ES2401114T3

ES2401114T3 - Modulación antisentido de la expresión de apolipoproteína B

Info

Publication number: ES2401114T3
Application number: ES05784428T
Authority: ES
Inventors: Richard S. Geary; Zhengrong Yu; Rosanne M. Crooke
Original assignee: Genzyme Corp
Current assignee: Genzyme Corp
Priority date: 2004-08-10
Filing date: 2005-08-10
Publication date: 2013-04-17
Anticipated expiration: 2025-08-10
Also published as: ES2550824T3; DK1786472T3; US20120115926A1; ES2663810T3; PL1786472T3; EP1786472A2; PT2409713E; AU2005272912A1; US20090326040A1; CA2576860A1; PL2409713T3; HUE026284T2; US20060035858A1; EP2409713A1; SI2409713T1; EP2997980B1; EP2409713B1; EP1786472B1; WO2006020676A2; WO2006020676A3

Abstract

Un oligonucleótido con la secuencia de bases nucleicas GCCTCAGTCTGCTTCGCACC (SEQ ID NO:2) queinhibe la expresión de la apolipoproteína B, para uso en la reducción de los niveles de partículas pequeñas deLDL en un sujeto humano que muestra un nivel elevado de partículas pequeñas de LDL, en donde el nivel totalde colesterol LDL en dicho sujeto no es elevado.

Description

Modulación antisentido de la expresión de apoliproteína B.

Antecedentes de la invención

Campo de la invención

En esta memoria se describen composiciones y métodos para reducir el colesterol LDL y el tratamiento de estados asociados con niveles elevados de colesterol. Más específicamente, la invención se refiere a composiciones y a métodos para inhibir la expresión de la apolipoproteína B en el hígado.

Descripción de la técnica relacionada

La cardiopatía coronaria (CHD, de las siglas en inglés de “coronary heart disease”) ha sido la principal causa de muerte en los Estados Unidos durante más de un siglo, y complicaciones procedentes de la aterosclerosis son la causa más común de muerte en las sociedades occidentales (Knopp, New Engl. J. Medicine, 1999, 341, 498511; Davis y Hui, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2001, 21, 887-898; Bonow, Circulation, 2002, 106, 31403141). Un colesterol LDL (lipoproteína de baja densidad) elevado está reconocido ampliamente como un factor de riesgo para la cardiopatía coronaria. Sin embargo, a pesar de la intervención farmacológica, muchas personas son incapaces de disminuir los niveles de colesterol LDL.

Las directrices para una terapia reductora de lípidos fueron establecidas por el Panel III de tratamiento de adultos del “National Cholesterol Education Program” (NCEP) en 2001. Modificaciones de estas directrices fueron recomendadas por el Comité de Coordinación del NCEP en 2004, e incluían unos objetivos con tratamientos más agresivos (Grundy et al., Circulation, 2004, 110, 227-239). Estas directrices definen 3 categorías de riesgo de eventos coronarios principales y proporcionan unos niveles deseables de colesterol LDL como objetivo. Los que tienen un mayor riesgo son los pacientes con CHD o un riesgo equivalente a CHD y deben mantener el colesterol LDL por debajo de 100 mg/dL. Las directrices más recientes del NCEP recomiendan que los pacientes con un riesgo muy elevado de CHD empleen una terapia con fármacos para lograr niveles de colesterol LDL inferiores a 70 mg/dL. Un riesgo equivalente a CHD se define como sujetos con diabetes, enfermedad vascular periférica, aneurisma de la aorta abdominal, enfermedad sintomática de la arteria carótida, y aquellos con factores de riesgo múltiples que proporcionan un riesgo de CHD en 10 años superior al 20%. Para la segunda categoría, los pacientes con riesgo moderadamente alto de CHD con factores de riesgo múltiples (2 o más), en los que el riesgo de cardiopatía coronaria en 10 años es del 20%, el objetivo es un colesterol LDL inferior a 130 mg/dL. Las recomendaciones más recientes incluyen una opción terapéutica para disminuir los niveles de colesterol LDL a menos de 100 mg/dL en la categoría de riesgo moderadamente alto. La tercera categoría incluye personas con factores de riesgo de 0-1 y el colesterol LDL objetivo es menor de 160 mg/dL. Los factores de riesgo incluyen la edad, el tabaquismo, la hipertensión, un colesterol HDL bajo y antecedentes familiares de CHD. La terapia con fármacos se debe iniciar cuando el colesterol LDL en suero se mantiene por encima de 130, 160 y 190 mg/dL en los 3 grupos de riesgo, respectivamente, a pesar de los cambios terapéuticos del estilo de vida (Grundy et al., Circulation, 2004, 110 227-239).

Las lipoproteínas de baja densidad son una de las cinco grandes clases de lipoproteínas, que incluyen las siguientes: quilomicrones, responsables del transporte de los lípidos de la dieta desde el intestino a los tejidos; lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL); lipoproteínas de densidad intermedia (IDL); lipoproteínas de baja densidad (LDL); todas ellas transportan triacilgliceroles y colesterol desde el hígado a los tejidos; y las lipoproteínas de alta densidad (HDL), que transportan el colesterol endógeno desde los tejidos al hígado. Las partículas de lipoproteínas experimentan un procesamiento metabólico continuo y tienen propiedades y composiciones variables. Los componentes proteicos de las lipoproteínas se conocen como apolipoproteínas. Al menos nueve apolipoproteínas, una de las cuales es la apolipoproteína B, se distribuyen en cantidades significativas entre las diversas lipoproteínas humanas.

La apolipoproteína B (también conocida como ApoB, apolipoproteína B-100; ApoB-100, apolipoproteína B-48; ApoB-48 y antígeno Ag(x)), es una glicoproteína grande implicada en el ensamblaje y la secreción de lípidos y en el transporte y la absorción mediada por receptor, y la entrega de distintas clases de lipoproteínas. La apolipoproteína B realiza una variedad de funciones, incluyendo la absorción y el procesamiento de los lípidos de la dieta, así como la regulación de los niveles de lipoproteínas circulantes (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193).

En los mamíferos existen dos formas de apolipoproteína B. La ApoB-100 representa la proteína de longitud completa que contiene 4536 residuos de aminoácidos, sintetizada principalmente en el hígado humano (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193). Una forma truncada, conocida como apoB-48, es colineal con los 2152 residuos de aminoácidos terminales y se sintetiza en el intestino delgado de todos los mamíferos (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193). En los seres humanos, apoB-48 circula asociada con los quilomicrones y los restos de quilomicrones y estas partículas son eliminadas por un receptor distinto conocido como proteína relacionada con el receptor de LDL (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193). La apoB-48 se puede considerar como una adaptación, según la cual el lípido de la dieta se entrega desde el intestino delgado al hígado, mientras que la apoB-100 participa en el transporte y la entrega de colesterol (Davidson and Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193). La apoB-100 es el principal componente proteico de LDL y contiene el dominio necesario para la interacción de esta especie de lipoproteína con el receptor de LDL. Además, la apoB-100 contiene un residuo de cisteína no emparejado que media la interacción con la apolipoproteína (a) y genera lipoproteína (a) o Lp(a), otra lipoproteína distinta con potencial aterogénico (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000, 20, 169-193). Niveles plasmáticos elevados de lipoproteína Lp(a) que contiene apoB-100, están asociados con un mayor riesgo de aterosclerosis y sus manifestaciones, que pueden incluir la hipercolesterolemia (Seed et al., N. Engl. J. Med., 1990, 322, 1494-1499), infarto de miocardio (Sandkamp et al., Clin. Chem., 1990, 36, 20-23) y trombosis (Nowak-Gottl et al., Pediatrics, 1997, 99, E11).

La apolipoproteína B está implicada en la homeostasis del colesterol y su hiperproducción se ha asociado con varias enfermedades, incluyendo hipercolesterolemia familiar, apoB-100 defectuosa familiar e hipercolesterolemia familiar combinada (Kane y Havel, “The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Diseases”, 2001, 8ª edición, 2717-2751). Los trastornos en el metabolismo de apoB-100 que se corresponden con un mayor riesgo de CHD, también se observan en la diabetes y la obesidad (Grundy, Am. J. Cardiol., 1998, 81, 18B-25B; Chan et al., Diabetes, 2002, 51, 2377-2386; Chan et al., Metabolism, 2002, 51, 1041-1046). Además, estudios genéticos en modelos de ratón han mostrado una correlación entre apolipoproteína B elevada, niveles elevados de colesterol y aterosclerosis (Kim y Young, J. Lipid Res., 1998, 39, 703-723; Nishina et al., J. Lipid Res., 1990, 31, 859869).

En estudios de pacientes con hipobetalipoproteinemia familiar (FHBL), estos pacientes presentan niveles séricos reducidos de apolipoproteína B, niveles séricos disminuidos de colesterol LDL y una menor incidencia de la enfermedad arterial coronaria (Schonfeld et al., J. Lipid Res., 2003, 44, 878-883). Estudios en múridos han mostrado que ratones que tienen deficiencias heterocigotas en la apolipoproteína B, muestran niveles séricos reducidos de colesterol LDL y apolipoproteína B, y, además, están protegidos de la hipercolesterolemia inducida por dieta. (Farese et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1995, 92, 1774-1778).

Los documentos WO 2004/044181, WO 03/097662 y WO 03/011887 describen oligonucleótidos complementarios (antisentido) dirigidos a la apolipoproteína B.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona un oligonucleótido con la secuencia de bases nucleicas GCCTCAGTCTGCTTCGCACC (SEQ ID NO:2) que inhibe la expresión de la apolipoproteína B, para uso en la reducción de los niveles de partículas pequeñas de LDL en un sujeto humano que muestra un nivel elevado de partículas pequeñas de LDL, en donde el nivel total de colesterol LDL en dicho sujeto no es elevado.

En ciertas realizaciones, el oligonucleótido de la invención es un oligonucleótido quimérico con una longitud de 20 nucleótidos, compuesto de una región central interna “gap” que consiste en diez 2’-desoxinucleótidos, que está flanqueada en ambos lados (direcciones 5’ y 3’) por “alas” de cinco nucleótidos, compuestas de 2’-Ometoxietil nucleótidos, en donde los enlaces internucleósidos son de tipo fosforotioato a lo largo del oligonucleótido, y en donde todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.

Compendio de la descripción

Algunas realizaciones de la presente descripción se describen en los siguientes párrafos numerados:

1.: Un método para reducir los niveles de colesterol en suero en un sujeto humano, que comprende administrar a dicho sujeto una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido hacia la apolipoproteína B, en donde dicha administración da como resultado un área bajo la curva (AUC, de las siglas en inglés “area under curve”) plasmática mínima desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL para el oligonucleótido en dicho sujeto humano.

2.: El método del párrafo 1, en donde dicha administración da como resultado una AUC plasmática mínima desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 10 μg·h/mL.

3.: El método del párrafo 1, en el que dicha administración da como resultado una AUC plasmática mínima desde aproximadamente 4 μg·h/mL a aproximadamente 6 μg·h/mL.

4.: El método del párrafo 1, en donde dicha administración da como resultado una AUC plasmática mínima de aproximadamente 5 μg·h/mL.

5.: El método de los párrafos 1, 2, 3 o 4, en donde dicha AUC plasmática mínima se consigue a partir de aproximadamente 3 a aproximadamente 33 días después de la administración de una dosis de dicha pluralidad de dosis del oligonucleótido.

6.: El método del párrafo 1, en donde dichos niveles de colesterol en suero se reducen en dicho sujeto humano en al menos aproximadamente el diez por ciento.

7.: El método del párrafo 1, en donde dichos niveles de colesterol en suero se reducen en dicho sujeto humano en al menos aproximadamente el treinta por ciento.

8.: El método del párrafo 1, en donde dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL) en suero.

9.: El método del párrafo 1, en donde dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol de lipoproteínas de suero de muy baja densidad (VLDL) séricas.

10.: El método del párrafo 1, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

11.: El método del párrafo 1, en el que al menos una dosis de dicha pluralidad de dosis se administra aproximadamente una vez a la semana.

12.: El método del párrafo 1, en el que al menos una dosis de dicha pluralidad de dosis se administra aproximadamente una vez al mes.

13.: El método del párrafo 1, en el que dicho sujeto humano padece hipercolesterolemia.

14.: El método del párrafo 1, en el que cada dosis de dicha pluralidad de dosis comprende desde aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg del oligonucleótido.

15.: El método del párrafo 1, en el que cada dosis de dicha pluralidad de dosis comprende aproximadamente 200 mg del oligonucleótido.

16.: Un método para reducir los niveles de colesterol en suero en un sujeto humano, que comprende administrar a dicho sujeto una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B, en donde dicha administración da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL del oligonucleótido en dicho sujeto humano.

17.: El método del párrafo 16, en el que dicha administración da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 20 ng/dL.

18.: El método de los párrafos 16 o 17, en el que dicha concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de una dosis de dicha pluralidad de dosis del oligonucleótido.

19.: El método del párrafo 16, en donde dichos niveles de colesterol en suero se reducen en dicho sujeto humano en al menos aproximadamente el diez por ciento.

20.: El método del párrafo 16, en donde dichos niveles de colesterol en suero se reducen en dicho sujeto humano en al menos aproximadamente el treinta por ciento.

21.: El método del párrafo 16, en donde dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL) sérica.

22.: El método del párrafo 16, en donde dichos niveles de colesterol son niveles de colesterol de lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) séricas.

23.: El método del párrafo 16, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

24.: El método del párrafo 16, en el que al menos una dosis de dicha pluralidad de dosis se administra aproximadamente una vez a la semana.

25.: El método del párrafo 16, en el que al menos una dosis de dicha pluralidad de dosis se administra aproximadamente una al mes.

26.: El método del párrafo 16, en el que dicho sujeto humano padece hipercolesterolemia.

27.: El método del párrafo 16, en el que cada dosis de dicha pluralidad de dosis comprende desde aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg del oligonucleótido.

28.: El método del párrafo 16, en el que cada dosis de dicha pluralidad de dosis comprende aproximadamente 200 mg del oligonucleótido.

29.: Un método para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano, que comprende administrar al sujeto humano una dosis de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas

"GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2), suficiente para lograr una AUC plasmática mínima de al menos aproximadamente 2 μg·h/mL.

30.: El método del párrafo 29, en el que dicha dosis es suficiente para lograr una AUC plasmática mínima en el intervalo de aproximadamente 20 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL.

31.: El método de los párrafos 29 o 30, en el que dicha AUC plasmática mínima se consigue a partir desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 33 días después de la administración de dicha dosis del oligonucleótido.

32.: El método del párrafo 31, en el que dicha dosis se administra aproximadamente una vez por semana, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada tres meses.

33.: Un método para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano, que comprende administrar al sujeto humano una dosis de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2), suficiente para lograr una concentración plasmática mínima de al menos aproximadamente 5 ng/dL.

34.: El método del párrafo 33, en el que dicha dosis es suficiente para alcanzar una concentración plasmática mínima en el intervalo de aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL.

35.: El método de los párrafos 33 o 34, en el que dicha concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de dicha dosis del oligonucleótido.

36.: El método del párrafo 33, en el que dicha dosis se administra aproximadamente una vez por semana, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada tres meses.

37.: Un método para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano, que comprende administrar al sujeto humano una dosis de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2), suficiente para lograr una concentración hepática estimada de al menos aproximadamente 10 μg/g.

38.: El método del párrafo 37, en el que dicha dosis es suficiente para alcanzar una concentración estimada en el hígado en el intervalo de aproximadamente 10 μg/g a aproximadamente 150 μg/g.

39.: El método del párrafo 37, en el que dicha dosis se administra aproximadamente una vez por semana, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada tres meses.

40.: Un método para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano que comprende administrar a dicho sujeto humano un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2), en donde dicho oligonucleótido se administra durante un periodo de carga y un periodo de mantenimiento.

41.: El método del párrafo 40, en el que dicho oligonucleótido tiene una longitud de 20 a 30 bases nucleicas.

42.: El método del párrafo 40, en el que el período de carga comprende administrar el oligonucleótido al sujeto humano una vez al día hasta 10 días.

43.: El método del párrafo 42, en el que el oligonucleótido durante el período de carga se administra por vía intravenosa o subcutánea.

44.: El método del párrafo 40, en el que el período de mantenimiento comprende administrar el oligonucleótido al menos una vez aproximadamente cada 3 meses.

45.: El método del párrafo 44, en el que el oligonucleótido durante el período de mantenimiento se administra una vez aproximadamente cada mes.

46.: El método del párrafo 44, en el que el oligonucleótido se administra una vez aproximadamente cada 2 semanas.

47.: El método del párrafo 44, en el que el oligonucleótido se administra una vez aproximadamente cada 7 días.

48.: El método del párrafo 44, en el que el oligonucleótido durante el período de mantenimiento se administra por vía subcutánea.

49.: El método del párrafo 42 o 44, en el que se administra una dosis desde aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 5 mg/kg/día.

50.: El método del párrafo 49, en el que la dosis es desde aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 1,2 mg/kg/día.

51.: El método del párrafo 42 o 44, en donde la dosis es desde aproximadamente 50 mg por semana a aproximadamente 600 mg por semana.

52.: El método del párrafo 51, en el que la dosis es de aproximadamente 50 mg por semana.

53.: El método del párrafo 51, en el que la dosis es de aproximadamente 100 mg por semana.

54.: El método del párrafo 51, en el que la dosis es de aproximadamente 200 mg por semana.

55.: El método del párrafo 51, en el que la dosis es de aproximadamente 400 mg por semana.

56.: El método del párrafo 40, en el que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

57.: El método del párrafo 40, en el que dicho método da como resultado una reducción del colesterol VLDL sérico, los triglicéridos séricos, la lipoproteína (a) sérica o cualquier combinación de colesterol VLDL, triglicéridos séricos y lipoproteína (a) sérica.

58.: El método del párrafo 40, en el que dicho sujeto humano muestra al menos una indicación seleccionada entre el grupo que consiste en: un nivel elevado de colesterol total en suero, un nivel elevado de colesterol LDL en suero, una proporción de colesterol total:HDL elevada y una proporción LDL:HDL elevada.

59.: El método del párrafo 40, en el que dicho sujeto humano ha padecido o padece hipercolesterolemia familiar homocigótica o hipercolesterolemia familiar heterocigótica.

60.: El método del párrafo 40, en el que dicho sujeto humano ha padecido, padece o tiene un alto riesgo de hipercolesterolemia no familiar.

61.: El método del párrafo 40, en el que el sujeto humano tiene niveles de colesterol LDL en suero superiores a aproximadamente 70 mg/dL, antes de la administración de dicho oligonucleótido.

62.: El método del párrafo 40, en el que el sujeto humano tiene niveles de colesterol LDL en suero superiores a aproximadamente 100 mg/dL, antes de la administración de dicho oligonucleótido.

63.: El método del párrafo 40, en el que el sujeto humano tiene niveles de colesterol LDL en suero superiores a aproximadamente 130 mg/dL, antes de la administración de dicho oligonucleótido.

64.: El método del párrafo 61, 62 o 63, en el que la administración de dicho oligonucleótido reduce los niveles séricos de colesterol LDL en el sujeto humano a menos de aproximadamente 70 mg/dL.

65.: El método del párrafo 62 o 63, en el que la administración de dicho oligonucleótido reduce los niveles séricos de colesterol LDL en el sujeto humano a menos de aproximadamente 100 mg/dL.

66.: El método del párrafo 63, en el que la administración de dicho oligonucleótido reduce los niveles séricos de colesterol LDL en el sujeto humano a menos de aproximadamente 130 mg/dL.

67.: Un método para reducir los niveles de colesterol sérico en un sujeto humano, que comprende la selección de un sujeto humano tratado previamente sin éxito con una estatina; y la administración a dicho sujeto humano de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

68.: El método del párrafo 67, en el que dichos niveles séricos de colesterol comprenden niveles séricos de colesterol LDL.

69.: El método del párrafo 67, en el que el sujeto humano es intolerante a una estatina.

70.: El método del párrafo 67, en el que el sujeto ha experimentado efectos adversos como resultado del tratamiento con dicha estatina.

71.: El método del párrafo 70, en el que el sujeto ha experimentado miopatía, fatiga, efectos sobre el Sistema Nervioso Central (SNC) como resultado del tratamiento con dicha estatina, o cualquier combinación de miopatía, fatiga y efectos sobre el SNC, como resultado del tratamiento con dicha estatina.

72.: El método del párrafo 67, en el que el sujeto humano tiene una actividad insuficiente del receptor de LDL.

73.: El método del párrafo 67, en el que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

74.: Un método para usar un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) en un tratamiento para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano, comprendiendo dicho método informar a dicho sujeto humano de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una AUC plasmática mínima de al menos aproximadamente 2 μg·h/mL.

75.: El método del párrafo 74, en el que dicho sujeto humano está informado de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una AUC plasmática mínima en el intervalo de aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL.

76.: El método de los párrafos 74 o 75, en el que dicha AUC plasmática mínima se consigue a partir desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 33 días después de la administración de dicha dosis del oligonucleótido.

77.: El método del párrafo 74, en el que informar a dicho sujeto humano comprende proporcionar material impreso en el que se notifica que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una AUC plasmática mínima de al menos aproximadamente 2 μg·h/mL.

78.: El método del párrafo 77, en el que dicho material impreso es una etiqueta.

79.: Un método para usar un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) en un tratamiento para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano, comprendiendo dicho método informar a dicho sujeto humano de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración plasmática mínima de al menos aproximadamente 5 ng/dL.

80.: El método del párrafo 79, en el que dicho sujeto humano está informado de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración plasmática mínima en el intervalo de aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL.

81.: El método de los párrafos 79 o 80, en el que dicha concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de dicha dosis del oligonucleótido.

82.: El método del párrafo 79, en el que informar a dicho sujeto humano comprende proporcionar material impreso en el que se notifica que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración plasmática mínima de al menos aproximadamente 5 ng/mL.

83.: El método del párrafo 82, en el que dicho material impreso es una etiqueta.

84.: Un método para usar un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) en un tratamiento para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano, comprendiendo dicho método informar a dicho sujeto humano de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración hepática estimada de dicho oligonucleótido de al menos aproximadamente 10 μg/g.

85.: El método del párrafo 84, en el que dicho sujeto humano está informado de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración hepática estimada de dicho oligonucleótido en el intervalo de aproximadamente 10 μg/g a aproximadamente 150 μg/g.

86.: El método del párrafo 84, en el que informar a dicho sujeto humano comprende proporcionar material impreso que notifica que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración hepática estimada de dicho oligonucleótido de al menos aproximadamente 10 μg/g.

87.: El método del párrafo 86, en el que dicho material impreso es una etiqueta.

88.: Una composición farmacéutica que comprende una o varias dosis de un oligonucleótido que tiene una longitud de 14 a 30 bases nucleicas y que se hibrida con una secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B, en donde cada una de dichas una o varias dosis está el intervalo de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg, y en donde la administración intravenosa a un sujeto humano de dicho oligonucleótido desde aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC0-48 plasmática desde aproximadamente 11 μg·h/mL a aproximadamente 148 μg·h/mL.

89.: La composición farmacéutica del párrafo 88, en donde la administración intravenosa a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC0-48 plasmática de 11 μg·h/mL ± 3 μg·h/mL.

90.: La composición farmacéutica del párrafo 88, en donde la administración intravenosa a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC0-48 plasmática de 24 μg·h/mL ± 3 μg·h/mL.

91.: La composición farmacéutica del párrafo 88, en donde la administración intravenosa a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 2,7 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC0-48 plasmática de 68 μg·h/mL ± 14 μg·h/mL.

92.: La composición farmacéutica del párrafo 88, en donde la administración intravenosa a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC0-48 plasmática de 148 μg·h/mL ± 14 μg·h/mL.

93.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 88 a 92, en donde dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 2920 a 3420 de SEQ ID NO: 1.

94.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 88 a 92, en donde dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 3230 a 3288 de SEQ ID NO: 1.

95.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 88 a 92, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

96.: La composición farmacéutica del párrafo 95, en la que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

97.: Una composición farmacéutica que comprende una o varias dosis de un oligonucleótido que tiene una longitud de 14 a 30 bases nucleicas y que se hibrida con una secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B, en donde cada una de dichas una o varias dosis está en el intervalo de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg, y en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido desde aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, después de la administración de una o varias dosis de carga, es suficiente para lograr una AUC plasmática desde aproximadamente 19 μg·h/mL a aproximadamente 160 μg·h/mL.

98.: La composición farmacéutica del párrafo 97, en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC plasmática de 19 μg·h/mL ± 9 μg·h/mL.

99.: La composición farmacéutica del párrafo 97, en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC plasmática de 28 μg·h/mL ± 5 μg·h/mL.

100.: La composición farmacéutica del párrafo 97, en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 2,7 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC plasmática de 63 μg·h/mL ± 13 μg·h/mL.

101.: La composición farmacéutica del párrafo 97, en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr una AUC plasmática de 160 μg·h/mL.

102.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 97 a 101, en donde dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 2920 a 3420 de SEQ ID NO: 1.

103.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 97 a 101, en donde dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 3230 a 3288 de SEQ ID NO: 1.

104.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 97 a 101, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

105.: La composición farmacéutica del párrafo 104, en la que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

106.: Una composición farmacéutica que comprende una o varias dosis de un oligonucleótido que tiene una longitud de 14 a 30 bases nucleicas y que se hibrida con una secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B, en donde cada una de dichas una o varias dosis está en el intervalo de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg, y en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido desde aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, después de la administración de una o varias dosis de carga, es suficiente para lograr una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 2 ng/mL a aproximadamente 40 ng/mL.

107.: La composición farmacéutica del párrafo 106, en la que dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 2920 a 3420 de SEQ ID NO: 1.

108.: La composición farmacéutica del párrafo 106, en la que dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 3230 a 3288 de SEQ ID NO: 1.

109.: La composición farmacéutica del párrafo 106, en la que dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

110.: Una composición farmacéutica que comprende una o varias dosis de un oligonucleótido que tiene una longitud de 14 a 30 bases nucleicas y que se hibrida con una secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B, en donde cada una de dichas una o varias dosis está en el intervalo de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg, y en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido desde aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, después de la administración de una o varias dosis de carga, es suficiente para lograr una biodisponibilidad de al menos aproximadamente 54%.

111.: La composición farmacéutica del párrafo 110, en la que dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 2920 a 3420 de SEQ ID NO: 1.

112.: La composición farmacéutica del párrafo 110, en la que dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 3230 a 3288 de SEQ ID NO: 1.

113.: La composición farmacéutica del párrafo 110, en la que dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

114.: Una composición farmacéutica que comprende una o varias dosis de un oligonucleótido que tiene una longitud de 14 a 30 bases nucleicas y que se hibrida con una secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B, en donde cada una de dichas una o varias dosis está en el intervalo de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg, y en donde la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido de aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, después de la administración de una o varias dosis de carga, es suficiente para lograr un t½ de eliminación terminal desde aproximadamente 23 a aproximadamente 47 días.

115.: La composición farmacéutica del párrafo 114, en la que la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 0,7 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr un t½ de eliminación terminal de aproximadamente 23 días ± 1 día.

116.: La composición farmacéutica del párrafo 114, en la que la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr un t½ de eliminación terminal de aproximadamente 27 días ± 12 días.

117.: La composición farmacéutica del párrafo 114, en la que la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 2,7 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr un t½ de eliminación terminal de aproximadamente 31 días ± 11 días.

118.: La composición farmacéutica del párrafo 114, en la que la administración subcutánea a un sujeto humano de dicho oligonucleótido a aproximadamente 5,9 mg/kg de peso corporal, es suficiente para lograr un t½ de eliminación terminal de aproximadamente 47 días.

119.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 114 a 118, en donde dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 2920 a 3420 de SEQ ID NO: 1.

120.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 114 a 118, en donde dicho oligonucleótido se hibrida con una región de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica la apolipoproteína B que comprende los nucleótidos 3230 a 3288 de SEQ ID NO: 1.

121.: La composición farmacéutica de cualquiera de los párrafos 114 a 118, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

122.: La composición farmacéutica del párrafo 121, en la que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

123.: Una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B para reducir los niveles de colesterol en suero, en donde la administración de dicha pluralidad de dosis de dicho oligonucleótido da como resultado una AUC plasmática mínima para dicho oligonucleótido desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL.

124.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dicha administración da como resultado una AUC plasmática mínima desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 10 μg·h/mL.

125.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dicha administración da como resultado una AUC plasmática mínima desde aproximadamente 4 μg·h/mL a aproximadamente 6 μg·h/mL.

126.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dicha administración da como resultado una AUC plasmática mínima de aproximadamente 5 μg·h/mL.

127.: La pluralidad de dosis de los párrafos 123, 124, 125 o 126, en donde dicha AUC plasmática mínima se consigue a partir de aproximadamente 3 a aproximadamente 33 días después de la administración de una dosis de dicha pluralidad de dosis del oligonucleótido.

128.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dichos niveles séricos de colesterol se reducen al menos en un diez por ciento.

129.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dichos niveles séricos de colesterol se reducen al menos en un treinta por ciento.

130.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dichos niveles séricos de colesterol son niveles de colesterol LDL.

131.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dichos niveles séricos de colesterol son niveles de colesterol VLDL.

132.: La pluralidad de dosis del párrafo 123, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

133.: La pluralidad de dosis del párrafo 127, en donde la administración es aproximadamente una vez a la semana.

134.: La pluralidad de dosis del párrafo 127, en donde la administración es aproximadamente una vez al mes.

135.: La pluralidad de dosis del párrafo 127, en donde cada una de dicha pluralidad de dosis comprende desde aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg de dicho oligonucleótido.

136.: La pluralidad de dosis del párrafo 127, en donde cada una de dicha pluralidad de dosis comprende aproximadamente 200 mg de dicho oligonucleótido.

137.: Una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B para reducir los niveles de colesterol en suero, en donde la administración de dicha pluralidad de dosis de dicho oligonucleótido da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL.

138.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde la administración da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 20 ng/dL.

139.: La pluralidad de dosis de los párrafos 137 o 138, en donde dicha concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de una dosis de dicha pluralidad de dosis del oligonucleótido.

140.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde dichos niveles séricos de colesterol se reducen al menos en un diez por ciento.

141.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde dichos niveles séricos de colesterol se reducen al menos en un treinta por ciento.

142.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde dichos niveles séricos de colesterol son niveles de colesterol LDL.

143.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde dichos niveles séricos de colesterol son niveles de colesterol VLDL.

144.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

145.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde la administración es aproximadamente una vez a la semana.

146.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde la administración es aproximadamente una vez al mes.

147.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde cada una de dicha pluralidad de dosis comprende desde aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg de dicho oligonucleótido.

148.: La pluralidad de dosis del párrafo 137, en donde cada una de dicha pluralidad de dosis comprende aproximadamente 200 mg de dicho oligonucleótido.

149.: Uso de una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de colesterol en suero, en el que la administración de dicho medicamento da como resultado una AUC plasmática mínima para dicho oligonucleótido desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 10 μg·h/mL.

150.: El uso del párrafo 149, en donde la administración de dicho medicamento da como resultado una AUC plasmática mínima desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 10 μg·h/mL.

151.: El uso del párrafo 149, en donde la administración de dicho medicamento da como resultado una AUC plasmática mínima desde aproximadamente 4 μg·h/mL a aproximadamente 6 μg·h/mL.

152.: El uso del párrafo 149, en donde la administración de dicho medicamento da como resultado una AUC plasmática mínima de aproximadamente 5 μg·h/mL.

153.: El uso de los párrafos 149, 150, 151 o 152, en el que dicha AUC plasmática mínima se logra desde aproximadamente 3 a aproximadamente 33 días después de la administración de una dosis de dicho medicamento.

154.: El uso del párrafo 149, en el que dichos niveles de colesterol en suero se reducen al menos en aproximadamente un diez por ciento.

155.: El uso del párrafo 149, en el que dichos niveles de colesterol en suero se reducen al menos en aproximadamente un treinta por ciento.

156.: El uso del párrafo 149, en el que dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol LDL en suero.

157.: El uso del párrafo 149, en el que dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol VLDL en suero.

158.: El uso del párrafo 149, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

159.: El uso del párrafo 149, en el que dicha administración es aproximadamente una vez a la semana.

160.: El uso del párrafo 149, en el que dicha administración es aproximadamente una vez al mes.

161.: El uso del párrafo 149, en el que cada una de dicha pluralidad de dosis comprende desde aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg de dicho oligonucleótido.

162.: El uso del párrafo 149, en el que cada una de dicha pluralidad de dosis comprende aproximadamente 200 mg de dicho oligonucleótido.

163.: Uso de una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de colesterol en suero, en el que la administración de dicho medicamento da como resultado una concentración plasmática mínima de dicho oligonucleótido desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL.

164.: El uso del párrafo 163, en el que la administración de dicho medicamento da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 20 ng/dL.

165.: El uso de los párrafos 163 o 164, en el que dicha concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de una dosis de dicho medicamento.

166.: El uso del párrafo 163, en el que dichos niveles de colesterol en suero se reducen al menos en aproximadamente un diez por ciento.

167.: El uso del párrafo 163, en el que dichos niveles de colesterol en suero se reducen al menos en aproximadamente un treinta por ciento.

168.: El uso del párrafo 163, en el que dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol LDL en suero.

169.: El uso del párrafo 163, en el que dichos niveles de colesterol en suero son niveles de colesterol VLDL en suero.

170.: El uso del párrafo 163, en donde dicho oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2).

171.: El uso del párrafo 163, en el que la administración es aproximadamente una vez a la semana.

172.: El uso del párrafo 163, en el que la administración es aproximadamente una vez al mes.

173.: El uso del párrafo 163, en el que cada una de dicha pluralidad de dosis comprende desde aproximadamente 50 mg a aproximadamente 400 mg de dicho oligonucleótido.

174.: El uso del párrafo 163, en el que cada una de dicha pluralidad de dosis comprende aproximadamente 200 mg de dicho oligonucleótido.

175.: Uso de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) para la preparación de un medicamento para reducir el colesterol LDL en suero, en donde la administración de dicho medicamento es suficiente para conseguir una AUC plasmática mínima para dicho oligonucleótido de al menos aproximadamente 2 μg·h/mL.

176.: El uso del párrafo 175, en el que dicha administración de dicho medicamento es suficiente para conseguir una AUC plasmática mínima en el intervalo desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL.

177.: El uso de los párrafos 175 o 176, en el que dicha AUC plasmática mínima se consigue a partir de aproximadamente 3 a aproximadamente 33 días después de la administración de dicho medicamento.

178.: El uso del párrafo 175, en el que la administración de dicho medicamento se produce aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada tres meses.

179.: Uso de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) para la preparación de un medicamento para reducir el colesterol LDL en suero, en donde la administración de dicho medicamento es suficiente para conseguir una concentración plasmática mínima para dicho oligonucleótido de al menos aproximadamente 5 ng/mL.

180.: El uso del párrafo 179, en el que dicha administración de dicho medicamento es suficiente para conseguir una concentración plasmática mínima en el intervalo de aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL.

181, El uso de los párrafos 179 o 180, en el que dicha concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de dicho medicamento.

182.: El uso del párrafo 179, en el que la administración de dicho medicamento se produce aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada tres meses.

183.: Uso de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) para la preparación de un medicamento para reducir el colesterol LDL en suero, en donde la administración de dicho medicamento es suficiente para conseguir una concentración hepática estimada de al menos aproximadamente 10 μg/g.

184.: El uso del párrafo 183, en el que dicha administración de dicho medicamento es suficiente para alcanzar una concentración hepática estimada en el intervalo de aproximadamente 10 μg/g a aproximadamente 150 μg/g.

185.: El uso del párrafo 183, en el que la administración de dicho medicamento se produce aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada tres meses.

186.: Uso de un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) para la preparación de un medicamento para reducir el colesterol LDL en suero, en donde dicho medicamento se administra durante un periodo de carga y un periodo de mantenimiento.

187.: El uso del párrafo 186, en el que dicho oligonucleótido tiene una longitud de 20 a 30 bases nucleicas.

188.: El uso del párrafo 186, en el que el período de carga comprende administrar el medicamento una vez al día en un periodo hasta 10 días.

189.: El uso del párrafo 188, en el que dicho medicamento se administra por vía intravenosa o subcutánea.

190.: El uso del párrafo 186, en el que el período de mantenimiento comprende administrar el medicamento al menos una vez aproximadamente cada 3 meses.

191.: El uso del párrafo 190, en el que el medicamento se administra una vez aproximadamente cada mes.

192.: El uso del párrafo 190, en el que el medicamento se administra una vez aproximadamente cada 2 semanas.

193.: El uso del párrafo 190, en el que el medicamento se administra una vez aproximadamente cada 7 días.

194.: El uso del párrafo 190, en el que dicho medicamento se administra por vía intravenosa o subcutánea.

195.: El uso de los párrafos 188 o 190, en el que el oligonucleótido presente en el medicamento se administra en una dosis desde aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 5 mg/kg/día.

196.: El uso del párrafo 195, en el que el oligonucleótido presente en el medicamento se administra en una dosis desde aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 1,2 mg/kg/día.

197.: El uso de los párrafos 188 o 190, en el que el oligonucleótido presente en el medicamento se administra en una dosis desde aproximadamente 50 mg por semana a aproximadamente 600 mg por semana.

198.: El uso del párrafo 197, en el que el oligonucleótido presente en el medicamento se administra en una dosis de aproximadamente 50 mg por semana.

199.: El uso del párrafo 197, en el que la dosis es de aproximadamente 100 mg por semana.

200.: El uso del párrafo 197, en el que la dosis es de aproximadamente 200 mg por semana.

201.: El uso del párrafo 197, en el que la dosis es de aproximadamente 400 mg por semana.

202.: El uso del párrafo 186, en el que el oligonucleótido comprende ISIS 301012.

203.: El uso del párrafo 186, en el que la administración del medicamento da como resultado una reducción del colesterol VLDL en suero, triglicéridos en suero, lipoproteína (a) en suero o cualquier combinación colesterol VLDL en suero, triglicéridos en suero y lipoproteína (a) en suero.

204.: El uso del párrafo 186, en el que el medicamento se administra a un sujeto humano que muestra al menos una indicación seleccionada entre el grupo que consiste en un nivel elevado del colesterol total en suero, un nivel elevado del colesterol LDL en suero, una proporción de colesterol total:HDL elevada y una proporción LDL:HDL elevada.

205.: El uso del párrafo 186, en el que el medicamento se administra a un sujeto humano que ha padecido o padece hipercolesterolemia familiar homocigótica o hipercolesterolemia familiar heterocigótica.

206.: El uso del párrafo 186, en el que el medicamento se administra a un sujeto humano que ha padecido, padece o tiene un mayor riesgo de hipercolesterolemia no familiar.

207.: El uso del párrafo 186, en donde el medicamento se administra a un sujeto humano que tiene niveles de colesterol LDL en suero, superiores a aproximadamente 70 mg/dL antes de la administración.

208.: El uso del párrafo 186, en donde el medicamento se administra a un sujeto humano que tiene niveles de colesterol LDL en suero, superiores a aproximadamente 100 mg/dL antes de la administración.

209.: El uso del párrafo 186, en donde el medicamento se administra a un sujeto humano que tiene niveles de colesterol LDL en suero, superiores a aproximadamente 130 mg/dL antes de la administración.

210.: El uso de los párrafos 207, 208 o 209, en el que la administración de dicho medicamento reduce los niveles de colesterol LDL en suero a menos de aproximadamente 70 mg/dL.

211.: El uso de los párrafos 208 o 209, en el que la administración de dicho medicamento reduce los niveles de colesterol LDL en suero a menos de aproximadamente 100 mg/dL.

212.: El uso del párrafo 209, en el que la administración de dicho medicamento reduce los niveles séricos de colesterol LDL a menos de aproximadamente 130 mg/dL.

213.: El método de los párrafos 29, 33, 37, 74, 79 o 84, en el que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

214.: La composición farmacéutica de los párrafos 109 o 113, en la que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

215.: La pluralidad de dosis de los párrafos 132 o 144, en la que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

216.: El uso de los párrafos 158, 170, 175, 179, 183, 186, en el que dicho oligonucleótido comprende ISIS 301012.

También se describen en esta memoria métodos para reducir el colesterol en suero mediante la administración de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B, tal como el oligonucleótido antisentido ISIS 301012 y un segundo agente reductor de lípidos, en una dosis menor que la que sería necesaria para lograr un efecto terapéutico o profiláctico, si el segundo agente se administrara solo. Por ejemplo, los segundos agentes reductores de lípidos se pueden seleccionar entre el grupo que consiste en secuestrantes de ácidos biliares (por ejemplo, colestiramina, colestipol y clorhidrato de colesevelam), fibratos (por ejemplo, clofibrato, gemfibrozil, fenofibrato, bezafibrato y ciprofibrato), niacina, estatinas (por ejemplo, lovastatina, prevastatin, atorvastatina, simvastatina y fluvastatina), e inhibidores de la absorción de colesterol (por ejemplo, ezetimiba).

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un gráfico de líneas que muestra el porcentaje de cambio desde el valor de referencia de la apolipoproteína B (ApoB-100), el colesterol LDL (LDL) en suero y el colesterol total en suero, en relación con los niveles de AUC plasmática mínima en sujetos humanos, aproximadamente 3 días después de la finalización del período de tratamiento con dosis múltiples (MD25), descrito en el Ejemplo 3.

Descripción detallada de la invención

En esta memoria se describen composiciones y métodos para reducir los niveles de colesterol LDL en el suero de un humano que padece o tiene riesgo de padecer hipercolesterolemia, mediante la administración al ser humano de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B. Tal y como se usa en la presente memoria "dirigido" o "dirigido a" se refiere a un oligonucleótido capaz de hibridarse con una molécula de ácido nucleico seleccionada o una región de una molécula de ácido nucleico. Tal hibridación de un oligonucleótido con su ácido nucleico diana modula (inhibe o estimula) la función normal del ácido nucleico a través de un mecanismo conocido generalmente conocido como "antisentido". En una realización, el oligonucleótido comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2). En otras realizaciones, el oligonucleótido es ISIS 301012. Se descubrió que el oligonucleótido ISIS 301012 era eficaz para reducir el nivel de apolipoproteína B en suero y colesterol LDL en suero en seres humanos, durante un período de tiempo prolongado, después de la administración. Por ejemplo, el tratamiento de seres humanos con ISIS 301012 condujo a niveles reducidos de colesterol LDL y apolipoproteína B durante varias semanas después del cese del tratamiento. Por esta razón, ISIS 301012 proporciona un efecto prolongado sobre la hipercolesterolemia, y por lo tanto es una herramienta útil para el tratamiento de esta enfermedad.

Una realización adicional de la descripción se refiere a la administración de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B en un sujeto humano, de modo que la AUC plasmática mínima esté entre aproximadamente 2 a 20 μg·h/mL, 2 a 10 μg·h/mL o 2 a 7 μg·h/mL. En una realización, el oligonucleótido se administra de modo que la AUC plasmática mínima sea de aproximadamente 4 a 6 μg·h/mL. En aún otra realización, el oligonucleótido se administra de modo que la AUC plasmática mínima sea de aproximadamente 5 μg·h/mL. En otras formas de realización, el oligonucleótido se administra de modo que la AUC plasmática mínima sea de aproximadamente 2 μg·h/mL, aproximadamente 3 μg·h/mL, aproximadamente 4 μg·h/mL, aproximadamente 5 μg·h/mL, aproximadamente 6 μg·h/mL, aproximadamente 7 μg·h/mL, aproximadamente 8 μg·h/mL, aproximadamente 9 μg·h/mL, aproximadamente 10 μg·h/mL, aproximadamente 11 μg·h/mL, aproximadamente 12 μg·h/mL, aproximadamente 13 μg·h/mL, aproximadamente 14 μg·h/mL, aproximadamente 15 μg·h/mL, aproximadamente 16 μg·h/mL, aproximadamente 17 μg·h/mL, aproximadamente 18 μg·h/mL, aproximadamente 19 μg·h/mL o aproximadamente 20 μg·h/mL. En una realización, el sujeto se trata con dosis de mantenimiento semanales de 200 mg, del oligonucleótido, y el oligonucleótido es ISIS 301012. En otras realizaciones, el sujeto se trata solo una vez al mes con una concentración del oligonucleótido que se selecciona para dar lugar a la deseada AUC plasmática mínima. Alternativamente, el sujeto se puede tratar solo una vez cada dos meses, o incluso cada tres meses, con una concentración del oligonucleótido que se selecciona para dar lugar a la deseada AUC plasmática mínima.

Otra realización de la descripción se refiere al uso de ISIS 301012 como un tratamiento para un ser humano que padece, o que tiene un mayor riesgo de hipercolesterolemia, en donde el oligonucleótido ISIS 301012 se administra durante un periodo de carga y un período de mantenimiento. Las dosis durante el periodo de carga son típicamente más altas, o más frecuentes, que durante el período de mantenimiento, y la cantidad y la frecuencia de la dosificación se seleccionan de modo que los niveles tisulares hepáticos de ISIS 301012 se aproximen a los niveles tisulares que proporcionan beneficios terapéuticos. Las concentraciones plasmáticas mínimas de oligonucleótido están en equilibrio con las concentraciones tisulares de fármaco y, por lo tanto, se utilizan como una representación de las concentraciones tisulares hepáticas. Por ejemplo, una dosis de 200 mg de ISIS 301012 administrada por vía intravenosa 3 veces durante un período de carga de 1 semana, alcanzó una concentración plasmática mínima de aproximadamente 18 ng/dL. Se observaron reducciones del colesterol LDL en suero, colesterol total en suero y apolipoproteína B en suero. Las dosis durante el período de mantenimiento son típicamente menores o menos frecuentes que durante el período de carga, y se administran una vez a la semana, una vez cada 2 semanas, una vez al mes o una vez cada 3 meses. Esta dosis puede ser igual o menor que la dosis administrada durante el período de carga. Por ejemplo, una dosis de 200 mg de ISIS 301012 se puede administrar una vez a la semana durante el período de mantenimiento.

Tal como se utiliza en la presente memoria, un oligonucleótido puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto humano, cuando se encuentra una reducción de al menos 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% o 90% de los niveles de apolipoproteína B sérica o de colesterol LDL sérico. Sin embargo, cualquier reducción en los niveles de apolipoproteína B o de colesterol LDL en suero puede ser terapéuticamente beneficiosa para un sujeto, por lo que los porcentajes de reducción antes mencionados son ilustrativos y no limitativos, en las realizaciones de la invención. Un oligonucleótido puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto humano cuando el nivel de colesterol LDL en suero se reduce a aproximadamente 70 mg/dL o menos, a aproximadamente 100 mg/dL o menos, o a aproximadamente 130 mg/dL o menos.

Tal y como se usa en esta memoria, "que padece hipercolesterolemia" se refiere a un sujeto humano que tiene niveles de colesterol LDL o de colesterol total superiores a los niveles recomendados de colesterol LDL o colesterol total, según lo establecido por el “National Cholesterol Education Panel”. Tal y como se usa en la presente memoria, "con riesgo de hipercolesterolemia" se refiere a un sujeto humano que muestra uno o varios factores de riesgo de padecer cardiopatía coronaria, tal como, por ejemplo, los factores de riesgo definidos por el “National Cholesterol Education Panel”. Tal y como se usa en la presente memoria, "que lo requiere” es intercambiable con “que padece hipercolesterolemia" o "con riesgo de padecer hipercolesterolemia. "Sujeto" y "sujeto humano" se usan en esta memoria de manera intercambiable.

Otra realización de la descripción se refiere a reducir el nivel de lipoproteínas que contienen apolipoproteína B en un sujeto humano. Tal y como se usa en la presente memoria, "lipoproteína que contiene apolipoproteína B" se refiere a cualquier lipoproteína que tiene apolipoproteína B como componente proteico, y se entiende que incluye LDL, VLDL, IDL y lipoproteína (a). LDL, VLDL, IDL y lipoproteína (a) contienen cada una molécula de apolipoproteína B, con lo que una medición de la apolipoproteína B en suero refleja el número total de estas lipoproteínas. Como es conocido en la técnica, cada una de las lipoproteínas mencionadas anteriormente es aterogénica. Por lo tanto, la reducción de una o varias lipoproteínas que contienen apolipoproteína B en suero, puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto humano. Pequeñas partículas de LDL se considera que son particularmente aterogénicas, en comparación con partículas grandes de LDL, por lo que la disminución de las partículas de LDL pequeñas puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto humano. Tras el tratamiento con ISIS 301012, se encontró que los niveles séricos de partículas de LDL pequeñas, colesterol VLDL o lipoproteína (a) se habían reducido en los seres humanos.

Otra realización de la descripción se refiere a la reducción de parámetros lipídicos adicionales en un sujeto. Tras el tratamiento con ISIS 301012, se encontró que los triglicéridos en suero, la proporción de LDL:HDL o la proporción de colesterol total:HDL se habían reducido en los seres humanos. La reducción de la proporción de colesterol total:HDL o LDL:HDL es una mejora clínicamente deseable en la proporción de colesterol. Del mismo modo, es deseable clínicamente reducir los triglicéridos séricos humanos que muestran niveles de lípidos elevados.

También se describen en esta memoria métodos para reducir el colesterol LDL en suero en un ser humano mediante la administración de una dosis de un oligonucleótido que inhibe la expresión de la apolipoproteína B. En esta realización, el oligonucleótido se administra en una dosis que proporciona una concentración mínima predeterminada en el plasma del ser humano, en donde la concentración plasmática mínima da como resultado un nivel sérico menor de colesterol LDL. En una realización, la concentración plasmática mínima está en el intervalo de aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL. En una realización, el oligonucleótido es SEQ ID NO: 2. Preferiblemente, el nivel de colesterol LDL en suero disminuido proporciona un beneficio terapéutico al ser humano. Esta realización abarca la reducción de parámetros lipídicos adicionales, tales como el colesterol total en suero, las partículas de LDL pequeñas en suero, los triglicéridos en suero, la lipoproteína (a) en suero y el colesterol VLDL en suero.

En otra realización, el oligonucleótido se administra en una dosis que proporciona una concentración predeterminada en el plasma del ser humano, en donde la concentración plasmática mínima predeterminada se mide como "área bajo la curva" (AUC) mínima plasmática, tal y como se detalla más en su totalidad más abajo, y en donde la AUC plasmática mínima predeterminada da como resultado un nivel más bajo de colesterol LDL en suero. Dicha AUC plasmática mínima está en el intervalo de aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL. En una realización, el oligonucleótido es SEQ ID NO: 2. Esta realización abarca la reducción de parámetros lipídicos adicionales, tales como las partículas pequeñas de LDL en suero, el colesterol total en suero, los triglicéridos en suero, la lipoproteína (a) en suero y el colesterol VLDL en suero.

Todavía otras realizaciones de la presente descripción se refieren a una pluralidad de dosis, o a una o varias composiciones farmacéuticas que comprenden una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido hacia la apolipoproteína B para reducir los niveles de colesterol en el suero. En ciertas realizaciones, el colesterol en suero es colesterol LDL en suero o colesterol VLDL en suero. La administración de tal pluralidad de dosis a un sujeto, tal como un ser humano, da como resultado una AUC plasmática mínima para el oligonucleótido desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL, aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 10 μg·h/mL y aproximadamente 4 μg·h/mL a aproximadamente 6 μg·h/mL. En otras realizaciones, la AUC plasmática mínima es de aproximadamente 5 μg·h/mL. En aún otras realizaciones, la administración de la pluralidad de dosis da como resultado una AUC plasmática mínima para el oligonucleótido de aproximadamente 2 μg·h/mL, aproximadamente 3 μg·h/mL, aproximadamente 4 μg·h/mL, aproximadamente 5 μg·h/mL, aproximadamente 6 μg·h/mL, aproximadamente 7 μg·h/mL, aproximadamente 8 μg·h/mL, aproximadamente 9 μg·h/mL, aproximadamente 10 μg·h/mL, aproximadamente 11 μg·h/mL, aproximadamente 12 μg·h/mL, aproximadamente 13 μg·h/mL, aproximadamente 14 μg·h/mL, aproximadamente 15 μg·h/mL, aproximadamente 16 μg·h/mL, aproximadamente 17 μg·h/mL, aproximadamente 18 μg·h/mL, aproximadamente 19 μg·h/mL o aproximadamente 20 μg·h/mL. En cualquiera de las realizaciones anteriores, la AUC plasmática mínima se consigue desde aproximadamente 3 a aproximadamente 33 días después de la administración de al menos una dosis de la pluralidad de dosis del oligonucleótido. En algunas realizaciones, el colesterol sérico es colesterol LDL sérico. En algunas realizaciones preferidas, el oligonucleótido utilizado en la pluralidad de dosis es SEQ ID NO: 2.

En ciertas otras realizaciones, la administración de una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a una apolipoproteína B da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL, mientras que en otras realizaciones la concentración plasmática mínima es de aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 20 ng/dL. En aún otras realizaciones, la concentración plasmática mínima es de aproximadamente 5 ng/dL, aproximadamente 6 ng/dL, aproximadamente 7 ng/dL, aproximadamente 8 ng/dL, aproximadamente 9 ng/dL, aproximadamente 10 ng/dL, aproximadamente 11 ng/dL, aproximadamente 12 ng/dL, aproximadamente 13 ng/dL, aproximadamente 14 ng/dL, aproximadamente 15 ng/dL, aproximadamente 16 ng/dL, aproximadamente 17 ng/dL, aproximadamente 18 ng/dL, aproximadamente 19 ng/dL, aproximadamente 20 ng/dL, aproximadamente 21 ng/dL, aproximadamente 22 ng/dL, aproximadamente 23 ng/dL, aproximadamente 24 ng/dL, aproximadamente 25 ng/dL, aproximadamente 26 ng/dL, aproximadamente 27 ng/dL, aproximadamente 28 ng/dL, aproximadamente 29 ng/dL, aproximadamente 30 ng/dL, aproximadamente 31 ng/dL, aproximadamente 32 ng/dL, aproximadamente 33 ng/dL, aproximadamente 34 ng/dL, aproximadamente 35 ng/dL, aproximadamente 36 ng/dL, aproximadamente 37 ng/dL, aproximadamente 38 ng/dL, aproximadamente 39 ng/dL o aproximadamente 40 ng/dL. En tales realizaciones, la concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración de al menos una dosis de la pluralidad de dosis del oligonucleótido. En algunas realizaciones preferidas, el oligonucleótido utilizado en la pluralidad de dosis es SEQ ID NO: 2.

Las realizaciones descritas en este documento también se refieren al uso de una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B, para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de colesterol en suero. La administración de tal medicamento a un sujeto, tal como un ser humano, da como resultado una AUC plasmática mínima para el oligonucleótido desde aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 20 μg·h/mL, aproximadamente 2 μg·h/mL a aproximadamente 10 μg·h/mL y aproximadamente 4 μg·h/mL a aproximadamente 6 μg·h/mL. En otras realizaciones, la AUC plasmática mínima es de aproximadamente 5 μg·h/mL. En aún otras realizaciones, la administración del medicamento da como resultado una AUC plasmática mínima para el oligonucleótido de aproximadamente 2 μg·h/mL, aproximadamente 3 μg·h/mL, aproximadamente 4 μg·h/mL, aproximadamente 5 μg·h/mL, aproximadamente 6 μg·h/mL, aproximadamente 7 μg·h/mL, aproximadamente 8 μg·h/mL, aproximadamente 9 μg·h/mL, aproximadamente 10 μg·h/mL, aproximadamente 11 μg·h/mL, aproximadamente 12 μg·h/mL, aproximadamente 13 μg·h/mL, aproximadamente 14 μg·h/mL, aproximadamente 15 μg·h/mL, aproximadamente 16 μg·h/mL, aproximadamente 17 μg·h/mL, aproximadamente 18 μg·h/mL, aproximadamente 19 μg·h/mL o aproximadamente 20 μg·h/mL. En cualquiera de las realizaciones anteriores, la AUC plasmática mínima se consigue a partir de aproximadamente 3 a aproximadamente 33 días después de la administración del medicamento que contiene el oligonucleótido. En algunas realizaciones preferidas, el oligonucleótido utilizado en la preparación del medicamento es SEQ ID NO: 2.

En ciertas otras realizaciones, la administración de una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a una apolipoproteína B da como resultado una concentración plasmática mínima desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 40 ng/dL, mientras que en otras realizaciones la concentración plasmática mínima es desde aproximadamente 5 ng/dL a aproximadamente 20 ng/dL. En aún otras realizaciones, la concentración plasmática mínima es de aproximadamente 5 ng/dL, aproximadamente 6 ng/dL, aproximadamente 7 ng/dL, aproximadamente 8 ng/dL, aproximadamente 9 ng/dL, aproximadamente 10 ng/dL, aproximadamente 11 ng/dL, aproximadamente 12 ng/dL, aproximadamente 13 ng/dL, aproximadamente 14 ng/dL, aproximadamente 15 ng/dL, aproximadamente 16 ng/dL, aproximadamente 17 ng/dL, aproximadamente 18 ng/dL, aproximadamente 19 ng/dL, aproximadamente 20 ng/dL, aproximadamente 21 ng/dL, aproximadamente 22 ng/dL, aproximadamente 23 ng/dL, aproximadamente 24 ng/dL, aproximadamente 25 ng/dL, aproximadamente 26 ng/dL, aproximadamente 27 ng/dL, aproximadamente 28 ng/dL, aproximadamente 29 ng/dL, aproximadamente 30 ng/dL, aproximadamente 31 ng/dL, aproximadamente 32 ng/dL, aproximadamente 33 ng/dL, aproximadamente 34 ng/dL, aproximadamente 35 ng/dL, aproximadamente 36 ng/dL, aproximadamente 37 ng/dL, aproximadamente 38 ng/dL, aproximadamente 39 ng/dL o aproximadamente 40 ng/dL. En tales realizaciones, la concentración plasmática mínima se consigue aproximadamente 7 días después de la administración del medicamento que contiene el oligonucleótido. En algunas realizaciones preferidas, el oligonucleótido utilizado en la preparación del medicamento es SEQ ID NO: 2.

También se describe en esta memoria la utilización del oligonucleótido de SEQ ID NO: 2 para la preparación de un medicamento para reducir el colesterol LDL en suero, en donde la administración del medicamento es suficiente para lograr una o una combinación de las propiedades farmacocinéticas siguientes: una AUC plasmática mínima de al menos aproximadamente 2 μg·h/mL, una concentración plasmática mínima de al menos aproximadamente 5 ng/dL o una concentración hepática estimada de al menos aproximadamente 10 μg/g de hígado.

Realizaciones adicionales descritas en este documento se refieren al uso de un oligonucleótido que comprende SEQ ID NO: 2 para la preparación de un medicamento para reducir el colesterol LDL en suero, en donde el medicamento se administra durante un periodo de carga y un periodo de mantenimiento. Por ejemplo, en el período de carga, el medicamento se puede administrar aproximadamente 1 dosis al día hasta aproximadamente 10 días. El medicamento se puede administrar por vía intravenosa o subcutánea. En algunas realizaciones, el período de mantenimiento comprende administrar el medicamento al menos una vez cada 3 meses. Sin embargo, durante el mantenimiento, el medicamento se puede administrar más frecuentemente. Por ejemplo, el medicamento se puede administrar una vez aproximadamente cada mes, una vez aproximadamente cada dos semanas o una vez aproximadamente cada semana. Las dosis de mantenimiento del medicamento se pueden administrar por vía intravenosa o subcutánea. En algunas realizaciones, las dosis de carga y/o las dosis de mantenimiento del medicamento se administran con una tasa de aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 5 mg/kg/día. En ciertas realizaciones, la administración se produce con una tasa de aproximadamente 0,1 mg/kg/día a aproximadamente 1,2 mg/kg/día. En otras realizaciones, el medicamento se administra en una dosis de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 600 mg por semana.

En cualquiera de las realizaciones anteriores, el oligonucleótido que comprende SEQ ID NO: 2 puede ser ISIS 301012. ISIS 301012 se dirige al ARNm de la apolipoproteína B humana, y es un oligonucleótido quimérico ("gapmero") con una longitud de 20 nucleótidos, compuesto por una región central interna "gap" que consta de diez 2'-desoxinucleótidos, que está flanqueada en ambos lados (direcciones 5' y 3') por "alas" de cinco nucleótidos". Las alas están compuestas de 2'-O-metoxietil (2'-MOE) nucleótidos. Los enlaces internucleosídicos (cadena principal) son enlaces fosforotioato (P=S) a lo largo de todo el oligonucleótido. Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas. ISIS 301012 se sintetiza utilizando los métodos descritos en el documento de Solicitud de Patente de EE.UU. nº de serie 10/712.795.

Oligonucleótidos

En el contexto de esta invención, el término "oligonucleótido" se refiere a un oligómero o un polímero de ácido ribonucleico (ARN) o ácido desoxirribonucleico (ADN) o miméticos de los mismos. Por tanto, este término incluye oligonucleótidos compuestos por bases nucleicas presentes en la naturaleza, azúcares y enlaces internucleósidos covalentes (cadena principal) (ARN y ADN), así como oligonucleótidos que tienen porciones que no son de origen natural que actúan de manera similar (miméticos de oligonucleótidos). Los miméticos de oligonucleótidos se prefieren frecuentemente sobre las formas naturales debido a propiedades deseables tales como, por ejemplo, una captación celular mejorada, una mayor afinidad hacia el ácido nucleico diana y mayor estabilidad en presencia de nucleasas. Tal y como se utiliza en esta memoria, el término "modificación" incluye la sustitución y/o cualquier cambio de un oligonucleótido de partida o natural.

Tal y como se conoce en la técnica, un nucleósido es una combinación de base-azúcar. La porción de base del nucleósido es normalmente una base heterocíclica. Las dos clases más comunes de tales bases heterocíclicas son las purinas y las pirimidinas. Los nucleótidos son nucleósidos que incluyen además un grupo fosfato unido covalentemente a la porción de azúcar del nucleósido. Para aquellos nucleósidos que incluyen un azúcar pentofuranosilo, el grupo fosfato puede estar ligado con el resto 2', 3' o 5' hidroxilo del azúcar. En la formación de oligonucleótidos, los grupos fosfato de enlazan covalentemente con nucleósidos adyacentes entre sí, para formar un compuesto polimérico lineal. Dentro de la estructura del oligonucleótido, los grupos fosfato se conocen comúnmente como los que forman la cadena principal de internucleósidos del oligonucleótido. El enlace normal

o cadena principal de ARN y ADN es un enlace fosfodiéster 3' a 5'.

Los oligonucleótidos útiles en esta invención incluyen oligonucleótidos que contienen cadenas principales modificadas o enlaces internucleosídicos no naturales. Tal y como se usa en la presente memoria, un "oligonucleótido mimético" o un "mimético" se refiere a cualquier compuesto de la invención que está modificado a partir de ácidos nucleicos de ARN o ADN presentes en la naturaleza.

Tal y como se define en la presente memoria, los oligonucleótidos que tienen cadenas principales modificadas incluyen los que conservan un átomo de fósforo en la cadena principal y los que no tienen un átomo de fósforo en la cadena principal. A los efectos de esta memoria descriptiva, y a veces como referencia en la técnica, los oligonucleótidos modificados que no tienen un átomo de fósforo en su cadena principal internucleosídica, también se pueden considerar oligonucleósidos. Las cadenas principales de oligonucleótidos modificados incluyen, por ejemplo, fosforotioatos. Los enlaces fosforotioato proporcionan estabilidad frente a nucleasas, así como características de unión a proteínas plasmáticas al oligonucleótido. La estabilidad frente a nucleasas es útil para aumentar la vida útil in vivo de los oligonucleótidos, mientras que la unión a proteínas plasmáticas disminuye la tasa de aclaramiento de primer paso del oligonucleótido a través de la excreción renal.

En otros miméticos de oligonucleótidos, el azúcar está modificado o sustituido con grupos nuevos. Las unidades de bases se mantienen para la hibridación con un compuesto diana de ácido nucleico apropiado. Las modificaciones del azúcar pueden impartir estabilidad frente a nucleasas, afinidad de la unión o alguna otra propiedad biológica beneficiosa para el oligonucleótido. Una modificación del azúcar este tipo incluye 2'-metoxietoxi (2'-O-CH2CH2OCH3, también conocido como 2'-O-(2-metoxietil) o 2'-MOE) (Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504), es decir, un grupo alcoxialcoxi.

Los miméticos de oligonucleótidos también pueden incluir modificaciones o sustituciones de bases nucleicas (denominadas frecuentemente en la técnica simplemente como "bases"). Tal y como se emplea en la presente memoria, las bases nucleicas "no modificadas" o "naturales" incluyen las bases púricas adenina (A) y guanina (G), y las bases pirimidínicas timina (T), citosina (C) y uracilo (U). Las bases nucleicas modificadas incluyen otras bases nucleicas sintéticas y naturales tales como 5-metilcitosina (5-me-C). Ciertas sustituciones de bases nucleicas, incluyendo las sustituciones de 5-metilcitosina, son particularmente útiles para aumentar la afinidad de la unión de los oligonucleótidos de la invención. Por ejemplo, las sustituciones de 5-metilcitosina han mostrado que aumentan la estabilidad del ácido nucleico dúplex en 0,6-1,2°C (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. y Lebleu, B., compiladores, "Antisense Research and Applications", CRC Press, Boca Raton, 1993, págs. 276-278y son actualmente las sustituciones de bases preferidas, incluso más particularmente cuando se combinan con modificaciones de 2'-O-metoxietil azúcar.

No es necesario que todas las posiciones en un oligonucleótido o un oligonucleótido mimético dado estén modificadas uniformemente, y de hecho, una o varias de las modificaciones mencionadas anteriormente se pueden incorporar en un oligonucleótido aislado, o incluso en un nucleósido aislado dentro de un oligonucleótido.

Las realizaciones de la invención también incluyen oligonucleótidos o miméticos que son compuestos quiméricos. Oligonucleótidos "quiméricos" o "quimeras", en el contexto de esta invención, son compuestos, particularmente oligonucleótidos, que contienen al menos dos regiones químicamente distintas, cada una de ellas compuesta de al menos una unidad monomérica, es decir, un nucleótido en el caso de un oligonucleótido. Estos oligonucleótidos contienen típicamente al menos una región químicamente distinta en la que el oligonucleótido se modifica de modo que confiere al oligonucleótido una resistencia incrementada frente a la degradación con nucleasas, una mayor captación celular y/o un aumento de la afinidad de la unión con el ácido nucleico diana. Una región adicional químicamente distinta del oligonucleótido puede servir como sustrato para enzimas capaces de escindir ARN:ADN o híbridos de ARN:ARN. A modo de ejemplo, la ARNasa H es una endonucleasa celular que escinde la cadena de ARN de un dúplex de ARN:ADN. Modificaciones que activan, proporcionan o activan la ARNasa H y como resultado producen la escisión del ARN diana, mejoran de este modo en gran medida la eficacia del oligonucleótido para inhibir la expresión génica. En consecuencia, pueden obtenerse frecuentemente resultados comparables con oligonucleótidos más cortos cuando se utilizan oligonucleótidos quiméricos que incorporan modificaciones que facilitan la escisión del dúplex, en comparación con desoxioligonucleótidos de fosforotioato que se hibridan con la misma región diana. La escisión del ARN diana se puede detectar rutinariamente mediante electroforesis en gel y, si es necesario, técnicas asociadas de hibridación de ácidos nucleicos, conocidas en la técnica.

Los oligonucleótidos quiméricos de la invención se pueden formar como estructuras compuestas de dos o más oligonucleótidos, oligonucleótidos modificados, oligonucleósidos y/o miméticos de oligonucleótidos tal y como se ha descrito anteriormente. Los oligonucleótidos quiméricos pueden ser de varios tipos diferentes. Estos incluyen un primer tipo en el que el segmento "de la región interna" de los nucleósidos ligados se sitúa entre los segmentos 5' y 3' del “ala” de nucleósidos unidos y un segundo tipo de "extremo abierto" en donde el segmento "de la región interna" se encuentra en el extremo, ya sea 3' o 5' terminal del oligonucleótido quimérico. Los compuestos del primer tipo también se conocen en la técnica como “gapmeros” u oligonucleótidos con región interna. Los compuestos del segundo tipo se conocen también en la técnica como "hemimeros" o "alameros". Tales compuestos también se han denominado en la técnica como híbridos.

En un gapmero que tiene una longitud de 20 nucleótidos, una región interna o un ala puede tener una longitud de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 nucleótidos. En una realización, un gapmero de 20 nucleótidos se compone de una región interna de 8 nucleótidos de longitud, flanqueada en ambos lados 5' y 3' por alas de 6 nucleótidos de longitud. En otra realización, un gapmero de 20 nucleótidos se compone de una región interna de 8 nucleótidos de longitud, flanqueada en ambos lados 5' y 3' por alas de 5 nucleótidos de longitud. En otra realización, un gapmero de 20 nucleótidos se compone de una región interna de 12 nucleótidos de longitud, flanqueada en ambos lados 5' y 3' por alas de 4 nucleótidos de longitud. En una realización adicional, un gapmero de 20 nucleótidos se compone de una región interna de 14 nucleótidos de longitud, flanqueada en ambos lados 5' y 3' por alas de 3 nucleótidos de longitud. En otra realización, un gapmero de 20 nucleótidos se compone de una región interna de 16 nucleótidos de longitud, flanqueada en ambos lados 5' y 3' por alas de 2 nucleótidos de longitud. En otra realización, un gapmero de 20 nucleótidos se compone de una región interna de 18 nucleótidos de longitud, flanqueada en ambos extremos 5' y 3' por alas de 1 nucleótido de longitud. Alternativamente, las alas tienen diferentes longitudes, por ejemplo, un gapmero de 20 nucleótidos puede estar compuesto por una región interna de 10 nucleótidos de longitud, flanqueada por un ala de 6 nucleótidos en un lado (5' o 3') y un ala de 4 nucleótidos en el otro lado (5' o 3').

En un hemimero, un oligonucleótido quimérico con "extremo abierto" que tiene dos regiones químicamente distintas, una primera región químicamente distinta o el segmento de región interna, en un compuesto de 20 nucleótidos de longitud, se puede localizar en el extremo 5' terminal del oligonucleótido y puede tener 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 o 19 nucleótidos de longitud. Además, una segunda región químicamente distinta en un compuesto de 20 nucleótidos de longitud, puede estar localizada en el extremo 3' terminal del oligonucleótido y puede tener una longitud de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 o 19 nucleótidos. Por ejemplo, un hemimero de 20 nucleótidos puede tener una primera región químicamente distinta,

o un segmento de región interna, de 10 nucleótidos en el extremo 5' y una segunda región químicamente distinta de 10 nucleótidos en el extremo 3'.

Documentos de patentes representativas de Estados Unidos que describen la preparación de dichas estructuras híbridas incluyen, pero no se limitan a: 5.013.830; 5.149.797; 5.220.007; 5.256.775; 5.366.878; 5.403.711; 5.491.133; 5.565.350; 5.623.065; 5.652.355; 5.652.356; y 5.700.922.

Los oligonucleótidos descritos en esta memoria comprenden desde aproximadamente 14 a aproximadamente 30 bases nucleicas (es decir, desde aproximadamente 14 a aproximadamente 30 nucleósidos enlazados). Un experto en la técnica apreciará que esto representa oligonucleótidos que tienen 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 bases nucleicas. También se describen en esta memoria oligonucleótidos que tienen 1, 2 o 3 bases nucleicas añadidas o eliminadas de cualquier extremo de un oligonucleótido de aproximadamente 14 a 30 bases nucleicas de longitud, en donde los oligonucleótidos no pierden su eficacia terapéutica.

En una realización adicional, los oligonucleótidos descritos en esta memoria comprenden desde aproximadamente 20 a aproximadamente 30 bases nucleicas. Un experto en la técnica apreciará que esto representa oligonucleótidos que tienen 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 bases nucleicas. También se describen en esta memoria oligonucleótidos que tienen 1, 2 o 3 bases nucleicas añadidas o eliminadas de cualquier extremo de un oligonucleótido de aproximadamente 20 a 30 bases nucleicas de longitud, en donde los oligonucleótidos no pierden su eficacia terapéutica.

Los oligonucleótidos usados de acuerdo con esta invención se pueden preparar convenientemente y de manera rutinaria a través de la técnica bien conocida de síntesis en fase sólida. El equipo para dicha síntesis se puede obtener de varios vendedores que incluyen, por ejemplo, Applied Biosystems (Foster City, CA). Se puede emplear adicional o alternativamente cualquier otro medio para dicha síntesis que es conocido en la técnica. Es bien conocido el uso de técnicas similares para preparar oligonucleótidos tales como los fosforotioatos y los derivados alquilados.

Los oligonucleótidos descritos en la presente memoria, particularmente ISIS 301012 y los oligonucleótidos relacionados con ISIS 301012, abarcan cualquier sal, éster o sal de tales ésteres farmacéuticamente aceptables, o cualquier otro compuesto que tras la administración a un ser humano, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito o el residuo biológicamente activo del oligonucleótido administrado. En consecuencia, por ejemplo, la descripción señala también profármacos y sales farmacéuticamente aceptables de los oligonucleótidos de la invención, sales farmacéuticamente aceptables de dichos profármacos, y otros bioequivalentes. Tal y como se usa en la presente memoria, "bioequivalencia" significa la ausencia de una diferencia significativa en la tasa y la medida en la que el ingrediente activo en equivalentes farmacéuticos está disponible en el sitio de acción del fármaco, cuando se administra en la misma dosis molar en condiciones similares. Tal y como se usa en esta memoria, "oligonucleótidos relacionados con ISIS 301012" incluyen oligonucleótidos que tienen la secuencia de ISIS 301012, que están truncados en 1 o 2 incrementos de bases desde el extremo 5' y/o 3'.

El término "profármaco" indica un agente terapéutico que se prepara en una forma inactiva y que se convierte en forma activa (es decir, fármaco) dentro del cuerpo, o de sus células, por la acción de enzimas endógenas u otros productos químicos y/o condiciones. En particular, las versiones de profármacos de los oligonucleótidos de la invención se preparan como derivados de SATE [(S-acetil-2-tioetil)fosfato] de acuerdo con los métodos descritos en el documento WO 93/24510 de Gosselin et al., publicado el 9 de diciembre 1993 o en los documentos WO 94/26764 y U.S 5.770.713 de Imbach et al.

La expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales fisiológica y farmacéuticamente aceptables de los oligonucleótidos de la invención: es decir, sales que conservan la actividad biológica deseada del compuesto original y no confieren efectos toxicológicos no deseados al mismo.

Para los oligonucleótidos, los ejemplos preferidos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen pero no se limitan a (a) sales formadas con cationes tales como sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, poliaminas tales como espermina y espermidina, etc.; (b) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y similares; (c) sales formadas con ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido cáprico, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido palmítico, ácido algínico, poli(ácido glutámico), ácido naftalensulfónico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido naftalendisulfónico, poli(ácido galacturónico) y similares; y (d) sales formadas a partir de aniones elementales tales como cloro, bromo y yodo.

Indicaciones clínicas

En esta memoria se describen métodos para tratar, prevenir o mejorar trastornos asociados con colesterol LDL elevado en suero, que comprenden administrar a un sujeto humano una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un oligonucleótido que inhibe la expresión de la apolipoproteína B. Un compuesto tal es ISIS 301012. Tales trastornos incluyen hipercolesterolemia, hipercolesterolemia familiar homocigótica, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar combinada y apolipoproteína B familiar defectuosa. Tal como se utiliza en esta memoria, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una dosis que cuando se administra a un ser humano, disminuye uno o varios parámetros lipídicos que incluyen colesterol LDL en suero, apolipoproteína B en suero, colesterol VLDL en suero, colesterol total en suero, lipoproteína (a) en suero, triglicéridos en suero, proporción de colesterol total:HDL en suero o proporción LDL:HDL en suero. Tal y como se utiliza en esta memoria, la expresión "cantidad profilácticamente eficaz" significa una dosis que cuando se administra a un ser humano, impide un aumento en uno o varios parámetros lipídicos que incluyen el colesterol LDL en suero, la apolipoproteína B en suero, el colesterol VLDL en suero, el colesterol total en suero, la lipoproteína (a) en suero, los triglicéridos en suero, la proporción de colesterol total:HDL en suero o la proporción LDL:HDL en suero.

También se describen en esta memoria métodos para tratar, prevenir o mejorar trastornos asociados con colesterol LDL en suero elevado en un sujeto humano, tratado previamente sin éxito con agentes reductores de lípidos. En una realización, el sujeto humano fue tratado previamente sin éxito con una estatina. Se entiende que tales sujetos incluyen sujetos hipercolesterolémicos familiares homocigóticos que no responden a una estatina o que muestran una respuesta limitada a una estatina, debido a una actividad insuficiente del receptor de LDL. Por lo tanto, sujetos hipercolesterolémicos familiares homocigóticos, así como los hipercolesterolémicos heterocigóticos, frecuentemente no alcanzan los niveles de lípidos clínicamente deseables, por ejemplo, del colesterol total en suero o del colesterol LDL en suero. Un experto en la técnica entenderá además que los sujetos tratados previamente sin éxito con agentes terapéuticos reductores de lípidos, incluyen los que son intolerantes a ciertos agentes reductores de lípidos. Por ejemplo, los que experimentan efectos secundarios graves después del tratamiento con una estatina, p. ej., rabdomiolisis, son intolerantes a una estatina y por lo tanto no alcanzan niveles clínicamente deseables de lípidos con la terapia de estatina. Otros sujetos incluyen los que experimentan efectos adversos después de la administración de los agentes reductores de lípidos actuales, por ejemplo, miopatía, fatiga o efectos sobre el sistema nervioso central (por ejemplo, insomnio) después del tratamiento con una estatina, y del mismo modo no alcanzan los niveles clínicamente deseados de lípidos con la terapia de estatina. En una realización, a sujetos humanos previamente tratados sin éxito con una estatina, se les dan dosis de ISIS 301012 que proporcionan beneficios terapéuticos, tales como una disminución de la apolipoproteína B en suero, disminución del colesterol LDL en suero o disminución del colesterol total en suero.

Tal y como se usa en la presente memoria, "previamente tratados sin éxito con una estatina" se entiende que incluye sujetos humanos que no están alcanzando los niveles de lípidos clínicamente deseables (por ejemplo, colesterol LDL en suero, colesterol VLDL en suero, colesterol total en suero) debido a una o varias de las siguientes razones: actividad insuficiente del receptor de LDL; intolerancia a una estatina; efectos adversos después del tratamiento con una estatina; o poco cumplimiento de la terapia con estatinas recomendada clínicamente.

Tal y como se utiliza en la presente memoria, un sujeto humano que tiene "actividad insuficiente del receptor de LDL" se entiende que incluye un sujeto que cumple uno o varios de los siguientes criterios: pruebas genéticas que confirman 2 genes mutados del receptor de LDL; anamnesis documentada de colesterol LDL en suero sin tratar, superior a 500 mg/dL; xantoma tendinoso y/o cutáneo antes de los 10 años; o bien, ambos padres tienen colesterol LDL en suero elevado documentado, antes de la terapia hipolipemiante que concuerda con una hipercolesterolemia familiar heterocigótica. En algunas realizaciones, el sujeto ha sido diagnosticado con hipercolesterolemia familiar homocigótica o heterocigótica.

También se describen en esta memoria métodos para tratar, prevenir o mejorar trastornos relacionados con la apolipoproteína B. Tal y como se usa en la presente memoria, un "trastorno relacionado con la apolipoproteína B" indica estados o enfermedades que están asociados con niveles elevados en suero de apolipoproteína B, e incluyen hipercolesterolemia familiar, apoB-100 familiar defectuosa, hipercolesterolemia familiar combinada, hipercolesterolemia no familiar (o poligénica), hipertrigliceridemia, síndrome metabólico y diabetes de tipo 2.

Con respecto a algunos aspectos, la presente invención incluye métodos para tratar sujetos humanos que muestran niveles elevados de partículas de LDL pequeñas, teniendo tales sujetos más colesterol LDL transportado en partículas de LDL pequeñas que en comparación con partículas de LDL grandes, que comprenden la administración a un sujeto de una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un oligonucleótido que inhibe la expresión de la apolipoproteína B. Uno de tales compuestos es ISIS 301012. Los niveles totales de colesterol LDL en tales sujetos no son elevados.

También se describe en esta memoria un método para usar un oligonucleótido que comprende la secuencia de bases nucleicas "GCCTCAGTCTGCTTCGCACC" (SEQ ID NO: 2) en un tratamiento para reducir el colesterol LDL en suero en un sujeto humano. El método comprende informar al sujeto humano de que la administración de dicho oligonucleótido da como resultado una AUC plasmática mínima de al menos aproximadamente 2 μg·h/mL, da como resultado una concentración plasmática mínima de al menos aproximadamente 5 ng/dL o da como resultado una concentración hepática estimada de dicho oligonucleótido de al menos aproximadamente 10 μg/g. En algunas realizaciones, el oligonucleótido comprende ISIS 301012.

Tal y como se utiliza en la presente memoria, "informar" se refiere a proporcionar información relativa a las actividades farmacológicas, farmacocinéticas y/o farmacodinámicas de un oligonucleótido. El acto de informar se puede realizar, por ejemplo, proporcionando una descripción verbal o proporcionando material impreso. En los casos en que se utiliza el material impreso, el material impreso puede proporcionar, por ejemplo, información relativa a los efectos del oligonucleótido sobre el colesterol LDL en suero, el colesterol VLDL en suero, el colesterol total en suero, las partículas de LDL pequeñas en suero, la proporción en suero de colesterol total:HDL o la proporción en suero de LDL:HDL. El material impreso puede proporcionar además información relativa al perfil farmacocinético de un oligonucleótido, tal como, por ejemplo, a través de la AUC plasmática mínima, las concentraciones plasmáticas mínimas, la semivida de eliminación, las concentraciones estimadas de tejido o Cmáx. En una realización, el material impreso proporciona información relacionada con los efectos farmacodinámicos y farmacocinéticos de ISIS 301012. Tal y como se usa en esta memoria, "informar" no requiere más que el simple hecho de proporcionar la información. No es necesario que los destinatarios de la información acepten, acusen recibo o comprendan la información.

Tal y como se utiliza en la presente memoria, "etiqueta" se refiere a material impreso que se asocia con un envase para contener los oligonucleótidos y/o las composiciones farmacéuticas que incluyen los oligonucleótidos descritos en la presente memoria. A modo de ejemplo no limitativo, la etiqueta y el envase se pueden colocar juntos en una caja o un recubrimiento retráctil. Alternativamente, la etiqueta puede estar fijada directamente al envase. En otras realizaciones, la etiqueta no tiene que estar asociada físicamente o en proximidad física con el envase, sin embargo, la etiqueta se debe proporcionar al mismo tiempo o en un tiempo razonablemente próximo, al momento de proporcionar el envase.

Composiciones farmacéuticas

Las composiciones farmacéuticas que comprenden oligonucleótidos (por ejemplo, la composición farmacéutica que comprende ISIS 301012 u oligonucleótidos relacionados con ISIS 301012), se pueden administrar por una variedad de modos, que incluyen la vía parenteral. La administración parenteral se entiende que incluye la inyección o infusión intravenosa, intraarterial, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular. En un aspecto, la administración de oligonucleótidos, tales como ISIS 301012, a un sujeto humano, es realizada por un profesional sanitario. En otro aspecto, la administración de los oligonucleótidos es realizada por una persona designada, entrenada, tal como, por ejemplo, el sujeto. En un aspecto, un oligonucleótido se administra por vía subcutánea como una inyección única en el abdomen o en el muslo. Alternativamente, la dosis se divide y se administra como 2 o 3 inyecciones no seguidas en el abdomen o en el muslo.

Las composiciones y formulaciones para la administración parenteral pueden incluir soluciones acuosas estériles, que pueden contener también tampones, diluyentes y otros aditivos adecuados, pero sin limitarse a los mismos, potenciadores de la penetración, compuestos portadores y otros vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas líquidas de oligonucleótido se pueden preparar mediante la combinación del oligonucleótido con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril exenta de pirógenos o solución salina. El agua estéril exenta de pirógenos se entiende que incluye agua estéril para inyección.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención, que pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria, se pueden preparar de acuerdo con técnicas convencionales bien conocidas en la industria farmacéutica. Tales técnicas incluyen la etapa de asociar los ingredientes activos con el(los) vehículo(s) farmacéutico(s) o excipiente(s). En general, las formulaciones se preparan asociando los ingredientes activos con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y luego, si es necesario, dando forma al producto.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden formularse como suspensiones en medios acuosos, no acuosos o mixtos. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir tampones fisiológicamente compatibles, que incluyen, por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato (PBS). Las suspensiones acuosas pueden contener además sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión que incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, sorbitol y/o dextrano. La suspensión también puede contener estabilizantes.

Un "vehículo farmacéutico" o un "excipiente" es un disolvente farmacéuticamente aceptable, un agente de suspensión o cualquier otro vehículo farmacológicamente inerte para administrar uno o varios oligonucleótidos a un animal. El excipiente puede ser líquido o sólido y se selecciona, teniendo en cuenta la manera planeada de administración, de modo que se proporcione el grosor deseado, la consistencia deseada, etc., cuando se combina con un oligonucleótido y cualquier otro componente de una composición farmacéutica dada. Los vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, agua, soluciones salinas, alcoholes, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilosa, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidona y similares.

Las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen varios productos farmacéuticos activos. En un aspecto, un producto farmacéutico activo es una solución estéril de oligonucleótido en agua para inyección que se puede administrar como una inyección subcutánea o como una infusión intravenosa, tras la dilución en la solución salina. La concentración del ingrediente farmacéutico activo es de 250 mg/mL. Esta formulación comprende el oligonucleótido en agua para inyección ajustado a pH 7,0-9,0 con ácido o base durante la preparación. El oligonucleótido en agua se envasa en un vial de vidrio transparente de tipo I (tratado con sulfato de amonio), tapado con un cierre de de goma de bromobutilo recubierto con TEFLON®, y sobresellado con FLIP-OFF® de aluminio. En una realización, el oligonucleótido estéril en agua para solución para inyección comprende ISIS 301012.

En un aspecto adicional, un producto farmacéutico activo es un oligonucleótido liofilizado estéril que se reconstituye con un diluyente adecuado, por ejemplo, agua estéril para inyección. El producto reconstituido se administra como una inyección subcutánea o como una infusión intravenosa tras la dilución en solución salina. El producto farmacéutico liofilizado consiste en el oligonucleótido que se ha preparado en agua para inyección, ajustado a pH 7,0-9,0 con ácido o base durante la preparación, y luego liofilizado. El producto farmacéutico liofilizado puede tener 50-125 mg del oligonucleótido. Se entiende que esto abarca 50, 75, 100 y 125 mg de oligonucleótido liofilizado. El producto farmacológico liofilizado puede envasarse en un vial de vidrio transparente de tipo I de 2 ml (tratado con sulfato de amonio), tapado con un cierre de caucho de bromobutilo y sobresellado con un FLIP-OFF® de aluminio. En una realización, el producto farmacéutico liofilizado comprende ISIS 301012.

Las composiciones de la presente invención pueden contener adicionalmente otros componentes auxiliares encontrados convencionalmente en composiciones farmacéuticas, en sus niveles de uso establecidos en la técnica. Así, por ejemplo, las composiciones pueden contener materiales adicionales, compatibles, farmacéuticamente activos tales como, por ejemplo, agentes antipruríticos, astringentes, anestésicos locales o antiinflamatorios, o pueden contener materiales adicionales útiles en la formulación física de diversas formas de dosificación de las composiciones de la presente invención, tales como colorantes, agentes aromatizantes, conservantes, antioxidantes, opacificantes, agentes espesantes y estabilizantes. Sin embargo, dichos materiales, cuando se añaden, no deberían interferir indebidamente con las actividades biológicas de los componentes de las composiciones de la presente invención. Las formulaciones pueden esterilizarse y, si se desea, mezclarse con agentes auxiliares, por ejemplo, agentes lubricantes, conservantes, estabilizantes, humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, tampones, colorantes, aromatizantes y/o sustancias aromáticas y similares, que no interaccionan perjudicialmente con el(los) oligonucleótido(s) de la formulación.

Dosificación

Tal y como se utiliza en la presente memoria, una "dosis" se refiere a la cantidad de fármaco administrado a un sujeto humano en un día; por ejemplo, mediante administración intravenosa o subcutánea, en una administración única o dividida en múltiples administraciones. Un intervalo de dosis preferido para un sujeto típico de 70 kg es de aproximadamente 25-800 mg. Intervalos más preferidos incluyen aproximadamente 25-600 mg, aproximadamente 25-400 mg, aproximadamente 25-200 mg, aproximadamente 50-600 mg, aproximadamente 50-400 mg

o aproximadamente 50-200 mg en un día. Intervalos adicionales incluyen aproximadamente 0,1-5 mg/kg, aproximadamente 0,5-3 mg/kg, aproximadamente 0,5-8 mg/kg, aproximadamente 0,25-3 mg/kg o aproximadamente 0,25-2 mg/kg. Tal y como se usa en la presente memoria, la cantidad de fármaco administrado en una dosis oscila desde 50 hasta 600 mg por semana. Se entiende que dosis de 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550 y 600 mg por semana, todas se incluyen dentro del intervalo de 50-600 mg/semana. Tal y como se usa en la presente memoria, los términos "paciente" y "sujeto" son intercambiables.

Los regímenes de dosificación pueden incluir dosis durante un periodo de carga y/o un período de mantenimiento. Durante el período de carga, que por lo general o lo más frecuente se produce al principio de la terapia y que dura aproximadamente una semana (aunque podría ser mayor o menor, por ejemplo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 días), se puede proporcionar múltiples administraciones cada día, cada 2 días, cada 3 días, cada 4 días, cada 5 días, cada 6 días o cada semana. Alternativamente, el período de carga puede durar aproximadamente 28 días, aunque podría ser mayor o menor, por ejemplo, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 o 35 días, y una sola administración se puede administrar cada día, cada 2 días, cada 3 días, cada 4 días, cada 5 días, cada 6 día o cada 7 días. Durante un período de mantenimiento, que sigue el periodo de carga y puede durar durante varios años o toda la vida del sujeto, las dosis se pueden administrar con una frecuencia que oscila desde cada día a cada 3 meses, lo que se entiende que incluye todos los días, cada 2 días, cada 3 días, cada 4 días, cada 5 días, cada 6 días, cada semana, cada 2 semanas, cada 3 semanas, cada 4 semanas, cada mes, cada 2 meses o cada 3 meses. Las dosis del periodo de mantenimiento son típicamente, pero no siempre, inferiores a las dosis del periodo de carga, y pueden variar desde 10 hasta 50 mg/día. Unos niveles de lípidos disminuidos, tales como de apolipoproteína B en suero, colesterol total en suero, colesterol LDL en suero, colesterol VLDL en suero, lipoproteína (a) en suero, proporción sérica de LDL:HDL y/o proporción sérica de colesterol:HDL, se pueden mantener durante al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 semanas (o 1, 2, 3 o 4 meses) después de una dosis del fármaco.

Un régimen de dosificación alternativo puede incluir dosis administradas durante un período de mantenimiento, sin un período de carga anterior. Las dosis se pueden administrar con una frecuencia que oscila desde cada día hasta cada tres meses, lo que se entiende que incluye todos los días, cada 2 días, cada 3 días, cada 4 días, cada 5 días, cada 6 días, cada semana, cada 2 semanas, cada 3 semanas, cada 4 semanas, cada mes, cada 2 meses o cada 3 meses.

El término "biodisponibilidad" se refiere a una medición de la porción de un fármaco administrado que llega al sistema circulatorio (por ejemplo, la sangre, especialmente el plasma sanguíneo) cuando se emplea un modo particular de administración para administrar el fármaco. Por ejemplo, cuando se utiliza un modo de administración subcutánea para introducir el fármaco en un sujeto humano, la biodisponibilidad para tal modo de administración se puede comparar con un modo de administración diferente (por ejemplo, un modo de administración intravenoso) y las extrapolaciones realizadas para facilitar la determinación de la terapia apropiada. En general, la biodisponibilidad puede evaluarse midiendo el área bajo la curva (AUC) o la concentración máxima (Cmáx) en suero o plasma de la forma inalterada de un fármaco, después de la administración del fármaco a un sujeto humano. El AUC es una determinación del área bajo la curva que representa gráficamente la concentración sérica o plasmática de un fármaco a lo largo de la ordenada (eje Y) frente al tiempo a lo largo de la abscisa (eje X). Generalmente, el AUC para un fármaco en particular se puede calcular usando métodos conocidos por los expertos normales en la técnica y tal y como se describe en G. S. Banker, "Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences", 4ª ed., (Mayo 2002). En algunas realizaciones, el área bajo la curva de la concentración plasmática sanguínea de un fármaco (AUCsc) después de la administración subcutánea, se puede dividir por el área bajo la curva de la concentración plasmática de un fármaco después de la administración intravenosa (AUCiv), para proporcionar un cociente adimensional (biodisponibilidad relativa, BR) que representa la fracción de fármaco absorbido a través de la vía subcutánea en comparación con la vía intravenosa.

Tal y como se utiliza en la presente memoria, "AUC" o "AUC0-∞" indica el área bajo la curva de concentracióntiempo desde el tiempo 0 (al administrar o antes de la administración del oligonucleótido) hasta el infinito. "AUC048" se refiere al área bajo la curva de concentración-tiempo desde el tiempo 0 (al administrar o antes de la administración del oligonucleótido) hasta 48 horas después de la administración del oligonucleótido. En una realización, el oligonucleótido es ISIS 301012.

Una medición mínima se determina en un momento después de la dosificación, cuando las concentraciones de fármaco en plasma están en equilibrio con las concentraciones de fármaco en el tejido, y cuando las concentraciones de fármaco ya no se ven afectadas por las funciones de absorción o aclaramiento, tales como la distribución de una dosis inyectada a diversos tejidos. Por ejemplo, en el caso de oligonucleótidos, tales como ISIS 301012, los cálculos mínimos se realizan al menos 3 días después de la administración del oligonucleótido a un sujeto humano. Tal y como se usa en la presente memoria, "Cmínima" o "concentración plasmática mínima" se refiere a una concentración mínima en el plasma cuando las concentraciones plasmáticas de oligonucleótido están en equilibrio con las concentraciones tisulares de oligonucleótido. Ta y como se usa en la presente memoria, "AUCmínima" o "AUC plasmática mínima" indica el área bajo la curva de concentración-tiempo en un momento en el que las concentraciones plasmáticas de oligonucleótido están en equilibrio con las concentraciones tisulares de oligonucleótido. En una realización, el oligonucleótido es ISIS 301012. La semivida de un fármaco se puede calcular usando métodos conocidos por los expertos normales en la técnica. La semivida del oligonucleótido se determina durante la fase de distribución o la fase de eliminación, después de la administración del oligonucleótido. La semivida de distribución aparente se calcula usando la regresión log-lineal de las concentraciones de oligonucleótido en el plasma durante la fase de distribución. A modo de ejemplo, la fase de distribución de un oligonucleótido puede durar hasta 3 días después de la administración del oligonucleótido a un sujeto humano. Tal y como se usa en la presente memoria, "la semivida de eliminación terminal" o "semivida de eliminación" representa el momento en el que se aclara de los tejidos aproximadamente el 50% del oligonucleótido administrado, y se calcula empleando la regresión log-lineal de las concentraciones de oligonucleótido en plasma durante la fase de eliminación terminal de la administración.

Un experto en la técnica entenderá que para los oligonucleótidos, el AUC plasmática, Cmáx, Cmínima, y los parámetros relacionados se miden en la fracción plasmática de la sangre, en lugar de en la fracción sérica, ya que la medición de la fracción plasmática refleja la cantidad clínicamente más relevante de oligonucleótido unido a proteínas plasmáticas y transportado por las mismas. Las concentraciones de oligonucleótido en plasma se pueden determinar por métodos de rutina en la técnica, por ejemplo, mediante ELISA basado en la hibridación. Asimismo se entiende que los parámetros lipídicos, incluyendo apolipoproteína B, colesterol LDL, colesterol total, colesterol VLDL, lipoproteína (a), colesterol HDL o triglicéridos, se miden en la fracción sérica o plasmática de la sangre.

En general, la biodisponibilidad se correlaciona con la eficacia terapéutica cuando la eficacia terapéutica de un compuesto está relacionada con la concentración sanguínea (o plasmática) obtenida, incluso si el sitio de acción final del fármaco es intracelular (van Berge-Henegouwen et al., Gastroenterol., 1977, 73, 300). La eficacia terapéutica de ISIS 301012 se determina comparando la concentración plasmática de ISIS 301012, por ejemplo, con reducciones en suero de colesterol LDL.

La biodisponibilidad en un órgano se refiere a la concentración de un oligonucleótido en un órgano. La biodisponibilidad en un órgano se puede medir en sujetos humanos por una variedad de medios, tales como mediante radiografía de todo el cuerpo. La biodisponibilidad en un órgano se puede modificar, por ejemplo, mejorando, con una o varias modificaciones de un oligonucleótido, mediante el uso de uno o varios compuestos portadores

o excipientes, etc., tal y como se describe con más detalle en esta memoria. En general, un aumento de la biodisponibilidad se traducirá en un aumento de la biodisponibilidad de un órgano. Las concentraciones plasmáticas mínimas de oligonucleótido, incluyendo las concentraciones plasmáticas mínimas de ISIS 301012, están en equilibrio con las concentraciones de fármaco tisulares y por lo tanto se utilizan como una representación de la concentración en los tejidos hepáticos.

Los efectos de los tratamientos con oligonucleótidos tales como ISIS 301012, se pueden evaluar después de la recogida de tejidos o fluidos de un sujeto humano que recibe dichos tratamientos. Se conoce en la técnica que una muestra de biopsia se puede obtener a partir de ciertos tejidos sin provocar efectos perjudiciales a un sujeto. En ciertas realizaciones, un tejido y sus células constituyentes comprenden, pero no están limitados a, sangre (por ejemplo, células hematopoyéticas, tales como las células progenitoras hematopoyéticas humanas, células madre hematopoyéticas humanas, células CD34+, células CD4+), linfocitos y otras células de la estirpe sanguínea, médula ósea, mama, cuello del útero, colon, esófago, ganglio linfático, músculo, sangre periférica, mucosa oral y piel. En otras realizaciones, un líquido y sus células constituyentes comprenden, pero no están limitados a sangre, orina, semen, líquido sinovial, líquido linfático y líquido cefalorraquídeo.

Los tejidos o los fluidos de los sujetos se pueden evaluar para estudiar los niveles de expresión del ARNm o la proteína diana. Además, se pueden evaluar los niveles de expresión del ARNm o de la proteína de otros genes conocidos o sospechosos de estar asociados con el estado de enfermedad, afección o fenotipo específicos. Los niveles de ARNm se pueden medir o evaluar con PCR en tiempo real, transferencia de tipo Northern, hibridación in situ o análisis de micromatrices de ADN. Los niveles proteicos se pueden medir o evaluar con ELISA, inmunotransferencia, ensayos cuantitativos de proteínas, ensayos de la actividad de la proteína (por ejemplo, ensayos de la actividad caspasa), inmunohistoquímica o inmunocitoquímica.

Por otra parte, los efectos del tratamiento se pueden evaluar midiendo los parámetros de lípidos, tal como se describe en este documento (colesterol, lipoproteínas y triglicéridos, etc.), o biomarcadores asociados con la enfermedad o la afección en los tejidos y fluidos mencionados anteriormente, recogidos de un paciente o un sujeto que recibe el tratamiento, mediante métodos clínicos rutinarios conocidos en la técnica. Estos biomarcadores incluyen, pero no se limitan a: glucosa, ácidos grasos libres y otros marcadores del metabolismo de la glucosa y de los lípidos; transaminasas hepáticas, bilirrubina, albúmina, nitrógeno ureico en sangre, creatinina y otros marcadores de la función renal y hepática; interleucinas, factores de necrosis tumoral, moléculas de adhesión intracelular, proteína C reactiva y otros marcadores de la inflamación; testosterona, estrógenos y otras hormonas; marcadores tumorales; vitaminas, minerales y electrolitos.

Además, la espectroscopía por resonancia magnética nuclear (RMN) se utiliza para determinar las concentraciones de partículas de lipoproteínas en la sangre, incluyendo las partículas de VLDL (total, grandes/quilomicrones, medianas y pequeñas), partículas de LDL (total, grandes, pequeñas, medianas-pequeñas y muy pequeñas) y partículas de HDL (grandes, medianas y pequeñas). Tales mediciones del tamaño de las partículas de lipoproteínas permiten determinar las subclases de colesterol LDL, colesterol VLDL y colesterol HDL, por ejemplo, la fracción de colesterol LDL que es transportada en pequeñas partículas de LDL frente a partículas grandes de LDL.

Las mediciones in situ de parámetros de lípidos en los tejidos y líquidos también pueden llevarse a cabo utilizando técnicas de formación de imagen de todo el cuerpo, incluyendo la ecografía, la tomografía computarizada (TC) o la formación de imágenes por resonancia magnética.

Aunque la presente invención ha sido descrita con especificidad de acuerdo con ciertas realizaciones, los siguientes ejemplos sirven solamente para ilustrar la invención y no están destinados a limitar la misma.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Inhibición antisentido de la expresión de la apolipoproteína B humana con un oligonucleótido quimérico con fosforotioato que tienen alas 2'-MOE y una región interna desoxi (ISIS 301012)

Se diseñó un oligonucleótido para el ARN de la apolipoproteína B humana diana, usando una secuencia publicada (número de entrada de GenBank NM_000384.1, incorporada en esta memoria como SEQ ID NO: 1) y se denomina en lo sucesivo ISIS 301012 (GCCTCAGTCTGCTTCGCACC; SEQ ID NO: 2). ISIS 301012 es un oligonucleótido quimérico sintetizado utilizando métodos como los descritos en el documento WO 2004044181. El oligonucleótido ISIS 301012 quimérico es un "gapmero" de 20 nucleótidos de longitud, compuesto por una región central "interna" que consta de diez 2'-desoxinucleótidos, y flanqueada a ambos lados (direcciones 5' y 3') por “alas” de cinco nucleótidos. Las alas están compuestas por 2'-O-metoxietil (2'-MOE) nucleótidos. ISIS 301012 se muestra en la Tabla 1, en donde, en la secuencia de nucleótidos, los 2'-desoxinucleótidos (bases nucleicas 6-15) se indican con letra normal y los nucleótidos 2'-MOE (bases nucleicas 1-5 y 16-20) se indican con letra negrita y subrayada. Los enlaces internucleosídicos (cadena principal) son enlaces fosforotioato (P=S) a lo largo de todo el oligonucleótido. Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.

ISIS 301012 reduce la apolipoproteína B humana in vitro e in vivo. En la Tabla 1, el "sitio diana" indica el número del primer nucleótido (más 5') en la secuencia diana particular, al que se une el oligonucleótido.

Tabla 1

Sitio diana y Secuencia de ISIS 301012

Nº de ISIS: REGIÓN SEQ ID NO DE LA DIANA SITIO DE LA DIANA SECUENCIA SEQ ID NO

301012: Región codificadora 2 3249 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 2

Ejemplo 2

Efectos de la inhibición antisentido de la apolipoproteína B en monos cangrejeros

Se utilizaron monos cangrejeros (machos o hembras) para evaluar los oligonucleótidos antisentido por su potencial para disminuir el ARNm de la apolipoproteína B o los niveles de proteína in vivo, así como para evaluar los criterios de valoración fenotípicos asociados con la expresión de la apolipoproteína B. Como parte de este ejemplo, se determinaron los niveles de colesterol LDL y colesterol total de los monos tratados.

ISIS 301012 en monos cangrejeros delgados

El oligonucleótido ISIS 301012 fue investigado en un estudio a largo plazo para estudiar sus efectos sobre la expresión de la apolipoproteína B y los niveles de lípidos en suero en monos cangrejeros.

Monos cangrejeros machos y hembras fueron tratados con 2, 4 o 12 mg/kg de ISIS 301012 por vía intravenosa,

o 2 o 20 mg/kg por vía subcutánea, con una frecuencia de cada dos días durante la primera semana, y cada 4 días a continuación, durante periodos de tratamiento de 1 y 3 meses. Los animales tratados con solución salina sirvieron como testigos negativos. Cada grupo de tratamiento incluía 2 a 3 animales de cada sexo.

Con un intervalo de un mes y a los 3 meses de la terminación del estudio, se sacrificaron los animales y se evaluó la expresión de la apolipoproteína B en el hígado, los niveles de lípidos en suero y los indicadores de toxicidad. Se aisló el ARN a partir de tejido hepático y la expresión del ARNm de la apolipoproteína B se midió con PCR en tiempo real, tal y como se describe en el documento de Solicitud de EE.UU nº de serie 10/712.795. Los lípidos séricos, incluyendo el colesterol total, el colesterol LDL, el colesterol HDL y los triglicéridos, fueron evaluados con análisis clínicos rutinarios, por ejemplo, usando un analizador clínico de Olympus (Olympus America Inc., Melville, NY). Las proporciones de colesterol LDL a colesterol HDL y de colesterol total a colesterol HDL, también se calcularon. Los análisis de la aminotransferasa de alanina sérica (ALT) y aminotransferasa de aspartato sérica (AST), de infiltrados inflamatorios en el tejido y de gránulos basófilos en el tejido, proporcionaron una evaluación de la toxicidad relacionada con el tratamiento. La esteatosis hepática, o acumulación de lípidos en el hígado, se evaluó mediante análisis histológicos de rutina con tinción con rojo oleoso O y la medición de triglicéridos en el tejido hepático, usando un ensayo GPO de triglicéridos (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO).

Los resultados procedentes del intervalo de un mes del tratamiento a largo plazo, se muestran en la Tabla 2 y se normalizaron frente a animales tratados con solución salina, para el ARNm y frente a los valores de referencia no tratados, para los niveles de lípidos. Los niveles en suero de colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, concentración de partículas de LDL y triglicéridos se midieron por espectroscopia de resonancia magnética nuclear mediante Liposcience (Raleigh, NC). Además, la concentración de oligonucleótido intacto en el hígado se midió mediante electroforesis en gel capilar y se presenta como microgramos de oligonucleótido por gramo de tejido hepático. Cada resultado representa el promedio de los datos de 4 animales (2 machos y 2 hembras). Cuando está presente, "ND" indica "no determinado".

Tabla 2

Efectos de ISIS 301012 en monos cangrejeros delgados después de 4 semanas de tratamiento

: Administración intravenosa Inyección subcutánea

2 mg/kg: 4 mg/kg 12 mg/kg 3,5 mg/kg 20 mg/kg

expresión de apolipoproteína B (% de cambio normalizado frente a solución salina): -45 -76 -96 n.d. -94

concentración de oligonucleótido antisentido en el hígado (μg/g): 92 179 550 n.d. 855

Parámetros lipídicos (% de cambio normalizado frente al valor de referencia no tratado): Solución salina 2 mg/kg 4 mg/kg 12 mg/kg 3,5 mg/kg 20 mg/kg

Colesterol total: +1 -6 -2 -2 +5 -5

Colesterol LDL: +17 +15 +9 +3 -4 -16

Colesterol HDL: -11 -23 -15 -8 +13 +5

LDL/HDL: +62 +94 +38 +44 -15 -19

Colesterol total/HDL: +30 +44 +22 +21 -7 -10

Triglicérido: +37 +26 +32 +15 +1 -3

Concentración de partículas de LDL: +15 +8 +8 -11 -14 -21

Estos datos muestran que ISIS 301012 inhibía la expresión de la apolipoproteína B de una manera dependiente

5 de la dosis en una especie de primates y de forma concomitante disminuía los niveles de lípidos con dosis más altas de ISIS 301012. Además, estos resultados muestran que ISIS 301012 se acumulaba en el hígado en una forma dependiente de la dosis.

Después de 13 semanas de tratamiento con una dosis intravenosa de 2 mg/kg de ISIS 301012 o una dosis subcutánea de 20 mg/kg de ISIS 301012, se midieron los niveles en suero de colesterol total, colesterol LDL, coles

10 terol HDL, la concentración de partículas LDL y triglicéridos mediante espectroscopía con resonancia magnética nuclear de LipoScience, Inc. (Raleigh, NC). Estos datos se muestran en la Tabla 3 y se normalizaron frente a los valores de referencia sin tratar. Cada resultado representa el promedio de los datos de 4 animales (2 machos y 2 hembras).

Tabla 3

Efectos de ISIS 301012 en monos cangrejeros delgados después de 13 semanas de tratamiento

Parámetros lipídicos, % de cambio normalizado frente al valor de referencia no tratado: Solución salina 2 mg/kg 20 mg/kg

Colesterol total: +11 +7 +11

Colesterol LDL: +36 +4 -3

Colesterol HDL: -8 +18 +5

LDL/HDL: +64 -6 -20

Colesterol total/HDL: +30 +5 -11

Triglicérido: +36 +5 +10

Concentración de partículas de LDL: +31 -3 -7

Estos datos ilustran una disminución significativa del colesterol LDL y de las proporciones de colesterol total/HDL y LDL/HDL después de 13 semanas de tratamiento con ISIS 301012. Además, los niveles de colesterol HDL se incrementaron significativamente.

No se observó esteatosis hepática, o acumulación de lípidos en el hígado, después de 4 semanas de tratamiento con las dosis indicadas. Se observó una toxicidad esperada relacionada con la dosis, con las dosis más altas de 12 y 20 mg/kg, incluyendo un incremento transitorio de 1,2-1,3 veces en el tiempo de la tromboplastina parcial activada (APTT), durante las primeras 4 horas y gránulos basófilos en el hígado y el riñón (tal y como se determinó con un examen histológico de rutina con muestras de tejidos). No se observaron cambios funcionales en el riñón.

En un experimento similar, monos cangrejeros machos y hembras recibieron una dosis intravenosa de ISIS 301012 a 4 mg/kg, cada dos días durante la primera semana y después cada 4 días. Los grupos de animales se sacrificaron después de la primera dosis y la cuarta dosis, así como los días 11, 15 y 23 después de la cuarta dosis y la dosis final. El ARN del hígado y los niveles de ARNm de apolipoproteína B fueron evaluados con PCR en tiempo real, tal y como se describe en el documento de solicitud de EE.UU. nº de serie 10/712.795. Los resultados de este experimento mostraron una reducción del 40% en la expresión del ARNm de la apolipoproteína B después de una dosis intravenosa única de 4 mg/kg de ISIS 301012. Además, después de 4 dosis de ISIS 301012 a 4 mg/kg, el ARNm de la apolipoproteína B se redujo en aproximadamente 85% y una reducción del 50% en el ARNm de la apolipoproteína B se mantuvo hasta 16 días después del cese del tratamiento con ISIS 301012.

ISIS 326358 en monos cangrejeros alimentados con dieta rica en grasas

En una realización adicional, se evaluaron los efectos de la inhibición antisentido de la apolipoproteína B en monos cangrejeros con alimentación rica en grasas. ISIS 326358 (GCCTCAGTCTGCTTTACACC; SEQ ID NO: 3) es un oligonucleótido y el equivalente en monos cangrejeros de ISIS 301012. El oligonucleótido ISIS 326356 difiere de ISIS 301012 en 2 posiciones de bases nucleicas. Como ISIS 301012, ISIS 326358 es un gapmero, que tiene una porción central interna de 10 2'-desoxinucleótidos, que está flanqueada a ambos lados (5' y 3') por porciones de ala de 5 2'-MOE nucleótidos. Todos los enlaces internucleósidos son fosforotioato, y todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.

La actividad farmacológica de ISIS 326358 se caracterizó en los monos cangrejeros alimentados con una dieta alta en grasa (aproximadamente 17% de manteca de cerdo y aproximadamente 25% de colesterol) durante 3 semanas, antes del tratamiento con ISIS 326358, y durante todo el estudio. ISIS 326358 se administró por vía subcutánea con dosis de 2,5, 5 o 17,5 mg/kg durante 5 semanas. Las 3 primeras dosis se proporcionaron en días alternos (dosis de carga; 7,5, 12,5 o 37,5 mg/kg/semana) y a continuación, dos veces a la semana (dosis de mantenimiento; 5 mg, 10 o 35/kg/semana).

La dieta rica en grasas aumentó el colesterol sérico aproximadamente a 400 mg/dL, con respecto al nivel de aproximadamente 150 mg/dL observado en los monos que recibieron una dieta convencional. Después del tratamiento con ISIS 326358, el colesterol LDL, la apolipoproteína B hepática (ARNm y proteína) y el colesterol total se redujeron significativamente en un 70%, 50% y 50%, respectivamente. Las reducciones en el colesterol LDL y el colesterol total eran dependientes de la dosis y del tiempo. No se observaron cambios estadísticamente significativos en la apolipoproteína B o las lipoproteínas en el grupo testigo de solución salina, en comparación con los valores previos a la dosificación. No se observaron cambios en las transaminasas hepáticas o los niveles de triglicéridos en el hígado en los monos tratados con ISIS 326358.

Resumiendo, estos datos muestran que la inhibición antisentido de la apolipoproteína B utilizando ISIS 326358 en primates que recibían una dieta alta en grasas, reduce la expresión de la apolipoproteína B hepática y disminuye significativamente el colesterol total y el colesterol LDL en el suero.

Ejemplo 3

Evaluación de ISIS 301012 en un estudio clínico en fase I

Tal y como se describe a continuación, ISIS 301012 fue sometido a ensayo con un estudio con aumento de la dosis, a doble ciego, controlado con placebo, de fase I, con el fin de evaluar la seguridad y la tolerabilidad de dosis únicas y múltiples de ISIS 301012, administradas a seres humanos por vía intravenosa y subcutánea. Además, estos estudios evaluaron el perfil farmacocinético de dosis únicas y múltiples de ISIS 301012, administrado por vía intravenosa y por vía subcutánea; y también evaluaron la farmacodinámica de ISIS 301012 administrado por vía intravenosa y subcutánea.

Para este ejemplo, se proporcionó una solución de ISIS 301012 (250 mg/mL, 0,5 mL) en solución salina estéril, sin conservar, tamponada contenida en viales de vidrio de 2 mL con tapón. El fármaco en estudio se almacenó de forma segura a 2°C a 8°C y protegido de la luz. El placebo era solución salina al 0,9%.

Diseño del estudio

Los sujetos, de 18 a 65 años de edad con niveles de colesterol total entre 200 y 300 mg/dL después de un ayuno nocturno y un índice de masa corporal (IMC) inferior a 30 kg/m2, se dividieron al azar en cohortes para recibir

ISIS 301012 o placebo en una proporción de 3:1. Las cohortes de la dosificación fueron las siguientes: Cohorte A, 50 mg de ISIS 301012 o placebo; Cohorte B, 100 mg de ISIS 301012 o placebo; Cohorte C, 200 mg de ISIS 301012 o placebo; Cohorte D, 400 mg de ISIS 301012 o placebo.

El estudio consistió en un componente de dosis única (SD), seguido por un componente de dosis múltiple (MD). En el componente de dosis única, cada sujeto recibió una dosis subcutánea del fármaco del estudio, que estuvo seguida por un período de observación de 4 semanas. Los sujetos que completaron el componente de dosis única y el período de observación del estudio, continuaron con el componente de dosis múltiple del estudio. Sujetos adicionales fueron reclutados solamente para el componente de dosis múltiple del estudio. El período de dosis múltiple fue seguido por un periodo de evaluación post-tratamiento (PD).

Durante el componente de dosis múltiple, los sujetos del componente de dosis única del estudio continuaron recibiendo el fármaco del estudio (ISIS 301012 o placebo) para lo cual habían sido aleatorizados previamente. Durante la primera semana del período de tratamiento de dosis múltiple, los sujetos recibieron tres dosis intravenosas con sus respectivos niveles de dosis de las cohortes en días alternos, seguido de una sola dosis subcutánea semanal durante tres semanas. Este régimen de dosificación dio como resultado concentraciones tisulares estimadas que eran aproximadamente 70 a 80% de los niveles del estado estacionario.

El Día SD1 (día 1 del período de dosis única), se recogió sangre para un perfil de lípidos (colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, colesterol VLDL, apolipoproteína B, triglicérido, lipoproteína (a) y CRP de alta sensibilidad) después de ayunar durante una noche (al menos 12 horas). Estas mediciones representan las mediciones de referencia. El fármaco del estudio se administró a través de una inyección subcutánea (s.c.), designando tiempo 0 (t = cero) el final de la inyección. Las muestras de sangre para el análisis farmacocinético (PK) se recogieron en los momentos siguientes: 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8 y 12 horas después de la administración del fármaco del estudio. Las muestras de orina para el análisis PK fueron recogidas durante un período de 24 horas, comenzando en el tiempo 0 (t = cero) el Día SD1 y finalizando el día SD2. El día SD4, se recogieron las muestras sanguíneas para el análisis PK y el análisis del perfil de lípidos.

Los tratamientos individuales de las cohortes para el período de administración de una dosis única se resumen en la Tabla 4. Los sujetos en el grupo de placebo reciben el mismo volumen de inyección que en la cohorte a la que fueron asignados.

Tabla 4

Período de tratamiento de dosis única

Dosis Total: Nº de Sujetos Todas las inyecciones SQ a 250 mg/mL en SD1

Placebo: 7 De acuerdo con la cohorte

50 mg: 8 1 inyección, 0,2 mL

100 mg: 8 1 inyección, 0,4 mL

200 mg: 9 1 inyección, 0,8 mL

400 mg: 4 2 inyecciones, 0,8 mL

Durante el componente de dosis múltiple, el fármaco en estudio se administró por vía intravenosa como una infusión de 2 horas, los días MD1, MD3 y MD5 de la Semana 1 y como una inyección(es) subcutánea(s) de no más de 200 mg por inyección, los días MD8, MD15 y MD22. Todos los sujetos fueron obligados a ayunar durante al menos 12 horas antes de la toma de muestras de sangre para el perfil de lípidos en MD1, MD8, MD15, MD22, MD25, PD14, PD30, y, en su caso, los días PD44, PD58, PD72 y PD86.

El día MD1 (día 1 del período de dosis múltiple), el fármaco del estudio se administró mediante infusión intravenosa durante 2 horas (i.v.), designando el inicio de la infusión tiempo 0 (t = cero). Las muestras de sangre para el análisis farmacocinético (PK) se recogieron 0,5, 1, 2, 2,25, 2,5, 3, 4, 6 y 8 horas después de comenzar la infusión del fármaco del estudio. La toma de muestras PK durante 2 horas se realizó justo antes de finalizar la infusión del fármaco del estudio. Además, se realizó una recogida de muestras de orina durante 24 horas, empezando en el tiempo 0 (t = cero) para el análisis PK.

Los días MD3 y MD5, el fármaco del estudio se administró mediante infusión intravenosa y se recogieron muestras de sangre para el análisis PK, 5 minutos antes del comienzo de la infusión del fármaco del estudio y 2 horas después del comienzo de la infusión del fármaco del estudio.

Los días MD2, MD4, MD6, se recogieron muestras de sangre para PK, 24 horas después del inicio de la infusión del fármaco del estudio.

Los días MD8, MD15, el fármaco en estudio se administró por inyección subcutánea. Se recogieron muestras de sangre para el análisis PK y muestras de orina para el análisis de orina.

El día MD22, el fármaco del estudio se administró mediante inyección subcutánea. Las muestras de sangre para el análisis PK se recogieron antes y 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, y 12 horas después de la administración del fármaco del estudio. Una muestra de orina para análisis de orina se recogió durante un período de 24 horas, comenzando en el momento de la dosificación el día MD22 y terminando el día MD23.

El día MD23, se recogieron muestras de sangre para PK, 24 horas después de la dosificación del fármaco en estudio del día MD22.

El día MD25, 3 días después de la dosis final del día MD22, las muestras de sangre se recogieron para el análisis PK.

En la Tabla 5 se muestra un resumen del régimen de dosificación para el período de dosis múltiple. Los grupos de 50 mg y 200 mg tenía cada uno un sujeto menos que durante el período de dosis única. Los sujetos en el grupo de placebo reciben el mismo volumen de inyección que en la cohorte a la que fueron asignados.

Tabla 5

Periodo de tratamiento de dosis múltiple

Semana de carga - cada 2 horas infusiones I.V.: Dosificación una vez a la semana inyecciones SQ a 250 mg/mL

Dosis: Nº de Sujetos MD1 MD3 MD5 MD8 MD15 MD22

Placebo: 7 N/A N/A N/A De acuerdo con la cohorte

50 mg: 7 50 mg 50 mg 50 mg 1 iny., 0,2 mL 1 iny., 0,2 mL 1 iny., 0,2 mL

100 mg: 8 100 mg 100 mg 100 mg 1 iny., 0,4 mL 1 iny., 0,4 mL 1 iny., 0,4 mL

200 mg: 8 200 mg 200 mg 200 mg 1 iny., 0,8 mL 1 iny., 0,8 mL 1 iny., 0,8 mL

400 mg: 2 400 mg 400 mg 400 mg 2 iny., 0,8 mL 2 iny., 0,8 mL 2 iny., 0,8 mL

Durante el período de evaluación posterior al tratamiento, los días PD14 (o PD39, 39 días desde MD1), y PD30 (o PD55, 55 días desde MD1), se tomaron muestras de sangre para el perfil lipídico y el análisis PK. En todos los sujetos que habían ayunado, los niveles totales de colesterol en suero eran menores o iguales al 90% de sus valores de referencia en PD30, y continuaron en un período de seguimiento prolongado. Las mediciones en ayunas del perfil lipídico se realizaron cada 2 semanas hasta PD86 (o PD111, 111 días después de MD1) o hasta que los niveles totales de colesterol en suero volvieron a ser superiores al 90% del valor de referencia. Los días PD44 PD58, PD72 y PD86 (o PD69, PD83, PD97 y PD111, respectivamente), las muestras de sangre se recogieron para el perfil lipídico y el análisis PK.

Análisis farmacodinámico

Los efectos farmacodinámicos de ISIS 301012 se evaluaron comparando los niveles de lípidos de los parámetros lipídicos al inicio del tratamiento con los de después de la dosis múltiple de ISIS 301012; estos datos se muestran en las tablas siguientes. Los datos se presentan como cambio porcentual medio desde el valor de referencia, en donde el valor de referencia es la medición de los parámetros lipídicos respectivos realizada el primer día de la primera dosis administrada del fármaco en estudio, que era o bien el primer día del período de tratamiento de dosis única (SD1) o el primer día del período de tratamiento de dosis múltiple (MD1).

El colesterol total, el colesterol LDL, el colesterol HDL y los triglicéridos se midieron mediante procedimientos clínicos rutinarios de MDS Pharma Services (Belfast, Irlanda). Los niveles de apolipoproteína B y lipoproteína (a) se midieron mediante procedimientos rutinarios de laboratorio clínico de MDS Pharma Services (Belfast, Irlanda). Los datos se presentan en las tablas a continuación como el cambio porcentual medio en relación con los valores de referencia de SD1 (Tablas 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 y 19) o MD1 (Tablas 7, 9, 11, 13, 15, 17 y 21). La media representa el promedio de los datos de 5 sujetos en la cohorte de placebo, de 3 sujetos en la cohorte de 50 mg, de 3 sujetos en la cohorte de 100 mg, de 6 a 7 sujetos en la cohorte de 200 mg y de 2 sujetos en la cohorte de 400 mg.

El valor de referencia para el que los datos fueron normalizados está indicado para cada tabla. Los valores de referencia se fijaron en 100%, y los valores por encima o por debajo del 100% indican un aumento o una disminución, respectivamente, en el parámetro lipídico medido. Los datos se presentan para las mediciones de parámetros lipídicos realizadas durante los períodos de dosis múltiple, por ejemplo, MD8 indica una medición realizada 8 días después de la administración de la primera dosis durante los períodos de dosis múltiple. También se muestran los datos de las mediciones de parámetros lipídicos realizadas durante el período de evaluación posterior al tratamiento, por ejemplo, una medición del día PD39 se hizo el 14º día del periodo de evaluación posterior al tratamiento, que es equivalente a 39 días después de la primera administración de la primera dosis durante el período de dosis múltiple. Cuando está presente, "ND" indica que la medición particular es "no determinada"". Los análisis de otros biomarcadores séricos no mostraron ninguna tendencia de eventos clínicos adversos, incluida la ausencia de cambios en el recuento de glóbulos blancos, el recuento de plaquetas o la función renal. Además, no se observó ninguna toxicidad después de la administración de ISIS 301012.

5 Colesterol LDL. Las mediciones de colesterol LDL, mostradas en las Tablas 6 y 7, revelaron reducciones en esta lipoproteína en las cohortes de 100 mg, 200 mg y 400 mg, durante todo el período de dosis múltiple. Por ejemplo, en la Tabla 6, el día MD25, los niveles medios de colesterol LDL eran 73%, 66% y 60% de los valores de referencia en las cohortes de 100 mg, 200 mg y 400 mg, respectivamente. Se observaron efectos en la cohorte de 400 mg, en donde los niveles de colesterol LDL se redujeron hasta en un 39% (61% del valor de referencia

10 de MD1, el día MD22) o 45% (55% del valor de referencia de SD1, el día MD15). Además, una reducción en el colesterol LDL se observó el día PD83 en la cohorte de 100 mg, aproximadamente 2 meses después de la administración de la dosis final de ISIS 301012.

Tabla 6

Porcentaje medio de colesterol LDL del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 99 120 89 83 91

MD8: 99 99 75 83 79

MD15: 100 106 63 68 61

MD22: 94 109 69 65 55

MD25: 92 108 73 66 60

PD39: 87 ND 68 58 ND

PD55: 96 95 69 58 ND

PD83: ND ND 78 ND ND

15 Tabla 7

Porcentaje medio de colesterol LDL del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 100 83 84 92 87

MD15: 102 89 70 75 67

MD22: 96 92 78 72 61

MD25: 93 90 82 73 66

PD39: 88 ND 76 64 ND

PD55: 97 79 78 64 ND

PD83: ND ND 87 ND ND

Apolipoproteína B. En las mediciones de apolipoproteína B en suero, que se muestran en las Tablas 8 y 9, se

observó una reducción dependiente de la dosis de esta apolipoproteína, especialmente en las cohortes de 100

mg, 200 mg y 400 mg. Las reducciones de apolipoproteína B en suero se mantuvieron hasta el día PD111 en las 20 cohortes de 100 mg y 200 mg, aproximadamente 3 meses después de la administración de la dosis final de ISIS

301012. Las reducciones fueron tan elevadas como 56% o 52% (o 44% del valor de referencia de SD1 el día

MD22 o 48% del valor de referencia de MD1 el día MD22, respectivamente) en la cohorte de 400 mg; una re

ducción similar en el porcentaje medio en relación con el valor de referencia de SD1, se observó el día PD83.

Además, los efectos prolongados también se observaron en las cohortes de 100 mg y 200 mg, en donde los 25 niveles de apolipoproteína B sérica fueron de 90% y 79%, respectivamente, de los valores de referencia de SD1

el día PD111, aproximadamente 3 meses después de la administración de la dosis final de ISIS 301012.

Tabla 8

Porcentaje medio de apolipoproteína B del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 111 111 90 99 92

MD8: 113 86 80 94 76

MD15: 109 100 67 66 56

MD22: 102 89 80 63 44

MD25: 98 89 90 44 52

PD39: 115 89 80 58 48

PD55: 104 86 80 53 52

PD69: ND ND ND 61 52

PD83: ND ND 90 69 56

PD97: ND ND 90 72 ND

PD111: ND ND 90 79 ND

Tabla 9

Porcentaje medio de apolipoproteína B del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 102 77 89 96 83

MD15: 98 90 74 67 61

MD22: 92 81 89 64 48

MD25: 88 81 100 45 57

PD39: 104 81 89 58 52

PD55: 94 77 89 53 57

PD69: ND 62 ND 62 57

PD83: ND 70 100 70 61

PD97: ND 73 100 73 ND

PD111: ND 80 100 80 ND

5 Colesterol Total. El análisis del colesterol total mostró una reducción en el cambio porcentual medio desde el valor de referencia, si los datos se normalizaron frente a SD1 (Tabla 10) o MD1 (Tabla 11). Por ejemplo, en MD1, MD8, MD15, MD22 y MD25, el colesterol total medio en la cohorte de 200 mg se redujo en 97%, 89%, 74%, 71% y 76% de los valores de referencia de SD1. Además, estos efectos se mantuvieron después del cese de la dosificación, el día MD22. Por ejemplo, en la cohorte de 200 mg, el colesterol total medio era de 88% de

10 los valores de referencia de SD1, en PDL111, aproximadamente 3 meses después de la administración de la dosis final de ISIS 301012.

Tabla 10

Porcentaje medio de colesterol total del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 103 113 87 97 88

MD8: 103 93 88 89 79

MD15: 104 96 75 74 63

MD22: 99 103 76 71 60

MD25: 98 97 89 76 63

PD39: 109 100 85 70 61

PD55: 114 105 90 74 68

PD69: ND ND 84 69 62

PD83: ND ND 95 78 ND

PD97: ND ND 96 78 ND

PD111: ND ND 105 88 ND

Tabla 11

Porcentaje medio de colesterol total del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 101 83 101 91 90

MD15: 102 85 86 76 72

MD22: 97 91 88 73 68

MD25: 96 86 102 78 72

PD39: 106 89 98 72 69

PD55: 111 93 103 75 78

PD69: ND ND 97 71 70

PD83: ND ND 109 80 ND

PD97: ND ND 110 80 ND

PD111: ND ND 120 91 ND

Colesterol HDL. Tal y como se muestra en las Tablas 12 y 13, estos datos muestran algunos cambios en el colesterol HDL en la cohorte de 400 mg, sin embargo, en las cohortes de 50 mg, 100 y 200 mg, los cambios en el colesterol HDL no fueron de forma señalada. Los niveles de colesterol HDL se incrementaron en la cohorte de

10 100 mg, en relación con el valor de referencia del día MD1.

Tabla 12

Porcentaje medio de colesterol HDL del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 101 102 92 102 87

MD8: 94 78 102 91 71

MD15: 95 92 91 96 67

MD22: 103 99 102 104 87

MD25: 103 100 109 102 94

PD39: 103 ND 99 102 ND

PD55: 99 98 101 106 ND

Tabla 13

Porcentaje medio de colesterol HDL del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 93 76 110 89 82

MD15: 94 90 98 94 77

MD22: 102 96 110 102 100

MD25: 102 98 118 100 108

PD39: 114 ND 108 99 ND

PD55: 98 96 109 104 ND

Triglicérido. Los niveles de triglicéridos, que se muestran en las Tablas 14 y 15, se redujeron mediante la administración de ISIS 301012 en las cohortes de 100 mg, 200 mg y 400 mg. Tal y como se muestra en la Tabla 14, en las cohortes de 100 mg y 200 mg, la reducción de triglicéridos se logró en MD8 y MD15, respectivamente, y

10 se mantuvo hasta el día PD55, aproximadamente 1 mes después de la administración de la dosis final de ISIS 301012.

Tabla 14

Porcentaje medio de triglicérido del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 148 100 110 121 103

MD8: 153 180 81 107 105

MD15: 157 103 91 94 87

MD22: 122 89 87 90 91

MD25: 109 100 83 91 64

PD39: 129 ND 70 83 ND

PD55: 96 115 92 66 ND

Tabla 15

Porcentaje medio de triglicérido del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 103 180 73 89 102

MD15: 106 103 82 78 85

MD22: 82 89 79 75 89

MD25: 74 100 75 75 62

PD39: 87 ND 64 69 ND

PD55: 65 115 83 55 ND

Lipoproteína (a). Los niveles de lipoproteína (a) en suero, que se muestran en las Tablas 16 y 17, se redujeron

5 después del tratamiento con ISIS 301012. Por ejemplo, en la cohorte de 400 mg, la lipoproteína (a) se redujo durante el período de dosis múltiple, hasta 71%, 83%, 76% y 84% del valor de referencia de SD1, o 66%, 85%, 70% y 72% del valor de referencia de MD1, los días MD8, MD15, MD22 y MD25, respectivamente. Las reducciones de aproximadamente 12% a 15% (normalizadas frente al valor de referencia de SD1 o MD1) se mantuvieron hasta el día PD55 en las cohortes de 100 mg y 200 mg, aproximadamente un mes después de la administra

10 ción de la dosis final de ISIS 301012.

Tabla 16

Porcentaje medio de lipoproteína (a) del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 104 130 99 97 108

MD8: 93 99 107 109 71

MD15: 100 103 84 89 93

MD22: 104 95 75 82 76

MD25: 111 109 90 84 78

PD39: 140 ND 93 88 ND

PD55: 122 97 88 85 ND

Tabla 17

Porcentaje medio de lipoproteína (a) del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 89 76 108 112 66

MD15: 96 79 84 91 85

MD22: 100 74 75 84 70

MD25: 106 84 91 86 72

PD39: 134 ND 94 91 ND

PD55: 118 75 88 87 ND

Proporción de colesterol:HDL. Tal y como se muestra en la Tabla 18, se calcularon las proporciones de colesterol total a colesterol HDL, mostrando una mejora en estas proporciones, que es un efecto clínicamente deseable. Una disminución de las proporciones en relación con los valores de referencia se observó, por ejemplo, en

20 la cohorte de 200 mg, a partir del día MD8 que persistió hasta PD55. Las mejoras en la proporción de colesterol total frente a colesterol HDL también se observaron en las cohortes de 100 mg y 400 mg.

Tabla 18

Proporción de colesterol total:HDL, porcentaje medio del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 109 123 91 97 106

MD15: 112 101 86 80 91

MD22: 100 93 87 74 63

MD25: 95 91 85 75 64

PD39: 95 ND 91 69 ND

PD55: 108 97 90 68 ND

Colesterol LDL frente a colesterol HDL. Tal y como se muestra en la Tabla 19, la reducción clínicamente deseable en la proporción de LDL:HDL se observó en las cohortes de 100 mg, 200 mg y 400 mg durante el período de tratamiento de dosis múltiple. Estas reducciones persistieron hasta el día PD55 en las cohortes de 100 mg y 200 mg, día en que las proporciones eran de 68% y 55%, respectivamente, de los valores de referencia de SD1.

Tabla 19

Proporción de LDL:HDL, porcentaje medio del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 102 130 74 88 100

MD15: 109 116 68 68 82

MD22: 95 103 70 62 54

MD25: 88 101 67 63 55

PD39: 81 ND 69 55 ND

PD55: 93 97 68 55 ND

Colesterol VLDL. Tal y como se muestra en las tablas 20 y 21, se observó que los niveles de colesterol VLDL se reducían en todas las cohortes en relación con el valor de referencia, el día MD1 y en las cohortes de 100 mg, 200 mg y 400 mg en relación con el valor de referencia, el día SD1. Por ejemplo, el día MD25, el colesterol VLDL en la cohorte de 200 mg, se redujo a 63% del valor de referencia de MD1, y estos efectos persistieron

15 hasta el día del estudio PD55, momento en el cual los niveles de colesterol VLDL eran el 49% del valor de referencia del día MD1. Se observaron reducciones sostenidas del colesterol VLDL hasta el día PD55 en las cohortes de 100 y 200 mg, normalizadas frente a los valores de referencia de los días SD1 o MD1.

Tabla 20

Porcentaje medio de colesterol VLDL del valor de referencia (SD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD1: 144 125 106 122 84

MD8: 149 222 79 101 88

MD15: 153 118 90 87 62

MD22: 122 103 91 83 70

MD25: 106 121 87 77 44

PD39: 126 ND 83 77 ND

PD55: 87 127 86 60 ND

Tabla 21

Porcentaje medio de colesterol VLDL del valor de referencia (MD1)

: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: 104 178 74 83 106

MD15: 107 95 85 71 74

MD22: 85 82 86 68 83

MD25: 74 97 82 63 52

PD39: 88 ND 78 63 ND

PD55: 60 102 81 49 ND

Efectos farmacodinámicos con análisis estadístico

5 En las Tablas 22 a 43 se resumen los parámetros lipídicos evaluados en 7 sujetos que recibieron placebo, y 8, 8, 9 y 4 sujetos que recibieron 50 mg, 100 mg, 200 mg y 400 mg de ISIS 301012, respectivamente. En las tablas del resumen se presentan los niveles medios de cada parámetro lipídico, por ejemplo, mg/dL de colesterol LDL, por cohorte de dosis. La segunda tabla mostrada para cada parámetro lipídico es la tabla de Cambio Porcentual, y representa el cambio porcentual medio desde el valor de referencia para cada cohorte, por ejemplo, significa el

10 cambio porcentual el día MD25 en relación con el valor de referencia. "El "día del estudio" indica el día del estudio en el que se midió el parámetro lipídico, por ejemplo, colesterol LDL. La medición del "valor de referencia” es el nivel del parámetro lipídico, por ejemplo, colesterol LDL, antes de la dosis inicial de ISIS 301012, el día del estudio SD1. Si una medición de SD1 no estaba disponible, se utilizó en su lugar una medición de MD1. "MD" "indica una medición tomada durante el período de dosis múltiple, por ejemplo, MD15 es el 15º día del período

15 de dosis múltiple. El período de dosis múltiple tuvo una duración de 25 días, con lo que la medición del MD25 es de una muestra tomada el día de la última dosis del fármaco en estudio. "PD" es una medición tomada durante el periodo de evaluación posterior al tratamiento. Por ejemplo, PD39 es una medición tomada 14 días después de la dosis final, que es equivalente a 39 días después de la primera dosis del período de dosis múltiple. "N" indica el número de muestras usadas en el cálculo de los niveles medios y la mediana; N para las mediciones

20 realizadas durante los periodos de MD o PD puede ser menor que N en el valor de referencia. "Std" es la desviación estándar. Los valores de P se aplican a la diferencia entre las medias en los grupos de dosificación y las medias en el grupo placebo, y se determinaron usando la prueba de Wilcoxon de suma de rangos de prueba. "NC" indica un nivel de parámetro lipídico o un valor de P que no se calculó.

Colesterol LDL. La Tabla 22 contiene el resumen de los niveles de colesterol LDL, en donde los niveles se

25 muestran en mg/dL. Los cambios porcentuales medios y las medianas de colesterol LDL, con respecto a los valores de referencia, se presentan en la Tabla 23. Se observaron reducciones prolongadas y dependientes de la dosis en los niveles séricos de colesterol LDL. El porcentaje de reducción máximo del colesterol LDL fue de aproximadamente 35% para el grupo de 200 mg y de aproximadamente 48% para el grupo de 400 mg (Tabla 23). La reducción del colesterol LDL persistió, permaneciendo por debajo del valor de referencia durante 90 días

30 en 50% de los sujetos en el grupo de 200 mg.

Tabla 22

Resumen del nivel de colesterol LDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

Media: 131 126 131 123 133

Mediana: 123 118 136 121 130

Std: 27 24 24 16 23

Mín -Máx: 95 -171 100 -173 91 -160 103 -153 109 -164

Valor de P: 0,7789 1 0,6597 0,7879

MD8: N 7 7 8 8 2

Media: 126 118 119 105 105

Mediana: 121 116 111 102 105

Resumen del nivel de colesterol LDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Std: 19 17 25 14 14

Mín -Máx: 107 -160 104 -155 94 -164 88 -126 95-115

Valor de P: 0,197 0,414 0,0401 0,2222

MD15: N 7 8 8 8 2

Media: 132 124 101 85 82

Mediana: 116 121 99 86 82

Std: 29 20 29 14 21

Mín -Máx: 109 -175 99 -166 59 -151 67 -107 67 -96

Valor de P: 0,9302 0,0774 0,0003 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

Media: 124 125 102 82 74

Mediana: 112 125 98 85 74

Std: 29 15 20 11 5

Mín -Máx: 93 -167 96 -149 79 -144 58 -92 70 -77

Valor de P: 0,4443 0,0881 0,0003 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

Media: 122 128 105 83 80

Mediana: 115 121 102 86 80

Std: 32 16 16 13 6

Mín -Máx: 76 -170 117 -163 84 -139 54 -95 76 -84

Valor de P: 0,143 0,128 0,0126 0,1389

PD39: N 7 8 8 8 2

Media: 128 119 106 77 79

Mediana: 118 115 98 81 79

Std: 22 17 24 18 1

Mín -Máx: 107 -160 103 -155 90 -158 51 -107 78 -80

Valor de P: 0,4797 0,0362 0,0005 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

Media: 127 117 103 79 85

Mediana: 120 114 96 82 85

Std: 25 16 25 17 13

Mín -Máx: 103 -179 100 -151 72 -154 59 -114 76 -94

Valor de P: 0,3357 0,0376 0,0009 0,0556

PD69: N 2 2 5 7 2

Media: 127 111 106 85 84

Mediana: 127 111 105 87 84

Std: 24 25 23 7 7

Mín -Máx: 110 -144 93 -128 81 -141 73 -93 79 -89

Valor de P: 0,6667 0,381 0,0278 0,3333

PD83: N 2 3 7 8 2

Resumen del nivel de colesterol LDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Media: 144 115 108 92 99

Mediana: 144 111 106 92 99

Std: 40 25 23 12 2

Mín -Máx: 116 -172 92 -141 73 -150 72 -115 97 -100

Valor de P: 0,4 0,2222 0,0444 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 0

Media: NC 114 111 95 NC

Mediana: NC 114 116 95 NC

Std: NC 21 36 10 NC

Mín -Máx: NC 99 -128 65 -160 75 -109 NC

PD111: N 0 1 2 6 0

Media: NC 90 121 101 NC

Mediana: NC 90 121 100 NC

Std: NC NC 13 11 NC

Mín -Máx: NC 90 -90 112 -130 85 -119 NC

Tabla 23

Resumen del nivel de colesterol LDL, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

Media: -2 -8 -8 -14 -27

Mediana: 1 -8 -14 -14 -27

Std: 16 7 15 10 5

Mín -Máx: -20 -27 -19 - 2 -23 -20 -27 - 3 -30 --23

Valor de P: 0,6200 0,3357 0,1893 0,0556

MD15: N 7 8 8 8 2

Media: 1 -0,2 -23 -29 -44

Mediana: 4 -3 -24 -26 -44

Std: 11 13 19 17 3

Mín -Máx: -19 -16 -14 -29 -46 - 9 -50 --7 -46 --43

Valor de P: 0,5358 0,0205 0,0022 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

Media: -5 1 -21 -32 -48

Mediana: -2 -2 -23 -28 -48

Std: 12 15 12 15 7

Mín -Máx: -31 - 7 -14 -25 -33 -0,0 -52 --11 -53 --44

Valor de P: 0,8665 0,0289 0,0037 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

Media: -6 3 -19 -31 -44

Mediana: -4 1 -20 -26 -44

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Std: 19 16 11 16 7

Mín -Máx: -43 -21 -15 -37 -32 - 2 -55 --12 -49 --39

Valor de P: 0,6126 0,0939 0,0093 0,1111

PD39: N 7 8 8 8 2

Media: -1 -4 -19 -35 -44

Mediana: -3 -8 -18 -35 -44

Std: 13 16 14 19 10

Mín -Máx: -19 -20 -21 -30 -36 --1 -67 --7 -51 --37

Valor de P: 0,6126 0,0721 0,0022 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

Media: -1 -6 -20 -34 -41

Mediana: 5 -7 -23 -37 -41

Std: 15 8 17 19 3

Mín -Máx: -18 -21 -15 - 9 -40 -10 -58 --1 -43 --39

Valor de P: 0,8665 0,0939 0,0022 0,0556

PD69: N 2 2 5 7 2

Media: 4 -13 -18 -29 -41

Mediana: 4 -13 -17 -24 -41

Std: 18 14 9 12 7

Mín -Máx: -8 -17 -23 --3 -33 --11 -48 --16 -46 --36

Valor de P: 0,6667 0,0952 0,0556 0,3333

PD83: N 2 3 7 8 2

Media: -1 -1 -19 -24 -30

Mediana: -1 -4 -20 -18 -30

Std: 3 16 8 15 12

Mín -Máx: -3 -0,6 -15 -17 -26 --6 -45 --6 -39 --22

Valor de P: 0,8000 0,0556 0,0444 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 0

Media: NC 2 -15 -21 NC

Mediana: NC 2 -18 -16 NC

Std: NC 14 11 13 NC

Mín -Máx: NC -8 -11 -29 - 0 -46 --11 NC

Valor de P: 0 1 2 6 0

PD111: N NC -17 7 -19 NC

Media: NC -17 7 -19 NC

Mediana: NC 0 23 8 NC

Std: NC -17 --17 -9 -23 -30 --6 NC

Mín -Máx: 7 7 8 8 2

Valor de P: -2 -8 -8 -14 -27

Apolipoproteína B. En las Tablas 24 y 25 se muestran los niveles séricos medios de apolipoproteína B por

cohorte y el porcentaje medio del valor de referencia por cohorte, respectivamente. La administración de ISIS

301012 dio como resultado una reducción prolongada, dependiente de la dosis, de los niveles en suero de apo

lipoproteína B. El grupo de dosis de 200 mg mostró una reducción máxima del 50%, respecto al valor de refe

5 rencia (Tabla 25), el MD25, 72 horas después de la dosis final. Los niveles reducidos de apolipoproteína B per

manecieron por debajo del valor de referencia durante 90 días después del tratamiento, en el 75% de los sujetos

con 200 mg. Debido al efecto prolongado de ISIS 301012, los niveles séricos de apolipoproteína B se midieron el

día PD125 y PD139 en 2 sujetos y 1 sujeto, respectivamente. El día PD125, la media y la mediana de los niveles

séricos de apolipoproteínas B para 2 sujetos de la cohorte de 200 mg, eran de 90 mg/dL (Std = 28), lo que re10 presenta un cambio de -17% respecto al valor de referencia (Std = 12). El día PD139, la apolipoproteína B total

en suero de 1 sujeto era de 86 mg/dL, lo que representa un cambio de -28% respecto al valor de referencia.

Tabla 24

Resumen de los niveles de apolipoproteína B, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 102 101 105 101 113

: Mediana 93 101 99 98 110

: Std 22 20 22 17 27

: Mín - Máx 84 - 147 77 - 142 68 - 141 76 - 133 86 - 145

: Valor de P 0,9312 0,2671 0,4684 0,4939

MD8: N 7 8 8 8 2

: Media 107 86 95 93 90

: Mediana 105 83 83 89 90

: Std 18 24 24 15 21

: Mín - Máx 86 - 132 56 - 136 75 - 142 76 - 117 75 - 105

: Valor de P 0,058 0,1807 0,152 0,3889

MD15: N 7 8 8 8 3

: Media 103 94 78 67 70

: Mediana 94 89 71 69 70

: Std 28 20 21 13 16

: Mín -Máx 68 -143 72 -138 57 -122 47 -84 54 -86

: Valor de P 0,2939 0,0323 0,0034 0,0583

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 99 91 82 66 56

: Mediana 93 89 77 70 56

: Std 23 16 20 11 6

: Mín -Máx 76 -143 65 -118 63 -124 41 -76 52 -60

: Valor de P 0,6943 0,113 0,0005 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 94 87 87 50 66

: Mediana 95 84 87 51 66

: Std 22 10 18 16 6

: Mín -Máx 67 -123 74 -106 61 -122 21 -73 61 -70

: Valor de P 0,4634 0,5358 0,0012 0,1111

PD39: N 7 8 8 8 2

Resumen de los niveles de apolipoproteína B, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Media 102 86 81 61 59

: Mediana 101 82 79 62 59

: Std 19 12 23 13 4

: Mín -Máx 66 -120 78 -113 51 -126 43 -81 56 -61

: Valor de P 0,0503 0,0774 0,002 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 86 86 76 57 62

: Mediana 95 81 72 58 62

: Std 21 19 25 9 8

: Mín -Máx 44 -100 59 -113 53 -131 41 -72 56 -67

: Valor de P 0,7573 0,2319 0,0166 0,2222

PD69: N 3 5 5 7 2

: Media 109 90 74 62 64

: Mediana 112 86 75 61 64

: Std 20 26 24 7 10

: Mín -Máx 88 -127 70 -133 39 -106 50 -70 57 -71

: Valor de P 0,2857 0,0714 0,0083 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 120 96 72 67 70

: Mediana 120 88 76 68 70

: Std 28 25 28 11 10

: Mín -Máx 100 -139 76 -131 30 -104 47 -85 63 -77

: Valor de P 0,2667 0,1111 0,0444 0,3333

PD97: N 0 2 4 8 1

: Media NC 96 90 72 81

: Mediana NC 96 88 74 81

: Std NC 8 42 12 NC

: Mín -Máx NC 90 -101 45 -139 56 -85 81 -81

PD111: N 0 1 3 6 2

: Media NC 76 81 77 95

: Mediana NC 76 87 74 95

: Std NC NC 14 14 21

: Mín -Máx NC 76 -76 65 -90 66 -105 80-110

Tabla 25

Apolipoproteína B, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 8 8 2

: Media 7 -14 -9 -8 -24

: Mediana 11 -13 -11 -7 -24

: Std 12 22 14 12 5

: Mín -Máx -10 -24 -46 -17 -24 -19 -27 -10 -28 --21

: Valor de P 0,0721 0,0401 0,0401 0,0556

MD15: N 7 8 8 8 3

: Media 1 -6 -25 -32 -43

: Mediana 1 -4 -28 -32 -43

: Std 14 14 13 18 2

: Mín -Máx -24 -21 -27 -14 -41 --2 -61 --14 -44 --41

: Valor de P 0,3969 0,0059 0,0022 0,0167

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media -3 -9 -22 -34 -52

: Mediana 0 10 -20 -33 -52

: Std 10 11 11 16 9

: Mín -Máx -16 -10 -23 - 7 -43 --7 -56 --11 -59 --45

: Valor de P 0,1893 0,0037 0,0012 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media -7 -13 -16 -50 -44

: Mediana -3 -11 -12 -50 -44

: Std 16 12 13 17 11

: Mín -Máx -28 -14 -32 - 8 -37 - 3 -78 --26 -52 --36

: Valor de P 0,4634 0,281 0,0006 0,0556

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 2 -14 -22 -39 -50

: Mediana 4 -16 -19 -37 -50

: Std 21 9 15 18 12

: Mín -Máx -26 -37 -26 - 3 -57 --10 -61 --17 -58 --41

: Valor de P 0,0939 0,0541 0,0059 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media -11 -14 -28 -42 -47

: Mediana 4 -16 -22 -45 -47

: Std 29 13 15 14 9

: Mín -Máx -70 -12 -33 - 4 -49 --7 -59 --21 -54 --41

: Valor de P 0,1893 0,0541 0,0205 0,2222

PD69: N 3 5 5 7 2

: Media 6 -16 -34 -38 -46

: Mediana -1 -11 -34 -40 -46

Apolipoproteína B, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 24 16 7 12 8

: Mín -Máx -14 -33 -33 - 4 -43 --25 -55 --20 -51 --40

: Valor de P 0,3929 0,0357 0,0167 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 4 -12 -31 -33 -40

: Mediana 4 -9 -21 -34 -40

: Std 13 13 26 16 9

: Mín -Máx -5 -12 -30 - 0 -67 --5 -52 --8 -47 --34

: Valor de P 0,2667 0,1111 0,0444 0,3333

PD97: N 0 2 4 8 1

: Media NC 3 -19 -28 -15

: Mediana NC 3 -20 -25 -15

: Std NC 27 15 14

: Mín -Máx NC -17 -22 -34 --1 -58 --13 -15 --15

PD111: N 0 1 3 6 2

: Media NC -30 -3 -23 -20

: Mediana NC -30 -8 -25 -20

: Std NC 33 16 6

: Mín -Máx NC -30 --30 -32 -32 -48 --3 -24 --16

Colesterol Total. Los niveles medios del colesterol total y el porcentaje medio del valor de referencia se muestran en las Tablas 26 y 27, respectivamente. Las reducciones medias máximas observadas fueron de 27% en el grupo de 200 mg y de 40% en el grupo de 400 mg (Tabla 27). Debido a los efectos prolongados de ISIS 301012, 5 los niveles de colesterol total en suero se midieron el día PD125 en 2 sujetos y el día PD139 en 1 sujeto. El día PD125, la media y la mediana de los niveles séricos de colesterol total para 2 sujetos de la cohorte de 200 mg eran de 170 mg/dL (Std = 16), lo que representa un cambio de -17% respecto al valor de referencia (Std = 6). El día PD139, el colesterol total en suero de 1 sujeto era de 193 mg/dL, lo que representa un cambio de -7% respecto al valor de referencia.

10 Tabla 26

Resumen del nivel de colesterol total, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 216 221 218 211 239

: Mediana 213 217 220 201 240

: Std 33 33 24 18 30

: Mín -Máx 174 -271 186 -290 182 -251 193 -244 201 -275

: Valor de P 0,9324 0,8056 0,7378 0,2182

MD8: N 7 8 8 8 2

: Media 214 205 201 187 203

: Mediana 209 195 199 182 203

: Std 18 29 29 22 14

: Mín -Máx 190 -240 166 -255 155 -251 166 -232 193-213

Resumen del nivel de colesterol total, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Valor de P 0,285 0,1961 0,0126 0,6389

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 220 212 177 160 174

: Mediana 217 211 182 159 174

: Std 24 35 33 27 16

: Mín -Máx 193 -259 170 -282 135 -240 120 -197 162 -186

: Valor de P 0,4848 0,0071 0,0006 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 211 214 173 151 155

: Mediana 201 219 172 153 155

: Std 37 23 25 20 6

: Mín -Máx 159 -263 166 -240 139 -220 124 -178 151 -159

: Valor de P 0,8005 0,0266 0,0022 0,0833

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 211 217 188 160 162

: Mediana 209 209 191 157 162

: Std 39 26 24 22 6

: Mín -Máx 143 -271 186 -267 143 -224 120 -190 159 -166

: Valor de P 0,8838 0,1125 0,0099 0,2222

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 230 218 190 153 157

: Mediana 224 213 190 164 157

: Std 27 28 25 27 14

: Mín -Máx 197 -263 186 -275 162 -244 104 -178 147 -166

: Valor de P 0,4127 0,0047 0,0002 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 235 224 185 161 176

: Mediana 228 220 186 168 176

: Std 31 26 28 26 3

: Mín - Máx 201 - 298 193 - 275 132 - 232 128 - 190 174 - 178

: Valor de P 0,3804 0,0044 0,0003 0,0556

PD69: N 3 5 7 7 2

: Media 241 222 193 154 159

: Mediana 248 209 186 155 159

: Std 26 58 24 21 11

: Mín -Máx 213 -263 166 -313 162 -240 128 -178 151 -166

: Valor de P 0,3929 0,025 0,0167 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 259 226 201 168 182

: Mediana 259 219 201 172 182

Resumen del nivel de colesterol total, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 33 50 27 25 16

: Mín -Máx 236 -282 174 -294 170 -251 132 -209 170 -193

: Valor de P 0,5333 0,1111 0,0444 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 205 201 166 190

: Mediana NC 205 209 166 190

: Std NC 27 49 20 NC

: Mín -Máx NC 186 -224 155 -271 143 -201 190 -190

PD111: N 0 1 3 6 2

: Media NC 162 209 186 203

: Mediana NC 162 228 188 203

: Std NC NC 34 10 14

: Mín -Máx NC 162 -162 170 -228 170 -197 193 -213

Tabla 27

Colesterol total, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 8 8 8 2

: Media 1 -7 -8 -11 -21

: Mediana -6 10 -11 -12 -21

: Std 13 7 8 6 2

: Mín -Máx -13 -20 -16 - 5 -16 - 4 -21 --2 -23 --19

: Valor de P 0,281 0,127 0,0721 0,0556

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 3 -4 -19 -23 -32

: Mediana 0 -2 -21 -22 -32

: Std 11 7 12 15 0

: Mín -Máx -9 -19 -14 - 4 -35 - 0 -51 --8 -32 --32

: Valor de P 0,281 0,0061 0,0012 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media -2 -2 -21 -27 -40

: Mediana 2 -2 -21 -26 -40

: Std 12 11 9 12 8

: Mín -Máx -26 -11 -17 -19 -34 --6 -46 --12 -45 --34

: Valor de P 0,6943 0,014 0,0037 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media -2 -2 -14 -24 -37

: Mediana 0 -1 -13 -23 -37

: Std 17 7 8 12 8

: Mín -Máx -33 -18 -14 - 8 -29 --2 -40 --6 -42 --31

Colesterol total, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Valor de P 0,9554 0,0502 0,0132 0,0833

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 7 -1 -12 -27 -39

: Mediana 9 0 -13 -28 -39

: Std 10 9 8 14 11

: Mín -Máx -7 -20 -11 - 8 -24 --2 -50 --12 -47 --31

: Valor de P 0,0721 0,0025 0,0003 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 10 2 -15 -23 -31

: Mediana 5 4 -13 -27 -31

: Std 14 7 8 14 6

: Mín -Máx -6 -31 -11 - 9 -28 --7 -39 --4 -35 --27

: Valor de P 0,4634 0,0003 0,0006 0,0556

PD69: N 3 5 7 7 2

: Media 1 -3 -12 -27 -38

: Mediana 0 0 -12 -25 -38

: Std 5 11 6 11 10

: Mín -Máx -3 -7 -20 - 8 -20 --4 -39 --10 -45 --31

: Valor de P 0,8571 0,0167 0,0167 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 8 1 -8 -20 -29

: Mediana 8 3 -7 -15 -29

: Std 5 8 6 12 13

: Mín -Máx 4 -11 -10 - 7 -17 - 0 -35 --6 -38 --19

: Valor de P 0,2667 0,0556 0,0444 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 3 -8 -20 -21

: Mediana NC 3 -9 -17 -21

: Std NC 10 10 11

: Mín -Máx NC -4 -9 -18 - 8 -41--4 -21 --21

PD111: N 0 1 3 6 2

: Media NC -16 5 -13 -21

: Mediana NC -16 0 -12 -21

: Std NC 14 8 2

: Mín -Máx NC -16 --16 -6 -20 -25 --4 -23 --19

Colesterol HDL. En las Tablas 28 y 29 se presentan los niveles medios de colesterol HDL y el cambio de porcentaje medio respecto al valor de referencia del colesterol HDL, respectivamente. No se observaron cambios significativos en los niveles de colesterol HDL, como era de esperar ya que HDL no incluye un componente de apolipoproteína B. Al igual que niveles elevados de colesterol LDL son un factor de riesgo para la enfermedad cardiovascular, un colesterol HDL reducido también es un factor de riesgo que se considera a la hora de determinar si una persona tiene necesidad de un tratamiento hipolipemiante. Por tanto, el que ISIS 301012 no afecte negativamente a los niveles de colesterol HDL, es un resultado terapéutico positivo.

Tabla 28

Resumen del nivel de colesterol HDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 51 59 49 53 59

: Mediana 44 52 45 48 57

: Std 19 18 11 13 17

: Mín -Máx 29 - 83 44 - 98 39 - 72 33 - 70 41 - 81

: Valor de P 0,1893 0,7789 0,4869 0,6485

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 48 49 47 47 44

: Mediana 53 52 44 45 44

: Std 13 13 10 10 21

: Mín -Máx 29 - 68 28 - 68 36 - 64 35 - 62 29 - 59

: Valor de P 0,9015 0,7789 0,8665 1

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 48 56 45 48 42

: Mediana 53 53 43 43 42

: Std 15 18 8 13 18

: Mín -Máx 29 - 67 36 - 94 36 - 64 35 - 68 29 - 54

: Valor de P 0,5358 0,8429 0,7789 0,5

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 51 57 46 52 54

: Mediana 52 52 42 48 54

: Std 18 14 11 15 21

: Mín -Máx 28 - 78 45 - 87 37 - 65 34 - 74 39 - 69

: Valor de P 0,7789 0,7542 1 0,8889

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 52 60 49 52 58

: Mediana 55 55 46 46 58

: Std 17 15 11 14 23

: Mín -Máx 28 - 75 48 - 94 37 - 69 34 - 73 42 - 74

: Valor de P 0,6126 0,8665 0,9551 0,8889

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 55 62 50 53 63

: Mediana 56 58 49 52 63

: Std 19 17 11 14 25

: Mín -Máx 27 -82 43 -99 38 -73 29 -71 45 -80

: Valor de P 0,5358 0,5358 1 0,6667

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 55 65 50 56 72

: Mediana 56 63 49 54 72

Resumen del nivel de colesterol HDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 18 19 11 16 17

: Mín -Máx 33 -86 41 -100 38 -74 33 -80 60 -84

: Valor de P 0,3357 0,4634 0,9551 0,5

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 61 67 49 52 66

: Mediana 73 65 46 54 66

: Std 26 12 13 15 27

: Mín -Máx 32 - 79 57 - 83 35 - 68 30 - 73 47 - 85

: Valor de P 1 0,5714 0,3833 0,8

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 56 65 49 53 66

: Mediana 56 63 44 54 66

: Std 33 6 13 15 31

: Mín -Máx 32 - 79 62 - 75 38 - 75 31 - 77 45 - 88

: Valor de P 1 1 0,8889 0,6667

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 62 52 52 87

: Mediana NC 62 53 54 87

: Std NC 3 16 13

: Mín -Máx NC 59 - 64 37 - 77 32 - 71 87 - 87

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 55 63 56 65

: Mediana NC 55 63 61 65

: Std NC 11 13 27

: Mín -Máx NC 55 - 55 56 - 71 31 - 68 46 - 84

Tabla 29

Colesterol HDL, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media -2 -9 -5 -7 -28

: Mediana -5 -5 -5 -8 -28

: Std 19 16 10 11 2

: Mín -Máx -31 -22 -35 - 9 -19 -11 -27 - 8 -29 --27

: Valor de P 0,7104 0,7789 0,7789 0,2222

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media -3 -6 -8 -6 -31

: Mediana 10 -7 -9 -6 -31

: Std 20 8 10 8 3

: Mín -Máx -22 -24 -17 - 5 -22 - 3 -23 - 6 -33 --29

Colesterol HDL, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Valor de P 0,6943 0,9551 0,9551 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 1 -2 -6 -1 10

: Mediana -7 -5 -6 3 10

: Std 19 10 12 10 7

: Mín -Máx -21 -37 -11 -16 -27 - 9 -21 -10 -15 --5

: Valor de P 0,8665 0,6126 0,7789 0,6667

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 2 3 0 0 -3

: Mediana -5 2 -2 2 -3

: Std 19 6 13 5 7

: Mín -Máx -17 -30 -4 -11 -22 -15 -10 - 5 -8 -2

: Valor de P 0,1893 0,8665 0,3969 1,0000

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 7 6 1 1 5

: Mediana -2 6 -1 1 5

: Std 20 10 13 10 8

: Mín -Máx -9 -42 -12 -19 -17 -21 -12 -20 0 -11

: Valor de P 0,4634 0,7789 0,9551 0,5000

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 10 11 1 7 25

: Mediana 3 7 3 11 25

: Std 18 17 9 9 30

: Mín -Máx -11 -40 -7 -45 -13 -15 -12 -15 4 -46

: Valor de P 0,8421 0,4448 0,9294 0,3056

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 2 19 -2 -1 10

: Mediana 2 19 -5 2 10

: Std 7 7 19 9 6

: Mín -Máx -5 -9 12 -28 -20 -29 -15 -13 5 -14

: Valor de P 0,0571 0,3929 0,5167 0,4000

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 10 26 0 2 9

: Mediana 10 26 2 2 9

: Std 0 11 15 13 0

: Mín -Máx 10 -10 12 -38 -22 -28 -15 -27 9 - 9

PD97: Valor de P 0,1333 0,2222 0,1778 0,3333

: N 0 2 5 8 1

: Media NC 18 5 1 8

: Mediana NC 18 -2 0 8

Colesterol HDL, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std NC 0 14 10 NC

PD111: Mín -Máx NC 18 -18 -5 -29 -9 -17 8 - 8

: N 0 1 2 6 2

: Media NC 9 -1 3 8

: Mediana NC 9 -1 -1 8

: Std NC NC 1 15 5

: Mín -Máx NC 9 - 9 -2 - 0 -10 -31 5 -12

Triglicérido. Resúmenes de los niveles de triglicéridos y los cambios porcentuales se presentan en las Tablas 30 y 31, respectivamente. Se observaron reducciones dependientes de la dosis en los niveles de triglicéridos, con reducciones máximas del 27% en el grupo de 200 mg y del 43% en el grupo de 400 mg (Tabla 31). Los niveles elevados de triglicéridos en suero pueden ser considerados un factor de riesgo independiente para la cardiopatía coronaria, por lo tanto, una reducción en los niveles de triglicéridos es un resultado terapéuticamente deseable.

Tabla 30

Resumen del nivel de triglicéridos, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 104 95 105 103 127

: Mediana 76 94 88 88 108

: Std 90 29 47 44 57

: Mín - Máx 56 - 307 55 - 139 65 - 212 51 - 179 82 - 209

: Valor de P 0,3512 0,0875 0,3652 0,0727

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 127 114 116 112 149

: Mediana 99 69 112 88 149

: Std 82 71 48 63 86

: Mín - Máx 41 - 286 51 - 239 37 - 209 57 - 232 88 - 209

: Valor de P 0,6200 0,8906 0,9551 0,6667

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 146 109 126 100 123

: Mediana 108 98 117 84 123

: Std 113 46 61 39 4

: Mín -Máx 50 -371 46 -178 34 -231 72 -172 120 -126

: Valor de P 0,6943 1,0000 0,6733 0,8889

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 118 104 122 99 129

: Mediana 78 101 137 77 129

: Std 84 20 48 51 28

: Mín -Máx 56 -291 80 -133 56 -204 50 -199 109 -149

: Valor de P 0,5142 0,6319 1,0000 0,6111

Resumen del nivel de triglicéridos, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 110 95 114 101 91

: Mediana 90 86 108 97 91

: Std 83 24 47 47 32

: Mín - Máx 45 - 288 72 - 136 69 - 218 48 - 196 68 - 113

: Valor de P 1,0000 0,4634 0,7167 0,9444

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 113 116 114 91 83

: Mediana 63 99 98 84 83

: Std 89 46 61 36 26

: Mín - Máx 56 - 297 75 - 207 45 - 240 49 - 138 64 - 101

: Valor de P 0,3201 0,5894 0,9336 0,8333

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 97 93 146 77 103

: Mediana 59 81 115 77 103

: Std 65 41 103 23 51

: Mín - Máx 52 - 226 49 - 168 56 - 389 41 - 109 67 - 139

: Valor de P 0,8026 0,1520 0,8665 0,5000

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 219 110 197 103 106

: Mediana 92 110 135 90 106

: Std 248 36 146 57 6

: Mín -Máx 61 -505 67 -152 98 -451 41 -222 101 -110

: Valor de P 0,8571 0,5714 0,8333 0,8000

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 237 94 131 134 148

: Mediana 237 96 108 107 148

: Std 199 36 72 74 59

: Mín -Máx 96 -378 47 -135 38 -243 55 -262 106 -190

: Valor de P 0,4667 0,6667 0,5333 1,0000

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 147 149 99 83

: Mediana NC 147 128 85 83

: Std NC 50 112 56 NC

: Mín -Máx NC 111 -182 59 -337 60 -232 83 -83

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 151 96 118 109

: Mediana NC 151 96 80 109

: Std NC NC 68 106 34

: Mín - Máx NC 151 -151 48 -144 46 -326 85 -133

Tabla 31

Media de triglicéridos, % del valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 32 8 17 -1 -5

: Mediana 17 0 11 -4 -5

: Std 53 44 49 27 7

: Mín -Máx -27 -108 -41 -72 -54 -117 -34 -52 -9 -0

: Valor de P 0,3829 0,9551 0,3357 0,5

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 45 17 34 -6 -6

: Mediana 21 25 8 0 -6

: Std 64 37 97 20 51

: Mín -Máx -24 -166 -47 -50 -58 -255 -42 -22 -43 -30

: Valor de P 0,9551 0,6126 0,0289 0,5

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 21 18 21 -8 -8

: Mediana 0 13 8 -6 -8

: Std 41 38 47 28 29

: Mín -Máx -13 -101 -35 -91 -30 -117 -64 -30 -29 -12

: Valor de P 1 0,9551 0,1206 0,5

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 10 4 12 -7 -38

: Mediana 17 4 1 -7 -38

: Std 32 26 29 26 11

: Mín -Máx -38 -47 -34 -35 -14 -69 -46 -28 -46 --30

: Valor de P 0,6943 1 0,281 0,1111

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 12 23 10 -15 -43

: Mediana -3 16 4 -20 -43

: Std 43 35 44 23 13

: Mín -Máx -18 -99 -13 -92 -44 -106 -44 -30 -52 --34

: Valor de P 0,281 0,7789 0,152 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 1 -1 37 -27 -32

: Mediana -11 -6 20 -34 -32

: Std 38 30 60 20 2

: Mín -Máx -30 -70 -52 -56 -30 -160 -43 -18 -34 --31

: Valor de P 0,7789 0,2319 0,0541 0,0556

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 30 12 99 -9 -19

Media de triglicéridos, % del valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Mediana 17 17 14 -11 -19

: Std 30 21 176 34 46

: Mín -Máx 9 -65 -16 -29 -14 -407 -54 -45 -52 -13

: Valor de P 0,6286 1 0,1833 0,4

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 22 -2 31 17 23

: Mediana 22 -1 21 22 23

: Std 1 26 70 30 103

: Mín -Máx 22 -23 -32 -25 -53 -170 -25 -71 -49 -96

: Valor de P 0,5333 0,8889 1 1

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 57 24 -9 -14

: Mediana NC 57 6 -16 -14

: Std NC 6 43 31 NC

: Mín -Máx NC 53 -61 -26 -78 -39 -52 -14 --14

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 27 41 6 -24

: Mediana NC 27 41 -16 -24

: Std NC NC 114 57 17

: Mín -Máx NC 27 -27 -40 -122 -45 -113 -36 --12

Lipoproteína (a). Las tablas 32 y 33 muestran los niveles medios de lipoproteína (a) y los cambios medios de lipoproteína (a) en relación con el valor de referencia, respectivamente. La lipoproteína (a) se ha relacionado con el desarrollo y la progresión de la aterosclerosis, por lo que su reducción puede ser un objetivo de las terapias reductoras de lípidos. Se observó una reducción máxima de aproximadamente el 22% en el grupo de 200 mg el MD22, sin embargo, no se observaron otras reducciones estadísticamente significativas dependientes de la dosis en lipoproteína (a).

Tabla 32

Resumen del nivel de lipoproteína (a), mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 12 16 10 24 6

: Mediana 4 7 7 11 5

: Std 16 24 11 27 4

: Mín -Máx 1 -45 1 -71 1 -29 3 -73 1 -10

: Valor de P 0,6876 0,9549 0,2507 0,8242

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 12 6 11 25 4

: Mediana 6 3 6 10 4

: Std 15 7 13 29 4

: Mín -Máx 1 -43 1 -21 1 -32 4 -84 1 - 7

Resumen del nivel de lipoproteína (a), mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Valor de P 0,5973 0,8291 0,2213 0,6389

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 13 17 10 22 5

: Mediana 5 5 7 8 5

: Std 15 27 11 26 6

: Mín -Máx 1 -41 1 -81 1 -30 6 -67 1 - 9

: Valor de P 0,8379 0,7739 0,2681 0,6389

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 13 15 8 21 4

: Mediana 3 3 3 8 4

: Std 16 26 11 26 4

: Mín -Máx 1 -44 1 -75 1 -31 3 -63 1 - 7

: Valor de P 0,8632 0,6061 0,2674 0,6389

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 14 17 10 22 4

: Mediana 5 6 4 9 4

: Std 18 30 12 26 5

: Mín -Máx 1 -50 1 -89 1 -31 2 -65 1 - 7

: Valor de P 0,9549 0,7629 0,3340 0,7500

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 14 14 8 23 3

: Mediana 9 3 4 11 3

: Std 15 27 9 27 3

: Mín -Máx 1 -38 1 -80 1 -21 2 -70 1 - 6

: Valor de P 0,6876 0,5820 0,4434 0,5000

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 13 14 8 21 1

: Mediana 4 3 1 8 1

Std
Std: 15 25 11 24 0

: Mín -Máx 1 -42 1 -74 1 -28 4 -60 1 - 1

: Valor de P 0,6061 0,2211 0,2810 0,1389

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 2 4 9 23 3

: Mediana 1 3 6 13 3

: Std 2 3 11 25 2

: Mín -Máx 1 - 4 1 - 8 1 -27 3 -61 1 - 4

: Valor de P 0,5429 0,3214 0,0333 0,7000

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 3 3 9 21 4

: Mediana 3 1 4 13 4

Resumen del nivel de lipoproteína (a), mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 2 4 10 26 4

: Mín -Máx 1 - 4 1 - 9 1 -23 1 -65 1 - 7

: Valor de P 1,0000 0,5000 0,4000 1,0000

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 1 14 22 1

: Mediana NC 1 10 12 1

: Std NC 0 11 25

: Mín -Máx NC 1 - 1 1 -27 1 -66 1 - 1

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 3 28 23 5

: Mediana NC 3 28 10 5

: Std NC 2 33 5

: Mín -Máx NC 3 - 3 27 -30 4 -90 1 - 9

Tabla 33

Lipoproteína (a), % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 32 -12 -6 1 -17

: Mediana 0 -21 0 -7 -17

: Std 75 61 31 22 25

: Mín -Máx -21 -190 -82 -110 -60 -41 -24 -40 -35 - 0

: Valor de P 0,2063 0,8432 0,4448 0,4722

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 26 29 -5 -8 -5

: Mediana 0 27 0 -15 -5

: Std 56 77 20 34 6

: Mín -Máx -9 -150 -80 -140 -41 -28 -37 -74 -9 -0

: Valor de P 1 0,3893 0,0138 0,4444

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 25 6 -24 -22 -14

: Mediana 0 -9 -20 -23 -14

: Std 65 110 27 15 20

: Mín -Máx -18 -170 -89 -250 -66 - 5 -49 --3 -29 - 0

: Valor de P 0,4625 0,0476 0,0034 0,3333

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 11 -9 -14 -20 -13

: Mediana 9 -6 -6 -15 -13

: Std 14 32 28 13 19

: Mín -Máx 0 -39 -50 -38 -60 -24 -41 --4 -27 - 0

Lipoproteína (a), % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Valor de P 0,1377 0,0659 0,0003 0,1667

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 46 -31 -19 -15 -22

: Mediana 7 -30 -17 -9 -22

: Std 65 35 23 27 32

: Mín -Máx -17 -139 -78 -13 -59 - 8 -75 - 9 -45 - 0

: Valor de P 0,0176 0,0253 0,0499 0,2222

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 41 -26 -30 -14 -45

: Mediana 8 -4 -22 -16 -45

: Std 65 41 33 28 64

: Mín -Máx -7 -140 -89 -16 -91 - 0 -52 -41 -90 - 0

: Valor de P 0,039 0,0034 0,014 0,1389

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 3 -16 -12 -5 -29

: Mediana 0 -20 -5 10 -29

: Std 4 66 20 38 41

: Mín -Máx 0 -8 -89 -67 -48 - 0 -68 -43 -57 - 0

: Valor de P 0,6286 0,125 0,7833 0,6

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 4 -22 -28 -20 -18

: Mediana 4 0 -20 -17 -18

: Std 5 45 26 55 25

: Mín -Máx 0 -8 -89 - 2 -60 - 0 -91 -81 -36 - 0

: Valor de P 0,4667 0,1389 0,4 0,6667

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC -45 -15 4 0

: Mediana NC -45 -20 -13 0

: Std NC 63 20 69

: Mín -Máx NC -89 - 0 -38 -12 -91 -141 0,0 -0,0

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC -70 8 24 -7

: Mediana NC -70 8 5 -7

: Std NC 23 80 11

: Mín -Máx NC -70 --70 -8 -24 -63 -156 -15 - 0

Colesterol total frente a colesterol HDL. Las mejoras en los niveles de lipoproteínas se pueden evaluar comparando la proporción de colesterol total frente a colesterol HDL. Una disminución de este índice indica una mejora en un perfil lipoproteico, y tal disminución puede ocurrir ya sea a través de la reducción del colesterol total, el aumento del colesterol HDL, o una combinación de cambios en ambos parámetros. Como era de esperar después de una disminución en el colesterol total y ningún cambio en el colesterol HDL, esta proporción mejoró después del tratamiento con ISIS 301012. Por ejemplo, en el grupo de 200 mg, se observó una reducción máxima de aproximadamente el 29% el día PD55 (Tabla 35).

Tabla 34

Proporción de colesterol total-colesterol HDL, resumen

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 5 4 4 4 4

: Mediana 4 4 4 4 4

: Std 2 1 1 1 2

: Mín -Máx 3 - 9 2 - 5 2 - 6 3 - 6 3 - 7

: Valor de P 0,8665 0,9551 0,7577 1

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 5 4 4 4 5

: Mediana 4 4 4 4 5

: Std 2 1 1 1 2

: Mín -Máx 3 - 8 3 - 6 3 - 7 3 - 6 3 - 7

: Valor de P 0,8316 0,6943 0,3357 1

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 5 4 4 3 4

: Mediana 4 4 4 3 4

: Std 2 1 1 0 2

: Mín -Máx 3 - 9 2 - 5 3 - 6 3 - 4 3 - 6

: Valor de P 0,6126 0,3514 0,0289 0,6667

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 5 4 4 3 3

: Mediana 4 4 4 3 3

: Std 2 1 1 1 1

: Mín -Máx 3 - 9 2 - 5 3 - 6 2 - 4 2 - 4

: Valor de P 0,843 0,8665 0,0939 0,5

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 5 4 4 3 3

: Mediana 4 4 4 3 3

: Std 2 1 1 1 1

: Mín -Máx 3 -10 3 - 5 3 - 6 2 - 4 2 - 4

: Valor de P 0,7559 0,9312 0,0876 0,6389

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 5 4 4 3 3

: Mediana 4 4 4 3 3

: Std 2 1 1 1 1

: Mín -Máx 3 - 9 3 - 5 3 - 6 2 - 4 2 - 3

: Valor de P 0,2949 0,7169 0,0541 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 5 4 4 3 2

: Mediana 4 3 4 3 2

Proporción de colesterol total-colesterol HDL, resumen

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 2 1 1 1 1

: Mín -Máx 3 - 8 3 - 5 3 - 6 2 - 4 2 - 3

: Valor de P 0,2438 0,4634 0,0225 0,1111

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 5 3 4 3 3

: Mediana 3 3 4 3 3

: Std 3 1 2 1 1

: Mín -Máx 3 - 7 3 - 4 3 - 6 2 - 4 2 - 3

: Valor de P 0,4 0,7857 0,35 0,8

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 5 3 4 3 3

: Mediana 5 3 4 3 3

: Std 3 1 1 1 1

: Mín -Máx 3 - 8 3 - 4 2 - 6 2 - 4 2 - 4

: Valor de P 0,5333 0,8889 0,4 0,6667

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 3 4 3 2

: Mediana NC 3 4 3 2

: Std NC 0 2 1 NC

: Mín -Máx NC 3 - 3 2 - 6 2 - 5 2 - 2

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 3 4 3 3

: Mediana NC 3 4 3 3

: Std NC NC 1 1 1

: Mín -Máx NC 3 - 3 3 - 4 3 - 6 2 - 4

Tabla 35

Proporción de colesterol total:HDL, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 6 3 2 -2 6

: Mediana 2 -3 -0,7 -7 6

: Std 14 16 8 13 5

: Mín -Máx -12 -29 -10 -35 -6 -20 -14 -23 3 -10

: Valor de P 0,7104 0,6943 0,2319 0,6667

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 10 -1 -6 -18 -9

: Mediana 11 -2 -6 -19 -9

: Std 11 6 14 14 1

: Mín -Máx -3 -28 -9 -9 -28 -17 -37 -1 1 -10 --9

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Valor de P 0,0541 0,0721 0,0022 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 0,5 -3 -8 -24 -34

: Mediana -1 -3 10 -25 -34

: Std 12 7 8 11 13

: Mín -Máx -14 -21 -14 - 8 -18 - 5 -38 --10 -43 --25

: Valor de P 0,7789 0,1206 0,0012 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media -3 -6 10 -24 -33

: Mediana -2 -4 10 -21 -33

: Std 9 7 9 11 12

: Mín -Máx -16 -7 -15 -7 -23 - 5 -39 --11 -42 --25

: Valor de P 0,5358 0,1206 0,0022 0,0556

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 0,8 -9 10 -27 -43

: Mediana 5 -8 -6 -26 -43

: Std 10 14 12 14 17

: Mín -Máx -15 -11 -34 -11 -35 - 3 -45 --8 -55 --31

: Valor de P 0,1893 0,0939 0,0037 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media -1 -9 -11 -29 -45

: Mediana -0,7 -12 -7 -28 -45

: Std 6 18 15 12 17

: Mín -Máx -10 - 6 -38 -11 -44 - 7 -42 --9 -57 --33

: Valor de P 0,5358 0,152 0,0006 0,0556

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media -2 -27 -6 -26 -41

: Mediana -0,7 -25 -0,4 -26 -41

: Std 14,2 7,3 17,4 15,5 12

: Mín -Máx -17 -11 -38 --22 -37 - 5 -53 --6 -50 --33

: Valor de P 0,0571 1 0,0667 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media -8 -26 -5 -20 -35

: Mediana -8 -27 -5 -19 -35

: Std 10 4 14 18 12

: Mín -Máx -15 --1 -29 --20 -31 - 11 -54 - 2 -43 --26

: Valor de P 0,1333 0,6667 0,4 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC -15 -9 -17 -31

: Mediana NC -15 -4 -13 -31

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std NC 6 17 18 0

: Mín -Máx NC -19 --11 -36 - 5 -56 - 2 -31 --31

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC -22 15 -18 -32

: Mediana NC -22 15 -13 -32

: Std NC NC 16 15 10

: Mín -Máx NC -22 --22 4 -26 -48 --6 -39 --25

Colesterol LDL frente a colesterol HDL. Los perfiles lipídicos fueron evaluados adicionalmente, comparando el nivel de colesterol LDL con el nivel de colesterol HDL. Una disminución en esta proporción es un resultado positivo e indica una reducción del colesterol LDL, un aumento del colesterol HDL, o una combinación de cambios en ambos parámetros. Como sería de esperar, con la disminución del colesterol LDL y ningún cambio en el colesterol HDL después del tratamiento con ISIS 301012, esta proporción se redujo. Por ejemplo, la proporción media en el grupo de 200 mg era de aproximadamente un 38% menos que los niveles de referencia el día PD39.

Tabla 36

Proporción LDL:HDL, resumen

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 3 2 3 3 3

: Mediana 3 2 3 3 2

: Std 2 1 1 1 1

: Mín -Máx 2 - 6 1 - 3 1 - 4 2 - 5 2 - 4

: Valor de P 0,4634 0,9315 0,5913 0,6848

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 3 3 3 2 3

: Mediana 2 2 3 2 3

: Std 1 1 1 1 2

: Mín -Máx 2 - 5 2 - 4 2 - 5 2 - 3 2 - 4

: Valor de P 0,8048 0,9551 0,5565 0,6667

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 3 2 2 2 2

: Mediana 2 2 2 2 2

: Std 2 1 1 0 2

: Mín -Máx 2 - 6 1 - 3 2 - 4 1 - 3 1 - 3

: Valor de P 0,7789 0,3357 0,0401 0,6667

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 3 2 2 2 2

: Mediana 2 2 2 2 2

: Std 2 1 1 1 1

: Mín -Máx 2 - 6 1 - 3 1 - 4 1 - 2 1 - 2

: Valor de P 0,8019 0,9551 0,1284 0,5

Proporción LDL:HDL, resumen

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 3 2 2 2 2

: Mediana 2 2 2 2 2

: Std 2 1 1 0 1

: Mín -Máx 2 - 6 2 - 3 1 - 4 1 - 2 1 - 2

: Valor de P 0,7789 0,9551 0,152 0,5

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 3 2 2 2 1

: Mediana 2 2 2 2 1

: Std 2 1 1 0 1

: Mín -Máx 2 - 6 1 - 3 1 - 4 1 - 2 1 - 2

: Valor de P 0,5542 0,841 0,0135 0,2222

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 3 2 2 2 1

: Mediana 2 2 2 1 1

: Std 1 1 1 1 1

: Mín -Máx 2 - 6 1 - 3 1 - 4 1 - 2 1 - 2

: Valor de P 0,3201 0,5358 0,0401 0,1111

PD69: N 2 2 5 7 2

: Media 2 2 2 2 1

: Mediana 2 2 2 2 1

: Std 0 0 1 1 1

: Mín -Máx 2 - 2 2 - 2 1 - 4 1 - 3 1 - 2

: Valor de P 1 0,5714 0,8889 1

PD83: N 2 3 7 8 2

: Media 3 2 2 2 2

: Mediana 3 2 3 2 2

: Std 3 0 1 1 1

: Mín -Máx 2 - 5 2 - 2 1 - 4 1 - 3 1 - 2

: Valor de P 1 0,8889 0,8889 0,6667

PD97: N 0 2 5 8 0

: Media NC 2 2 2 NC

: Mediana NC 2 2 2 NC

: Std NC 0 1 1 NC

: Mín -Máx NC 2 - 2 1 - 4 1 - 3 NC

PD111: N 0 1 2 6 0

: Media NC 2 2 2 NC

: Mediana NC 2 2 2 NC

: Std NC 1 1 NC

: Mín -Máx NC 2 - 2 2 - 2 1 - 4 NC

Tabla 37

Proporción de LDL:HDL, % de cambio desde los valores de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 2 3 -3 -5 1

: Mediana 5 -3 -3 -6 1

: Std 17 19 20 19 4

: Mín -Máx -15 -28 -12 -44 -25 -34 -30 -28 -2 -4

: Valor de P 0 0,8048 0,5358 0,637 0,8889

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 7 6 -16 -24 -19

: Mediana 2 0 -18 -24 -19

: Std 19 15 21 18 2

: Mín -Máx -16 -41 -8 -33 -44 -22 -50 - 0 -20 --18

: Valor de P 0 0,8665 0,0289 0,0093 0,0556

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media -4 3 -16 -31 -42

: Mediana 1 2 -19 -28 -42

: Std 19 16 14 16 12

: Mín -Máx -27 -27 -13 -39 -36 -11 -56 --12 -51 --34

: Valor de P 0 0,6126 0,3969 0,0103 0,0556

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media -7 0,6 -18 -31 -42

: Mediana 0 -4 -19 -26 -42

: Std 15 18 13 15 12

: Mín -Máx -32 - 4 -14 -42 -35 - 6 -56 --15 -50 --34

: Valor de P 0 0,9551 0,2319 0,0205 0,0556

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media -6 -9 -19 -36 -47

: Mediana -8 -13 -23 -34 -47

: Std 16 16 12 20 13

: Mín -Máx -25 -22 -28 -28 -33 - 2 -62 --8 -56 --37

: Valor de P 0 0,8665 0,0721 0,0093 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 10 -14 -21 -38 -51

: Mediana -14 -17 -27 -35 -51

: Std 8 12 17 16 14

: Mín -Máx -18 - 2 -32 - 6 -42 - 6 -59 --10 -61 --41

: Valor de P 0 0,3969 0,1893 0,0037 0,0556

PD69: N 2 2 5 7 2

: Media 6 -26 -15 -28 -46

Proporción de LDL:HDL, % de cambio desde los valores de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Mediana 6 -26 -15 -24 -46

: Std 23 15 13 14 9

: Mín -Máx -10 -23 -37 --16 -36 --2 -50 --10 -53 --40

: Valor de P 0 0,3333 0,381 0,1111 0,3333

PD83: N 2 3 7 8 2

: Media 10 -24 -18 -24 -36

: Mediana 10 -30 -23 -17 -36

: Std 2 12 9 19 11

: Mín -Máx -12 --9 -30 --10 -28 --4 -52 - 5 -44 --28

: Valor de P 0 0,4 0,5 0,2667 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 0

: Media NC -14 -18 -21 NC

: Mediana NC -14 -16 -13 NC

: Std NC 12 18 18 NC

: Mín -Máx NC -22 --6 -37 - 5 -54 --3 NC

: N 0 1 2 6 0

: Media NC -24 7 -20 NC

: Mediana NC -24 7 -16 NC

: Std NC 0 24 14 NC

: Mín -Máx NC -24 -10 -24 -46 --7 NC

Colesterol VLDL. Se observaron reducciones en el colesterol VLDL, como se muestra en las tablas 38 y 39. Las reducciones máximas fueron de 30% en el grupo de 200 mg y de 60% en el grupo de 400 mg (Tabla 39).

Tabla 38

Resumen del nivel total de VLDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 77 59 78 71 107

: Mediana 47 66 66 59 88

: Std 83 31 43 36 48

: Mín -Máx 36 -264 16 -95 45 -179 34 -136 73 -177

: Valor de P 0,9807 0,1604 0,5177 0,0727

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 91 83 89 75 118

: Mediana 56 54 81 56 118

: Std 75 68 42 48 81

: Mín -Máx 24 -242 18 -210 34 -174 37 -177 61 -175

: Valor de P 0,8048 0,6126 0,9551 0,5

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 108 78 100 65 83

Resumen del nivel total de VLDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Mediana 72 63 97 53 83

: Std 104 48 58 25 10

: Mín -Máx 25 -326 29 -146 21 -190 41 -105 76 -90

: Valor de P 0,8665 0,7167 0,5913 0,8889

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 86 79 95 66 93

: Mediana 52 74 100 57 93

: Std 75 40 43 31 35

: Mín -Máx 30 -244 28 -141 43 -166 29 -129 68 -118

: Valor de P 0,7789 0,3969 0,9551 0,5

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 79 65 89 63 59

: Mediana 61 60 86 54 59

: Std 78 33 34 39 46

: Mín -Máx 20 -246 19 -121 60 -163 29 -153 26 -91

: Valor de P 0,843 0,2303 0,8887 0,8611

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 83 85 94 62 66

: Mediana 46 77 81 60 66

: Std 76 43 49 28 34

: Mín -Máx 28 -239 24 - 157 50 -195 23 -97 42 -90

: Valor de P 0,5358 0,281 1 0,9444

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 67 58 105 50 66

: Mediana 41 47 85 51 66

: Std 58 35 74 21 50

: Mín -Máx 23 -191 22 -115 42 -279 18 -77 30 -101

: Valor de P 1 0,0671 0,7789 1

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 150 66 130 70 83

: Mediana 48 59 104 61 83

: Std 184 27 73 43 23

: Mín -Máx 40 -363 44 -102 67 -255 21 -156 66 -99

: Valor de P 1 0,5714 1 0,8

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 190 50 90 89 109

: Mediana 190 52 80 82 109

: Std 187 25 54 54 55

: Mín -Máx 57 -322 21 -74 23 -176 29 -185 70 -148

: Valor de P 0,5333 0,6667 0,5333 1

Resumen del nivel total de VLDL, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 82 112 67 43

: Mediana NC 82 95 52 43

: Std NC 45 87 46 NC

: Mín -Máx NC 50 -114 42 -260 34 -176 43 -43

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 94 76 78 82

: Mediana NC 94 76 48 82

: Std NC , 60 77 48

: Mín -Máx NC 94 -94 33 -118 19 -225 48 -116

Tabla 39

VLDL total, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 37 18 23 -2 -17

: Mediana 18 0 12 10 -17

: Std 69 57 52 29 22

: Mín -Máx -58 -149 -45 -121 -37 -135 -41 -55 -32 --1

: Valor de P 0,535 0,7789 0,2319 0,3333

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 47 39 45 -8 -32

: Mediana 51 56 16 -15 -32

: Std 72 48 106 29 24

: Mín -Máx -44 -155 -36 -88 -68 -273 -47 -50 -49 --16

: Valor de P 0,9551 0,8665 0,152 0,2222

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 27 53 30 -6 -29

: Mediana 11 40 15 3 -29

: Std 59 68 54 32 6

: Mín -Máx -47 -134 -30 -171 -35 -128 -70 -35 -33 --24

: Valor de P 0,6126 1 0,3969 0,2222

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 14 25 23 -13 -60

: Mediana 14 6 17 -7 -60

: Std 60 57 33 34 16

: Mín -Máx -64 -102 -37 -125 -9 -84 -57 -34 -71 --49

: Valor de P 0,7789 0,8023 0,3969 0,2222

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 16 61 25 -12 -51

VLDL total, % de cambio desde el valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Mediana -11 26 14 -15 -51

: Std 55 75 41 36 3

: Mín -Máx -22 -113 5 -225 -9 -120 -56 -51 -53 --49

: Valor de P 0,0721 0,1206 0,4634 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media -1 5 33 -30 -55

: Mediana -26 20 20 -44 -55

: Std 50 34 45 31 17

: Mín -Máx -36 -76 -57 -38 -22 -124 -51 -42 -67 --43

: Valor de P 0,6126 0,1206 0,0721 0,0556

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 4 35 83 -8 -35

: Mediana -11 20 49 -4 -35

: Std 30 55 124 39 12

: Mín -Máx -16 -38 -15 -114 -27 -292 -69 -39 -44 --27

: Valor de P 0,6286 0,3929 0,8333 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 24 -7 21 13 2

: Mediana 24 -16 6 9 2

: Std 3 52 63 36 88

: Mín -Máx 22 -27 -60 -64 -57 -126 -31 -62 -61 -64

: Valor de P 0,5333 0,8889 0,7111 1

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 14 35 -8 -52

: Mediana NC 14 8 10 -52

: Std NC 25 62 37

: Mín -Máx NC -4 -31 -18 -138 -52 -54 -52 --52

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 8 46 -3 -41

: Mediana NC 8 46 -16 -41

: Std NC 120 53 9

: Mín -Máx NC 8 -8 -39 -131 -44 -97 -47 --35

Tamaño de las partículas LDL. Existen pruebas de que concentraciones elevadas de las partículas de LDL pequeñas y densas pueden ser indicadores fiables de riesgo cardiovascular. Para evaluar los efectos de ISIS 301012 sobre el tamaño de las partículas de LDL en los participantes del estudio, se determinó la concentración 5 total de partículas de LDL, partículas de la subclase LDL pequeñas y grandes y el tamaño medio de las partículas de LDL por RMN (Liposcience, Raleigh, NC). Como la apolipoproteína B es un componente del colesterol LDL, los niveles de apolipoproteína B proporcionaban una medición independiente de la concentración de partículas LDL. Además de las reducciones en el suero de la apolipoproteína B y el colesterol LDL en el grupo de dosis de 200 mg, se observaron reducciones significativas en el número de partículas LDL, predominantemente 10 las partículas de LDL pequeñas y densas. Se observaron reducciones en la concentración de las partículas de LDL pequeñas (Tablas 40 y 41), así como en la fracción de colesterol LDL de colesterol LDL pequeño (Tablas 42 y 43). La duración de la respuesta era compatible con la semivida larga en el tejido hepático de ISIS 301012.

Estos resultados indican que la reducción del colesterol LDL después de la inhibición antisentido de la apolipoproteína B se debe en parte a la reducción de partículas LDL pequeñas, densas y aterogénicas.

Tabla 40 Tabla 41

Concentración de partículas de LDL pequeñas, nmol/L

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 913 401 848 821 869

: Mediana 593 454 646 856 758

: Std 859 306 583 277 511

: Mín -Máx 409 -2824 0 -859 243 -2134 446 -1363 389 -1569

: Valor de P 0,152 0,6943 0,351 0,7879

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 1157 463 946 780 695

: Mediana 989 484 828 687 695

: Std 662 252 565 409 809

: Mín -Máx 656 -2582 8 -775 416 -2177 450 -1709 123 -1267

: Valor de P 0,0023 0,3969 0,1206 0,8889

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 1181 465 825 582 390

: Mediana 876 426 618 594 390

: Std 844 391 545 212 465

: Mín -Máx 245 -2699 2 -1107 397 -2089 322 -914 61 -719

: Valor de P 0,0939 0,281 0,0939 0,2222

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 979 449 816 520 265

: Mediana 849 423 726 461 265

: Std 693 367 607 246 375

: Mín - Máx 93 - 2310 0 -935 217 - 2134 236 - 1023 0 -530

: Valor de P 0,152 0,6126 0,1206 0,1111

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 993 434 862 514 272

: Mediana 634 416 723 471 272

: Std 861 273 597 210 343

: Mín -Máx 327 -2846 15 -825 244 -2193 308 -900 29 -514

: Valor de P 0,0721 0,7789 0,1893 0,1111

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 887 507 688 344 172

: Mediana 646 487 644 344 172

: Std 652 387 564 148 155

: Mín -Máx 346 -2226 19 -1112 6 -1948 98 -571 62 -281

: Valor de P 0,281 0,5911 0,014 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

Concentración de partículas de LDL pequeñas, nmol/L

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Media 876 479 791 289 280

: Mediana 646 474 580 281 280

: Std 668 361 540 231 339

: Mín -Máx 124 -2205 7 -1032 453 -2061 6 -657 40 -519

: Valor de P 0,2319 0,6943 0,0401 0,2222

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 1096 345 881 589 232

: Mediana 590 393 869 551 232

: Std 897 234 576 281 242

: Mín -Máx 566 -2131 19 -576 286 -1809 352 -1189 61 -403

: Valor de P 0,1143 0,7857 0,1833 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 1478 522 919 509 196

: Mediana 1478 636 912 422 196

: Std 1600 358 621 292 277

: Mín -Máx 346 -2609 0-816 291 -2185 100 -1060 0-392

: Valor de P 0,8 0,8889 0,6889 0,6667

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 1051 879 592 0

: Mediana NC 1051 685 455 0

: Std NC 292 671 395 NC

: Mín -Máx NC 844 -1257 301 -1891 232 -1376 0-0

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 320 448 694 386

: Mediana NC 320 448 541 386

: Std NC NC 54 470 506

: Mín -Máx NC 320 -320 409 -486 382 -1642 28 -743

Partículas pequeñas de LDL, cambio porcentual medio

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 50 11 20 -9 -50

: Mediana 60 -11 17 -21 -50

: Std 42 49 29 39 43

: Mín -Máx -9 -115 -44 -90 -22 -71 -48 -80 -80 --19

: Valor de P 0 0,1282 0,1893 0,0205 0,0556

MD15: N 7 7 8 8 2

: Media 48 28 8 -30 -72

: Mediana 25 29 0,6 -22 -72

Partículas pequeñas de LDL, cambio porcentual medio

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 78 41 43 26 26

: Mín -Máx -40 -161 -27 -89 -34 -100 -63 - 2 -90 --54

: Valor de P 0 0,9015 0,5358 0,0541 0,0556

MD22: N 7 7 8 8 2

: Media 18 5 -6 -39 -83

: Mediana 25 9 -3 -45 -83

: Std 55 35 18 24 24

: Mín -Máx -77 -79 -44 -50 -45 -13 -74 - 8 -100 --66

: Valor de P 0 0,62 0,3357 0,0401 0,1111

MD25: N 7 7 8 8 2

: Media 11 18 6 -40 -81

: Mediana 13 6 2 -39 -81

: Std 24 41 33 20 20

: Mín -Máx -20 -49 -24 -77 -36 -67 -66 --5 -95 --67

: Valor de P 0 1 0,6126 0,0012 0,0556

PD39: N 7 7 8 8 2

: Media 9 40 -25 -58 -86

: Mediana -15 12 -23 -60 -86

: Std 48 45 38 22 6

: Mín -Máx -27 -99 -5 -111 -98 -17 -89 --15 -90 --82

: Valor de P 0 0,1282 0,3357 0,0037 0,0556

PD55: N 7 7 8 8 2

: Media 2 16 3 -63 -80

: Mediana 17 19 -13 -65 -80

: Std 42 24 42 32 19

: Mín -Máx -70 -43 -22 -55 -25 -103 -99 --2 -94 --67

: Valor de P 0 0,8048 0,7789 0,0093 0,1111

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 13 40 -5 -27 -82

: Mediana 26 41 -8 -41 -82

: Std 33 66 16 35 11

: Mín -Máx -25 -38 -35 -111 -23 -18 -62 -25 -90 --74

: Valor de P 0 0,8571 0,5714 0,1167 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media -17 7 9 -39 -88

: Mediana -17 30 2 -49 -88

: Std 13 74 26 33 18

: Mín -Máx -26 --8 -100 -67 -22 -59 -89 -12 -100 --75

: Valor de P 0 0,5333 0,1111 0,5333 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 1

Partículas pequeñas de LDL, cambio porcentual medio

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Media NC 131 -0,2 -33 -100

: Mediana NC 131 2 -46 -100

: Std NC 4 28 40 0

: Mín -Máx NC 128 -134 -41 -34 -69 -45 -100 --100

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC -40 32 -15 -74

: Mediana NC -40 32 -38 -74

: Std NC 0 51 48 30

: Mín -Máx NC -40 --40 -4 -68 -48 -73 -96 --53

Tabla 42

Subclase de LDL pequeñas de colesterol LDL, resumen, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Valor de referencia: N 7 8 8 9 4

: Media 54 24 51 50 52

: Mediana 35 28 39 51 45

: Std 51 18 35 17 31

: Mín -Máx 23 -168 0 -52 15-127 27 -83 24 -94

: Valor de P 0,2319 0,7167 0,351 0,6485

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 70 28 57 47 42

: Mediana 60 30 51 41 42

: Std 40 15 34 25 50

: Mín -Máx 39 -157 1 -47 25 -132 29 -105 7 -77

: Valor de P 0,0023 0,3969 0,1206 0,8889

MD15: N 7 8 8 8 2

: Media 71 28 50 35 23

: Mediana 53 26 37 36 23

: Std 52 23 32 13 28

: Mín -Máx 14 -166 0 -67 24 -124 20 -57 3 -44

: Valor de P 0,0939 0,281 0,1206 0,2222

MD22: N 7 8 8 8 2

: Media 59 27 49 31 16

: Mediana 51 26 44 28 16

: Std 41 22 35 15 23

: Mín -Máx 6 -136 0 -57 12 -122 14 -62 0 -32

: Valor de P 0,152 0,6126 0,1206 0,1111

MD25: N 7 8 8 8 2

: Media 59 26 52 31 17

: Mediana 38 24 44 30 17

Subclase de LDL pequeñas de colesterol LDL, resumen, mg/dL

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 52 17 35 13 21

: Mín -Máx 19 -170 2 -49 15 -130 19 -55 2 -32

: Valor de P 0 0,0721 0,9551 0,2319 0,3333

PD39: N 7 8 8 8 2

: Media 54 31 42 21 10

: Mediana 38 30 38 21 10

: Std 42 24 34 9 10

: Mín -Máx 20 -141 2 -70 0 -119 6 -36 3 -17

: Valor de P 0,3357 0,7789 0,0154 0,0556

PD55: N 7 8 8 8 2

: Media 53 29 49 18 17

: Mediana 39 28 35 17 17

: Std 42 22 35 14 20

: Mín -Máx 7 -136 1 -62 28 -132 1 -41 2 -31

: Valor de P 0,2319 0,6943 0,0541 0,2222

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 67 21 54 35 15

: Mediana 35 23 54 33 15

: Std 58 14 34 16 14

: Mín -Máx 33 -134 2 -35 17 -108 21 -67 6 -25

: Valor de P 0,2286 1 0,4167 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media 92 32 56 31 12

: Mediana 92 39 56 25 12

: Std 102 22 37 17 17

: Mín -Máx 20 -164 0 -51 18 -131 6 -63 0 -24

: Valor de P 0,8 0,8889 0,7111 0,6667

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 63 55 36 0

: Mediana NC 63 43 27 0

: Std NC 17 43 23 NC

: Mín -Máx NC 51 -75 19 -121 14 -81 0 - 0

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC 19 28 42 24

: Mediana NC 19 28 33 24

: Std NC , 3 28 31

: Mín -Máx NC 19 -19 26 -30 24 -99 2-45

Tabla 43

Subclase de LDL pequeñas de colesterol LDL, % del valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

MD8: N 7 7 8 8 2

: Media 54 13 21 -8 -50

: Mediana 70 0 16 -21 -50

: Std 43 51 27 41 45

: Mín -Máx -7 -117 -48 -92 -16 -70 -50 -85 -82 --18

: Valor de P 0,1282 0,152 0,0205 0,0556

MD15: N 7 7 8 8 2

: Media 49 30 8 -30 -72

: Mediana 27 30 -0,7 -22 -72

: Std 78 43 42 27 26

: Mín -Máx -40 -160 -29 -90 -31 -97 -64 - 3 -91 --54

: Valor de P 0,9015 0,4634 0,0541 0,0556

MD22: N 7 7 8 8 2

: Media 19 5 -7 -39 -83

: Mediana 28 10 -4 -44 -83

: Std 56 33 18 25 24

: Mín -Máx -75 -80 -40 -51 -41 -13 -74 -10 -100 --66

: Valor de P 0,62 0,351 0,0401 0,1111

MD25: N 7 7 8 8 2

: Media 11 19 6 -39 -81

: Mediana 11 0,9 0 -38 -81

: Std 22 43 34 20 21

: Mín -Máx -14 -48 -24 -80 -36 -68 -66 --3 -96 --66

: Valor de P 1 0,7789 0,0012 0,0556

PD39: N 7 7 8 8 2

: Media 10 42 -22 -57 -86

: Mediana -12 13 -19 -61 -86

: Std 47 47 37 23 7

: Mín -Máx -28 -100 -5 -110 -97 -17 -89 --12 -91 --82

: Valor de P 0,1282 0,2319 0,0037 0,0556

PD55: N 7 7 8 8 2

: Media 2 15 3 -62 -80

: Mediana 17 19 -12 -64 -80

: Std 43 24 39 33 19

: Mín -Máx -70 -45 -20 -56 -26 -93 -99 - 1 -94 --67

: Valor de P 0,8048 0,9551 0,0093 0,1111

PD69: N 3 4 5 7 2

: Media 18 40 -4 -27 -79

: Mediana 28 43 -2 -40 -79

Subclase de LDL pequeñas de colesterol LDL, % del valor de referencia

Día del estudio: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: Std 35 67 16 35 8

: Mín -Máx -20 -47 -37 -110 -23 -16 -64 -18 -85 --74

: Valor de P 0,8571 0,3929 0,1167 0,2

PD83: N 2 4 7 8 2

: Media -15 6 11 -39 -87

: Mediana -15 30 4 -48 -87

: Std 18 73 26 33 18

: Mín -Máx -28 --3 -100 -65 -21 -62 -88 -10 -100 --74

: Valor de P 0,5333 0,2222 0,4 0,3333

PD97: N 0 2 5 8 1

: Media NC 124 3 -33 -100

: Mediana NC 124 2 -46 -100

: Std NC 7 28 39 NC

: Mín -Máx 120 -129 -38 -36 -68 -42 -100 --100

PD111: N 0 1 2 6 2

: Media NC -42 35 -14 -74

: Mediana NC -42 35 -37 -74

: Std NC 0 53 48 31

: Mín -Máx -42 --42 -3 -72 -47 -75 -95 --52

Resumen farmacodinámico

Los datos presentados en este documento muestran que el tratamiento con ISIS 301012 da como resultado una reducción dependiente de la dosis de la apolipoproteína B, el colesterol LDL y el colesterol total en suero. Las 5 reducciones de los niveles séricos de colesterol LDL, tal y como se muestran en las Tablas 22 y 23, se observaron durante todo el período de tratamiento, y al final del período de tratamiento variando desde aproximadamente 20% en el grupo de 100 mg hasta más de 30% en los grupos de 200 mg y 400 mg. Las reducciones en los niveles séricos de apolipoproteína B, tal y como se muestran en las Tablas 24 y 25, también se observaron durante todo el período de tratamiento, y al final del período de tratamiento variando desde aproximadamente 15% 10 en el grupo de 50 mg hasta más de 40% en los grupos de 200 mg y 400 mg. Los niveles totales de colesterol en el suero se redujeron de manera similar al final del tratamiento, aproximadamente el 15% en el grupo de 100 mg y más de aproximadamente el 25% en los grupos de 200 mg y 400 mg. Los individuos con mayores niveles de valor de referencia en el suero de colesterol LDL y de apolipoproteína B, experimentaron mayores reducciones porcentuales en estos lípidos, en comparación con los individuos con menores niveles de valor de referencia en

15 suero de colesterol LDL y de apolipoproteína B.

Duración del efecto: 2 semanas

Las reducciones de los niveles en suero de colesterol LDL, colesterol total y apolipoproteína B se mantuvieron el día PD39, dos semanas después de MD25. El colesterol LDL en suero se redujo aproximadamente un 20%, 35% y 45% en los grupos de 100 mg, 200 mg y 400 mg, respectivamente. La apolipoproteína B en suero se

20 redujo en aproximadamente un 20%, 35% y 50% en los grupos de 100 mg, 200 mg y 400 mg, respectivamente. El colesterol total en suero disminuyó de forma similar, en aproximadamente 15%, 25% y 30% en los grupos de 100 mg, 200 mg y 400 mg, respectivamente.

Duración del efecto: 30 Días

La duración del efecto se prolongó, con reducciones significativas en varios parámetros lipídicos observados 30

25 días después de MD25. Un resumen de estas reducciones se ilustra en la Tabla 44, en donde se muestra el cambio porcentual medio del valor de referencia para varios parámetros lipídicos. Los datos se expresan como cambio porcentual medio respecto al valor de referencia. "Std" indica la desviación estándar. No se realizaron estadísticas formales en la cohorte de 400 mg debido al tamaño pequeño de la muestra (n=2). "N" indica el número de sujetos evaluados en cada cohorte.

Tabla 44

Cambio porcentual medio el día PD55

Parámetro lipídico: Placebo 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

: N 7 8 8 8 2

Colesterol LDL: Media -1 -6 -20 -34 -41

: Std 15 8 17 19 3

: Valor de P 0,8665 0,0939 0,0022 0,0556

Apolipoproteína B: Media -11 -14 -28 -42 -47

: Std 29 13 15 14 9

: Valor de P 0,1893 0,0541 0,0205 0,2222

Colesterol Total: Media 10 2 -15 -23 -31

: Std 14 7 8 14 6

: Valor de P 0,4634 0,0003 0,0006 0,0556

Colesterol HDL: Media 10 11 1 7 25

: Std 18 17 9 9 30

: Valor de P 0,8421 0,4448 0,9294 0,3056

Triglicéridos: Media 1 -1 37 -27 -32

: Std 38 30 60 20 2

: Valor de P 0,7789 0,2319 0,0541 0,0556

5 Duración del efecto: Tres Meses

Durante el período de evaluación posterior al tratamiento, la apolipoproteína B en suero y el colesterol LDL estaban 20-25% por debajo del nivel de referencia, tres meses después de MD25 en las cohortes de dosis de 200 mg y 400 mg. Estos resultados son compatibles con la semivida tisular larga de ISIS 301012, que se estimó en aproximadamente 31 días en la cohorte de dosis de 200 mg. Los triglicéridos, el colesterol VLDL y la lipoproteína

10 (a) en suero también parecen reducirse. El colesterol HDL en suero no se vio afectado.

Análisis farmacocinético

Se realizó un análisis farmacocinético no compartimental de ISIS 301012 en cada grupo de datos de un sujeto individual. Las concentraciones plasmáticas de ISIS 301012 se midieron por ELISA basado en hibridación con PPD Development (Richmond, VA). La concentración de fármaco máxima observada (Cmáx) y el tiempo tomado 15 para la alcanzar Cmáx (Tmáx) se obtuvieron directamente a partir de los datos de concentración-tiempo. La semivida plasmática en la disposición (t1/2λz) asociada con la fase de eliminación terminal aparente se calcula a partir de la ecuación, t1/2λz = 0,693/λz, en donde λz es la constante de la tasa terminal asociada con la fase de eliminación terminal aparente. La constante de la tasa de eliminación terminal se calcula mediante regresión log-lineal de los 3 últimos puntos o más de concentración y tiempo. La semivida aparente en la distribución se calculó a 20 partir de una ecuación similar, utilizando la constante de la tasa de eliminación aparente, en lugar de la constante de la tasa de eliminación terminal. La constante de la tasa de distribución aparente se calcula mediante regresión log-lineal de los puntos de la fase de distribución. Después de la dosificación individual, se calculó un área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo, desde el tiempo cero (predosis) hasta el tiempo infinito (AUC∞) usando la regla trapezoidal lineal y la extrapolación al infinito, dividiendo la última concentración medible 25 (Cúltima) por λz. Después de la dosificación múltiple, el área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo durante el tiempo de cada intervalo de dosificación (tau, τ), en el estado estacionario (AUCτ), se calculó usando la regla trapezoidal lineal. Además, se calcularon las áreas parciales bajo la curva de concentración plasmáticatiempo desde el tiempo cero (predosis) a tiempos seleccionados (t), después del comienzo de la infusión intravenosa o subcutánea (AUCτ) usando la regla trapezoidal lineal. El aclaramiento plasmático (CL) se calculó a 30 partir de CL = Dosis real/AUCiv. El volumen de distribución en el estado estacionario [Vss = (AUMCiv *Dosis real)/(AUCiv)2; en donde AUMCiv es el área bajo la curva del primer momento después de una infusión intravenosa] también se calculó. El tiempo de absorción medio después de la inyección subcutánea se calculó restando la

AUMCSC plasmática (curva del primer momento para inyección subcutánea) de AUMCiv (curva del primer momento para infusión intravenosa) estimada para cada sujeto, y se refiere a la medida en que ISIS 301012 fue distribuido por todo el cuerpo en concentraciones del estado estacionario. Además, las proporciones de AUC plasmática subcutánea frente a intravenosa fueron utilizadas para estimar la biodisponibilidad plasmática subcu

5 tánea (F) para cada sujeto.

La cantidad de ISIS 301012 y el oligonucleótido total excretado en la orina se determinaron a partir de la siguiente expresión:

Aet = Corina XVorina

en donde Aet es la cantidad excretada hasta un tiempo t fijado (es decir, 24 horas), Corina es la concentración del

10 analito en la orina y Vorina es el volumen de orina total. El porcentaje de la dosis administrada, excretada en la orina (intacta o como oligonucleótido total) se calculó a continuación a partir de la siguiente expresión:

% de dosis excretada = (Aet/dosis administrada) X100%

Resumen farmacocinético

El perfil farmacocinético plasmático de ISIS 301012 se determinó a partir de muestras de sangre después de la

15 primera infusión intravenosa de 2 horas (MD1), y se resume en la Tabla 45. Los datos se presentan como media ± desviación estándar para cada grupo de dosis. Cmáx = concentración plasmática máxima; Tmáx = tiempo para alcanzar la Cmáx; AUC0-48hr = área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo, desde el tiempo 0 hasta 48 horas después del inicio de la administración de la dosis; CL = aclaramiento plasmático; Vss = volumen de distribución del estado estacionario. La biodisponibilidad después de una administración intravenosa, se supone que

20 es del 100%.

Tabla 45

ISIS 301012 dosificado por vía intravenosa: Farmacocinéticas plasmáticas

Grupo de dosis: 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Dosis, mg/kg para 70 kg: 0,7±0,1 1±0,1 2,7±0,5 5,9±1,2

N: 8 8 8 3

Cmáx (μg/ml): 5±1 9±1 22 ± 4 38±5

Tmáx (h): 2 ± 0,1 2 ± 0,1 2 ± 0,2 2 ± 0,2

AUC0-48h (μg*h/mL): 11 ± 3 24 ± 3 68 ± 14 148 ± 14

CL (L/h): 5 ± 1 4 ± 0,6 3 ± 0,7 3 ± 0,3

Vss (L): 6 ± 3 7 ± 1 7 ± 1 8 ± 0,8

Distribución aparente t1/2 (h): 0,7 ± 0,1 0,8 ± 0,1 1 ± 0,2 1,7 ± 0,4

Se observaron concentraciones plasmáticas máximas (Cmáx) dependientes de la dosis, después de infusiones intravenosas de 2 horas, al final de la infusión seguidas por una disminución bifásica. Una fase inicial de distri

25 bución relativamente rápida (la semivida de distribución aparente promedio osciló entre 0,7 y 1,7 horas) dominó el aclaramiento plasmático y estaba seguida por una fase de eliminación aparente más lenta.

Las farmacocinéticas plasmáticas determinadas a partir de muestras de sangre después de la última inyección subcutánea (MD22), se resumen en la Tabla 46. Los datos se presentan como media ± desviación estándar. Cmáx = concentración plasmática máxima; Tmáx = tiempo para alcanzar la Cmáx; AUC0-48hr = área bajo la curva de

30 concentración plasmática-tiempo desde el tiempo 0 hasta 48 horas después del inicio de la administración de la dosis; AUC0-∞ en ss = área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo desde el tiempo 0 hasta el infinito en el estado estacionario; %BAV = biodisponibilidad plasmática (%) después de la administración subcutánea.

Tabla 46

ISIS 301012 dosificado por vía subcutánea: Farmacocinéticas plasmáticas

Grupo de dosis: 50 mg 100 mg 200 mg 400 mg

Dosis, mg/kg para 70 kg: 0,7 ±0,1 1,3 ±0,1 2,7 ±0,5 5,9 ± 1,2

N: 7 8 8 2

Cmáx(μg/ml): 1 ± 0,3 2 ± 1 3 ± 1 7

Tmáx (h): 4 ± 2 4 ± 2 3 ± 2 7

AUC0-48hr (μg*h/mL): 8 ± 2 18 ± 4 35 ± 7 109

AUC0-∞ en ss (μg*h/mL): 19 ± 9 28 ± 5 63 ± 13 160

Distribución aparente t1/2 (h): 4 ± 1 5 ± 3 7 ± 3 8

Eliminación t1/2 (h): 23 ± 1 27 ± 12 31 ± 11 47

% de BAV: 69 ± 9 76 ± 18 54 ± 11 78

El tiempo promedio hasta las concentraciones plasmáticas máximas (Tmáx) después de la última inyección sub

5 cutánea (MD22) de ISIS 301012 era aproximadamente de 4 horas después de la administración de las dosis de 50 y 100 mg, y aproximadamente 3 horas después de la administración de la dosis de 200 mg. Las concentraciones plasmáticas disminuyeron más lentamente desde la concentración plasmática máxima (Cmáx) después de la inyección subcutánea, en comparación con la infusión intravenosa, indicando una absorción continuada de ISIS 301012 tras la consecución de la Cmáx. Las concentraciones plasmáticas máximas (Cmáx) variaron desde

10 aproximadamente 1 a 3 μg/mL (50 mg a 200 mg) y eran dependientes de la dosis, en el intervalo de dosis subcutánea estudiada, pero fueron mucho menores en comparación con las dosis equivalentes de infusión intravenosa. Cmáx, Tmáx, AUC plasmática después de la primera dosis subcutánea de ISIS 301012 fueron similares a las mostradas en la Tabla 46, después de la última dosis subcutánea. La concentración plasmática de fármaco se redujo al menos 10 veces en 24 horas. La fase de eliminación terminal observada en el plasma proporcionaba

15 una medida de la tasa de eliminación tisular, por lo tanto la semivida de eliminación representa el momento en el que se aclaró aproximadamente el 50% de ISIS 301012 desde los tejidos. La caracterización de la fase de eliminación terminal produjo una semivida de eliminación de aproximadamente 23 (+1) a 31 (±11) días (véase la Tabla 46). Este resultado es compatible con la eliminación lenta de ISIS 301012 observada desde los tejidos de mono, y por lo tanto, parece reflejar un equilibrio del oligonucleótido entre el plasma y el tejido. La biodisponibili

20 dad plasmática absoluta (BAV) de ISIS 301012 después de la administración subcutánea fue de 54% a 78%, en comparación con la infusión intravenosa, y era independiente de la dosis. La BAV plasmática puede subestimar la absorción final completa de ISIS 301012, ya que estudios en primates no humanos han mostrado que la dosis completa se distribuye en última instancia a los tejidos, de tal manera que no hay diferencia entre la administración intravenosa y la subcutánea con respecto a las concentraciones finales de fármaco en los órganos.

25 La excreción promedio de oligonucleótido total en la orina fue menor del 8% en las primeras 24 horas. La excreción de los metabolitos de cadena corta era evidente. Los datos de la excreción de orina indican que ISIS 301012 se distribuye principalmente a los tejidos. La eliminación final es una combinación de metabolismo de nucleasas y excreción en la orina.

Relaciones exposición-respuesta

30 La correlación entre las concentraciones plasmáticas de ISIS 301012, proteína apolipoproteína B en suero y colesterol LDL, se muestra en la Tabla 47. La apolipoproteína B sérica, el colesterol LDL y el colesterol total se presentan como porcentaje del valor de referencia. Los números entre paréntesis después del valor de referencia porcentual de apolipoproteína B, indican el número de muestras utilizadas para calcular la media; y todas las otras medias se calcularon usando el número de muestras en la columna "N".

Tabla 47

Relación exposición-respuesta: Nivel plasmático de ISIS 301012, proteína apolipoproteína B y colesterol LDL en el grupo de tratamiento de 200 mg

Día del estudio: N ISIS 301012 ng/dL Apolipoproteína B % del valor de referencia Colesterol LDL % del valor de referencia Colesterol total % del valor de referencia

MD1: 9 0,5 96 93 99

MD8: 8 18 92 86 90

MD15: 8 16 68 71 77

MD22: 8 21 66 68 76

MD25: 8 30 50 69 76

PD39: 8 15 61 65 74

PD55: 8 8,7 58 66 76

PD69: 6 6,1 64 73 76

PD83: 7 5,2 70 79 83

PD97: 5 4,7 76 (7) 82 87

PD111: 4 5,1 77 (6) 80 81

Tal y como se muestra en la Tabla 47, la exposición total del tejido, representada por las concentraciones plas

5 máticas de ISIS 301012 (medidas por lo menos 72 horas después de la dosificación durante y después del período de tratamiento de dosis múltiple) estaba muy correlacionada con los niveles séricos de la proteína apolipoproteína B y los niveles de colesterol LDL, los cuales respondían en forma similar de dosis-respuesta. Los incrementos en la AUC plasmática fueron ligeramente superiores más que proporcionales a la dosis. Una reducción significativa de la proteína apolipoproteína B (p <0,02) desde el valor de referencia, para el grupo de trata

10 miento de 200 mg, se consiguió desde el día 15 (MD 15) hasta el día 97 (PD 72, o 75 días después de la última dosis), en consonancia con la lenta eliminación de ISIS 301012 en el plasma (t1/2 de eliminación terminal de aproximadamente 31 días).

Una comparación de las reducciones en suero frente a la AUC plasmática mínima, en 26 sujetos tratados con ISIS 301012 al final del período de dosificación múltiple (MD25), reveló una correlación directa entre la AUC 15 mínima y las reducciones observadas en los niveles de proteína apolipoproteína B en suero, colesterol LDL y colesterol total (r ≥0,67, p ≤0,0002) (Figura 1). Esta correlación es compatible con el hecho de que la AUC mínima es una representación de las concentraciones hepáticas, como resultado del equilibrio alcanzado entre la concentración de fármaco en el plasma y en el hígado. También se observó una correlación entre las concentraciones plasmáticas mínimas y las reducciones en suero, cuando las concentraciones plasmáticas mínimas (Cmí

20 nima; concentración mínima media determinada a partir de los niveles en plasma, justo antes de la dosificación los días MD15 y MD22) se compararon con las reducciones en suero de apolipoproteína B, colesterol LDL y colesterol total. La Cmínima y la AUC mínima se correlacionan con reducciones en los parámetros lipídicos, demostrando que cuando aumentaba la exposición a ISIS 301012, la apolipoproteína B en suero, el colesterol LDL y el colesterol total disminuían.

25 La relación entre los niveles séricos de proteína apolipoproteína B y las concentraciones plasmáticas mínimas de ISIS 301012 se describe con un modelo de efecto inhibidor sigmoideo Emáx, usando los datos recogidos 3 días después de la dosificación. La EC50 plasmática estimada y las concentraciones hepáticas estimadas basadas en estudios previos con primates no humanos, eran de 18 (±2) ng/mL y 60 μg/g, respectivamente. La concentración plasmática mínima aumenta después de dosis múltiples de ISIS 301012, lo que refleja la acumulación

30 de ISIS 301012 en el hígado; los aumentos fueron de 2 veces después de la dosis de carga de ISIS 301012 y de 5 veces después de la última dosis de ISIS 301012. Las farmacocinéticas plasmáticas en mono y ser humano de ISIS 301012 son esencialmente superponibles a dosis equivalentes de mg/kg. Utilizando estas similitudes de PK conocidas, la medición de las concentraciones de fármaco en la fase de eliminación terminal en estudios clínicos en humanos, se puede emplear para evaluar la acumulación en el hígado. Estos cálculos se muestran en la

35 Tabla 48. Las concentraciones hepáticas de ISIS 301012 se estiman basándose en los datos de mono. Las concentraciones plasmáticas promedio en mono representan un promedio de 6 animales y se midieron 48 a 72 horas después de la última dosis, en un estudio toxicológico de 13 semanas con dosis repetidas (por ejemplo, el estudio descrito en el Ejemplo 2). Los datos de la concentración plasmática mínima humana se obtuvieron 72 horas después de la última dosis de carga intravenosa; el número de sujetos del estudio se indica entre parénte

40 sis. Las concentraciones hepáticas en el mono representan un promedio de 4-6 animales y se midieron en tejidos recogidos 48 horas después de la última dosis, en un estudio toxicológico de 13 semanas con dosis repetidas.

Tabla 48

ISIS 301012: Farmacocinéticas plasmáticas en mono y ser humano

Dosis/Ruta: Cmínima plasmática (ng/dL) Conc. hepática real (μg/g)

Mono

3,5 mg/kg/semana/i.v.: 28 100 ± 59

7 mg/kg/semana/i.v.: 107 293 ± 105

21 mg/kg/semana/i.v.: 292 584 ± 129

35 mg/kg/semana/s.c.: 570 1129 ± 242

Ser Humano: Cmínima plasmática (ng/dL) Conc. hepática estimada (μg/g)

50 mg/semana/i.v./s.c.: 24 (n=5) 10

100 mg/semana/i.v./s.c.: 8 (n=3) 28

200 mg/semana/i.v./s.c.: 18 (n=6) 60

400 mg/semana/i.v./s.c.: 40 (n=2) 150

La AUC plasmática mínima para los grupos de dosis de 50 mg, 100 mg, 200 mg y 400 mg se encontró que era 5 3, 5, 12 y 18 μg·h/mL, respectivamente, el MD25 (tres días después de la dosis final durante el período de dosificación múltiple).

La reducción de los niveles de colesterol LDL en un ser humano proporciona un medio para tratar, prevenir y/o mejorar la cardiopatía coronaria. Tal y como se ha descrito anteriormente, el oligonucleótido ISIS 301012 producía reducciones sustanciales, sostenidas en suero de apolipoproteína B y colesterol LDL, así como de otros

10 parámetros lipídicos, y es por tanto un agente útil para el tratamiento de la hipercolesterolemia.

Ejemplo 4

Tratamientos de carga y mantenimiento

Con el fin de tratar sujetos que padecen enfermedades relacionadas con la producción de apolipoproteína B o colesterol LDL, se analizó una serie de diferentes regímenes de cargas y de mantenimiento para estudiar su

15 eficacia terapéutica. Los sujetos se tratan con ISIS 301012 tal y como se describe a continuación:

El grupo A recibe una fase de carga lenta, durante la cual se administran 4 dosis de 200 mg de ISIS 301012 durante 11 días. Esta fase de carga lenta está seguida por una fase de mantenimiento de 11 semanas, durante la cual se administra una dosis de 200 mg de ISIS 301012 cada dos semanas.

El grupo B recibe una fase de carga lenta, durante la cual se administran 4 dosis de 200 mg de ISIS 301012

20 durante 11 días. Esta fase de carga lenta está seguida por una fase de mantenimiento de 11 semanas, durante la cual se administra una dosis de 100 mg de ISIS 301012 cada dos semanas.

El grupo C recibe una fase de carga lenta, en la que 3 dosis de 200 mg de ISIS 301012 se administran semanalmente durante tres semanas. Esta fase de carga lenta está seguida por una fase de mantenimiento de 3 meses, durante la cual se administra una dosis de 200 mg de ISIS 301012 una vez al mes.

25 El grupo D recibe una fase de carga rápida, durante la cual se administran 3 dosis de 200 mg de ISIS 301012 durante 7 días. Esta fase de carga rápida está seguida por una fase de mantenimiento de 11 semanas, durante la cual se administra una dosis de 200 mg de ISIS 301012 cada dos semanas.

El grupo E recibe una fase de carga rápida, durante la cual se administran 3 dosis de 200 mg de ISIS 301012 durante 7 días. Esta fase de carga rápida está seguida por una fase de mantenimiento de 3 meses, durante la

30 cual se administra una dosis de 200 mg de ISIS 301012 una vez al mes.

El grupo F recibe solamente una fase de mantenimiento, durante la cual se administra una dosis de 200 mg de ISIS 301012 una vez a la semana durante 13 semanas.

El grupo G recibe solamente una fase de mantenimiento, durante la cual se administra una dosis de 200 mg de ISIS 301012 una vez cada dos semanas durante 13 semanas.

35 Se descubrió que el tratamiento con ISIS 301012 de los sujetos en los grupos A, B, C, D, E, F y G proporciona beneficios terapéuticos. Los beneficios terapéuticos incluyen la reducción en suero de colesterol LDL, apolipoproteína B, triglicéridos, colesterol total, colesterol no HDL, colesterol VLDL, lipoproteína (a), la proporción LDL:HDL y la proporción apolipoproteína B:apolipoproteína A-1, respecto al valor de referencia. Se ha encontrado que no hay ningún cambio en los niveles de colesterol HDL. Las diferencias en la aparición y el grado de los beneficios terapéuticos se utilizan para evaluar la eficacia terapéutica de cada régimen de dosificación.

Ejemplo 5

Hipercolesterolemia familiar homocigótica

La hipercolesterolemia familiar (HF) es un trastorno metabólico autosómico dominante, caracterizado por colesterol LDL muy elevado y una aparición prematura de aterosclerosis. Los síntomas clínicos son el resultado del desarrollo de depósitos de colesterol LDL en la piel, los tendones (xantomas) y placas arteriales (ateromas). El principal defecto genético de la FH es una mutación en el gen del receptor de LDL (LDL-R). El LDL-R facilita la captación de colesterol LDL en las células del hígado, en donde es metabolizado, dando lugar a la liberación de colesterol para uso metabólico. Defectos en el LDL-R dan como resultado una absorción ineficaz del colesterol LDL, que a su vez conduce a un aclaramiento plasmático retrasado del colesterol LDL. La mayor permanencia del colesterol LDL en el plasma permite su absorción por fagocitos y otras células, que depositan el colesterol LDL externo y se producen xantomas y ateromas.

La prevalencia de individuos homocigotos en todo el mundo es de 1:1.000.000; aproximadamente 300 sujetos HF homocigóticos residen en los Estados Unidos. Debido al efecto fundador, algunos países tienen una tasa de prevalencia más alta, por ejemplo, Canadá francófona, Sudáfrica, Finlandia e Islandia. Casi todos los sujetos con HF homocigótica desarrollan xantomas con 5 años de edad y aterosclerosis antes de la edad adulta. A pesar del tratamiento con las actuales terapias reductoras del colesterol, son pocos los sujetos con HF homocigótica que logran los objetivos del tratamiento. Por lo tanto, los sujetos HF homocigóticos necesitan otras opciones terapéuticas.

ISIS 301012 es proporcionado a sujetos adultos con HF como una solución de 200 mg/mL en 1 ml de volumen total y se administra por vía subcutánea como una única inyección en el abdomen o en el muslo. En algunos individuos, la dosis se divide y se administra como 2 o 3 inyecciones no seguidas en el abdomen o en el muslo.

Un total de 12 dosis de ISIS 301012 se administran por vía subcutánea o intravenosa. La primera dosis se administra el día 1 del estudio, mientras que las 11 dosis restantes se administran comenzando el día 8 y a continuación de forma semanal, en donde los sujetos reciben una dosis de 200 mg de ISIS 301012.

Un grupo de sujetos HF pediátricos (con edades de 8 a 17 años) también se tratan, en donde la dosificación se basa en el peso corporal en el momento del examen. Los sujetos pediátricos que pesan al menos 25 kg pero menos de 37,5 kg, reciben una primera dosis de ISIS 301012 de 50 mg, seguida de una dosis de ISIS 301012 de 100 mg durante el resto del estudio. Los sujetos que pesan por lo menos 37,5 kg pero menos de 50 kg, reciben una primera dosis de 100 mg, seguida de dosis semanales de 150 mg durante el resto del estudio. Sujetos pediátricos que pesan más de 50 kg, reciben la dosis de adulto descrita anteriormente.

Después de la pauta de tratamiento, se encuentra que cada sujeto tiene niveles reducidos de colesterol LDL, terapéuticamente relevantes, en relación con el valor de referencia (pretratamiento) de colesterol LDL. También se encuentra que los sujetos han reducido los niveles en suero de proteína apolipoproteína B, triglicéridos, colesterol VLDL, lipoproteína (a) y colesterol total, en comparación con el valor de referencia. En consecuencia, ISIS 301012 proporciona un beneficio terapéutico a los individuos tratados con este compuesto.

Ejemplo 6

Hipercolesterolemia familiar heterocigótica

La prevalencia de individuos que son heterocigotos para la hipercolesterolemia familiar es aproximadamente de 1:500, residiendo aproximadamente 500.000 sujetos heterocigotos para HF en los Estados Unidos. Mientras que los sujetos HF homocigóticos tienen dos copias de un alelo mutado del receptor de LDL, los HF heterocigóticos tienen un alelo mutado del receptor de LDL. Los sujetos HF heterocigóticos generalmente desarrollan xantomas en la 3ª década de la vida y aterosclerosis en la 4ª década. Aproximadamente el 30% de las personas diagnosticadas con HF ya tiene antecedentes de enfermedad cardiovascular. A pesar de la terapia máxima, aproximadamente el 20% de estos sujetos son incapaces de alcanzar los objetivos del tratamiento. Por lo tanto, los sujetos HF heterocigóticos se consideran una población que necesita tratamientos alternativos para reducir el colesterol. Por esta razón, los sujetos HF heterocigóticos se eligen para el tratamiento con ISIS 301012.

Las dosis de ISIS 301012 se administran en forma de inyección subcutánea en el abdomen o en el muslo, una vez a la semana durante 12 semanas. La primera dosis de ISIS 301012 se administra como una dosis de 100 mg. Si los sujetos toleran el fármaco del estudio durante la primera semana, todas las dosis posteriores de ISIS 301012 son de 200 mg (semanas 2 a 12). ISIS 301012 se suministra como un 1 mL de una solución de 200 mg/mL y las dosis de 100 y 200 mg de ISIS 301012 se administran en volúmenes de 0,5 y 1,0 mL, respectivamente.

Después de la pauta de tratamiento, se encuentra que cada sujeto tiene niveles reducidos de colesterol LDL, terapéuticamente relevantes, en relación con el valor de referencia (pretratamiento) del colesterol LDL. También

5 se encuentra que los sujetos han reducido los niveles en suero de proteína apolipoproteína B, triglicéridos, colesterol VLDL, lipoproteína (a) y colesterol total, en comparación con el valor de referencia. En consecuencia, ISIS 301012 proporciona un beneficio terapéutico a los individuos tratados con este compuesto.

Ejemplo 7

Concentración plasmática mínima objetivo

10 Un sujeto humano que tiene niveles elevados de colesterol es tratado con el oligonucleótido ISIS 301012 dirigido a la apolipoproteína B. Al sujeto se administran primero dosis de carga de ISIS 301012, que se calculan para que den como resultado una concentración plasmática mínima de al menos 5 ng/dL. En este caso, el sujeto recibe una fase de carga lenta, durante la cual se administran 4 dosis de ISIS 301012 de 200 mg durante 11 días. Después de la fase de carga lenta, el sujeto es tratado con dosis de mantenimiento de ISIS 301012, que se

15 calculan para dar como resultado una concentración plasmática mínima de al menos 5 ng/dL. En este caso, el sujeto es tratado semanalmente con dosis de mantenimiento de ISIS 301012 de 200 mg. Las concentraciones plasmáticas se determinan con el análisis farmacocinético de muestras de sangre recogidas durante y después de los períodos de dosificación. Después de varios meses de tratamiento, el sujeto solo recibe tratamientos mensuales o trimestrales con concentraciones apropiadas de ISIS 301012, con el fin de mantener una concen

20 tración plasmática mínima de al menos 5 ng/dL.

Otros sujetos reciben dosis de una fase de carga rápida, que se calculan para dar como resultado una concentración plasmática mínima de al menos 5 ng/dL. En este caso, el sujeto recibe 3 dosis de ISIS 301012 de 200 mg que se administran más de 7 días. Después de la fase de carga rápida, el sujeto es tratado con dosis de mantenimiento de ISIS 301012, que se calculan para dar como resultado una concentración plasmática mínima 25 de al menos 5 ng/dL. En este caso, el sujeto es tratado semanalmente con dosis de mantenimiento de ISIS 301012 de 200 mg. Las concentraciones plasmáticas se determinan con el análisis farmacocinético de muestras de sangre recogidas durante y después de los períodos de dosificación. Después de varios meses de tratamiento, el sujeto solo recibe tratamientos mensuales o trimestrales con concentraciones apropiadas de ISIS 301012, con el fin de mantener una concentración plasmática mínima de al menos 5 ng/dL. Se descubrió que tratando al

30 sujeto para que tenga una concentración plasmática mínima de 5 ng/dL, da como resultado una reducción superior al 10% en niveles en suero de apolipoproteína B, colesterol LDL, triglicérido y colesterol total.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Geary, Richard S. Yu, Zhengrong Crooke, Rosanne M.

5 <120> METODOS PARA MODULAR LOS NIVELES DE LIPOPROTEÍNA Y COLESTEROL EN SERES HUMANOS

<130> ISIS.009VPC

<150> 60/612.831

<151> 2004-09-23 10 <150> 60/600.785

<151>

<160> 3

<170> FastSEQ parar Windows Versión 4.0

<210> 1 15 <211> 14121

<212> ADN

<213> H. sapiens

<400> 1

5: <210> 2 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia artificial

<220> <223> Oligonucleótido

<400> 2 gcctcagtct gcttcgcacc: 20

10: <210> 3 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia artificial

15: <220> <223> Oligonucleótido

<400> 3 gcctcagtct gctttacacc: 20

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un oligonucleótido con la secuencia de bases nucleicas GCCTCAGTCTGCTTCGCACC (SEQ ID NO:2) que inhibe la expresión de la apolipoproteína B, para uso en la reducción de los niveles de partículas pequeñas de LDL en un sujeto humano que muestra un nivel elevado de partículas pequeñas de LDL, en donde el nivel total

5 de colesterol LDL en dicho sujeto no es elevado.
2. El oligonucleótido de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho oligonucleótido es un oligonucleótido quimérico con una longitud de 20 nucleótidos, compuesto por una región “interna” central que consiste en diez 2’-desoxinucleótidos, que está flanqueada en ambos lados (direcciones 5’ y 3’) por “alas” de cinco nucleótidos, compuestas de 2’-O-metoxietil nucleótidos, en donde los enlaces internucleósidos son de tipo fosforotioato a lo

10 largo del oligonucleótido, y en donde todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.