitis, forúnculos, antrax, mastitis y acné. Con frecuencia el tratamiento implica la administración tópica u oral de antibióticos, anti-fúngicos y en algunos casos esteroides. Los antibióticos y antifúngicos también pueden provocar la muerte de los microorganismos beneficiosos no patógenos, lo que conduce a re-infección. Además, los microorganismos cada vez son más resistentes a los antibióticos, véase por ejemplo Antibiotic Resistance; Stephen Gillespie ed; Humana Press, 1 de septiembre de 2000. Por consiguiente, existe una constante necesidad de formas de tratamiento alternativas.

La presente invención va ampliamente destinada a composiciones y métodos para controlar los trastornos cutáneos usando una cepa de Micrococcus luteus, o al menos proporcionar a la gente una elección útil.

45 Sumario de la invención

En un primer aspecto, la invención proporciona un cultivo biológicamente puro de la cepa Q24 de M. luteus en depósito en Deutsche Sammlung von Mikroorganisms Und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, con el número de acceso DSM 17172.

La invención también proporciona una composición que comprende la cepa Q24 de M. luteus con un diluyente, vehículo y/o excipiente.

55 En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende dicha cepa de M. luteus eficaz al menos para inhibir una o más bacterias seleccionadas entre el grupo que consiste en especies de Staphylococcus, especies de Propionibacterium, especies de Corynebacterium y especies de Streptococcus y difteroides aerobios.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende dicha cepa de M. luteus eficaz al menos para inhibir el crecimiento de una o más bacterias seleccionadas entre el grupo que consiste en Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus simulans, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium ulcerans, Corynebacterium minutissimum, Corynebacterium tenuis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae y Streptococcus dysgalactiae junto con un diluyente, vehículo y/o excipiente.

65 En una realización, la cepa de M. luteus inhibe al menos cuatro del grupo de bacterias anteriores, preferentemente ocho y más preferentemente todas las once. Generalmente, estas bacterias son reconocidas como bacterias cutáneas.

En una realización el Staphylococcus aureus es resistente a la meticilina.

5 Preferentemente, el M. luteus es la cepa Q24.

Preferentemente, la composición se formula para administración tópica.

Las formas aptas para administración tópica incluyen polvos, emulsiones, ungüentos, pastas, aceites, geles lociones, cremas, suspensiones, pulverizaciones nasales, dispositivos de bola, barra o pulverizadores de aerosol, formulaciones semi-sólidas y sólidas.

La invención también proporciona una cepa de M. luteus, o una composición de la invención para su uso en el tratamiento de un trastorno cutáneo, en la que el trastorno cutáneo es una infección cutánea o de los dedos del pie.

15 Los trastornos cutáneos susceptibles de tratamiento de acuerdo con la presente invención incluyen infecciones cutáneas, tales como impétigo, erisifelas, foliculitis, acné, forúnculos, antrax, celulitis, queratolisis punteada, intertrigo, tricomicosis, mastitis, infecciones de los dedos del pie tales como tiña y olor corporal.

Las bacterias responsables de los trastornos cutáneos que se pueden controlar usando un cultivo o composición de acuerdo con la presente invención incluyen especies de Propionibacterium, que incluyen Propionibacterium acnes, especies de Streptococci incluyendo Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae y Streptococcus dysgalactiae, especies de Staphylococcus incluyendo Staphylococcus simulans, Staphylococcus saprophyticus y Staphylococcus aureus, especies de Corynebacterium que incluyen Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium

25 ulcerans, Corynebacterium tenuis y Corynebacterium minutissimum. Se incluyen en este grupo los difteroides aerobios. Este es un grupo de Corinebacterias referido comúnmente como responsable, al menos en parte, del olor corporal.

Opcionalmente, la población existente de la microflora cutánea se ve reducida antes de, o de manera simultánea con, el tratamiento usando un método descrito aquí.

La invención también se refiere al uso de M. luteus en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de trastornos cutáneos como los anteriores, incluyendo infecciones cutáneas (en particular acné) e infecciones de los dedos del pie.

35 La invención también proporciona un método no terapéutico para tratar o evitar el olor corporal en un individuo, comprendiendo el método aplicar una composición de la invención al área afectada.

Aunque la invención es ampliamente como se ha descrito anteriormente, las personas expertas en la técnica apreciarán que no está limitada a ello, sino que incluye realizaciones de las cuales da ejemplos la siguiente descripción.

Descripción detallada de la invención

45 Como se ha comentado anteriormente, la presente invención va destinada en un primer aspecto a la cepa Q24 de

M. luteus. Se depositó esta cepa de M. luteus por parte del cesionario en los términos del Tratado de Budapest con Deutsche Sammlug von Mikroorganismen Und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania el 10 de marzo de 2005, y se asignó un Nº. de Acceso 17172.

M. luteus es una bacteria saprofítica esférica gram positivo. El organismo es un habitante natural de la piel humana, y puede encontrarse ocasionalmente en las membranas de las mucosas. Se considera no patógeno y se puede dispersar por medio de contacto directo. Resulta común en el medio ambiente pero sobrevive únicamente un tiempo limitado en el suelo o en agua. La especie es no formadora de esporas, aerobia estricta que produce pigmentos insolubles de color entre blanco lechoso y amarillo. Se proporciona una descripción morfológica completa en los

55 ejemplos adjuntos.

M. luteus Q24 es útil para, al menos, inhibir la proliferación de bacterias tales como especies de Propionibacterium que incluyen Propionibacterium acnes; especies de Staphylococcus que incluyen Staphylococcus aureus (todas y cada una de las 24 cepas sometidas a ensayo fueron sensibles incluyendo 20 que fueron resistentes a la meticilina), Staphylococcus saprophyticus; y Staphylococcus simulans; especies de Corynebacterium que incluyen, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium ulcerans, Corynebacterium tenuis, Corynebacterium minutissimum, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae y Streptococcus dysgalactiae. Se incluyen en este grupo difteroides aerobios. Este es un grupo de Corinebacterias al que comúnmente se atribuye, al menos en parte, la responsabilidad del olor corporal.

65 Sin pretender quedar ligado a teoría alguna, actualmente se piensa que M. luteus sirve como cepa de efector para sustituir las bacterias implicadas en la generación de trastornos cutáneos. Una cepa de efector es una cepa que puede competir satisfactoriamente con el organismo que provoca el trastorno por medio de una acción competitiva (por ejemplo por los sitios de unión; o inhibición por medio de otros sub-productos asociados al metabolismo; o una combinación de los mismos).

5 Los M. luteus de la invención exhiben un amplio espectro de actividad antibacteriana. Por tanto, los M. luteus son útiles como agente antibacteriano de por sí así como desde el punto de vista terapéutico. Los M. luteus también son útiles como agente anti-fúngico de por sí. En este contexto, "terapéutico" incluye tratamiento profilático. Usos terapéuticos incluyen el tratamiento o la prevención de infecciones bacterianas, en particular de Staphylococcus,

10 Streptococcus, Propionibacterium e infecciones de Corynebacterium. Los M. luteus de la invención son particularmente apropiados para su uso contra las bacterias S. aureus, P. acnes, Corynebacterium minutissimum y

S. pyogenes. Las condiciones susceptibles de tratamiento con las cepas o las composiciones de la invención incluyen infecciones cutáneas (incluyendo acné), infecciones de los dedos del pie y olor corporal.

15 Los trastornos cutáneos comunes y los organismos que causan, al menos en parte, el trastorno son los siguientes:

Tabla A

Trastorno Bacteria

Impétigo Streptococcus pyogenes y/o Staphylococcus aureus

Erisifelas Streptococcus pyogenes

Foliculitis Staphylococcus aureus

Forúnculos Staphylococcus aureus

Antrax Staphylococcus aureus

Acné Propionibacterium acnes

Queratolisis punteada Bacteria corineforme / Difteroides aerobios

Intetrigo1 Proliferación de bacterias residentes y transitorias

Eritasma Corynebacterium minutissimum

Tricomicosis Corynebacterium tenuis

Infección reticular del dedo del pie2 Bacteria corineforme / Difteroides aerobios

Olor corporal Difteroides aerobios

Tiña3 especies de Staphylococcus y especies de Streptococcus

Mastitis4 Staphylococcus aureus, Streptococcus agalctiae, Streptococcus dysgaltatiae

1Intertrigo es un trastorno polimicrobiano como muchas enfermedades cutáneas que, con frecuencia, procede de la infección por microorganismos frecuentes normales de la piel. La mayoría de las bacterias residentes y transitorias

20 incluyen normalmente especies de Staphylococcus, especies de Streptococcus, especies de Propionibacteria, difteroides aerobios y algunas especies de Candida. 2Infección reticular de los dedos del pie Una infección polimicrobiana que implica difteroides aerobios de bacterias corineformes, Brevibacterias y bacilos Gram-negativo

25 3Tiña es una infección polimicrobiana que normalmente implica hongos dermatofitos tales como Trichophyton, Epidermophyton y Microsporum. Comúnmente las infecciones bacterianas secundarias están implicadas en la tiña. Los organismos causantes incluyen especies de Staphylococcus, especies de Streptococcus, Pseudomonas, y Corynebacterium minutissimum. (Véase Gupta AK et., Dermatology Clinics vol 21; p431-62, 2003 Treatments of Tinea pedis).

30 4Mastitis es también una infección polimicrobiana cuyos organismos causantes clave incluyen Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae.

La expresión "trastornos cutáneos" como se usa aquí se debe entender de manera amplia, englobando enfermedades bacterianas de la piel y de las mucosas provocadas, al menos en parte, por una o más bacterias del 35 género Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium y Propionibacterium o por bacterias del grupo de los difteroides aerobios.

Los trastornos específicos cutáneos aquí son los provocados al menos en parte por S. saprophyticus, S. simulans,

S. aureus, S. pyogenes, S. agalactiae, S. dysgalactiae, C. diphteriae, C. ulcerans; C. minutissimum, C tenius y P. 40 acnies.

Para el tratamiento de los trastornos cutáneos, las formulaciones terapéuticas tópicas son particularmente útiles. El término "tópico" se refiere a composiciones apropiadas para aplicación a la piel o a las superficies de las mucosas del cuerpo. Las superficies de las mucosas incluyen la cavidad nasal.

Una "formulación terapéutica" es una formulación apropiada para administración de una cepa de M. luteus a un

5 individuo que lo necesita, en particular un individuo susceptible de trastornos cutáneos. En general, las formulaciones terapéuticas de la invención están formadas por una cepa de M. luteus de la invención y un vehículo aceptable, diluyente y/o excipiente.

Un "vehículo aceptable, diluyente y/o excipiente" significa un vehículo para administración de una cepa de M. luteus de la invención, al individuo, en la que el vehículo es compatible con la viabilidad celular bacteriana. Vehículos aceptables apropiados para su uso en la administración de cepas viables de M. luteus de la invención se conocen bien por parte de los expertos en la técnica. Generalmente, los vehículos apropiados son inertes y pueden ser bien sólidos o bien líquidos.

15 En una realización, el vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable. Vehículos farmacéuticamente aceptables apropiados para su uso con las cepas de M. luteus aquí incluyen, pero sin limitarse a, disoluciones salinas tamponadas (por ejemplo, disolución salina tamponada con fosfato), medios de cultivo farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, TSB) u otras disoluciones que mantienen la viabilidad de la bacteria. Adicionalmente, dichos vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser disoluciones no acuosas, suspensiones y emulsiones. Una variedad de vehículos farmacéuticamente aceptables apropiados para la administración de bacterias viables o liofilizables se conoce bien en la técnica (véase, por ejemplo, Remington´s Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Gennaro, ed., 1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa., incorporado aquí por referencia. Vehículos sólidos apropiados conocidos en la técnica incluyen, por ejemplo, carbonato de magnesio; estearato de magnesio; celulosas; talco; azúcares tales como fructosa, sacarosa, dextrosa, trehalosa, manitol, lactosa; almidones; y harinas;

25 pero sin limitarse a los mismos.

Vehículos oleaginosos apropiados para su uso en las composiciones de la invención incluyen glicerol, aceites minerales, aceites esenciales, grasas, ácidos grasos y sus ésteres, glicéridos, propilen glicol, lanolina y derivados, lecitina y derivados, vaselina de petrolato blanca, emulsiones formadas a partir de aceite(s) y agua, y se pueden mezclar para formar geles líquidos, cremas, emulsiones, pastas, suspensiones, semi-sólidos, sólidos o aerosoles entre otros. También se pueden añadir detergentes y tensioactivos tales como Tween 80.

Actualmente se prefiere el uso de aceites y grasas tales como mantequilla de coco, mantequilla de karité, aceite de granillas y aceite de camomila.

35 Las formulaciones de fase que incluyen fases acuosas y oleosas con el M. luteus o la composición de la invención en una fase oleosa también resultan viables. En una realización, la formulación de fase es una formulación de dos fases con una fase oleosa y una fase acuosa.

Las composiciones también pueden incluir excipientes tales como conservantes conocidos en la técnica; agentes espesantes; opacificantes; aglutinantes; antioxidantes; emulsionantes; tampones; colorantes; agentes antiapelmazantes; materiales de relleno; sales minerales; aceites esenciales; extractos botánicos; y aromas según sea apropiado. También se pueden incluir nutrientes (por ejemplo, carbohidratos tales como xilitol, lactosa y maltosa o similares, y/o proteínas tales como caseína) para mantener la viabilidad de M. luteus. También se pueden incluir

45 emolientes para mejorar las propiedades cosméticas y facilitar la aplicación de la composición. Ejemplos de emolientes son siliconas tales como DC246 y DC556 (Dow Corning, EE.UU.), ésteres de ácido graso tales como Esto/RTM1517 (Unichem), pero sin limitarse a los mismos. Los vehículos y excipientes seleccionados no afectan significativamente a la actividad antibacteriana de M. luteus.

Una composición actualmente preferida incluye una sal tal como una sal de roca o cloruro sódico pero sin limitarse a las mismas. Debido a que muchas bacterias y hongos implicados en los trastornos cutáneos son sensibles a sales, la inclusión de una sal en la composición contribuye a reducir las poblaciones bacterianas sobre la piel, uñas o mucosas. Esto permite una colonización más eficaz por parte de la cepa de M. luteus.

55 Del modo más normal, la sal se incluye en una concentración de 1 a 10 %, preferentemente de 3 a 7 %, y más preferentemente de 5 % en peso de la composición.

Se puede formular la cepa de M. luteus de la invención en cualquiera de una variedad de composiciones apropiadas para administración tópica, incluyendo la administración mucosal. Por ejemplo, se puede formular la cepa de M. luteus para administración como liófilo o pasta celular preparada a partir de un cultivo de M. luteus, o se puede administrar directamente al sitio que presenta el trastorno cutáneo. También se puede administrar la cepa en forma de crema, gel, emulsión, aceite, pasta, loción, lavativa, suspensión, pulverización (incluyendo pulverización nasal), polvo, barra, bola o aerosol, sólida o semi-sólida, pero las formas no se limitan a éstas.

65 Para el tratamiento del olor corporal, son viables formulaciones desodorantes de bola, polvo, aerosol o barra. Actualmente se prefiere el uso de formulaciones de barra. Se pueden producir todas las formulaciones de acuerdo con técnicas conocidas en la materia. Por ejemplo, se puede producir una barra desodorante por medio de fusión de mantequilla de coco y de karité, y mezclando en un polvo de M. luteus sometido a secado por congelación. Posteriormente, se vierte la mezcla en el interior de un recipiente de barra desodorante y se enfría hasta solidificar.

5 Para el tratamiento del acné, el M. luteus puede ser un componente para el lavado facial, jabón, loción, gel de ungüento en forma de crema, emulsión o similar. De manera conveniente, M. luteus puede formar parte de un producto de régimen de tratamiento cutáneo existente. Por ejemplo, una lavativa facial, limpiador o hidratante.

Para infecciones cutáneas que incluyen tiña se puede formular el M. luteus en forma de polvo, aceite, lavativa, crema, jabón, loción de ungüento o pulverización (incluyendo pulverizaciones nasales).

Formulaciones tales como aceites para baño, y jabones son útiles para el tratamiento de las infecciones cutáneas identificadas aquí.

15 Para uso antimicrobiano general, también se pueden producir formulaciones por otros métodos de administración que incluyen formulaciones aptas para administración transdérmica, pero no se limitan a las mismas.

El M. luteus, las composiciones y las formulaciones de la invención también se pueden administrar por vía tópica indirectamente, tal como en material para el contacto cutáneo o con las mucosas. Por ejemplo, en pañales, toallitas húmedas, compresas, artículos de ropa y similares. Se puede aplicar M. luteus al material por medio de técnicas conocidas en la materia tales como pulverización y secado.

Las formulaciones y composiciones de la invención pueden comprender además uno o más agentes antibacterianos secundarios. Estos agentes secundarios pueden ser, por ejemplo, antibióticos u otros agentes antibacterianos o

25 microorganismos que producen antibacterianos. Antibacterianos útiles incluyen sustancias que inhiben sustancias de tipo bacteriocina (BLIS), tales como nisina, epidermina y salivaricinas A, A1, A2 y B por ejemplo. También se pueden incluir otros compuestos antibacterianos tales como alumbre de potasio. Cualquier antibacteriano debe ser también compatible con la viabilidad de M. luteus. El antibacteriano secundario se puede incluir a una concentración de 1 a 20 %, comúnmente de 3 a 15 %, preferentemente de 4 a 10 %, más preferentemente de 1 a 9 %, en peso de la composición e incluso más preferentemente de 7,5 %.

El M. luteus comprende aproximadamente de 0,01 % a aproximadamente 99 % en peso de la composición final, comúnmente de 0,05 a 50 %, preferentemente de 0,075 a 20 %, más preferentemente de 0,1 a 10 % en peso de la composición o formulación apropiada para administración tópica.

35 En el tratamiento de los trastornos cutáneos, la cepa de M. luteus de la invención se puede administrar a cualquier individuo susceptible.

El término "individuo" según se usa aquí incluye humanos, caballos, perros, gatos, cerdos, ovejas, vacas, cabras pero no se limita a los mismos. Preferentemente, el individuo es un humano. Las cepas de M. luteus se pueden administrar al individuo a cualquier edad, por ejemplo en la infancia, adolescencia o en la edad adulta.

Se puede administrar el M. luteus de la invención de varias formas. Por ejemplo, en forma de las composiciones o formulaciones comentadas anteriormente, o como suspensiones, fórmulas de liberación retardada o polvos de liófilo.

45 También se puede administrar la cepa de M. luteus por medio de aplicación directa de un liófilo, cultivo o pasta celular a la superficie de la piel afectada, uña o mucosa del individuo. Cualquier modo de administración es apropiado con tal de que se aplique la formulación terapéutica a la piel o la mucosa.

En general, la cantidad de M. luteus administrada al individuo será una cantidad eficaz para la restitución del trastorno cutáneo provocado por bacterias u hongos sobre la piel del individuo. "Una cantidad eficaz para la restitución del trastorno cutáneo que provoca la bacteria sobre la piel del individuo significa una cantidad eficaz para la colonización cutánea por parte de la cepa de M. luteus, y la reducción significativa de las bacterias residentes que provocan el trastorno cutáneo (por ejemplo, por medio de competición entre las bacterias por los sitios de unión, nutrientes y/o acción antibacteriana).

55 La expresión "dosis unitaria" cuando se usa en referencia a una formulación terapéutica de la presente invención se refiere a unidades físicamente discretas apropiadas para dosificación unitaria para el individuo, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo (M. luteus viable) calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el diluyente requerido, vehículo o excipiente.

Las dosificaciones específicas pueden variar ampliamente de acuerdo con diferentes variables del individuo que incluyen complexión, peso, edad, gravedad de la enfermedad (por ejemplo, tenacidad y/o número de bacterias residentes que provocan el trastorno cutáneo, u hongos) y grado de respuesta a la terapia (por ejemplo, susceptibilidad de la piel del individuo a la colonización). Se pueden determinar los métodos para establecer la ruta 65 de administración apropiada y la dosificación por parte del consumidor a medida que se se consideren apropiados, o en una base de caso por caso por parte del doctor que presta la atención, farmacéutico u otro médico. Dichas

determinaciones son rutinarias para el experto en la técnica (véase, por ejemplo, Remington´s Pharmaceutical Sciences, 8th ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990).

En general, el número de M. luteus administrado al individuo variará desde aproximadamente 102 a 1015 bacterias, 5 preferentemente desde aproximadamente 103 a 1010 bacterias, más preferentemente desde aproximadamente 104 a 108 bacterias, normalmente de aproximadamente 106 a 107 unidades formadoras de colonia (UFC) por dosis.

Las dosis múltiples de la cepa M. luteus se pueden administrar para lograr una colonización y la sustitución de las bacterias residentes que provocan el trastorno cutáneo o los hongos. Puede resultar necesario que las cepas de M. luteus se administren al paciente una única vez o de forma repetida. Los tratamientos repetidos pueden ser una vez al mes, una vez a la semana, una vez al día, dos o tres veces al día, o según se requiera. De manera conveniente, se puede llevar a cabo la administración como parte de los cuidados rutinarios del paciente.

Para el tratamiento del olor corporal, se debería aplicar M. luteus o la composición de la invención sobre partes

15 corporales afectadas tales como axila, ingle, pies y arruga cutáneas. De la manera más conveniente, la aplicación se lleva a cabo tras la ducha.

La parte del cuerpo donde se requiere con más frecuencia el tratamiento del acné es la cara. Las aplicaciones de M. luteus pueden ser en forma de lavativa facial, limpiador, hidratante o similar usado en el cuidado rutinario, o se puede aplicar en forma de crema o similar.

Las infecciones cutáneas pueden afectar a una variedad de superficies y partes corporales incluyendo las arrugas cutáneas. La tiña aparece comúnmente en los pies (Tinea pedis), ingles (Tinea curis), cuerpo (Tinea corporis), uñas de los pies (Tinea unguium) o cuero cabelludo (Tinea capitis). Como se ha comentado anteriormente, la tiña es una

25 infección cutánea polimicrobiana. Normalmente se trata el Pie de Atleta por medio de aplicación directa del organismo o composición de la invención sobre el área afectada. Aceites y polvos son particularmente útiles para esta finalidad.

Muchas infecciones también surgen en puntos de traumatismo, por ejemplo escarificaciones, rozaduras y cortes. Estos puntos de traumatismo permiten la colonización por parte de organismos comensales normales de la piel. Los agentes infecciosos cutáneos comunes tratables por medio del uso de M. luteus o las composiciones de la invención se recogen en el listado anterior e incluyen S. pyogenes, S. aureus, P. acnes y coreniformes aerobios.

Staphylococcus aureus (incluyendo las cepas resistentes a meticilina) son comúnmente transportados por la piel y

35 en los fosas nasales y pulmones. Se pueden usar las pulverizaciones nasales de la invención para tratar o eliminar el transporte de S. aureus y patógenos similares. Resulta deseable el tratamiento terapéutico de los trabajadores del sector sanitario y alimentario para eliminar S. aureus resistente de la piel y fosas nasales con el fin de evitar la dispersión de la infección.

La mastitis implica la infección de la glándula mamaria por parte de una bacteria cutánea. Normalmente la prevención o el tratamiento de la mastitis se consigue por medio de lavados de la mama o el pezón.

Con el fin de facilitar la colonización, en una realización el método de tratamiento de la invención incluye una etapa preliminar de pre-tratamiento del individuo para al menos reducir la microflora normal presente en la superficie

45 cutánea. Este pre-tratamiento puede ser tan simple como llevar a cabo procedimientos de cuidados normales tales como lavado con jabón y agua, o el uso de un lavado con sal, ducha, limpieza cutánea y tratamientos usuales para el acné. Posteriormente, se administra M. luteus de la invención al medio despoblado con fines de repoblación.

La colonización satisfactoria de la piel del individuo por medio de la cepa de M. luteus se pueden establecer por medio de cultivo de las bacterias de la piel del individuo, e identificación de M. luteus usando métodos bien conocidos en la técnica para la identificación de cepas bacterianas tales como la identificación de ARN 16.

Los métodos y usos de la invención pueden comprender además el uso de uno o más agentes antibacterianos secundarios, como se ha comentado anteriormente.

55 El M. luteus y las composiciones de la invención también se pueden usar junto con productos de tratamiento existentes tales como productos para el tratamiento del acné, desodorantes y antitranspirantes, limpiadores, tonificantes e hidratantes pero sin limitarse a los mismos.

Cuando se usa el término comprende, comprenden, formado o comprender en esta memoria descriptiva, deben interpretarse como que especifican la presencia de las características, integrantes, etapas o componentes citados a los que se hace referencia, pero no excluye la presencia o la adición de una o más características, integrantes, etapas componentes o sus grupos.

65 A continuación, se ilustran varios aspectos de la invención de forma no limitante por medio de la referencia a la siguiente sección experimental.

Ejemplos

EJEMPLO 1 5 Aislamiento y Caracterización de Micrococcus luteus Q24

Se aisló la cepa Q24 de M. luteus a partir de la piel de un sujeto macho adulto sano y se sometió a cultivo en placas de agar de sangre. Se incubaron las placas a 35-37 ºC, 5 % de CO2 en aire.

10 La comparación de la región génica variable de ARN 16 con las bases de datos estableció que los organismos eran Micrococcus luteus. Su aspecto en agar de sangre es coherente con Micrococcus luteus. Las colonias individuales son convexas, circulares, completas, suaves y se vuelven cremosas-con pigmentación amarilla tras incubación prolongada. La tinción de Gram apareció como cocos Gram-positivo (de 1 micrómetro de diámetro) en coágulos

15 irregulares.

Características fisiológicas y bioquímicas de M. luteus Q24

Se determinaron las características bioquímicas usando estuches Staph ID32 y API 50 CH (bioMérieux). 20 Pigmentación amarilla Ureasa positiva Reducción de nitrato negativa Producción de acetoína negativa Sensibilidad a novobiocina sensible Hidrólisis de esculina negativa Hidrólisis de caseína positiva Fermentación: Glicerol negativa Eritritol negativa D-arabinosa negativa L-arabinosa negativa D-xilosa negativa Adonitol negativa

α-Metil-xilósido negativa Galactosa negativa D-glucosa negativa D-fructosa negativa L-sorbosa negativa Maltosa negativa Lactosa negativa Trehalosa negativa D-manosa negativa Rafinosa negativa Manosa negativa Manitol negativa Ribosa negativa Dulcitol negativa Inositol negativa Sorbitol negativa Sacarosa negativa N-acetilglucosamina negativa D-turanosa negativa Arabinosa negativa Celobiosa negativa α-Metil-D-manósido negativa α-Metil-D-glucósido negativa Amigdalina negativa Salicina negativa Melibiosa negativa Inulina negativa Melezitosa negativa Amidona negativa Glucógeno negativa Xilitol negativa β-Gentiobiosa negativa D-tagatosa negativa D-fucosa negativa L-fucosa negativa D-arabitol negativa L-arabitol negativa Gluconato negativa 2 ceto-gluconato negativa 5 ceto-gluconato negativa

β-galactosidasa negativa Arginina fosfatasa positiva Pirrolidinil acrilamidasa negativa β-Glucouronidasa negativa Arginina dihidroliasa negativa Ornitina descarboxilasa negativa

Actividad inhibidora de Micrococcus luteus

A. Se evaluó la capacidad de la cepa Q24 de M. luteus para inhibir las bacterias asociadas a trastornos cutáneos en 5 un ensayo de antagonismo diferido frente a nueve cepas de indicador normalizado.

El ensayo de tipificación-P implica una primera proliferación de la cepa de ensayo sobre agar de sangre en forma de cultivo en línea diamétrica. Tras retirar esta proliferación, se esteriliza la superficie del agar con vapor de cloroformo, se airea y se alinean de forma cruzada 9 bacterias indicadoras normalizadas (explicadas en la tabla 1) a lo largo de

10 la línea del inóculo de cepa de ensayo original. Tras la incubación, se toma la interferencia con la proliferación de los indicadores en las proximidades de la línea de productor original como indicativa de la actividad inhibidora. Se indica el tamaño relativo de la zona cualitativamente en una escala de +- (reducción de la proliferación del indicador en una zona de aproximadamente la anchura de la línea de productor original) hasta +++ (zona de inhibición clara de tres veces la anchura de la línea de productor original).

15 La Tabla 1 siguiente presenta los resultados.

Tabla 1

Designación del indicador Especificación de la cepa Actividad

I1 Micrococcus luteus cepa T-18 +++ I2 S. pyogenes (Grupo-A)2 cepa FF22, tipo-M 52, patrón-T 3/13 ++ I3 S. anginosus (Grupo-F) cepa T-29 + I4 S.uberis (Grupo-E) cepa T-6, (ATCC 27958) + I5 S. pyogenes (Grupo-A) cepa 71-679, tipo-M 4, patrón-T 4 ++ I6 Lactococcus lactis (subespecies lactis) (Grupo-N) cepa T-21 +++ I7 S. pyogenes (Grupo-A) cepa 71-698, tipo-M 28, patrón-T 28 ++ I8 S. pyogenes (Grupo-A) cepa W-1, tipo-M M87, patrón-T 6 + I9 S. equisimilis (Grupo-C) cepa T-148 ++

1 Tagg y Bannister "Fingerprinting" streptococos beta-hemolíticos por medio de su introducción y sensibilidad frente a inhibidores de tipo bacteriocina. J Med Microbiol 12, 397-411. 5 2 Designación de grupo Lancefield

La Tabla 1 muestra un patrón de tipo-P 777 que significa una actividad inhibidora frente a todos los nueve indicadores. La actividad fue particularmente intensa frente a la cepa de Micrococcus, S. pyogenes, L. lactis y S. equisimilis.

10 Por medio del uso de este ensayo de antagonismo diferido, se evaluó de manera adicional el espectro inhibidor de

M. luteus Q24 y los resultados se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2. Actividad frente a cepas adicionales potenciales de indicador

Especies Número sometido a ensayo Sensibilidad a M. luteus Q24

Staphylococcus aureus* 24 24 Staphylococcus simulans 1 1 Staphylococcus xylosus 1 1

Staphylococcus saprohyticus 1 1 Staphylococcus camosus 1 1 Staphylococcus cohnii 1 0 Streptococcus mutans 9 0 Streptococcus dysgalactiae 3 3 Streptococcus salivarius 10 0 Streptococcus agalactiae 3 3 Corynebacterium minutissimum 1 1 Corynebacterium diphtheriae 1 1 Corynebacterium ulcerans 1 1 Lactobacillus casei 1 1 Lactobacillus acidophilus 1 1 Micrococcus lysodiekticus 1 1 Kocuria varians (productor de variacina) 1 0 Enterococcus faecalis 3 1 Candida albicans 4 0 Prevotella intermedia 2 2 Porphyromonas gingivalis 2 2 Propionibacterium acnes 1 1

Propionibacterium propionicus 1

1 Pseudomonas aeruginosa 1

0 Micrococcus luteus Q24 (cepa de productor) 1 0

* las cepas sometidas a ensayo incluyeron 20 cepas resistentes a meticilina

EJEMPLO 2

5 A. Aplicación tópica para evitar el olor corporal

Se inoculó una suspensión salina de M. luteus Q24 con una concentración de aproximadamente 1 x 106 UFC por dosis limpiando una axila de cada uno de los diferentes sujetos de ensayos tras la ducha.

10 Se observó que la cepa incoluada persistía durante al menos 24 horas. La comparación subjetiva del olor corporal de dos axilas por parte de los sujetos y por parte de asesores "encubiertos" descubrió que la axila inoculada con Q24 se encontraba relativamente libre de olor en comparación con la axila de control.

B. Efecto de M. luteus Q24 sobre el olor de la axila 15

Formulación desodorante de barra Mantequilla de coco 16 g

Mantequilla de karité 12 g

Alumbre de potasio 2,3 g

Polvo de Q24 sometido a secado por congelación 0,04 g

Se preparó la barra desodorante por medio de fusión de mantequilla de coco y karité a 40 ºC. Se mezcló polvo de M. luteus Q24 sometido a secado por congelación con la mantequilla fundida y se vertió en el interior de un recipiente

20 de barra desodorante. Se enfrió la mezcla a 4 ºC hasta que solidificó.

La cuenta celular de Q24 para la barra desodorante fue de 5 x 106 ufc/g.

El sujeto se duchó como habitualmente y posteriormente se aplicó en la axila izquierda el desodorante en barra Q24.

25 La axila derecha se usó como control A. Se sumergió un limpiador de algodón en disolución salina estéril/Tween 80 de 1 % y se usó para limpiar la zona de la axila. Se re-suspendió la muestra limpia en 1 ml de disolución salina/Tween 80 de 1%. Se colocaron diluciones de diez veces de las muestras en espiral sobre placas de agar de sangre o medio de aislamiento de Corinebacteria (22 g de base de agar de sangre Columbia, carbonato de calcio 0,5 g, lecitina 0,5 g, Tween 80 2,5 ml. agar de sangre humana 20 ml, telurito de sodio 10 ml, agua destilada 500 ml).

30 Se incubaron las placas a 37 ºC, 5 % de CO2 al aire. Se determinaron las cuentas de estafilococos en las placas de agar de sangre trascurridas 24 horas de incubación y las cuentas de corinebacterias en el medio selectivo trascurridos 2 días.

Se autoevaluó el olor corporal oliendo su propia axila (0 - sin olor, 1 - olor ligero, 3 -olor intenso, 5 - olor muy 35 intenso).

Tabla 3. Efecto de M. luteus Q24 sobre poblaciones de estafilococos y corinebacterias en axila.

Tiempo (horas): Cuentas de estafilocos Cuentas de corinebacterias 20

Axila izquierda: Axila derecha Axila izquierda Axila derecha

0 7 24: 1,6x1058,2x1041,0x105 3,4x105 6,4x105 4,2x106 3,8x103 9,0x102 3,3x103 4,5x103 3,5x104 8,2x104 25

Tabla 4. Efecto de M. luteus sobre el olor de axila

Tiempo (horas): Puntuación de olor

Izquierda: Derecha

0 7: 0 0 0 3

24: 1 5

El M. luteus Q24 tenía un ligero efecto sobre las cuentas celulares de estafilococos mientras que había un 0,6 log de reducción en las cuentas celulares de corinebacterias a las 7 horas (Tabla 3). La puntuación de olor sobre la axila de control aumentó durante 24 horas al tiempo que la axila tratada únicamente aumentó ligeramente (Tabla 4).

5 Estos resultados confirman la evaluación temprana de que Q24 es eficaz a la hora de reducir el olor corporal. Se piensa que es por medio de la acción contra los difteroides aerobios comúnmente implicados en el olor corporal.

EJEMPLO 3 10 Efecto de M luteus Q24 sobre el Pie de Atleta

Formulación: Aceite de granillas 2,0 g

Aceite de camomila 0,06 g

Polvo Q24 sometido a secado por congelación 0,1 g

15 Se preparó una formulación de aceite por medio de mezcla de polvo de M. luteus sometido a secado por congelación con los aceites para producir una formulación de suspensión.

La cuenta celular Q24 para la barra desodorante fue de 1,2 x 107 ufc/g.

20 Se aplicó diariamente la formulación al área infectada de cinco sujetos con pie de atleta durante tres días. En 10 minutos habían desaparecido los síntomas de picor. Trascurridos tres días no fue necesario aplicación adicional debido al cese de los signos de la infección.

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un cultivo biológicamente puro de la cepa Q24 de M. luteus en depósito en Deutsche Sammlung von Mikroorganisms Und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, con el número de acceso DSM 17172.

5 2.- Una composición que comprende una cepa de M. luteus de acuerdo con la reivindicación 1, junto con un diluyente, vehículo y/o excipiente.
3.- Una composición que comprende una cepa de la cepa de M. luteus de acuerdo con la reivindicación 1, eficaz para al menos inhibir una o más bacterias seleccionadas entre el grupo que consiste en especies de Staphylococcus, especies de Propionibacterium, especies de Corynebacterium, especies de Streptococcus y difteroides aerobios.
4.- Una composición que comprende una cepa de M. luteus de acuerdo con la reivindicación 1, eficaz al menos para

15 inhibir la proliferación de una o más bacterias seleccionadas entre el grupo que consiste en Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus simulans, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium ulcerans, Corynebacterium minutissimum, Corynebacterium tenuis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae y Streptococcus dysgalactiae junto con un diluyente, vehículo y/o excipiente.
5.- Una composición de la reivindicación 4, eficaz para inhibir al menos cuatro del grupo de bacterias anterior, preferentemente ocho, y preferentemente todas las once.
6.- Una composición de la reivindicación 4, en la que Staphylococcus aureus es resistente a la meticilina.

25 7.- Una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, que se formula para administración tópica.
8.- Una composición de la reivindicación 7, que es una formulación de lavativa, crema, loción, gel, aceite, emulsión, ungüento, suspensión, polvo, aerosol, pulverización, pulverización nasal, bola, barra, semi-sólida o sólida.
9.- Una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, que además comprende uno o más agentes antibacterianos secundarios.
10.- Una composición de la reivindicación 9, en la que el agente antibacteriando secundario es una sustancia inhibidora de tipo bacteriocina (BLIS).

35 11.- Una composición de la reivindicación 10, en la que BLIS está seleccionado entre nisina, epidermina y salivaricina A, salivaricina A1, salivaricina A2 y salivaricina B.
12.- Una composición de la reivindicación 9, en la que el agente antibacteriano secundario es alumbre de potasio.
13.- Una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 12, que está en forma de dosificación unitaria.
14.- Una composición de la reivindicación 13 que contiene de aproximadamente 104 a 108, preferentemente de 106 a 107 UFC de M. luteus por dosis.

45 15.- Una composición de la reivindicación 2, en la que M. luteus comprende de 0,01 a 99 %, preferentemente de 0,05 a 50 %, preferentemente de 0,075 a 20 %, preferentemente de 1 a 10 % en peso de la composición.
16.- Una composición de una cualquiera de las reivindicación 2 a 15, que es una formulación terapéutica.
17.- Una composición de la reivindicación 8, que es un desodorante en forma de un polvo, bola, barra o pulverización de aerosol.
18.- Una composición de la reivindicación 17, que está en forma de desodorante de barra.

55 19.- Una composición de la reivindicación 8, que es una composición para el tratamiento de infecciones en forma de una lavativa, crema, loción, gel, aceite, emulsión, ungüento o suspensión.
20.- Una composición de la reivindicación 19, que es una composición para el tratamiento del acné.
21.- Una composición de la reivindicación 8, que es una composición para el tratamiento de la tiña en forma de un polvo o aceite.
22.- Una composición de la reivindicación 8, que se formula como pulverización nasal.

65 23.- Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 22 para su uso en el tratamiento de un

trastorno cutáneo, en el que el trastorno cutáneo es una infección cutánea o de los dedos del pie.
24.- El uso de un cultivo de acuerdo con la reivindicación 1, o una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 22 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno cutáneo, en el que 5 el trastorno cutáneo es una infección cutánea o de los dedos del pie.
25.- El uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que el trastorno cutáneo es impétigo, erisipelas, foliculitis, forúnculos, antrax, celulitis, acné, queratolisis punteada, intertrigo bacteriano, eritrasma o tricomicosis.

10 26.- El uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que el trastorno cutáneo está provocado, al menos en parte, por una o más especies de Propionibacterium, especies de Staphylococcus, especies de Streptococcus, especies de Corynebacterium y difteroides aerobios.
27.- El uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que el trastorno cutáneo está provocado por uno o más de

15 Propionibacterium acnes, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus simulans, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium ulcerans, Corynebacterium minutissimum y Corynebacterium tenuis.
28.- El uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que la infección cutánea es acné o mastitis.

20 29.- El uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que la infección del dedo del pie es infección reticular del dedo del pie o tiña.
30.- El uso de acuerdo con la reivindicación 24 ó 29, en el que la infección es tiña, y el medicamento se aplica a un 25 área afectada por la tiña.
31.- El uso de acuerdo con la reivindicación 30, en el que la tiña es tiña pedis (pie de atleta).
32.- El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 31, en el que el medicamento es para controlar la 30 incidencia y/o la gravedad de un trastorno cutáneo.
33.- El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 32, en el que el método de tratamiento incluía la etapa preliminar de reducir la población existente de microflora cutánea.

35 34.- El uso de un cultivo biológicamente puro de la reivindicación 1 en la fabricación de una composición para el tratamiento de un infección de S. aureus resistente a meticilina.
35.- Un método no terapéutico para el tratamiento o prevención del olor corporal en un individuo, comprendiendo el método aplicar una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, 17 y 18 sobre un área 40 afectada.