ES2334923T3 - Complejos metalicos que utilizan la vitamina b12 como ligando. - Google Patents

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Abstract

Complejo metálico de fórmula general M(L)n, en el que cada L se selecciona independientemente y representa un ligando, y por lo menos un L es vitamina B12 (cianocobalamina) o un derivado de la misma que se encuentra unido mediante el átomo de nitrógeno del grupo cianuro de la misma a M, el cual es un elemento seleccionado de entre los metales de transición tecnecio, rodio, renio, paladio y platino, formando de esta manera un grupo M-NC-[Co], en el que [Co] representa la vitamina B12 sin cianuro y en el que n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6.

Description

Complejos metálicos que utilizan la vitamina B_{12} como ligando.
La invención se refiere a complejos metálicos que contienen vitamina B_{12} como ligando. Asimismo, la invención se refiere a la utilización de dichos complejos en el radiodiagnóstico, la terapia con radionucleidos, la quimioterapia o como catalizadores.
Antecedentes de la técnica
Los fármacos anticáncer actuales, tales como el cisplatino, también resultan tóxicos para las células sanas normales. Las dosis relativamente elevadas que deben administrarse a un paciente provocan efectos secundarios severos. Una selectividad incrementada al dirigirse a las células de cáncer resultaría beneficiosa para el índice terapéutico y la calidad de vida del paciente.
En la terapia con radionucleidos se utiliza la acumulación metabólica de un radiofarmacéutico para administrar una dosis terapéutica de reacción en un tejido. El factor crítico para el éxito de la terapia de radionucleidos es la acumulación en el tejido diana comparado con el tejido normal, que se encuentra en el intervalo de entre 5 y 100 en todos los métodos conocidos hasta hoy. Una excepción a lo anterior es la muy exitosa terapia metabólica con yodo de la enfermedad tiroidea. Debido a la baja proporción de acumulación en diana respecto a tejido normal, la carga de radiación para los tejidos normales del paciente con frecuencia es relativamente elevada. De esta manera, existe una necesidad de un modo para administrar específicamente el radionucleido en el tejido diana.
Un compuesto candidato interesante que puede conducir a la incorporación específica de sitio es la vitamina B_{12}. Las células de cáncer de proliferación rápida se denominan grandes consumidores de B_{12}. Esta demanda muy elevada convierte a la vitamina B_{12} en un potencial "caballo de Troya" para la administración de agentes terapéuticos.
La cianocobalamina (vitamina B_{12}) es bien conocida y su química ha sido revisada exhaustivamente. Existen muchas patentes y publicaciones sobre la derivatización de la vitamina B_{12} en el anillo tetrapirrólico con cobalto o en el grupo ribosa. Algunos de dichos derivados de la vitamina B_{12} han sido propuestos para la aplicación en la terapia o el diagnóstico del cáncer, aunque ninguno ha sido comercializado todavía.
La patente US No. 2004/224921, por ejemplo, se refiere a cobalaminas fluorescentes que comprenden un compuesto fluorescente, fosforescente, luminiscente o productor de luz que se encuentra covalentemente unido a la cobalamina. Estas cobalaminas fluorescentes pueden utilizarse como marcadores diagnósticos y prognósticos para distinguir las células y tejidos cancerosos de las células y tejidos sanos, y para determinar si un individuo responderá positivamente a la quimioterapia utilizando bioconjugados terapéuticos basados en la cobalamina. Los compuestos fluorescentes, fosforescentes o productores de luz pueden unirse covalentemente a la cobalamina. Estas cobalaminas fluorescentes pueden utilizarse como marcadores diagnósticos y prognósticos para distinguir las células y tejidos cancerosos de las células y tejidos sanos, y para determinar si un individuo responderá positivamente a la quimioterapia con bioconjugados terapéuticos basados en la cobalamina. Los compuestos fluorescentes, fosforescentes o productores de luz pueden unirse covalentemente al átomo de cobalto, al anillo tetrapirrólico o al grupo ribosa de la cobalamina. Este tipo de derivatización también se encuentra descrito para compuestos no fluorescentes.
La derivatización directamente en el cobalto conduce a que un compuesto conserve más del 90% de la actividad de la vitamina B_{12}. La derivatización en esta posición es, de esta manera, una elección evidente. Sin embargo, dichos compuestos adolecen de desventajas. Por ejemplo, los compuestos alquilados del cobalto son sensibles a la luz.
Las derivatizaciones en la ribosa o en posiciones en la estructura tetrapirrólica presentan la desventaja de no poderse cortar, influyendo de esta manera sobre el comportamiento biológico de la vitamina B_{12} de manera significativa.
Existe, por lo tanto, la necesidad de un fármaco que pueda utilizarse para el diagnóstico y el tratamiento del cáncer, que no comporte efectos secundarios severos ni conduzca a una carga de radiación elevada.
Descripción resumida de la invención
Se ha encontrado según la invención que determinados complejos metálicos son capaces de coordinarse directamente con el grupo cianuro en la vitamina B_{12}. Podría demostrarse que este tipo de unión se produce en particular para el complejo [Tc(N\capO)(OH_{2})(CO)_{3}] (N\capO=ligando bidentado) en el que el átomo de nitrógeno del cianuro se une directamente al centro metálico Tc formando un grupo [Co]-CN-Tc. Lo anterior representa un ejemplo prototípico de un complejo en el que la vitamina B_{12} actúa como un ligando para un metal, en este caso para Tc. Sin embargo, otros complejos metálicos en los que la vitamina B_{12} es un ligando que se encuentra unido al metal a través de su cianuro también constituyen parte de la presente invención. En la totalidad de dichos complejos metálicos, la vitamina B_{12} actúa como ligando.
En la invención se propone por primera vez coordinar la vitamina B_{12} mediante el cianuro de la misma con un metal para formar un complejo [Co]-CN-M, en el que [Co] representa la vitamina B_{12} sin cianuro. Los inventores han encontrado que dichos derivados de la vitamina B_{12} son químicamente estables y pueden producirse fácilmente.
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Con la excepción de la posición CN, todos los demás sitios en la vitamina B_{12} han sido propuestos en la literatura para el marcaje. El cianuro no ha sido utilizado con anterioridad debido a que no se esperaba que actuase como grupo ligando.
De esta manera, la invención se refiere a complejos metálicos de fórmula general M(L)_{n}, en la que cada L se selecciona independientemente y es un ligando, y por lo menos una L se selecciona de entre la vitamina B_{12} (cianocobalamina) y los derivados de la misma unidos mediante el átomo de nitrógeno de su grupo cianuro a M, que es un elemento seleccionado de entre los metales de transición tecnecio, rodio, renio, paladio y platino, formando de esta manera un grupo M-NC-[Co], en el que [Co] representa la vitamina B_{12} o el derivado de la misma sin cianuro y en el que n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6.
No es necesario que los diferentes ligandos L presentes en un complejo metálico sean iguales, sino que cada L puede seleccionarse independientemente.
Para las aplicaciones en el diagnóstico y/o la terapia del cáncer, el metal ventajosamente es un isótopo radioactivo de Re o de Tc, tal como uno seleccionado de entre ^{99m}Tc, ^{188}Re, ^{186}Re o ^{105}Rh.
En el caso de que M sea tecnecio o renio, los demás ligandos L convenientemente son tres grupos carbonilo (COs) y opcionalmente un ligando bidentado, opcionalmente acoplado a otro metal, una molécula biológicamente activa u otra molécula, tal como un agente fluorescente. También resulta posible disponer de dos ligandos monodentados, tales como H_{2}O o Cl, en lugar de un ligando bidentado. Otros ligandos monodentados son los derivados monocarboxilato, los derivados monotiolato, las aminas alifáticas/aromáticas, etc., opcionalmente sustituidas con una molécula biológicamente activa.
El ligando bidentado se seleccionan convenientemente de entre dos partes amina alifáticas y/o aromáticas o una parte amina alifática o aromática y un grupo aniónico, tal como un carboxilato, un tiolato o un hidroxilato. Son ejemplos los \alpha-aminoácidos o los derivados del ácido picolínico.
El ligando L también puede ser una molécula biológicamente activa.
Si M es platino, L puede seleccionarse de entre un ligando que contenga N, S, P, O o C como el átomo ligante de metal o cualquier otro donante con una pareja de electrones libres disponible para la coordinación con el metal, opcionalmente acoplados a una molécula biológicamente activa.
La molécula biológicamente activa u otra molécula se selecciona de entre agentes fluorescentes, farmacóforos con actividades citotóxicas, citostáticas u otras actividades farmacológicas, pigmentos ópticos, pigmentos NIR o pigmentos fosforescentes (tales como los dados a conocer en las patentes US 6.180.085 y US 6.641.798). Los agentes fluorescentes son, por ejemplo, fluoresceína, pireno, acridina, dansilo u otros. Estos pueden utilizarse con fines diagnósticos y prognósticos. Los agentes citotóxicos o citostáticos son, por ejemplo, tamoxifeno, metotrexato y ciclofosfamida u otros compuestos con actividad farmacológica conocida (para la terapia). Alternativamente, la otra molécula puede ser un compuesto radioactivo con fines diagnósticos o terapéuticos. La molécula biológicamente activa también puede ser un ácido nucleico, tal como ARN o ADN, en particular ARN o ADN antisentido.
La invención se refiere además a un procedimiento para preparar dichos complejos metálicos que contienen vitamina B_{12} o un derivado de la misma como ligando, que comprende mezclar vitamina B_{12} con un complejo precursor, en el que M es un metal de transición, n es 2, 3, 4, 5 ó 6 y L es un ligando, para obtener un complejo metálico con un puente [Co]-CN-M estable. El complejo precursor presenta la fórmula general M(L)_{n-1}L', en la que L' es un ligando que resulta sustituido por la vitamina B_{12}. El metal de transición se selecciona convenientemente de entre tecnecio, rutenio, rodio, renio, paladio, platino, iridio y cobre.
La invención se refiere además a un complejo precursor que presenta la fórmula general M(L)_{n-1}, en la que M es un metal de transición, preferentemente seleccionado de entre tecnecio, rutenio, rodio, renio, paladio, platino, iridio y cobre, n es 2, 3, 4, 5 ó 6, y L es un ligando.
La invención también se refiere a los complejos metálicos de la invención para la utilización como agente diagnóstico o terapéutico, y a composiciones farmacéuticas que comprenden los complejos metálicos de la invención.
Además, la invención se refiere a complejos metálicos de la invención, en los que M es un metal con actividad catalítica:
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en los que M es un metal de transición seleccionado de entre tecnecio, rodio, renio, paladio y platino.
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La invención también se refiere a los complejos metálicos de la invención para la utilización como agente diagnóstico o terapéutico, y a composiciones farmacéuticas que comprenden los complejos metálicos de la invención.
Además, la invención se refiere a complejos metálicos de la invención, en los que M es un metal con actividad catalítica.
Descripción detallada de la invención
De esta manera, la invención se refiere a complejos metálicos que contienen vitamina B_{12} o uno de los derivados de la misma como ligando. En una realización, el metal puede ser un radionucleido, tal como ^{99m}Tc o ^{188}Re para la aplicación radiofarmacéutica en, por ejemplo, el diagnóstico del cáncer y la terapia con radionucleidos. En otra realización, pueden utilizarse complejos metálicos obtenidos mediante acoplamiento de otros fragmentos metálicos (por ejemplo Rh, Pt, Pd) a la vitamina B_{12} mediante el cianuro, para la quimioterapia o la catálisis estereoespecífica y/o enantioselectiva.
La reacción de la vitamina B_{12} con complejos metálicos en una configuración d^{3}, d^{6} o d^{8} conduce a la formación de un puente [Co]-CN-M estable. En el caso de que M sea ^{99m}Tc, éste es un método conveniente de marcaje de la vitamina B_{12}. En el caso de que M sea, por ejemplo, Rh(I), el complejo correspondiente puede utilizarse para la catálisis, debido a que la vitamina B_{12} proporciona un ambiente estereoespecífico.
En el caso de que M sea ^{99m}Tc o ^{188}Re, el complejo precursor es convenientemente [Tc(NnO)(OH_{2})(CO)_{3}], en el que (OH_{2} se sustituye con [Co]-CN. El ligando N\capO (u otras combinaciones de donantes) es variable. En ausencia de otros ligandos (monodentados o bidentados), únicamente la vitamina B_{12} se encuentra coordinada con el metal. En ausencia de un ligando N\capO bidentado o de un ligando bidentado de cualquier otra combinación de donantes, se sustituye un agua por la vitamina B_{12} y las dos posiciones restantes en Tc siguen ocupadas por H_{2}O o por Cl. En solución, los complejos b1-b4 con ^{99m}Tc y Re se reciben en rendimiento cuantitativo, aunque el rendimiento aislado en forma de sólido para Re es más bajo (ver la parte experimental).
El ligando N\capO (u otros) también puede ser bifuncional. Una de las funcionalidades se utiliza para la coordinación con el metal, mientras que la segunda funcionalidad puede acoplarse adicionalmente con, por ejemplo, un vector direccionador. Lo anterior permite la combinación de reconocimiento de receptores, la internalización y el atrapamiento de vitamina B_{12} marcada. Este tipo de derivado también se denomina "caballo de Troya" en el caso de que la funcionalidad adicional por ejemplo se corte enzimáticamente en el interior de la célula. En este caso libera un compuesto vitamina B_{12} funcionalmente activo o inactivo.
Son ejemplos de ligandos bifuncionales: ácido 1,4-dipicolínico, ácido 1,5-dipicolínico, ácido 1,2-imidazol-dicarboxílico, ácido 1,2-piperazín-dicarboxílico, aminoácidos, tales como ácido glutámico y lisina.
La variabilidad estructural y funcional de los diferentes complejos que pueden unirse al cianuro de la vitamina B_{12} ofrecen, de esta manera, la posibilidad de un ajuste fino y la mejora del comportamiento general y distribución biológica del complejo [Co]-CN-M(L)_{n-1}.
La vitamina B_{12} como ligado muestra una estabilidad inesperada en los complejos de la invención. Se coordina en forma de vitamina B_{12} nativa. En el caso de que se libere de los complejos metálicos de la invención mediante sustitución con otro ligando, se libera en forma de vitamina B_{12} nativa y, de esta manera, no resulta perjudicial para el cuerpo y resulta segura.
En el caso de que la vitamina B_{12} se coordine con un compuesto tóxico, se espera que su toxicidad se reduzca. Es conocido de la literatura que determinados enzimas, tales como la adenosiltransferasa, cortan el cianuro o cualquier otro grupo unido al cobalto en la vitamina B_{12} respecto a [Co]-CN. Esto significa que el complejo metálico M(L)_{n-1} también se corta y resulta liberado de la vitamina B_{12}. Tras la liberación del grupo tóxico, que puede ser el complejo metálico o una molécula unida al complejo metálico, en una célula cancerosa que ha incorporado el complejo de vitamina B_{12}, el grupo tóxico puede llevar a cabo su modo de acción sin inducir efectos secundarios perjudiciales en células no diana.
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También se ha establecido que el tipo de acoplamiento mediante el cianuro según sugiere la invención no afecta a la unión de la vitamina B_{12} a la transcobalamina (TCI), a la transcobalamina II (TCII) y al factor intrínseco (TF). De esta manera, todavía resulta incorporado por la célula y de esta manera puede utilizarse con éxito como caballo de Troya.
El acoplamiento de cualquier otro ligando L a M se realiza mediante un átomo de unión seleccionado de entre S, N, C, O, P u otro átomo que contenga una pareja de electrones libres. El átomo de unión de esta manera es parte de un grupo L más grande.
La síntesis de los complejos metálicos de la invención es simple debido a que no existe necesidad de derivatizar la estructura de B_{12}. Los productos se encuentran fácilmente disponibles a rendimientos muy elevado. En el caso de que se utilice un derivado de la vitamina B_{12} como el ligando, la derivatización de la vitamina B_{12} puede llevarse a cabo antes de la síntesis del complejo metálico.
Los compuestos ilustrados en las figuras 1 y 2 son compuestos de la invención (aparte del compuesto 5 de la figura 1, que es cisplatino).
Para obtener los productos b1-b4, el complejo [M(OH_{2}) (L^{2}) (CO)_{3}] (M=^{185,187}Re, ^{99m}Tc) se coordinó con la vitamina B_{12}. Se sintetizó el complejo [M(OH)_{2} (L^{2}) (CO)_{3}] antes de introducir B_{12}, haciendo reaccionar el complejo fac-[^{99m}Tc(OH_{2})_{3}(CO_{3})]^{+}, respectivamente el complejo [ReBr_{3}(CO_{3})]^{2-}, con un ligando bidentado L^{2}. Lo anterior se denomina enfoque mixto de ligando [2+1]. El metal de puente puede considerarse un mediador entre la vitamina B_{12} y el ligando L^{2}, mientras que el ligando L^{2} es variable.
Los diastereómeros (a) y (b) de b1-b4 pueden separarse uno del otro. Los diastereómeros puros son cinéticamente estables y si alguna vez se interconvierten, sólo lo hacen lentamente uno en otro. La clara diferencia entre los tiempos de retención de HPLC de los diastereoisómeros indica la posibilidad de utilizar la vitamina B_{12} como ligando quiral para la introducción de enantioselectividad o de diastereoselectividad en reacciones que utilizan complejos metálicos como catalizadores.
En los complejos metálicos de la invención, la vitamina B_{12} no se sustituye por ligandos competidores tales como, por ejemplo, cloruro, acetonitrilo, agua u otros grupos ligandos naturales.
Debido a que la sensibilidad a la luz de los compuestos de coenzima B_{12} que contienen el enlace Co-C (C\equivalquilo) se relaciona con la rotura del enlace Co-C, los complejos de la invención no son sensibles a la luz en absoluto. Lo anterior es una ventaja importante debido a que simplifica el almacenamiento y la manipulación.
Para la utilización en el diagnóstico y la terapia de radionucleidos, los complejos metálicos de la invención pueden administrarse en el huésped, principalmente en un huésped mamífero, normalmente mediante inyección, por vía intravenosa, intraarterial, peritoneal, intratumoral u oral por medio de una forma de dosificación que libere el complejo metálico en el estómago. La vía de administración depende del sitio particular en el que se desee el radionucleido. Generalmente se inyectan entre aproximadamente 0,1 y 2 ml en un huésped, dependiendo del peso del mismo. Habitualmente el régimen de tratamiento se ajusta al paciente, debido a que depende del peso, tipo de tumor, edad, etc. del paciente que debe tratarse. El experto en la materia es capaz de determinar la dosis radioactiva necesaria. Tras la administración del radionucleido, dependiendo del propósito de la misma, el huésped puede tratarse de diversas maneras para el diagnóstico o la terapia mediante la detección de las emisiones radioactivas del sitio o sitios a los que se une específicamente el radionucleido.
En el caso de que los complejos metálicos sean complejos de platino, pueden utilizarse en una composición farmacéutica para la quimioterapia. La vía de administración habitualmente es intravenosa. Nuevamente la cantidad de complejo metálico que debe administrarse se determina independientemente para cada paciente.
El compuesto b1 representa un ejemplo típico de un derivado con ^{99m}Tc de la vitamina B_{12}. Demuestra la unión a las proteínas específicas de transporte de vitamina B_{12}.
El compuesto b2 es menos lipofílico debido a la presencia de un grupo carboxílico adicional en L^{2} que no se encuentra implicado en la coordinación con el grupo M(CO)_{3}. El grupo carboxílico libre puede considerarse un anclaje al que puede unirse cualquier otra biomolécula (por ejemplo un péptido) o molécula bioactiva o marcador fluorescente.
Los compuestos b3 y b4, aunque se obtienen a menores rendimientos (\sim30%), demuestran la posibilidad de combinar cualquier tipo de \alpha-aminoácido artificial o natural con vitamina B_{12} mediante el enfoque [2+1].
Los ensayos de citotoxicidad de b4 con una línea celular de melanoma de ratón (B16F1) demostraron una inhibición de la proliferación de 17% a una concentración de 100 \muM. A la misma concentración, la cobalamina nativa (vitamina B_{12}) no mostró ningún efecto.
Los compuestos de cisplatino b5-b7 demuestran la posibilidad de que la vitamina B_{12} también actúe como ligando para metales que no son Tc ni Re. El cloruro del complejo b5 es lábil y puede sustituirse por un ligando más estable tal como, por ejemplo, metilguanina b6 o guanosina b7. Lo anterior ofrece la posibilidad de utilizar la vitamina B_{12} como caballo de troya para introducir secuencias de ARN o ADN antisentido en las células y en el núcleo celular para silenciar la transcripción o la traducción.
Los ensayos de citotoxicidad con una línea celular de melanoma de ratón (B16F1) mostraron un porcentaje de células proliferativas de 20% en el caso de b5 y de 30% en el caso de b6.
La presente invención se ilustra a partir de los Ejemplos haciendo referencia a compuestos en los que los ligandos forman un tricarbonilo de tecnecio o de renio, en el que uno de los grupos OH_{2} se sustituye por vitamina B_{12} y que puede derivatizarse adicionalmente en los grupos OH_{2} restantes, o un compuesto de platino, tal como cisplatino, en el que uno de los átomos de cloro se sustituye por vitamina B_{12} y el otro átomo de cloro es opcionalmente cualquier otra molécula.
Sin embargo, la idea inventiva básica es utilizar el cianuro en la vitamina B_{12} para la derivatización. Basándose en esta idea, el experto en la materia será perfectamente capaz de definir otros derivados diferentes de los dados a conocer en la presente invención pero que utilicen la idea de la invención. Dichos compuestos también forman parte de la presente invención.
La invención se ilustra adicionalmente a partir de los ejemplos no limitativos siguientes, en los que se hace referencia a las figuras siguientes.
La figura 1 muestra complejos precursores antes del acoplamiento con la vitamina B_{12}. La numeración corresponde a la numeración utilizada en los Ejemplos. El compuesto 5 es el agente conocido cisplatino.
La figura 2 muestra ejemplos de complejos metálicos de la invención. La numeración corresponde a la numeración utilizada en los Ejemplos.
La figura 3 muestra un cromatograma de HPLC de ^{99m}Tc(VitB_{12}) (H_{2}O) (CO)_{3}.
La figura 4 muestra la fórmula estructural de la vitamina B_{12}.
La figura 5 muestra las estructuras de rayos X de los compuestos b1, b4, b5 y b6.
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Ejemplos Materiales y Métodos
Todos los compuestos químicos se adquirieron de la calidad comercial máxima de Merck, Dietikon (CH), Aldrich o Fluka, Buchs (CH) y se utilizaron sin purificación adicional, a menos que se indique lo contrario.
Todas las reacciones se llevaron a cabo bajo atmósfera de nitrógeno o de argón. Se realizó un seguimiento de las reacciones mediante HPLC.
Los análisis de HPLC se llevaron a cabo en un sistema Merck-Hitachi L-7000 dotado de un detector UV/Vis de haz de diodos y un detector radiométrico EG&G Berthold LB 508. Se utilizaron columnas Macherey Nagel Nucleosil C-18ec RP (tamaño de partícula: 5 \mum, tamaño de poro: 100\ring{A}, 250x3 mm) y Merck C-18e RP Supersphere® (tamaño de poro: 100\ring{A}, 250x4 mm) y WatersXTerra RP8 (tamaño de partícula: 5 \mum, 3,0x100 mm) para la separación. Se utilizaron diferentes sistemas y gradientes de solvente de HPLC. Sistema de solventes 1: AcOH al 0,1% y CH_{3}CN al 10% en agua, pH 3 (A) y metanol (B). Sistema de solventes 2: acetato de trietilamonio al 0,1% y CH_{3}CN al 10% en agua, pH 8. Sistema de solventes 3: ácido trifluoroacético al 0,1% en agua (A) y metanol (B). Gradiente 1:
0-3 minutos, 100% de A, 3,1-9 minutos: 75% de A; 9,1-20 minutos: 66% - 0% de A; 20-25 minutos: 0% de A;
0,5 ml/minuto, o según se mencione. Gradiente 2: 0-40 minutos, 100% \rightarrow 0% de A; 30,1-40 minutos, 0% de A; 40,1-42 minutos, 0% \rightarrow 100% de A; 42-50 minutos, 100% de A. Gradiente 3: 0-5 minutos, 100% de A; 5,1-40 minutos, 100% \rightarrow 65% de A; 40,1-45 minutos, 0% de A; 45,1-53 minutos, 100% de A. Gradiente 4: 0-5 minutos, 0% \rightarrow 20% de B, 5-45 minutos, 20% \rightarrow 65% de B. Gradiente 5: 0-10 minutos, 20% de B, 10-30 minutos, 20% \rightarrow 40% de B. Gradiente 6: 0-30 minutos, 25% \rightarrow 65% de B. Gradiente 7: 0-5 minutos, 25% de B, 5,1-30 minutos, 25% \rightarrow 100% de B.
Se llevaron a cabo separaciones preparativas mediante HPLC en un sistema Varian Prostar dotado de dos bombas Prostar 215 y de un detector UV/Vis Prostar 320 utilizando columnas Macherey Nagel Nucleosil C-18ec RP (tamaño de partícula: 7 \mum, tamaño de poro: 100 \ring{A}, 250x20 mm, caudal: 10 ml/minuto, y 250x40 mm, caudal: 40 ml/min) y columna WaterXTerra Prep RP8 (tamaño de partícula: 5 \mum, 100x30 mm, caudal: 30 ml/minuto).
Se registraron los espectros de masas mediante ionización por electropulverización (ESI-MS) en un espectrómetro Merck Hitachi M-8000.
Los espectros de UV/Vis se registraron en un espectrómetro Varian Cary 50.
Los espectros de IR se registraron en un espectrómetro Bio-Rad FTS-45 con las muestras en píldoras comprimidas de KBr, a menos que se indique lo contrario.
Se registraron los espectros de RAMAN en un instrumento de onda continua Renishaw Ramanscope dotado de tres láseres a longitudes de onda de 514, 633 y 785 nm.
Se registraron los espectros de RMN en un espectrómetro Varian Gemini 200 MHz o 300 MHz y un Bruker DRX 500 MHz. Se informan los desplazamientos químicos respecto a TMS utilizando los protones del solvente residual como estándar interno. Los desplazamientos químicos de los espectros de RMN de ^{31}P se informan respecto a 0 ppm de ácido ortofosfórico. Los desplazamientos químicos de los espectros de RMN de ^{14}N se informan respecto a 0 ppm de nitrometano. Las asignaciones de pico de los derivados de cobalamina se determinaron mediante interpretación de los espectros de ^{1}H COESY, la correlación C-H, los espectros DEPT y (en algunos casos) ROESY.
Se midieron los espectros de masas MALDI-ToF en un Voyager-DE PRO con ácido a-ciano-4-hidroxicinámico como matriz. Se llevaron a cabo mediciones de CV utilizando un voltímetro 757 VA Computrace de Metrohm a temperatura ambiente utilizando carbono vítreo (Metrohm) como electrodo de trabajo y electrodo auxiliar, y Ag/AgCl como electrodo de referencia. Los compuestos se midieron como solución 1 mM en hexafluorofosfato de tetrabutilamonio 0,1 M en metanol.
Se recogieron los datos cristalográficos en un difractómetro Stoe IPDS a 183(2) K utilizando radiación K\alpha del Mo monocromada con gráfito (\lambda=0,71073 \ring{A}). Se recubrieron los cristales adecuados con aceite Paratone N, se montaron sobre un filtro de fibra de vidrio y se transfirieron inmediatamente a un difractómetro Stoe IPDS. Los datos se recogieron a 183(2) K utilizando radiación K\alpha del Mo monocromada con gráfito (\lambda=0,71073 \ring{A}). El programa SELECT seleccionó ocho mil reflexiones distribuidas sobre la totalidad de la esfera limitante y se utilizaron para el ajuste fino de los parámetros de la celdilla unidad utilizando el programa CELL^{[1]}. Los datos se corrigieron para los efectos de Lorentz y de polarización, así como para la absorción (numérica). Las estructuras se resolvieron mediante métodos directos, utilizando SHELXS-97^{[2]} o SIR97^{[3]} y se refinaron mediante el método de matriz completa de cuadrados mínimos en F2 con SHELXL-97^{[4]}.
Se llevaron a cabo análisis elementales en un analizador elemental Leco CHNS-932.
Se prepararon [NEt_{3}]_{2}[ReBr_{3}(CO)_{3}]^{[5]} y fac-[^{99m}Tc(OH_{2})_{3}(CO)_{3}]^{+(6)} tal como se ha indicado anteriormente.
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Procedimientos generales de marcaje
Se enjuagó con dinitrógeno un vial de vidrio de 10 ml con tapón de goma. Se añadieron 50 ml de una solución acuosa 10^{-3} M que contenía un derivado de cobalamina o un ligando y 450 ml de una solución 0,1 M tamponada con fosfato de [^{99m}Tc(OH_{2})_{3}(CO)_{3}]^{+} (pH 7,4) y la mezcla de reacción se mantuvo a 75ºC durante 30-45 minutos.
Se prepararon los derivados de cobalamina puenteados con cianuro de la manera siguiente: se añadieron 50 ml de una solución acuosa 10^{-3} M de ligando bidentado y 450 ml de solución tamponada con fosfato de [^{99m}Tc(OH_{2})_{3}(CO)_{3}]^{+} (pH 7,4) a un vial enjuagado con dinitrógeno (tal como se ha indicado anteriormente) y la mezcla de reacción se mantuvo a 90ºC durante 30 minutos. Se añadieron 100 ml de dicha solución a otro vial, que contenía 100 ml de solución acuosa 10^{-2} M de vitamina B_{12}. Esta mezcla de reacción se mantuvo a 37ºC durante 60 minutos.
Se llevó a cabo el análisis de HPLC con detección de \gamma para verificar la conversión completa de la especie ^{99m}Tc.
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Síntesis de [Re (imc) (OH_{2}) (CO)_{3}] (1)
Se disolvió (NEt_{4})_{2}[ReBr_{3}(CO)_{3}] (488 mg, 0,63 mmoles) en agua (5 ml) y se añadió a una solución de ácido 4-imidazol-carboxílico (imc) (71 mg, 0,63 mmoles) en agua (3 ml). Tras 2 horas bajo reflujo, el producto precipitó en forma de unos polvos blancos a temperatura ambiente. La filtración, el lavado con éter dietílico y el secado bajo alto vacío proporcionaron 186 mg de 1 (73%).
RMN ^{1}H (300, DMSO-d_{6}) \delta 8,40 (s, 1H, imc), 7,68 (s, 1H, imc), 7,08 (br s, 1H, imc)
IR (KBr, cm^{-1}): 2039, 1936 v_{c=0} (st)
MS (ESI+, MeOH) m/z: 764 (2M - 2H_{2}O), 382 (M - H_{2}O)^{+}
Análisis calculado para C_{7}H_{5}N_{2}O_{6}Re: C, 21,05; H, 1,26; N, 7,02. Observado: C, 21,15; H, 1,41; N, 6,97.
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Síntesis de [Re(2,4-dipic) (OH_{2}) (CO)_{3}] (2)
Se disolvió (NEt_{4})_{2}[ReBr_{3}(CO)_{3}] (101 mg, 0,13 mmoles) en agua (10 ml). Tras la adición de AgNO_{3} (70 mg, 0,4 mmoles) y la agitación a temperatura ambiente durante 3 horas, se eliminó el AgBr mediante filtración y se añadió ácido piridín-2,4-dicarboxílico (2,4-dípico) (24 mg, 0,13 mmoles) a la solución incolora, seguido de agitación a 50ºC durante 2 horas. La solución, ahora de color amarillo, se enfrió y el producto se dejó que cristalizase a 4ºC durante 12 horas. Los cristales amarillos se recogieron mediante filtración, se lavaron con agua y se secaron bajo alto vacío, proporcionando el producto con un rendimiento de 38 mg (65%).
RMN ^{1}H (300, DMSO-d_{6}) \delta 8,96 (d, 1H, piridina), 8,34 (s, 1H, piridina), 8,15 (d, 1H, piridina), 7,50 (s, 1H, piridina)
IR (KBr, cm^{-1}): 20,36, 1920 v_{C=0} (st)
MS (ESI+, MeOH) m/z: 438 (M - H_{2}O)^{+}
Análisis calculado para C_{10}H_{6}NO_{8}Re: C, 26,45; H, 1,33; N, 3,07. Observado: C, 26,15; H, 1,67; N, 3,07.
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Síntesis de [^{99m}Tc (ser) (OH_{2}) (CO)_{3}] (3)
Se preparó el complejo 3 según el procedimiento de marcaje estándar descrito en el capítulo "Materiales y métodos". Se marcó la serina con una concentración de 10^{-3} M en la mezcla de reacción. El ^{99m}Tc se había convertido por completo tras 40 minutos a 90ºC.
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Síntesis de [Re (dmg) (OH_{2}) (CO)_{3}] (4)
Se disolvió (Et_{4}N)_{2}[ReBr_{3}(CO)_{3}] (100 mg, 0,13 mmoles) en una mezcla de metanol/agua (4:1, 10 ml). Se añadió N,N-dimetilglicina (70 mg, 0,7 mmoles) y la mezcla se agitó durante 12 horas a 50ºC. Se dejó que se equilibrase la solución a temperatura ambiente, se concentró y se purificó en una columna de filtración C18 corta. Se obtuvo un sólido cristalino blanco. Rendimiento: 20 mg (40%).
RMN ^{1}H (500, DMSO-d_{6}) \delta 4,18 (s, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,15 (s, 3H)
Análisis calculado para C_{21}H_{24}N_{3}O_{15}Re_{3} (trímero): C, 22,58; H, 2,17; N, 3,76. Observado: C, 23,19; H, 2,78; N, 3,84
IR (KBr, cm^{-1}): 2022, 1911, 1890, 1866
MS (ESI+, MeOH) m/z: 1117,0 ([M]^{+}) (trímero)
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Síntesis de compuesto (b1)
Se agitó una solución de vitamina B_{12} (100 mg, 73,8 mmoles) y 1 (50 mg, 0,125 mmoles) en 10 ml de metanol a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se controló con mediciones de HPLC (sistema de solventes 1, gradiente 2). Al no detectarse más vitamina B_{12}, se evaporó el solvente, se redisolvió el producto crudo y se filtró a través de un filtro de 0,2 \mum para eliminar el exceso de 1. El filtrado se sometió a purificación mediante HPLC preparativa (sistema de solventes 1, gradiente 2, caudal de 30 ml/minuto). Los dos isómeros se separaron. Los isómeros se obtuvieron en forma de polvos rojos en cantidades similares \sim(1:1). Rendimiento total: 96%. Para la caracterización completa ver los datos cristalográficos. Se obtuvieron los cristales de b1(b) mediante difusión de vapor de la acetona en una solución acuosa de b1(b).
RMN ^{31}P (81, CD_{3}OD) \delta 0,68
IR (KBr, cm^{-1}): 3400, 2926, 2179, 2023, 1900, 1667, 1627, 1572, 1401, 1366, 1213, 1056
MS (ESI+, MeOH) m/z: 1737 (M+1)^{+}, 869 (M+2)^{2+}
CV: E_{1/2} = -652 mV vs. Ag^{+}/AgCl, reversible aproximadamente al 90%.
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Síntesis de compuesto (b2)
Se agitó una solución de vitamina B_{12} (50 mg, 36,9 mmoles) y 2 (19,8 mg, 0,074 mmoles) en 3 ml de metanol a temperatura ambiente durante 48 horas. La reacción se controló con mediciones de HPLC (sistema de solventes 1, gradiente 2). Al no detectarse más vitamina B_{12}, se evaporó el solvente y el producto crudo se sometió a purificación mediante HPLC preparativa (sistema de solventes 1, gradiente 2, caudal de 30 ml/minuto). Se obtuvieron los isómeros separadamente en forma de polvos rojos en cantidades similares \sim(1:1). Rendimiento total: 76%.
20
21
Síntesis de compuesto (b3) con M=^{99m}Tc
Se mezclaron 500 ml de una solución 10^{-4} M en PBS de 3, pH 7,4, con 500 ml de una solución acuosa 0,01 M de vitamina B_{12} y se agitó a 40ºC durante 1,5 horas. Tras la reacción se llevó a cabo una HPLC (sistema de solventes 1, gradiente 2). La reacción alcanzó un equilibrio tras una transformación del 60%.
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Síntesis de compuesto (b4)
Se disolvió vitamina B_{12} (50 mg, 0,04 mmoles) en metanol (10 ml). Se añadió [Re(dmg) (CO)_{3}]_{3} 4 (45 mg, 0,04 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Se formaron dos compuestos (claramente diferenciables mediante HPLC) (rendimiento: 25% y 36%). Dichos compuestos se aislaron y se purificaron mediante HPLC preparativa (sistema de solventes 3, gradiente 7). Rendimiento: 10 mg, 14% (compuesto 1), 12 mg, 17% (compuesto 2). Se obtuvieron cristales de b4(b) adecuados para el análisis de rayos X mediante difusión de vapor de acetona en una solución en H_{2}O del complejo. Para la caracterización completa ver los datos cristalográficos.
Análisis calculado para C_{70}H_{96}CoN_{15}O_{19}PRe: C, 48,66; H, 5,60; N, 12,16. Observado: C, 48,42; H, 5,01; N, 12,04 (b4(b))
IR (KBr, cm^{-1}): 2033, 1928, 1904
MS (ESI+, MeOH) m/z: 1728,7 (M+1)^{+}
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Síntesis de compuesto (b5)
Se agitó una mezcla de cis-diamindicloroplatino (II) (5) (66,4 mg, 0,221 mmoles) y nitrato de plata (37,6 mg, 0,221 mmoles) en agua (6 ml) a 35ºC durante 2 horas. Se separó el precipitado mediante centrifugación y se lavó con agua (4 ml). Las soluciones se añadieron a cianocobalamina (300 mg, 0,221 mmoles) y la solución resultante se agitó a 50ºC durante 16 horas. El análisis de HPLC demostró la conversión completa de la cobalamina. Se eliminó el solvente in vacuo, y el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (sistema de solventes 3, gradiente 4). La liofilización de la fracción de producto proporcionó b5 en forma de polvos rojos. Rendimiento: 259,8 mg, 72,6%.
Se obtuvieron cristales de b5 mediante difusión de vapor de acetona en una solución acuosa saturada de b5.
UV/Vis: \lambda/nm (log \varepsilon/mol l^{-1}cm^{-1}) = 279,9 (4,1), 361,9 (4,4), 519,9 (3,8), 550,9 (3,8).
IR (KBr, cm^{-1}): v_{CN}(st) 2199
RMN ^{195}Pt (107, CD_{3}OD) \delta -2340
MS MALDI-ToF m/z: 1607 [M - Cl + Na]^{+}, 1591 [M-Cl-NH_{3}+Na]^{+}, 1571 [M - Cl - 2NH_{3} + Na]^{+}
CV: E_{1/2} = -515 mV vs. Ag^{+}/AgCl, reversible aproximadamente al 50%
Síntesis de compuesto (b6)
Se agitó a 50ºC una solución de b5 (37,4 mg, 23,1 \mumoles) y 9-metilguanina (6) (4,2 mg, 25 \mumoles) en agua (2 ml). Tras 4 días, el análisis de HPLC demostró una conversión prácticamente completa de los materiales de partida. El solvente se eliminó in vacuo y el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (sistema de solventes 3, gradiente 5). La liofilización de la fracción de producto proporcionó b6 en forma de unos polvos rojos. Rendimiento: 32,0 mg, 79%. Se obtuvieron cristales de b6 mediante difusión de vapor de acetona en una solución acuosa saturada de b6.
RMN ^{31}P (202, CD_{3}OD): \delta 0,73
MS MALDI-ToF: 1736 [M - CH_{3}]^{+}, 1.715 [M - NH_{3} - CH_{3}]^{+}
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Síntesis de compuesto (b7)
Se agitó a 30ºC una solución de b5 (58,5 mg, 36,1 \mumoles) y 2'-desoxiguanosina (7) (11,6 mg, 43,3 \mumoles) en agua (5 ml). Tras 4 días, el análisis de HPLC demostró una conversión prácticamente completa de los materiales de partida. Se eliminó el solvente in vacuo, y el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (sistema de solventes 3, gradiente 6). La liofilización de la fracción de producto proporcionó b7 en forma de unos polvos rojos. Rendimiento: 45,3 mg, 67,7%.
UV/Vis: \lambda/nm (log \varepsilon/mol l^{-1}cm^{-1}) = 278,0 (4,2), 361,9 (4,2), 521,0 (3,7), 546,0 (3,7).
RMN ^{31}P (202, CD_{3}OD): \delta 0,71 (94%), 0,21 (6%)
RMN ^{195}Pt (107, CD_{3}OD): \delta -2475 (línea con aproximadamente 1,5 kHz) MS MALDI-ToF: 1723 [M - ribosa - 2NH_{3} + Na]^{+}
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Preparación de ^{99m}Tc (vitB_{12}) (X)_{2} (CO)_{3} [X = Cl, H_{2}O]
Se preparó ^{99m}Tc(H_{2}O)_{3}(CO)^{3+} mediante la adición de 1 ml (50 mCi, aunque la concentración de radioactividad no es necesario que sea de 50 mCi/ml, funciona con niveles más bajos y más altos) de ^{99}Tc-pertecnetato a un vial IsoLink^{TM} y sometiendo a ebullición de la solución resultante durante 20 minutos. Se dejó que la mezcla de reacción tricarbonilo se enfriase y se acidificó a pH 3 con HCl 1N.
A continuación, se preparó una solución acuosa 10 mM de vitamina B_{12} mediante la disolución de 68,0 mg de la vitamina en 5 ml de agua para inyección libre de oxígeno. Se dejó que una mezcla de 0,1 ml de solución de ^{99m}Tc-tricarbonilo y 0,9 ml de la solución 10 mM de vitamina B_{12} reaccionase a 100ºC durante 30 minutos bajo una atmósfera de nitrógeno.
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Preparación de ^{186}Re (vitB_{12}) (X)_{2} (CO)_{3} [X = Cl, H_{2}O]
Se añadió una solución previamente acidificada (pH 2,5) de perrenato-^{186}Re a un vial, se selló bajo una atmósfera de nitrógeno, que contenía una mezcla de NH_{3}BH_{3} y ácido ascórbico. La reacción se completó tras 10 minutos a temperatura ambiente. Esto se denominó etapa pre-reducción.
Se preparó una solución acuosa 10 mM de vitamina B_{12} mediante la disolución de 68,0 mg de la vitamina B_{12} en 5 ml de agua para inyección libre de oxígeno. A partir de la solución de renio reducido, se añadió 1 ml a un vial IsoLink^{TM} y se dejó que reaccionase durante 15 minutos a 100ºC. La solución resultante, que contenía ^{186}Re (H_{2}O)_{3}(CO)^{3+}, se enfrió.
Una mezcla de 0,1 ml de la solución de tricarbonilo de renio y 0,9 ml de la solución 10 mM de vitamina B_{12}, se mantuvo a 100ºC durante 45 minutos.
La figura 3 es un ejemplo de un cromatograma de HPLC de ^{99m}Tc(vitB_{12}) (H_{2}O)_{2}(CO)_{3}.
\newpage
Datos cristalográficos Tabla de difracción de rayos X del compuesto b1(b)
22 
\newpage
Tabla de difracción de rayos X del compuesto b4(b)
23
Datos de difracción de rayos X y refinamiento estructural de los compuestos b5
25 
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Referencias
[1] 2.87 ed., STOE & Cie, GmbH, Darmstadt, Germany, 1998.
[2] G. M. Sheldrick, Acta Cryst. 1990, A46, 467.
[3] A. Altomare, M. C. Burla, M. Camalli, G. L. Cascarano, C. Giacovazzo. A. Guagliardi. A. G. G. Molitemi. G. Polidori, R. Spagna, J. Appi. Cryst. 1999, 32, 115.
[4] G. M. Sheldrick, University Góttingen, 1997.
[5] R. Alberto, A. Egli, U. Abram, K. Hegetschweiler, P. A. Schubiger, J. Chem. Soc. Dalton Trans. 1994, 2815.
[6] R. Alberto, K. Ortner, N. Wheatley, R. Schibli, A. P. Schubiger, J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 3135.

Claims (14)

1. Complejo metálico de fórmula general M(L)_{n}, en el que cada L se selecciona independientemente y representa un ligando, y por lo menos un L es vitamina B_{12} (cianocobalamina) o un derivado de la misma que se encuentra unido mediante el átomo de nitrógeno del grupo cianuro de la misma a M, el cual es un elemento seleccionado de entre los metales de transición tecnecio, rodio, renio, paladio y platino, formando de esta manera un grupo M-NC-[Co], en el que [Co] representa la vitamina B_{12} sin cianuro y en el que n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6.
2. Complejo metálico según la reivindicación 1, en el que el metal es un isótopo radioactivo de los elementos Re o Tc, tal como ^{99m}Tc, ^{188}Re y ^{186}Re.
3. Complejo metálico según la reivindicación 1 ó 2, en el que M es tecnecio o renio, comprendiendo los demás ligandos tres grupos carbonilo (COs) y opcionalmente un ligando bidentado, opcionalmente acoplados a otro complejo metálico o a otra molécula, tal como una molécula biológicamente activa o un agente fluorescente.
4. Complejo metálico según la reivindicación 3, en el que el ligando bidentado se selecciona de entre dos partes amina alifáticas y/o aromáticas o una parte amina alifática o aromática y un grupo aniónico tal como un carboxilato, un tiolato o un hidroxilato.
5. Complejo metálico según la reivindicación 4, en el que el ligando bidentado se selecciona de entre \alpha-aminoácidos o derivados del ácido picolínico.
6. Complejo metálico según la reivindicación 1, en el que, en el caso de que M sea platino, L se selecciona independientemente de entre los ligandos que contienen N, S, P, O o C como átomo ligante de metal o cualquier otro donante con una pareja de electrones libres para la coordinación con el metal, opcionalmente acoplados a otro complejo metálico o a otra molécula, tal como una molécula biológicamente activa o una molécula fluorescente.
7. Complejo metálico según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en el que la otra molécula se selecciona de entre agentes fluorescentes, farmacóforos con actividades citotóxicas, citostáticas u otras actividades farmacológicas, pigmentos ópticos, pigmentos NIR o pigmentos fosforescentes.
8. Complejo metálico según la reivindicación 7, en el que el agente fluorescente se selecciona de entre fluoresceína, pireno, acridina y dansilo.
9. Complejo metálico según la reivindicación 7, en el que el agente citotóxico es tamoxifeno, metotrexato o ciclofosfamida.
10. Complejo metálico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que presenta una fórmula estructural seleccionada de entre las siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
3
30
4
11. Procedimiento para la preparación de un complejo metálico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que comprende mezclar la vitamina B_{12} con un complejo precursor de fórmula general M(L)_{n-1}L', en la que M es un metal de transición seleccionado de entre tecnecio, rodio, renio, paladio y platino, n es 2, 3, 4, 5 ó 6, L' es un ligando que debe sustituirse por vitamina B_{12} o por un derivado de la misma, y cada L se selecciona independientemente y es un ligando, con el fin de obtener un complejo metálico con un puente [Co]-CN-M estable.
12. Complejo precursor que presenta una fórmula seleccionada de entre las siguientes:
5
50
en las que M es un metal de transición seleccionado de entre tecnecio, rodio, renio, paladio y platino.
13. Complejo metálico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la utilización en radiodiagnóstico, quimioterapia o terapia de radionucleidos.
14. Complejo metálico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que M es un metal catalíticamente activo para utilizar en catálisis.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101019555B (zh) * 2007-03-23 2011-03-30 南京师范大学 稀土-氨基酸-维生素三元配合物植物生长调节剂及其制备方法
CN102791724A (zh) * 2010-03-08 2012-11-21 苏黎世大学 用于医疗用途的一氧化碳释放铼化合物
WO2012061477A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Promega Corporation Coelenterazine derivatives and methods of using same
US8669103B2 (en) 2010-11-02 2014-03-11 Promega Corporation Oplophorus-derived luciferases, novel coelenterazine substrates, and methods of use
US9385033B2 (en) * 2013-09-27 2016-07-05 Intel Corporation Method of forming a metal from a cobalt metal precursor
JP6588917B2 (ja) 2014-01-29 2019-10-09 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生細胞への適用のためのプロ基質
US9790537B2 (en) 2014-01-29 2017-10-17 Promega Corporation Quinone-masked probes as labeling reagents for cell uptake measurements

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4560782A (en) * 1982-11-19 1985-12-24 Research Corporation Anti-tumor diplatinum coordination compounds
US4673631A (en) * 1984-12-15 1987-06-16 Canon Kabushiki Kaisha Toner, charge-imparting material and composition containing metal complex
JPH03504450A (ja) * 1988-05-09 1991-10-03 ザ・パブリツク・ヘルス・ラボラタリイ・サーヴイス・ボード 脱ハロゲン化における金属キレート錯体の使用
US5393909A (en) * 1988-11-22 1995-02-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Diamine platinum complexes as antitumor agents
GB8910760D0 (en) * 1989-05-10 1989-06-28 Health Lab Service Board Corrin mediated degradation of organic nitrogen compounds
DE19712388A1 (de) * 1997-03-25 1998-10-01 Studiengesellschaft Kohle Mbh Verfahren zur Synthese von aromatisch substituierten Olefinen
US6844425B1 (en) * 1999-02-24 2005-01-18 Mallinckrodt Inc. Combination of intercalating organometallic complexes and tumor seeking biomolecules for DNA cleavage and radiotherapy
US6797521B2 (en) * 1999-10-26 2004-09-28 University Of Utah Research Foundation Fluorescent cobalamins and uses thereof
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
US6180085B1 (en) * 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Dyes
ES2476899T3 (es) * 2001-01-30 2014-07-15 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Medicamentos contra el cáncer de pulmón
DE60326465D1 (de) * 2002-09-03 2009-04-16 Univ Zuerich Herstellung von m(co)3-komplexen durch festphasentechniken durch metal-unterstützte trennung vom festen träger

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Publication number Publication date
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