ES2337806T3

ES2337806T3 - Nonadepsipeptidos sustituidos.

Info

Publication number: ES2337806T3
Application number: ES05790976T
Authority: ES
Inventors: Franz Von Nussbaum; Nina Brunner; Rainer Endermann; Chantal Furstner; Elke Hartmann; Jacques Ragot; Guido Schiffer; Joachim Schuhmacher; Niels Svenstrup; Joachim Telser; Sonja Anlauf; Michael-Alexander Bruning
Original assignee: Aicuris GmbH and Co KG
Current assignee: Aicuris GmbH and Co KG
Priority date: 2004-10-20
Filing date: 2005-10-08
Publication date: 2010-04-29
Anticipated expiration: 2025-10-08
Also published as: EP1809653B1; DE102004051025A1; WO2006042654A1; JP2008517005A; EP1809653A1; US7786079B2; DE502005008925D1; ATE455789T1; US20080058251A1

Abstract

Compuesto de la fórmula **(Ver fórmula)** en la que R1 significa hidrógeno, alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, cicloalquilo C3-C6 o arilo C6-C10, donde el alquilo, alquenilo, cicloalquilo y arilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, ciano, trimetilsililo, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, benciloxi, cicloalquilo C3-C6, arilo C6-C10, heterociclilo de 5 a 7 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquil C1-C6-amino, aril C6-C10-amino, alquil C1-C6-carbonilamino, aril C6-C10-carbonilamino, alquil C1-C6-carbonilo, alcoxi C1-C6-carbonilo, aril C6-C10-carbonilo y benciloxicarbonilamino, donde, a su vez, el cicloalquilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, trifluorometilo, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, fenilo y heterociclilo de 5 a 7 miembros, R2 significa hidrógeno o alquilo C1-C4, R3 significa alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6, heterociclilo de 5 a 7 miembros, arilo C6-C10, heteroarilo de 5 ó 6 miembros, alquil C1-C6-carbonilo, alcoxi C1-C6-carbonilo, cicloalquil C3-C6-carbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 a 7 miembros, aril C6-C10-carbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 ó 6 miembros o alquil C1-C6-aminocarbonilo, donde el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo y alquilaminocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, alquil C1-C6-amino y fenilo, y donde el alquilcarbonilo está sustituido con un sustituyente amino o alquil C1-C6-amino, y donde el alquilcarbonilo puede estar sustituido con otros 0, 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, trimetilsililo, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-tio, benciloxi, cicloalquilo C3-C6, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquil C1-C6-carbonilamino, alcoxi C1-C6-carbonilamino, aril C6-C10-carbonilamino, aril C6-C10-carboniloxi, benciloxicarbonilo y benciloxicarbonilamino, donde, a su vez, el fenilo y heteroarilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, nitro, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 y fenilo, R4 significa hidrógeno, alquilo C1-C4, ciclopropilo o ciclopropilmetilo, y R5 significa aril C6-C10-aminocarbonilo, aril C6-C10-carbonilo, aril C6-C10-aminotiocarbonilo, aril C6-C10-tiocarbonilo, aril C6-C10-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros, donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-amino, alcoxi C1-C6-carbonilo, alquil C1-C6-aminocarbonilo, alquil C1-C6-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros, R6 significa hidrógeno, R7 significa hidrógeno, o R5 significa hidrógeno, R6 significa aril C6-C10-aminocarbonilo, aril C6-C10-carbonilo, aril C6-C10-aminotiocarbonilo, aril C6-C10-tiocarbonilo, aril C6-C10-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros, donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-amino, alcoxi C1-C6-carbonilo, alquil C1-C6-aminocarbonilo, alquil C1-C6-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros, R7 significa hidrógeno, o R5 significa hidrógeno, R6 significa hidrógeno, R7 significa aril C6-C10-aminocarbonilo, aril C6-C10-carbonilo, aril C6-C10-aminotiocarbonilo, aril C6-C10-tiocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros, donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-amino, alcoxi C1-C6-carbonilo, alquil C1-C6-aminocarbonilo, alquil C1-C6-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros, o R5 y R6 son iguales y significan aril C6-C10-aminocarbonilo, aril C6-C10-carbonilo, aril C6-C10-aminotiocarbonilo, aril C6-C10-tiocarbonilo, aril C6-C10-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros, donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-amino, alcoxi C1-C6-carbonilo, alquil C1-C6-aminocarbonilo, alquil C1-C6-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros, R7 significa hidrógeno, o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.

Description

Nonadepsipéptidos sustituidos.

La invención se refiere a nonadepsipéptidos de la fórmula (I) y a procedimientos para su preparación así como su uso para la fabricación de fármacos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente enfermedades infecciosas bacterianas.

La pared celular bacteriana se sintetiza por una serie de enzimas (biosíntesis de pared celular) y es esencial para la supervivencia o la multiplicación de microorganismos. La estructura de esta macromolécula así como de las proteínas que participan en su síntesis está muy conservada dentro de las bacterias. Debido a su naturaleza esencial y uniformidad, la biosíntesis de la pared celular es un punto de ataque ideal para nuevos antibióticos (D. W. Green, The bacterial cell wall as a source of antibacterial targets, Expert Opin. Ther. Targets, 2002, 6, 1-19).

La vancomicina y las penicilinas son inhibidores de la biosíntesis de la pared celular bacteriana y representan ejemplos exitosos de la potencia antibiótica de este principio activo. En la clínica se utilizan desde hace varias décadas para el tratamiento de infecciones bacterianas, sobre todo con patógenos gram-positivos. Por la creciente aparición de microorganismos resistentes, por ejemplo, estafilococos resistentes a meticilina, neumococos resistentes a penicilina y enterococos resistentes a vancomicina (F. Baquero, Gram-positive resistance: challenge for the development of new antibiotics, J. Antimicrob. Chemother., 1997, 39, Supl A: 1-6; A. P. Johnson, D. M. Livermore, G. S. Tillotson, Antimicrobial susceptibility of Gram-positive bacteria: what's current, what's anticipated?, J. Hosp. Infect., 2001, (49), Supl A: 3-11) así como, recientemente, estafilococos por primera vez resistentes a vancomicina (B. Goldrick, First reported case of VRSA in the United States, Am. J. Nurs., 2002, 102, 17), estas sustancias están perdiendo cada vez más su eficacia terapéutica.

La presente invención describe una nueva clase de inhibidores de la biosíntesis de pared celular sin resistencias cruzadas con clases conocidas de antibióticos.

En el documento US 4.754.018 se describe que la sustancia natural lisobactina y algunos derivados tienen eficacia antibacteriana. El aislamiento y la eficacia antibacteriana de lisobactina también se describen en los documentos EP-A-196 042 y JP 01132600. El documento WO04/099239 describe derivados de la lisobactina con eficacia antibacteriana.

La eficacia antibacteriana de lisobactina y katanosina A se describe de forma adicional en O'Sullivan, J. y col., J. Antibiot. 1988, 41, 1740 - 1744, Bonner, D. P. y col., J. Antibiot. 1988, 41, 1745 - 1751, Shoji, J. y col., J. Antibiot. 1988, 41, 713 - 718 y Tymiak, A. A. y col., J. Org. Chem. 1989, 54, 1149 – 1157.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos alternativos con actividad antibacteriana comparable o mejorada, mejor solubilidad y mejor tolerabilidad, por ejemplo, menor nefrotoxicidad, para el tratamiento de enfermedades bacterianas en seres humanos y animales.

Son objeto de la invención compuestos de la fórmula

1

en la que

R^{1}: significa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{6} o arilo C_{6}-C_{10},

\quad: donde el alquilo, alquenilo, cicloalquilo y arilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, ciano, trimetilsililo, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, benciloxi, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, arilo C_{6}-C_{10}, heterociclilo de 5 a 7 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquil C_{1}-C_{6}-amino, aril C_{6}-C_{10}-amino, alquil C_{1}-C_{6}-carbonilamino, aril C_{6}-C_{10}-carbonilamino, alquil C_{1}-C_{6}-carbonilo, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo y benciloxicarbonilamino,

\quad: donde, a su vez, el cicloalquilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, trifluorometilo; alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, fenilo y heterociclilo de 5 a 7 miembros,

R^{2}: significa hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4},

R^{3}: significa alquilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, heterociclilo de 5 a 7 miembros, arilo C_{6}-C_{10}, heteroarilo de 5 ó 6 miembros, alquil C_{1}-C_{6}-carbonilo, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, cicloalquil C_{3}-C_{6}-carbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 a 7 miembros, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 ó 6 miembros o alquil C_{1}-C_{6}-aminocarbonilo,

\quad: donde el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo y alquilaminocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, alquil C_{1}-C_{6}-amino y fenilo

\quad: y

\quad: donde el alquilcarbonilo está sustituido con un sustituyente amino o alquil C_{1}-C_{6}-amino

\quad: y

\quad: donde el alquilcarbonilo puede estar sustituido con otros 0, 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, trimetilsililo, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-tio, benciloxi, cicloalquilo C_{1}-C_{6}, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquil C_{1}-C_{6}-carbonilamino, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilamino, aril C_{6}-C_{10}-carbonilamino, aril C_{6}-C_{10}-carboniloxi, benciloxicarbonilo y benciloxicarbonilamino,

\quad: donde, a su vez, el fenilo y heteroarilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, nitro, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6} y fenilo,

R^{4}: significa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, ciclopropilo o ciclopropilmetilo

y

R^{5}: significa aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

\quad: donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-amino, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminocarbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros,

R^{6}: significa hidrógeno,

R^{7}: significa hidrógeno

o

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{6}: significa aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

R^{7}: significa hidrógeno

o

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{6}: significa hidrógeno,

R^{7}: significa aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

\quad: donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-amino, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminocarbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros

o

R^{5} y R^{6} son iguales y

\quad: significan aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

R^{7}: significa hidrógeno,

y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.

Son compuestos de acuerdo con la invención los compuestos de la fórmula (I) y sus sales, solvatos, solvatos de las sales y profármacos, los compuestos comprendidos por la fórmula (I) de las fórmulas que se mencionan a continuación y su sales, solvatos, solvatos de las sales y profármacos así como los compuestos comprendidos por la fórmula (I) que se mencionan a continuación como ejemplos de realización y sus sales, solvatos, solvatos de las sales y profármacos, siempre que en el caso de los compuestos comprendidos por la fórmula (I) que se mencionan a continuación no sean ya sales, solvatos, solvatos de las sales y profármacos.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden existir dependiendo de su estructura en formas estereoisoméricas (enantiómeros, diastereómeros). Por lo tanto, la invención se refiere a los enantiómeros o diastereómeros y sus respectivas mezclas. A partir de estas mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros se pueden aislar de manera conocida los constituyentes uniformes de manera estereoisomérica.

Como los compuestos de acuerdo con la invención pueden estar presentes en formas tautoméricas, la presente invención comprende todas las formas tautoméricas.

Como sales se prefieren en el marco de la presente invención sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención. Sin embargo, también están comprendidas sales que por sí mismas no son adecuadas para aplicaciones farmacéuticas, pero que, sin embargo, se pueden usar, a modo de ejemplo, para el aislamiento o la purificación de los compuestos de acuerdo con la invención.

Las sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención comprenden sales de adición de ácidos de ácidos minerales, ácidos carboxílicos y ácidos sulfónicos, por ejemplo, sales del ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico y ácido benzoico.

Las sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención también comprenden sales de bases habituales, tales como, de forma ilustrativa y preferentemente, sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, sales de calcio y magnesio) y sales de amonio, derivadas de amoniaco o aminas orgánicas con 1 a 16 átomos de C, tales como, de forma ilustrativa y preferentemente, etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procaína, dibencilamina, N-metilmorfolina, arginina, lisina, etilenodiamina y N-metilpiperi-
dina.

Como solvatos se denominan en el marco de la invención las formas de los compuestos de acuerdo con la invención que, en estado sólido o líquido, forman un complejo por coordinación con moléculas de disolvente. Los hidratos son una forma especial de los solvatos, en los que la coordinación se produce con agua.

En el marco de la presente invención, los sustituyentes, a menos que se especifique de otro modo, tienen el siguiente significado:

\quad: Alquilo \underbar{per se} y "alc" y "alquil" en alcoxi, alquilamino, alquiltio, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilaminosulfonilo, alquilcarbonilamino y alcoxicarbonilamino se refiere a un resto alquilo lineal o ramificado con, por norma, de 1 a 6, preferentemente de 1 a 4, de forma particularmente preferente de 1 a 3 átomos de carbono, de forma ilustrativa y preferentemente a metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, terc-butilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, n-pentilo y n-hexilo.

\quad: Alcoxi se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, terc-butoxi, n-pentoxi y n-hexoxi.

\quad: Alquiltio se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a metiltio, etiltio, n-propiltio, isopropiltio, terc-butiltio, n-pentiltio y n-hexiltio.

\quad: Alquenilo se refiere a un resto alquenilo lineal o ramificado con 2 a 6 átomos de carbono. Se prefiere un resto alquenilo lineal o ramificado con 2 a 4, de forma particularmente preferente con 2 a 3 átomos de carbono. Se mencionan de forma ilustrativa y preferentemente: vinilo, alilo, n-prop-1-en-1-ilo, n-but-2-en-1-ilo, 2-metilprop-1-en-1-ilo y 2-metilprop-2-en-1-ilo.

\quad: Alquilamino se refiere a un resto alquilamino con uno o dos sustituyentes alquilo (seleccionados independientemente entre sí), de forma ilustrativa y preferentemente a metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, terc-butilamino, n-pentilamino, N-hexilamino, N,N-dimetilamino, N,N-dietilamino, N-etil-N-metilamino, N-metil-N-n-propilamino, N-isopropil-N-n-propilamino, N-terc-butil-N-metilamino, N-etil-N-n-pentilamino y N-n-hexil-N-metilamino. Alquil C_{1}-C_{3}-amino se refiere, a modo de ejemplo, a un resto monoalquilamino con 1 a 3 átomos de carbono o a un resto dialquilamino con, respectivamente, 1 a 3 átomos de carbono por sustituyente alquilo.

\quad: Arilamino se refiere a un sustituyente arilo unido por un grupo amino, donde al grupo amino está unido eventualmente un sustituyente adicional tal como, por ejemplo, arilo o alquilo, de forma ilustrativa y preferentemente a fenilamino, naftilamino, fenilmetilamino o difenilamino.

\quad: Alquilcarbonilo se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a metilcarbonilo, etilcarbonilo, n-propilcarbonilo, isopropilcarbonilo, terc-butilcarbonilo, n-pentilcarbonilo y n-hexilcarbonilo.

\quad: Alcoxicarbonilo se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, n-propoxicar- bonilo, isopropoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo, n-pentoxicarbonilo y n-hexoxicarbonilo.

\quad: Alcoxicarbonilamino se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a metoxicarbonilamino, etoxicarbonilamino, n-propoxicarbonilamino, isopropoxicarbonilamino, terc-butoxicarbonilamino, n-pentoxicarbonilamino y n-hexoxicarbonilamino.

\quad: Cicloalquilcarbonilo se refiere a un sustituyente cicloalquilo unido por un grupo carbonilo, de forma ilustrativa y preferentemente a ciclopropilcarbonilo, ciclobutilcarbonilo, ciclopentilcarbonilo y ciclohexilcarbonilo.

\quad: Heterociclilcarbonilo se refiere a un sustituyente heterociclilo unido por un grupo carbonilo, de forma ilustrativa y preferentemente a tetrahidrofuranilcarbonilo, pirrolidinilcarbonilo, pirrolinilcarbonilo, piperidinilcarbonilo, tetrahidropiranilcarbonilo, piperazinilcarbonilo, morfolinilcarbonilo y perhidroazepinilcarbonilo.

\quad: Arilcarbonilo se refiere a un sustituyente arilo unido por un grupo carbonilo, de forma ilustrativa y preferentemente a fenilcarbonilo, naftilcarbonilo y fenantrenilcarbonilo.

\global\parskip0.970000\baselineskip

\quad: Heteroarilcarbonilo se refiere a un sustituyente heteroarilo unido por un grupo carbonilo, de forma ilustrativa y preferentemente a tienilcarbonilo, furilcarbonilo, pirrolilcarbonilo, tiazolilcarbonilo, oxazolilcarbonilo, imidazolilcarbonilo, piridilcarbonilo, pirimidilcarbonilo, piridazinilcarbonilo, indolilcarbonilo, indazolilcarbonilo, benzofuranilcarbonilo, benzotiofenilcarbonilo, quinolinilcarbonilo e isoquinolinilcarbonilo.

\quad: Alquilcarbonilamino se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a metilcarbonilamino, etilcarbonilamino, n-propilcarbonilamino, isopropilcarbonilamino, terc-butilcarbonilamino, n-pentilcarbonilamino y n-hexilcarbo- nilamino.

\quad: Arilcarbonilamino se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a fenilcarbonilamino, naftilcarbonilamino y fenantrenilcarbonilamino.

\quad: Arilcarboniloxi se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a fenilcarboniloxi, naftilcarboniloxi y fenantrenilcarboniloxi.

\quad: Alquilaminocarbonilo se refiere a un resto alquilaminocarbonilo con uno o dos sustituyentes alquilo (seleccionados independientemente entre sí), de forma ilustrativa y preferentemente a metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, n-propilaminocarbonilo, isopropilaminocarbonilo, terc-butilaminocarbonilo, n-pentilaminocarbonilo, n-hexilaminocarbonilo, N,N-dimetilaminocarbonilo, N,N-dietilaminocarbonilo, N-etil-N-metilaminocarbonilo, N-metil-N-n-propilaminocarbonilo, N-isopropil-N-n-propilaminocarbonilo, N-terc-butil-N-metilaminocarbonilo, N-etil-N-n-pentilaminocarbonilo y N-n-hexil-N-metilaminocarbonilo. Alquil C_{1}-C_{3}-aminocarbonilo se refiere, a modo de ejemplo, a un resto monoalquilaminocarbonilo con 1 a 3 átomos de carbono o a un resto dialquilaminocarbonilo con, respectivamente, 1 a 3 átomos de carbono por sustituyente alquilo.

\quad: Alquilaminosulfonilo se refiere a un resto alquilaminosulfonilo con uno o dos sustituyentes alquilo (seleccionados independientemente entre sí), de forma ilustrativa y preferentemente a metilaminosulfonilo, etilaminosulfonilo, n-propilaminosulfonilo, isopropilaminosulfonilo, terc-butilaminosulfonilo, n-pentilaminosulfonilo, n-hexilaminosulfonilo, N,N-dimetilaminosulfonilo, N,N-dietilaminosulfonilo, N-etil-N-metilaminosulfonilo, N-me- til-N-n-propilaminosulfonilo, N-isopropil-N-n-propilaminosulfonilo, N-terc-butil-N-metilaminosulfonilo, N-etil-N-n-pentilaminosulfonilo y N-n-hexil-N-metilaminosulfonilo. Alquil C_{1}-C_{3}-aminosulfonilo se refiere, a modo de ejemplo, a un resto monoalquilaminosulfonilo con 1 a 3 átomos de carbono o a un resto dialquilaminosulfonilo con, respectivamente, 1 a 3 átomos de carbono por sustituyente alquilo.

\quad: Arilaminocarbonilo se refiere a un sustituyente arilo unido por un grupo aminocarbonilo, donde al grupo aminocarbonilo está unido eventualmente un sustituyente adicional, tal como, por ejemplo, arilo o alquilo, de forma ilustrativa y preferentemente a fenilaminocarbonilo, naftilaminocarbonilo, fenilmetilaminocarbonilo o difenilaminocarbonilo.

\quad: Arilaminotiocarbonilo se refiere a un sustituyente arilo unido por un grupo aminotiocarbonilo, donde al grupo aminotiocarbonilo está unido eventualmente un sustituyente adicional, tal como, por ejemplo, arilo o alquilo, de forma ilustrativa y preferentemente a fenilaminotiocarbonilo, naftilaminotiocarbonilo, fenilmetilaminotiocarbonilo o difenilaminotiocarbonilo.

\quad: Ariltiocarbonilo se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a feniltiocarbonilo, naftiltiocarbonilo y fenantreniltiocarbonilo.

\quad: Arilsulfonilaminocarbonilo se refiere de forma ilustrativa y preferentemente a fenilsulfonilaminocarbonilo, naftilsulfonilaminocarbonilo y fenantrenilsulfonilaminocarbonilo.

\quad: Heteroarilaminocarbonilo se refiere a un sustituyente heteroarilo unido por un grupo aminocarbonilo, donde al grupo aminocarbonilo está unido eventualmente un sustituyente adicional, tal como, por ejemplo, arilo o alquilo, de forma ilustrativa y preferentemente a tienilaminocarbonilo, furilaminocarbonilo, pirrolilaminocarbonilo, tiazolilaminocarbonilo, oxazolilaminocarbonilo, imidazolilaminocarbonilo, piridilaminocarbonilo, pirimidilaminocarbonilo, piridazinilaminocarbonilo, indolilaminocarbonilo, indazolilaminocarbonilo, benzofuranilaminocarbonilo, benzotiofenilaminocarbonilo, quinolinilaminocarbonilo, isoquinolinilaminocarbonilo, furilmetilaminocarbonilo y piridilmetilaminocarbonilo.

\quad: Heteroarilaminotiocarbonilo se refiere a un sustituyente heteroarilo unido por un grupo aminotiocarbonilo, donde al grupo aminotiocarbonilo se une eventualmente un sustituyente adicional, tal como, por ejemplo, arilo o alquilo, de forma ilustrativa y preferentemente a tienilaminotiocarbonilo, furilaminotiocarbonilo, pirrolilaminotiocarbonilo, tiazolilaminotiocarbonilo, oxazolilaminotiocarbonilo, imidazolilaminotiocarbonilo, piridilaminotiocarbonilo, pirimidilaminotiocarbonilo, piridazinilaminotiocarbonilo, indolilaminotiocarbonilo, indazolilaminotiocarbonilo, benzofuranilaminotiocarbonilo, benzotiofenilaminotiocarbonilo, quinolinilaminotiocarbonilo, isoquinolinilaminotiocarbonilo, furilmetilaminotiocarbonilo y piridilmetilaminotiocarbonilo.

\quad: Heteroariltiocarbonilo se refiere a un sustituyente heteroarilo unido por un grupo tiocarbonilo, de forma ilustrativa y preferentemente a tieniltiocarbonilo, furiltiocarbonilo, pirroliltiocarbonilo, tiazoliltiocarbonilo, oxazoliltiocarbonilo, imidazoliltiocarbonilo, piridiltiocarbonilo, pirimidiltiocarbonilo, piridaziniltiocarbonilo, indoliltiocarbonilo, indazoliltiocarbonilo, benzofuraniltiocarbonilo, benzotiofeniltiocarbonilo, quinoliniltiocarbonilo e isoquinoliniltiocarbonilo.

\global\parskip1.000000\baselineskip

\quad: Cicloalquilo se refiere a un grupo cicloalquilo con, por norma, 3 a 6 átomos de carbono, de forma ilustrativa y preferentemente a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

\quad: Arilo se refiere a un resto carbocíclico, aromático, de mono- a tricícilco, con, por norma, 6 a 14 átomos de carbono; de forma ilustrativa y preferentemente a fenilo, naftilo y fenantrenilo.

\quad: Heterociclilo se refiere a un resto heterocíclico, mono- o policíclico, preferentemente mono- o bicíclico, con, por norma, 5 a 7 átomos de anillo y con hasta 3, preferentemente con hasta 2 heteroátomos y/o heterogrupos de la serie N, O, S, SO y SO_{2}._{ }Los restos heterociclilo pueden ser saturados o parcialmente insaturados. Se prefieren restos heterociclilo saturados monocíclicos de 5 a 7 miembros con hasta dos heteroátomos de la serie O, N y S, tales como, de forma ilustrativa y preferentemente, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, pirrolidin-2-ilo, pirrolidin-3-ilo, pirrolinilo, piperidin-1-ilo, piperidin-2-ilo, piperidin-3-ilo, piperidin-4-ilo, tetrahidropiran-2-ilo, tetrahidropiran-3-ilo, tetrahidropiran-4-ilo, piperazin-1-ilo, piperazin-2-ilo, morfolin-2-ilo, morfolin-3-ilo, morfolin-4-ilo, tiomorfolin-2-ilo, tiomorfolin-3-ilo, tiomorfolin-4-ilo y perhidroazepinilo.

\quad: Heteroarilo se refiere a un resto aromático, mono- o bicíclico con, por norma, 5 a 10, preferentemente de 5 a 6 átomos de anillo y con hasta 5, preferentemente con hasta 4 heteroátomos de la serie S, O y N, de forma ilustrativa y preferentemente a tien-2-ilo, tien-3-ilo, fur-2-ilo, fur-3-ilo, pirrol-1-ilo, pirrol-2-ilo, pirrol-3-ilo, tiazol-2-ilo, tiazol-4-ilo, tiazol-5-ilo, oxazol-2-ilo, oxazol-4-ilo, oxazol-5-ilo, imidazol-1-ilo, imidazol-2-ilo, imidazol-4-ilo, imidazol-5-ilo, pirid-2-ilo, pirid-3-ilo, pirid-4-ilo, pirimid-2-ilo, pirimid-4-ilo, pirimid-5-ilo, pirazin-2-ilo, pirazin-3-ilo, piridazin-3-ilo, piridazin-4-ilo, indolilo, indazolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, quinolinilo e isoquinolinilo.

\quad: Halógeno se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo, preferentemente flúor y cloro.

\vskip1.000000\baselineskip

Se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que

R^{1}: significa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2-piridilmetilo o 3-piridilmetilo,

\quad: donde el 2-piridilmetilo o 3-piridilmetilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por hidroxi, amino, trifluorometilo, metilo, metoxi y morfolinilo,

R^{2}: significa hidrógeno,

R^{3}: significa 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo, 1-amino-3,3-dimetilbut-1-ilcarbonilo o 1-amino-2-trimetilsililet-1-ilcarbonilo,

R^{4}: significa hidrógeno,

y

R^{6}: significa hidrógeno,

R^{7}: significa hidrógeno

o

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{7}: significa hidrógeno

o

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{6}: significa hidrógeno,

o

R^{5} y R^{6} son iguales y

R^{7}: significa hidrógeno,

y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que

R^{1}: significa 2-metilprop-1-ilo,

R^{2}: significa hidrógeno,

R^{3}: significa 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo,

R^{4}: significa hidrógeno

y

R^{5}: significa hidrógeno,

\global\parskip0.970000\baselineskip

R^{7}: significa hidrógeno

o

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{6}: significa hidrógeno,

\quad: donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-amino, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminocarbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros,

y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que

R^{1}: significa 2-metilprop-1-ilo,

R^{2}: significa hidrógeno,

R^{3}: significa 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo,

R^{4}: significa hidrógeno

y

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{6}: significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo,

\quad: donde el fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo y piridilcarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, piperazinilo, morfolinilo, 2-oxo-pirrolidinilo y 2-oxo-piperidinilo,

R^{7}: significa hidrógeno

o

R^{5}: significa hidrógeno,

R^{6}: significa hidrógeno,

R^{7}: significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo,

y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que R^{1} significa 2-metilprop-1-ilo, R^{2} significa hidrógeno, R^{3} significa 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo y R^{4} significa hidrógeno, y R^{5}, R^{6} y R^{7} tienen el significado que se ha indicado anteriormente.

\global\parskip1.000000\baselineskip

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que el estereocentro que procede de un aminoácido en R^{3} tiene configuración D.

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que R^{6} y R^{7} significan hidrógeno y R^{5} significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo, donde el fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo y piridilcarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, piperazinilo, morfolinilo, 2-oxo-pirrolidinilo y 2-oxo-piperidinilo y R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado que se ha indicado anteriormente.

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que R^{5} y R^{7} significan hidrógeno y R^{6} significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo, donde el fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo y piridilcarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, piperazinilo, morfolinilo, 2-oxo-pirrolidinilo y 2-oxo-piperidinilo y R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado que se ha indicado anteriormente.

También se prefieren compuestos de la fórmula (I) en la que R^{5} y R^{6} significan hidrógeno y R^{7} significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo, donde el fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo y piridilcarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, piperazinilo, morfolinilo, 2-oxo-pirrolidinilo y 2-oxo-piperidinilo y R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado que se ha indicado anteriormente.

Las definiciones de restos indicadas con detalle en las respectivas combinaciones o combinaciones preferidas de restos se sustituyen también de forma discrecional por definiciones de restos de otra combinación, independientemente de las respectivas combinaciones indicadas de los restos.

También se prefieren muy particularmente combinaciones de dos o más de los intervalos preferidos que se han mencionado anteriormente.

Además, es objeto de la invención un procedimiento para la preparación de los compuestos de las fórmulas (I), en el que se hacen reaccionar compuestos de la fórmula

2

en la que

R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado que se ha indicado anteriormente,

con 1 a 10 equivalentes, preferentemente de 2 a 5 equivalentes, de un cloruro de ácido aril- o heteroarilcarboxílico, un aril- o heteroarilisocianato, un cloruro de ácido aril- o heteroariltiocarboxílico, un aril- o heteroarilisotiocianato o un arilsulfonilisocianato, donde los restos arilo y heteroarilo se corresponden con los restos arilo y heteroarilo de los restos R^{5}, R^{6} y R^{7}, que tienen el significado que se ha indicado anteriormente,

y a continuación, la mezcla resultante de compuestos de la fórmula (I) se separa por cromatografía en los compuestos individuales de la fórmula (I).

Los grupos amino libres en los restos R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} se protegen antes de la reacción de acuerdo con procedimientos conocidos por el experto, por ejemplo, con un grupo protector Boc, que se vuelve a escindir después de la reacción y antes de la cromatografía.

La reacción con cloruros de ácido aril- y heteroarilcarboxílico, aril- y heteroarilisocianatos, cloruros de ácido aril- y heteroariltiocarboxílico, aril- y heteroarilisotiocianatos y arilsulfonilisocianatos se realiza generalmente en disolventes inertes, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperaturas de -30ºC a 50ºC a presión normal.

Son disolventes inertes, a modo de ejemplo, el tetrahidrofurano, cloruro de metileno, piridina, dioxano, dimetilformamida o una mezcla de los disolventes que se han indicado. Como disolventes inertes se prefieren tetrahidrofurano, cloruro de metileno y dimetilformamida.

Son bases, a modo de ejemplo, la trietilamina, diisopropiletilamina o N-metilmorfolina, se prefiere diisopropiletilamina.

Los compuestos de la fórmula (I) que están presentes en forma de sales se pueden transformar, por ejemplo, por reacción con ácido clorhídrico o ácido metanosulfónico, en una sal con un contraión diferente.

Los cloruros de ácido aril- y heteroarilcarboxílico, aril- y heteroarilisocianatos, cloruros de ácido aril- y heteroariltiocarboxílico, aril- y heteroarilisotiocianatos y arilsulfonilisocianatos son conocidos o se pueden preparar de manera análoga a procedimientos conocidos.

Los compuestos de la fórmula (II) son conocidos o se pueden preparar, haciendo reaccionar el compuesto de la fórmula

3

\vskip1.000000\baselineskip

con compuestos de la fórmula

4

\vskip1.000000\baselineskip

en la que

R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado que se ha indicado anteriormente y

X^{1}: significa halógeno, preferentemente bromo, cloro o flúor, o hidroxi.

\vskip1.000000\baselineskip

En el caso de que X^{1} represente halógeno, la reacción se realiza generalmente en disolventes inertes, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperaturas de -30ºC a 50ºC a presión normal.

Son disolventes inertes, a modo de ejemplo, el tetrahidrofurano, cloruro de metileno, piridina, dioxano o dimetilformamida. Como disolventes inertes se prefieren tetrahidrofurano o cloruro de metileno.

Son bases, a modo de ejemplo, la trietilamina, diisopropiletilamina o N-metilmorfolina, prefiriéndose diisopropiletilamina.

En el caso de que X^{1} represente hidroxi, la reacción se realiza generalmente en disolventes inertes, en presencia de un reactivo de deshidratación, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperaturas de -30ºC a 50ºC a presión normal.

Son disolventes inertes, a modo de ejemplo, hidrocarburos halogenados, tales como diclorometano o triclorometano, hidrocarburos, tales como benceno, nitrometano, dioxano, dimetilformamida o acetonitrilo. Asimismo es posible utilizar mezclas de los disolventes. Se prefiere particularmente diclorometano o dimetilformamida.

A este respecto, son adecuados como reactivos de deshidratación, a modo de ejemplo, carbodiimidas, tales como, por ejemplo, N,N'-dietil-, N,N,'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N,N'-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilaminoisopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC), N-ciclohexilcarbodiimida-N'-propiloximetil-poliestireno (PS-Carbodiimida) o compuestos carbonílicos, tales como carbonildiimidazol, o compuestos 1,2-oxazolio, tales como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazolio o compuestos acilamino, tales como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina o anhídrido del ácido propanofosfónico o cloroformiato de isobutilo, o cloruro de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)-fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxi-tri(dimetilamino)-fosfonio, o hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N'N'-tetra-metiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TPTU) o hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N'N'-tetrametil-uronio (HATU), o 1-hidroxi-benzotriazol (HOBt), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)-fosfonio (BOP) o N-hidroxisuccinimida, o mezclas de los mismos, con bases.

Son bases, a modo de ejemplo, los carbonatos de metales alcalinos, tales como, por ejemplo, carbonato o hidrogenocarbonato sódico o potásico o bases orgánicas, tales como trialquilaminas, por ejemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina.

Preferentemente, la condensación se realiza con HATU o con EDC en presencia de HOBt.

Los compuestos de la fórmula (IV) llevan eventualmente grupos protectores, de tal forma que en estos casos, a la reacción del compuesto de la fórmula (III) con compuestos de la fórmula (IV) sigue una escisión de los grupos protectores con, por ejemplo, ácido trifluoroacético de acuerdo con procedimientos conocidos por el experto.

El compuesto de la fórmula (III) se puede sintetizar por la doble degradación de Edmann a partir de lisobactina (Ejemplo 1A).

Los compuestos de la fórmula (IV) se conocen o se pueden sintetizar de acuerdo con procedimientos conocidos a partir de los reactantes correspondientes.

La preparación de los compuestos de acuerdo con la invención se puede ilustrar mediante el siguiente esquema de síntesis.

\newpage

Esquema de síntesis

5

Los compuestos de acuerdo con la invención muestran un espectro de acción farmacológico valioso no previsible. Muestran una acción antibacteriana.

Por lo tanto, son adecuados para el uso como fármacos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en seres humanos y animales.

Los compuestos de acuerdo con la invención se caracterizan por una menor nefrotoxicidad con respecto a lisobactina.

Los compuestos de acuerdo con la invención se caracterizan por una mejor solubilidad con respecto a lisobactina.

Los nonadepsipéptidos que se han descrito actúan como inhibidores de la biosíntesis de la pared celular bacteriana.

Las preparaciones de acuerdo con la invención son particularmente eficaces contra bacterias y microorganismos similares a bacterias. Por lo tanto, son particularmente adecuadas para la profilaxis y quimioterapia de infecciones locales y sistémicas en medicina y veterinaria, que pueden ser causadas por estos patógenos.

Básicamente, las preparaciones de acuerdo con la invención se pueden usar contra todas las bacterias y microorganismos similares a bacterias, que poseen una pared celular bacteriana (murein sacculus) o los sistemas enzimáticos correspondientes, a modo de ejemplo, por los siguientes patógenos o por mezclas de los siguientes patógenos:

Cocos gram-negativos (Neisseria gonorrhoeae) así como bacilos gram-negativos, tales como enterobacterias, por ejemplo, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Pseudomonas, Klebsiella, Citrobacter (C. freundii, C. divernis), Salmonella y Shigella; además, Enterobacter (E. aerogenes, E. agglomerans), Hafnia, Serratia (S. marcescens), Providencia, Yersinia, así como el género Acinetobacter, Branhamella y Chlamydia. Además de esto, el espectro antibacteriano comprende bacterias anaerobias estrictas, tales como, por ejemplo, Bacteroides fragilis, representantes del género Peptococcus, Peptostreptococcus así como el género Clostridium; además, Micobacterias, por ejemplo, M. tuberculosus. Los compuestos de acuerdo con la invención muestran una actividad particularmente pronunciada contra cocos gram-positivos, por ejemplo, estafilococos (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. carnosus), enterococos (E. faecalis, E. faecium) y estreptococos (S. agalactiae, S. pneumoniae, S. pyogenes).

La anterior enumeración de patógenos se tiene que interpretar como meramente ilustrativa y de ningún modo como limitante. Como enfermedades que se provocan por los patógenos que se han mencionado o infecciones mixtas y que se pueden prevenir, mejorar o curar mediante las preparaciones de acuerdo con la invención, se mencionan a modo de ejemplo:

Enfermedades infecciosas del ser humano, tales como, por ejemplo, infecciones no complicadas y complicadas de las vías urinarias, infecciones no complicadas de la piel y superficiales, infecciones complicadas de la piel y tejidos blandos, pulmonía adquirida en el hospital y como paciente externo, neumonías nosocomiales, exacerbaciones agudas e infecciones bacterianas secundarias de bronquitis crónica, otitis media aguda, sinusitis aguda, faringitis estreptocócica, meningitis bacteriana, uretritis/cervicitis gonocócica y no gonocócica no complicada, prostatitis aguda, endocarditis, infecciones intra-abdominales no complicadas y complicadas, infecciones ginecológicas, enfermedad inflamatoria pélvica, vaginosis bacteriana, osteomielitis aguda y crónica, artritis bacteriana aguda, terapia empírica en pacientes neutropénicos febriles, por lo demás, bacteriemias, infecciones por MRSA, diarrea infecciosa aguda, infecciones por Helicobacter pylori, infecciones post-quirúrgicas, infecciones odontógenas, infecciones oftalmológicas, infecciones post-quirúrgicas, (incluyendo absceso perirrectal, infecciones de heridas, infecciones biliares, mastitis y apendicitis aguda), fibrosis quística y bronquiectasia.

Además de en el ser humano, también se pueden tratar infecciones bacterianas en otras especies. Se mencionan a modo de ejemplo:

Cerdo: diarrea, enterotoxemia, septicemia, disentería, salmonelosis, síndrome de metritis-mastitis-agalaxia, mastitis;

Rumiantes (vaca, oveja, cabra): diarrea, septicemia, bronconeumonía, salmonelosis, pasteurelosis, infecciones genitales;

Caballo: bronconeumonías, poliartritis septicémica, infecciones puerperales y post-puerperales, salmonelosis;

Perro y gato: bronconeumonía, diarrea, dermatitis, otitis, infecciones de vías urinarias, prostatitis;

Aves (gallina, pavo, codorniz, paloma, aves ornamentales y otras): infecciones por E. coli, enfermedades crónicas de vías respiratorias, salmonelosis, pasteurelosis, psitacosis.

Asimismo, se pueden tratar enfermedades bacterianas en la cría y el mantenimiento de peces de producción y ornamentales, donde el espectro antibacteriano se extiende más allá de los patógenos que se han mencionado anteriormente a otros patógenos, tales como, por ejemplo, Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Corinebacterias, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsia y Yersinia.

Es un objeto adicional de la presente invención el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para la fabricación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de las enfermedades que se han mencionado anteriormente.

Preferentemente, los compuestos de acuerdo con la invención se usan para la fabricación de fármacos que son adecuados para la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades bacterianas.

Son un objeto adicional de la presente invención los fármacos que contienen al menos un compuesto de acuerdo con la invención y al menos uno o varios ingredientes activos adicionales, particularmente para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades que se han mencionado anteriormente. Los ingredientes activos de combinación preferidos son compuestos con acción antibacteriana que tienen otro especto de acción, particularmente un espectro de acción complementario, y/o son sinérgicos con respecto a los compuestos de acuerdo con la invención.

Los compuestos de acuerdo con la invención pueden actuar de forma sistémica y/o local. Con este fin, se pueden administrar de manera adecuada, tal como, por ejemplo, por vía oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica, transdérmica, conjuntival, ótica o como implante o endoprótesis.

Para estas vías de administración, los compuestos de acuerdo con la invención se pueden administrar en formas de administración adecuadas.

Para la administración oral son adecuadas las formas de administración que funcionan de acuerdo con el estado de la técnica que suministran de forma rápida y/o modificada los compuestos de acuerdo con la invención, que contienen los compuestos de acuerdo con la invención en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta, tales como, por ejemplo, comprimidos (comprimidos no revestidos o revestidos, a modo de ejemplo, con revestimientos entéricos o que se disuelven de forma retardada o insolubles, que controlan la liberación del compuesto de acuerdo con la invención), comprimidos o películas/obleas que se descomponen rápidamente en la cavidad oral, películas/liofilizados, cápsulas (a modo de ejemplo, cápsulas de gelatina dura o blanda), grageas, gránulos, pellas, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.

La administración parenteral puede tener lugar evitando una etapa de absorción (por ejemplo, de forma intravenosa, intra-arterial, intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o con intercalación de una absorción (por ejemplo, de forma intramuscular, subcutánea, intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Para la administración parenteral, son adecuadas como formas de administración, entre otras, preparaciones para inyección e infusión en forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos estériles.

Para las demás vías de administración son adecuadas, por ejemplo, formas farmacéuticas para inhalación (entre otros, inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas, soluciones, pulverizadores nasales, comprimidos, películas/obleas o cápsulas a administrar por vía lingual, sublingual o bucal, supositorios, preparaciones óticas u oculares, cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas de agitación), suspensiones lipófilas, pomadas, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos (tales como, a modo de ejemplo, parches), leche, pastas, espumas, polvos de uso externo, implantes o endoprótesis vasculares.

Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden transformar en las formas de administración que se han indicado. Esto puede efectuarse de manera conocida por mezcla con adyuvantes inertes, no tóxicos, farmacéuticamente adecuados. A estos adyuvantes pertenecen, entre otros, vehículos (a modo de ejemplo, celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por ejemplo, polietilenglicoles líquidos), emulsionantes y agentes dispersantes o humectantes (a modo de ejemplo, dodecilsulfato sódico, oleato de polioxisorbitano), aglutinantes (a modo de ejemplo, polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos y naturales (a modo de ejemplo, albúmina), estabilizantes (por ejemplo, antioxidantes, tales como, a modo de ejemplo, ácido ascórbico), colorantes (por ejemplo, pigmentos inorgánicos, tales como, a modo de ejemplo, óxidos de hierro) y correctores de sabor y/u olor.

Son un objeto adicional de la presente invención los fármacos que contienen al menos un compuesto de acuerdo con la invención, habitualmente junto con uno o varios adyuvantes inertes, no tóxicos, farmacéuticamente adecuados, así como su uso para los fines que se han mencionado anteriormente.

En general se ha demostrado que en la administración intravenosa es ventajoso administrar cantidades de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg, preferentemente de aproximadamente 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal para la obtención de resultados eficaces y con la administración oral, la dosificación es de aproximadamente 0,01 a 50 mg/kg, preferentemente de 0,5 a 10 mg/kg de peso corporal.

A pesar de esto, eventualmente puede ser necesario desviarse de las cantidades que se han mencionado y, en particular, dependiendo del peso corporal, de la vía de administración, del comportamiento individual con respecto al ingrediente activo, del tipo de la preparación y el momento en o el intervalo con el que se produce la administración. De este modo, en algunos casos puede ser suficiente trabajar con menos de la cantidad mínima que se ha mencionado anteriormente, mientras que en otros casos se tiene que superar el límite superior que se ha mencionado. En el caso de la administración de mayores cantidades, puede ser recomendable distribuir las mismas en varias tomas individuales a lo largo del día.

Las indicaciones en porcentaje en los siguientes ensayos y ejemplos, a menos que se indique de otro modo, son porcentajes en peso; las partes son partes en peso. Las proporciones de disolvente, las proporciones de dilución y las indicaciones de concentración de soluciones de líquido/líquido se refieren respectivamente al volumen.

\vskip1.000000\baselineskip

A. Ejemplos Abreviaturas

gral.: general

Área: superficie (del pico)

calc.: calculado

BHI: Brain Heart Infusion (infusión de cerebro y corazón)

Boc: terc-butiloxicarbonilo

a: señal ancha (en espectros de RMN)

Ej.: ejemplo

d: doblete (en espectros de RMN)

CCF: cromatografía en capa fina

IQD: ionización química directa (en EM)

DCM: diclorometano

DIEA: N,N-diisopropiletilamina

DMSO: dimetilsulfóxido

DMF: N,N-dimetilformamida

de T.: del valor teórico

EDC: 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (también EDCI)

EDCxHCl: clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida

AE: acetato de etilo (éster etílico del ácido acético)

IE: ionización por bombardeo electrónico (en EM)

IEN: ionización por electronebulización (en EM)

p.f.: punto de fusión

enc.: encontrado

sat.: saturado

h: hora

HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio

HOBt: 1-hidroxibenzotriazol

HPLC: cromatografía líquida de alto rendimiento, a alta presión

HR: High Resolution (alta resolución)

i. v.: al vacío

conc.: concentrado

EM-CL: espectrometría de masas acoplada a cromatografía líquida

LDA: diisopropilamida de litio

m: middle (media) (en espectros de UV e IR)

m: multiplete (en espectros de RMN)

MALDI: Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization (desorción/ionización por láser asistida por matriz)

CIM: concentración inhibidora mínima

min: minuto/minutos

MRSA: Staphylococcus aureus resistente a meticilina

EM: espectrometría de masas

NCCLS: National Committee for Clinical Laboratory Standards

neg.: negativa

NMM: N-metilmorfolina

RMN: resonancia magnética nuclear

p.a.: para análisis

Pd-C: paladio sobre carbón

pos.: positivo

p.c.: por ciento

cuant.: cuantitativo

RP-HPLC: HPLC de fase inversa (Reverse Phase HPLC)

TA: temperatura ambiente

T_{r}: tiempo de retención (en HPLC)

s: strong (fuerte) (en espectros de UV e IR)

s: singlete (en espectros de RMN)

TBTU: tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio

TCTU: tetrafluoroborato de O-(1H-6-clorobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio

TFA: ácido trifluoroacético

TFE: 2,2,2-trifluoroetanol

THF: tetrahidrofurano

TOF: tiempo de vuelo (time of flight)

UV: ultravioleta

Vis: visible

VRSA: Staphylococcus aureus resistente a vancomicina

w: weak (débil) (en espectros de UV e IR)

Z, Cbz: benciloxicarbonilo.

\vskip1.000000\baselineskip

Bibliografía

En relación a la nomenclatura de los péptidos y ciclodepsipéptidos, véase:

1.: A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds (Recommendations 1993), 1993, Blackwell Scientific publications.

2.: Nomenclature and symbolism for amino acids and peptides. Recommendations 1983, IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, UK. Biochemical Journal 1984, 219, 345-373. Así como bibliografía citada.

3.: En relación a la nomenclatura de derivados de nonadepsipéptidos que están derivatizados en las cadenas laterales de aminoácidos, se usa el sistema de prefijos de la IUPAC para el direccionamiento del respectivo sitio de derivatización (IUPAC, Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peptides, Names and Symbols for Derivatives of Named Peptides, Section 3AA-22, Recommendations 1983-1992). A modo de ejemplo, por tanto, N^{\omega . 6}-acetil-lisobactina indica una lisobactina acetilada en el aminoácido 6 (calculado desde el extremo N del depsipéptido, es decir, en el presente documento, D-Arg) especialmente en el átomo de nitrógeno terminal. De forma análoga, O^{3 . 11}-metil-lisobactina indica un derivado metilado en el aminoácido 11 (Ser) en el átomo de oxígeno (O^{3}) de la cadena lateral.

\vskip1.000000\baselineskip

Procedimientos Generales de EM-CL, EM-HR, HPLC y cromatografía en gel

Procedimiento 1 (HPLC): tipo de aparato de HPLC: serie HP 1100; columna UV DAD: Zorbax Eclipse XBD-C8 (Agilent), 150 mm x 4,6 mm, 5 \mum; eluyente A: 5 ml de HClO_{4}/l de agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-1 min 10% de B, 1-4 min 10-90% de B, 4-5 min 90% de B; caudal: 2,0 ml/min; horno: 30ºC; detección UV: 210 y 254 nm.

Procedimiento 2 (HPLC): columna: Kromasil RP-18, 60 mm x 2 mm, 3,5 \mum; eluyente A: 5 ml de HClO_{4}/l de agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min 2% de B, 0,5 min 2% de B, 4,5 min 90% de B, 9 min 90% de B; caudal: 0,75 ml/min; horno: 30ºC; detección UV: 210 nm.

Procedimiento 3 (EM-CL): tipo de aparato de EM: Micromass ZQ; Tipo de aparato de HPLC: serie HP 1100; UV DAD; columna: Phenomenex Synergi 2 \mu Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de
A \rightarrow 2,5 min 30% de A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; caudal: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; horno: 50ºC; detección UV: 210 nm.

Procedimiento 4 (HPLC): columna: Kromasil RP-18, 250 mm x 4 mm, 5 \mum; eluyente A: 5 ml de HClO_{4}/l de agua, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0 min 5% de B, 10 min 95% de B; caudal: 1 ml/min; horno: 40ºC; detección UV: 210 nm.

Procedimiento 5 (HPLC): columna: Kromasil RP-18, 250 mm x 4 mm, 5 \mum; eluyente A: 2 ml de HClO_{4}/l de agua, eluyente B: acetonitrilo; isocrático: 45% de B, 55% de A; caudal: 1 ml/min; horno: 40ºC; detección UV:
210 nm.

Procedimiento 6 (HPLC): columna: Kromasil RP-18, 250 mm x 4 mm, 5 \mum; eluyente A: 2 ml de HClO_{4}/l de agua, eluyente B: acetonitrilo; isocrático: 50% de B, 50% de A; caudal: 1 ml/min; horno: 40ºC; detección UV:
210 nm.

Procedimiento 7 (EM-MALDI): Los experimentos de EM/EM-MALDI se realizan con un 4700 Proteomics Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA, EEUU) que está equipado con óptica de iones TOF/TOF y láser de Nd:YAG de 200 Hz (355 nm). Los iones cuasimoleculares se aceleran en la fuente de iones con 8 kV, se seleccionan con un deflector eléctrico (EM1) y se bombardean con átomos de argón en una celda de bombardeo, que se dispone entre EM1 y EM2. Los iones fragmentarios resultantes se vuelven a acelerar con 15 kV y se caracterizan con el segundo analizador de masas de tiempo de vuelo (EM2).

Procedimiento 8 (EM-HR-TOF): Se registran espectros de EM-HR-TOF-IEN+ con un aparato Micromass LCT (tensión capilar: 3,2 KV, tensión de cono: 42 V, temperatura de fuente: 120ºC, temperatura de desolvatación: 280ºC). Para esto se usa una bomba de inyección (empresa Harvard Apparatus) para el suministro de la muestra. Como patrón sirve la leucina-encefalina (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu).

Procedimiento 9 (Cromatografía en gel Sephadex LH-20): La cromatografía en gel se realiza sin presión en Sephadex LH-20 (empresa Pharmacia). Se fracciona según actividad de UV (detector de UV para 210 nm, empresa Knauer) (colector de fracciones ISCO Foxy 200). Dimensiones de columna: 60 x 21 cm (escala 2500-5000 \mumol); 50 x 10 cm (escala 500-2500 \mumol); 30 x 5 cm (escala 250-500 \mumol); 25 x 4 cm (escala 50-250 \mumol); 40 x 2 cm (escala
5-50 \mumol).

Procedimiento 10 (Reprosil): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Reprosil ODS-A 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: TA; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-10 min 5-95% de B, a continuación regeneración de la columna de cromato-
grafía.

Procedimiento 11 (Reprosil): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Reprosil ODS-A 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: TA; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-10 min 15-65% de B, a continuación regeneración de la columna de cromatografía.

Procedimiento 12 (Phenomenex Luna): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Phenomenex Luna C18 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: TA; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; isocrático 50% de B.

Procedimiento 13 (Kromasil): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Kromasil 100 C18 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: TA; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; isocrático 65% de B.

Procedimiento 14 (Reprosil): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Reprosil ODS-A 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: TA; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-15 min 10-90% de B, a continuación regeneración de la columna de cromato-
grafía.

Procedimiento 15 (Kromasil): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Kromasil 100 C18 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: 40ºC; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0-15 min 70-55% de A, 15,1-20 min 70% de A, a continuación regeneración de la columna de cromatografía.

Procedimiento 16 (Reprosil): columna: Gilson Abimed HPLC; sistema de bomba binaria Varian; Reprosil ODS-A 5 \mu 250 mm x 20 mm; caudal: 25 ml/min; horno: TA; detección UV: 210 nm; eluyente A: agua/TFA al 0,2%, eluyente B: acetonitrilo; isocrático 57% de A.

Procedimiento 17 (Symmetryprep): aparato: Gilson Abimed HPLC; detector UV a 210 nm; sistema de bomba binaria; columna: SymmetryPrep^{TM}C_{18}, empresa Waters, 7 \mum; 300 mm x 19 mm; caudal: 7 ml/min; eluyente A: agua/TFA al 0,5%, eluyente B: acetonitrilo/TFA al 0,5%; gradiente: 0-5 min 5% de B, 5-30 min 5-60% de B, 30-35 min 60-98% de B, 35-40 min 98% de B, a continuación regeneración de la columna de cromatografía.

Procedimiento 18 (cHPLC-EM-MALDI): Los experimentos de EM/EM-MALDI se realizan con un 4700 Proteomics Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA, EEUU), que está equipado con óptica de iones TOF/TOF y un láser de Nd:YAG de 200 Hz (355 nm). Los iones cuasimoleculares se aceleran en la fuente de iones con 8 kV, se seleccionan con un deflector eléctrico (EM1) y se bombardean con átomos de argón en una celda de bombardeo, que se dispone entre EM1 y EM2. Los iones fragmentarios resultantes se vuelven a acelerar con 15 kV y se caracterizan con el segundo analizador de masas de tiempo de vuelo (EM2). El acoplamiento de cHPLC-MALDI-TOF/TOF se realiza fuera de línea mediante un sistema PROBOT (empresa Dionex).

\vskip1.000000\baselineskip

Instrucciones Generales de Trabajo Instrucción General de Trabajo 1 (Esterificación)

A una solución del péptido protegido con N-Boc (0,3 mmol) en DCM seco (10 ml) se le añaden en atmósfera de gas protector de argón DIEA (1 mmol) y un cloruro de ácido (0,3 mmol). La mezcla de reacción se agita a TA. El desarrollo de la reacción se controla mediante HPLC analítica (Procedimiento 13). Se añaden porciones adicionales de cloruro de ácido (respectivamente 0,3 mmol) hasta que la HPLC analítica indica una reacción suficiente (>95%). La mezcla de reacción se mezcla con ácido acético (pH aproximadamente 7) y después se purifica por cromatografía con el Procedimiento 9 (metanol/acetona: 4/1, ácido acético al 0,5%) y/o el Procedimiento 12.

\vskip1.000000\baselineskip

Instrucción General de Trabajo 2 (Carbamoilación)

A una solución del péptido protegido con N-Boc (0,3 mmol) en DMF seca (100 ml) se le añaden en atmósfera de gas protector de argón DIEA (1 mmol) y un isocianato (0,3 mmol). La mezcla de reacción se agita a TA. El desarrollo de la reacción se controla mediante HPLC analítica (Procedimiento 13). Se añaden porciones adicionales de isocianato (respectivamente 0,3 mmol) hasta que la HPLC analítica indica una reacción suficiente (>95%). La mezcla de reacción se mezcla con ácido acético (pH aproximadamente 7) y después se purifica por cromatografía con el Procedimiento 9 (metanol/acetona: 4/1, ácido acético al 0,5%) y/o el Procedimiento 12.

\vskip1.000000\baselineskip

Instrucción General de Trabajo 3 (Preparación de muestra hidrolítica para EM-MALDI)

El depsipéptido a abrir (por ejemplo, lisobactina, 0,05 \muMol) se mezcla en un microvial (de 500 \mul a 1000 \mul) en primer lugar con un tampón borato-ácido clorhídrico (empresa Merck) pH 8 (250 \mul). Se deja reposar durante una noche, se mezcla con ácido acético (100 \mul) y la muestra se liofiliza. El producto en bruto se investiga sin otras etapas de purificación mediante secuenciación de EM-MALDI.

\vskip1.000000\baselineskip

Compuestos de Partida Ejemplo 1A Bistrifluoroacetato de D-leucil-N^{1}-{(3S,6S,12S,15S,18R,21S,24S,27S,28R)-6-[(1S)-1-amino-1-hidroxi-2-oxoetil]-18-(3-{[amino(imino)metil]amino}propil)-12-[(1S)-1-hidroxietil)-3-(hidroximetil)-24-[(1R)-1-hidroxi-2-metilpropil]-21-isobutil-15-[(1S)-1-metilpropil]-2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxo-28-fenil-1-oxa-4,7,10,13,16,19,22,25-octaazaci- cloocta-cosan-27-il}-L-leucinamida (lisobactina)

6

Fermentación Medio de Cultivo

\quad: YM: Agar levadura-malta: D-Glucosa (4 g/l), extracto de levadura (4 g/l), extracto de malta (10 g/l), 1 litro de agua Lewatit. Antes de la esterilización (20 minutos a 121ºC), el pH se ajusta a 7,2.

\quad: HPM: manitol (5,4 g/l), extracto de levadura (5 g/l), peptona cárnica (3 g/l).

\quad: Conserva de trabajo: La cepa liofilizada (ATCC 53042) se cultiva en 50 ml de medio YM.

\quad: Fermentación en matraz: 150 ml de medio YM o 100 ml de medio HPM en un matraz Erlenmeyer de 1 l se inoculan con 2 ml de la conserva de trabajo y se dejan desarrollar durante 30-48 horas a 28ºC sobre un agitador a 240 rpm.

Fermentación de 30 l: se usan 300 ml de la fermentación en matraz (medio HPM) para la inoculación de una solución de medios nutrientes de 30 litros estéril (1 ml Antifoam SAG 5693/1). Este cultivo se deja desarrollar durante 21 horas a 28ºC, 300 rpm y una ventilación con aire estéril de 0,3 vvm. El pH se mantiene constante en pH = 7,2 con ácido clorhídrico 1 M. En total se añaden durante el tiempo de cultivo 880 ml de ácido clorhídrico 1 M.

Cultivo principal (2001): 15 x 150 ml de medio YM en un matraz Erlenmeyer de 1 l se inoculan con 2 ml de la conserva de trabajo y se dejan desarrollar a 28ºC durante 48 horas y 240 rpm sobre el agitador. Se usan 2250 ml de este cultivo para la inoculación de una solución de medios nutrientes de 200 l estéril (YM) (1 ml Antifoam SAG 5693/1) y se dejan desarrollar durante 18,5 horas a 28ºC, 150 rpm y una ventilación con aire estéril de 0,3 vvm.

Para el control del desarrollo de la fermentación se extraen muestras (50 ml) cada hora. 2 ml de este caldo de cultivo se mezclan con 1 ml de metanol (ácido trifluoroacético al 0,5%) y se filtran por un filtro de 0,45 \mum. 30 \mul de esta suspensión se analizan mediante HPLC (Procedimiento 1 y Procedimiento 2).

Después de 18,5 horas, el caldo de cultivo del cultivo principal se separa a 17000 rpm en sobrenadante y sedimento.

Aislamiento

El sobrenadante (183 l) se ajusta a pH 6,5-7 con ácido trifluoroacético concentrado o hidróxido sódico y se aplica a una columna Lewapol (OC 1064, contenido de 60 l). A continuación se eluye con agua pura, agua/metanol 1:1 y, a continuación, con metanol puro (con ácido trifluoroacético al 0,1%). Esta fase orgánica se concentra al vacío hasta un residuo acuoso restante de 11,51.

La fase acuosa restante se une a gel de sílice C_{18} y se separa (MPLC, Biotage Flash 75, 75 x 30 cm, KP-C18-WP, 15-20 \mum, caudal: 30 ml; eluyente: acetonitrilo/agua con ácido trifluoroacético al 0,1%; gradiente: acetonitrilo al 10%, 15% y 40%). La fase de acetonitrilo al 40%, que contiene la cantidad principal del Ejemplo 1A, se concentra al vacío y a continuación se liofiliza (aproximadamente 13 g). Esta mezcla de sólidos se separa en porciones de 1,2 g en primer lugar en una HPLC preparativa (Procedimiento 3), a continuación por filtración en gel en Sephadex LH-20 (5 x 70 cm, acetonitrilo/agua 1:1, respectivamente con ácido trifluoroacético al 0,05%) y una HPLC preparativa adicional (Procedimiento 4).

Este procedimiento proporciona 2250 mg del Ejemplo 1A.

El sedimento se recoge en 4 l de acetona/agua 4:1, se mezcla con 2 kg de Celite, se ajusta con ácido trifluoroacético a pH = 6, se agita y se centrifuga. El disolvente se concentra al vacío y el residuo se liofiliza. El liofilizado obtenido (89,9 g) se recoge en metanol, se filtra, se concentra y se separa en gel de sílice (Procedimiento 5). Después, el Ejemplo 1A se purifica por filtración en gel (Sephadex LH-20, 5 x 68 cm, agua/acetonitrilo 9:1 (con ácido trifluoroacético al 0,05%), caudal: 2,7 ml/min, tamaño de fracción 13,5 ml) hasta la sustancia pura.

Este procedimiento proporciona 447 mg del Ejemplo 1A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 6,19 min

EM (IENpos): m/z = 1277 (M+H)^{+}

RMN de ^{1}H (500,13 MHz, d_{6}-DMSO): \delta = 0,75 (d, 3H), 0,78 (d, 6H), 0,80 (t, 3H), 0,82 (d, 3H), 0,90 (d, 3H), 0,91 (d, 3H), 0,92 (d, 3H), 0,95 (d, 3H), 0,96 (d, 3H), 1,05 (m, 1H), 1,19 (d, 3H), 1,25 (m, 2H), 1,50 (m, 4H), 1,51 (m, 2H), 1,55 (m, 1H), 1,61 (m, 1H), 1,65 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 2,75 (m, 2H), 3,40 (m, 1H), 3,52 (m, 2H), 3,53 (dd, 1H), 3,64 (m, 2H), 3,66 (m, 1H), 3,68 (dd, 1H), 3,73 (m, 2H), 4,00 (dd, 1H), 4,02 (a, 1H), 4,13 (a, 1H), 4,32 (dd, 1H), 4,39 (t, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,75 (dd, 1H), 5,19 (t, 1H), 5,29 (d, 1H), 5,30 (a, 1H), 5,58 (m, 2H), 6,68 (m, 3H), 6,89 (d, 1H), 6,93 (m, 3H), 6,94 (a, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,12 (a, 1H), 7,20 (a, 2H), 7,23 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,54 (d, 1H), 7,58 (d, 1H), 8,32 (a, 1H), 9,18 (a, 1H), 9,20 (m, 2H), 9,50 (a, 1H).

RMN de ^{13}C (125,77 MHz, d_{6}-DMSO): \delta = 10,3, 15,3, 19,0, 19,2, 19,6, 20,0, 20,9, 22,0, 22,4, 23,0, 23,2, 24,3, 24,4, 25,0, 25,4, 26,0, 27,8, 30,9, 35,4, 39,5, 40,8, 40,9, 41,6, 44,1, 51,5, 52,7, 55,9, 56,2, 56,4, 57,9, 58,8, 60,2, 61,1, 62,6, 70,1, 71,6, 71,7, 75,5, 128,1, 128,6, 136,7, 156,8, 168,2, 170,1, 170,4, 171,2, 171,5, 171,9, 172,2, 172,4, 173,7.

La asignación de las señales se realizó de acuerdo con la asignación descrita en la bibliografía (T. Kato, H. Hinoo, Y. Terui, J. Antibiot, 1988, 61, 719-725).

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Esquema pasa a página siguiente)

Ejemplo 2A Acetato de N^{1}-terc-butoxicarbonil-lisobactina

7

Se disuelven 10,0 g (5,18 mmol; al 78%) de lisobactina (Ejemplo 1A) en 2 l de una mezcla de terc-butanol/solución tampón (pH 6)/solución tampón (pH 7) (2:1:1). En primer lugar, se añaden gota a gota a 20ºC 6,7 mmol (1,2 equivalentes) de dicarbonato de di-terc-butilo en 5 ml de mezcla de terc-butanol/tampón y, a continuación, 6,7 mmol (1,2 equivalentes) de DIEA en 5 ml de mezcla de terc-butanol/tampón. Después de 12 horas, no se observa una reacción completa mediante HPLC analítica (Procedimiento 1). Se añaden gota a gota otros 6,7 mmol (1,2 equivalentes) de dicarbonato de di-terc-butilo en 5 ml de mezcla de terc-butanol/tampón. Después de una hora, la reacción se ha completado, a lo que se añaden 2,58 ml (45 mmol) de ácido acético. El producto sin procesar se concentra, se liofiliza, se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:ácido acético/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente por HPLC preparativa (Procedimiento 10). Se obtienen 5,76 g (74% del valor teórico) de producto.

[\alpha]^{20}_{Na} = -56º (c = 0,21 en metanol).

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,7 min.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,29 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,02 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 639 (100), 1376 (40) [M - CO_{2}- C_{4}H_{8} + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 687 (100), 1374 (5) [M - CO_{2} - C_{4}H_{8} - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{63}H_{106}N_{15}O_{19} calc. 1376,7789, enc. 1376,7820.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplos de Realización

Ejemplos 1 a 3

Se hacen reaccionar 250 mg (0,17 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 2. Después de la reacción con isocianato de fenilo, se aíslan 105 mg de una mezcla de varios derivados de lisobactina protegidos con Boc monosustituidos.

HPLC (Procedimiento 2): T_{r} = 4,54 min; \lambda_{máx} (cualitativo) = 208 nm (s), 234 nm (m);

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,47 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 698 (100) [M - CO_{2} - C_{4}H_{8}+ 2H]^{2+}, 748 (5) [M + 2H]^{2+}, 1495 (100) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 687 (80), 1493 (100) [M - H]^{-}.

La mezcla se presenta como suspensión en 3 ml de DCM, se mezcla con 1 ml de TFA y se agita a TA durante 15 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente y se separa por HPLC preparativa (Procedimiento 11). Se obtienen 41,4 mg (17% del valor teórico) del Ejemplo 1, 30,1 mg (25% del valor teórico) del Ejemplo 2 y 5,8 mg (3% del valor teórico) del Ejemplo 3.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 1

Trifluoroacetato de N^{\omega . 6}-(fenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

8

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,1 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 220 nm (s), 240 nm (m).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,70 min

HPLC (Procedimiento 4): T_{r} = 8,36 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,52 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 698 (100) [M + 2H]^{2+}, 1395 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 696 (100), 1393 (30) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{103}N_{16}O_{18} (MH^{+}) calc. 1395,7636, enc. 1395,7604;

Para la determinación de la secuencia de aminoácidos, se hidroliza y se analiza una muestra analítica del producto de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 3 (Procedimiento 7).

\newpage

Ejemplo 2

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(fenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

9

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 1): T_{r} = 4,1 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 242 nm (m).

HPLC (Procedimiento 2): T_{r} = 3,70 min

HPLC (Procedimiento 4): T_{r} = 8,70 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,60 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 698 (100) [M + 2H]^{2+}, 1395 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 636 (100), 1393 (5) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{103}N_{16}O_{18} (MH^{+}) calc. 1395,7636, enc. 1395,7653;

\newpage

Ejemplo 3

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(fenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

10

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 1): T_{r} = 4,3 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 232 nm (m).

HPLC (Procedimiento 2): T_{r} = 3,79 min

HPLC (Procedimiento 4): T_{r} = 8,89 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,72 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 698 (100) [M + 2H]^{2+}, 1395 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 136 (10), 637 (60), 696 (30), 1393 (30) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{103}N_{16}O_{18} (MH^{+}) calc. 1395,7636, enc. 1395,7639;

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplos 4 a 6

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 2. Después de la reacción con isocianato de 3-metoxifenilo se aíslan 125,7 mg de una mezcla de varios derivados monosustituidos del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,55 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,21 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 713 (100) [M - Boc + 2H]^{2+}, 763 (5) [M + 2H]^{2+}, 1525 (60) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 761 (100), 1523 (15) [M-H]^{-}).

La mezcla se presenta como suspensión en 4,5 ml de DCM, se mezcla con 1,5 ml de TFA y se agita a TA durante 10 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente y se separa mediante HPLC preparativa (Procedimiento 13). Se obtienen 30,5 mg (5% del valor teórico) del Ejemplo 4, 30,5 mg (5% del valor teórico) del Ejemplo 5 y 30,5 mg (4% del valor teórico) del Ejemplo 6.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 4

Trifluoroacetato de N^{\omega . 6}-(3-metoxifenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

11

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,1 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 210 nm (m), 245 nm (w).

HPLC (Procedimiento 5): T_{r} = 4,88 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,56 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 713 (100) [M + 2H]^{2+}, 1425 (10) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 711 (100), 1423 (20) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{66}H_{105}N_{16}O_{19} (MH^{+}) calc. 1425,7742, enc. 1425,7766;

\newpage

Ejemplo 5

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(3-metoxifenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

12

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,2 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 210 nm (m), 245 nm (w).

HPLC (Procedimiento 5): T_{r} = 6,71 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,67 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 713 (100) [M + 2H]^{2+}, 1425 (10) [M + H]^{+}

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{66}H_{105}N_{16}O_{19} (MH^{+}) calc. 1425,7742, enc. 1425,7761;

\newpage

Ejemplo 6

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(3-metoxifenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

13

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,3 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 210 nm (m), 245 nm (w).

HPLC (Procedimiento 5): T_{r} = 8,21 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,71 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 713 (100) [M + 2H]^{2+}, 1425 (10) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 637 (100), 711 (80), 1423 (20) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{66}H_{105}N_{16}O_{19} (MH^{+}) calc. 1425,7742, enc. 1425,7789;

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplos 7 a 9

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 2. Después de la reacción con isocianato de 3-bromofenilo, se aíslan 202 mg de una mezcla de varios derivados monosustituidos del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,62 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,28 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 738 (100) [M - Boc + 2H]^{2+}, 788 (5) [M + 2H]^{2+}, 1574 (5) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 786 (100), 1573 (10) [M - H]^{-}).

La mezcla se presenta como suspensión en 6 ml de DCM, se mezcla con 2 ml de TFA y se agita a TA durante 15 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente y se separa mediante HPLC preparativa (Procedimiento 12). Se obtienen 105 mg (19% del valor teórico) del Ejemplo 7, 51 mg (9% del valor teórico) del Ejemplo 8 y 10 mg (2% del valor teórico) del Ejemplo 9.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 7

Trifluoroacetato de N^{\omega . 6}-(3-bromofenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

14

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,2 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 220 (m), 246 nm (w).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,73 min

HPLC (Procedimiento 6): T_{r} = 3,39 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,61 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 652 (50), 738 (100) [M + 2H]^{2+}, 1473 (10) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 736 (100), 1471 (15) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{102}N_{16}O_{18} (MH^{+}) calc. 1473,6741, enc. 1473,6750.

\newpage

Ejemplo 8

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(3-bromofenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

15

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,4 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 (m), 240 nm (w).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,86 min

HPLC (Procedimiento 6): T_{r} = 4,82 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,71 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 738 (100) [M + 2H]^{2+}, 1473 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 637 (100), 736 (10), 1471 (5) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{102}N_{16}O_{18} (MH^{+}) calc. 1473,6741, enc. 1473,6781.

TABLA 1 Datos de RMN de ^{1}H (500 MHz, d_{5}-piridina, 302 K) y RMN de ^{13}C (d_{5}-piridina)

\vskip1.000000\baselineskip

16

\newpage

Ejemplo 9

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(3-bromofenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

17

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/CTV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,4 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 (m), 240 nm (w).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,92 min

HPLC (Procedimiento 6): T_{r} = 6,01 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,83 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 738 (100) [M + 2H]^{2+}, 1473 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 637 (100), 736 (40), 1471 (10) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{102}N_{16}O_{18} (MH^{+}) calc. 1473,6741, enc. 1473,6766.

Ejemplo 10 Trifluoroacetato de N^{\omega . 6}-(3-(N,N-dimetilsulfonil)-fenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

18

\vskip1.000000\baselineskip

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 2. Después de la reacción con isocianato de 3-(N,N-dimetilsulfonil)-fenilo, se aíslan 40 mg de una mezcla de varios derivados monosustituidos del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,48 min;

HPLC (Procedimiento 2): T_{r} = 5,0 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,20 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 752 (100) [M - Boc + 2H]^{2+}, 1602 (10) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 687 (100), 800 (35), 1600 (10) [M - H]^{-});

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{72}H_{116}N_{17}O_{22} (MH^{+}) calc. 1602,8202, enc. 1602,8148).

La mezcla se presenta como suspensión en 6 ml de DCM, se mezcla con 2 ml de TFA y se agita a TA durante 15 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente y se separa mediante HPLC preparativa (Procedimiento 14). Se obtienen 12,5 mg (2% del valor teórico) del compuesto del título (Ejemplo 10).

HPLC/CTV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,2 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 (m), 250 nm (w).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,70 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,72 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 652 (60), 752 (100) [M + 2H]^{2+}, 1502 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 637 (30), 750 (100), 1500 (10) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{67}H_{108}N_{17}O_{20} (MH^{+}) calc. 1502,7677, enc. 1502,7721.

Ejemplos 11 a 13

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 2. Después de la reacción con 4-morfolino-fenilisocianato, se aíslan 66 mg de una mezcla de varios derivados monosustituidos del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,35 min;

HPLC (Procedimiento 2): T_{r} = 4,7 min;

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 nm (s), 256 nm (m);

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,37 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 741 (75) [M - Boc + 2H]^{2+}, 791 (100) [M + 2H]^{2+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 687 (50), 789 (100);

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{74}H_{118}N_{17}O_{21} (MH^{+}) calc. 1580,8688, enc. 1580,8671).

La mezcla se presenta como suspensión en 5 ml de DCM, se mezcla con 1,7 ml de TFA y se agita a TA durante 15 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente y se separa mediante HPLC preparativa (Procedimiento 15). Se obtienen 5,7 mg (9% del valor teórico) del Ejemplo 11, 3,7 mg (5% del valor teórico) del Ejemplo 12 y 1,2 mg (2% del valor teórico) del Ejemplo 13.

Ejemplo 11

Trifluoroacetato de N^{\omega . 6}-(4-morfolino-fenilaminocarbonil)-lisobactina

19

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): 4,0 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 nm (s), 246 nm (m).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,62 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,55 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 741 (100) [M + 2H]^{2+}, 1480 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 740 (100), 1478 (10) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{69}H_{110}N_{17}O_{19} (MH^{+}) calc. 1480,8164, enc. 1480,8112.

Ejemplo 12

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(4-morfolino-fenilaminocarbonil)-lisobactina

20

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,0 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 (s), 242 nm (m).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,66 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,63 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 741 (100) [M + 2H]^{2+}, 1480 (5) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 637 (100).

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{69}H_{110}N_{17}O_{19} (MH^{+}) calc. 1480,8164, enc. 1480,8188.

Ejemplo 13

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(4-morfolino-fenilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

21

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,0 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 (s), 242 nm (m).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,66 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,73 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 494 (75), 741 (100) [M + 2H]^{2+}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{69}H_{110}N_{17}O_{19} (MH^{+}) calc. 1480,8164, enc. 1480,8164.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplos 14 y 15

Se hacen reaccionar 300 mg (0,21 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 1. Después de la reacción con cloruro del ácido fenilcarboxílico, se aíslan 221 mg de una mezcla de dos derivados monosustituidos del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,52 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,49 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 1480 (40) [M + H]^{+}.

\newpage

La mezcla se presenta como suspensión en 3 ml de DCM, se mezcla con 1 ml de TFA y se agita a TA durante 10 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente mediante HPLC preparativa (Procedimiento 11). Se obtienen 163 mg (73% del valor teórico) de los Ejemplos 14 y 15 en forma de una mezcla 1:1.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,88 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,83 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 199 (100), 691 (50), 1380 (10) [M + H]^{+}

Para la determinación de la secuencia de aminoácidos, se hidroliza y se analiza una muestra analítica del producto de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 3 (Procedimiento 7) (mezcla 1/1).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 14

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(fenilcarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

22

\newpage

Ejemplo 15

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(fenilcarbonil)-lisobactina

23

Ejemplo 16 Bisacetato de O^{3 . 10},O^{3 . 11}-di-(fenilcarbonil)-lisobactina

24

Se hacen reaccionar 23 mg (0,02 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 1. Después de la reacción con cloruro del ácido fenilcarboxílico, en esta reacción se aíslan, además de los dos derivados de li-
sobactina monosustituidos protegidos con Boc (Ejemplo 14 y 15), 3,2 mg de un compuesto con dos grupos benzoílo.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,81 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,52 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 743 (100), 1584 (5) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 121 (10), 1582 (5) [M - H]^{-}.

La mezcla se presenta como suspensión en 0,15 ml de DCM, se mezcla con 0,05 ml de TFA y se agita a TA durante 6 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se separa por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:ácido acético/80:20:0,1). Se obtienen 1,7 mg (6,5% del valor teórico) del compuesto del título.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,88 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,98 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 743 (100) [M + 2H]^{2+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 121 (100), 741 (40).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 17 Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(3-(6-morfolino-3-piridil)-carbonil)-lisobactina

25

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 1. Después de la reacción con cloruro del ácido 6-(morfolin-4-il)-piridin-3-carboxílico, se aíslan 151 mg de un derivado monosustituido del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,38 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,07 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 734 (20) [M - Boc + 2H]^{2+}, 784 (100 [M + 2H]^{2+}, 1566 (100) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 782 (100), 1564 (100) [M-H]^{-}).

El derivado de lisobactina protegido con Boc se presenta como suspensión en 3 ml de DCM, se mezcla con 1 ml de TFA y se agita a TA durante 15 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica adicionalmente mediante HPLC preparativa (Procedimiento 11). Se obtienen 135 mg (23% del valor teórico) del compuesto del título (Ejemplo 17).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,64 min.

HPLC (Procedimiento 4): T_{r} = 7,98 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,60 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 734 (100) [M + 2H]^{2+}, 1466 (2) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 628 (100), 732 (50), 1464 (10) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{68}H_{108}N_{17}O_{19} (MH^{+}) calc. 1466,8007, enc. 11466,7960.

Para la determinación de la secuencia de aminoácidos, se analiza una muestra analítica del producto (Procedimiento 18).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplos 18 y 19

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 1. Después de la reacción con cloruro del ácido 3-metoxifenilcarboxílico, se aíslan 115 mg de una mezcla de dos derivados monosustituidos del Ejemplo 2A.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,58 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,24 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 706 (100), 1510 (20) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 754 (100), 1508 (20) [M - H]^{-}.

La mezcla se presenta como suspensión en 3 ml de DCM, se mezcla con 1 ml de TFA y se agita a TA durante 25 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente mediante HPLC preparativa (Procedimiento 16). Se obtienen 3 mg (0,7% del valor teórico) de los Ejemplos 18 y 19 en forma de una mezcla 1:1.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,79 min.

HPLC (Procedimiento 5): T_{r} = 7,56 min

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,63 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 706 (100), 1410 (10) [M + H]^{+}

EM (IENneg.): m/z (%) = 704 (60), 1408 (15) [M - H]^{-}.

\newpage

Ejemplo 18

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10}-(3-metoxi-fenilcarbonil)-lisobactina

26

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 19

Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(3-metoxi-fenilcarbonil)-lisobactina

27

Ejemplo 20 Bistrifluoroacetato de O^{3 . 10},O^{3 . 11}-di-(fenilcarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

28

\vskip1.000000\baselineskip

Se hacen reaccionar 53 mg (0,035 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 1. Después de la reacción con cloruro del ácido 3-metoxifenilcarboxílico, en esta reacción se aíslan, además de los dos derivados monosustituidos del Ejemplo 2A (Ejemplo 18 y 19), 11 mg de un compuesto con dos grupos benzoílo.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,88 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,62 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 773 (45), 823 (100), 1644 (15).

La mezcla se presenta como suspensión en 1 ml de DCM, se mezcla con 0,3 ml de TFA y se agita a TA durante 15 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica adicionalmente por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,5). Se obtienen 6,2 mg (16% del valor teórico) del compuesto del título.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,00 min.

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 1,96 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 773 (100), 1544 (10) [M + 2H]^{2+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 151 (100), 1542 (20).

Ejemplo 21 Bistrifluoroacetato de O^{3 . 11}-(fenilsulfonilaminocarbonil)-lisobactina

\vskip1.000000\baselineskip

29

\vskip1.000000\baselineskip

Se hacen reaccionar 500 mg (0,35 mmol) del Ejemplo 2A de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 2. Después de la reacción con isocianato de fenilsulfonilo, se aíslan 318 mg de un derivado de lisobactina monosustituido protegido con Boc.

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 4,56 min;

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,45 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 730 (100) [M - Boc + 2H]^{2+}, 1559 (20) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 778 (100), 1557 (50) [M - H]^{-});

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{70}H_{111}N_{16}O_{22}S (MH^{+}) calc. 1559,7780, enc. 1559,7739.

El producto en bruto se presenta como suspensión en 9 ml de DCM, se mezcla con 3 ml de TFA y se agita a TA durante 10 min, hasta que la HPLC analítica (Procedimiento 1) indica una reacción completa. El producto en bruto se libera de disolvente al vacío. Finalmente, el producto en bruto se purifica de forma general por cromatografía en gel (Procedimiento 9; metanol:acetona:TFA/80:20:0,1) y se purifica adicionalmente mediante HPLC preparativa (Procedimiento 17). Se obtienen 218 mg (43% del valor teórico) del compuesto del título (Ejemplo 21).

HPLC (Procedimiento 1): T_{r} = 3,86 min.

HPLC/UV-Vis (Procedimiento 2): T_{r} = 4,23 min.

\lambda_{máx} (cualitativo) = 200 nm (s), 220 nm (m).

EM-CL (Procedimiento 3): T_{r} = 2,00 min;

EM (IENpos.): m/z (%) = 730 (100) [M + 2H]^{2+}, 1459 (5) [M + H]^{+};

EM (IENneg.): m/z (%) = 728 (100), 1457 (80) [M - H]^{-}.

EM-TOF-HR (Procedimiento 8): C_{65}H_{103}N_{16}O_{20} (MH^{+}) calc. 1459,7255, enc. 1459,7209.

Para la determinación de la secuencia de aminoácidos, se hidroliza y se analiza una muestra analítica del producto de acuerdo con la Instrucción General de Trabajo 3 (Procedimiento 18).

\vskip1.000000\baselineskip

B. Evaluación de la eficacia fisiológica

La actividad in vitro de los compuestos de acuerdo con la invención se puede mostrar en los siguientes ensayos:

Determinación de la concentración inhibidora mínima (CIM)

La CIM se determina en el ensayo de dilución en líquido de acuerdo con las directrices del NCCLS. Los cultivos de una noche de Staphylococcus aureus 133, Entercococcus faecalis 27159, E. faecium 4147 y Streptococcus pneumoniae G9a se incuban con las sustancias de ensayo descritas en una serie de dilución 1:2. La determinación de la CIM se realiza con un número de células de 10^{5} microorganismos por ml en el medio Isosensitest (empresa Difco, Irvine/EEUU), con excepción de S. pneumoniae, que se ensaya en BHI-Bouillon (empresa Difco, Irvine/EEUU) con suero bovino al 10% con un número de células de 10^{6} microorganismos por ml. Los cultivos se incuban a 37ºC durante 18-24 horas, S. pneumoniae, en presencia de CO_{2} al 10%.

La menor concentración de sustancia respectiva a la que ya no se presenta ningún desarrollo visible de bacterias se define como la CIM. Los valores de CIM se indican en \mug/ml.

En la Tabla A se muestran datos de actividad in vitro representativos para los compuestos de acuerdo con la invención:

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA A

\vskip1.000000\baselineskip

30

\vskip1.000000\baselineskip

La idoneidad de los compuestos de acuerdo con la invención para el tratamiento de infecciones bacterianas se puede mostrar en el siguiente modelo animal:

Infección sistémica por Staphylococcus aureus 133

Se cultivan células de S. aureus 133 durante una noche en BHI-Bouillon (empresa Oxoid, Nueva York/EEUU). El cultivo de una noche se diluye 1:100 en BHI-Bouillon fresco y se incuba durante 3 horas. Las células, que se encuentran entonces en la fase de crecimiento logarítmico, se retiran por centrifugación y se lavan dos veces con solución salina fisiológica tamponada. Después, se ajusta fotométricamente una suspensión celular en solución salina con una extinción de 50 unidades. Después de una etapa de dilución (1:15), esta suspensión se mezcla 1:1 con una solución de mucina al 10%. De esta solución de infección se administran por vía intraperitoneal 0,25 ml/20 g de ratón (que corresponden a 1 x 10^{6} microorganismos/ratón). La terapia se produce por vía intraperitoneal o intravenosa 30 minutos después de la infección. Para el ensayo de infección se usan ratones CFW1 hembra. La supervivencia de los animales se registra a lo largo de 6 días.

\newpage

Las propiedades de los compuestos de acuerdo con la invención con respecto a la tolerabilidad renal se pueden mostrar en el siguiente modelo animal:

Modelo de ratón para la determinación de los efectos nefrotóxicos

Los efectos secundarios nefrotóxicos de los nonadepsipéptidos se analizan mediante experimentos histopatológicos de los riñones en ratones y/o ratas después de la administración múltiple de una determinada dosificación. Para esto, se tratan 5-6 animales diariamente por vía intravenosa (i.v.) o intraperitoneal (i.p.) con sustancias que se disuelven en solución acuosa o con adición de solutol. Los efectos nefrotóxicos se determinan por evaluación con microscopio óptico de secciones de los riñones en parafina teñidas con hematoxilina y eosina (H&E). Eventualmente, se realiza una reacción de ácido peryódico de Schiff (PAS) para una mejor representación de glucoproteínas. Los efectos nefrotóxicos se definen de manera semicuantitativa para cada animal como grados de gravedad de la basofilia y la degeneración/regeneración tubular que se presentan (grados de gravedad: 0 = ningún efecto; 1 = efecto mínimo; 2 = efecto ligero; 3 = efecto moderado; 4 = lesiones graves). El grado promedio de gravedad de la degeneración/regeneración tubular así como la incidencia (número de los animales afectados) se calculan por grupo de animal o derivado. También se indican las modificaciones renales que van más allá de esto, tales como dilatación tubular así como necrosis y acumulación de material necrótico.

La solubilidad de un compuesto se determina de acuerdo con los procedimientos conocidos por el experto.

C. Ejemplos de realización para composiciones farmacéuticas

Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden convertir en preparaciones farmacéuticas del siguiente modo:

Comprimido

Composición:

100 mg del compuesto del Ejemplo 1, 50 mg de lactosa (monohidrato), 50 mg de almidón de maíz (nativo), 10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (empresa BASF, Ludwigshafen, Alemania) y 2 mg de estearato de magnesio.

Peso de comprimido 212 mg. Diámetro 8 mm, radio de curvatura 12 mm.

Preparación:

La mezcla de ingrediente activo, lactosa y almidón se granula con una solución al 5% (m/m) del PVP en agua. El granulado se mezcla después del secado con el estearato de magnesio durante 5 min. Esta mezcla se comprime con una prensa de comprimidos habitual (formato del comprimido, véase anteriormente). Como valor orientativo para la compresión se usa una fuerza de presión de 15 kN.

Suspensión que se puede administrar por vía oral

Composición:

1000 mg del compuesto del Ejemplo 1, 1000 mg de etanol (al 96%), 400 mg de Rhodigel (goma de xantano de la empresa FMC, Pennsylvania, EEUU) y 99 g de agua.

10 ml de suspensión oral se corresponden con una monodosis de 100 mg del compuesto de acuerdo con la invención.

Preparación:

El Rhodigel se suspende en etanol y el ingrediente activo se añade a la suspensión. La adición del agua se produce con agitación. Hasta la finalización del hinchamiento del Rhodigel, se agita durante aproximadamente 6 h.

Solución que se puede administrar por vía intravenosa

Composición:

100-200 mg del compuesto del Ejemplo 1, 15 g de polietilenglicol 400 y 250 g de agua para fines de inyección.

Preparación:

El compuesto del Ejemplo 1 se disuelve con agitación junto con polietilenglicol 400 en el agua. La solución se filtra a esterilidad (diámetro de poros 0,22 \mum) y, en condiciones asépticas, se introduce en botellas de infusión esterilizadas por calor. Éstas se cierran con tapones de infusión y cápsulas.

Claims

1. Compuesto de la fórmula

31

en la que

\quad: R^{1} significa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{6} o arilo C_{6}-C_{10},

\quad: donde, a su vez, el cicloalquilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, ciano, nitro, trifluorometilo, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, fenilo y heterociclilo de 5 a 7 miembros,

\quad: R^{2} significa hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4},

\quad: R^{3} significa alquilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, heterociclilo de 5 a 7 miembros, arilo C_{6}-C_{10}, heteroarilo de 5 ó 6 miembros, alquil C_{1}-C_{6}-carbonilo, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, cicloalquil C_{3}-C_{6}-carbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 a 7 miembros, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 ó 6 miembros o alquil C_{1}-C_{6}-aminocarbonilo,

\quad: donde el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo y alquilaminocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, amino, alquil C_{1}-C_{6}-amino y fenilo,

\quad: y

\quad: donde el alquilcarbonilo está sustituido con un sustituyente amino o alquil C_{1}-C_{6}-amino,

\quad: y

\quad: donde el alquilcarbonilo puede estar sustituido con otros 0, 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, hidroxi, trimetilsililo, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-tio, benciloxi, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, alquil C_{1}-C_{6}-carbonilamino, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilamino, aril C_{6}-C_{10}-carbonilamino, aril C_{6}-C_{10}-carboniloxi, benciloxicarbonilo y benciloxicarbonilamino,

\quad: R^{4} significa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, ciclopropilo o ciclopropilmetilo,

y

\quad: R^{5} significa aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

\quad: R^{6} significa hidrógeno,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{6} significa aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-sulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{6} significa hidrógeno,

\quad: R^{7} significa aril C_{6}-C_{10}-aminocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-carbonilo, aril C_{6}-C_{10}-aminotiocarbonilo, aril C_{6}-C_{10}-tiocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilcarbonilo de 5 a 10 miembros, heteroarilaminotiocarbonilo de 5 a 10 miembros o heteroariltiocarbonilo de 5 a 10 miembros,

o

\quad: R^{5} y R^{6} son iguales y

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

2. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque

\quad: R^{1} significa 2-metilprop-1-ilo, 2,2-dimetilprop-1-ilo, 2-piridilmetilo o 3-piridilmetilo,

\quad: R^{2} significa hidrógeno,

\quad: R^{3} significa 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo, 1-amino-3,3-dimetilbut-1-ilcarbonilo o 1-amino-2-trimetilsililet-1-ilcarbonilo,

\quad: R^{4} significa hidrógeno,

y

\quad: R^{6} significa hidrógeno,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{6} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} y R^{6} son iguales y

\quad: donde el arilaminocarbonilo, arilcarbonilo, arilaminotiocarbonilo, ariltiocarbonilo, arilsulfonilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilaminotiocarbonilo y heteroariltiocarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1,2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-amino, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminocarbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-aminosulfonilo, heterociclilo de 5 a 7 miembros eventualmente sustituido con oxo y heteroarilo de 5 a 10 miembros,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

3. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque

\quad: R^{1} significa 2-metilprop-1-ilo,

\quad: R^{2} significa hidrógeno,

\quad: R^{3} significa 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo,

\quad: R^{4} significa hidrógeno,

y

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{6} significa hidrógeno,

o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

4. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque

\quad: R^{1} significa 2-metilprop-1-ilo,

\quad: R^{2} significa hidrógeno,

\quad: R^{3} 1-amino-3-metilbut-1-ilcarbonilo,

\quad: R^{4} significa hidrógeno,

y

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{6} significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo,

\quad: donde el fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo y piridilcarbonilo pueden estar sustituidos con 0, 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí entre el grupo constituido por pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, piperazinilo, morfolinilo, 2-oxo-pirrolidinilo y 2-oxopiperidinilo,

\quad: R^{7} significa hidrógeno,

o

\quad: R^{5} significa hidrógeno,

\quad: R^{6} significa hidrógeno,

\quad: R^{7} significa fenilaminocarbonilo, fenilcarbonilo, piridilaminocarbonilo o piridilcarbonilo,

o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Esquema pasa a página siguiente)

\newpage

5. Procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque se hace reaccionar un compuesto de la fórmula

32

en la que

R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado indicado en la reivindicación 1,

con 1 a 10 equivalentes de un cloruro de ácido aril- o heteroarilcarboxílico, un aril- o heteroarilisocianato, un cloruro de ácido aril- o heteroariltiocarboxílico, un aril- o heteroarilisotiocianato o un arilsulfonilisocianato, donde los restos arilo y heteroarilo se corresponden con los restos arilo y heteroarilo en los restos R^{5}, R^{6} y R^{7}, que tienen el significado indicado en la reivindicación 1,

y, a continuación, la mezcla resultante de compuestos de la fórmula (I) se separa por cromatografía en los compuestos individuales de la fórmula (I).

6. Compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.

7. Uso de un compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de infecciones bacterianas.

8. Fármaco que contiene un compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4 en combinación con un adyuvante inerte, no tóxico, farmacéuticamente adecuado.

9. Fármaco de acuerdo con la reivindicación 8 para el tratamiento y/o la profilaxis de infecciones bacterianas.

10. Uso de una cantidad con eficacia antibacteriana de al menos un compuesto de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, de un fármaco de acuerdo con la reivindicación 8 ó 9 o de un fármaco obtenido de acuerdo con la reivindicación 7 para la fabricación de un medicamento para combatir infecciones bacterianas en seres humanos y animales.