ES2355808T3

ES2355808T3 - Polipéptidos derivados de proteína precursora amiloide (app) y sus usos.

Info

Publication number: ES2355808T3
Application number: ES02720228T
Authority: ES
Inventors: Radmila c/o Dept. of Biological Sciences MILEUSNIC; Steven Peter Russell c/o Dept. of Biological Sciences ROSE
Original assignee: Open University
Current assignee: Open University
Priority date: 2001-04-18
Filing date: 2002-04-17
Publication date: 2011-03-31
Anticipated expiration: 2022-04-17
Also published as: CY1111301T1; DK1381627T3; ATE487734T1; PT1381627E; DE60238243D1

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende: (a) un compuesto con la fórmula: X1 es un grupo acilo representado por la fórmula: X2 es H o un grupo acilo representado por la fórmula: y R representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, un grupo cicloalquilo sustituido por alquilo o no sustituido, un grupo aralquilo de cadena lineal o ramificada o un grupo arilo sustituido por alquilo o no sustituido, siendo los grupos R iguales o diferentes cuando hay dos presentes; y (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a compuestos polipeptídicos, a compuestos derivados de los mismos y al uso de dichos compuestos en medicina. Se cree que los compuestos según 5 la invención son potencialmente útiles como mejoradores cognitivos y en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La enfermedad de Alzheimer es una enfermedad cerebral 10 degenerativa que está caracterizada por la pérdida progresiva de la memoria, y subsiguientemente de la mayoría de las otras funciones cognitivas, en un deterioro irreversible durante un período de años. Representa un problema de salud considerable, particularmente en una población envejecida. 15

La proteína precursora amiloide (“APP” del inglés amyloid precursor protein) es una proteína transmembrana multifuncional y se sabe que tiene funciones importantes en el tejido cerebral normal. Se sabe que la forma humana de la APP consiste en 695 restos de aminoácidos (SEQ. ID. NO.: 1) en una secuencia que 20 también es conocida (véase Kang y col., Nature 325, 733-736 (1987)). Se sabe que la forma de pollo de la APP consiste en 534 restos de aminoácidos (SEQ. ID. NO.: 2) y que se parece mucho a la forma humana, teniendo aproximadamente un 95% de homología con la misma (véase el artículo de Kang y col. recién 25 mencionado, y Barnes y col, J Neurosci, 18 (15) 5869-5880 (1998)). Las secuencias de aminoácidos de las formas humana y de pollo de la APP están reproducidas en la figura 1 de los dibujos de esta memoria descriptiva.

Dos efectos que se ha apreciado que aparecen en el cerebro 30 de una persona que padece enfermedad de Alzheimer son la acumulación fuera de las células nerviosas del cerebro de masas enredadas de proteína, y la acumulación dentro de las células cerebrales de una proteína diferente. Se sabe que las proteínas extracelulares son agregados de polipéptidos con unas secuencias 35

de aminoácidos correspondientes a porciones de la parte extracelular de la APP. Las masas enmarañadas de estas proteínas se conocen como placas amiloides. Las proteínas intracelulares se conocen como proteínas tau. Sin embargo, no se sabe si una o ambas de la acumulación extracelular de placas amiloides y la 5 acumulación intracelular de proteínas tau son las causas o los síntomas de la enfermedad de Alzheimer y las enfermedades neurodegenerativas relacionadas del tipo de la enfermedad de Alzheimer.

La secuencia de aminoácidos del fragmento del polipéptido 10 -amiloideo (1-42) es idéntica en las formas humana y de pollo de la APP y consiste en los restos de aminoácidos 597 a 638 en la forma humana, y los restos 436 a 477 en la forma de pollo (véanse los artículos de Kang y col. y Barnes y col. mencionados más arriba). 15

DEFINICIONES

Las siguientes expresiones se usan en esta memoria descriptiva y tienen los siguientes significados, excepto donde el contexto indique otra cosa:

APP: significa "proteína precursora amiloide".

APP humana: significa la forma humana de la APP.

APP de pollo: significa la forma de pollo de la APP.

RERMS: significa el pentapéptido Arg-Glu-Arg-Ser-Met (SEQ. ID. NO.: 3).

APP 328-332: también significa el pentapéptido Arg-Glu-Arg-Ser-Met (SEQ. ID. NO.: 3) que se corresponde con los restos de aminoácidos 328 a 332 de la APP humana.

SMRER: significa el pentapéptido Ser-Met- Arg-Glu-Arg (SEQ. ID. NO.: 4).

APP 332-328: significa lo mismo que SMRER.

Dominio A: significa el dominio de la APP que forma placas -amiloides.

-amiloide 12-28: significa la secuencia de restos de aminoácidos que constituye parte del dominio A de la APP humana, siendo la secuencia Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys (SEQ. ID. NO.: 8), que se corresponde con los restos de aminoácidos 608 a 624 de la APP humana y los aminoácidos 447 a 463 de la APP de pollo.

RSAER: significa el pentapéptido Arg-Ser- Ala-Glu-Arg (SEQ. ID. NO.: 5).

APP 319-335: significa el polipéptido Ala-Lys-Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser-Gln-Val--Met (AKERLEAKHRERMSQVM) (SEQ. ID. NO.: 6).

RER: significa el tripéptido Arg-Glu-Arg (SEQ. ID. NO.: 9).

APP 328-330: significa lo mismo que RER.

Ac-RER: significa RER en el que uno de los átomos de hidrógeno del grupo -NH2 en el N-terminal ha sido sustituido por un grupo acetilo; la fórmula estructural del Ac-RER se da a continuación.

BERM: significa el tetrapéptido Arg-Glu-Arg-Met (SEQ. ID. NO.: 10).

APP 328-331: significa lo mismo que REM.

MRER: significa el tetrapéptido Met-Arg-Glu-Arg (SEQ. ID. NO.: 11).

APP 331-328: significa lo mismo que MRER.

Aminoácido: según se usa en este documento, pretende incluir aminoácidos tanto naturales como sintéticos, y ambos aminoácidos D y L.

Aminoácido estándar: significa cualquiera de los veinte L-aminoácidos estándar encontrados habitualmente en los péptidos naturales.

Aminoácido no estándar: significa cualquier aminoácido, distinto a los aminoácidos estándar, independientemente de si se prepara sintéticamente o deriva de una fuente natural; según se usa en este documento, "aminoácido sintético" también engloba aminoácidos modificados químicamente, incluyendo, pero no limitándose a, sales, derivados de aminoácidos (tales como amidas), y sustituciones. Los aminoácidos contenidos en los péptidos de la presente invención, y particularmente en los carboxilo o amino terminales, pueden modificarse mediante metilación, amidación, acetilación o sustitución con otros grupos químicos que pueden cambiar la semivida circulante de los péptidos sin afectar negativamente a su actividad; adicionalmente puede haber presente o ausente un puente de disulfuro en los péptidos de la invención.

Derivado: incluye cualquier péptido generado intencionadamente que tiene, en su totalidad o en parte, una secuencia de aminoácidos sustancialmente similar a la de los presentes compuestos; los derivados de los presentes compuestos pueden estar caracterizados por sustituciones, deleciones, adiciones o reemplazamientos individuales o múltiples de aminoácidos; estos derivados pueden incluir (a) derivados en los que uno o más restos de aminoácidos de los presentes compuestos están sustituidos por aminoácidos conservativos o no conservativos; (b) derivados en los que se añaden uno o más aminoácidos a los presentes compuestos; (c) derivados en los que uno o más de los aminoácidos de los presentes compuestos incluyen un grupo sustituyente; (d) derivados en los que los presentes compuestos o una porción de los mismos están fusionados con otro péptido (por ejemplo, albúmina sérica o dominio de transducción de proteína); (e) derivados en los que uno o más de los restos de aminoácidos no estándar (es decir, aquellos distintos a los 20 L-aminoácidos estándar encontrados en las proteínas naturales) están incorporados o sustituidos en la secuencia de los presentes compuestos; y (f) derivados en los que uno o más grupos de unión no aminoacídicos están incorporados o reemplazan una porción de los presentes compuestos.

APP 296-335, APP 317-332, APP 321-335, APP 319-332, APP 321-332, APP 321-331, APP 325-335, APP 321-330, APP 327-332 y APP 316-337: tienen los significados dados en las tablas 1 y 2, más adelante en este documento.

A lo largo de esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones, las secuencias de aminoácidos están escritas usando las abreviaturas estándar de una letra o de tres letras. Todas las secuencias están escritas de izquierda a derecha en la 5 dirección desde el N-terminal hacia el C-terminal.

El siguiente término se define como sigue:

secuencia en orden inverso según se usa en este documento, la secuencia en orden inverso de una secuencia dada es una secuencia en la que el orden de los restos de aminoácidos está 10 invertido en comparación con la secuencia dada cuando se lee en dirección desde el N-terminal hacia el C-terminal, y viceversa; por lo tanto, por ejemplo, SMRER es una secuencia en orden inverso de RERMS, leyéndose cada una según se indicó anteriormente de izquierda a derecha en la dirección N-terminal 15 hacia C-terminal; además, MVQSMRERHKAELREKA (SEQ. ID. NO.: 7)

(también denominada en este documento como APP 335-319) es la secuencia en orden inverso de la APP 319-335 definida anteriormente.

El documento WO-A-94/09808 (The Regents of The University of California, inventor T Saitoh) y T Saitoh y diversos 5 coautores en J. Neuroscience 14 5461-5470 (1994), J. Neurobiol. 25, 585-594 (1994) y J. Cell Biol. 121, 879-886 (1993) desvelan ciertos polipéptidos correspondientes a partes de la APP humana. Estos polipéptidos consisten en lo siguiente:

Tabla 1 10

Nº de restos de aminoácidos: Parte correspondiente de APP humana Secuencia SEQ. ID. NO.:

40: APP 296-335 TPDAVDKYLETPGDENEHAHFQKAKERLEAKHRERMSQVM [Thr-Pro-Asp-Ala-Val-Asp-Lys-Tyr-Leu-Glu-Thr-Pro-Gly-Asp-Glu-Asn-Glu-His-Ala-His-Phe-Gln-Lys-Ala-Lys-Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser-Gln-Val-Met] 22

17: APP 319-335 AKERLEAKHRERMSQVM [Ala-Lys-Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser-Gln-Val-Met] 6

16: APP 317-332 QKAKERLEAKHRERMS [Gln-Lys-Ala-Lys-Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser] 12

15: APP 321-335 ERLEAKHRERMSQVM [Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Ar -Glu-Arg-Met-Ser-Gln-Val-Met] 13

14: APP 319-332 AKERLEAKHRERMS [Ala-Lys-Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser]
14

12: APP 321-332 ERLEAKHRERMS [Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser] 15

11: APP 321-331 ERLEAKHRERM [Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met] 16

11: APP 325-335 AKHRERMSQVM [Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg--Met-Ser-Gln-Val-Met] 17

10: APP 321-330 ERLEAKHRER [Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg] 18

6: APP 327-332 HRERMS [His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser] 19

5: APP 328-332 RERMS [Arg-Glu-Arg-Met-Ser] 3

4: APP 328-331 REM [Arg-Glu-Arg-Met] 10

3: APP 328-330 RER [Arg-Glu-Arg] 9

Las mismas publicaciones también hacen referencia a un

polipéptido 17-mer que es la secuencia de orden inverso de la APP 319-335 (según se definió anteriormente). La secuencia de orden inverso también se identifica en este documento como APP 335-319.

G Multhaup y col., en J. Mol Recognition 8, 247-257 (1995), 5 desvelan el siguiente polipéptido, que también se corresponde con parte de la APP humana:

Tabla 2

Nº de restos de aminoácidos: Parte correspondiente de la APP humana Secuencia SEQ. ID. NO.:

22: APP 316-337 FQKAKERLEAKHRERMSQVMRE [Phe-Gln-Lys-Ala-Lys-Glu-Arg-Leu-Glu-Ala-Lys-His-Arg-Glu-Arg-Met-Ser-Gln-Val-Met-Arg-Glu] 20

MILEUSNIC R y col., EUROPEAN JOURNAL OF NEUROSCIENCE, vol. 10 12, nº Suplemento 11, página 314, (24 de junio de 2000) desvelan que la inyección de RERMS o SMRER 30 min antes de un entrenamiento de memoria (una prueba de tarea de evitación pasiva: pre-entrenamiento de pollos de días de edad) revierte la amnesia inducida por la APP antisentido en dichos pollos 15 (Resumen).

El documento WO-A-97/00063 desvela un péptido que comprende la secuencia RER en su C-terminal (página 61, ejemplo XXI), del que se establece (página 61, líneas 7-9) que es un agente bloqueante potencialmente superior para aumentar la cantidad 20 disponible de CRF y/o Ucn, de esta última se establece (página 61, líneas 24-27) que halla aplicación para modificar el humor, aprendizaje, memoria y comportamientos de individuos normales y con alteraciones mentales (enfermedad de Alzheimer: página 64, líneas 22-24) (página 61, líneas 24-27, reivindicación 36). 25 Puede incorporarse una amida sustituida (metilamida, etilamida) en el C-terminal (página 67, líneas 7-10).

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: 30

(a) un compuesto con la fórmula:

en la que:

X1 es un grupo acilo representado por la fórmula:

X2 es H o un grupo acilo representado por la fórmula: 5

y R representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, un grupo cicloalquilo sustituido por alquilo o no sustituido, un grupo aralquilo de cadena lineal o ramificada o un grupo arilo sustituido por alquilo o no sustituido, siendo 10 los grupos R iguales o diferentes cuando hay dos presentes; y

(b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también proporciona un método no terapéutico y no quirúrgico para producir un efecto de mejora cognitiva en un animal, que comprende: 15

proporcionar un animal en el que debe producirse el efecto; y

administrar al animal una cantidad de un compuesto eficaz para producir la mejora cognitiva, teniendo el compuesto la fórmula: 20

en la que:

X1 es un grupo acilo representado por la fórmula:

X2 es H o un grupo acilo representado por la fórmula: 5

y R representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, un grupo cicloalquilo sustituido por alquilo o no sustituido, un grupo aralquilo de cadena lineal o ramificada o un grupo arilo sustituido por alquilo o no sustituido, siendo 10 los grupos R iguales o diferentes cuando hay dos presentes.

Preferiblemente, X2 es H.

Ventajosamente, R representa un grupo alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada.

Más preferiblemente, R es un grupo metilo. 15

Algunos ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal y ramificada son grupos metilo, etilo n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, pentilo y hexilo. Algunos ejemplos de grupos cicloalquilo sustituidos o no sustituidos son grupos metilciclohexilo y ciclohexilo. Algunos ejemplos de 20

grupos aralquilo sustituidos o no sustituidos de cadena lineal o ramificada son un grupo bencilo. Algunos ejemplos de grupos arilo sustituidos o no sustituidos son grupos fenilo y tolilo.

Los grupos alquilo de cadena lineal o ramificada son los más preferidos para R. 5

El compuesto de la invención puede estar unido físicamente a una molécula adicional o vehículo para la administración farmacéutica del compuesto.

La invención proporciona adicionalmente un compuesto según se definió anteriormente para su uso en medicina, y el uso de 10 dicho compuesto en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer, y como mejorador cognitivo. El uso medicinal es preferiblemente el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa, más preferiblemente el tratamiento de la 15 enfermedad de Alzheimer.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Los dibujos de esta memoria descriptiva consisten en lo siguiente:

la figura 1 que muestra la secuencia de aminoácidos de la 20 APP humana y la APP de pollo, según se ha mencionado más arriba;

la figura 2 muestra el efecto del polipéptido -amiloide 12-28 sobre la formación de la memoria;

la figura 3 muestra el efecto de RERMS sobre la amnesia inducida por -amiloide 12-28; 25

la figura 4 muestra el efecto de RERMS sobre la amnesia inducida por anti-APP;

la figura 5 muestra el efecto de RERMS, SMRER y RSAER sobre la amnesia inducida por APP-antisentido;

la figura 6 muestra el efecto de APP 319-335 sobre la 30 amnesia inducida por APP-antisentido;

la figura 7 muestra el efecto de RERMS sobre un entrenamiento débil;

la figura 8 muestra el efecto de APP 319-335 sobre un entrenamiento débil; 35

la figura 9 muestra el efecto de RER sobre un entrenamiento débil;

la figura 10 muestra los efectos de RER y Ac-RER sobre la amnesia inducida por -amiloide 12-28;

la figura 11 muestra el efecto de Ac-RER sobre un 5 entrenamiento débil;

la figura 12 muestra los efectos de diferentes dosis de RER y Ac-RER; y

la figura 13 muestra el efecto de Ac-RER sobre la amnesia inducida por -amiloide 12-28. 10

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La invención se describirá ahora adicionalmente a modo de ejemplo con referencia a los siguientes procedimientos y resultados experimentales. Los péptidos RER, RERMS, SMRER, RSAER y APP 319-335 a los que se hace referencia caen fuera del ámbito 15 de la invención.

Materiales y métodos

Animales y entrenamiento

Se incubaron huevos Ross Chunky obtenidos comercialmente y se hicieron eclosionar en incubadoras, y se mantuvieron hasta 20 las 16 ± 6 horas de edad. Los pollos se colocaron por parejas en pequeños corrales de aluminio. Tras un período de equilibrado de una hora, los pollos se preentrenaron y se entrenaron esencialmente según describen Lossner y Rose (J. Neorochem. 41, 1357-1363 (1983). Los preentrenamientos implicaron tres 25 presentaciones de 10 s de una pequeña bola blanca (2 mm de diámetro), a intervalos de aproximadamente 5 minutos. Cuando los pollos no conseguían picotear la bola al menos dos veces en tres presentaciones (menos del 5%), no eran usados subsiguientemente, pero permanecían en sus corrales durante la duración del 30 experimento. Se usaron dos técnicas de entrenamiento: entrenamiento "fuerte" y "débil". En ambos, 5 a 10 minutos después de la última prueba de preentrenamiento, los pollos fueron entrenados mediante una presentación de 10 s de una bola cromada de 4 mm de diámetro que había sido sumergida en el 35

amargo antranilato de metilo. Los pollos de control picotearon una bola recubierta de agua o seca. En la versión "fuerte" de la tarea se usó un 100% de antranilato de metilo. En la versión "débil", se usó un 10% de antranilato de metilo. Los pollos picotearon espontáneamente la bola de entrenamiento o de control 5 durante 20 s. Los pollos que picotearon la bola amarga evidenciaron una reacción de disgusto y normalmente no picotearían una similar, sino la bola seca subsiguientemente durante algunas horas. En diversos momentos después del entrenamiento se probaron los pollos ofreciéndoles una bola 10 cromada de 4 mm seca, seguida 10 minutos después por una pequeña bola blanca (2 mm de diámetro), cada uno durante entre 20 y 30 s. Los animales fueron probados por un experimentador que no sabía qué tratamiento había recibido cada pollo. Se considera que los pollos recuerdan la tarea si evitan la bola cromada en 15 la prueba, pero pican la bola blanca (discriminan), y que la han olvidado si pican ambas bolas. La retentiva se calcula como una puntuación de evitación porcentual (porcentaje de pollos que evitan la bola cromada) y como una puntuación de discriminación (porcentaje de pollos que evitan la bola cromada pero pican la 20 bola blanca). El uso de la puntuación de discriminación asegura que los pollos pueden de hecho ver y picar de forma precisa la bola; y por lo tanto, que la evitación de la bola cromada no es debida a factores no específicos tales como una ausencia de coordinación oculomotora, motivación, atención, vigilia, etc., 25 sino que es un acto positivo, que demuestra la memoria para el estímulo desagradable. Cada pollo se entrenó y se probó sólo una vez, y se probaron las diferencias entre grupos para buscar la significación estadística mediante la prueba g-test descrita por Sokal y Rohlf (Biometry: the Principles and Practice of 30 Statistics in Biological Research (2ª edición), W H Freeman, Nueva York (1981)). La validez de esta tarea de entrenamiento en particular usada para valorar la formación de la memoria se discute ampliamente en Andrew (Neural and Behavioural Plasticity: the Use of the Domestic Chick as a Model, Oxford 35

University Press, Oxford, Reino Unido (1991)).

Se encontró que los pollos entrenados en la versión fuerte de la tarea retenían la evitación durante al menos 48 horas, y se encontró que más del 80% normalmente evitaban y discriminaban durante la prueba a las 24 horas. Por lo tanto, si se 5 administran los agentes que son amnésicos - esto es, que provocan que el pollo no recuerde -, los pollos mostrarían el olvido picando, en lugar de evitando, la bola cromada en la prueba. Por el contrario, se halló que los pollos normalmente recordaban la versión "débil" de la tarea durante únicamente 10 unas pocas horas, unas 6 a 8 horas en todos; la retención a las 24 horas normalmente estaba reducida a un 20 al 30%. Por lo tanto, la experiencia de aprendizaje no está comprometida con la memoria a largo plazo. Así pueden probarse los agentes que son mejoradores de la memoria. Un agente mejorador de la memoria, 15 administrado a un pollo entrenado en la tarea de aprendizaje débil, produce un aumento en la retención - aumento en la evitación de la bola cromada a las 24 horas. Esto es, dichos mejoradores de la memoria ayudan a convertir el aprendizaje débil en fuerte permitiendo la transición desde la memoria de 20 corto a largo plazo.

Inyecciones de péptidos

Se inyectaron inyecciones intracraneales bilaterales intracerebralmente (2 g/hemisferio) de disolución salina o de disoluciones de diferentes péptidos en disolución salina (de 0,5 25 a 5 g/hemisferio) homólogos de diferentes regiones del dominio externo de la APP humana, en una región cerebral específica de la que se sabe que es requerida para la formación de memoria (el hiperestriado ventral intermedio) en diferentes puntos temporales antes o después del entrenamiento usando una jeringa 30 Hamilton de 5 g equipada con una funda plástica para permitir una penetración de 3 mm. Tras completar la inyección, la aguja se mantuvo en el sitio durante 5 s. La correcta ubicación se aseguró usando un soporte craneal diseñado especialmente descrito por Davis y col. (Physiol. Behav. 22, 177-184 (1979)), 35

y se monitorizó visualmente rutinariamente postmortem. Los péptidos u otras sustancias se administraron en diversos momentos antes o después del protocolo de entrenamiento. Se probaron los pollos en diferentes momentos temporales tras el entrenamiento, según se describió anteriormente. Se observó el 5 comportamiento general de los pollos tras las inyecciones, para detectar cualquier potencial reacción no específica o adversa a las inyecciones.

Materiales peptídicos

Los polipéptidos administrados se sintetizaron usando un 10 sintetizador peptídico convencional de una forma que es conocida por los expertos en la materia. Los polipéptidos sintetizados se purificaron mediante el uso de RP-HPLC, y la pureza se comprobó adicionalmente mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF), siendo ambas técnicas conocidas por los expertos en la materia. 15 Tras la síntesis, los polipéptidos se mantuvieron en argón en un estado liofilizado, evitando el argón la oxidación, en particular de cisteína, metionina y triptófano.

La síntesis de polipéptidos, según se acaba de mencionar, la lleva a cabo MWG-Biotech UK Limited of Milton Keynes, Reino 20 Unido.

RERMS también está disponible en Bachem Limited of St. Helens, Merseyside, Reino Unido.

Ac-RER puede sintetizarse mediante técnicas conocidas por los expertos en la materia. Se obtuvo en Cambridge Research 25 Biochemicals Limited of Billingham, Cleveland, Reino Unido.

Para detalles adicionales relativos a métodos sintéticos para la preparación de péptidos y derivados peptídicos, se hace referencia a "Principles of Peptide Synthesis" de M. Bodanszky, 2ª Edición (Springer Laboratory, 1993) 30

Resultados experimentales

En muchos sistemas de modelo animal para el estudio de la memoria se sabe que la inyección de -amiloide y péptidos -amiloideos, tales como -amiloide 12-28, da como resultado un fracaso de los animales para retener las memorias recientemente 35

adquiridas. La figura 2 muestra este resultado para un pollo; la inyección de -amiloide 12-28 en el cerebro 30 minutos antes del entrenamiento de los pollos en una tarea de evitación pasiva da como resultado una amnesia en los animales probados 30 minutos subsiguientemente. 5

La figura 2 muestra a la izquierda la mitad de la evitación porcentual medida en términos de evitación total y de discriminación para un control salino, y a la derecha la mitad de la evitación porcentual medida cuando se inyecta -amiloide 12-28 según se describió anteriormente 30 minutos antes del 10 entrenamiento, y la memoria se prueba 30 minutos después del entrenamiento.

Sin embargo, si la amnesia es inducida por la inyección de -amiloide 12-28 30 minutos antes del entrenamiento, y se inyecta RERMS 20 minutos antes del entrenamiento, se restaura la 15 retención de la memoria. La figura 3 muestra que en este caso la memoria es normal a las 24 horas después del entrenamiento.

La figura 3 muestra a la izquierda la evitación porcentual medida en términos de evitación total y de discriminación para un control salino, en el centro los correspondientes resultados 20 cuando se inyecta -amiloide 12-28 30 minutos antes del entrenamiento y se prueba la memoria 24 horas después del entrenamiento, y a la derecha los resultados cuanto la inyección de -amiloide 12-28 antes del entrenamiento es seguida 10 minutos después por RERMS y se prueba la memoria de nuevo 24 horas 25 después del entrenamiento.

Por lo tanto, se muestra que RERMS puede evitar la pérdida de memoria producida por -amiloide 12-28, un componente de las placas amiloides características de la enfermedad de Alzheimer.

Se sabe que la alteración de la función normal de la APP 30 mediante el bloqueo de su dominio externo con un anticuerpo monoclonal específico (mb22C11) cerca del momento del entrenamiento, aunque no tiene efecto sobre la capacidad de los pollos para aprender la respuesta de evitación pasiva, evita la

transición a la memoria a largo plazo. El anticuerpo monoclonal mb22C11, disponible en Boehringer Mannheim, reconoce específicamente un epítopo consistente en parte del dominio externo de la APP.

La figura 4 muestra a la izquierda la evitación porcentual 5 medida para pollos inyectados con un control salino, en el centro la evitación porcentual medida cuando se inyecta intracerebralmente mb22C11 (1-5 g en 2 l) según se describió anteriormente para inyecciones de péptidos, 30 minutos antes del entrenamiento, y a la derecha, la evitación porcentual medida 10 cuando también se inyecta RERMS 25 minutos después de mb22C11 (5 minutos antes del entrenamiento). En todos los casos, la memoria se probó 24 horas después del entrenamiento.

Los resultados mostrados en la figura 4 demuestran que RERMS, inyectado 5 minutos antes del entrenamiento, evitará la 15 pérdida de memoria inducida por el anticuerpo, y que el péptido RERMS puede evitar la pérdida de memoria inducida por el anti-APP. Por lo tanto, RERMS puede evitar la pérdida de memoria resultante de la función normal de la APP.

Las figuras 5 y 6 muestran el efecto de inducir una pérdida 20 de memoria mediante la inyección de un oligodesoxinucleótido fosfodiéster 16-mer protegido terminalmente diseñado para corresponderse con los sitios de inicio de la transcripción 146 y AUG1786 del ARNm de la APP, inmediatamente secuencia arriba de un sitio de unión de ribozima. El oligodesoxinucleótido, 5'-CCC 25 GAG GAC TGA GCC A-3' (SEQ. ID. NO.: 21) fue adicionalmente modificado en los nucleótidos 2º y 13º para evitar un bucle interno, y está disponible en King's College Molecular Medicine Unit, Londres, Reino Unido. El oligodesoxinucleótido se usó en las formas desorganizada (scrambled, SC) y antisentido (AS) y se 30 administró según se describió anteriormente para la administración de péptidos, en una cantidad de 0,6 a 1,0 g en 2 l.

En un primer experimento, se inyectó a los pollos disolución salina, RERMS, SMRER y RSAER en diversas 35

combinaciones en las cantidades establecidas anteriormente.

Los resultados se muestran en la figura 5, que muestra las evitaciones porcentuales medidas en la tarea de aprendizaje "fuerte" descrita anteriormente. La figura 5a muestra el efecto, comparado con un control salino, de la administración separada 5 de oligodesoxinucleótido SC 12 horas antes del tratamiento y oligodesoxinucleótido AS 12 horas antes del tratamiento, junto con el efecto de la administración de RERMS después del oligodesoxinucleótido AS 30 minutos antes del tratamiento.

La figura 5a muestra que el oligodesoxinucleótido SC no 10 tuvo efecto sobre la memoria, pero el compuesto AS tuvo un efecto significativo sobre la pérdida de memoria que fue evitado en gran parte cuando se administró RERMS.

La figura 5b muestra que se obtuvieron resultados similares con el pentapéptido de orden inverso SMRER. 15

La figura 5c muestra que el efecto obtenido con RERMS y SMRER está ausente con el pentapéptido RSAER.

En un segundo experimento se administraron los oligodesoxinucleótidos SC y AS 12 horas antes del tratamiento. Se inyectó un polipéptido, (APP 319-335), correspondiente a los 20 restos de aminoácidos 319 a 335 de la APP humana, 30 minutos antes del tratamiento. Se probó la memoria de los pollos según la versión "fuerte" de la prueba descrita anteriormente, 30 minutos después del entrenamiento.

La figura 6 muestra sucesivamente desde la izquierda: la 25 evitación porcentual medida para un control salino; la evitación porcentual medida cuando se administró oligodesoxinucleótido SC; la evitación porcentual medida cuando se administró oligodesoxinucleótido AS; y la evitación porcentual medida cuando se administró APP 319-335 30 minutos antes del 30 tratamiento tras la administración de oligodesoxinucleótido AS 12 horas antes del tratamiento. Cada resultado se muestra tanto en términos de evitación total (columna de la izquierda) como de discriminación (columna de la derecha).

Los resultados mostrados en la figura 6 demuestran que la 35

APP319-335 puede evitar la pérdida de memoria inducida por el antisentido.

Las figuras 7 y 8 muestran los efectos de RERMS y APP 319-335 sobre la memoria en pollos entrenados con la prueba de memoria "débil" descrita anteriormente. 5

Según se estableció anteriormente, los pollos entrenados débilmente (entrenados con antranilato de metilo al 10%) retuvieron la memoria para la evitación durante sólo unas 6 horas, y a continuación olvidaron. La figura 7 muestra, a la izquierda, los resultados de la evitación porcentual (en 10 términos de evitación total y discriminación) para pollos entrenados con la versión "fuerte" del entrenamiento, en el centro los resultados correspondientes para el entrenamiento "débil", y en la derecha, el efecto de la administración de RERMS después del entrenamiento "débil". Se probó la memoria de 15 los pollos 24 horas después del entrenamiento; se administró RERMS de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente 30 minutos antes del entrenamiento.

La figura 8 muestra los correspondientes resultados obtenidos cuando se usó el polipéptido APP 319-335 en lugar de 20 RERMS.

Las figuras 7 y 8 muestran que RERMS y APP 319-335 inyectados antes del entrenamiento de los pollos en la tarea débil, mejoraron la memoria a las 24 horas. Funcionan, por tanto, como mejoradores cognitivos (agentes nootropos). Por lo 25 tanto, RERMS y APP 319-335 mejoran ambos la memoria normal en animales entrenados débilmente.

La figura 9 muestra el efecto de RER sobre la memoria en pollos entrenados con la prueba de memoria "débil" descrita anteriormente. 30

Según se estableció anteriormente, los pollos entrenados débilmente (entrenados con antranilato de metilo al 10%) retuvieron la memoria para la evitación sólo unas 6 horas, y a continuación olvidaron.

La figura 9 muestra, en las tres columnas de la izquierda, 35

los resultados de la evitación porcentual a la izquierda (en términos de evitación total) para pollos entrenados con la versión "fuerte" del entrenamiento, en el centro los resultados correspondientes al entrenamiento "débil" y, a la derecha, el efecto de la administración de RER tras el entrenamiento 5 "débil". Se probó la memoria de los pollos 24 horas después del entrenamiento; se administró RER de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente 30 minutos antes del entrenamiento.

La figura 9 muestra, a la derecha, los correspondientes datos en términos de discriminación. 10

La figura 9 muestra que el RER, si se inyecta antes de entrenar los pollos con la tarea débil, mejora la memoria a las 24 horas. Funciona, por tanto, como un mejorador cognitivo (agente nootropo). Por lo tanto, el RER mejora la memoria normal en animales entrenados débilmente. 15

La figura 10 muestra el efecto de RER y Ac-RER sobre la amnesia inducida por -amiloide 12-28 en pollos entrenados con la prueba de memoria "fuerte" descrita anteriormente.

La figura 10 muestra de izquierda a derecha la evitación porcentual medida en términos de evitación total y 20 discriminación para:

- pollos entrenados con la versión "fuerte" del entrenamiento;

- el efecto amnésico de -amiloide 12-28 administrado a 2 g/hemisferio 30 min antes del entrenamiento; 25

- el efecto del RER administrado a 2 g/hemisferio 20 min antes del entrenamiento tras la administración de -amiloide 12-28 30 min antes del entrenamiento; y

- el efecto del Ac-RER administrado a 2 g/hemisferio 20 min antes del entrenamiento tras la administración de -amiloide 30 12-28 30 min antes del entrenamiento.

Los resultados de la figura 10 muestran que tanto RER como Ac-RER tienen el efecto de restablecer la memoria medida 20 min tras la administración de RER o Ac-RER, tras la amnesia inducida

mediante la administración de -amiloide 12-28.

Los resultados también muestran que el efecto restablecedor de la memoria de Ac-RER es menor que el de RER, pero indica que el Ac-RER es más estable tras la administración, y por lo tanto, más adecuado para su administración periférica. 5

La figura 11 muestra el efecto de Ac-RER sobre la memoria en pollos entrenados con la prueba de memoria "débil" descrita anteriormente. La figura 11 muestra de izquierda a derecha la evitación porcentual medida en términos de evitación y discriminación total para: 10

- pollos entrenados con la versión "fuerte" del entrenamiento:

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento;

- pollos entrenados con la versión "débil" del 15 entrenamiento después de recibir Ac-RER administrado a 2 g/hemisferio 30 min antes; y

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento después de recibir Ac-RER administrado a 2 g/hemisferio 60 min antes. 20

Los resultados de la figura 11 muestran que Ac-RER tiene el efecto de mejorar la memoria de pollos tratados débilmente cuando se administra 30 ó 60 minutos antes. Los resultados también muestran que el efecto 60 minutos después de la administración todavía es significativo, aunque menos que 30 25 minutos después de la administración.

Los resultados muestran por tanto que Ac-RER tiene el efecto de un mejorador cognitivo, y que el efecto es apreciable durante un significativo período de tiempo.

La figura 12 muestra el efecto de diferentes dosis de RER y 30 Ac-RER sobre la memoria de pollos entrenados con la prueba de memoria "débil" descrita anteriormente.

La figura 12 muestra de izquierda a derecha la evitación porcentual medida en términos de evitación total y discriminación para: 35

- pollos entrenados con la versión "fuerte" del entrenamiento;

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento;

- pollos entrenados con la versión "débil" del 5 entrenamiento después de recibir RER administrado 30 min antes a 0,2 g/hemisferio;

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento después de recibir RER administrado 30 min antes a 1,0 g/hemisferio; 10

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento después de recibir RER administrado 30 min antes a 2,0 g/hemisferio;

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento después de recibir Ac-RER administrado 30 min 15 antes a 4,0 g/hemisferio; y

- pollos entrenados con la versión "débil" del entrenamiento después de recibir Ac-RER administrado 30 min antes a 6,0 g/hemisferio.

Los resultados de la figura 12 muestran que tanto RER como 20 Ac-RER tienen el efecto de mejorar la memoria de pollos entrenados débilmente cuando se administran 30 minutos antes, y que se requieren dosis mayores de Ac-RER que de RER para tener un efecto comparable.

Los resultados muestran por tanto que se requiere un 25 aumento en las cantidades de Ac-RER, en comparación con RER, para que se use como un mejorador cognitivo. Esto indica de nuevo que Ac-RER es más estable tras la administración que RER, y por lo tanto más adecuado para su administración periférica.

La figura 13 muestra el efecto de Ac-RER administrado en 30 diferentes momentos sobre la amnesia inducida por -amiloide 12-28 en pollos entrenados con la prueba de memoria "fuerte" descrita anteriormente.

La figura 13 muestra de izquierda a derecha la evitación

porcentual medida en términos de evitación total y discriminación para:

- pollos entrenados con la versión "fuerte" del entrenamiento;

- el efecto amnésico de -amiloide 12-28 administrado a 2 5 g/hemisferio 30 min antes del entrenamiento;

- el efecto restablecedor de la memoria de Ac-RER administrado a 4 g/hemisferio 60 min antes del entrenamiento y 30 min antes de la administración de -amiloide 12-28 a 2 g/hemisferio; 10

- el efecto restablecedor de la memoria de Ac-RER administrado a 4 g/hemisferio 20 min antes del entrenamiento y 10 min después de la administración de -amiloide 12-28 a 2 g/hemisferio; y

- el efecto restablecedor de la memoria de Ac-RER 15 administrado a 4 g/hemisferio junto con -amiloide 12-28 a 2 g/hemisferio 30 min antes del entrenamiento.

Los resultados de la figura 13 muestran que el Ac-RER tiene el efecto de restablecer la memoria cuando se ha inducido una amnesia con -amiloide 12-28. El efecto se manifiesta 20 independientemente de si el Ac-RER se administra antes, después o simultáneamente con el inductor de amnesia -amiloide 12-28.

El papel de la APP en la formación de la memoria se ha atribuido a su implicación en los procesos de adhesión de la célula al sustrato. Los datos referidos sugieren que la 25 implicación de la APP en la formación de la memoria implica muy probablemente un cambio en los eventos de transducción de señales. Los momentos tras el entrenamiento en los que la amnesia inducida por el anticuerpo y el antisentido, y en los que RER, Ac-RER, RERMS y SMRER evitan la amnesia, se 30 corresponden con aquellos durante los cuales la formación de la memoria es vulnerable a una alteración de las funciones de transducción de señales putativas de la APP.

El sistema del pollo es bueno para explorar estos aspectos, porque la tarea de aprendizaje es controlada de forma precisa y clara, y también permite asegurarse de que cualquier efecto observado de una sustancia inyectada es específico de retención y no de adquisición o de procesos concomitantes tales como 5 agudeza visual, vigilia o actividad motora. Además, se ha cartografiado bien el papel de otras moléculas de adhesión celular en la cascada que da lugar a la modulación sináptica, de forma que puede establecerse los efectos del bloqueo o del intento de rescate de la actividad de la APP funcional en un 10 contexto establecido: véase Rose, Learn. Memory 7, 1-17 (2000).

Los resultados experimentales a los que se hace referencia anteriormente indican por tanto que los compuestos de la presente invención son eficaces para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades y alteraciones neurológicas y como 15 mejoradores cognitivos (agentes nootropos) en otros animales, incluyendo mamíferos humanos y no humanos. Los compuestos son por lo tanto eficaces en el tratamiento y/o la prevención de la enfermedad de Alzheimer en seres humanos, y otras enfermedades y alteraciones neurodegenerativas en animales en general, 20 incluyendo los seres humanos. Dichos animales incluyen animales transgénicos y otros modelos animales para la enfermedad de Alzheimer.

Según se usa en este documento, excepto donde el contexto lo indique de otro modo, los términos "tratamiento", "tratar" y 25 expresiones análogas usadas en relación con las enfermedades neurodegenerativas incluyen dentro de su ámbito no sólo el tratamiento cuando los síntomas son apreciables, sino también la prevención parcial o total de dichas enfermedades y el retraso en su aparición en pacientes o animales que están sometidos a 30 tratamiento antes de la aparición de la enfermedad o de que sus síntomas sean apreciables.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse intracerebralmente según se describió anteriormente, o pueden administrarse por vía periférica, por 35

ejemplo, intramuscularmente, intravenosamente, transdérmicamente u oralmente, preferiblemente tras su complejación según se describió anteriormente. En lugar de eso, o además, los compuestos pueden protegerse frente a una alteración entre administración y eficacia, por ejemplo, mediante la adición de 5 grupos protectores.

Los resultados experimentales de las figuras 10 a 13 muestran que los derivados polipeptídicos de la presente invención, particularmente Ac-RER, son eficaces durante períodos de tiempo más largos tras su administración que sus análogos que 10 carecen de grupos protectores, y son por lo tanto particularmente adecuados para su administración periférica.

Los compuestos de la presente invención también pueden formularse como composiciones farmacéuticas, según se mencionó anteriormente, particularmente composiciones tales que sean 15 capaces de cruzar la barrera hematoencefálica, y ser por lo tanto adecuadas para su administración periférica.

En todos los casos, una dosis adecuada de los compuestos peptídicos según la invención es desde 10 hasta 100 g/kg de peso corporal del animal a tratar. 20

Según se usa en este documento, el término "eficaz para tratar", en el contexto de una enfermedad neurodegenerativa, significa que la cantidad del (los) compuesto(s) usado(s) en el tratamiento, que provoca(n) una reducción o estabilización o, según sea el caso, evita(n) o retrasa(n) la aparición de dichos 25 síntomas, medidos según criterios médicos o fisiológicos estándar, por ejemplo, según se desvela en Handbook of Memory Disorders (eds: A D Baddeley, B A Wilson 25 y F N Watts), Wiley (1995).

Según se usa en este documento, el término "eficaz para 30 tratar", en relación con una mejora cognitiva, significa una cantidad del (los) compuesto(s) usado(s) en el tratamiento que provoca una mejora en el poder cognitivo medido según criterios fisiológicos, por ejemplo según se desvela en Handbook of Memory Disorders (eds: A D Baddeley, B A Wilson y F N Watts), Wiley 35

(1995).

TEXTO LIBRE DE LISTADO DE SECUENCIAS

SEQ. ID. NO.: Texto libre <223>

3: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 5-mer

4: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 5-mer

5: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 5-mer

6: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 17-mer

7: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 17-mer

8: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 17-mer

9: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 3-mer

10: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 4-mer

11: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 4-mer

12: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 16-mer

13: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 15-mer

14: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 14-mer

15: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 12-mer

16: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 11-mer

17: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 11-mer

18: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 10-mer

19: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 6-mer

20: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 22-mer

21: Descripción de secuencia artificial: oligonucleótido 16-mer protegido terminalmente, modificado en las posiciones 2 y 13 para impedir la formación de bucle interno

22: Descripción de secuencia artificial: polipéptido 40-mer

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> The Open University 5

<110> Rose, Steven Peter Russell

<110> Mileusnic, Radmila

<120> Polipéptidos, derivados y usos de los mismos

<130> RA/P301588WO

<140> PCT/GB02/xxxxx 10

<141> 14-04-2002

<150> GB 0109558.7

<151> 18-04-2001

<150> GB 0120084.9

<151> 17-08-2001

<150> US 09/998491 5

<151> 30-11-2001

<150> GB 0207387.2

<151> 28-03-2002

<160> 22

<170> PatentIn ver. 2.1 10

<210> 1

<211> 695

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1 15

<210> 2

<211> 534

<212> PRT

<213> Gallus gallus 5

<400> 2

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial 5

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 5-mer

<400> 3

<210> 4 10

<211> 5

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 5-mer 15

<400> 4

<210> 5

<211> 5

<212> PRT 20

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 5-mer

<400> 5

25

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220> 30

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 17-mer

<400> 6

<210> 7

<211> 17

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial 5

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 17-mer

<400> 7

<210> 8 10

<211> 17

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 17-mer 15

<400> 8

<210> 9

<211> 3

<212> PRT 20

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 3-mer

<400> 9

25

<210> 10

<211> 4

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220> 30

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 4-mer

<400> 10

<210> 11

<211> 4 5

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 4-mer

<400> 11 10

<210> 12

<211> 16

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial 15

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 16-mer

<400> 12

<210> 13 20

<211> 15

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 15-mer 25

<400> 13

<210> 14

<211> 14

<212> PRT 30

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 14-mer

<400> 14

<210> 15

<211> 12

<212> PRT 5

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 12-mer

<400> 15

10

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220> 15

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 11-mer

<400> 16

<210> 17

<211> 11 20

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 11-mer

<400> 16 25

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial 30

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 10-mer

<400> 18

<210> 19

<211> 6

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial 5

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 6-mer

<400> 19

<210> 20 10

<211> 22

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 22-mer 15

<400> 20

<210> 21

<211> 16 20

<212> ADN

<213> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: oligodesoxinucleótido 16-mer protegido terminalmente, modificado en las posiciones 2 y 25 13 para impedir la formación de bucle interno

<400> 21

<210> 22

<211> 40 30

<212> PRT

<2I3> Secuencia Artificial

<220>

<223> Descripción de secuencia artificial: polipéptido 40-mer

<400> 22

Claims

REIVINDICACIONES
1. Una composición farmacéutica que comprende:

(a) un compuesto con la fórmula:

en la que:

X1 es un grupo acilo representado por la fórmula: 5

X2 es H o un grupo acilo representado por la fórmula:

y R representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, un grupo cicloalquilo sustituido por alquilo o no 10 sustituido, un grupo aralquilo de cadena lineal o ramificada o un grupo arilo sustituido por alquilo o no sustituido, siendo los grupos R iguales o diferentes cuando hay dos presentes; y

(b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.
2. Una composición farmacéutica según la reivindicación 1, 15 en la que X2 es H.
3. Una composición farmacéutica según la reivindicación 2, en la que R representa un grupo alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada.
4. Una composición farmacéutica según la reivindicación 3, en la que R es un grupo metilo.
5. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el compuesto está unido físicamente a una molécula adicional o vehículo para la 5 administración farmacéutica del compuesto.
6. Un compuesto con la fórmula:

en la que:

X1 es un grupo acilo representado por la fórmula: 10

X2 es H o un grupo acilo representado por la fórmula:

y R representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, un grupo cicloalquilo sustituido por alquilo o no 15 sustituido, un grupo aralquilo de cadena lineal o ramificada o un grupo arilo sustituido por alquilo o no sustituido, siendo los grupos R iguales o diferentes cuando hay dos presentes, para su uso en medicina.
7. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que X2 es H.
8. Un compuesto según la reivindicación 7, en el que R representa un grupo alquilo C1 a C6 de cadena lineal o ramificada. 5
9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el que R es un grupo metilo.
10. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, que está unido físicamente a una molécula adicional o vehículo para la administración farmacéutica del compuesto. 10
11. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, para su uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa.
12. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. 15
13. Uso de un compuesto según se define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa.
14. Uso de un compuesto según se define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en la preparación de un medicamento para 20 su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
15. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, para su uso como un mejorador cognitivo.
16. Uso de un compuesto según se define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en la preparación de un medicamento para 25 su uso como un mejorador cognitivo.
17. Un método no terapéutico y no quirúrgico para producir un efecto de mejora cognitiva en un animal, que comprende:

proporcionar un animal en el que debe producirse el efecto; y 30

administrar al animal una cantidad de un compuesto eficaz para producir la mejora cognitiva, teniendo el compuesto la fórmula:

en la que:

X1 es un grupo acilo representado por la fórmula:

X2 es H o un grupo acilo representado por la fórmula: 5

y R representa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, un grupo cicloalquilo sustituido por alquilo o no sustituido, un grupo aralquilo de cadena lineal o ramificada o un grupo arilo sustituido por alquilo o no sustituido, siendo 10 los grupos R iguales o diferentes cuando hay dos presentes.
18. Un método según la reivindicación 17, en el que X2 es H.
19. Un método según la reivindicación 18, en el que R representa un grupo alquilo C1 a C6 de cadena lineal o 15 ramificada.
20. Un método según la reivindicación 19, en el que R es un grupo metilo.
21. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a

20, en el que dicho compuesto se administra en forma de una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
22. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20, en el que dicho compuesto está unido físicamente a una 5 molécula adicional o vehículo para la administración farmacéutica del compuesto.
23. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 22, en el que el animal es un ser humano.