ES2414290B1 - Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo - Google Patents

Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo Download PDF

Info

Publication number
ES2414290B1
ES2414290B1 ES201132023A ES201132023A ES2414290B1 ES 2414290 B1 ES2414290 B1 ES 2414290B1 ES 201132023 A ES201132023 A ES 201132023A ES 201132023 A ES201132023 A ES 201132023A ES 2414290 B1 ES2414290 B1 ES 2414290B1
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
expression
mir
patients
diagnosis
acute renal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES201132023A
Other languages
English (en)
Other versions
ES2414290A2 (es
ES2414290R1 (es
Inventor
Elia Aguado Fraile
Miren Edurne RAMOS MUÑOZ
Angel Manuel CANDELA TOHA
Fernando Liaño García
Maria Laura García Bermejo
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario Ramon Y Cajal
Original Assignee
Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario Ramon Y Cajal
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to ES201232008A priority Critical patent/ES2432853B1/es
Application filed by Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario Ramon Y Cajal filed Critical Fundacion para la Investigacion Biomedica del Hospital Universitario Ramon Y Cajal
Priority to ES201132023A priority patent/ES2414290B1/es
Priority to CN201280061797.5A priority patent/CN104080925B/zh
Priority to EP12857270.8A priority patent/EP2792752B1/en
Priority to ES12857270.8T priority patent/ES2676449T3/es
Priority to CN201710541520.7A priority patent/CN107385025A/zh
Priority to MX2014006811A priority patent/MX359369B/es
Priority to PCT/ES2012/070858 priority patent/WO2013087961A1/es
Priority to JP2014546594A priority patent/JP6356071B2/ja
Priority to BR112014014279A priority patent/BR112014014279A8/pt
Priority to US14/364,644 priority patent/US20140378335A1/en
Priority to RU2014123753A priority patent/RU2657422C2/ru
Priority to CA2859081A priority patent/CA2859081A1/en
Publication of ES2414290A2 publication Critical patent/ES2414290A2/es
Publication of ES2414290R1 publication Critical patent/ES2414290R1/es
Application granted granted Critical
Publication of ES2414290B1 publication Critical patent/ES2414290B1/es
Priority to US15/277,734 priority patent/US20170175191A1/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere al miRNAsmiR-146a, como marcador de daño renal agudo y a un método y kit para el diagnóstico y/o pronóstico del daño renal agudo mediante dicho marcador.

Description

METODO PARA EL DIAGNÓSTICO YIO PRONÓSTICO DE DAÑO RENAL AGUDO
Campo de la invención
La presente invención se encuadra en el campo general de la biomedicina y en particular se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.
Estado de la técnica
Los miRNAs son RNAs de pequeño lamaño (22-25 nucleólidos) codilicados endógenamente capaces de reconocer RNAs mensajeros y así regular negativamente la expresión de proteínas, dentro de complejos de silenciamiento inducido (RISC) por complementaridad total o parcial con su mRNA diana. La mayoría son transcritos por la RNA Poi 1I desde genes individuales o desde transcritos policistrónicos para varios de ellos a la vez. Se generan como pre-miRs más largos que se procesan en el núcleo por una Ribonucleasa 111, salen a citoplasma vía mecanismos dependientes de Exportina-5 y Ran-GTP y allí son finalmente procesados por otra Ribonucleasa III a su forma madura.
Su función es esencial en una amplia variedad de procesos incluidos el desarrollo embrionario, la respuesta a estrés o la regulación estricta de procesos fisiológicos y por tanto, el mantenimiento de la homeostasis de los organismos.
Muy recientemente se ha demostrando que los miRNAs son reguladores clave en la respuesta celular rápida y precisa ante cualquier tipo de estímulo incluyendo la falta de nutrientes o la hipoxia (Ivan M, Harris AL, Martelli F, Kulshreshtha R. Hypoxia response and microRNAs: no longer two separate worlds. J Cell Mol Med.;12(5A):1426-31 , 2008).
La solicitud de patente W02011012074 describe un conjunto de miRNAs, entre los que se incluye el miR-29a como marcadores plasmáticos de cáncer de hígado, y un método de diagnóstico y evaluación del cáncer hepático basado en la detección de al menos uno de ellos.
La solicitud de patente W02009036236 se refiere a un conjunto de miRNAs, entre los que se incluye el miR-146a, como marcadores plasmáticos de cáncer de hígado y un método de diagnóstico y/o evaluación del diferentes patologías oncológicas basado en la detección de al menos uno de los microRNAs descritos.
Akkina, S. el al. ,"MicroRNAs in kidney function and disease", Translational Research, 2011 Apr, Vol. 157, No. 4, pg 236-240 Y Li, J.Y. et al., "Review: The role of microRNAs in kidney disease", NEPHROLOGY (CARLTON), Sep 2010, Vol. 15, NO.6, p599-608, describen la implicación de miRNAs en la fisiología y patología renal.
JUAN, D. el aL, "Identification of a microRNA panel far clear-cell kidney cancer" , UROLOGY, 2010 Apr, Vo1.75, No. 4, páginas 835-41 , describe un conjunto de miRNAs como marcadoreds de cáncer renal.
El Fracaso renal agudo (FRA) como un síndrome caracterizado por una brusca caída en el filtrado glomerular en días o semanas, expresándose clínicamente con la incapacidad de excretar los productos nitrogenados de desecho y regular la homeostasis de liquidas yelectrolitos.
El FRA representa uno de los problemas más graves dentro de las enfermedades renales en el mundo desarrollado por la elevada mortalidad que conlleva, alrededor del 50%. En torno al 30% de todos los episodios de FRA ocurren en los enfermos ingresados en las UCls, como consecuencia de un fallo multiorgánico. En este último contexto, la mortalidad se eleva al 80%.
El desarrollo de FRA es además una de las complicaciones más habituales tras una intervención cardiaca, de las que se realizan unas 30.000/año en España y más de un 1 % de ellas en nuestro Hospital. Prácticamente la totalidad de los pacientes intervenidos desarrollan cierto grado de FRA. De la gravedad de este FRA postoperatorio depende la evolución a largo plazo de los pacientes, resultando en una mortalidad cercana al 60% en aquellos casos que requieran diálisis tras la intervención cardiaca (Candela-Toha A, Elias-Martin E, Abraira V et al. Predicting Acute Renal Failure after Cardiac Surgery: External Validation 01 Two New Clinical Scores. Clin J Am Soc Nephrol; 3:1260-1265. 2008). Tanto la cirugía cardiaca como el trasplante renal son dos situaciones "cuasi" experimentales de estudio para la NTA en humanos, ya que se conoce el momento y la duración del estímulo isquémico y además se pueden monitorizar. Todas estas estadísticas de morbi-mortalidad no han variado significativamente en las últimas décadas y hasta el momento, no existe una terapéutica eficaz para la prevención y/o reducción de la NT A en todas estas situaciones. A ello ha contribuido en gran medida la falta de marcadores de daño renal más precisos que la determinación de creatinina y urea en suero, utilizados hasta el momento. Estos marcadores clásicos no reflejan directamente el daño celular ni en que compartimento del tejido renal (túbulo o endotelio) se está produciendo el mismo, tan s610 son parámetros indicativos de una función renal alterada consecuencia del daño (Vaidya VS, Waikar SS, Ferguson MA, el aL, Urinary Biomarkers lar Sensitive and Specific Detection 01 Acule Kidney Injury in Humans. Clin Transl Sci. ;1(3):200208, 2008). De hecho, es posible que pacientes con un daño renal subclínico no sean identificados como tales porque no se haya producido una alteración significativa en los niveles séricos de creatinina y urea. Así, en los últimos años se están desarrollado numerosos estudios tratando de identificar y validar nuevos marcadores del FRA como NGAL, IL18, KIM, Cistatina C, VEGF o CXCL 10, que parecen funcionar como buenos marcadores en poblaciones infantiles sin patologías añadidas significativas pero no en población adulta (Vaidya VS, Waikar SS, Ferguson MA, et aL, Urinary Biomarkers for Sensitive and Specific Detection of Acute Kidney Injury in Humans. Clin Transl Sci.
1 (3):200-208, 2008).
Todo lo expuesto anteriormente justifica la necesidad de identificar y validar nuevos biomarcadores de evolución de daño renal más precisos e indicativos de qué compartimento tisular y en qué grado se está dañando y/o recuperando, cuya determinación además sea rápida, sencilla y sin necesidad de biopsiar al paciente.
Descripción de la invención
Así pues en un primer aspecto la presente invención se refiere a un método para obtener datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende determinar el nivel de expresión del microRNA miR-146a, en una muestra aislada de un sujeto.
En la presente invención por daño renal agudo se entiende a cualquier daño producido por una reducción brusca, en horas o en días de la función renal, a una disminución del filtrado glomerular o un acumulo de productos nitrogenados séricos, o a una incapacidad para regular la homeostasis.
En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un método para el diagnóstico ylo pronóstico de daño renal agudo (de ahora en adelante método de la presente invención) que comprende determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-146a, en una muestra aislada de un sujeto y comparar dicho nivel de expresión con un valor control, donde la alteración de dicho nivel de expresión es indicativo de daño renal agudo.
En una realización más particular de la presente invención la muestra a analizar es seleccionada entre sangre, suero u orina.
En una realización más particular de la presente invención, la disminución del nivel de expresión de miR-146a, en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En una realización preferente de la presente invención, la expresión del micro-RNA se determina mediante peR cuantitativa.
En otra realización preferente de la presente invención, el nivel de expresión del micro-RNA se determina mediante micromatrices de RNA.
En un tercer aspecto, la presente invención se refiere al uso del micro-RNA miR146apara el diagnóstico y pronóstico del daño renal agudo.
En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un kit para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo (de ahora en adelante kit de la presente invención) según el método de la presente invención que comprende las sondas y cebadores necesarios para determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-146a, En un quinto aspecto, la presente invención se refiere al uso el kit de la presente invención, para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.
Descripción de las figuras
La figura 1 muestra la expresión del miR-26b en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (PI) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos pooles de individuos sanos (healthy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,CT), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
La figura 2 muestra la expresión del miR-29a en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (P I) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos poales de individuos sanos (heallhy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,GT), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
La figura 3 muestra la expresión del miR-454 en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (P I) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos pooles de individuos sanos (healthy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,eT), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
La figura 4 muestra la expresión del miR-146 en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (PI) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos pooles de individuos sanos (healthy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,el), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
La figura 5 muestra la expresión del miR-27a en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (PI) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos pooles de individuos sanos (healthy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,CT), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
La figura 6 muestra la expresión del miR-93 en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (P I) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos poales de individuos sanos (heallhy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,GT), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
La figura 7 muestra la expresión del miR-10a en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (P I) y de etiología tóxica (Pl) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos pooles de individuos sanos (healthy). a) Datos del ciclo de amplificación en el que se detecta la expresión del miRNA en todas las muestras (crossing threshold ,el), respecto a un microRNA sintético empleado como control interno de la técnica, b) número de veces de la expresión del miRNA en pacientes de FRA respecto a individuos sanos que se igualan a 1, mediante una fórmula matemática exponencial.
Descripción detallada de la invención
En primer lugar se realizó un experimento de estudio de microRNAs a gran escala empleando RNA obtenido de pacientes con fallo renal agudo de diferentes etiologías. Las muestras empleadas para este procedimiento consistieron en:
-
Dos muestras de pacientes con fallo renal agudo de etiología isquémica en el momento de máximo daño renal, indicado mediante parámetros de diagnóstico clínico habituales, como creatinina sérica.
-
Dos muestras de estos mismos pacientes a los 7 ó 10 días después del fallo renal, cuando se ha recuperado la función del órgano, de nuevo estimada mediante creatinina sérica.
-
Dos muestras de paciente con fallo renal producido por sustancias nefrotóxicas, una en el momento de máximo daño y otra cua.ndo ha recuperado función renal.
-
Una muestra de paciente que presenta fallo renal producido por sepsis tomada en el momento de máximo daño del órgano.
-
Dos grupos compuestos de 5 personas sanas, empleados como control.
El experimento de estudio masivo de m ¡eroRNAs en suero se realizó mediante peR cuantitativa empleando las plataformas Taqman Low Density Array (TLDAs) de Applied Biosystems. Mediante el análisis de los datos obtenidos se realizó una selección de los microRNAs de interés para nuestro estudio.
Posteriormente se realizó la confirmación de los datos de expresión de los microRNAs seleccionados obtenidos en el experimento anterior. Para ello se emplearon muestras de pacientes diferentes de las anteriores y consistentes en:
-
Cuatro pacientes con fallo renal agudo de etiología isquémica, denominados P11 , P12, P13, P14. De cada paciente se han empleado muestras a dia 0, momento del diagnóstico, 1, 3, 5 Y 7 días después del diagnóstico de fallo renal.
-
Tres pacientes que presentan fallo renal agudo producido por sustancias nefrotóxicas, denominados PT1 , PT2, PT3. De cada paciente se han empleado muestras a día O, momento del diagnóstico, 1, 3, 5 Y 7 días después del diagnóstico de fallo renal.
-
Dos grupos de controles compuestos cada uno de 10 personas sanas.
Para la confirmación de los datos se realizó PCR cuantitativa empleando sondas individuales para cada microRNA de tecnología LNA (Exiqon).
Como muestran las figuras 1-4 los miRNAs en suero disminuyen su expresión en los pacientes de FRA respecto a los controles sanos.
En la figura 5 se observa que miR-27a disminuye su expresión en los pacientes de FRA respecto a los controles sanos. Es importante destacar que la expresión de miR27a a tiempo de 7 días fue más variable entre los pacientes y algunos de ellos hubo una tendencia a recuperar valores de expresión e individuos sanos.
El miR-93 (Iigura 6) disminuyó su expresión en los pacientes de FRA respecto a los controles sanos, destacando además, que este miRNA en día 7 mostró una tendencia a recuperar valores cercanos a los controles en algunos pacientes.
El miR-1Oa (figura 7) disminuyó su expresión algunos pacientes de FRA respecto a los
S controles sanos, en un paciente isquémico no se observó esta tendencia y si es importante destacar que en varios pacientes, a día 7 se recuperaron los niveles de expresión del miRNA.
Además se calcularon los valores de área bajo la curva por análisis de curvas COR para la expresión de los miRNAs en distintos pacientes.
10 La tabla 1 muestra que estos miRNAs tuvieron un valor diagnóstico de FRA independientemente de la etiología del FRA, con especificidad y sensibilidad muy superior a la creatinina sérica (marcador utilizado actualmente).
IntervalO de connanza
asintótico al 95%
Variables resultado de contraste
Área Error típ_A SiQ_ asintóticab Limite InferiOr limite superior
miR_101_DO
1,000 ,000 ,oda 1,000 1,000
miR_21O_DO
,761 ,120 ,043 ,526 ,995
miR_126_DO
,900 ,0 61 ,002 ,780 1,020
miR_26b_DO
1,000 ,000 ,000 1,000 1,000
miR_29a_DO
,757 ,095 ,04. ,572 ,943
miR_146a_DO
1,000 ,000 ,000 1,000 1.000
miR_27a_DO
,786 ,091 ,027 ,608 ,964
miR_93_DO
,771 ,099 ,036 ,577 ,965
miR_10a_DO
1,000 ,000 ,000 1,000 1,000
miR_ 127_DO
,714 ,122 ,097 ,474 ,954
Tabla 1: análisis de las curvas ROe para los miRNAs en pacientes de FRA de UVI a 15 día O
Los datos de la tabla 2 demuestran que estos miRNAs fueron más sensibles y específicos que la creatinina, sugiriendo que a pesar de los valores normales de creatinia el riñón seguía alterado, de tal torma que estos miRNAs tu vieron un alto valor pronóstico de evolución en el tiempo de estos enfermos hacia alteración renal crónica
20 a más largo plazo.
Vanables resultado de contraste
ÁIea Errortio.- Sia. asintólicab Intervalo de confianza asintótico al 95%
Limite inferior
limite sUDerior
mirl01_b mir210_b mirl26_b mir26b_b mir29a_b mirl46a_b mir27a_b mir93_b mirl0a_b miR127 b
.899 ,702 .848 .94' .803 .na ,896 .934 .697 .859 ,065 ,112 ,075 ,039 ,089 ,087 ,064 ,049 ,127 068 ,001 ,082 ,003 ,000 ,009 ,017 ,00 1 ,000 ,090 0.2. ,712 .482 ,701 ,869 ,629 ,608 ,771 ,838 ,448 ,726 1,026 ,922 ,996 1,020 ,977 ,947 1,021 1,031 ,946 ,991
Intervalo de confianza asintótico al 95% Variables resultado
i~~~~e
Sigo.asinlóticao
de contraste
ElTortip~·
Limite inferior
su enor
"'''
miR_101_Dl ,886
,107 ,003 ,676 1,096
miR_21 0_Dl ,601 ,133 ,407
,346
,869 miR_126_07
,106 ,077 ,937
.729
,520
miR_26Il_D7
,986
,0 19 ,000 1,022
.949
miR_29a_Dl ,625
,137 ,333 ,357
,893 miR_146a_D7
1.000
,000 ,000 1,000
1,000
miR_27a_Dl ,571
,118
,580
.339
,804 miR_93 -D7
,364
,138 ,293
,094
,634 miR_'0a_D7
1,000 ,000 1,000
,000
1,000 miR 127 07
,629
,319
,104 ,424 ,833
__ • _ _ A_
-----
".--'----. ' .. _-, ~----,,-~ .'. ---~,---,, ---_._--------_.. --'--.' -
,
Tabla 2: análiSIS de las curvas ROe para los mlRNAs en pacientes de FRA de UVI a día 7.
Los datos de la tabla 3 muestran que la alteración en estos miRNAs indicaron una predisposición a desarrollar FRA isquémico tras cirugía cardiaca.
_·_L._ • .. _.-, -~ ,. _,_ ,
L . ~
.~ ~. ~ .~ ~
-~
Tabla 3: análisis de las curvas ROe para los miRNAs en pacientes previo a la cirugía 10 cardiaca.
Los datos de la tabla 4 muestran que la alteración en estos miRNAs son indicadores tempranos de desarrollo de FRA tras cirugía cardiaca.
,.
Intervalo de confianza asintótico al 95% Variables resultado
Límite de contraste
Errortíp_1I $ iQ _aSintóticab superior
Área Límite inferior
mirl 01
,667 , 118 ,154 ,434
,899 mir210---.p-" i
,598 ,365
,831 mir1 26J>i
,1 19
,402
,667
,1 19
,154
,899
.434
miR26b...,pi
,757
,101
,028 ,558
,955
mir29aJ>i
,561
,1 10
,603 ,344 ,777
mir146aJ)i
,534
,120
,769 ,299 ,770
mir27aJli
,831
,091
,005 ,652 1,009
mir93_pi
,852
,078
,003 ,699 1,004
mir1OaJ)i
,836
,098
,004 ,644
1,028 miR127...,pi
,751
,092
,032 ,570
,932
-
'
..
Tabla 4: análisis de las curvas ROe para los miRNAs en pacientes inmediatamente después de la cirugía cardiaca.

Claims (3)

  1. REIVINDICACIONES
    ES 2 414 290 A2
    1. Método para obtener datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-146a, en una muestra aislada de un sujeto.
    5
    2. Método según la reivindicación 1 donde seleccionada entre sangre, suero u orina. la donde la muestra a analizar es
    lO
    3. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende el método según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 y comparar dicho nivel de expresión con un valor control, donde la disminución del nivel de expresión de miR146a, en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
  2. 4. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la expresión del micro-RNA se determina mediante peR cuantitativa.
    15
    5. Método según cualquiera de las reivindicaciones1-3, donde el nivel de expresión del micro-RNA se determina mediante micromatrices de RNA.
  3. 6. Uso del micro-RNA miR-146apara el diagnóstico y pronóstico del daño renal agudo.
ES201132023A 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo Active ES2414290B1 (es)

Priority Applications (14)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201132023A ES2414290B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
ES201232008A ES2432853B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnostico y/o pronostico de dano renal agudo
RU2014123753A RU2657422C2 (ru) 2011-12-15 2012-12-11 Способ диагностики и/или прогноза острого повреждения почек
ES12857270.8T ES2676449T3 (es) 2011-12-15 2012-12-11 Método para el diagnóstico de daño renal agudo
CN201710541520.7A CN107385025A (zh) 2011-12-15 2012-12-11 用于对急性肾损伤进行诊断和/或预后的方法
MX2014006811A MX359369B (es) 2011-12-15 2012-12-11 Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.
PCT/ES2012/070858 WO2013087961A1 (es) 2011-12-15 2012-12-11 Metodo para el diagnostico y/o pronostico de daño renal agudo
JP2014546594A JP6356071B2 (ja) 2011-12-15 2012-12-11 急性腎障害の診断および／または予後診断方法
CN201280061797.5A CN104080925B (zh) 2011-12-15 2012-12-11 用于对急性肾损伤进行诊断和/或预后的方法
US14/364,644 US20140378335A1 (en) 2011-12-15 2012-12-11 Method for the diagnosis and/or prognosis of acute renal damage
EP12857270.8A EP2792752B1 (en) 2011-12-15 2012-12-11 Method for the diagnosis of acute renal damage
CA2859081A CA2859081A1 (en) 2011-12-15 2012-12-11 Method for the diagnosis and/or prognosis of acute renal damage
BR112014014279A BR112014014279A8 (pt) 2011-12-15 2012-12-11 método para obter dados úteis para o diagnóstico e/ou prognóstico de insuficiência renal aguda; uso de pelo menos um micro-rna; kit para o diagnóstico e/ou prognóstico de insuficiência renal aguda e uso do kit
US15/277,734 US20170175191A1 (en) 2011-12-15 2016-09-27 Method for the diagnosis and/or prognosis of acute renal damage

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES201132023A ES2414290B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo

Publications (3)

Publication Number Publication Date
ES2414290A2 ES2414290A2 (es) 2013-07-18
ES2414290R1 ES2414290R1 (es) 2013-10-11
ES2414290B1 true ES2414290B1 (es) 2014-04-16

Family

ID=48611890

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES201132023A Active ES2414290B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
ES201232008A Active ES2432853B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnostico y/o pronostico de dano renal agudo
ES12857270.8T Active ES2676449T3 (es) 2011-12-15 2012-12-11 Método para el diagnóstico de daño renal agudo

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES201232008A Active ES2432853B1 (es) 2011-12-15 2011-12-15 Metodo para el diagnostico y/o pronostico de dano renal agudo
ES12857270.8T Active ES2676449T3 (es) 2011-12-15 2012-12-11 Método para el diagnóstico de daño renal agudo

Country Status (10)

Country Link
US (2) US20140378335A1 (es)
EP (1) EP2792752B1 (es)
JP (1) JP6356071B2 (es)
CN (2) CN107385025A (es)
BR (1) BR112014014279A8 (es)
CA (1) CA2859081A1 (es)
ES (3) ES2414290B1 (es)
MX (1) MX359369B (es)
RU (1) RU2657422C2 (es)
WO (1) WO2013087961A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105303261A (zh) * 2015-11-10 2016-02-03 北京大学第一医院 医院内急性肾损伤预警系统
JP7166659B2 (ja) * 2018-10-04 2022-11-08 学校法人自治医科大学 急性腎障害の検査方法、急性腎障害の検査用キット、動物治療方法、及び急性腎障害用医薬
RU2749245C1 (ru) * 2020-11-13 2021-06-07 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский университет) (ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Се Способ диагностики гипоксии паренхимы почек при экспериментальной интраабдоминальной гипертензии
RU2768578C1 (ru) * 2020-12-25 2022-03-24 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ульяновский государственный университет" Способ прогнозирования острого повреждения почек у пациентов с декомпенсацией хронической сердечной недостаточности на основе системы оценки риска
ES2950308B2 (es) * 2022-03-02 2024-06-19 Univ Oviedo Métodos y usos para cuantificar la sobredistensión pulmonar mediante la determinación de un conjunto de miARNs

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2198400C2 (ru) * 2001-04-12 2003-02-10 Российский НИИ геронтологии Способ диагностики гипоксически-ишемического поражения почек
WO2009036236A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 The Ohio State University Research Foundation Mirna expression in human peripheral blood microvesicles and uses thereof
CN101988120A (zh) 2009-07-30 2011-03-23 江苏命码生物科技有限公司 一种利用血清中的微小核糖核酸诊断肝癌的新技术
ES2363661B2 (es) * 2009-09-04 2012-05-30 Fundación Para La Investigación Biomédica Del Hospital Universitario Ramón Y Cajal. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.
CN102218144B (zh) * 2010-04-13 2016-03-02 江苏命码生物科技有限公司 一种调节生物体内微小核糖核酸含量的方法及其用途
SG184821A1 (en) * 2010-04-21 2012-11-29 Amc Amsterdam Means and methods for determining risk of cardiovascular disease

Also Published As

Publication number Publication date
ES2414290A2 (es) 2013-07-18
RU2657422C2 (ru) 2018-06-13
JP6356071B2 (ja) 2018-07-11
US20140378335A1 (en) 2014-12-25
CN107385025A (zh) 2017-11-24
CN104080925A (zh) 2014-10-01
EP2792752A4 (en) 2015-12-02
ES2676449T3 (es) 2018-07-19
CA2859081A1 (en) 2013-06-20
MX2014006811A (es) 2015-11-06
CN104080925B (zh) 2017-08-01
ES2432853B1 (es) 2015-03-09
BR112014014279A2 (pt) 2017-06-13
RU2014123753A (ru) 2016-02-10
BR112014014279A8 (pt) 2017-06-13
WO2013087961A1 (es) 2013-06-20
US20170175191A1 (en) 2017-06-22
ES2432853A2 (es) 2013-12-05
EP2792752A1 (en) 2014-10-22
MX359369B (es) 2018-09-26
JP2015501650A (ja) 2015-01-19
ES2432853R1 (es) 2014-03-11
EP2792752B1 (en) 2018-04-04
ES2414290R1 (es) 2013-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6203209B2 (ja) 早期結腸直腸癌の検出のための血漿マイクロｒｎａ
ES2414290B1 (es) Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
ES2813699T3 (es) Métodos de uso de miARN de fluidos corporales para la detección y monitoreo de la enfermedad de Parkinson (PD)
ES2610245T3 (es) Perfilado de microARN para el diagnóstico en linfoma cutáneo de células T (CTCL)
TWI580788B (zh) 用於檢測川崎病的方法及套組
ES2363661B2 (es) Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.
US20110111976A1 (en) Microrna biomarkers of tissue injury
CN103243161A (zh) 一种辅助预测食管鳞癌患者术后生存时间长短的产品
KR102178922B1 (ko) 당뇨병성 신증 진단을 위한 마이크로RNA let-7 또는 마이크로RNA-150 바이오마커 및 이의 용도
KR102333797B1 (ko) 경도인지장애 및 알츠하이머성 치매의 선별 진단을 위한 신규 마이크로 rna 바이오마커
KR102178919B1 (ko) 당뇨병성 신증 진단을 위한 마이크로rna 바이오마커 및 이의 용도
ES2432849B1 (es) Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
ES2432854B1 (es) Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
ES2432533A1 (es) Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
ES2434106A2 (es) Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo
US20170159125A1 (en) Micro-rna biomarkers for haemolysis and methods of using same
WO2021191485A1 (es) Biomarcadores para predecir la respuesta de un sujeto a una terapia con bcg, métodos y usos basados en los mismos
CN112226500A (zh) 长链非编码rna作为生物标志物在造影剂致急性肾损伤诊断中的应用
ES2950308B2 (es) Métodos y usos para cuantificar la sobredistensión pulmonar mediante la determinación de un conjunto de miARNs
KR102480430B1 (ko) 주사증 진단을 위한 마이크로RNA-31-5p 및 이의 용도
CN109762897B (zh) 一种骨肉瘤生物标记物环状RNA-circ_0006633及其应用
US20210388448A1 (en) Method of determining prognosis in patients with follicular lymphoma
ES2381401B1 (es) Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.
KR20220052474A (ko) 주사증 진단을 위한 마이크로RNA-21-3p 및 이의 용도
ES2374890B1 (es) Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.

Legal Events

Date Code Title Description
FG2A Definitive protection

Ref document number: 2414290

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: B1

Effective date: 20140416