ES2327444T3 - Macrociclos de amida vi antibacterianos. - Google Patents

Macrociclos de amida vi antibacterianos. Download PDF

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ES2327444T3 ES06723578T ES06723578T ES2327444T3 ES 2327444 T3 ES2327444 T3 ES 2327444T3 ES 06723578 T ES06723578 T ES 06723578T ES 06723578 T ES06723578 T ES 06723578T ES 2327444 T3 ES2327444 T3 ES 2327444T3
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Rainer Endermann
Kerstin Ehlert
Siegfried Raddatz
Martin Michels
Yolanda Cancho-Grande
Stefan Weigand
Karin Fischer
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Abstract

Compuesto de fórmula **(Ver fórmula)** en la que R5 es igual a un grupo de fórmulas **(Ver fórmula)** en las que * es el punto de unión al átomo de carbono, R1 es igual a hidrógeno o hidroxilo, R2 es igual a hidrógeno, metilo o etilo, R3 es igual a un grupo de fórmulas en las que * es el punto de unión al átomo de nitrógeno, R6 es igual a un grupo de fórmulas **(Ver fórmulas)** en las que * es el punto de unión al átomo de nitrógeno, R11 es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo, R12 es igual a hidrógeno o metilo, k es el número 0 ó 1, l es el número 1, 2, 3 ó 4, y m y n son independientemente entre sí un número 1, 2 ó 3, R7 es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo, R8, R9 y R10 son independientemente entre sí un grupo de fórmulas **(Ver fórmulas)** en las que * es el punto de unión al átomo de nitrógeno, R13 es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo, R14 es igual a hidrógeno o metilo, R15 y R16 son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo, o es un número 0 ó 1, p, q y w son independientemente entre sí un número 1, 2, 3 ó 4, R4 es igual a hidrógeno, hidroxilo, halógeno, amino o metilo, o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.

Description

Macrociclos de amida VI antibacterianos.
La invención se refiere a macrociclos de amida antibacterianos y a procedimientos para su preparación, a su uso para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, así como a su uso para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de infecciones bacterianas.
En los documentos WO03/106480, WO04/012816, WO05/033129, WO05/058943, WO05/100380 y WO05/
118613 se describen macrociclos de acción antibacteriana de tipo bifenomicina B con sustituyentes amida o éster.
En los documentos US 3.452.136, tesis doctoral de R. U. Meyer, Universidad de Stuttgart, Alemania 1991, tesis doctoral de V. Leitenberger, Universidad de Stuttgart, Alemania 1991, Synthesis (1992), (10), 1025-30, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 (1992), (1), 123-30, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1991), (10), 744, Synthesis (1991), (5), 409-13, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1991), (5), 275-7, J. Antibiot. (1985), 38(11), 1462-8, J. Antibiot. (1985), 38(11), 1453-61, se describe la sustancia natural bifenomicina B como activa antibacteriana. Se describen etapas parciales de la síntesis de bifenomicina B en Synlett. (2003), 4, 522-526.
Chirality (1995), 7(4), 181-92, J. Antibiot. (1991), 44(6), 674-7, J. Am. Chem. Soc. (1989), 111(19), 7323-7, J. Am. Chem. Soc. (1989), 111(19), 7328-33, J. Org. Chem. (1987), 52(24), 5435-7, Anal. Biochem. (1987), 165(1), 108-13, J. Org. Chem. (1985), 50(8), 1341-2, J. Antibiot. (1993), 46(3), C-2, J. Antibiot. (1993), 46(1), 135-40, Synthesis (1992), (12), 1248-54, Appl. Environ. Microbiol. (1992), 58(12), 3879-8, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1992), (13), 951-3 describen una sustancia natural estructuralmente relacionada, la bifenomicina A, que presenta en el macrociclo otra sustitución con un grupo hidroxilo.
Las sustancias naturales no satisfacen los requisitos que se plantean a medicamentos antibacterianos respecto a sus propiedades. Están ciertamente presentes en el mercado agentes de acción antibacteriana estructuralmente diferentes, pero periódicamente puede desarrollarse resistencia. Son por tanto deseables nuevos agentes para una terapia buena y más eficaz.
Es por tanto un objetivo de la presente invención poner a disposición compuestos nuevos y alternativos con efecto antibacteriano igual o mejor para el tratamiento de enfermedades bacterianas en personas y animales.
Sorprendentemente, se ha encontrado que determinados derivados de estas sustancias naturales, en los que el grupo carboxilo de la sustancia natural está intercambiado por un grupo amida terciaria y que contienen un grupo básico, son antibacterianos eficaces frente a cepas de S. aureus resistentes a bifenomicina (RN4220Bi^{R} y T17).
Además, los derivados muestran una frecuencia de resistencia espontánea mejorada frente a cepas de tipo silvestre de S. aureus y cepas de S. aureus resistentes a bifenomicina.
Son objeto de la invención los compuestos de fórmula
1
en los que
R^{5}
es igual a un grupo de fórmulas
2
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno, metilo o etilo,
R^{3}
es igual a un grupo de fórmulas
3
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
R^{6}
es igual a un grupo de fórmulas
4
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{11} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{12} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
k es el número 0 ó 1,
\quad
l es el número 1, 2, 3 ó 4,
\quad
y
\quad
m y n son independientemente entre sí el número 1, 2 ó 3,
R^{7}
es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
R^{8}, R^{9} y R^{10} son independientemente entre sí un grupo de fórmulas
5
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{13} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{14} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
R^{15} y R^{16} son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo,
\quad
o es el número 0 ó 1,
\quad
p, q y w son independientemente entre sí el número 1, 2, 3 ó 4,
R^{4}
es igual a hidrógeno, hidroxilo, halógeno, amino o metilo,
\quad
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
\vskip1.000000\baselineskip
Son compuestos según la invención los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, así como los compuestos comprendidos en la fórmula (I) citados a continuación como ejemplo(s) de realización y sus sales, solvatos y solvatos de las sales, a menos que en los compuestos comprendidos en la fórmula (I) citados a continuación no se trate ya de sales, solvatos y solvatos de las sales.
Los compuestos según la invención pueden existir, dependiendo de su estructura, en formas estereoisoméricas (enantiómeros, diastereómeros). La invención se refiere por tanto a los enantiómeros o diastereómeros y sus mezclas respectivas. A partir de dichas mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros, pueden aislarse de modo conocido mediante procedimientos conocidos, como cromatografía en fase quiral o cristalización con aminas quirales o ácidos quirales, los componentes individuales.
La invención se refiere, dependiendo de la estructura de los compuestos, también a tautómeros de los compuestos.
Se prefieren como sales en el marco de la invención las sales fisiológicamente inocuas de los compuestos según la invención.
Las sales fisiológicamente inocuas de los compuestos (I) comprenden sales de adición de ácido de ácidos minerales, ácidos carboxílicos y ácidos sulfónicos, por ejemplo, sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido acético, ácido propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido trifluoroacético y ácido benzoico.
Las sales fisiológicamente inocuas de los compuestos (I) comprenden también sales de bases habituales como, por ejemplo y preferiblemente, sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio y potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, sales de calcio y magnesio) y sales de amonio, derivadas de amoniaco o aminas orgánicas de 1 a 16 átomos de C, como por ejemplo y preferiblemente etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procaína, dibencilamina, N-metilmorfolina, dihidroabietilamina, arginina, lisina, etilendiamina y metilpiperidina.
Se designan como solvatos en el marco de la invención aquellas formas de los compuestos que pueden formar un complejo en estado sólido o líquido mediante coordinación con moléculas de disolvente. Los hidratos son una forma especial de solvatos en los que la coordinación se realiza con agua.
Halógeno representa flúor, cloro, bromo y yodo. El símbolo # en un átomo de carbono significa que el compuesto se presenta en forma enantioméricamente pura respecto a la configuración en este átomo de carbono, con lo que se entiende en el marco de la presente invención un exceso enantiomérico (enantiomeric excess) de más del 90% (>90% e.e.).
En las fórmulas de los grupos que representan R^{3}, el punto final de la línea no representa, además de respectivamente un *, un átomo de carbono o un grupo CH_{2}, sino que es la parte del enlace con el grupo carbonilo a la que está unida R^{3}.
En las fórmulas de los grupos que pueden representar R^{5}, el punto final de la línea no representa, además de respectivamente un *, un átomo de carbono o un grupo CH_{2}, sino que es la parte del enlace con el átomo de carbono a la que está unida R^{7}.
En las fórmulas de los grupos que representan R^{6}, R^{8}, R^{9} y R^{10}, el punto final de la línea no representa, además de respectivamente un *, un átomo de carbono o un grupo CH_{2}, sino que es la parte del enlace con el átomo de nitrógeno a la que están unidos R^{6}, R^{8}, R^{9} y R^{10}.
Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmula
6
en los que
R^{1}
es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno, metilo o etilo,
R^{3}
es como se define anteriormente,
R^{4}
es igual a hidrógeno, hidroxilo, halógeno, amino o metilo,
\quad
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) o (Ia) en las que
R^{2}
es igual a hidrógeno.
Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) o (Ia) en las que
R^{4}
es igual a hidrógeno, hidroxilo, cloro o metilo.
\newpage
Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) o (Ia) en las que
R^{4}
es igual a hidroxilo.
Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) o (Ia) en las que
R^{5}
es igual a un grupo de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
7 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) o (Ia) en las que
R^{5}
es igual a un grupo de fórmula
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8 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno,
R^{3}
es igual a un grupo de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\newpage
\quad
R^{6} es igual a un grupo de fórmulas
\vskip1.000000\baselineskip
10 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{11} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{12} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
k es el número 0 ó 1,
\quad
l es el número 1, 2, 3 ó 4,
\quad
y
\quad
m y n son independientemente entre sí el número 1, 2 ó 3,
R^{4}
es igual a hidroxilo,
\quad
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
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Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) y (Ia) en las que
R^{5}
es igual a un grupo de fórmula
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11 
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\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno,
\newpage
R^{3}
es igual a un grupo de fórmulas
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12
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{7} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{8} y R^{10} son independientemente entre sí un grupo de fórmulas
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13
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{13} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{14} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
R^{15} y R^{16} son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo,
\quad
o es el número 0 ó 1,
\quad
p, q y w son independientemente entre sí el número 1, 2, 3 ó 4,
R^{4}
es igual a hidroxilo,
\quad
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
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Se prefieren también en el marco de la presente invención compuestos de fórmulas (I) o (Ia) en las que
R^{5}
es igual a un grupo de fórmula
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14
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno,
R^{3}
es igual a un grupo de fórmula
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15 
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\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{9} es un grupo de fórmulas
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16 
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\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{13} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{14} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
R^{15} y R^{16} son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo,
\quad
o es el número 0 ó 1,
\quad
p, q y w son independientemente entre sí el número 1, 2, 3 ó 4,
R^{4}
es igual a hidroxilo,
\quad
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
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Es además objeto de la invención un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I) o sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales, en el que según el procedimiento
\newpage
[A]
se hacen reaccionar compuestos de fórmula
17
en la que R^{2}, R^{4} y R^{5} tienen el significado dado anteriormente y boc es igual a terc-butoxicarbonilo,
en un procedimiento en dos etapas en primer lugar en presencia de uno o varios reactivos de deshidratación con compuestos de fórmula
(III),HR^{3}
en la que R^{3} tiene el significado anteriormente dado,
y a continuación con un ácido y/o mediante hidrogenólisis,
o
[B]
se hacen reaccionar compuestos de fórmula
18
en la que R^{2}, R^{4} y R^{5} tienen el significado anteriormente dado y Z es igual a benciloxicarbonilo,
en un procedimiento en dos etapas en primer lugar en presencia de uno o varios reactivos de deshidratación con compuestos de fórmula
(III),HR^{3}
en la que R^{3} tiene el significado anteriormente dado,
y a continuación con un ácido o mediante hidrogenólisis.
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La base libre de la sal puede obtenerse, por ejemplo, mediante cromatografía en una columna de fase inversa con un gradiente de acetonitrilo-agua con adición de una base, particularmente mediante el uso de una columna RP18 Phenomenex Luna C18(2) y dietilamina como base.
Es otro objeto de la invención un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I) o sus solvatos según la reivindicación 1, en el que las sales de los compuestos o los solvatos de las sales de los compuestos se transforman en los compuestos mediante cromatografía con adición de una base.
El grupo hidroxilo en R^{1} está protegido dado el caso durante la reacción con compuestos de fórmula (III) con un grupo terc-butildimetilsililo que se escinde en la segunda etapa de reacción.
Las funcionalidades reactivas en el resto R^{3} de compuestos de fórmula (III) se protegen ya con grupos protectores incorporados a la síntesis, preferiblemente lábiles a ácidos (por ejemplo Boc). Después de realizada la reacción hasta compuestos de fórmula (I), los grupos protectores pueden escindirse mediante reacción de desprotección. Esto se da según procedimientos estándar de la química de grupos protectores. Se prefieren reacciones de desprotección en condiciones ácidas o mediante hidrogenólisis.
La reacción de la primera etapa de los procedimientos [A] y [B] se realiza en general en disolventes inertes, dado el caso en presencia de una base, preferiblemente en un intervalo de temperatura de 0ºC a 40ºC a presión normal.
Sirven como reactivos de deshidratación en este momento, por ejemplo, carbodiimidas como, por ejemplo, N,N'-dietil-, N,N'-dipropil-, N,N'-diisopropil- o N,N'-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilaminoisopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC), N-ciclohexilcarbodiimida-N'-propiloximetilpoliestireno (PS-carbodiimida) o compuestos de carbonilo como carbonildiimidazol o compuestos de 1,2-oxazolio como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metilisoxazolio o compuestos de acilamino como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina o anhídrido del ácido propanofosfónico o cloroformiato de isobutilo o cloruro de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxitri(dimetilamino)fosfonio o hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TPTU) o hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), o 1-hidroxibenztriazol (HOBt), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio (BOP), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfonio (PyBOP), o mezclas de estos, o mezcla de estos junto con bases.
Son bases, por ejemplo, carbonatos alcalinos como, por ejemplo, carbonato o hidrogenocarbonato de sodio o potasio o bases orgánicas como trialquilaminas, por ejemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina.
Preferiblemente, se lleva a cabo la condensación con HATU en presencia de una base, particularmente diisopropiletilamina, o con PyBOP en presencia de una base, particularmente diisopropiletilamina.
Son disolventes inertes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados como diclorometano o triclorometano, hidrocarburos como benceno o nitrometano, dioxano, dimetilformamida o acetonitrilo. Es igualmente posible utilizar mezclas de disolventes. Se prefiere especialmente la dimetilformamida.
La reacción con un ácido en la segunda etapa de los procedimientos [A] y [B] se realiza preferiblemente en un intervalo de temperatura de 0ºC a 40ºC a presión normal.
Son adecuados como ácidos en este momento ácido clorhídrico en dioxano, ácido bromhídrico en ácido acético o ácido trifluoroacético en cloruro de metileno.
La hidrogenólisis en la segunda etapa del procedimiento [B] se realiza en general en un disolvente en presencia de hidrógeno y paladio sobre carbón activo, preferiblemente en un intervalo de temperatura de 0 a 40ºC a presión normal.
Son disolventes, por ejemplo, alcoholes como metanol, etanol, n-propanol o isopropanol, en mezcla con agua y ácido acético glacial, se prefiere una mezcla de etanol, agua y ácido acético glacial.
Los compuestos de fórmula (III) son conocidos o pueden prepararse análogamente a procedimientos conocidos.
Los compuestos de fórmula (II) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de fórmula
19
en la que R^{2}, R^{4} y R^{5} tienen el significado anteriormente dado,
con bicarbonato de di(terc-butilo) en presencia de una base.
La reacción se realiza en general en un disolvente, preferiblemente en un intervalo de temperaturas de 0 a 40ºC a presión normal.
Son bases, por ejemplo, hidróxidos alcalinos como hidróxido de sodio o potasio o carbonatos alcalinos como carbonato de cesio, carbonato de sodio o potasio u otras bases como DBU, trietilamina o diisopropiletilamina, se prefieren hidróxido de sodio o carbonato de sodio.
Son disolventes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados como cloruro de metileno o 1,2-dicloroetano, alcoholes como metanol, etanol o isopropanol, o agua.
Preferiblemente, se lleva a cabo la reacción con hidróxido de sodio en agua o carbonato de sodio en metanol.
Los compuestos de fórmula (V) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de fórmula
20
en la que R^{2}, R^{4} y R^{5} tienen el significado anteriormente dado, y
R^{17}
es igual a bencilo, metilo o etilo,
\quad
con un ácido o mediante hidrogenólisis, como se describe para la segunda etapa del procedimiento [B], dado el caso mediante reacción posterior con una base para saponificar el éster metílico o etílico.
La saponificación puede realizarse, por ejemplo, como se describe en la reacción de compuestos de fórmula (VI) hasta compuestos de fórmula (IV).
Los compuestos de fórmula (IV) son conocidos o pueden prepararse saponificando compuestos de fórmula (VI) de éster bencílico, metílico o etílico.
La reacción se realiza en general en un disolvente en presencia de una base, preferiblemente en un intervalo de temperaturas de 0 a 40ºC a presión normal.
Son bases, por ejemplo, hidróxidos alcalinos como hidróxido de litio, sodio o potasio, se prefiere hidróxido de litio.
Son disolventes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados como diclorometano o triclorometano, éteres como tetrahidrofurano o dioxano, o alcoholes como metanol, etanol o isopropanol, o dimetilformamida. Es igualmente posible utilizar mezclas de disolventes o mezclas de disolventes con agua. Se prefieren especialmente tetrahidrofurano o una mezcla de metanol y agua.
Los compuestos de fórmula (VI) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de fórmula
21
en la que R^{2}, R^{4}, R^{5} y R^{17} tienen el significado anteriormente dado,
en la primera etapa con ácidos, como se describe para la segunda etapa de los procedimientos [A] y [B], y en la segunda etapa con bases.
En la segunda etapa, se realiza la reacción con bases en general en un disolvente, preferiblemente a un intervalo de temperatura de 0 a 40ºC a presión normal.
Son bases, por ejemplo, hidróxidos alcalinos como hidróxido de sodio o potasio o carbonatos alcalinos como carbonato de cesio, carbonato de sodio o potasio u otras bases como DBU, trietilamina o diisopropiletilamina, se prefiere la trietilamina.
Son disolventes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados como cloroformo, cloruro de metileno o 1,2-dicloroetano o tetrahidrofurano o mezclas de disolventes, se prefieren cloruro de metileno o tetrahidrofurano.
Los compuestos de fórmula (VII) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de fórmula
22
en la que R^{2}, R^{4}, R^{5} y R^{17} tienen el significado anteriormente dado,
con pentafluorofenol en presencia de reactivos de deshidratación, como se describe para la primera etapa de los procedimientos [A] y [B].
La reacción se realiza preferiblemente con DMAP y EDC en diclorometano a un intervalo de temperatura de -40 a 40ºC a presión normal.
Los compuestos de fórmula (VIII) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de fórmula
23
en la que R^{2}, R^{4}, R^{5} y R^{17} tienen el significado anteriormente dado,
con fluoruro, particularmente con fluoruro de tetrabutilamonio.
La reacción se realiza en general en un disolvente, preferiblemente a un intervalo de temperaturas de -10 a 30ºC a presión normal.
Son disolventes inertes, por ejemplo, hidrocarburos halogenados como diclorometano, o hidrocarburos como benceno o tolueno, o éteres como tetrahidrofurano o dioxano, o dimetilformamida. Es igualmente posible utilizar mezclas de disolventes. Son disolventes preferidos tetrahidrofurano y dimetilformamida.
\newpage
Los compuestos de fórmula (IX) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de fórmula
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24 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{2}, R^{4} y R^{17} tienen el significado anteriormente dado,
con compuestos de fórmula
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25 
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en la que R^{5} tiene el significado anteriormente dado,
en presencia de reactivos de deshidratación, como se describen para la primera etapa de los procedimientos [A] y [B].
Los compuestos de fórmula (X) son conocidos o pueden prepararse análogamente a los procedimientos descritos en la parte de ejemplos.
Los compuestos de fórmula (XI) son conocidos o pueden prepararse análogamente a procedimientos conocidos.
Los compuestos según la invención muestran un espectro de acción farmacológica y farmacocinética valioso no previsible.
Son adecuados por tanto para uso como medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en personas y animales.
Los compuestos según la invención pueden utilizarse, debido a sus propiedades farmacológicas, solos o en combinación con otros principios activos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades infecciosas, particularmente de infecciones bacterianas.
Por ejemplo, pueden tratarse y/o evitarse enfermedades locales y/o sistémicas que están causadas por los siguientes agentes patógenos o por mezclas de los siguientes agentes patógenos:
cocos grampositivos, por ejemplo, estafilococos (S. aureus, S. epidermidis) y estreptococos (S. agalactiae, S. faecalis, S. pneumoniae, S. pyogenes); cocos gramnegativos (Neisseria gonorrhoeae), así como bacilos gramnegativos como enterobacterias, por ejemplo, Escherichia coli, Hämophilus influenzae, Citrobacter (C. freundii, C. divernis), Salmonella y Shigella; además Klebsiella (K. pneumoniae, K. oxytocy), Enterobacterias (E. aerogenes, E. agglomerans), Hafnia, Serratia (S. marcescens), Proteus (P. mirabilis, P. rettgeri, P. vulgaris), Providencia, Yersinia, así como el género Acinetobacter. Además, el espectro antibacteriano comprende el género Pseudomonas (P. aeruginosa, P. maltophilia), así como bacterias anaeróbicas estrictas como, por ejemplo, Bacteroides fragilis, representantes del género Peptococcus, Peptostreptococcus, así como el género Clostridium; además micoplasmas (M. pneumoniae, M. hominis, M. urealyticum) así como micobacterias, por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis.
La enumeración anterior de agentes patógenos ha de considerarse únicamente como paradigmática. Como enfermedades que están causadas por los patógenos citados o infecciones mixtas y que pueden evitarse, mejorarse o curarse mediante preparados de aplicación tópica según la invención se citan como ejemplos:
Enfermedades infecciosas en personas como, por ejemplo, infecciones sépticas, infecciones medulares y articulares, infecciones cutáneas, heridas infectadas postoperatorias, abscesos, flemones, heridas infectadas, quemaduras infectadas, quemaduras, infecciones en la zona bucal, infecciones después de operaciones dentales, artritis séptica, mastitis, tonsilitis, infecciones genitales e infecciones oculares.
Además de en personas, pueden tratarse también infecciones bacterianas en otras especies. Se citan como ejemplos:
cerdos: diarrea por Coli, enterotoxemia, septicemia, disentería, salmonelosis, síndrome de metritis-mastitis-agalactia, mastitis;
rumiantes (vaca, oveja, cabra): diarrea, septicemia, bronconeumonía, salmonelosis, pasteurelosis, micoplasmosis, infecciones genitales;
caballos: bronconeumonías, artritis séptica, infecciones puerperales y postpuerperales, salmonelosis;
perros y gatos: bronconeumonía, diarrea, dermatitis, otitis, infecciones del tracto urinario, prostatitis;
aves (pollo, pavo, codorniz, paloma, aves ornamentales y otras): micoplasmosis, infecciones por E. coli, enfermedades crónicas del tracto respiratorio, salmonelosis, pasteurelosis, psitacosis.
Igualmente pueden tratarse enfermedades bacterianas en la cría y mantenimiento de peces útiles y ornamentales, en los que el espectro antibacteriano se extiende además de a los agentes patógenos anteriormente citados a otros tales como, por ejemplo, Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Corynebakterien, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsie, Yersinia. Es otro objeto de la presente invención el empleo de compuestos según la invención para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, preferiblemente de enfermedades bacterianas, particularmente infecciones bacterianas.
Es objeto adicional de la presente invención el uso de los compuestos según la invención para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de las enfermedades anteriormente citadas.
Es objeto adicional de la presente invención el uso de los compuestos según la invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de las enfermedades anteriormente citadas.
Es objeto adicional de la presente invención un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, particularmente de las enfermedades anteriormente citadas, usando una cantidad antibacteriana eficaz de los compuestos según la invención.
Los compuestos según la invención pueden actuar sistémica y/o localmente. Con este fin, pueden administrarse de modo adecuado como, por ejemplo, por vía oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica, transdérmica, conjuntival, ótica o como implante o prótesis endovascular.
Para estos modos de administración, pueden administrarse los compuestos según la invención en formas de administración adecuadas.
Para administración oral, son adecuadas formas de administración de funcionamiento rápido y/o modificado según el estado de la técnica que dispensan los compuestos según la invención, que contienen los compuestos según la invención en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta como, por ejemplo, comprimidos (comprimidos no recubiertos o recubiertos, por ejemplo con recubrimientos gastrorresistentes o de liberación retardada o insolubles que controlan la liberación del compuesto según la invención), comprimidos o películas/obleas de degradación rápida en la cavidad oral, películas/liofilizados, cápsulas (por ejemplo, cápsulas de gelatina dura o blanda), grageas, gránulos, aglomerados, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o disoluciones.
La administración parenteral puede darse evitando una etapa de resorción (por ejemplo, por vía intravenosa, intraarterial, intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o incluyendo una resorción (por ejemplo, por vía intramuscular, subcutánea, intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Para administración parenteral, son adecuados como formas de administración, entre otros, preparados de inyección e infusión en forma de disoluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos estériles.
Para los demás modos de administración son adecuados, por ejemplo, formas de administración por inhalación (entre otros, inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas, disoluciones y pulverizadores nasales, comprimidos, películas/obleas o cápsulas de administración lingual, sublingual o bucal, supositorios, preparados auriculares u oculares, cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas agitadas), suspensiones lipófilas, pomadas, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos (como, por ejemplo, apósitos), leches, pastas, espumas, polvos finos, implantes o prótesis endovasculares.
Los compuestos según la invención pueden transformarse en las formas de administración citadas. Esto puede darse de modo conocido mediante mezclado con coadyuvantes inertes no tóxicos farmacéuticamente adecuados. Se cuentan entre estos coadyuvantes, entre otros, portadores (por ejemplo, celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por ejemplo, polietilenglicoles líquidos), agentes emulsionantes y dispersantes o humectantes (por ejemplo, dodecilsulfato de sodio, oleato de polioxisorbitán), aglutinantes (por ejemplo, polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos y naturales (por ejemplo, albúmina), estabilizadores (por ejemplo, antioxidantes como, por ejemplo, ácido ascórbico), colorantes (por ejemplo, pigmentos inorgánicos como, por ejemplo, óxidos de hierro) y correctores del sabor
y/u olor.
Son objeto adicional de la presente invención medicamentos que contienen al menos un compuesto según la invención, habitualmente junto con uno o varios coadyuvantes inertes no tóxicos farmacéuticamente adecuados, así como su uso con los fines anteriormente citados.
En general, se ha demostrado ventajoso administrar en administración parenteral cantidades de 5 a 250 mg/kg de peso corporal cada 24 h para conseguir resultados eficaces. En la administración oral, la cantidad asciende a aproximadamente 5 a 100 mg/kg de peso corporal cada 24 h.
A pesar de ello, puede ser necesario dado el caso desviarse de las cantidades citadas, ciertamente dependiendo del peso corporal, modo de administración, comportamiento individual frente al principio activo, tipo de preparado y momento o intervalo en el que se realiza la administración. Así, en algunos casos puede ser suficiente con menos de la cantidad mínima anteriormente citada, mientras que en otros casos deben superarse los límites superiores anteriores. En caso de administración de cantidades mayores, puede ser aconsejable repartir éstas en varias tomas individuales a lo largo del día.
Los datos porcentuales en los siguientes ensayos y ejemplos son, a menos que se indique otra cosa, porcentajes en peso; las partes son partes en peso. Las relaciones de disolventes, relaciones de dilución y datos de concentración de disoluciones líquido-líquido se refieren respectivamente al volumen.
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A. Ejemplos Abreviaturas usadas
abs.
absoluto
ac.
acuoso
Bn
bencilo
boc
terc-butoxicarbonilo
Ej.
ejemplo
CDCl_{3}
cloroformo
CH
ciclohexano
d
doblete (en RMN-^{1}H)
dd
doblete de dobletes (en RMN-^{1}H)
TLC
cromatografía en capa fina
DCC
diciclohexilcarbodiimida
DIC
diisopropilcarbodiimida
DIEA
diisopropiletilamina (base de Hünig)
DMSO
dimetilsulfóxido
DMAP
4-N,N-dimetilaminopiridina
DMF
dimetilformamida
d. t.
del teórico
EDC
N'-(3-dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida x HCl
AcOEt
acetato de etilo
ESI
ionización por electropulverización (en EM)
Fmoc
9-fluorenilmetoxicarbonilo
sat.
saturado
HATU
hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HBTU
hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HOBt
1-hidroxi-1H-benzotriazol x H_{2}O
h
hora(s)
HPLC
cromatografía líquida de alta presión/alto rendimiento
CL-EM
cromatografía líquida acoplada a espectroscopia de masas
m
multiplete (en RMN-^{1}H)
min
minuto
EM
espectroscopia de masas
RMN
espectroscopia de resonancia nuclear
MTBE
metil-terc-butiléter
Pd/C
paladio/carbono
PFP
pentafluorofenol
%
porcentaje
PyBOP
hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(pirrolidino)fosfonio
c
cuartete (en RMN-^{1}H)
F_{r}
factor de retención (en TLC)
FI
fase inversa (en HPLC)
TA
temperatura ambiente
T_{R}
tiempo de retención (en HPLC)
s
singlete (en RMN-^{1}H)
t
triplete (en RMN-^{1}H)
TBS
terc-butildimetilsililo
TFA
ácido trifluoroacético
THF
tetrahidrofurano
TMSE
2-(trimetilsilil)etilo
TPTU
tetrafluoroborato 2-(2-oxo-1(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio
Z
benciloxicarbonilo
\newpage
Procedimientos de CL-EM y HPLC
Procedimiento 1 (CL-EM): Tipo de dispositivo de EM: Micromass ZQ; tipo de dispositivo de HPLC: Waters Alliance 2795; columna: Phenomenex Synergi 2m Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de A \rightarrow 2,5 min 30% de A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50ºC; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 2 (CL-EM): Tipo de dispositivo de EM: Micromass ZQ; tipo de dispositivo de HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; columna: Phenomenex Synergi 2m Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de A \rightarrow 2,5 min 30% de A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50ºC; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 3 (CL-EM): Instrumento: Micromass Quattro LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: Phenomenex Synergi 2m Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 90% de A \rightarrow 2,5 min 30% de A \rightarrow 3,0 min 5% de A \rightarrow 4,5 min 5% de A; flujo: 0,0 min 1 ml/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 ml/min; estufa: 50ºC; detección UV: 208-400 nm.
Procedimiento 4 (CL-EM): Tipo de dispositivo de EM: Micromass ZQ; tipo de dispositivo de HPLC: Waters Alliance 2795; columna: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 50 mm x 4,6 mm; eluyente A: agua + 500 ml de ácido fórmico al 50%/1 l, eluyente B: acetonitrilo + 500 ml de ácido fórmico al 50%/l; gradiente: 0,0 min 10% de B \rightarrow 3,0 min 95% de B \rightarrow 4,0 min 95% de B; estufa: 35ºC; flujo: 0,0 min 1,0 ml/min \rightarrow 3,0 min 3,0 ml/min \rightarrow 4,0 min 3,0 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 5 (CL-EM): Instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: Thermo HyPURITY Aquastar 3 m 50 mm x 2,1 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 100% de A \rightarrow 0,2 min 100% de A \rightarrow 2,9 min 30% de A \rightarrow 3,1 min 10% de A \rightarrow 5,5 min 10% de A; estufa: 50ºC; flujo: 0,8 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 6 (CL-EM): Instrumento: Micromass Platform LCZ con HPLC Agilent Serie 1100; columna: Thermo Hypersil GOLD-3m 20 x 4 mm; eluyente A: 1 l de agua + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%, eluyente B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de ácido fórmico al 50%; gradiente: 0,0 min 100% de A \rightarrow 0,2 min 100% de A \rightarrow 2,9 min 30% de A \rightarrow 3,1 min 10% de A \rightarrow 5.5 min 10% de A; estufa: 50ºC; flujo: 0,8 ml/min; detección UV: 210 nm.
Compuestos de partida
Ejemplo 1A
{(1S)-4-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-1-[({2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}-amino)carbonil]butil}carbamato de bencilo
26
Se disuelven en atmósfera de argón 300 mg (0,82 mmol) de N2-[(benciloxi)carbonil]-N^{5}-(terc-butoxicarbonil)-L-omitina y 171 mg (1,06 mmol) de (2-aminoetil)carbamato de terc-butilo en 6 ml de dimetilformamida. Se añaden entonces a 0ºC (baño de hielo) 204 mg (1,06 mmol) de EDC y 33 mg (0,25 mmol) de HOBt. Se calienta lentamente a TA y se agita durante 12 h a TA. Se concentra la disolución a vacío y se recoge el residuo con acetato de etilo. Se lava la fase orgánica consecutivamente con disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio y cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio y se evapora a vacío. Se seca el sólido restante a alto vacío.
Rendimiento: 392 mg (94% d. t.)
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 2,36 min.
EM (ESI): m/z = 509 (M+H)^{+}.
Ejemplo 2A
N^{5}-(terc-Butoxicarbonil)-N-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}-L-ornitinamida 
\vskip1.000000\baselineskip
27 
\vskip1.000000\baselineskip
Se hidrogena una disolución de 390 mg (0,77 mmol) de {(1S)-4-[(terc-butoxicarbonil)amino]-1-[({2-[(terc-butoxi-
carbonil)amino]etil}amino)carbonil]-butil}carbamato de bencilo (ejemplo 1A) en 50 ml de etanol tras la adición de 40 mg de paladio sobre carbón activo (al 10%) durante 4 h a TA y presión normal. Se filtra sobre tierra de diatomeas y se lava el residuo con etanol. Se concentra el filtrado a vacío. Se hace reaccionar el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 263 mg (91% d.t.)
EM (ESI): m/z = 375 (M+H)^{+}; 397 (M+Na)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3A
1-[(Benciloxi)carbonil]-L-prolil-N^{5}-(terc-butoxicarbonil)-N-{2-[(terc-butoxi-carbonil)amino]etil}-L-ornitinamida 
\vskip1.000000\baselineskip
28 
\vskip1.000000\baselineskip
Se disuelven en atmósfera de argón 48 mg (0,194 mmol) de 1-[(benciloxi)carbonil]-L-prolina y 94 mg (0,25 mmol) del compuesto del ejemplo 2A en 6 ml de dimetilformamida. Se añaden entonces a 0ºC (baño de hielo) 48 mg (0,25 mmol) de EDC y 7,8 mg (0,058 mmol) de HOBt. Se calienta lentamente a TA y se agita durante 12 h a TA. Se concentra la disolución a vacío, se recoge el residuo con diclorometano y se lava con disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio, ácido clorhídrico 0,1 N y agua. Se concentran las fases orgánicas combinadas a vacío y se vuelve a hacer reaccionar el sólido así obtenido sin purificación.
Rendimiento: 117 mg (95% d.t.)
CL-EM (procedimiento 3): T_{R} = 2,36 min.
EM (ESI): m/z = 606 (M+H)^{+}.
\newpage
Ejemplo 4A
L-Prolil-N^{5}-(terc-butoxicarbonil)-N-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}-L-ornitinamida 
\vskip1.000000\baselineskip
29
Se disuelven 117 mg (0,193 mmol) del compuesto del ejemplo 3A en 50 ml de etanol y se mezclan con 20 mg de paladio sobre carbón activo (al 10%). Se hidrogena durante 12 h a presión normal, se filtra sobre tierra de diatomeas y se concentra el filtrado a vacío. Se vuelve a hacer reaccionar el sólido así obtenido sin purificación.
Rendimiento: 86 mg (94% d.t.)
EM (ESI): m/z = 472 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5A
{(5S)-5-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-6-hidroxihexil}carbamato de terc-butilo 
\vskip1.000000\baselineskip
30
Se mezcla una disolución de 475 mg (0,90 mmol) de N^{2},N^{6}-bis(terc-butoxicarbonil)-L-lisin-N-ciclohexilciclohexa-
namina (1:1) en 10 ml de tetrahidrofurano a -10ºC con 91 mg (0,90 mmol) de 4-metilmorfolina y 98 mg (0,90 mmol) de éster etílico del ácido clorofórmico, y se agita durante 30 min. Se añaden gota a gota lentamente a esta temperatura 1,81 ml (1,81 mmol) de una disolución 1 M de hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano. Se calienta lentamente a TA y se agita durante 12 h a TA. Se añaden cuidadosamente con enfriamiento con hielo 0,1 ml de agua y 0,15 ml de disolución de hidróxido de sodio al 4,5% y se agita otras 3 h a TA. Se filtra la preparación y se concentra el filtrado a vacío. Se disuelve el residuo en acetato de etilo, se lava con agua, se seca sobre sulfato de magnesio y se concentra de nuevo a vacío hasta sequedad. Se hace reaccionar el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 250 mg (83% d. t.)
EM (ESI): m/z = 333 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 6A
Metanosulfonato de (2S)-2,6-bis[(terc-butoxicarbonil)amino]hexilo
31
Se mezcla una disolución de 250 mg (0,75 mmol) del compuesto del ejemplo 5A en 20 ml de diclorometano con 103 mg (0,90 mmol) de cloruro del ácido metanosulfónico y 0,21 ml (1,5 mmol) de trietilamina y se agita durante 16 h a TA. Se diluye con diclorometano y se lava dos veces con ácido clorhídrico 0,1 N. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio y se concentra a vacío hasta sequedad. Se hace reaccionar el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 264 mg (86% d.t.)
EM (DCI): m/z = 428 (M+NH_{4})^{+}.
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Ejemplo 7A
{(5S)-6-Azido-5-[(terc-butoxicarbonil)amino]hexil}carbamato de terc-butilo
32
Se mezcla una disolución de 264 mg (0,64 mmol) del compuesto del ejemplo 6A en 15 ml de dimetilformamida con 42 mg (0,64 mmol) de azida de sodio y se agita durante 12 h a 70ºC. Se separa por destilación a vacío la mayoría del disolvente y se diluye el residuo con acetato de etilo. Se lava varias veces con disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio y se concentra a vacío hasta sequedad. Se hace reaccionar el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuant.
EM (ESI): m/z = 358 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 8A
{(5S)-6-Amino-5-[(terc-butoxicarbonil)amino]hexil}carbamato de terc-butilo
33
Se hidrogena una disolución de 229 mg (0,64 mmol) del compuesto del ejemplo 7A en 10 ml de etanol tras la adición de 20 mg de paladio sobre carbón activo (al 10%) durante 12 h a TA y a presión normal. Se filtra por tierra de diatomeas y se lava el residuo con etanol. Se concentra el filtrado a vacío hasta sequedad. Se hace reaccionar el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 161 mg (76% d.t.)
EM (ESI): m/z = 332 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 9A
(2S,4R)-2-[({(2S)-2,6-Bis[(terc-butoxicarbonil)amino]hexil}amino)carbonil]-4-hidroxipirrolidin-1-carboxilato de bencilo
34
Se realiza la preparación análogamente al ejemplo 3A a partir de 57 mg (0,216 mmol) de (4R)-1-[(benciloxi)carbonil]-4-hidroxi-L-prolina y 93 mg (0,28 mmol) del compuesto del ejemplo 8A en 6 ml de dimetilformamida con la adición de 54 mg (0,28 mmol) de EDC y 8,7 mg (0,065 mmol) de HOBt. Se purifica el producto mediante HPLC-FI preparativa (fase móvil: gradiente de agua/acetonitrilo: 90:10 \rightarrow 5:95).
Rendimiento: 42 mg (34% d. t.)
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 2,08 min.
EM (ESI): m/z = 579 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10A
(4R)-N-{(2S)-2,6-Bis[(terc-butoxicarbonil)amino]hexil}-4-hidroxi-L-prolinamida
35
La preparación se realiza análogamente al ejemplo 4A a partir de 41 mg (0,071 mmol) del compuesto del ejemplo 9A en 20 ml de etanol con la adición de 7,5 mg de paladio sobre carbón activo (al 10%). Se hace reaccionar el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuant.
EM (ESI): m/z = 445 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 11A
Metanosulfonato de 2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etilo
36
Se añaden 11,3 g (98,4 mmol) de cloruro del ácido metanosulfónico a una disolución de 16 g (82,0 mmol) de (2-hidroxietil)carbamato de bencilo y 16,60 g (64,02 mmol) de trietilamina en 1 l de diclorometano. Se agita la mezcla de reacción durante una noche a TA. Se añade agua y se lava la fase orgánica consecutivamente con agua y disolución de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio y se evapora a vacío. Se seca el sólido restante a alto vacío. Se purifica el producto bruto mediante HPLC preparativa.
Rendimiento 7 g (31% d.t.).
CL-EM (procedimiento 3): T_{R} = 1,84 min.
EM (ESI): m/z = 273 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 12A
{2-[(2-Hidroxietil)amino]etil}carbamato de bencilo
37
Se añaden 500 mg (1,83 mmol) de metanosulfonato de 2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etilo (ejemplo 11A) y 758 mg (5,48 mmol) de carbonato de potasio a una disolución de 226 mg (3,66 mmol) de 2-aminoetanol en 25 ml de acetonitrilo. Se agita la mezcla de reacción durante una noche a 50ºC. Se evapora entonces el disolvente y se recoge el residuo con diclorometano. Se lava la fase orgánica con agua, se seca sobre sulfato de magnesio y se concentra. Se purifica el producto bruto mediante HPLC preparativa.
Rendimiento 131 mg (29% d. t.)
CL-EM (procedimiento 3): T_{R} = 0,78 min.
EM (ESI): m/z = 239 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 13A
[2-({2-[(terc-Butoxicarbonil)(metil)amino]etil}amino)etil]carbamato de bencilo 
\vskip1.000000\baselineskip
38 
\vskip1.000000\baselineskip
Se realiza la preparación análogamente al ejemplo 12A a partir de 300 mg (1,098 mmol) de metanosulfonato de 2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etilo (ejemplo 11A), 386 mg (2,19 mmol) de (2-aminoetil)metilcarbamato de terc-butilo y 455 mg (3,30 mmol) de carbonato de potasio en 10 ml de acetonitrilo.
Rendimiento: 360 mg (82% d.t.)
CL-EM (procedimiento 4): T_{R} = 1,51 min.
EM (ESI): m/z = 352 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 14A
[2-({3-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-2-hidroxipropil}amino)etil]carbamato de bencilo 
\vskip1.000000\baselineskip
39 
\vskip1.000000\baselineskip
Se realiza la preparación análogamente al ejemplo 12A a partir de 270 mg (0,98 mmol) de metanosulfonato de 2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etilo (ejemplo 11A), 379 mg (1,98 mmol) de (3-amino-2-hidroxipropil)carbamato de terc-butilo y 409 mg (2,96 mmol) de carbonato de potasio en 10 ml de acetonitrilo.
Rendimiento: 209 mg (45% d.t.)
CL-EM (procedimiento 2): T_{R} = 1,44 min.
EM (ESI): m/z = 368 (M+H)^{+}.
\newpage
Ejemplo 15A
5-(Metoxicarbonil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-glutamato de 1-terc-butilo
40
Se disuelven en atmósfera de argón 5 g (16,15 mmol) de ácido (4S)-5-terc-butoxi-4-[(terc-butoxicarbonil)amino]-5-pentanoico y 2,45 ml (17,60 mmol) de trietilamina en 80 ml de THF y se enfría a 0ºC. Se añaden a esto 1,68 g (17,77 mmol) de cloroformiato de metilo y se deja agitar después durante 3 horas a 0ºC. Se filtra la mezcla de reacción por tierra de diatomeas. Se hace reaccionar directamente el filtrado.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 16A
N-(terc-Butoxicarbonil)-5-hidroxi-L-norvalinato de terc-butilo
41
Se añade gota a gota el filtrado de 5-(metoxicarbonil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-glutamato de 1-terc-butilo (ejemplo 15A) a una suspensión de 1,52 g (40,38 mmol) de borohidruro de sodio en 4,5 ml de agua a 0ºC. Se calienta la mezcla lentamente a TA y se agita durante una noche. Se concentra la disolución de reacción a vacío y se mezcla el residuo con acetato de etilo y agua para procesamiento. Se lava la fase orgánica con disolución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio y se evapora a vacío. Se hace reaccionar el producto bruto sin purificación adicional.
Rendimiento: 4,5 g (48% d.t.)
CL-EM (procedimiento 2): T_{R} = 2,04 min.
EM (ESI): m/z= 290 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 17A
N-(terc-Butoxicarbonil)-5-[(metilsulfonil)oxi]-L-norvalinato de terc-butilo
42
Se añaden 1,07 g (9,35 mmol) de cloruro del ácido metanosulfónico a una mezcla de 4,5 g (7,79 mmol) de N-(terc-butoxicarbonil)-5-hidroxi-L-norvalinato de terc-butilo (ejemplo 16A) y 2,17 ml (5,58 mmol) de trietilamina en 200 ml de diclorometano. Se agita la mezcla a TA durante una noche y se mezcla entonces con agua. Se lava la fase orgánica consecutivamente con agua y disolución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio y se evapora a vacío. Se purifica el producto bruto mediante HPLC preparativa.
Rendimiento: cuant.
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 2,16 min.
EM (ESI): m/z = 368 (M+H)^{+}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 18A
N^{2}-(terc-Butoxicarbonil)-N^{5}-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}-L-ornitinato de terc-butilo 
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43
Se realiza la preparación análogamente al ejemplo 12A a partir de 2 g (5,443 mmol) de N-(terc-butoxicarbonil)-5-[(metilsulfonil)oxi]-L-norvalinato de terc-butilo (ejemplo 17A), 1,78 g (10,89 mmol) (2-aminoetil)carbamato de terc-butilo y 2,26 g (16,33 mmol) de carbonato de potasio en 100 ml de acetonitrilo. Se hace reaccionar el producto bruto sin purificación adicional.
Rendimiento: 4,2 g (53% d.t.)
CL-EM (procedimiento 3): T_{R} = 1,61 min.
EM (ESI): m/z = 432 (M+H)^{+}.
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Ejemplo 19A
2-{[(2-{[(Benciloxi)carbonil]amino}etil)amino]metil}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo 
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44 
\vskip1.000000\baselineskip
Se realiza la preparación análogamente al ejemplo 12A a partir de 1 g (3,66 mmol) de metanosulfonato de 2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etilo (ejemplo 11A), 1,56 g (7,31 mmol) de 2-(aminometil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo y 1,52 g (10,98 mmol) de carbonato de potasio en 70 ml de acetonitrilo.
Rendimiento: 680 mg (45% d.t.)
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 1,47 min.
EM (ESI): m/z = 392 (M+H)^{+}.
\newpage
Ejemplo 20A
{2-[{(2S)-5-{[Benciloxi)carbonil]amino}-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-pentanoil}-(2-hidroxietil)amino]etil} carbamato de bencilo
45
Se añaden 193 mg (0,51 mmol) de HATU y 0,247 ml (1,39 mmol) de N,N-diisopropiletilamina a una disolución de 169 mg (0,462 mmol) de N^{5}-(benciloxi)carbonil]-N^{2}-(terc-butoxicarbonil)-L-omitina en 10 ml de DMF anhidra. Después de 30 min de agitación a TA, se añaden 116 mg (0,46 mmol) de {2-[(2-hidroxietil)amino]etil}carbamato de bencilo (ejemplo 12A). Se agita la mezcla de reacción durante 15 h a TA. Se evapora entonces el disolvente y se mezcla el residuo con acetato de etilo y agua. Se lava la fase orgánica consecutivamente con ácido clorhídrico 1 N y disolución acuosa saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra. Se purifica el producto bruto mediante HPLC preparativa.
Rendimiento: 188 mg (70% d.t.)
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 2,17 min.
EM (ESI): m/z = 587 (M+H)^{+}.
Ejemplo 21A
Clorhidrato de {(4S)-4-amino-5-[(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-(2-hidroxietil)amino]-5-oxopentil}carba- mato de bencilo
46
Se añaden 2 ml de una disolución 4 M de ácido clorhídrico en dioxano a una disolución de 176 mg (0,30 mmol) de {2-[{(2S)-5-{[(benciloxi)carbonil]amino}-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]pentanoil}-(2-hidroxietil)amino]etil}carbamato de bencilo (ejemplo 20A) en 1 ml de dioxano. Después de 3 h a TA, se concentra la disolución de reacción a vacío, se coevapora varias veces con diclorometano y se seca a alto vacío. Se hace reaccionar el producto bruto sin purificación adicional.
Rendimiento: 160 mg (85% d.t.)
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 1,53 min.
EM (ESI): m/z = 487 (M-HCl+H)^{+}.
Ejemplo 22A
3-[(3S)-3-(3-{[(Benciloxi)carbonil]amino}propil)-5-(2-hidroxietil)-4,9-dioxo-11-fenil-10-oxa-2,5,8-triazaun- decan-1-oil]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
47
Se disuelven en atmósfera de argón 47 mg (0,206 mmol) de ácido 1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-carboxílico, 130 mg (0,206 mmol) de clorhidrato de {(4S)-4-amino-5-[(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-(2-hidroxietil)amino]-5-oxopentil}carbamato de bencilo (ejemplo 21A) y 0,08 ml de trietilamina (0,56 mmol) en 10 ml de dimetilformamida. Se añaden entonces a 0ºC (baño de hielo) 67 mg (0,350 mmol) de EDC y 9 mg (0,068 mmol) de HOBt. Se calienta lentamente a TA y se agita durante 12 h a TA. Se concentra la disolución a vacío y se recoge el residuo con diclorometano. Se lava la fase orgánica consecutivamente con agua, ácido clorhídrico 1 N y disolución acuosa saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra. Se hace reaccionar el producto bruto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuant.
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 2,26 min.
EM (ESI): m/z = 698 (M+H)^{+}.
Ejemplo 23A
Clorhidrato de {(4S)-5-[(2-{[(benciloxi)carbonil]amino}etil)-(2-hidroxietil)-amino]-5-oxo-4-[(piperidin-3-il- carbonil)amino]pentil}carbamato de bencilo
48
Se añaden 2 ml de una disolución 4 M de ácido clorhídrico en dioxano a una disolución de 180 mg (0,196 mmol) de 3-[(3S)-3-(3-{[(benciloxi)carbonil]amino}propil)-5-(2-hidroxietil)-4,9-dioxo-11-fenil-10-oxa-2,5,8-triazaundecan-1-oil]piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (ejemplo 22A) en 1 ml de dioxano. Después de 3 h a TA, se concentra la disolución de reacción a vacío, se coevapora varias veces con diclorometano y se seca a alto vacío. Se purifica el producto bruto mediante HPLC preparativa.
Rendimiento: 18 mg (14% d.t.)
CL-EM (procedimiento 2): T_{R} = 1,84 min.
EM (ESI): m/z = 598 (M-HCl+H)^{+}.
Se preparan análogamente a las instrucciones indicadas anteriormente para el ejemplo 1 los ejemplos 24A a 29A indicados en la siguiente tabla a partir de los correspondientes reactantes:
\vskip1.000000\baselineskip
49 
\newpage
Se preparan análogamente a las instrucciones indicadas para el ejemplo 2A los ejemplos 20A a 35A indicados en la siguiente tabla a partir de los correspondientes reactantes:
51 
\newpage
Ejemplo 36A
{2-[{[(8S,11S,14S)-14-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxi-carbonil)amino]propil}-5,17-dihidroxi- 10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo-[14.3.1.12,6]henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-il]carbonil}-(2-hidroxietil)a- mino]etil}carbamato de bencilo 
\vskip1.000000\baselineskip
52 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añaden 19,2 mg (0,050 mmol) de HATU y 0,010 ml (0,137 mmol) de N,N-diisopropiletilamina a una disolución de 30 mg (0,046 mmol) de ácido 8S,11S,14S)-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxi-carbonil)-amino]propil}-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo-[14.3.1.12,6]-henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxílico (ejemplo 83A del documento WO03/106480) en 2 ml de DMF anhidra. Después de 30 min de agitación a TA, se añaden 12,7 mg (0,046 mmol) de {2-[(2-hidroxietil)amino]etil}carbamato de bencilo (ejemplo 12A). Se agita la mezcla de reacción durante 15 h a TA. Se evapora entonces el disolvente y se recoge el residuo con diclorometano. Se lava la fase orgánica con agua, se seca sobre sulfato de magnesio y se concentra. Se purifica el producto bruto mediante HPLC preparativa.
Rendimiento: 8 mg (20% d.t.)
CL-EM (procedimiento 2): T_{R} = 2,29 min.
EM (ESI): m/z = 877 (M+H)^{+}.
\newpage
Se preparan análogamente a las instrucciones del ejemplo 36A los ejemplos 37A a 45A indicados en la siguiente tabla.
53
54
55
Ejemplo 46A
1-{[(8S,11S,14S)-14-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxi-carbonil)amino]propil}-5,17-dihidroxi- 10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo-[14.3.1.12,6]henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-il]carbonil}-L-prolil-N^{5}-(terc- butoxicarbonil)-N-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}-L-omitinamida
56
Se añaden a 0ºC 26 mg (0,050 mmol) de PyBOP y 0,020 ml (0,14 mmol) de N,N-diisopropiletilamina a una solución de 30 mg (0,046 mmol) de ácido (8S,11S,14S)-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxi-carbonil)amino]propil}-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo-[14.3.1.12.6]-henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxílico (ejemplo 83A del documento WO03/106480) en 10 ml de DMF anhidra. Después de 30 min a 0ºC, se añaden 23,7 mg (0,05 mmol) de L-prolil-N^{5}-(terc-butoxicarbonil)-N-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}-L-ornitinamida (ejemplo 4A). Se agita la mezcla de reacción durante 15 h a TA. Se evapora entonces el disolvente y se agita el residuo con agua, se separa por filtración y se seca a vacío. Se purifica cromatográficamente el producto bruto en Sephadex-LH20 (fase móvil: metanol/ácido acético (al 0,25%)).
Rendimiento: 34 mg (66% d.t.)
CL-EM (procedimiento 2): T_{R}= 2,49 min.
EM (ESI): m/z = 1110 (M+H)^{+}.
\newpage
Análogamente a las instrucciones del ejemplo 46A, se preparan los ejemplos 47A a 50A indicados en la siguiente tabla.
57 
\newpage
Ejemplo 51A
Hidroacetato de [2-((2-aminoetil)-{[(8S,11S,14S)-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxicarbonil) amino]propil}-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo[14.3.1.12,6]henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen- 8-il]carbonil}amino)etil]metilcarbamato de terc-butilo 
\vskip1.000000\baselineskip
59 
\vskip1.000000\baselineskip
Se disuelven 11 mg (0,01 mmol) de [2-({[(8S,11S,14S)-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxicar-
bonil)amino]propil}-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo[14.3.1.12,6]-henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-he-
xaen-8-il]carbonil}-{2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]etil}amino)etil]-carbamato de bencilo (ejemplo 37A) en 4 ml de ácido acético/agua (4:1). Se añaden a ello 5 mg de paladio sobre carbón activo (al 10%) y se hidrogena a continuación durante 15 h a presión normal. Se filtra la mezcla de reacción por tierra de diatomeas prelavada y se evapora por rotavapor el filtrado a vacío. Se hace reaccionar el producto bruto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuant.
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 1,80 min.
EM (ESI): m/z = 856 (M^{-}HOAc+H)^{+}.
\newpage
Análogamente a las instrucciones del ejemplo 51A, se preparan los ejemplos 52A a 56A indicados en la siguiente tabla.
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60
61
Ejemplos de realización Ejemplo 1 Tetraclorhidrato de 1-{[(8S,11S,14S)-14-amino-11-(3-aminopropil)-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo [14.3.1.12,6]henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-il]carbonil}-L-prolil-N-(2-aminoetil)-L-omitinamida 
\vskip1.000000\baselineskip
62 
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Se añaden 0,363 ml de una disolución 4 N de ácido clorhídrico en dioxano a una solución de 26,9 mg (0,024 mmol) del compuesto del ejemplo 46A en 1 ml de dioxano a 0ºC. Después de 3 h a TA, se concentra la disolución de reacción a vacío y se coevapora varias veces con diclorometano. Se seca el sólido residual a alto vacío hasta peso constante.
Rendimiento: 20 mg (96% d.t.)
CL-EM (procedimiento 5): T_{R} = 1,82 min.
EM (ESI): m/z = 710 (M-4HCl+H)^{+}.
RMN-^{1}H (400 MHz, D_{2}O): \delta= 1,26 (mc, 1H), 1,55-2,1 (m, 10H), 2,27 (mc, 1H), 2,75 (mc, 1H), 2,9-3,2 (m, 7H), 3,3-3,8 (m, 6H), 4,25 (mc, 1H), 4,44 (mc, 2H), 4,7-4,9 (m, 2H, bajo D_{2}O), 6,85-7,0 (m, 3H), 7,27 (s, 1H), 7,34 (d, 1H), 7,4 (d, 1H).
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Ejemplo 2 Tetra(hidrotrifluoroacetato) de 1-{[(8S,11S,14S)-14-amino-11-(3-aminopropil)-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo[14.3.1.12.6]-henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-il]carbonil}-L-prolil-N-(2-aminoetil)-L-ornitina- mida
Se transforma el ejemplo 1 en forma de sal tetraclorhidrato mediante HPLC preparativa (Reprosil ODS-A, fase móvil acetonitrilo/ácido trifluoroacético acuoso al 0,2% 5:95 \rightarrow 95:5) en el tetra(hidrotrifluoroacetato).
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Ejemplo 3 Tetraclorhidrato de (8S,11S,14S)-14-amino-N-(2-aminoetil)-11-(3-aminopropil)-5,17-dihidroxi-N-[2-(metilamino)e- til]-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo[14.3.1.12.6]henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxamida
63
Se agita una mezcla de 9 mg (0,011 mmol) de [2-((2-aminoetil)-{[(8S,11S,14S)-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-11-{3-[(terc-butoxicarbonil)-amino]propil}-5,11-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo[14.3.1.12,6]-henicosa-1
(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-il]carbonil}amino)etil]metil-carbamato de terc-butilo (ejemplo 51A) y 1,5 ml de una disolución 4 M de ácido clorhídrico en dioxano durante 20 min a TA. Se concentra la disolución de reacción, se coevapora varias veces con diclorometano y se seca a alto vacío.
Rendimiento: cuant.
CL-EM (procedimiento 1): T_{R} = 0,27 min.
EM (ESI): m/z = 555 (M-4HCl+H)^{+}.
RMN-^{1}H (400 MHz, D_{2}O): \delta= 1,60-1,90 (m, 5H), 2,73 (d, 3H), 2,86-3,11(m, 4H), 3,23-3,38 (m, 4H), 3,50-3,95 (m, 8H), 5,09 (m, 2H), 6,96 (d, 2H), 7,01 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,46 (d, 1H).
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Ejemplo 4 Triclorhidrato de 1-{[(8S,11S,14S)-14-amino-11-(3-aminopropil)-5,17-dihidroxi-10,13-dioxo-9,12-diazatriciclo[14. 3.1.12,6]henicosa-1(20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-il]carbonil}-N-(2-aminoetil)-L-prolinamida
64
Se añaden 0,363 ml de una disolución 4 N de ácido clorhídrico en dioxano a una disolución de 26,9 mg (0,024 mmol) del compuesto del ejemplo 47A en 1 ml de dioxano a 0ºC. Después de 3 h a TA, se concentra la disolución de reacción a vacío y se coevapora varias veces con diclorometano. Se seca el sólido residual a alto vacío hasta peso constante.
Rendimiento: 20 mg (96% d.t.)
CL-EM (procedimiento 5): T_{R} = 1,82 min.
EM (ESI): m/z = 710 (M-3HCl+H)^{+}.
RMN-^{1}H (400 MHz, D_{2}O): \delta= 1,26 (mc, 1H), 1,5-2,1 (m, 8H), 2,26 (mc, 1H), 2,76 (mc, 1H), 2,9-3,2 (m, 7H), 3,3-3,6 (m, 2H), 4,37 (mc, 1H), 4,45 (mc, 1H), 4,7-4,9 (m, 2H, bajo D_{2}O), 6,85-7,0 (m, 3H), 7,27 (s, 1H), 7,34 (d, 1H), 7,4 (d, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 Trisclorhidrato de (8S,11S,14S)-14-amino-N-{2-[(2-aminoetil)amino]-2-oxoetil}-11-(3-aminopropil)-5,17-dihidroxy-N-metil-10,13-dioxo-9,12-diaza-triciclo[14.3.1.12,6]henicosa-1 (20),2(21),3,5,16,18-hexaen-8-carboxamida 
\vskip1.000000\baselineskip
65 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añaden 0,343 ml de una disolución 4 N de ácido clorhídrico en dioxano a una disolución de 19,9 mg (0,023 mmol) del compuesto del ejemplo 43A en 1 ml de dioxano a 0ºC. Después de 3 h a TA, se concentra la solución de reacción a vacío y se coevapora varias veces con diclorometano. Se seca el sólido residual a alto vacío hasta peso constante.
Rendimiento: 13,6 mg (88% d.t.)
CL-EM (procedimiento 5): T_{R} =1,9 min.
EM (ESI): m/z = 570 (M-3HCl+H)^{+}.
Análogamente a las instrucciones del ejemplo 1, se preparan los ejemplos 5 a 14 indicados en la siguiente tabla, correspondientemente a los respectivos procedimientos de aislamiento en forma de sal clorhidrato o hidro(trifluoroacetato).
66
67
68
B. Evaluación de la eficacia fisiológica Abreviaturas usadas
AMP
monofosfato de adenosina
ATP
trifosfato de adenosina
medio BHI
medio de infusión de cerebro y corazón
CoA
coenzima A
DMSO
dimetilsulfóxido
DTT
ditiotreitol
EDTA
ácido etilendiaminotetraacético
KCl
cloruro de potasio
KH_{2}PO_{4}
dihidrogenofosfato de potasio
MgSO_{4}
sulfato de magnesio
CMI
concentración mínima inhibidora
PMV
placa de microvaloración
NaCl
cloruro de sodio
Na_{2}HPO_{4}
hidrogenofosfato de disodio
NH_{4}Cl
cloruro de amonio
NTP
trifosfato nucleotídico
PBS
disolución salina tamponada con fosfato
PCR
reacción en cadena de la polimerasa
PEG
polietilenglicol
PEP
fosfoenolpiruvato
Tris
tris[hidroximetil]aminometano.
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad in vitro de los compuestos según la invención puede mostrarse en los siguientes ensayos:
Transcripción-traducción in vitro con extractos de E. coli
Para la preparación de un extracto de S30, se cultivan MRE600 de Escherichia coli de crecimiento logarítmico (M. Müller; Universidad de Friburgo), se lavan y se utilizan como se describe para el ensayo de transcripción-traducción in vitro (Müller, M. y Blobel, G. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1984) 81, pág.7421-7425).
Se añade a la mezcla de reacción del ensayo de transcripción-traducción in vitro adicionalmente 1 \mul de AMPc (11,25 mg/ml) por cada 50 \mul de mezcla de reacción. La preparación de ensayo asciende a 105 \mul, en los que se disponen 5 \mul de sustancia a ensayar en DMSO al 5%. Se usan como matrices de transcripción preparaciones de 1 \mug/100 \mul del plásmido pBESTLuc (Promega, Alemania). Después de la incubación durante 60 min a 30ºC, se añaden 50 \mul de disolución de luciferina (tricina 20 mM, MgSO_{4} 2,67 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 33,3 mM, pH 7,8, CoA 270 \muM, luciferina 470 \muM, ATP 530 \muM) y se mide la bioluminiscencia generada durante 1 minuto en un luminómetro. Se da como CI_{50} la concentración de un inhibidor que conduce a un 50% de inhibición de la traducción de luciferasa de luciérnaga.
Transcripción-traducción in vitro con extractos de S. aureus Construcción de un plásmido indicador de luciferasa de S. aureus
Para la construcción de un plásmido indicador que pueda usarse en un ensayo de transcripción-traducción in vitro de S. aureus, se usa el plásmido pBESTluc (Promega Corporation, EE.UU.). El promotor tac de E. coli antes de luciferasa de luciérnaga presente en este plásmido se intercambia por el promotor capA1 con la secuencia de Shine-Dalgarno correspondiente de S. aureus. Para ello, se usan los cebadores CAPFor 5'-CGGCCAAGCTTACTCGGATCCA
GAGTTTGCAAAATATACAGGGGATTATATATAATGGAAAACAAGAAAGGAAAATAGGAGGTTTATATGGAA
GACGCCA-3' y CAPRev 5'-GTCATCGTCGGGAAGACCTG-3'. El cebador CAPFor contiene el promotor capA1, el sitio de unión a ribosoma y la región 5' del gen de luciferasa. Después de PCR usando pBESTluc como molde, puede aislarse un producto de PCR que contiene el gen luciferasa de luciérnaga con el promotor capA1 fusionado. Este se liga después de restricción con ClaI e HindIII en el vector pBESTluc digerido igualmente con ClaI e HindIII. El plásmido pla generado puede replicarse en E. coli y usarse como molde en el ensayo de transcripción-traducción in vitro en S. aureus.
Preparación de extractos de S30 de S. aureus
Se inoculan 6 l de medio BHI con un sobrenadante de cultivo de 250 ml de una cepa de S. aureus y se deja crecer a 37ºC hasta una DO_{600 \ nm} de 2-4. Se recogen las células mediante centrifugación y se lavan con 500 ml de tampón A frío (Tris-acetato 10 mM, pH 8,0, acetato de magnesio 14 mM, DTT 1 mM, KCl 1 M). Después de una nueva centrifugación, se lavan las células con 250 ml de tampón A frío con KCl 50 mM y se congelan los sedimentos obtenidos a -20ºC durante 60 min. Se descongelan los sedimentos durante 30 a 60 min en hielo y se suspenden hasta un volumen total de 99 ml en tampón B (Tris-acetato 10 mM, pH 8,0, acetato de magnesio 20 mM, DTT 1 mM, KCl 50 mM). Se disponen 1,5 ml de lisostafina (0,8 mg/ml) en tampón B en cada 3 vasos de centrífuga preenfriados y se mezclan cada uno con 33 ml de suspensión celular. Se incuban las muestras durante 45 a 60 min a 37ºC con agitación continua, antes de añadir 150 \mul de una disolución de DTT 0,5 M. Se separan por centrifugación las células lisadas a 30.000 x g durante 30 min a 4ºC. Se centrifuga otra vez el sedimento celular después de suspensión en tampón B en las mismas condiciones y se purifican los sobrenadantes combinados. Se centrifugan otra vez los sobrenadantes en las mismas condiciones y se añaden a los dos tercios superiores del sobrenadante 0,25 volúmenes de tampón C (Tris-acetato 670 mM, pH 8,0, acetato de magnesio 20 mM, fosfoenolpiruvato de Na3 7 mM, DTT 7 mM, ATP 5,5 mM, aminoácidos 70 mM (completos de Promega), 75 mg de piruvato cinasa (Sigma, Alemania)/ml. Se incuban las muestras durante 30 min a 37ºC. Se dializan los sobrenadantes durante una noche a 4ºC frente a 2 l de tampón de diálisis (Tris-acetato 10 mM, pH 8,0, acetato de magnesio 14 mM, DTT 1 mM, acetato de potasio 60 mM) con un intercambio de tampón en un tubo de diálisis con exclusión de 3.500 Da. Se concentra el dializado a una concentración de proteína de aproximadamente 10 mg/ml llenando el tubo de diálisis con PEG 800 frío en polvo (Sigma, Alemania) a 4ºC. Los extractos de S30 pueden dividirse en alícuotas y almacenarse a -70ºC.
Determinación de la CI_{50} en el ensayo de transcripción-traducción in vitro en S. aureus
La inhibición de la biosíntesis de proteína de los compuestos puede mostrarse en un ensayo de transcripción-traducción in vitro. El ensayo se basa en la transcripción y traducción exentas de células de luciferasa de luciérnaga usando el plásmido indicador pla como molde y extractos de S30 exentos de células obtenidos de S. aureus. Puede detectarse la actividad de la luciferasa generada mediante medida de la luminiscencia.
Debe ensayarse de nuevo la cantidad de extracto de S30 o plásmido pla a utilizar para cada preparación para garantizar una concentración óptima en el ensayo. Se disponen en una PMV 3 \mul de la sustancia a ensayar disuelta en DMSO al 5%. A continuación, se añaden 10 \mul de una disolución concentrada de plásmido pla apropiada. A continuación, se añaden 46 \mul de una mezcla de 23 \mul de premezcla (acetato de potasio 500 mM, Tris-acetato 87,5 mM, pH 8,0, acetato de amonio 67,5 mM, DTT 5 mM, ácido fólico 50 \mug/ml, PEG 8000 87,5 mg/ml, ATP 5 mM, 1,25 nM de cada NTP, 20 \muM de cada aminoácido, PEP 50 mM (sal de Na3), AMPc 2,5 mM, 250 \mug de cada ARNt de E. coli/ml) y 23 \mul de una cantidad adecuada de extracto de S30 de S. aureus y se mezclan. Después de incubar durante 60 min a 30ºC, añaden 50 \mul de disolución de luciferina (tricina 20 mM, MgSO_{4} 2,67 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 33,3 mM, pH 7,8, CoA 270 \muM, luciferina 470 \muM, ATP 530 \muM) y se mide la bioluminiscencia generada durante 1 min en un luminómetro. Se da como CI_{50} la concentración de inhibidor que conduce a un 50% de inhibición de la traducción de luciferasa de luciérnaga.
Determinación de la concentración mínima inhibidora (CMI)
La concentración mínima inhibidora (CMI) es la concentración mínima de un antibiótico con la que el germen de ensayo inhibe su crecimiento durante 18-24 h. La concentración inhibidora puede determinarse a este respecto según procedimientos microbiológicos estándar (véase, por ejemplo, The National Committee for Clinical Laboratory Standards. "Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard", 5ª edición, Documento NCCLS M7-A5 [ISBN 1-56238-394-9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pensilvania 19087-1898, EE.UU., 2000). La CMI de los compuestos según la invención se determina en el ensayo de dilución líquida a escala de placas de microvaloración de 96 pocillos. Se cultivan los gérmenes bacterianos en un medio mínimo (Na_{2}HPO_{4} 18,5 mM, KH_{2}PO_{4} 5,7 mM, NH_{4}Cl 9,3 mM, MgSO_{4} 2,8 mM, NaCl 17,1 mM, clorhidrato de tiamina 0,033 \mug/ml, ácido nicotínico 1,2 \mug/ml, biotina 0,003 \mug/ml, glucosa al 1%, 25 \mug/ml de cada aminoácido proteogénico con excepción de fenilalanina; [H.-P. Kroll; no publicado]) con adición de caldo BH al 0,4% (medio de ensayo). En el caso de L4001 de Enterococcus faecium, se añade al medio de ensayo suero de ternero fetal termoinactivado (FCS; GibcoBRL, Alemania) a una concentración final de 10%. Se diluyen cultivos de una noche de los gérmenes de ensayo a una DO_{578} de 0,001 (en el caso de enterococos, de 0,01) en medio de ensayo reciente y se incuban 1:1 con diluciones de la sustancia de ensayo (etapas de dilución 1:2) en medio de ensayo (200 \mul de volumen final). Se incuban los cultivos a 37ºC durante 18-24 horas; los enterococos en presencia de 5% de CO_{2}.
La concentración de sustancia más baja respectiva a la que no aparece crecimiento bacteriano visible se define como CMI.
Procedimientos alternativos de determinación de la concentración mínima inhibidora (CMI)
La concentración mínima inhibidora (CMI) es la concentración mínima de un antibiótico con la que un germen de ensayo inhibe su crecimiento durante 18-24 h. La concentración inhibidora puede determinarse a este respecto según procedimientos microbiológicos estándar con medio modificado en el marco de un ensayo de dilución en agar (véase, por ejemplo, The National Committee for Clinical Laboratory Standards. "Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard", 5ª edición. Documento NCCLS M7-A5 [ISBN 1-56238-394-9]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pensilvania 19087-1898 EE.UU., 2000). Se cultivan los gérmenes bacterianos en placas de agar al 1,5% que contienen sangre de caballo desfibrinada al 20%. Se diluyen los gérmenes de ensayo, que se incuban durante una noche en placas de agar de sangre de Columbia (Becton-Dickinson), se diluyen en PBS a un recuento de gérmenes de aprox. 5x10^{5} gérmenes/ml y se puntean sobre placas de ensayo (1-3 \mul). Las sustancias de ensayo contienen distintas diluciones de sustancias de ensayo (etapas de dilución 1:2). Se incuban los cultivos a 37ºC durante 18-24 horas en presencia de 5% de CO_{2}.
\newpage
La concentración de sustancia más baja respectiva a la que no aparece crecimiento bacteriano visible se define como CMI y se da en \mug/ml.
TABLA A (Con el ejemplo comparativo bifenomicina B)
69
Infección sistémica con S. aureus 133
Puede mostrarse la idoneidad de los compuestos según la invención para el tratamiento de infecciones bacterianas en distintos modelos animales. Para ello, se infectan los animales en general con un germen virulento adecuado y a continuación se tratan con el compuesto a ensayar, que se presenta en una formulación adaptada al modelo terapéutico respectivo. Especialmente, puede demostrarse la idoneidad de los compuestos según la invención para el tratamiento de infecciones bacterianas en un modelo de septicemia en ratones después de infección con S. aureus.
Para ello, se cultivan células de S. aureus 133 durante una noche en caldo BH (Oxoid, Alemania). Se diluye el sobrenadante de cultivo 1:100 en caldo BH reciente y se centrifuga fuertemente durante 3 horas. Se separan por centrifugación las bacterias que se encuentran en fase de crecimiento logarítmico y se lavan dos veces con disolución de sal común fisiológica tamponada. Después, se ajusta en el fotómetro (Dr. Lange LP 2W) una suspensión celular en disolución de sal común a una extinción de 50 unidades. Después de una etapa de dilución (1:15), se mezcla esta suspensión 1:1 con una suspensión de mucina al 10%. Se administran a partir de esta disolución infecciosa 0,2 ml/20 g de ratón por vía i.p. Esto corresponde a un recuento celular de aproximadamente 1-2 x 10^{6} gérmenes/ratón. La terapia i.v. se realiza durante 30 minutos después de la infección. Para el ensayo de infección, se usan ratones CFW1 hembra. Se registra la supervivencia de los animales durante 6 días. Se ajusta el modelo animal de modo que los animales no tratados mueran durante las 24 h después de la infección. Para el compuesto del ejemplo 2, podía demostrarse en este modelo una eficacia terapéutica de DE_{100} = 1,25 mg/kg.
Determinación de las frecuencias de resistencia espontánea frente a S. aureus
Se determinan las tasas de resistencia espontánea de los compuestos según la invención como sigue: se cultivan los gérmenes bacterianos en 30 ml de un medio mínimo (Na_{2}HPO_{4} 18,5 mM, KH_{2}PO_{4} 5,7 mM, NH_{4}Cl 9,3 mM, MgSO_{4} 2,8 mM, NaCl 17,1 mM, clorhidrato de tiamina 0,033 \mug/ml, ácido nicotínico 1,2 \mug/ml, biotina 0,003 \mug/ml, glucosa al 1%, 25 \mug/ml de cada aminoácido proteogénico con adición de caldo BH al 0,4%) a 37ºC durante una noche, se separan por centrifugación 10 min a 6.000 x g y se resuspenden en 2 ml de disolución de NaCl fisiológica tamponada con fosfato (aprox. 2x10^{9} gérmenes/ml). Se diluyen 100 \mul de esta suspensión celular o diluciones 1:10 y 1:100 en placas de agar presecadas (1,5% de agar, 20% de sangre de caballo desfibrinada o 1,5% de agar, 20% de suero bovino en 1/10 de medio Müller-Hinton diluido con PBS), que contienen el compuesto a ensayar a una concentración correspondiente a 5xCMI o 10xCMI, se siembran y se incuban durante 48 h a 37ºC. Se recuentan las colonias generadas (ufc).
Aislamiento de las cepas de S. aureus resistentes a bifenomicina RN4220Bi^{R} y T17
Se aísla in vitro la cepa RN4220Bi^{R} de S. aureus. Para ello, se incuban respectivamente 100 \mul de una suspensión celular de RN4220 de S. aureus (aprox. 1,2x10^{8} ufc/ml) en una placa de agar exenta de antibióticos (Na_{2}HPO_{4} 18,5 mM, KH_{2}PO_{4} 5,7 mM, NH_{4}Cl 9,3 mM, MgSO_{4} 2,8 mM, NaCl 17,1 mM, clorhidrato de tiamina 0,033 \mug/ml, ácido nicotínico 1,2 \mug/ml, biotina 0,003 \mug/ml, glucosa al 1%, 25 \mug/ml de cada aminoácido proteogénico con adición de caldo BH al 0,4% y agarosa al 1%) y una placa de agar que contiene bifenomicina B 2 \mug/ml (10xCMI), y se incuba durante una noche a 37ºC. Mientras que sobre la placa exenta de antibiótico crecen aprox. 1x10^{7} células, sobre la placa que contiene antibiótico crecen aprox. 100 colonias, correspondiente a una frecuencia de resistencia de 1x10^{-5}. En algunas de las colonias crecidas sobre placas que contienen antibiótico, se ensaya la CMI frente a bifenomicina B. Se selecciona una colonia con una CMI > 50 \muM para uso adicional y se designa la cepa como RN4220Bi^{R}.
Se aísla in vivo la cepa T17 de S. aureus. Se infectan por vía intraperitoneal ratones CFW1 con 4x10^{7} células S. aureus 133 por ratón. Media hora después de la infección, se tratan los animales con bifenomicina B 50 mg/kg por vía intravenosa. Se extraen los riñones a los animales supervivientes el día 3 después de la infección. Después de homogeneizar los órganos, se siembra el homogeneizado, como se describe en RN4220Bi^{R}, sobre placas de agar exentas de antibiótico y que contienen antibiótico, y se incuban durante una noche a 37ºC. Aproximadamente la mitad de las colonias aisladas de los riñones muestran crecimiento sobre las placas que contienen antibiótico (2,2x10^{6} colonias), lo que da cuenta del enriquecimiento en células de S. aureus resistentes a bifenomicina B en los riñones de animales tratados. Se ensaya en aproximadamente 20 de estas colonias la CMI frente a bifenomicina B, se selecciona una colonia con una CMI > 50 \muM para cultivo adicional y se designa como cepa T17.
C. Ejemplos de realización para composiciones farmacéuticas
Los compuestos según la invención pueden transformarse del modo siguiente en preparados farmacéuticos:
Disolución de administración intravenosa
Composición:
1 mg del compuesto del ejemplo 1, 15 g de polietilenglicol 400 y 250 g de agua para inyecciones.
Preparación:
Se disuelve el compuesto según la invención junto con polietilenglicol 400 en el agua con agitación. Se esteriliza por filtración la disolución (diámetro de poro 0,22 mm) y se rellenan frascos de infusión termoesterilizados en condiciones asépticas. Se cierran estos con tapones de infusión y cápsulas con reborde.

Claims (15)

1. Compuesto de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
70 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que
R^{5}
es igual a un grupo de fórmulas
\vskip1.000000\baselineskip
71 
\vskip1.000000\baselineskip
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno, metilo o etilo,
\newpage
R^{3}
es igual a un grupo de fórmulas
\vskip1.000000\baselineskip
72
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
R^{6}
es igual a un grupo de fórmulas
\vskip1.000000\baselineskip
73
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{11} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{12} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
k es el número 0 ó 1,
\quad
l es el número 1, 2, 3 ó 4,
\quad
y
\quad
m y n son independientemente entre sí un número 1, 2 ó 3,
R^{7}
es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
R^{8}, R^{9} y R^{10} son independientemente entre sí un grupo de fórmulas
74
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{13} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{14} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
R^{15} y R^{16} son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo,
\quad
o es un número 0 ó 1,
\quad
p, q y w son independientemente entre sí un número 1, 2, 3 ó 4,
R^{4}
es igual a hidrógeno, hidroxilo, halógeno, amino o metilo,
\quad
o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque corresponde a la fórmula
75
en la que
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2} es igual a hidrógeno, metilo o etilo,
R^{3} es como se define anteriormente,
R^{4} es igual a hidrógeno, hidroxilo, halógeno, amino o metilo,
o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque R^{2} es igual a hidrógeno.
4. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R^{4} es igual a hidrógeno, hidroxilo, cloro o metilo.
5. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R^{5} es igual a un grupo de fórmula
76
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno,
R^{3}
es igual a un grupo de fórmula
77
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{6} es igual a un grupo de fórmulas
78
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{11} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{12} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
k es un número 0 ó 1,
\quad
l es un número 1, 2, 3 ó 4,
\quad
y
\quad
m y n son independientemente entre sí un número 1, 2 ó 3,
R^{4}
es igual a hidroxilo,
\quad
o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
6. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R^{5} es igual a un grupo de fórmula
79
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno,
R^{3}
es igual a un grupo de fórmulas
80
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{7} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{8} y R^{10} son independientemente entre sí un grupo de fórmulas
81
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{13} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{14} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
R^{15} y R^{16} son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo,
\quad
o es un número 0 ó 1,
\quad
p, q y w son independientemente entre sí un número 1, 2, 3 ó 4,
R^{4}
es igual a hidroxilo,
\quad
o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
7. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R^{5} es igual a un grupo de fórmula
82
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de carbono,
\quad
R^{1} es igual a hidrógeno o hidroxilo,
R^{2}
es igual a hidrógeno,
R^{3}
es igual a un grupo de fórmula
83
\quad
en la que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{9} es un grupo de fórmulas
84
\quad
en las que
\quad
\text{*} es el punto de unión al átomo de nitrógeno,
\quad
R^{13} es igual a hidrógeno, amino o hidroxilo,
\quad
R^{14} es igual a hidrógeno o metilo,
\quad
R^{15} y R^{16} son independientemente entre sí hidrógeno, aminoetilo o hidroxietilo,
\quad
o es un número 0 ó 1,
\quad
p, q y w son independientemente entre sí un número 1, 2, 3 ó 4,
R^{4}
es igual a hidroxilo,
\quad
o una de sus sales, sus solvatos o los solvatos de sus sales.
8. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 o una de sus sales, solvatos o solvatos de sus sales, caracterizado porque
[A] se hace reaccionar un compuesto de fórmula
85
en la que R^{2}, R^{4} y R^{5} tienen el significado dado en la reivindicación 1 y boc es igual a terc-butoxicarbonilo,
en un procedimiento en dos etapas en primer lugar en presencia de uno o varios reactivos de deshidratación con un compuesto de fórmula
(III),HR^{3}
en la que R^{3} tiene el significado dado en la reivindicación 1,
y a continuación con un ácido y/o mediante hidrogenólisis,
o
[B] se hace reaccionar un compuesto de fórmula
86
en la que R^{2}, R^{4} y R^{5} tienen el significado dado en la reivindicación 1 y Z es igual a benciloxicarbonilo,
en un procedimiento en dos etapas en primer lugar en presencia de uno o varios reactivos de deshidratación con un compuesto de fórmula
(III),HR^{3}
en la que R^{3} tiene el significado dado en la reivindicación 1, y a continuación con un ácido o mediante hidrogenólisis.
9. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 o uno de sus solvatos, caracterizado porque se transforma en el compuesto una sal del compuesto o un solvato de una sal del compuesto mediante cromatografía con adición de una base.
10. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 7 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
11. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
12. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades bacterianas.
13. Medicamento que contiene al menos un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 7 en combinación con al menos un coadyuvante inerte, no tóxico y farmacéuticamente adecuado.
14. Medicamento según la reivindicación 13 para el tratamiento y/o la profilaxis de infecciones bacterianas.
15. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 7 o de un medicamento según la reivindicación 13 ó 14 en una cantidad con eficacia antibacteriana para la preparación de un medicamento para combatir infecciones bacterianas en personas y animales.
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