ES2398096T3 - Anticuerpo que enlaza con la integrina alfa4beta7 y su uso para tratar la enfermedad intestinal inflamatoria - Google Patents

Abstract

El uso de una inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma, para la fabricación de un medicamento para tratar a un humano que tiene enfermedad intestinal inflamatoria, en donde dicho medicamento es para la administración en una única dosis o en una dosis inicial seguida por una o más dosis posteriores en donde no son administrados más de alrededor de 8 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de un mes, y en donde la mencionada inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende una región que enlaza con el antígeno de origen no humano y al menos una parte de un anticuerpo de origen humano y tiene especificidad de enlace para el complejo ~α4ß7, y en donde dicha región que enlaza con el antígeno comprende tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena ligera y tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos enunciada a continuación: cadena ligera: CDR1 SEQ ID NO:9 CDR2 SEQ ID NO:10 CDR3 SEQ ID NO:11 cadena pesada: CDR1 SEQ ID NO:12 CDR2 SEQ ID NO:13 CDR3 SEQ ID NO:14.

Description

Anticuerpo que enlaza con la integrina α4β7 y su uso para tratar la enfermedad intestinal inflamatoria.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Los receptores de la integrina son importantes para regular tanto la regulación de linfocitos como el reclutamiento a los sitios de inflamación (Carlos, T.M. y Harlan, J.M., Blood, 84:2068-2101 (1994)). La integrina α4β7 humana tiene varios ligandos, uno de los cuales es la adresina vascular de la mucosa MAdCAM-1 (Berlin, C., y otros, Cell 74:185-195 (1993); Erle, D.J., y otros, J. Immunol. 153:517-528 (1994)) expresada en vénulas endoteliales altas en nódulos linfáticos mesentéricos y placas de Peyer (Streeter, P.R. y otros, Nature 331:41-46 (1988)). Como tal, la integrina α4β7 actúa como un receptor de guiado que media la migración de linfocitos al tejido linfoide de la mucosa intestinal (Schweighoffer, T., y otros, J. Immunol. 151-717 -729 (1993)). Además, la integrina α4β7 interactúa con la fibronectina y la molécula de adhesión celular vascular-(VCAM-1).

La enfermedad intestinal inflamatoria (EII), como la colitis ulcerativa y la enfermedad de Crohn, por ejemplo, puede ser una enfermedad debilitadora y progresiva que implica la inflamación del tracto gastrointestinal. Afectando a una estimación de dos millones de personas sólo en los Estados Unidos, los síntomas incluyen dolor abdominal, calambres, diarrea y sangrado rectal. Los tratamientos de la EII han incluido fármacos antiinflamatorios (como, corticoesteroides y sulfasalazina), fármacos inmunosupresivos (como, 6-mercaptopurina, ciclosporina y azatioprina) y cirugía (como, colectomía). Podolsky, New Engl. J. Med., 315:928-937 (1991) y Podolsky, New Engl. J. Med., 325:1008-1016 (1991). Sin embargo, dichos agentes terapéuticos no han sido efectivos en mantener la remisión de la EII.

Los anticuerpos contra la integrina α4β7 humana, como la el anticuerpo monoclonal murino Act-1 (mAb Act1), interfieren con la integrina α4β7 enlazando con la molécula-1 de adhesión celular de la adresina de la mucosa (MAdCAM-1) presente en vénulas endoteliales altas en los nódulos linfáticos de la mucosa. El Act-1 fue originalmente aislado por Lazarovits, A.I., y otros, j. Immunol. 133:1857-1862 (1984), de ratones inmunizados con linfocitos T-específicos del toxoide del tétano humanos y se informó que era un anticuerpo IgG1/x de ratón. Análisis más recientes del anticuerpo por Schweighoffer, T y otros, J. Immunol. 151:717-729 (1993) demostraron que puede enlazar con un subconjunto de linfocitos T CD4+ de la memoria humana que expresan selectivamente la integrina α4β7. Sin embargo, un problema serio usando anticuerpos murinos para las aplicaciones terapéuticas en humanos es que son altamente inmunogénicos en humanos e inducen rápidamente una respuesta de anticuerpos antimurinos (HAMA), lo que reduce la eficacia del anticuerpo del ratón en pacientes y puede evitar la administración continuada. La respuesta HAMA resulta en un despeje rápido del anticuerpo de ratón, limitando severamente cualquier beneficio terapéutico.

Gordon, F.H. y otros, Gastroenterology, vol. 116, no. 4, página A726, XP002179755, (resumen G3152), divulga el uso del AntegrenTM, un anticuerpo humanizado recombinante a una integrina α4 con actividad contra las integrinas α4β1 y α4β7, en pacientes con enfermedad de Crohn (CD) activa a una dosis de 3 mg/kg.

Existe una necesidad de enfoques terapéuticos mejorados a enfermedades intestinales crónicas y otros desórdenes inflamatorios de los tejidos de la mucosa.

RESUMEN DE LA INVENCION

La invención se refiere al uso de inmunoglobulina humanizada o un fragmento que enlaza con el antígeno de la misma, para la fabricación de un medicamento para tratar a un humano que tiene enfermedad intestinal inflamatoria, en donde dicho medicamento es para la administración en una única dosis o en una dosis inicial seguida por una o más dosis posteriores en donde no se administran más de alrededor de 8 mg de inmunoglobulina

o fragmento por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de un mes, y en donde dicha inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende una región que enlaza con el antígeno de origen no humano y al menos una parte de un anticuerpo de origen humano y tiene especificidad de enlace para el complejo α4β7, y en donde dicha región que enlaza con el antígeno comprende tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena ligera y tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos enunciada a continuación:

cadena ligera: CDR1 SEQ ID NO:9

CDR2 SEQ ID NO:10

CDR3 SEQ ID NO:11

cadena pesada: CDR1 SEQ ID NO:12

CDR2 SEQ ID NO:13

CDR3 SEQ ID NO:14.

La invención también se refiere al uso de una inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma, para la fabricación de un medicamento para inhibir la recaída y/o reaparición de la enfermedad intestinal inflamatoria inactiva en donde dicho medicamento es para la administración en una única dosis o en una dosis inicial seguida por una o más dosis posteriores en donde no se administran más de alrededor de 8 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de 30 días y en donde dicho fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende un enlace con el antígeno de origen no humanos y al menos una parte de un anticuerpo de origen humano y tiene especificidad de enlace para el complejo α4β7, y en donde dicha región que enlaza con el antígeno comprende tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena ligera y tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos enunciada a

continuación:

cadena ligera:

CDR1 SEQ ID NO:9

CDR2 SEQ ID NO:10

CDR3 SEQ ID NO:11

cadena pesada:

CDR1 SEQ ID NO:12

CDR2 SEQ ID NO:13

CDR3 SEQ ID NO:14.

El LDP-02 es un anticuerpo preferido para la administración. La inmunoglobulina puede ser para la administración en múltiples dosis y el intervalo entre dosis puede ser al menos 1 día o más largo. En realizaciones particulares, el intervalo entre dosis puede ser al menos de alrededor de 7, 14 ó 21 días o alrededor de un mes. En una realización, la cantidad de inmunoglobulina para la administración por dosis puede ser una cantidad que es suficiente para conseguir alrededor del 50% o más de saturación de los sitios de enlace del α4β7 en linfocitos circulantes y/o alrededor del 50% o más de inhibición de la expresión de integrina α4β7 en la superficie de linfocitos

circulantes durante un periodo de al menos alrededor de 10 días después de la administración de la dosis. En otra realización, la cantidad de: inmunoglobulina para la administración por dosis puede ser una cantidad que es suficiente para conseguir y mantener una concentración sérica de dicha inmunoglobulina de al menos alrededor de 1 µg/mL durante un periodo de alrededor de 10 días después de la administración de la dosis.

La inmunoglobulina puede ser para ser administrada sola o junto con uno o más agentes para tratar la enfermedad intestinal inflamatoria. Por ejemplo, la inmunoglobulina puede ser para la administración con esteroides, agentes inmunosupresores, agentes antiinflamatorios no esteroideos o inmunomoduladores. En una realización preferida, la inmunoglobulina es para tratar a un humano que tiene la enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La FIGURA 1 es una ilustración de la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:1) y la secuencia de aminoácidos deducida (SEQ ID NO:2) de la región de cadena ligera del Act-1 del ratón (Mus musculus) unida con la secuencia del péptido señal de cadena ligera del Act-1. La FIGURA 2 es una ilustración de la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:3) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO:4) de la región variable de cadena pesada del anticuerpo Act-1 de ratón. La secuencia de nucleótidos de la región variable está unida con una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de péptido señal de cadena pesada del Act-1 de ratón deducida, para producir una secuencia compuesta. (La identidad del cebador que amplifica la región de cadena pesada se dedujo de la secuencia degenerada, y la secuencia de aminoácidos para el péptido señal se derivó del cebador, secuencia abajo y secuencias de otros péptidos señal. El péptido señal mostrado puede no ser idéntico al del hibridoma del Act1). La FIGURA 3 es una ilustración de la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:5) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO:6) de una parte de la cadena pesada de un anticuerpo Act-1 humanizado (LDP02) con un péptido señal de cadena pesada. La FIGURA 4 es una ilustración de la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:7) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO:8) de una parte de la cadena ligera de un anticuerpo Act-1 humanizado con un péptido señal de cadena ligera, La FIGURA 5 es una ilustración de la secuencia de aminoácidos de las regiones determinantes complementarias de cadena ligera (CDR1, SEQ ID NO: 9; CDR2, SEQ ID NO:10; CDR3, SEQ ID NO:11) y las regiones determinantes de cadena pesada (CDR1, SEQ ID NO: 12; CDR2, SEQ ID NO:13; CDR3, SEQ ID NO:14)del anticuerpo murino Act-1 y LDP-02. La FIGURA 6 es un gráfico que muestra los niveles de LDP-02 séricos medios (µg/mL) en hombres sanos durante el tiempo que sigue a una única administración de LDP-02. Los niveles de LDP-02 sérico medios se vuelven insignificantes en el días 36 después de la administración de 0,15 mg/kg por inyección intravenosa (IV)(-♦-) o subcutánea (SC)(-■-) y después de la administración de 0,5 mg/kg por inyección intravenosa (-▲-). Sin embargo el LDP-02 sérico era todavía medible más allá del día 36 después de la administración de 1,5 mg/kg (-x) o 2,5 mg/kg (-*-) por inyección intravenosa. La FIGURA 7 es un gráfico que muestra la pérdida persistente de la señal de α4β7 (detectada con Act-1 mAb) después de la administración del LDP-02. alrededor del 90% de la señal de α4β7 se perdió rápidamente (MESF = 10%) después de la administración del LDP-02 y persistió después de la administración de todas las dosis de LDP-02. Entre alrededor del día 7 y el día 22, la señal de α4β7 empezó a volver a la línea base para el grupo de dosis IV de 0,15 mg/kg (-■-) y para el grupo de dosis SC de0,15 mg/kg (-♦-). Entre el día 22 y el día 36 la señal de α4β7 empezó a volver a la línea base para el grupo de dosis (-▲-) IV de 0,5 mg/kg. En las dosis de LDP02 más altas estudiadas (1,5 mg/kg (-x) y 2,5 mg/kg (-*-), la pérdida de la señal α4β7 perduró durante más de 36 días después de las dosis IV únicas. Para el grupo de dosis de 2,5 mg/kg (-*-), la pérdida de la señal de α4β7 perduró hasta alrededor del Día 70 (datos proporcionados en la presente en el Apéndice al Estudio L297-007). MESF: fluorescencia soluble equivalente media. La FIGURA 8 es un gráfico que muestra los niveles de LDP-02 séricos medidos (µg/mL) en pacientes con colitis ulcerosa a lo largo del tiempo después de una única administración de LDP-02. Los niveles de LDP-02 séricos medios subieron rápidamente después de la administración del LDP-02. La concentración de LDP-02 sérico cayó por debajo de 1,0 µg/mL en pacientes administrados con LDP-02 a 0,15 mg/kg por inyección intravenosa (-▲-= o subcutánea (-●-) en los diez días después de la dosis. Sin embargo, las concentraciones de LDP-02 séricas permanecieron por encima de 1,0 µg/mL durante alrededor de 20 días después de la administración de 0,5 mg/kg por inyección intravenosa (-■-). La concentración sérica de LDP-02 permaneció por encima de 1 µg/mL durante alrededor de 60 días después de la administración de 2,0 mg/kg por inyección intravenosa (-▼-). La FIGURA 9 es un gráfico que muestra la pérdida persistente de la señal de α4β7 (detectada con Act-1 mAB) después de la administración de LDP-02. Alrededor del 90% de la señal de α4β7 se perdió rápidamente (MESF = = 10%) después de la administración de LDP-02 y la duración de la pérdida de señal fue dependiente de la dosis. Comenzando alrededor del Día 10, la señal de α4β7 comenzó a retornar a la línea de base para el grupo administrado con 0,15 mg/kg de LDP-02 por inyección IV (-■-) o SC (-♦-). Sin embargo, la señal de α4β7 comenzó a retornar a la línea de base entre el día 30 y el día 60 para el grupo administrado con 0,5 mg/kg (-∆-) de forma intravenosa, y después del día 60 para el grupo administrado con 2,0 mg/kg (-x-) intravenosamente (datos proporcionados en la presente por el Apéndice al Estudio L297006). MESF: fluorescencia soluble equivalente media.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

La inmunoglobulina humanizada descrita tiene especificidad de enlace para la integrina α4β7 (por ejemplo, α4β7 mamífera( por ejemplo, α4β7 humana (Homo sapiens)). Preferiblemente, las inmunoglobulinas humanizadas pueden enlazar con la integrina α4β7 con una afinidad de al menos alrededor de 107M-1, preferiblemente al menos alrededor de 108M-1, y más preferiblemente al menos alrededor de 109M-1. La inmunoglobulina humanizada puede incluir una región que enlaza con el antígeno de origen no humano que estorba a la integrina α4β7 y una región constante derivada de una región constante humana. La inmunoglobulina humanizada que enlaza con la integrina α4β7 puede comprender una región determinante complementaria de origen no humano y una región marco variable de origen humano, y si se desea, una región constante de origen humano. Por ejemplo, la inmunoglobulina humanizada puede comprender una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la cadena ligera comprende una región determinante complementaria derivada de una anticuerpo de origen no humano que enlaza con la integrina

α4β7 y una región marco derivada de una cadena ligera de origen humano, y la cadena pesada comprende una

región determinante complementaria derivada de un anticuerpo de origen no humano que enlaza con la integrina α4β7 y una región marco derivada de una cadena pesada de origen humano.

Las inmunoglobulinas de origen natural tienen una estructura de núcleo común en la que dos cadenas ligeras idénticas (alrededor de 24 kD) y dos cadenas pesadas idénticas (alrededor de 55 ó 70 kD) forman un tetrámero. La parte amino-terminal de cada cadena se conoce como la región variable (V) y se puede distinguir de las regiones constantes conservadas (C) del resto de cada cadena. Dentro de la región variable de la cadena ligera hay una parte C-terminal conocida como la región J. Dentro de la región variable de la cadena pesada, hay una región D además de la región J. La mayoría de la variación de la secuencia de aminoácidos en las inmunoglobulinas se confina a tres localizaciones separadas en las regiones V conocidas como regiones hipervariables o regiones determinantes complementarias (CDRs) que están implicadas directamente en el enlace con antígenos. Partiendo del término amino, estas regiones están designadas CDR1, CDR2 y CDR3, respectivamente. Las CDRs se mantienen en su lugar por regiones marco más conservadas (FRs). Partiendo del término amino, estas regiones están designadas FR1, FR2, FR3, y FR4, respectivamente. Las localizaciones de las regiones CDR y FR y un sistema de numeración han sido definidos por Karat y otros. (Kabat, E.A. y otros., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)).

Las inmunoglobulinas humanas se pueden dividir en clases y subclases, dependiendo del isótopo de la cadena pesada. Las clases incluyen IgG, IgM, IgA, IgD e IGE, en las que las cadenas pesadas son del tipo gamma

(γ), mu (μ), alfa (α)m, delta (δ) o épsilon (ε), respectivamente. Las subclases incluyen IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IGA2, en las que las cadenas pesadas son del tipo γ1, γ2, γ3, γ4, α1 y α2, respectivamente. Las moléculas de inmunoglobulina humanas de una clase o subclase seleccionada pueden contener una cadena ligera kappa (κ) o lambda (λ). Ver, por ejemplo, Cellular and Molecular Immunology, Wonsiewicz, M.J., Ed., Capítulo 45, pp. 41-50, W.

B. Saunders Co, Philadelphia, PA (1991); Nisonoff, A., Introduction to Molecular Immunology, 2ª Ed., Capítulo 4, pp. 45-65, Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA (1984).

El término "inmunoglobulina" como se usa en la presente incluye anticuerpos completos y fragmentos biológicamente funcionales de los mismos. Dichos fragmentos biológicamente funcionales de los mismos mantienen al menos una función de enlace con antígenos de un anticuerpo de longitud completa correspondiente (por ejemplo especificidad para la α4β7 del anticuerpo Act-1), y preferiblemente, mantienen la capacidad de inhibir la interacción de la α4β7 con uno o más de sus ligandos (por ejemplo, MAdCAM-1, fibronectina). En una realización particularmente preferida, los fragmentos biológicamente funcionales pueden inhibir el enlace de la α4β7 con la adresina de la mucosa (MAdCAM-1). Ejemplos de fragmentos de anticuerpos biológicamente funcionales que pueden ser administrados como se describe en la presente incluyen fragmentos capaces de enlazar con una integrina α4β7, como anticuerpos de cadena sencilla, fragmentos, Fv, Fab, Fab' y F(ab')2. Dichos fragmentos pueden ser producidos por escisión enzimática o por técnicas recombinantes. Por ejemplo, la escisión de la papaína o la pepsina puede generar fragmentos Fab o F(ab')2, respectivamente. También se pueden usar otras proteasas con la especificidad de sustrato requerida para generar Fab, F(ab')2 u otros fragmentos que enlazan con el antígeno. Los anticuerpos pueden ser también producidos de una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpos en los que uno o más codones de parada han sido introducidos corriente arriba del sitio de parada natural. Por ejemplo, un gen quimérico que codifica una parte de la cadena pesada de F(ab')2 puede ser designado para incluir secuencias de ADN que codifican el domino CH1 y la región bisagra de la cadena pesada.

El término "inmunoglobulina humanizada" como se usa en la presente se refiere a una inmunoglobulina (anticuerpo) que comprende partes de inmunoglobulinas de origen diferente, en donde al menos una parte es de origen humano. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado puede comprender partes derivadas de una inmunoglobulina de origen no humano con la especificidad requisito, como un ratón, y de secuencias de inmunoglobulina de origen humano (por ejemplo, inmunoglobulina quimérica), unidas juntas químicamente por técnicas convencionales (por ejemplo, sintética o preparadas como un polipéptido contiguo usando tecnología de ADN recombinante (por ejemplo, ADN que codifica las partes de proteínas del anticuerpo quimérico puede ser expresado para producir una cadena de polipéptidos contiguos). Otro ejemplo de una inmunoglobulina humanizada es una inmunoglobulina que contiene una o más cadenas de inmunoglobulina que comprenden una CDR derivada de un anticuerpo de origen no humano y una región marco derivada de una cadena ligera y/o pesada de origen humano (por ejemplo, anticuerpos CDRinjertados con o sin cambios de marco). Los anticuerpos de cadena sencilla quiméricos o CDR-injertados también están abarcados por el término inmunoglobulina humanizada. Ver, por ejemplo, Cabilly y otros., Patente U.S. Nº 4.816.567; Cabilly y otros., Patente Europea Nº 0.125.023 B1; Boss y otros., Patente U.S. Nº 4.816.397; Boss y otros, Patente Europea Nº 0.120.694 B1, Neuberger, M.S. y otros, WO 86/01533; Neuberger, M.S. y otros, Patente Europea Nº 0.194.276 B1; Winter, Patente U.S. Nº 5.225.539; Winter, Patente Europea Nº 0.239.400 B1; Queen y otros, Patente Europea Nº 0 451 216 B1; Padlan, E.A. y otros, Patente Europea. Nº 0.519.596 B1. Ver también, Ladner y otros, Patente U.S. Nº 4.946.778; Huston, Patente U.S. Nº 5.476.786; y Bird, R.E. y otros, Science, 242: 423-426 (1988)), referentes a anticuerpos de cadena sencilla. En realizaciones particulares, la inmunoglobulina humanizada puede incluir una cadena de inmunoglobulina (por ejemplo, cadena pesada) que tiene una región variable de origen no humano (por ejemplo, origen murino) y al menos una parte de una región constante humana (por ejemplo, Cγ1), y una cadena de inmunoglobulina (por ejemplo, cadena ligera) en donde al menos una CDR es de origen no humano (por ejemplo origen murino) y las regiones marco (FR1, FR2, FR3, FR4) y, opcionalmente, la región constante (por ejemplo, Cκ, Cλ) son de origen humano.

La región que enlaza con el antígeno de la inmunoglobulina humanizada (la parte no humana) puede estar derivada de una inmunoglobulina de origen no humano (referida como una inmunoglobulina donante) que tiene una especificidad de enlace para la integrina α4β7. Por ejemplo, una región que enlaza con el antígeno adecuada puede estar derivada de un anticuerpo monoclonal Act-1 murino (Lazarovits, A.I. y otros, J. Immunol., 133(4): 1857-1864 (1984)). Otras fuentes incluyen anticuerpos específicos de la integrina α4β7 obtenidos de fuentes no humanas, como roedores (por ejemplo, ratón, rata), conejos, cerdos, cabras o primates no humanos (por ejemplo, monos). Se pueden hacer otros anticuerpos policlonales o monoclonales, como anticuerpos que enlazan con el mismo epítopo o con un epítopo similar como el anticuerpo Act-1 (por ejemplo Kohler y otros, Nature, 256:495-497 (1975); Harlow y otros, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor, NY); y Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2 (Suplemento 27, Verano ’94), Ausubel y otros, Eds. (John Wiley & Sons: New York, NY), Capítulo 11 (1991)).

Por ejemplo, se pueden producir anticuerpos contra un inmunógeno apropiado en una mamífero adecuado (por ejemplo, un ratón, rata, conejo, oveja). La preparación de una antígeno inmunizante, y la producción de un anticuerpo monoclonal se puede realizar usando cualquier técnica adecuada. Se han descrito una variedad de métodos (ver por ejemplo, Kohler y otros, Nature, 256: 495-497 (1975) y Eur. J. Immunol. 6: 511-519 (1976); Milstein y otros, Nature 266: 550-552 (1977); Koprowski y otros, Patente U.S. Nº 4.172.124; Harlow, E. y D. Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Harbor, NY); Current Protocols In Molecular Biology, Vol. 2 (Suplemento 27, Verano ’94), Ausubel, F.M. y otros, Eds., (John Wiley & Sons: New York, NY), Capítulo 11, (1991)). Por ejemplo, los agentes inmunizantes adecuados incluyen células que tiene a4p7, fracciones de membrana que contienen α4β7, fragmentos inmunogénicos de inmunógenos adecuados incluyen α4β7, un péptido β4 conjugado con un portador adecuado y similares. Las células productoras de anticuerpos (por ejemplo, un linfocito9 pueden ser aisladas de, por ejemplo, los nódulos linfáticos o el bazo de un animal inmunizado.

Las células pueden ser entonces fusionadas con una célula inmortalizada adecuada (por ejemplo, una línea celular de mieloma (por ejemplo, SP2/0, P3x63Ag8.653)), formando de este modo un hibridoma. Las células fusionadas pueden ser aisladas empleando técnicas de cultivo selectivas. Las células que producen anticuerpos con la especificidad deseada pueden ser seleccionadas usando un ensayo adecuado (por ejemplo, ELISA). Se pueden usar otros métodos adecuados de producir o aislar anticuerpos (anticuerpos humanos, anticuerpos no humanos de la especificidad requisito, incluyendo, por ejemplo, métodos que seleccionan anticuerpos recombinantes de una biblioteca (por ejemplo, una biblioteca de presentación de fagos). Los animales transgénicos capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos (por ejemplo, XenoMouseTM (Abgenix, Fremont, CA) pueden ser producidos usando métodos adecuados (ver por ejemplo, WO 98/24893 (Abgenix), publicada el 11 de Junio de 1998; Kucherlapate, R. y Jakobovits, A., Patente U.S. Nº 5.939.598; Jakobovits y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551-2555 (1993); Jakobovits y otros, Nature, 362: 255-258 (1993)). Se han descrito métodos adicionales para la producción de animales transgénicos capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos (por ejemplo, Lonberg y otros, Patente U.S. Nº 5.545.806; Surani y otros, Patente U.S. Nº 5.545.807; Lonberg y otros, WO97/13852).

La región que enlaza con el antígeno de la inmunoglobulina humanizada comprende CDRs de origen no humano derivadas de las regiones variables de cadena ligera y pesada de inmunoglobulinas de origen no humano, como una inmunoglobulina humanizada que incluye sustancialmente cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3, y cadena ligera CDR1, CDR2 y CDR3, de una o más inmunoglobulinas de origen no humano, y la inmunoglobulina humanizada resultante tiene especificidad de enlace para la integrina α4β7. Preferiblemente, las tres CDRs de una cadena seleccionada son sustancialmente las mismas que las CDRs de la cadena correspondiente de un donante, y más preferiblemente, las seis CDRs de las cadenas ligeras y pesadas son sustancialmente las mismas que las CDRs de las cadenas del donante correspondiente. La una o más CDRs de origen no humano tienen las secuencias de aminoácidos de las CDRs del Act-1 Ab murino (SEQ ID NOS: 9-14).

La parte de la inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humanizada que es de origen humano (la parte humana) puede estar derivada de cualquier inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humana adecuada. Por ejemplo, una región constante o parte de la misma, si está presente, puede estar derivada de las cadenas ligeras κ o λ, y/o las cadenas pesadas γ (por ejemplo γ1, γ2, γ3, γ4), μ, α (por ejemplo, α1, α2), δ o e de anticuerpos humanos, incluyendo las variantes alélicas. Se puede seleccionar una región constante particular (por ejemplo, IgG1), variante o porciones de la misma para tejer la función efectora. Por ejemplo, se puede incorporar una región constante mutada (variante) en una proteína de fusión para minimizar el enlace con los receptores Fc y/o la capacidad de fijar el complemento (ver por ejemplo, Winter y otros, GB 2.209.757 B; Morrison y otros, WO 89/07142; Morgan y otros, WO 94/29351, 22 de Diciembre de 1994). El LDP-02 contiene una región constante de cadena pesada (región constante de cadena pesada γ1 humana) que fue modificada para reducir el enlace con los receptores Fcγ humanos. Las modificaciones del Fc del LDP-02 están en las posiciones 235 y 237 (es decir, Leu235-Ala235 y Gly237-Ala237).

Si están presentes, las regiones marco de origen humano (por ejemplo, de la región variable de cadena ligera) están preferiblemente derivadas de una región variable de anticuerpo humano que tiene una similitud de secuencia con la región análoga (por ejemplo, región variable de cadena ligera) del donante de la región que enlaza con el antígeno. Otras fuentes de regiones marco para partes de origen humano de una inmunoglobulina humanizada incluyen secuencias de consenso variables humanas (ver por ejemplo, Kettleborough, C.A. y otros, Protein Engineering 4:773-783 (1991); Carter y otros, WO 94/04679, publicada el 3 de Marzo de 1994)). Por ejemplo, la secuencia del anticuerpo o región variable usada para obtener la parte no humana se puede comparar con las secuencias humanas como se describen en Kabat, E.A., y otros, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health y Human Services, U.S. Government Printing Office (1991). En una realización particularmente preferida, las regiones marco de una cadena de inmunoglobulina humana están derivadas de una región variable humana que tiene al menos un 65 % de identidad de secuencia general, y preferiblemente al menos un 70% de identidad de secuencia general, con la región variable del anticuerpo del donante no humano (por ejemplo, anticuerpo Act-1 de ratón). Una parte humana puede estar también derivada de una anticuerpo humano que tiene al menos alrededor de un 65% de identidad de secuencia, y preferiblemente al menos alrededor de un 70% de identidad de secuencia, dentro de la parte particular (por ejemplo FR) que se está usando, cuando se compara con la parte equivalente (por ejemplo, FR) del donante no humano. La identidad de la secuencia de aminoácidos puede ser determinada usando un algoritmo de alineación de secuencias adecuado, como el sistema Lasergene (DNASTAR, Inc., madison, WI), usando los parámetros por defecto.

En una realización, la inmunoglobulina humanizada comprende al menos una de las regiones marco (FR) derivadas de una o más cadenas de un anticuerpo de origen humano. Así, la FR puede incluir una Fr1 y/o FR2 y/o FR3 y/o FR4 derivadas de uno o más anticuerpos de origen humano. Preferiblemente, la parte humana de una cadena humanizada seleccionado incluye las FR1, FR3, FR3 y FR4 derivadas de una región variable de origen humano (por ejemplo, de una cadena de inmunoglobulina humana, de una secuencia de consenso humana).

Las partes de inmunoglobulina de origen humano y no humano para el uso de preparar anticuerpos humanizados pueden tener secuencias idénticas a inmunoglobulinas o partes de inmunoglobulinas de las que están derivadas o a variantes de las mismas. Dichas variantes incluyen mutantes que difieren por la adición, deleción, o sustitución de uno o más residuos. Como se ha indicado anteriormente, las CDRs que son de origen no humano son sustancialmente las mismas que en el donante no humano, y preferiblemente son idénticas a las CDRS del donante no humano. Se pueden hacer cambios en la región marco, como los que sustituyen un residuo de la región marco de origen humano con un residuo de la posición correspondiente del donante. Se pueden hacer una o más mutaciones en la región marco, incluyendo deleciones, inserciones, y sustituciones de uno o más aminoácidos. Para un anticuerpo o cadena humanizado seleccionado, se pueden diseñar mutaciones de marco adecuadas. Preferiblemente, las inmunoglobulinas humanizadas pueden enlazar con la integrina α4β7 con una afinidad similar o mejor que la del donante no humano. Las variantes pueden ser producidas por una variedad de métodos adecuados, incluyendo mutagénesis de cadenas humanas de aceptador o donante no humano.

Al inmunoglobulina (por ejemplo, inmunoglobulinas humanas y/o humanizadas) que tienen especificidad de enlace para la integrina α4β7 incluyen inmunoglobulinas (incluyendo fragmentos que enlazan con el antígeno) que pueden enlazar determinantes (epítopos9 de la cadena α4 (por ejemplo, mAb HP1/2 (Pulido, y otros, J Biol Chem 266:10241-10245 (1991), MAb 21.6 murino and MAb humanizado 21.6 (Bendig y otros, Patente U.S. Nº 5.840.299)) y/o la cadena β7 del heterodímero α4β7. Por ejemplo, en realizaciones particulares, la inmunoglobulina humana o humanizada pueden enlazar específica o selectivamente con un determinante del complejo α4β7, pero no enlazar determinantes (epítopos) en la cadena α4 o la cadena β7. En una realización, la inmunoglobulina humana o humanizada puede tener especificidad de enlace para un epítopo combinacional en el heterodímeros α4β7. Dicha inmunoglobulina puede enlazar con la α4β7 y no enlazar con la α4β7, por ejemplo. Los anticuerpos que tienen especificidad de enlace para el complejo α4β7 incluyen, el anticuerpo Act-1 murino, y un Act-1 humanizado referido como LDP-02 (ver, WO 98/06248 por LeukoSite, Inc., publicada el 19 de febrero de 1998 y la Patente U.S. Número

7.147.852. En una realización preferida, la inmunoglobulina humanizada tiene al menos una función característica del anticuerpo Act-1 murino, como la función de enlace (por ejemplo, teniendo especificidad para la integrina α4β7, teniendo la misma especificidad epitópica o similar), y/o función inhibidora (por ejemplo, la capacidad de inhibir la

adhesión dependiente de la α4β7 in vitro y//o in vivo, como la capacidad de inhibir la integrina α4β7 que enlaza con la MAdCAM-1 in vitro y/o in vivo, o la capacidad de inhibir el enlace de una célula que tiene la integrina α4β7 a un ligando de la misma (por ejemplo, una célula que tiene MAdCAM-1)). Así, las inmunoglobulinas humanizadas preferidas pueden tener la especificidad de enlace del anticuerpo Act-1 murino, la especificidad epitópica del anticuerpo Act-1 murino (por ejemplo, pueden competir con el Act-1 murino, un anticuerpo Act-1 quimérico, o Act-1 humanizado (por ejemplo, LDP-02) para enlazar con la α4β7 (por ejemplo, en una célula que tiene la integrina α4β7)), y o función inhibidora. Una Ab humanizada particularmente preferida es la LDP-02.

La función de enlace de una inmunoglobulina humana o humanizada que tiene especificidad de enlace con la integrina α4β7 se puede detectar por métodos inmunológicos estándares, por ejemplo usando ensayos que monitorizan la formación de un complejo entre la inmunoglobulina humanizada y la integrina α4β7 (por ejemplo, una fracción de membrana que comprende la integrina α4β7, o una célula que tiene la integrina α4β7, como un linfocito humano (por ejemplo, un linfocito del subconjunto CD4+α4hiβ1lo), la línea celular de los linfocitos humanos o la célula huésped recombinante que comprende el ácido nucleíco que codifica α4 y/o β7 que expresa la integrina α4β7. También se pueden usar ensayos de enlace y/o adhesión u otros métodos adecuados en procesos para la identificación y/o asilamiento de inmunoglobulinas (por ejemplo, inmunoglobulinas humanas y/o humanizadas) (por ejemplo de una biblioteca) con la especificidad requisito (por ejemplo, un ensayo que monitoriza la adhesión entre una célula que tiene una integrina α4β7 y un ligando de la misma (por ejemplo, una segunda célula que expresa MAdCAM, una proteína de fusión MAdCAM inmovilizada (por ejemplo, quimera MAd-CAM-1g), u otros métodos adecuados.

Las partes de inmunoglobulina de origen humano y no humano para el uso de preparar inmunoglobulinas humanizadas incluyen cadenas ligeras, cadenas pesadas y partes de cadenas ligeras y pesadas. Estas partes de inmunoglobulina se pueden obtener o derivar de inmunoglobulinas (por ejemplo, por la síntesis novo de una parte), o se pueden expresar y producir ácidos nucleícos que codifican una inmunoglobulina o cadena de la misma que tienen la propiedad deseada (por ejemplo, enlaza con la integrina α4β7, similitud de secuencia). Las inmunoglobulinas humanizadas que comprenden las partes deseada (por ejemplo, región que enlaza con el antígeno, CDR, FR, región constante) de origen humano y no humano se pueden producir usando ácidos nucleícos sintéticos y/o recombinantes para preparar genes (por ejemplo, ADNc) que codifican la cadena humanizada deseada. Para preparar una parte de una cadena, se pueden introducir uno o más codones de parada en la posición deseada. Por ejemplo, las secuencias de ácidos nucleícos (por ejemplo, ADN) que codifican regiones variables humanizadas recién diseñadas pueden ser construidos usando métodos de mutagénesis PCR para alterar las secuencias de ADN existentes (ver por ejemplo, Kamman, M., y otros Nucl. Acids Res. 17:5404 (1989)). Los cebadores PCR que codifican las nuevas CDRs se pueden hibridizar a una plantilla de ADN de una región variable previamente humanizada que se basa en la misma, o una muy similar, región variable (Sato, K. y otros, Cancer Research 53:851856 (1993)). Si una secuencia de ADN similar no está disponible para el uso como plantilla, un ácido nucleíco que comprende una secuencia que codifica una secuencia de la región variable se puede construir de oligonucleótidos sintéticos (ver por ejemplo, Kolbinger, F., Protein Engineering 8:971-980 (1993)). También se puede incorporar una secuencia que codifica un péptido señal en el ácido nucleíco (por ejemplo, en la síntesis, en el momento de la inserción en un vector). Si la secuencia del péptido señal natural no está disponible, se puede usar una secuencia del péptido señal de otro anticuerpo (ver por ejemplo, Kettleborough, C.A., Protein Engineering 4:773-783 (1991)). Usando estos métodos, los métodos descritos en la presente u otros métodos adecuados, las variantes pueden ser producidas fácilmente. En una realización, las regiones variables clonadas (por ejemplo, de la LDP-02) pueden ser mutagenizadas, y se pueden seleccionar las secuencias que codifican variantes con la especificidad deseada (por ejemplo, de una biblioteca de fagos; ver por ejemplo, Krebber y otros., U.S. 5.514.548; Hoogenboom y otros, WO 93/06213, publicada el 1 de abril de 1993)).

Las inmunoglobulinas humanizadas como se describen son para tratar a un humano que tiene enfermedad intestinal inflamatoria, como la enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa. El tratamiento incluye tratamiento terapéutico

o profiláctico (por ejemplo, terapia de mantenimiento). La enfermedad se puede evitar o retrasar (por ejemplo, aparición retrasada, remisión prolongada o quiescencia) o la severidad de la enfermedad se puede reducir en su totalidad o en parte.

No se administran más de alrededor de 8 mg de inmunoglobulina por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de 1 mes. Por ejemplo, las realizaciones, no se administran más de alrededor de 7 o alrededor de 6 o alrededor de 5 o alrededor de 4 o alrededor de 3 o alrededor de 2 o alrededor de 1 mg de inmunoglobulina por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de 1 mes. Como se usa en la presente, el término "mes" se refiere a un mes de calendario y abarca periodos de 28, 29, 30 y 31 días. Cuando se va a administrar un fragmento que enlaza con el antígeno de una inmunoglobulina humana o humanizada, la cantidad que se administra durante el periodo de alrededor de un mes se puede ajustar de acuerdo con el tamaño del fragmento. Por ejemplo, si el fragmento que enlaza con el antígeno es de alrededor de la mitad del tamaño del anticuerpo intacto por peso (por ejemplo, medido en kDa), la cantidad administrada durante un periodo de alrededor de 1 mes puede ser de alrededor de 4 mg por kg de peso corporal o menos. La cantidad de inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno administrada se puede expresar como mg/kg de peso corporal o usando cualquier otra unidad adecuada. Por ejemplo, la cantidad de inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno administrado se puede expresar como moles de sitios que enlazan con el antígeno por kg de peso corporal. El número de moles de sitios que enlazan con el antígeno es dependiente del tamaño, cantidad y valencia de la inmunoglobulina o fragmento y se puede determinar fácilmente. por ejemplo, los fragmentos de IgG y F(ab')2 de la misma son divalentes y una dosis que comprende 1 nanomol de fragmento IgG o F(ab')2 comprende 2 nanomoles de sitios que enlazan con el antígeno. El tamaño de un anticuerpo o fragmento que enlaza con el antígeno se puede determinar usando cualquier método adecuado (por ejemplo, filtración en gel).

El anticuerpo humano o humanizado o el fragmento que enlaza con el antígeno se puede administrar en una única dosis o en una dosis inicial seguida por una o más dosis posteriores. Cuando se desean múltiples dosis, el intervalo entre dosis y la cantidad de inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno pueden ser ajustados para conseguir el efecto terapéutico deseado pero no es más de hasta alrededor de 8 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de 1 mes. Preferiblemente, cada dosis comprende independientemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 8 mg o de alrededor de 0,1 a alrededor de 5 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal. Más preferiblemente, cada dosis comprende independientemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 2,5 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal. Más preferiblemente, cada dosis comprende independientemente alrededor de 0,15, alrededor de 0,5, alrededor de 1,0, alrededor de 1,5 o alrededor de 2,0 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal.

El intervalo entre dos dosis cualquiera (por ejemplo, dosis inicial y primera dosis posterior, primera dosis posterior y segunda dosis posterior) puede variar independientemente de unos pocos segundos o minutos a alrededor de 120 días o más. Por ejemplo, se puede administrar la dosis inicial y una primera dosis posterior puede ser administrada alrededor de 1 día después. Después de eso, la segunda y tercera dosis posteriores se pueden administrar en intervalos de alrededor de 1 mes. Generalmente el intervalo mínimo entre dosis es un periodo de al menos alrededor de 1 día o al menos alrededor de 7 días. En realizaciones particulares, el intervalo mínimo entre dosis es un periodo de al menos alrededor de 14 días, o al menos 21 días o al menos alrededor de 1 mes (por ejemplo, 28, 29, 30, 31 días. En realizaciones adicionales, el intervalo entre dosis puede ser de al menos alrededor de 40, alrededor de 50, alrededor de 60, alrededor de 70, alrededor de 80, alrededor de 90, alrededor de 100, alrededor de 110 o alrededor de 120 días.

La cantidad de inmunoglobulina humana o humanizada o fragmentos que enlazan con el antígeno de la misma administrada en cada dosis puede ser una cantidad que es suficiente para producir un efecto farmacocinético

o farmacodinámico deseado. Una variedad de parámetros farmacocinéticos y farmacológicos de inmunoglobulinas humanas y/o humanizadas o fragmentos que enlazan con el antígeno de las mismas se puede medir usando métodos adecuados. Por ejemplo, los parámetros farmacodinámicos de los anticuerpos y fragmentos que enlazan con el antígeno (por ejemplo, saturación de antígeno, inhibición inducida por anticuerpos de expresión del antígeno) se pueden medir usando inmunoensayos adecuados. Por ejemplo, como se describe en la presente, la señal de α4β7 (es decir, enlace de anticuerpo etiquetado a α4β7) después de la administración de LDP-02 se midió por citometría de flujo. Los resultados del ensayo revelaron que la administración de LDP-02 puede resultar en la

saturación de la α4β7 y/o la inhibición de la expresión de la α4β7 en la superficie de los linfocitos circulantes.

Por lo tanto, cada dosis a ser administrada puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir a) alrededor del 50% o mayor saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en linfocitos circulantes (por ejemplo, células CD8+) y/o b) alrededor del 50% o más inhibición de la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de linfocitos circulantes durante un periodo de al menos alrededor de 10 días después de la administración de la dosis. en otras realizaciones, cada dosis puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir y mantener a) alrededor del 60% o más, alrededor del 70% o más, alrededor del 80% o más o alrededor del 85% o más saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en linfocitos circulantes y/o b) alrededor del 60% o más, alrededor del 70% o más, alrededor del 80% o más o alrededor del 85% o más inhibición de la expresión de la integrina α4β7 en la superficie

celular de linfocitos circulantes durante un periodo de al menos alrededor de 10 días después de la administración de la dosis.

En otras realizaciones particulares, cada dosis puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir un grado deseado de saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en linfocitos circulantes (por ejemplo células CD8+) y/o inhibir la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de linfocitos circulantes al grado deseado durante un periodo de al menos alrededor de 14 días, al menos alrededor de 20 días, al menos alrededor de 25 días o al menos alrededor de un mes después de la administración de la dosis. En realizaciones adicionales, cada dosis puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir un grado deseado de saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en linfocitos circulantes (por ejemplo células CD8+) y/o inhibir la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de linfocitos circulantes al grado deseado durante un periodo de al menos alrededor de 40, alrededor de 50, alrededor de 60, alrededor de 70, alrededor de 80, alrededor de 90, alrededor de 100, alrededor de 110 o alrededor de 120 días.

Los ensayos adecuados para determinar la dosis de anticuerpo requerida para conseguir una concentración sérica deseada o para saturar y/o inhibir la expresión de un antígeno objetivo se puede diseñar fácilmente. Por ejemplo, un ensayo basado en la citometría de flujo se puede usar para medir la expresión de la α4β7 en la superficie de células aisladas de un sujeto después de la administración de una inmunoglobulina (por ejemplo, humana, humanizada) que enlaza con la α4β7. En una realización, se puede usar un anticuerpo murino que enlaza con la α4β7humana. Preferiblemente, el anticuerpo murino puede enlazar con in epítopo en la α4β7 que es distinto del epítopo enlazado por la inmunoglobulina humana o humanizada y el enlace del anticuerpo murino con la α4β7 no se inhibe (por ejemplo, bloqueado) por el enlace anterior de la inmunoglobulina humanizada. Los anticuerpos murinos u otros anticuerpos con estas propiedades se pueden preparar y seleccionar usando los métodos descritos en la presente u otros métodos adecuados. El nivel de la expresión de α4β7 en linfocitos circulantes (por ejemplo células CD8+) aisladas de un humano se puede medir o determinar usando cada uno de los anticuerpos (es decir, inmunoglobulina a ser administrada, anticuerpo murino)9 por citometría de flujo u otros métodos adecuados. Entonces, el anticuerpo humano o humanizado a ser administrado se puede administrar al humano, se puede sacar sangre periférica en momentos predeterminados después de al administración, y los linfocitos pueden ser aislados (por ejemplo, por centrifugación en gradiente de densidad) para el análisis. Los linfocitos de la sangre periférica (por ejemplo, células CD8) pueden ser teñidos con cada uno de los anticuerpos y la cantidad de α4β7 detectada por cada anticuerpo puede ser medida o detectada por citometría de flujo u otros métodos adecuados. una disminución en la cantidad de integrina α4β7 medida o determinada usando la inmunoglobulina humana o humanizada es indicativa de a) ocupación de integrina persistente por la inmunoglobulina administrada (por ejemplo, saturación de antígeno) y/o b) inhibición de la expresión de la α4β7 en la superficie de los linfocitos (por ejemplo, modulación detenida de la α4β7, derramamiento de la α4β7). Una disminución en la cantidad de integrina α4β7 medida o detectada usando la inmunoglobulina humana o humanizada junto con ningún cambio en la cantidad de integrina α4β7 medida o determinada usando el anticuerpo murino es indicativa de ocupación persistente de la α4β7 8por ejemplo, saturación) por la inmunoglobulina humana o humanizada administrada. Una disminución en la cantidad de integrina α4β7 medida o detectada usando la inmunoglobulina humana o humanizada junto con una disminución en la cantidad de integrina α4β7 medida o detectada usando el anticuerpo murino es indicativa de la inhibición de la expresión de la α4β7 en la superficie de los linfocitos circulantes.

Los parámetros farmacocinéticos, como la concentración sérica del anticuerpo a lo largo del tiempo después de la administración de dicho anticuerpo pueden ser medidos usando un inmunoensayo como un ELISA o un ensayo basado en células. Por ejemplo, como se describe en la presente, la concentración sérica de una inmunoglobulina α4β7 humanizada (LDP-02) en puntos temporales predeterminados después de una única administración del anticuerpo (LDP-02) se midió usando un ensayo basado en células. Los resultados del ensayo revelaron que la concentración sérica de la LDP-02 puede permanecer elevada (por ejemplo, en o por encima de 1 µg/mL) durante un periodo de alrededor de 10 días o más después de la administración del anticuerpo humanizado. La presencia prolongada de la LDP-02 en el suero puede ser indicativa de eficacia superior como resultado de la inhibición persistente de la función de la α4β7, por ejemplo inhibición persistente de la adhesión mediada por la α4β7de leucocitos con MAdCAM.

En consecuencia, cada dosis a ser administrada puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir y mantener una concentración sérica de al menos 1 µg/mL durante un periodo de al menos alrededor de 10 días después de la administración de la dosis. En realizaciones particulares, cada dosis puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir y mantener una concentración sérica de al menos 1 µg/mL durante un periodo de al menos alrededor de 14 días, al menos alrededor de 20 días, al menos alrededor de 25 días o al menos alrededor de un mes después de al administración de la dosis. En realizaciones adicionales, cada dosis puede comprender una cantidad de inmunoglobulina o fragmento que es suficiente para conseguir y mantener una concentración sérica de al menos 1 µg/mL durante un periodo de al menos alrededor de 40, alrededor de 50, alrededor de 60, alrededor de 70, alrededor de 80, alrededor de 90,a alrededor de 100, alrededor de 110 o alrededor de 120 días.

Como se discute en la presente, los fragmentos que enlazan con el antígeno de una inmunoglobulina humana o humanizada pueden ser sustancialmente más pequeños y, por lo tanto, enlazar más antígenos (α4β7) por unidad de proteína (µg) que la inmunoglobulina intacta o nativa. En consecuencia, la concentración sérica de un fragmento que enlaza con el antígeno de una inmunoglobulina humana o humanizada que puede ser indicativa de eficacia superior puede ser inferior a 1 µg/mL. Así, cuando se desea la administración de un fragmento que enlaza con el antígeno de una inmunoglobulina humana o humanizada, la dosis puede comprender una cantidad de fragmento que enlaza con el antígeno que es suficiente para conseguir una concentración sérica que es proporcional a 1 µg/mL, para una inmunoglobulina intacta. Por ejemplo, si el fragmento que enlaza con el antígeno es de alrededor de la mitad de tamaño del anticuerpo intacto por peso (por ejemplo, medido en kDa), la dosis puede comprender una cantidad suficiente para conseguir y mantener una concentración sérica de alrededor de 0,5 µg/mL durante un periodo de al menos alrededor de 10 días. La concentración de suero deseada de inmunoglobulina o fragmento que enlaza con los antígenos puede ser expresada como µg/mL o usando cualquier unidad adecuada. Por ejemplo, la cantidad de inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno administrada puede ser expresada como moles de sitios de enlace del antígeno por volumen de suero (por ejemplo, M).

Las inmunoglobulinas humanas y humanizadas pueden ser administradas para aplicaciones de diagnóstico in vivo o para modular la función de al integrina α4β7en aplicaciones terapéuticas (incluyendo profilácticas). Por ejemplo, las inmunoglobulinas humanas y humanizadas se pueden usar para detectar y/o medir el nivel de integrina α4β7 en un sujeto. Por ejemplo, una inmunoglobulina humanizada que tiene una especificidad de enlace para la integrina α4β7 se puede administrar a un humano y complejos anticuerpo-integrina α4β7 que están formados se pueden detectar usando métodos adecuados. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado puede ser etiquetado con, por ejemplo, radionucleidos (125l, IIIln, tecnecio-99m), una etiqueta de epítopo (tag), una etiqueta de afinidad (por ejemplo, biotina, avidina), un marcador espín, un enzima, un grupo fluorescente o un grupo quimioluminiscente y se pueden usar métodos de detección adecuados. En una aplicación del método. las inmunoglobulinas humanizadas pueden ser usadas para analizar tejidos normales frente a inflamados (por ejemplo, de un humano) para la reactividad y/o expresión de la integrina α4β7 (por ejemplo, radiológicamente) o para detectar asociaciones entre EII u otras condiciones y la expresión aumentada de la α4β7 (por ejemplo, en tejidos afectados). Las inmunoglobulinas descritas en la presente pueden ser administradas para la valoración de la presencia de la integrina α4β7 en tejidos normales frente a inflamados, a través de la cual se puede valorar la presencia de enfermedad, progreso de la enfermedad y/o eficacia de al terapia anti-integrina α4β7 en la enfermedad inflamatoria.

Las inmunoglobulinas humanas y humanizadas (incluyendo los fragmentos que enlazan con el antígeno) se pueden administrar a un individuo para modular (por ejemplo, inhibir (reducir o evitar) la función de enlace y/o la función de infiltración del leucocito (por ejemplo, linfocito, monocito) de la integrina α4β7. Por ejemplo, las inmunoglobulinas humanas y humanizadas que inhiben el enlace de la integrina a4p7 a un ligando (es decir, uno o más ligandos) se pueden administrar para el tratamiento de enfermedades asociadas con la infiltración de leucocitos) por ejemplo, linfocitos, monocitos) de tejidos (incluyendo el reclutamiento y/o acumulación de leucocitos en tejidos), particularmente de tejidos que expresan la molécula MAdCAM. Se administra una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humana o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma, o inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma (es decir, una o más inmunoglobulinas o fragmentos) a un individuo (por ejemplo, un mamífero, como un humano u otro primate) para tratar la mencionada enfermedad. Por ejemplo, se pueden tratar las enfermedades inflamatorias, incluyendo las enfermedades que están asociadas con la infiltración de leucocitos del tracto gastrointestinal (incluyendo el endotelio asociado a los intestinos), otros tejidos de la mucosa, o tejidos que expresan la molécula MAdCAM-1 (por ejemplo tejidos asociados a los intestinos, como las vénulas de la lamina propia del intestino delgado y grueso, y la glándula mamaria (por ejemplo, la glándula mamaria lactante)).

De manera similar, se puede tratar a un individuo que tiene una enfermedad asociada con la infiltración de leucocitos de tejidos como resultado del enlace de leucocitos con células (por ejemplo, células endoteliales) que expresan MAdCAM-1.

Las enfermedades que pueden ser tratadas en consecuencia incluyen la enfermedad intestinal inflamatoria (EII), como la colitis ulcerosa, la enfermedad de Crohn, ielitis, enfermedad Celiaca, Esprue no tropical, enteropatía asociada con artropatías seronegativas, colitis microscópica o colagenosa, gastroenteritis eosinofílica, o pouchitis resultante después de proctocolectomia, y anastomosis ileoanal.

La pancreatitis y la diabetes mellitus dependiente de la insulina son otras enfermedades que se pueden tratar. Se ha informado que la MAdCAM-1 es expresada por algunos vasos en el páncreas exocrino de ratones NOD (diabéticos no obesos), así como de ratones BALB/c y SJL. La expresión de MAdCAM-1 fue inducida según se informa en el endotelio en islotes inflamados del páncreas del ratón NOD, y la MAdCAM-1 fue la adresina predominante expresada en el endotelio de islotes NOD en etapas tempranas de al insulitis (Hanninen, A. y otros, C.Clin. Invest., 92:2509-2515 (1993)). Además, se observó la acumulación de linfocitos que expresan la α4β7 dentro de los islotes, y la MAdCAM-1 estaba implicada en el enlace de células de linfoma por la α4β7 a vasos de islotes inflamados (Hanninen, A., y otros., J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)).

Ejemplo de enfermedades inflamatorias asociadas con los tejidos de la mucosa que pueden ser tratadas incluyen; mastitis (glándulas mamarias), colecistitis, colangitis o pericolangitis (conducto biliar y tejido colindante del hígado), bronquitis crónica, sinusitis crónica, asma, y enfermedad injerto contra huésped (por ejemplo, en el tracto gastrointestinal). Como se ve en la enfermedad de Crohn, la inflamación a menudo se extiende más allá de la superficei de la mucosa, en consecuencia las enfermedades inflamatorias crónicas del pulmón que resultan en fibrosis intersticial, como la neumonitis por hipersensibilidad, enfermedades del colágeno, sarcoidosis, y otras condiciones idiopáticas son susceptibles de tratamiento.

El tratamiento puede ser curativo, inducir la remisión o la quiescencia o evitar la recaída o reaparición de la enfermedad activa. El tratamiento puede ser episódico o crónico (por ejemplo, tratamiento crónico de la enfermedad activa, para mantener la enfermedad quiescente, para inducir a la quiescencia y mantener a la quiescencia), por ejemplo.

Una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de enlace para la integrina α4β7 se administra a un humano que tiene enfermedad intestinal crónica, como colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn. La inmunoglobulina puede ser administrada para tratar la enfermedad activa y/o para mantener la quiescencia (es decir, inhibir la recaída o la reaparición).

La inmunoglobulina humanizada puede ser administrada para mantener la quiescencia de la enfermedad intestinal inflamatoria que ha sido inducida por el tratamiento con uno o más de otros agentes (por ejemplo esteroides (prednisona, prednisolona, hormona adrenocorticotrópica (ACTH)), ciclosporina A, FK506, anticuerpo que tiene especificidad de enlace con la TNFα (infliximab, CDP571), azatiopreno, 6-mercatopurina, ácido 5aminosalicílico (5-ASA) o compuestos que con tiene 5-ASA (por ejemplo, sulfsalazina, olsalazina, balsalazida), antibióticos (por ejemplo, metronidazol), interleucinas (IL-10, IL-11), nicotina, heparina, talidomida, lidocane) o cirugía (por ejemplo, resección intestinal).

La inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma es administrado en una cantidad efectiva. Para la terapia, una cantidad efectiva es una cantidad suficiente para conseguir el efecto terapéutico deseado (incluyendo profiláctico) (como, una cantidad suficiente para reducir o evitar el enlace mediado por integrina α4β7 con un ligando de la misma y/o la señalización, inhibiendo de este modo la adhesión e infiltración de leucocitos y/o las respuestas celulares asociadas; una cantidad suficiente para inducir la remisión o evitar la recaída o la reaparición de la enfermedad. La inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma puede ser administrado en una única dosis o en una dosis inicial seguida por una o más dosis posteriores como se describe en la presente. La cantidad de inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno administrada en una dosis particular así como el intervalo entre dosis puede depender de las características del individuo, como la salud general, edad, sexo, peso corporal, y tolerancia a los fármacos así como el tipo y severidad de la enfermedad. La persona experta será capaz de determinar las dosis adecuadas dependiendo de estos y otros factores.

La inmunoglobulina humanizada puede ser administrada a un individuo (por ejemplo un humano) sola o en conjunción con otro agente (es decir, uno o más agentes adicionales). Una inmunoglobulina humanizada puede ser administrada antes, junto con o posteriormente a la administración del agente adicional. Se puede administrar más de una inmunoglobulina humanizada que inhibe el enlace de la integrina α4β7 con sus ligandos. Se puede administrar un anticuerpo (por ejemplo, anticuerpo humano, anticuerpo humanizado), como un anticuerpo antiMAdCAM-1, anti-VCAM-1, o anti-ICAM-1, que inhibe el enlace de leucocitos con un ligando endotelial además de una inmunoglobulina humanizada que enlaza con la integrina α4β7.

Se puede administrar un ingrediente farmacológicamente activo adicional (por ejemplo, un compuesto antiinflamatorio, como el ácido 5-aminosalicílico (5-ASA) o compuestos que contienen 5-ASA (por ejemplo, sulfsalazina, olsalazina, balsalazida), otro compuesto antiinflamatorio no esteroideo, o un compuesto antiinflamatorio esteroideo (por ejemplo, prednisona, prednisolona, hormona adrenocorticotópica (ACTH)), agentes inmunosupresores (azatiopreno, 6-mercatopurina, ciclosporina A, FK506), inmunomoduladores (por ejemplo, anticuerpos que tiene especificidad de enlace para la TNFα (infliximab, CDP571), talidomida, interleucinas (por ejemplo, IL-10 humana recombinante, IL-11 humana recombinante)) antibióticos (por ejemplo, motronidazol), nicotina, heparina, lidocaina) en conjunción con una inmunoglobulina humanizada como se ha descrito.

Son posibles una variedad de vías de administración, incluyendo, pro no limitadas a, parenteral (por ejemplo, inyección intravenosa, intraarterial, intramuscular, intratecal, subcutánea), oral (por ejemplo, dietética), tópica, inhalación, (por ejemplo, intrabronquial, intranasal o inhalación oral, gotas intranasales), o rectal, dependiendo de la enfermedad o condición a ser tratada. Se prefiere la administración parenteral, particularmente la inyección intravenosas y la inyección subcutánea).

La inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma se puede administrar al individuo como parte de una composición farmacéutica o fisiológica para el tratamiento de la enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, colitis ulcerosa, enfermedad de Chron). Dicha composición puede comprender una inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno que tiene una especificidad de enlace para la integrina α4β7 como se describe en la presente, y un portador farmacéuticamente o fisiológicamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas o fisiológicas para la co-terapia pueden comprende una inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno que tiene especificidad de enlace para la integrina α4β7 y uno o más agentes terapéuticos adicionales. Una inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno que tiene especificidad de enlace para la función de la integrina α4β7 y un agente terapéutico adicional pueden ser componentes de composiciones separadas que se pueden mezclar juntas antes de la administración o ser administrados de forma separada. La formulación variará de acuerdo con la vía de administración seleccionada (por ejemplo, solución, emulsión, cápsula). Los portadores adecuados pueden contener ingredientes inertes que no interactúan con la inmunoglobulina o fragmento que enlaza con el antígeno y/o agentes terapéuticos adicionales. Se pueden emplear técnicas de formulación farmacéuticas estándares, como las descritas en Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Los portadores adecuados para la administración parenteral incluyen, por ejemplo, agua estéril, solución salina fisiológica, solución salina bacteriostática (solución salina que contiene alrededor de un 0,9% de alcohol bencílico), solución salina regulada con fosfato, solución de Hank, lactato de Ringer y similares. Los métodos para encapsular composiciones (como en un recubrimiento de gelatina dura o ciclodextrano) son conocidos en la técnica (Baker, y otros "Controlled Release of Biological Active Agents", John Wiley and Sons, 1986). Para la inhalación, el agente se puede solubilizar y cargar en un dispensador adecuado para la administración (por ejemplo, un atomizador, nebulizador o dispensador de aerosol presurizado).

la presente invención se ilustrará ahora por los siguientes Ejemplos, que no se pretende que sean limitativos de ninguna manera.

EJEMPLOS

Introducción

La LDP-02 es un anticuerpo monoclonal IgG1 humanizado que enlaza con al integrina α4β7, una glicoproteína de la superficie celular presente en la superficie de la mayoría de los linfocitos T y B, la α4β7media el tráfico de linfocitos a la mucosa gastrointestinal y el tejido linfoide asociado a los intestinos a través de la interacción de adhesión con el receptor de guiado MAdCAM-1. Bloqueando las interacciones α4β7-MAd-CAM-1, la LDP-02 puede inhibir el reclutamiento de leucocitos de la vasculatura a la mucosa gastrointestinal, teniendo así un efecto beneficioso en la actividad inflamatoria en pacientes afligidos con enfermedad intestinal inflamatoria (EII) como colitis ulcerosa y Enfermedad de Crohn.

Esta sección presenta información de las dos pruebas clínicas de LDP-02 que se han completado. Estas pruebas incluyen un estudio de Fase I completado realizado en sujetos sanos (Estudio L297-007) y una prueba de Fase Ib/IIa completada en pacientes con colitis ulcerosa (UC) (Estudio L-297-006). La tabla 1 describe cada uno de estos estudios.

Tabla 1

Nº de Estudio. # Sitios País

Estado del Estudio Diseño del Estudio/ Población Régimen de dosificación, Dosis, Vía Número d Sujetos que participan

L297-007

Completado Estudio de única Día 1 (dosis única) Total= 19

1

dosis ascendente, 0.15 mg/kg IV LDP-02= 14

UK

placebo-controlado , doble ciego, aleatorizado, de Fase I, 0.15 mg/kg SC Placebo= 5

Sujetos Masculinos

0.5 mg/kg IV

Sanos de 18-50años

1.5 mg/kg IV

de edad

2.5 mg/kg IV

L297-006

Completado Estudio multicentro, Día 1 (única dosis) Total= 29

5

dosis única creciente, 0.15 mg/kg SC LDP-02= 21

Canadá

placebo-controlada, 0.15 mg/kg IV Placebo= 8

doble ciego, aleatorizada, Fase Ib/IIa

0.5 mg/kg IV

2.0 mg/kg IV

Pacientes con colitis ulcerosa moderadamente severa. Antes el uso de esteroides fue limitado (≤20mg/día). Se permitió el uso de 5-ASAs

Placebo IV

Ejemplo 1: Estudio L297-007

El estudio L-297-007 titulado, "Un estudio de Dosis Creciente, Doble Ciego, Placebo-Controlado Investigando la Tolerabilidad, Farmacodinámicas y Farmacocinéticas de la LDP02 Dada por las Vías Subcutánea e Intravenosa en Voluntarios Masculinos Sanos" se ha completado con los resultados finales presentados en esta sección.

Diseño del Estudio

El Estudio L297-007 fue un estudio de dosis única ascendente, placebo-controlado, doble ciego, aleatorizado en voluntarios masculinos sanos. Los voluntarios masculinos sanos de 18 a 50 años de edad que cumplieron todos los criterios de inclusión/exclusión fueron inscritos en el estudio secuencialmente por el grupo de estudio y, dentro de cada grupo de estudio, fueron asignados aleatoriamente para recibir LDP-02 o placebo (es decir, regulador de citrato sódico isotónico). Para minimizar el riesgo a los sujetos, la seguridad y la tolerabilidad fueron revisadas a cada nivel de dosis antes de aumentar al siguiente nivel de dosis. Los grupos de tratamiento y números de sujetos planeados para el estudio se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2 Estudio L-297-007: Grupos de Estudio

Grupo

Vía de Administración * LDP-02 # Dosis de los sujetos Placebo # sujetos

1

IV SC 3 3 0.15 mg/kg 0.15 mg/kg 1 1

2

IV 3 0.5mg/kg) 1

3

IV 3 1.5mg/kg

4

IV 3 2.5 mg/kg 1

*SC= administración subcutánea; IV = administración intravenosa

En el Día 1 del estudio. se administró la LDP-02 o el placebo o por SC en el muslo (grupo 1 de dosificación SC sólo) o por infusión IV a tasa constante de 30 minutos (Grupos 1-4). Las valoraciones de seguridad incluyeron el registro de eventos adversos, exámenes físicos, signos vitales, laboratorios clínicos (es decir, hematología, químicas de sangre, y análisis de orina), niveles de citoquina en sangre, y electrocardiogramas de 12 derivaciones (ECGs). Además, como esta fue a la primera prueba clínica de la LDP-02, se llevó a cabo una monitorización cardiaca constante antes de la dosis hasta 4 horas después de la dosis. las muestras de sangre se obtuvieron para evaluar la respuesta anti-anticuerpos a la LDP-02, los niveles de citoquinas, la concentración de LDP-02 sérica (farmacocinéticas), y la saturación y ocupación del sitio de enlace de los receptores de α4β7 y subconjuntos de linfocitos (farmacodinámicas). Las valoraciones del estudio fueron realizadas en momentos especificados a través de 36 días después del tratamiento. Siguiendo a los resultados de los análisis farmacocinéticos y farmacodinámicos (inmunológicos) del Día 36, se corrigió el protocolo para permitir extracciones adicionales de sangre para sujetos que recibieron la LDP-02. Estas extracciones de sangre se usaron para seguir los niveles séricos de LDP-02 hasta que se volvieron no cuantificables (es decir, por debajo del límite de cuantificación [BLQ] y para asegurar que la saturación de α4β7 y poblaciones de la memoria celular habían retornado las niveles de la línea de base (pre-dosis). Esta corrección fue particularmente importante en los grupos de dosis más altas donde las características de las cinéticas de fase terminal no estaban bien establecidas en el Día 36.

Resultados del Estudio

Farmacocinéticas

El ensayo de la LDP-02 en suero se realizó usando un ensayo basado en células validado. Los estándares y muestras fueron incubados con una línea celular objetivo (HUT-78) que expresa el antígeno α4β7. después del lavado, se añadió un IgG1 antihumano policlonal fluorescentemente etiquetado. La intensidad de la fluorescencia se midió por citometría de flujo y se comparó con la intensidad de la fluorescencia de los estándares de LDP-02. La concentración de suero efectiva de la LDP-02 fue entonces definida por comparación de la muestra con una curva estándar generada con concentraciones conocidas de LDP-02.

Las muestras de sangre para la determinación de la concentración sérica de LDP-02 fueron recogidas antes de la dosis, 1, 1,5, 3, 8, 12 y 24 horas después de la dosificación, y en los Días 3, 5, 7, 8, 15, 22 y 36. Cuando se conoció que la LDP-02 era todavía detectable en el Día 36, las extracciones de sangre para los sujetos que recibieron la LDP-02 continuó hasta que los niveles hubieron caído por debajo de los límites de cuantificación del ensayo. Trece de los 14 sujetos que recibieron la LDP02 volvieron para extracciones de sangre de seguimiento hasta un máximo de 226 días después de la dosis.

Las concentraciones de LDP-02 a lo largo del tiempo por paciente individual y parámetros farmacocinéticos medios por grupo de dosis de LDP-02 se presentan en el Apéndice al Estudio L297-007. Las concentraciones séricas de LDP-02 medias a lo largo del tiempo están representadas hasta la última extracción de sangre para todos los grupos de tratamiento en la FIGURA 6.

Tabla 3 Estudio L297-007: Parámetros Farmacocinéticos Medios de la LDP-02 en sujetos Sanos1

Parámetro Farmacocinético

I Dosis y Vía de Administración de la LDP-02 (número de sujetos)

0.15 mg/kg SC (n=3)

0.15 mg/kg IV (n=3) 0.5 mg/kg IV (n=3) 1.5 mg/kg IV (n=3) 2.5 mg/kg IV (n=2)

Cmax (µg/mL)

1.112 (0.519) 7.648 (3.201) 15.760 (7.476) 118.813 (14.544) 101.749 (5.117)

tmax (días) (mediana & intervalo)

6.01 (4.01 -6.01) 0.13 (0.04 -0.33) 0.5 (0.06-0.5) 0.13 (0.06-0.33) 0.05 (0.04-0.06)

T1/2z (días)

4.33 (2.23) 4.39 (1.51) 4.02 (0.71) 14.9 (10.3) 17.1 (8.91)

AUC1 (µg·día/mL)

10.4 (4.40) 19.5 (5.00) 83.6 (18.3) 660 (229) 1651 (229)

λz (1/día)

0.1852 (0.0735) 0.1731 (0.0673) 0.1763 (0.0344) 0.0994 (0.1145) 0.0469 (0.0244)

AUC (µg·día/mL)

11.4 (5.80) 20.3 (5.88) 85.1 (18.2) 755 (308) 1747 (95.8)

AUC % Extrapolado

5.9 (7.3) 3.4 (3.2) 1.8 (1.4) 9.5 (16.1) 5.7 (8.0)

CL* (mLdía/kg)

15.3 (6.26) 7.75 (1.93) 6.06 (1.32) 2.31 (1.19) 1.43 (0.08)

Vz * (mL/g)

82.5 (6.88) 46.6 (10.1) 34.3 (2.84) 54.0 (51.4) 35.9 (20.3)

1Todos los valores son medios +/-SD a menos que se indique lo contrario. El SD aparece entre paréntesis. *Los plazos de depuración y volumen para los grupos de dosis SC son la depuración aparente (CL/F) y el volumen aparente(V2/F).

Los valores se obtuvieron para los parámetros farmacocinéticos de única dosis IV medios para los 4 grupos de dosis (Cmax', t1/2z y AUC). Las muestras de seguimientos (es decir, las tomadas más allá del Día 36), donde la atención se centró en la seguridad, permitieron alguna caracterización adicional de los perfiles de concentracióntiempo. La diferencia en los valores de t1/2z entre los 2 grupos de dosis más baja (0,15 y 0,5 mg/kg) y los grupos de dosis más alta (1,5 y 2,5 mg/kg) de alrededor de 10 días se pueden explicar en que la fase terminal "verdadera" para los grupos de dosis más alta no se ha caracterizado. Las farmacocinéticas no compartimentales de las dosis más bajas de la LDP-02 (0,15 y 0,5 mg/kg) fueron bien caracterizadas y las farmacocinéticas no lineales fueron evidentes a medida que la dosis se aumentó hasta 2,5 mg/kg.

Valoración del Efecto Farmacodinámico de la LDP-02

Se uso un análisis de clasificación celular activado por fluorescencia (FACS) para medir la presencia de sitios α4β7 en los linfocitos de la sangre periférica antes y después de la administración de LDP-02. Para detectar las α4β7 que eran reconocidas por el anticuerpo, se añadió a las muestras de la sangre del paciente ACT-1 etiquetada con biotina, el homólogo murino de la LDP-02 y se detectaron usando PR-estreptavidina. La fluorescencia soluble equivalente media estandarizada (MESF) es proporcional al número de sitios α4β7 detectables.

El enlace de la α4β7 sérica a lo largo del tiempo (valores MESF y porcentaje de la línea de base en cada punto temporal post-dosis) son presentados por sujetos individuales y por grupos de tratamiento en el Apéndice al Estudio L297-007.

Como se midió por el análisis FACS, la saturación media de la integrina α4β7 en los linfocitos a lo largo del tiempo (es decir, al Día 36) para cada tratamiento se presenta en la FIGURA 7. Como se ve en la Figura 7, no hubo detección de sitios de enlace α4β7 libres en los linfocitos durante al menos dos semanas después de la administración de todas las dosis de LDP-02. entre alrededor del día 7 y el día 2, la señal de α4β7 empezó a retornar a la línea de base para el grupo de dosis 0,15 mg/kg IV y para el grupo de dosis 0,15 mg/kg SC. Entre el día 22 y el día 36, la señal de α4β7 empezó a retornar a la línea de base para el grupo de dosis 0,5 mg/kg IV. En las dosis más altas de LDP-02 estudiadas (1,5, y 2,5 mg/kg) la pérdida de la señal de α4β7 persistió durante más de 36 días

después de las dosis IV sencillas. Para el grupo de dosis 2,5 mg/kg, la saturación del enlace de la α4β7 continuó hasta el Día 70 (ver, datos en Apéndice al Estudio L297-007).

El muestro de sangre de seguimiento hasta alrededor del Día de Estudio 200 se hizo para confirmar que los sitios de enlace de α4β7 libres en los linfocitos habían retornado a los niveles de la línea de base (pre-dosis). La reaparición inicial de los sitios de α4β7 libres pareció tener lugar cuando las concentraciones de sangre de LDP-02 se volvieron no detectables.

Conclusiones

La administración de la LDP-02 en las dosis IV de 0,15, 0,50, 1,50 y 2,5 mg/kg y una dosis SC de 0,15 mg/kg a sujetos masculinos sanos fue bien tolerada.

Después de la administración de todas las dosis de LDP-02 no hubo detección de sitios de enlace de α4β7 libres en linfocitos durante aproximadamente dos semanas después de la dosis. La saturación de los sitios de enlace de α4β7 continuó hasta aproximadamente 2 semanas después de la dosificación para el grupo 0,15 mg/kg IV y hasta aproximadamente 3 semanas después de la dosis para los grupos 0,15 mg/kg Sc y 0,5 mg/kg IV. La duración del efecto persistió durante un mes o más con la dosis 1,5 mg/kg IV y continuó hasta aproximadamente el Día 70 con el 2,5 mg/kg LDP-02 IV. Las muestras de seguimiento obtenidas después del Día 36 demostraron que la expresión de los sitios de enlace de α4β7 libres habían retornado a la línea de base (niveles pre-dosis). No surgieron anticuerpos anti-idiotipo contra la LDP-02 indicando que no inició una respuesta inmunogénica humoral. Las farmacocinéticas no-compartimentales de las dosis más bajas de LDP-02 (0,15 y 0,5 mg/kg) se volvieron evidentes a medida que la dosis se aumentó hasta 2,5 mg/kg.

APENDICE AL ESTUDIO L297-007

Concentración Sérica de LDP-02 a lo Largo del Tiempo por sujeto y por Grupo de Tratamiento. Los Datos de los pacientes individuales se presentan en las Tablas 4-9.

Tabla 4 0,15 mg/kg LDP-02 IV Tabla 5 0,15 mg/kg LDP-02 SC

Sujeto #2

Sujeto # 3 Sujeto # 4 Media µg/mL (n=3)

Tiempo (hr)

Tiempo (día) µg/mL Tiempo (hr) Tiempo (día) µg/mL Tiempo (hr) Tiempo (día) µg/mL

Pre-Dosis 1.0 1.5 3.0 8.0 12.0 24.0 72.0 120.0 168.0 192.0 360.0 528.0 864.0

Pre-Dosis 0.042 0.063 0.125 0.333 0.500 1.000 3.000 5.000 7.000 8.000 15.000 22.000 36.000 0.01 5.24 5.33 5.47 10.67 4.49 3.23 1.84 1.21 0.94 0.63 0.04 0.02 0.02 Pre-Dosis 1.0 1.5 3.0 8.0 12.0 24.0 72.0 120.0 168.0 192.0 360.0 528.0 864.0 3912.0 4920.0 Pre-Dosis 0.042 0.063 0.125 0.333 0.500 1.000 3.000 5.000 7.000 8.000 15.000 22.000 36.000 163.000 205.000 0.01 7.98 6.21 4.66 5.10 4.50 3.63 2.94 1.84 1.29 1.13 0.53 0.21 0.01 0.01 0.01 Pre-Dosis 1.0 1.5 3.0 8.0 12.0 24.0 72.0 120.0 168.0 192.0 360.0 528.0 864.0 3912.0 4752.0 Pre-Dosis 0.042 0.063 0.125 0.333 0.500 1.000 3.000 5.000 7.000 8.000 15.000 22.000 36.000 163.000 198.000 0.01 2.48 3.42 4.29 3.26 2.42 2.24 3.05 1.16 0.74 0.70 0.26 0.09 0.01 0.01 0.01 0.01 5.24 4.99 4.81 6.34 3.80 3.03 2.61 1.40 0.99 0.82 0.28 0.10 0.01 0.01 0.01

Tabla 6 0,5 mg/kg LDP-02 IV Tabla 7 1,5 mg/kg LDP-020 IV

Tabla 8 2,5 mg/kg LDP-02 IV Tabla 9 grupo placebo

Estudio L-297-007: Los Parámetros Farmacocinéticos Medios por Datos de Grupo de Tratamiento de pacientes individuales se presentan en las Tablas 10-14.

L297-007: Enlace de α4λ7 Sérico a lo Largo del Tiempo por Sujeto por Grupo de tratamiento. Los datos de pacientes individuales se presentan en las Tablas 15-20. Para cada sujeto se presenta el tiempo de muestreo de sangre, MESF de la muestra y % de MESF de la línea de base (pre-dosis).

Tabla 15 0,15 mg/kg LDP-02 IV Tabla 18 1.5 mg/kg LDP-02 IV

Sujeto # 2

Sujeto # 3 Sujeto # 4 Media

Pre-Dosis

5689 100% Pre-Dosis 5424 100% Pre-Dosis 4177 100% 5097 100%

3 hr

605 11% 3 hr 591 11% 3 hr 588 14% 595 12%

24 hrs

589 10% 24 hrs 600 11% 24 hrs 631 15% 607 12%

Día 3

501 9% Día 3 496 9% Día 3 548 13% 515 10%

Día 7

474 8% Día 7 473 9% Día 7 512 12% 487 10%

Día 15

1819 32% Día 15 578 11% Día 15 599 14% 999 20%

Día 22

2426 43% Día 22 558 10% Día 22 609 15% 1198 23%

36

3028 Día 36 3570 66% Día 36 3469 83% 3356 66%

Día 163

6934 128% Día 163 6837 164% 6885 135%

Día 205

4675 86% Día 205 6755 162% 5715 112%

Tabla 16 0.15 mg/kg LDP-02 SC

Sujeto # 5

Sujeto # 6 Sujeto # 8 Media

Pre-Dosis

6043 00% Pre-Dosis 6779 100% Pre-Dosis 5857 100% 6226 100%

3 hr

1797 30% 3 hr 4727 70% 3 hr 1514 26% 2679 43%

24 hrs

637 11% 24 hrs 588 9% 24 hrs 616 11% 614 10%

Día 3

529 9% Día 3 520 8% Día 3 527 9% 525 8%

Día 7

486 8% Día 7 474 7% Día 7 485 8% 482 8%

Día 15

598 10% Día 15 642 9% Día 15 635 11% 625 10%

Día 22

759 13% Día 22 934 14% Día 22 579 10% 757 12%

Día 36

1455 24% Día 36 1452 21% Día 36 2799 48% 1902 31%

Día 163

2743 45% Día 163 1989 29% Día 163 4621 79% 3118 50%

Día 212

4201 170% Día 212 2601 38% Día 212 4832 82% 3878 62%

Tabla 17 0.5 mg/kg LDP-02 IV

Sujeto # 9

Sujeto # 10 Sujeto # 12 Media

Pre-Dosis

5519 (100% Pre-Dosis 5966 100% Pre-Dosis 8550 100% 6678 100%

24 hrs

533 10% 24 hrs 548 9% 24 hrs 539 6% 540 8%

24 hrs

542 10% 24 hrs 554 9% 24 hrs 527 6% 541 8%

Día 3

565 10% Día 3 574 10% Día 3 539 6% 560 8%

Día 7

544 10% Día 7 551 9% Día 7 547 6% 547 8%

Día 15

540 10% Día 15 525 9% Día 15 520 6% 528 8%

Día 22

555 10% Día 22 572 10% Día 22 543 6% 557 8%

Día 36

885 16% Día 36 1182 20% Día 36 643 8% 903 14%

Día 149

444 81% Día 163 5256 88% Día 149 7810 91% 5838 87%

Sujeto # 13

Sujeto # 15 Sujeto # 16 Media

Pre-Dosis

4966 100% Pre-Dosis 5544 100% Pre-Dosis 5622 100% 5378 100%

3 hr

518 10% 3 hr 539 10% 3 hr 545 10% 534 10%

24 hrs

482 10% 24 hrs 487 9% 24 hrs 520 9% 496 9%

Día 3

511 10% Día 3 475 9% Día 3 514 9% 500 9%

Día 7

549 11% Día 7 535 10% Día 7 569 10% 551 10%

Día 15

472 9% Día 15 474 9% Día 15 491 9% 479 9%

Día 22

603 12% Día 22 617 11% Día 22 576 10% 599 1%

Día 36

618 12% Día 36 866 16% Día 36 606 11% 697 13%

Día 82

922 19% Día 80 832 15% 877 16%

Día 134

1647 33% Día 134 1531 28% 1589 30%

Día 176

2322 47% 1589 43%

Tabla 19 2.5 mg/kg LDP-02 IV

Sujeto # 18

Sujeto # 19 Media

Pre-Dosis

5922 100% Pre-Dosis 5065 100% 5494 100%

3 hr

527 9% 3 hr 527 10% 527 10%

24 hrs

568 10% 24 hrs 571 11% 569 10%

Día 3

511 9% Día 3 521 10% 516 9%

Día 7

503 9% Día 7 513 10% 508 9%

Día 15

530 9% Día 15 544 11% 537 10%

Día 22

588 10% Día 22 595 12% 591 11%

Día 36

550 9% Día 36 554 11% 552 10%

Día 70

615 10% Día 69 566 11% 590 11%

Día 138

4572 77% Día 124 1103 22% 2837 52%

Día 166

5603 95% Día 152 4094 81% 4849 88%

Tabla 20 grupo placebo

Sujeto # 1

Sujeto # 7 Sujeto # 11 Sujeto # 14 Sujeto # 17

Pre-Dosis

5807 100% 5198 100% 8747 100% 7017 100% 5982 100%

3 hr

5630 97% 4305 83% 8454 97% 6208 88% 5520 92%

24 hrs

6672 15% 4347 84% 8033 92% 6699 95% 5410 90%

Día 3

6078 105% 4008 77% 8701 99% 6141 88% 5488 92%

Día 7

5617 97% 4047 78% 8668 99% 6327 90% 5194 87%

Día 15

5797 100% 4758 92% 7516 86% 4851 69% 5759 96%

Día 22

5164 89% 4318 83% 6924 79% 5246 75% 5922 99%

Día 36

6200 107% 4686 90% 7065 81% 7857 112% 5349 89%

Ejemplo 2. Estudio L297-006

El estudio titulado, "Estudio de Doble Ciego, Aleatorizado, Placebo Controlado, de Fase Ib/IIa de Dosis Sencilla para Determinar la Seguridad, Tolerabilidad, Farmacocinéticas, Farmacodinámicas, y Efectividad de la LDP02 en Pacientes con Colitis Ulcerosa Moderadamente Severa" se completo y ciertos resultados finales ese presentan en esta sección.

Estudio Racional

Los Resultados de la prueba de la Fase I (Ejemplo 1. Estudio L297-007) en voluntarios sanos mostraron que la LDP-02 es dosis de 0,15 mg/kg SC y IV, 0,5 mg/kg IV, 1,5 mg/kg IV, y 2,5 mg/kg IV era segura y tolerada bien. Además, las dosis de 0,15 mg/kg IV o SC y 0,5 mg/kg IV mostraron tener un t1/2 de aproximadamente 100 a 130 horas y los datos de la citometría de flujo mostraron que la α4β7 no enlazada empieza a reaparecer en los grupos de dosificación 0,15 mg/kg aproximadamente dos semanas después de la dosificación. En base a estos datos, las dosificaciones de LDP-02 de 0,15 mg/kg SC, 0,15 mg IV, 0,5 mg/kg N, y 2,0 mg/kg IV fueron seleccionadas para el uso en el estudio inicial en pacientes con colitis ulcerosa. Este estudio fue diseñado de tal forma que cada dosis de LDP-02 fue determinada para ser segura y bien tolerada antes del incremento al siguiente nivel de dosis.

Diseño del Estudio

El estudio fue un estudio de dosis sencilla ascendente, controlado por placebo, de doble ciego, aleatorizado en pacientes diagnosticados con colitis ulcerosa moderadamente severa. Los pacientes con un diagnóstico documentado de colitis ulcerosa con una extensión de enfermedad mínima de 25 cm para el margen anal eran potencialmente elegibles para el estudio. Se excluyeron los pacientes con colitis ulcerosa severa como se define por los criterios de Truelove-Witts (Br MEd J; 2:1042-1048 (1995)). Los pacientes de colitis ulcerosa que cumplieron todos los criterios de inclusión/exclusión fueron inscritos secuencialmente en cuatro grupos de estudio y, dentro de cada grupo de estudio, fueron asignados aleatoriamente para recibir LDP-02 o placebo (es decir, 0,9% de cloruro sódico). Los grupos de tratamiento y números de pacientes inscritos se muestran en la Tabla 21.

Tabla 21: Grupos de Estudio

Grupo

Vía de Administración* LDP-02 Placebo

# pacientes

Dosis

# pacientes

1

SC 5 0.15 mg/kg 2

2

IV 5 0.15 mg/kg

2

3

IV 5 0.5 mg/kg 2

4

IV 5 2.0 mg/kg 2

La medicación del Estudio (LDP-02 o placebo) se administró en el Día 1 o Sc en el muslo o por infusión IV de 30 minutos. Las valoraciones de seguridad incluían el registro de eventos adversos, exámenes físicos, signos vitales, laboratorios clínicos (es decir, hematología, químicas de sangre, y análisis de orina), niveles de citoquina en sangre, y ECGs. La sangre fue extraída en varios puntos temporales para medir las concentraciones séricas de LDP-02 y para valorar la efectividad de la LDP-02 para saturar y bloquear los receptores de enlace de la α4β7 en los linfocitos de la sangre periférica. La efectividad de la LDP-02 para reducir la inflamación en el colon se midió por observaciones de enfermedad clínicas, apariencia endoscópica, histopatología, e inmunohistoquímica.

Resultados del Estudio

Disposición y Demografía del Paciente

Se introdujeron en el Estudio veintinueve pacientes con colitis ulcerosa moderadamente severa y 28 completaron la prueba. Se descubrió que un paciente era positivo para la toxina Clostridium difficile en el cribado, pero debido al retraso al informar de los resultados del laboratorio el paciente fue admitido en la prueba y recibió 2,0 mg/kg IV de LDP-02. Una vez que se obtuvieron los resultados del laboratorio, el paciente fue tratado con antibióticos y reemplazado por otro paciente. No hubo otros pacientes suspendidos del estudio. Como los pacientes fueron reclutados al estudio a lo largo del tiempo, no hubo intento de equilibrar los grupos de tratamiento respecto al historial de colitis ulcerosa de la línea de base. Como tal, la severidad y duración de la enfermedad de colitis ulcerosa y antes de las medicaciones para la colitis ulcerosa variaron de paciente a paciente y de grupo de tratamiento a grupo de tratamiento. estos datos se presentan en la Tabla 22.

Tabla 22: Historial de Colitis Ulcerosa por Grupo de Tratamiento

Grupo de Tratamiento

Tiempo desde el Comienzo de los Sintomas de la UC (años)1 Tiempo desde el diagnóstico de la UC (años)1 # de Exacerbaciones Agudas en los últimos 12 meses1 Semanas de 5-ASA oral continuo en los últimos 6 meses1 Semanas de esteroides orales continuos en los últimos 6 meses1

0.15 mg/kg SC (n=S)

5.32 (4.8,6.4) 4.6 (4.3,6.4) 3 (1,12) 24.0 (3,26) 0 (0,6)

0.15 mg/kg IV (n=5)

9.58 (2.6,14.2) 4.9 (2.1,14.0) 1 (1,3) 24.0 (6,26) 10 (0,24)

0.5 mg/kg IV (n=5)

10.8 (0.4,11.8) 9.0 (0.3,11.8) 1 (1,2) 26.0 (0,26) 0 (0,15)

2.0 mg/kg IV (n=6)

9.34 (3.4,58.8) 7.65 (3.2,19.4) 2 (1,5) 25.0 (0,26) 5 (0,26)

All LDP-02 (n=21)

5.99 (0.4,58.8) 4.9 (0.3,19.4) 2 (1,12) 26.0 (0,26) 0 (0,26)

Placebo (n=8)

5.27 (0.4,11.0) 4.85 (0.3,9.7) 1.5 (1,4) 24.0 (0,26) 16 (0,26)

1Valores de la mediana

Mediciones de la enfermedad

Aunque este era principalmente un estudio de farmacocinéticas y seguridad del intervalo de la dosis, se midieron varios parámetros para evaluar la efectividad del tratamiento. Las valoraciones de efectividad incluían registrar cambios de la línea de base usando un Sistema de Puntuación de Baron (endoscopia) modificado,Puntuación del Índice de Actividad de la Enfermedad de la Clínica Mayo, la Puntuación del Índice de Actividad de la Enfermedad de Powell-Tuck, frecuencia de deposiciones, y el Cuestionario de enfermedad Intestinal Inflamatoria. Los cambios de la línea de base a Día 30 para estos parámetros se muestran en la Tabla 23. Para pacientes en los que no hubo evaluación en el Día 30, la última observación después de la línea de base obtenida se realizo antes del Día 30.

Tabal 23: Cambio de la Línea de Base al Día 30 en los Parámetros de la Enfermedad

Grupo de Tratamiento

Cambio de la línea de base al día 301

Puntuación de Severidad Endoscópica

Índice de Actividad de la Clínica Mayo Índice de Actividad de Powell-Tuck Frecuencia de Deposiciones IBDQ Total

0.15 mg/kg SC (n=5)

0 (-2,0) -3.0 (-9,0) -3.0 (-6,-2) -1.0 (-7,1) 14.0 (14,72)

0.15 mg/kg IV (n=5)

0 (0,1) -1.0 (-3,2) 0 (-3,3) -0.4 (-5,2) 8.0 (-3,95)

0.5 mg/kg IV (n=5)

-2.0 (-3,0) -10 (-11,0) -6.0 (-13,-2) -5.3 (-6,0) 37.0 (14,80)

2.0 mg/kg IV (n=6)

-0.5 (-2,1) -2.0 (-6,3) -1.5 (-5,-5) -3.2 (-8,2) -2.5 (-59,95)

All LDP-02 (n=21)

0 (-3,1) -3.0 (-11,3) -3.0 (-13,5) -2.4 (-8,2) 14.0 (-59,95)

Placebo (n=8)

-1.0 (-3,2) -5.0 (-8.4) -6.0 (-9,-4) -3.2 (-12,2) 53.5 (-30,82)

1Valores de la mediana e intervalo. Para pacientes sin una evaluación el Día 30 la última evaluación después de la línea de base llevada a cabo antes del día 30

Como se ve de los resultados presentados en la Tabla 23, hubo variabilidad de respuesta entre los diferentes grupos de tratamiento. Los pacientes que recibieron 0,5 mg/kg IV parece que tienen las mejores respuestas; el valor de la severidad endoscópica mediana se redujo dos grados y la puntuación de la Clínica Mayo se redujo 10 puntos con una disminución en la frecuencia de las deposiciones. Tres de los cinco pacientes que recibían 0,5 mg/kg IV tuvieron una mejora de dos puntos en la puntuación de sigmoidoscopia de Baron modificada que se considera una respuesta endoscópica; sólo un paciente (comparado con un total de cinco tratados por grupo) en ambos grupos 2,0 mg/kg IV y 0,15 mg/kg SC no tuvo respuesta endoscópica. El grupo placebo también experimentó una mejora en la puntuación sigmoidoscópica y en la puntuación de la Clínica Mayo, aunque ambas fueron menores en magnitud en comparación con el grupo, mg/kg IV. dos de los ocho pacientes experimentaron una respuesta endoscópica.

El número de pacientes con una remisión completa, definida como un cero en la puntuación sigmoidoscópica de Baron modificada y en la puntuación de la Clínica Mayo en el Día 30, se registran en la Tabla 24

Tabla 24: Pacientes en Remisión Completa en el Día 30

Grupo de Tratamiento

Medido el Día 301

Número de Pacientes con Remisión Completa

Porcentaje de Pacientes en Remisión completa

0.15 mg/kg SC (n=5)

0 0

0.15 mg/kg IV (n=5)

0 0

0.5 mg/kg IV (n=5)

2 40%

2.0 mg/kg IV (n=6)

0 0

Todo LDP-02 (n=21)

2 9.5%

Placebo (n=8)

0 0

1Resultados de Cero en la Puntuación de Baron modificada y Puntuación de la Clínica Mayo en el Día 30

Ninguno de los pacientes en el grupo placebo experimentó una remisión completa mientras que dos pacientes de entre los que recibieron La LDP-02 tuvieron remisiones completas. Los dos pacientes estaban en el mismo grupo; ambos pacientes recibieron una única administración de 0,5 mg/kg de LDP-02. Uno de los pacientes estaba recibiendo terapia de mesalamina concurrente, mientras que el otro estaba recibiendo corticoesteroides de baja dosis concurrentes (20 mg de prednisona por día de forma oral).

Farmacocinéticas

El ensayo de la LDP-02 en suero se realizó por Cytometry Associates, Inc. como se ha descrito anteriormente (Estudio L297-007). Las muestras de sangre se recogieron antes e inmediatamente después de la terminación de la infusión (Día 1) y en los Días 2, 3, 5, 10, 14, 21, 30 y 60 para evaluar el perfil farmacocinético de la LDP-02.

Las concentraciones de LDP-02 a lo largo del tiempo por paciente individual y parámetros farmacocinéticos medios por dosis de LDP-02 se presentan en el Apéndice al estudio L296-006.

Como se ve en la FIGURA 8 los niveles séricos de LDP-02 para los grupos 0,15 mg/kg IV y SC cayeron a <1,0 (µg/mL) aproximadamente 20 días después de la dosis. Para el grupo de dosis 2,0 mg/kg, los niveles de LDP02 permanecieron elevados hasta aproximadamente el Día 60. La Tabla 25 presenta los parámetros farmacocinéticos clave por grupo de tratamiento.

Tabla 25: Parámetros Farmacocinéticos de la LDP-02

Parámetro Farmacocinético1

Dosis y Vía de Administración de la LDP-02 (número de sujetos con datos)2

0.15 mg/kg SC (n=5)

0. 15 mg/kg IV (n=5) 0. 5 mg/kg IV (n=5) 2. 0 mg/kg IV (n=4)3

Cmax (µg/mL)

1.44 (0.33) 3.602 (0.958) 10.544 (2.582) 32.933 (3.360)

tmax (días) (mediana & intervalo)

5 (3-10) 0.13 (0.13-0.13) 0.13 (0.13-0.13) 0.13 (0.13-2)

t1/2z (días)

15.63 (15.92) 18.91 (20.97) 10.62 (5.23) 15.0 (5.36)

AUCall (µg·día/mL)

25 (16) 27 (11) 91 (32) 515 (93)

λz (1/día)

0.1226 (0.1064) 0.0879 (0.0757) 0.0927 (0.0775) 0.0542 (0.0298)

AUC(INF) (µg·día/mL)

31 (23) 34 (18) 100 (39) 553 (116)

CL4 (mLddíakg)

9.21 (9.54) 7.75 (1.93) 6.06 (1.32) 2.31 (1.19)

Vz 4 (mL/kg)

95.08 (54.19) 101.05 (62.87) 77.63 (30.90) 76.64 (20.03)

1Todos los valores son medios +/-SD a menos que se indique lo contrario. El SD aparece en paréntesis. 2Dos pacientes, uno en el grupo 0.15 mg/kg Sc y otro en el grupo 0.5 mg/kg IV tuvieron datos evaluables a través del Día de estudio 21 con medición en momentos posteriores que no fueron fisiológicamente posibles. 3U paciente en el grupo de dosificación 2.0 mg/kg IV fue retirado en el Día de Estudio 10 y tuvo una intervención quirúrgica. Los resultados farmacocinéticos para este paciente no están incluidos. 4Los términos de depuración y volumen para el grupo de dosis SC son la depuración aparente (CL/F) y volumen aparente (Vz/F)

No parece que haya linealidad con la dosis para la concentración máxima de LDP-02 y el área por debajo de la curva medida después de la administración IV. La depuración y la vida media de eliminación terminal parecen ser independientes de la dosis IV administrada. El volumen de distribución parece disminuir ligeramente con dosis crecientes de LDP-02 IV.

Valoración del Efecto Farmacocinético de la LDP-02

El análisis FACS para medir la presencia de sitios de α4β7 en linfocitos sanguíneos se ha descrito anteriormente (Estudio L296-007). El enlace de la α4β7 sérico a lo largo del tiempo (es decir valores MESF y porcentaje de la línea de base en cada punto temporal post-dosis) se presentan por paciente individual y por grupo de tratamiento en el Apéndice al Estudio L297-006.

Los porcentajes medios de MESF de la línea de base a lo largo del tiempo para todos los tratamientos están presentados en la FIGURA 9. Como se ve en la FIGURA 9, el porcentaje de MESF de la línea de base cae rápidamente a aproximadamente un 10% después de la administración SC y IV de la LDP-02 con duración del efecto dependiente de la dosis. Comenzando alrededor del día 10, la señal de α4β7 empezó a retornar a la línea de base para los grupos de dosis 0,15 mg/kg IV y SC. Sin embargo, la señal de α4β7 empezó a retornar a la línea de base entre el día 30 y el día 60 para los grupos de dosis 0,5 mg/kg IV y 2,0 mg/kg.

Conclusiones

La administración de la LDP-02 en dosis de 0,15 mg/kg IV y SC, 0,5 mg/kg IV, y 2,0 mg/kg IV a pacientes con colitis ulcerosa moderadamente severa fue bien tolerada.

Los datos farmacocinéticos y farmacodinámicos de los pacientes con colitis ulcerosa fueron consistentes con los descubiertos en voluntarios sanos. Parece haber una linealidad con la dosis para la concentración máxima de LDP-02 y el área por debajo de la curva medida tras la administración IV. El volumen de distribución pareció aumentar ligeramente con dosis crecientes de LDP-02 IV. El porcentaje de MESF de la línea de base disminuyó a ~10% rápidamente después de la administración SC y IV de la LDP-02 con una duración del efecto dependiente de la dosis. Para los grupos de dosificación 0,15 mg/kg IV y SC, el porcentaje de la MESF de la línea de base comenzó a retornar a la línea de base aproximadamente 10 días después de la dosificación mientras este comenzó a tener lugar a los -30 días y -60 días para los grupos de dosis 0,5 mg/kg IV y 2, mg/kg, respectivamente.

Apéndice al Estudio L297-006

Concentración Sérica de LDP-02 a lo Largo del Tiempo por Sujeto y Grupo de Tratamiento. Los datos obtenidos de sujetos individuales se presentan en las Tablas 26-30. Los datos presentados en las Tablas 26-30 están en µg/mL.

Tabla 26 Grupo 1: 0.15 mg/kg LDP-02 SC

Tiempo (día)

Sujeto # 201101 Sujeto # 301103 Sujeto # 302105 Sujeto # 304107 Sujeto # 401104

Pre-Dosis 0.125 2 3 5 10 14 21 30 60

BQL BQL 0.61 0.90 0.76 0.15 BQL BQL BQL BQL BQL 0.07 0.91 1.10 1.48 1.12 0.61 BQL 0.33 0.23 BQL BQL 0.94 1.29 NR 1.40 0.78 NS 0.84 0.37 BQL BQL 1.01 1.49 1.66 0.92 0.24 0.11 0.26 0.30 BQL NS 1.29 1.65 1.74 1.44 0.99 0.65 0.12 BQL

BQL= registrado como no detectable NS= no se recibió muestra del laboratorio

Tabla 27 Grupo 2: 0.15 mg/kg LDP-02 IV

Time (Día)

Sujeto # 101201 Sujeto # 102202 Sujeto # 305204 Sujeto # 402203 Sujeto # 403206

Pre-Dosis

BQL BQL BQL BQL BQL

0.125

4.14 4.88 3.35 2.34 3.30

2

NR 2.74 1.92 1.83 2.34

3

3.12 3.15 1.55 1.42 2.03

5

1.82 1.83 1.33 0.82 1.19

10

0.81 0.88 0.86 0.37 0.79

14

0.32 0.15 BQL 0.23 0.26

21

0.38 0.12 0.10 BQL BQL

30

0.38 BQL 0.40 BQL 0.05

60

0.24 BQL 0.36 BQL 0.14

NR= no se informó del resultado de la muestra del laboratorio

Tabla 28 Grupo 3: 0.5 mg/kg LDP-02 IV

Tiempo(día)

Sujeto # 206302 Sujeto # 208303 Sujeto # 309306 Sujeto # 502304 Sujeto # 503307

Pre-Dosis 0.125 2 3 5 10 14 21 30 60

BQL 14.06 10.01 6.56 4.15 3.17 2.51 BQL BQL 0.41 BQL 12.33 8.51 6.45 5.52 4.46 0.14 0.17 0.48 1.73 BQL 7.90 5.73 4.96 3.59 2.81 2.46 *0.14 BQL 0.10 BQL 8.67 5.84 4.67 2.94 3.11 1.14 BQL 0.06 0.28 BQL 9.76 8.26 7.27 5.61 4.21 3.01 2.04 1.29 BQL

Tabla 29 Grupo 4: 2.0 mg/kg LDP-02 IV

Tiempo (día)

Sujeto # 104403 Sujeto # 210402 Sujeto # 310415 Sujeto # 404401 Sujeto # 504405 Sujeto # 506407

Pre-Dosis

BQL BQL BQL BQL BQL BQL

0.125

30.45 38.83 37.66 29.71 28.90 32.18

2

32.18 28.22 35.14 27.49 27.49 26.87

3

23.93 17.40 27.49 24.45 22.92 22.46

5

21.52 15.34 21.52 18.42 21.52 17.79

10

13:10 41.11 14.82 13.10 10.99 11.96

14

11.72 3.13 13.10 11.23 1.22 9.03

21

7.53 0.08 10.99 8.55 0.12 5.70

30

5.80 BQL 8.26 7.02 NR 4.19

60

1.71 0.41 2.24 1.95 NR 0.06

Tabla 30 Grupo placebo

Tiempo

Sujeto # Sujeto# Sujeto# Sujeto # Sujeto # Sujeto # Sujeto # Sujeto #

(día)

202102 303106 103205 306207 308305 501301 209404 505406

Pre-Dosis

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

0.125

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

2

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

3

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

5

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

10

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

14

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

21

BQL BQL NR BQL BQL BQL BQL BQL

30

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

60

BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL BQL

BQL = por debajo del límite de cuantificación.

Parámetros Farmacocinéticos Medios por Grupo de Tratamiento. Los datos obtenidos de sujetos individuales se presentan en las Tablas 31-34.

Tabla 31 Grupo 1: 0.15 mg/kg LDP-02 SC Tabla 34 Grupo 4: 2.0 mg/kg LDP-021V

Sujeto

Cmax (µg/mL) tmax (días) t1/2z (días) AUCall (µg·día/m L) λz (1/día) AUC (µg·día/mL) CL (mL/día/kg) Vz (mL/kg)

201101

0.90 3 2.58 5.30 0.2692 5.86 25.61 95.15

301103

1.48 5 34.61 30.39 0.0200 41.87 3.58 178.87

302105

1.40 10 31.35 46.94 0.0221 63.68 2.36 106.55

304107

1.66 5 3.88 15.41 0.1788 16.02 9.36 52.37

401104

1.74 5 5.72 28.17 0.1212 29.16 5.14 42.45

Media

1.436 5.6 15.628 25.242 0.1223 31.318 9.21 95.078

SD

0.329 2.607 15.921 15.813 0.1064 22.613 9.54 54.190

Cmax = concentración máxima tmax = tiempo para la concentración máxima λz = una medida de eliminación t1/2z = vida media terminal AUCt = AUCall = área por debajo de la curva usando todos los puntos temporales AUC = AUCext = área por debajo de la curva extrapolada AUC ext (%) = % de área por debajo de la curva atribuida a la extrapolación de la extrapolación VZ = volumen aparente de distribución CL = Depuración

Tabla 32 Grupo 2: 0.15 mg/kg LDP-02 IV

Sujeto

Cmax (µg/mL) tmax (días) t1/2z (días) AUCall (µg·día/mL) λz (1/día) AUC (µg·día/mL) CL (mL/día/kg) Vz (mL/kg)

101201

4.14 0.13 54.69 39.64 0.0127 58.58 2.56 202.06

102202

4.88 0.13 3.62 25.15 0.1914 25.78 5.82 30.39

305204

3.35 0.13 19.37 34.17 0.0358 44.23 3.39 94.77

402203

2.34 0.13 4.88 12.10 0.1420 13.72 10.94 77.03

403206

3.30 0.13 11.99 23.28 0.0578 25.70 5.84 100.99

Media

3.602 0.13 18.91 26.868 0.0879 33.602 5.71 101.05

SD

0.9579 0 20.97 10.611 0.0757 17.718 3.27 62.87

Tabla 33 Grupo 3: 0.5 mg/kg LDP-02 IV

Sujeto

Cmax (µg/mL) tmax (días) t1/2z (días) AUCall (µg·día/mL) λz (1/día) AUC (µg·día/mL) CL (mL/día/kg) Vz (mL/kg)

206302

14.06 0.13 17.21 139.26 0.0403 149.44 3.35 83.08

208303

12.33 0.13 3.02 74.99 0.2293 75.73 6.60 28.79

309306

7.90 0.13 9.22 67.49 0.0751 68.82 7.27 96.69

502304

8.67 0.13 10.52 65.34 0.0659 69.59 7.19 109.09

503307

9.76 0.13 13.11 109.80 0.0529 134.20 3.73 70.48

Media

10.544 0.13 10.616 91.376 0.0927 99.556 5.628 77.626

SD

2.582 0 5.229 32.207 0.0775 39.048 1.928 30.90

Sujeto

Cmax (µg/mL) tmax (días) t1/2z (días) AUCall (µg·día/mL) λz (1 día) AUC (µg·día/mL) CL (mL/día/kg) Vz (mL/kg)

104403

32.18 2.00 17.92 510.32 0.0387 554.52 3.61 93.22

310415

37.66 0.13 16.72 626.06 0.0415 680.08 2.94 70.92

404401

29.71 0.13 18.34 525.63 0.0378 577.22 3.46 91.68

506407

32.18 0.13 7.02 398.45 0.0988 399.06 5.01 50.75

506407 Media

32.933 0.13 15.0 515.12 0.0542 552.72 3.755 76.643

SD

3.360 0.935 5.364 93.19 0.0298 116.10 0.885 20.034

Enlace de α4β7 Sérica a lo Largo del Tiempo por Sujeto por Grupo de Tratamiento. Los datos obtenidos de sujetos individuales se presentan en las Tablas 35-40. Para cada sujeto se presenta el tiempo de muestro sanguíneo, MESF de la muestra y % de la línea de base (pre-dosis).

Tabla 35 Grupo 1: 0.15 mg/kg LDP-02 SC Tabla 36 Grupo 2: 0.15 mg/kg LDP-02 IV

Tiempo Días

Sujeto # 201101 Sujeto # 301103 Sujeto # 302105 Sujeto # 304107 Sujeto # 401104 Media

Pre-Dosis

1004 6 100 % 732 6 100% 1268 4 100 % 1311 7 100 % 3369 100% 9308 100%

0.125

951 9% 762 10% 1700 13% 857 7% 1105 33% 1075 12%

3

797 8% 383 5% 707 6% 853 7% 575 17% 663 17%

5

845 8% 723 10% 815 16% 1052 31% 859 9%

10

675 7% 717 10% 862 7% 865 7% 941 28% 812 9%

14

4197 42% 754 10% 830 7% 905 7% 1058 31% 1549 17%

21

9610 96% 803 11% 834 7% 3443 26% 948 28% 3128 34%

30

9462 94% 114 2 16% 1275 10% 1587 12% 1113 33% 2916 31%

60

9839 98% 752 10% 849 7% 1262 10% 2849 85% 3110 33%

Tiempo Días

Sujeto # 101201 Sujeto # 102202 Sujeto # 305204 Sujeto # 402203 Sujeto # 403206 Media

Pre-Dosis

2588 100% 271 2 100% 8394 100% 10016 100% 8342 100% 6410 100%

0.125

701 27% 827 30% 848 10% 642 6% 875 10% 779 12%

3

760 29% 784 29% 820 10% 679 7% 875 10% 784 12%

5

677 26% 884 33% 1012 12% 639 6% 859 10% 814 13%

10

671 26% 753 28% 943 11% 690 7% 856 10% 783 12%

14

1008 39% 151 5 56% 1377 16% 608 6% 744 9% 1050 16%

21

953 37% 422 0 156% 1860 22% 2044 20% 1606 19% 2137 33%

30

988 38% 328 12% 2332 28% 3302 33% 2560 31% 1902 30%

60

1680 65% 367 0 135% 3275 39% 6851 68% 1168 14% 3329 52%

Tabla 37 Grupo 3: 0.5 mg/kg LDP-02 IV

Tiempo Días

Sujeto # 206302 Sujeto # 208303 Sujeto # 309306 Sujeto # 502304 Sujeto # 503307 Media

Pre-Dosis

3830 100% 11267 100% 5084 100% 5615 100% 9400 100% 7039 100%

10.125

1322 35% 1577 14% 887 17% 879 16% 1021 11% 1137 16%

3

1189 31% 2012 18% 914 18% 775 14% 982 10% 1174 17%

5

1054 28% 1717 15% 962 19% 809 14% 1147 12% 1138 16%

10

1195 31% 2108 19% 965 19% 829 15% 732 8% 1166 17%

14

1339 35% 2405 21% 1106 22% 610 11% 801 9% 1252 18%

21

1296 34% 2085 19% 671 13% 636 11% 733 8% 1084 15%

30

1483 39% 1706 15% 1203 24% 860 15% 611 7% 1173 17%

60

985 26% 1038 9% 1611 32% 764 14% 7611 81% 2402 34%

Tabla 38 Grupo 4: 2.0 mg/kg LDP-02 IV*

Tiempo Días

Sujeto # 104403 Sujeto # 210402 Sujeto # 310415 Sujeto # 404401 Sujeto # 506407 Media

Pre-Dosis

6714 100% 5026 100% 4642 100% 4235 100% 7418 100% 5607 100%

0.125

695 10% 666 13% 736 16% 671 16% 738 10% 701 13%

3

659 10% 671 13% 632 14% 760 18% 683 9% 681 12%

5

633 9% 659 13% 663 14% 730 17% 665 9% 670 12%

10

703 10% 636 13% 556 12% 778 18% 734 10% 681 12%

14

681 10% 590 12% 640 14% 658 16% 755 10% 665 12%

21

528 8% 621 12% 568 12% 586 14% 756 10% 612 11%

30

639 10% 1218 24% 599 13% 682 16% 740 10% 776 14%

60

*Sin datos para el Sujeto # 505405

Tabla 39 Grupo Placebo

Tiempo Días

Sujeto # 202102 Sujeto # 303106 Sujeto # 103205 Sujeto # 306207 Sujeto # 308305 Sujeto # 501301

Pre-Dosis

7657 100% 21074 100% 4935 100% 8070 100% 15162 100% 5274 100%

0.125

5643 74% 23312 111% 4935 100% 6837 85% 15162 100% 6424 122%

3

8831 115% 19528 93% 4593 93% 7162 89% 13876 92% 6022 114%

5

7158 93% 16567 79% 4452 90% 5044 63% 13094 86% 5530 105%

10

7413 97% 17575 83% 5499 111% 4750 59% 14531 96% 8201 155%

14

6092 80% 17827 85% 3222 65% 4169 52% 10294 68% 6740 128%

21

8463 111% 18048 86% 4491 56% 12700 84% 7205 137%

30

7353 96% 15817 75% 2317 47% 1145 8 142% 9328 62% 5745 109%

60

3385 44% 11810 56% 4771 59% 9648 64% 3262 62%

Tabla 40 Grupo placebo

Tiempo Días

Sujeto # 209404 Sujeto # 505406 Media

Pre-Dosis

11012 100% 7579 100% 10095 100%

0.125

11826 107% 9025 119% 10396 103%

3

10549 96% 8792 116% 9919 98%

5

11614 105% 6217 82% 8710 86%

10

8238 75% 7150 94% 9170 91%

14

8382 76% 4787 63% 7689 76%

21

7031 64% 7160 94% 9300 92%

30

6817 62% 8166 108% 8375 83%

60

Claims (24)

1. REIVINDICACIONES

   1. El uso de una inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma, para la fabricación de un medicamento para tratar a un humano que tiene enfermedad intestinal inflamatoria, en donde dicho medicamento es para la administración en una única dosis o en una dosis inicial seguida por una o más dosis posteriores en donde no son administrados más de alrededor de 8 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de un mes, y en donde la mencionada inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende una región que enlaza con el antígeno de origen no humano y al menos una parte de un anticuerpo de

   origen humano y tiene especificidad de enlace para el complejo α4β7, y en donde dicha región que enlaza con el

   antígeno comprende tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena ligera y tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos enunciada a continuación:

   cadena ligera: CDR1 SEQ ID NO:9 CDR2 SEQ ID NO:10 CDR3 SEQ ID NO:11

   cadena pesada: CDR1 SEQ ID NO:12 CDR2 SEQ ID NO:13 CDR3 SEQ ID NO:14.

2. 2.

   El uso de la Reivindicación 1, en donde la mencionada inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:6.

3. 3.

   El uso de la Reivindicación 1 ó 2, en donde al mencionada inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende la región variable de cadena ligera SEQ ID NO:8.

4. 4.

   El uso de la Reivindicación 1, en donde el mencionado medicamento es suficiente para conseguir y mantener a)

   alrededor de un 50% o mayor saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en linfocitos circulantes y/o b) alrededor del 50% o mayor inhibición de la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de los linfocitos circulantes, y en donde la mencionada saturación y/o inhibición se mantiene durante un periodo de al menos alrededor de 10 días después de la administración de la dosis inicial.

5. 5.

   El uso de la Reivindicación 4, en donde cada una de las mencionadas dosis comprenden independientemente una cantidad de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno que es suficiente para conseguir a) alrededor de un 60% o mayor saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en los linfocitos circulantes y/o b) alrededor de un 60% o mayor inhibición de la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de los

   linfocitos circulantes.

6. 6.

   El uso de la Reivindicación 4, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente una cantidad de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno que es suficiente para conseguir

   a) alrededor de un 70% o mayor saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en los linfocitos circulantes y/o b) alrededor de un 70% o mayor inhibición de la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de los linfocitos circulantes.
7. 7. El uso de la Reivindicación 4, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente una cantidad de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno que es suficiente para conseguir

   a) alrededor de un 80% o mayor saturación de los sitios de enlace de la integrina α4β7 en los linfocitos circulantes y/o b) alrededor de un 80% o mayor inhibición de la expresión de la integrina α4β7 en la superficie celular de los linfocitos circulantes.

8. 8.

   El Uso de la Reivindicación 4, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente una cantidad de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno que es suficiente para conseguir y mantener la mencionada saturación y/o inhibición durante un periodo de al menos alrededor de 14 días, o al menos alrededor de 20 días, o al menos alrededor de 25 días, o al menos alrededor de 30 días, o al menos alrededor de 60 días después de la administración de la mencionada dosis.

9. 9.

   El uso de la Reivindicación 1, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende una cantidad de inmunoglobulina humanizada que es suficiente para conseguir y mantener una concentración sérica de inmunoglobulina humanizada de al menos alrededor de I µg/mL durante un periodo de al menos alrededor de 10 días, o al menos alrededor de 14 días, o al menos alrededor de 20 días, o al menos alrededor de 25 días, o al menos alrededor de 30 días, o al menos alrededor de 60 días después de la administración de la mencionada dosis.

10. 10.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 8 mg de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno por kg de peso corporal.

11. 11.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 5 mg de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno por kg de peso corporal.

12. 12.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 2,5 mg de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno por kg de peso corporal.

13. 13.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente alrededor de 0,15, alrededor de 0,5,alrededor de 1,0, alrededor de 1,5 o alrededor de 2,0mg de inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno por kg de peso corporal.

14. 14.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, en donde el intervalo entre la dosis inicial y las dosis posteriores es de al menos alrededor de 14 días, o al menos de alrededor de 21 días, o al menos de alrededor de 28 días, o al menos alrededor de 30 días.

15. 15.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, comprendiendo además el uso de una cantidad efectiva de uno o más agentes terapéuticos adicionales en la fabricación del medicamento.

16. 16.

    El uso de la Reivindicación 15, en donde los mencionados agentes son seleccionados del grupo consistente de esteroides, agentes inmunosupresores, agentes antiinflamatorios no esteroideos e inmunomoduladores.

17. 17.

    El uso de la Reivindicación 15, en donde los agentes mencionados son seleccionados del grupo consistente de azatiopreno, 6-mercatopurina, sulfasalazina, ácido 5-amino salicílico, prednisona y prednisolona.

18. 18.

    El uso de cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, en donde la mencionada enfermedad intestinal inflamatoria es colitis ulcerosa.

19. 19.

    El uso de la Reivindicación 18, en donde la mencionada enfermedad intestinal inflamatoria es la enfermedad de Crohn.

20. 20.

    El uso de la Reivindicación 1, en donde el intervalo mínimo entre dos dosis cualquiera es un periodo de al menos 1 semana.

21. 21.

    El uso de una inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma, para la fabricación de un medicamento para inhibir la recaída y/o reaparición de la enfermedad intestinal inflamatoria quiescente en donde dicho medicamento en donde dicho medicamento es para la administración en una única dosis

    o en una dosis inicial y dosis posteriores en donde no son administrados más de alrededor de 8 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal durante un periodo de alrededor de 30 días y en donde la mencionada inmunoglobulina humanizada o fragmento que enlaza con el antígeno de la misma comprende una región que enlaza con el antígeno de origen no humano y al menos una parte de un anticuerpo de origen humano y

    tiene especificidad de enlace para el complejo α4β7, y en donde dicha región que enlaza con el antígeno comprende

    tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena ligera y tres regiones determinantes complementarias (CDR1, CDR2 y CDR3) de una región variable de cadena pesada de la secuencia de aminoácidos enunciada a continuación:

    cadena ligera: CDR1 SEQ ID NO:9 CDR2 SEQ ID NO:10 CDR3 SEQ ID NO:11

    cadena pesada: CDR1 SEQ ID NO:12 CDR2 SEQ ID NO:13 CDR3 SEQ ID NO:14.

22. 22.

    El uso de la Reivindicación 21, en donde la quiescencia ha sido inducida por terapia médica o quirúrgica o en donde la mencionada enfermedad intestinal inflamatoria es colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn.

23. 23.

    El uso de la Reivindicación 1 ó 4, en donde cada una de las dosis mencionadas comprende independientemente alrededor de 6 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal.

24. 24.

    El uso de la Reivindicación 1 ó 4, en donde los intervalos entre dosis son de al menos 50 días.