ES2334803T3 - Derivados de nucleosidos y uso terapeutico de los mismos. - Google Patents
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Abstract
El uso, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, de un compuesto que es un nucleósido de la siguiente fórmula I'': **(Ver fórmula)** en la que: Y es H o OH; y X es H, F, Cl, Br, I o CH3; o la siguiente fórmula II'': **(Ver fórmula)** en la que: Y es H o OH; y X es H, F, Cl, Br o I; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
Description
Derivados de nucleósidos y uso terapéutico de
los mismos.
Esta solicitud se refiere a compuestos
nucleósidos, y métodos sintéticos relacionados, y sus composiciones
para uso en métodos terapéuticos para el tratamiento de trastornos
hiperproliferativos, que incluyen cánceres, administrando
compuestos nucleósidos.
Se necesitan nuevos compuestos nucleósidos como
moléculas terapéuticas para el tratamiento de trastornos tales como
cánceres. Se necesitan métodos para usar tanto los conocidos como
los nuevos compuestos nucleósidos para el tratamiento de trastornos
particulares.
La Fig. 1 es un gráfico que muestra la
inhibición del crecimiento del tumor por RX-3117 en
ratones sin pelo inyectados subcutáneamente con células de
carcinoma de colon humano HCT116.
Se sintetizaron y analizaron una serie de
compuestos nucleósidos para ver sus actividades terapéuticas,
incluyendo las actividades anti-cáncer. Se
demuestra que los compuestos nucleósidos de la invención son útiles
para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos, que incluyen
tumores, tales como tumores de pecho, tumores de colon, tumores de
pulmón y tumores de estómago.
El término "nucleósido" y las expresiones
"compuesto nucleósido", y "derivado de nucleósido" se usan
intercambiablemente en esta solicitud para significar compuestos de
fórmula I o II, como se define a continuación. Todos los términos
científicos y técnicos usados en esta solicitud tienen significados
comúnmente usados en la técnica a menos que se especifique de otro
modo. Tal como se usan en esta solicitud, las siguientes palabras o
frases tienen los significados especificados.
Tal como se usa aquí, "vehículo
farmacéuticamente aceptable" quiere decir cualquier material que,
cuando se combina con un compuesto de la invención, permite que el
compuesto retenga la actividad biológica, tal como la capacidad
para potenciar la actividad antibacteriana de mastocitos y
macrófagos. Los ejemplos incluyen, pero no están limitados a,
cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándar tales como una
disolución salina tamponada con fosfato, agua, emulsiones tales
como emulsiones aceite/agua, y varios tipos de agentes humectantes.
Las composiciones que comprenden tales vehículos se formulan por
métodos convencionales bien conocidos (véase, por ejemplo,
Remington's Pharmaceutical Sciences, Chapter 43, 14^{th} Ed., Mack
Publishing Co., Easton, Pa.).
El término "conjugado" quiere decir un
compuesto formado como un composite entre dos o más moléculas. Más
específicamente, en la presente invención, el derivado nucleósido
puede estar unido, por ejemplo, covalentemente unido, a restos
dirigidos específicos de la célula que forman un compuesto conjugado
para el suministro eficiente y específico del agente a una célula
de interés.
La frase "resto dirigido" quiere decir una
molécula que sirve para suministrar el compuesto de la invención a
un sitio específico para la actividad deseada. Los restos dirigidos
incluyen, por ejemplo, moléculas que unen específicamente moléculas
sobre una superficie celular específica. Tales restos dirigidos
útiles en la invención incluyen anticuerpos de antígeno
anti-superficie celular. Las citoquinas, que
incluyen interleuquinas y factores tales como el factor que
estimula el granulocito/macrófago (GMCSF) son también restos
dirigidos específicos, que se sabe que se unen a células
específicas que expresan altos niveles de sus receptores.
La expresión "resto profármaco" es un grupo
de substitución que facilita el uso de un compuesto de la invención,
por ejemplo, facilitando la entrada del fármaco dentro de las
células o la administración del compuesto. El resto profármaco se
puede escindir del compuesto, por ejemplo, por medio de enzimas de
escisión in vivo. Los ejemplos de restos profármaco incluyen
grupos fosfato, uniones péptido, y azúcares, restos que se pueden
hidrolizar in vivo.
"Tratar" quiere decir inhibir, reducir,
modular, mejorar, o bloquear por lo menos un síntoma que caracteriza
un estado patológico, en un sujeto amenazado, o afectado por el
estado.
Un "trastorno hiperproliferativo" es un
trastorno caracterizado por la proliferación anormal de células, y
genéricamente incluye trastornos de la piel tales como psoriasis así
como tumores benignos y malignos de todos los sistemas orgánicos.
Esta última clase de trastornos hiperproliferativos incluye, por
ejemplo, carcinomas de pecho (incluyendo carcinomas lobulares y de
conductos) y otros tumores sólidos, carcinomas, sarcomas, y
cánceres que incluyen carcinomas del pulmón como carcinoma de
células pequeñas, carcinoma de células grandes, carcinoma escamoso,
y adenocarcinoma, mesotelioma del pulmón, adenocarcinoma colorectal,
carcinoma de estómago, adenocarcinoma prostático, carcinoma de
ovario tal como cistadenocarcinoma seroso y cistadenocarcinoma
mucinoso, tumores de células germinales del ovario, carcinomas
testiculares, y tumores de células germinales, adenocarcinoma
pancreático, adenocarcinoma biliar, carcinoma hepatocelular,
carcinoma de vejiga que incluye carcinoma de células
transicionales, adenocarcinoma, y carcinoma escamoso, adenocarcinoma
de células renales, carcinomas endometriales que incluyen
adenocarcinomas y tumores Mullerianos mixtos (carcinosarcomas),
carcionomas del endocervix, ectocervix, y vagina tales como
adenocarcinoma y carcinoma escamoso, tumores de la piel como
carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales,
melanoma, y tumores de apéndices cutáneos, carcinoma esofágico,
carcinomas de la nasofaringe y orofaringe que incluyen carcinoma
escamoso y adenocarcinomas, carcinomas de las glándulas salivares,
tumores del cerebro y del sistema nervioso central que incluyen
tumores de origen glial, neuronal, y meníngeo, tumores del nervio
periférico, sarcomas del tejido blando y sarcomas de hueso y
cartílago.
La presente invención comprende compuestos
nucleósidos y sus compuestos para uso en el tratamiento de un
trastorno, enfermedad o estado hiperproliferativo en un sujeto (por
ejemplo, un paciente humano u otro sujeto animal). Los compuestos
para su uso según la invención comprenden administrar a un sujeto
una cantidad efectiva de un compuesto nucleósido según la
invención. Tal tratamiento, por ejemplo, puede prevenir, mejorar,
y/o inhibir los síntomas del estado hiperproliferativo, y/o puede
prevenir o inhibir la proliferación o crecimiento celular, por
ejemplo, en un tumor, tal como un neoplasma maligno. Una estrategia
de tratamiento descrita aquí disminuiría la carga tumoral, por lo
menos hasta un grado medible, y mejoraría la supervivencia de
pacientes que sufren un estado hiperproliferativo. Entre las
enfermedades, trastornos y estados susceptibles de tratamiento por
agentes de la invención están los neoplasmas, y más específicamente
tumores de varios orígenes (pulmón, colon, estómago, músculo liso,
esófago, linfoma no Hodgkin, y cáncer de pulmón de células no
pequeñas, etc.).
Los compuestos útiles en los métodos de la
invención incluyen nucleósidos que tienen la fórmula I:
en la que Y=H o OH y X=H, F, Cl,
Br, I, o
CH_{3}.
También están incluidos los compuestos que
tienen la fórmula II:
en la que Y=H o OH y X=H, F, Cl,
Br, o I. Aunque se ilustra en las conformaciones estereoquímicas
basadas en azúcares naturales, la invención incluye los
estereoisómeros relacionados, y mezclas. Los estereoisómeros
relacionados incluyen enantiómeros, diastereoisómeros y sus mezclas,
y mezclas racémicas y mezclas de dos o más diastereoisómeros. La
invención incluye también sales farmacéuticamente aceptables de
estos
compuestos.
Los compuestos de la invención pueden ser muy
activos contra una amplia gama de enfermedades hiperproliferativas,
incluyendo tumores. Por ejemplo, los compuestos según la invención
pueden ser activos contra tumores del ovario, tumores del pecho,
tumores cervicales, tumores de la próstata, tumores del hígado,
tumores de pulmón, tumores de riñón, tumores de colon, tumores
pancreáticos, tumores de cerebro, tumores de estómago y melanoma.
Por muy activo se entiende que un compuesto puede tener un
IC_{50} de 5,0 \muM o menos, 2,0 \muM o menos, 1,0 \muM o
menos, o 0,5 \muM o menos, con respecto a por lo menos una línea
celular para un tumor particular. Las líneas celulares ejemplares
para determinar la actividad incluyen OVCAR-3 humana
para tumores de ovario, MCF-7 o
MDA-MB-231 para tumores de pecho,
HeLa para tumores cervicales, PC3 o LNCap para tumores de próstata,
HepG2 para tumores del hígado, A549 o NCI-H226 para
tumores de pulmón, UMRC2 para tumores de riñón,
HT-29 o HCT116 para tumores de colon,
PANC-1 para tumores pancreáticos, U251 para tumores
cerebrales, MKN-45 para tumores de estómago y
SK-MEL-28 para melanoma.
Los compuestos de la invención son útiles como
composiciones farmacéuticas preparadas con una cantidad
terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención, como se
define aquí, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente
aceptable.
Los compuestos nucleósidos de la invención se
pueden formular como composiciones farmacéuticas y administrar a un
sujeto que necesite tratamiento, por ejemplo, un mamífero, tal como
un paciente humano, en varias formas adaptadas a la ruta de
administración escogida, por ejemplo, oral o parenteralmente, por
ruta intravenosa, intramuscular, tópica o subcutánea.
De este modo, los compuestos nucleósidos de la
invención se pueden administrar sistémicamente, por ejemplo,
oralmente, en combinación con un vehículo farmacéuticamente
aceptable tal como un diluyente inerte o un vehículo comestible
asimilable, o por inhalación o insuflación. Pueden estar encerrados
en cápsulas de gelatina de envoltura dura o blanda, pueden estar en
comprimidos, o se pueden incorporar directamente en los alimentos
de la dieta de un paciente. Para la administración terapéutica oral,
los compuestos nucleósidos se pueden combinar con uno o más
excipientes y usar en la forma de comprimidos ingeribles,
comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones,
jarabes, obleas, y similares. Los compuestos nucleósidos se pueden
combinar con un vehículo inerte en polvo fino e inhalar por el
sujeto o ser insuflados. Tales composiciones y preparaciones deben
contener por lo menos 0,1% de compuestos nucleósidos. El porcentaje
de las composiciones y preparaciones, por supuesto, se puede variar
y puede estar convenientemente entre alrededor de 2% y alrededor de
60% del peso de una forma de dosificación unitaria dada. La
cantidad de compuestos nucleósidos en tales composiciones
terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá un nivel de
dosificación efectiva.
Los comprimidos, trociscos, píldoras, cápsulas,
y similares pueden contener también los siguientes: aglomerantes
tales como goma de tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina;
excipientes tales como fosfato de dicalcio; un agente desintegrante
tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico y
similares; se puede añadir un lubricante tal como estearato de
magnesio; y un agente endulzante tal como sacarosa, fructosa,
lactosa o aspartamo o un agente saborizante tal como menta
piperita, aceite de gaulteria, o saborizante de cereza. Cuando la
forma de dosificación unitaria es una cápsula, puede contener,
además de materiales del tipo anterior, un vehículo líquido, tal
como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Varios otros
materiales pueden estar presentes como revestimientos o para
modificar de otro modo la forma física de la forma de dosificación
unitaria sólida. Por ejemplo, los comprimidos, píldoras o cápsulas
se pueden revestir con gelatina, cera, shellac o azúcar y
similares. Un jarabe o elixir pueden contener el compuesto activo,
sacarosa o fructosa como agente endulzante, metil- y
propil-parabenes como conservantes, un colorante y
saborizante tal como sabor a cereza o naranja. Por supuesto,
cualquier material usado para preparar cualquier forma de
dosificación unitaria debe ser farmacéuticamente aceptable y
sustancialmente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, los
compuestos nucleósidos se pueden incorporar en preparaciones y
dispositivos de desprendimiento sostenido.
Los compuestos nucleósidos se pueden administrar
también intravenosa o intraperitonealmente por infusión o
inyección. Las disoluciones de los compuestos nucleósidos se pueden
preparar en agua, opcionalmente mezclada con un tensioactivo no
tóxico. También se pueden preparar dispersiones en glicerol,
polietilenglicoles líquidos, triacetina, y sus mezclas y en
aceites. En condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas
preparaciones pueden contener un conservante para prevenir el
crecimiento de microorganismos.
Las formas de dosificación farmacéutica
apropiada para inyección o infusión pueden incluir disoluciones o
dispersiones acuosas estériles o polvos estériles que comprenden los
compuestos nucleósidos que están adaptados para la preparación
extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables o
infundibles, opcionalmente encapsuladas en liposomas. En todos los
casos, la forma de dosificación final debe ser estéril, fluida y
estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento. El
vehículo líquido puede ser un disolvente o un medio de dispersión
que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un polialcohol (por
ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos y
similares), aceites vegetales, ésteres de glicerilo no tóxicos, y
sus mezclas apropiadas. La fluidez apropiada se puede mantener, por
ejemplo, por la formación de liposomas, por el mantenimiento del
tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones o por el
uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos
se puede producir por varios agentes antibacterianos y antifúngicos,
por ejemplo, parabenes, clorobutanol, fenol, ácido sórbico,
trimerosal, y similares. En muchos casos, será preferible incluir
agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, tampones o cloruro de
sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se
puede producir por el uso en las composiciones de agentes que
retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y
gelatina.
\newpage
Se preparan disoluciones estériles inyectables
incorporando los compuestos nucleósidos en la cantidad requerida en
el disolvente apropiado con varios de los otros ingredientes
enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de
esterilización en filtro. En el caso de polvos estériles para la
preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos
preferidos de preparación son secado a vacío y técnicas de
liofilización, que dan un polvo del ingrediente activo más
cualquier ingrediente deseado adicional presente en las disoluciones
previamente esterilizadas en filtro.
Para la administración tópica, los compuestos
nucleósidos se pueden aplicar en forma pura. Sin embargo, será
deseable generalmente administrarlas a la piel como composiciones o
formulaciones, en combinación con un vehículo dermatológicamente
aceptable, que puede ser un sólido o un líquido.
Los vehículos sólidos útiles incluyen sólidos
finamente divididos tales como talco, arcilla, celulosa
microcristalina, sílice, alúmina y similares. Otros vehículos
sólidos incluyen nanopartículas o micropartículas poliméricas no
tóxicas. Los vehículos líquidos útiles incluyen agua, alcoholes o
glicoles o mezclas de agua/alcohol/glicol, en las que los
compuestos nucleósidos se pueden disolver o dispersar en
concentraciones efectivas, opcionalmente con la ayuda de
tensioactivos no tóxicos. Se pueden añadir adyuvantes tales como
fragancias y agentes antimicrobianos adicionales para optimizar las
propiedades para un uso dado. Las composiciones líquidas resultantes
se pueden aplicar en almohadillas absorbentes, usar para impregnar
vendajes y otras vendas, o pulverizar sobre el área afectada usando
pulverizadores de aerosol o del tipo de bomba.
También se pueden emplear espesantes tales como
polímeros sintéticos, ácidos grasos, sales y ésteres de ácido
graso, alcoholes grasos, celulosas modificadas o materiales
minerales modificados con vehículos líquidos para formar pastas
extendibles, geles, pomadas, jabones y similares, para la aplicación
directamente a la piel del usuario.
Los ejemplos de composiciones dermatológicas
útiles que se pueden usar para suministrar los compuestos
nucleósidos a la piel son conocidos en la técnica; por ejemplo,
véase Jacquet et al. (Patente de EE.UU. No. 4.608.392),
Geria (Patente de EE.UU. No. 4.992.478), Smith et al.
(Patente de EE.UU. No. 4.559.157), y Wortzman (Patente de EE.UU.
No. 4.820.508).
Las dosis útiles de los compuestos de fórmula I
o II se pueden determinar comparando su actividad in vitro,
y la actividad in vivo en modelos animales. Los métodos para
la extrapolación de dosis efectivas en ratones, y otros animales, a
seres humanos son conocidos en la técnica; por ejemplo, véase, la
patente de EE.UU. No. 4.938.949.
Generalmente, la concentración de los compuestos
nucleósidos en una composición líquida, tal como una loción, será
de alrededor de 0,1-25% en peso, o de alrededor de
0,5-10% en peso. La concentración en una composición
sólida o semisólida tal como un gel o un polvo puede ser de
alrededor de 0,1-5% en peso, o de alrededor de
0,5-2,5% en peso.
La cantidad de los compuestos nucleósidos
requerida para su uso en el tratamiento variará dependiendo de la
sal particular seleccionada y de la ruta de administración, la
naturaleza del estado que se está tratando y la edad y estado del
paciente, y será finalmente a discreción del médico o especialista
clínico que lo atiende.
Las dosis efectivas y rutas de administración de
los agentes de la invención son convencionales. La cantidad exacta
(dosis efectiva) del compuesto nucleósido variará de sujeto a
sujeto, dependiendo de, por ejemplo, la especie, edad, peso y
estado general o clínico del sujeto, la severidad o mecanismo de
cualquier trastorno que se está tratando, el agente particular o
vehículo usado, el método y programa de administración, y similares.
Una dosis terapéuticamente efectiva se puede determinar
empíricamente, por procedimientos convencionales conocidos por los
expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, The Pharmacological
Basis of Therapeutics, Goodman and Gilman, eds., Macmillan
Publishing Co., New York. Por ejemplo, una dosis efectiva se puede
estimar inicialmente, en ensayos de cultivo celular o en modelos
animales apropiados. El modelo animal se puede usar también para
determinar los intervalos de concentración apropiados y las rutas de
administración. Tal información se puede usar a continuación para
determinar las dosis útiles y las rutas de administración en seres
humanos. Se puede seleccionar también una dosis terapéutica por
analogía con dosis para agentes terapéuticos comparables.
El modo particular de administración y el
régimen de dosificación se seleccionarán por el especialista clínico
que lo atiende, teniendo en cuenta las particularidades del caso
(por ejemplo, el sujeto, la enfermedad, el estado de la enfermedad
implicada, y si el tratamiento es profiláctico). El tratamiento
puede incluir dosis diarias o multi-diarias del (de
los) compuesto(s) durante un periodo de unos pocos días a
meses, o incluso años.
En general, sin embargo, una dosis apropiada
estará en el intervalo de alrededor de 0,5 a alrededor de 100
mg/kg, por ejemplo, de alrededor de 10 a alrededor de 75 mg/kg de
peso corporal por día, tal como de 3 a alrededor de 50 mg por
kilogramo de peso corporal del receptor por día, de 6 a 90
mg/kg/día, o en el intervalo de 15 a 60 mg/kg/día. Por ejemplo, las
dosis apropiadas pueden ser 0,5, 5, 10, 25, 50, 100, 250 o 500 mg/kg
de peso corporal por día.
Los compuestos nucleósidos se administran
convenientemente en forma de dosificación unitaria; por ejemplo,
que contiene de 5 a 1000 mg, de 10 a 750 mg, o de 50 a 500 mg de
ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.
Los compuestos nucleósidos se pueden administrar
para conseguir concentraciones en plasma máximas de alrededor de
0,5 a alrededor de 75 \muM, de alrededor de 1 a 50 \muM, o, de
alrededor de 2 a alrededor de 30 \muM. Las concentraciones en
plasma deseables ejemplares incluyen por lo menos o no más de 0,25,
0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 o 200 \muM. Esto se puede
conseguir, por ejemplo, por inyección intravenosa de una disolución
de 0,05 a 5% de los compuestos nucleósidos, opcionalmente en
disolución salina, o administrados oralmente en forma de bolo que
contiene alrededor de 1-100 mg de los compuestos
nucleósidos. Los niveles en sangre deseables se pueden mantener por
infusión continua para proporcionar alrededor de
0,01-5,0 mg/kg/h, por ejemplo, por lo menos o no
más de 0,005, 0,01, 0,1, 2,5, 5,0 o 10,0 mg/kg/h. Alternativamente,
tales niveles se pueden obtener por infusiones intermitentes que
contienen alrededor de 0,4-15 mg/kg, por ejemplo,
por lo menos o no más de 0,25, 0,5, 1,0, 5,0, 10,0, 15,0 o 25,0
mg/kg de los compuestos nucleósidos.
Los compuestos nucleósidos pueden estar
presentes convenientemente en una sola dosis o en dosis divididas
administradas a intervalos apropiados, por ejemplo, en forma de dos,
tres, cuatro o más sub-dosis por día. La subdosis
misma se puede dividir adicionalmente, por ejemplo, en varias
administraciones discretas aproximadamente espaciadas; tal como
inhalaciones múltiples de un insuflador o por aplicación de una
pluralidad de gotas en el ojo.
En una realización ejemplar, el compuesto
nucleósido se dirige hacia las células en las que se desea el
tratamiento, por ejemplo, hacia células cancerosas humanas. El
compuesto se dirige hacia la célula deseada por conjugación con un
resto dirigido que se une específicamente a la célula deseada,
dirigiendo por ello la administración de una molécula conjugada.
Los restos dirigidos útiles son ligandos que se unen específicamente
a antígenos celulares o ligandos de la superficie celular, por
ejemplo, anticuerpos contra el antígeno celular B, CD19 (tal como
B43) y similares.
Para formar los conjugados de la invención, los
restos dirigidos se unen covalentemente a sitios sobre el compuesto
nucleósido. El resto dirigido, que es a menudo una molécula de
polipéptido, se une a compuestos de la invención en sitios
reactivos, que incluyen NH_{2}, SH, CHO, COOH, y similares. Se
usan agentes de unión específica para unir los compuestos. Los
agentes de unión se escogen según el sitio reactivo al que se va a
unir el resto dirigido.
Los métodos para seleccionar un agente de unión
apropiado y el sitio reactivo para la unión del resto dirigido al
compuesto de la invención son conocidos, y se describen, por
ejemplo, en Hermanson, et al., Bioconjugate Techniques,
Academic Press, 1996; Hermanson et al., Immobilized Affinity
Ligand Techniques, Academic Press, 1992; y Pierce Catalog and
Handbook, 1996, pp. T155-T201.
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La invención se puede clarificar adicionalmente
por referencia a los siguientes Ejemplos, que sirven para
ejemplificar algunas de las realizaciones preferidas.
Ejemplos
1-2
Todos los disolventes anhidros tales como
acetonitrilo, metanol, etanol, acetato de etilo, tetrahidrofurano,
cloroformo, y cloruro de metileno se destilaron sobre CaH_{2} o
P_{2}O_{5} o Na/benzofenona previamente a su uso. Todos los
productos químicos eran de grado de reactivo y se compraron de
Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wis.), o Sigma Chemical
Company (St. Louis, Mo.).
Los espectros de RMN del protón se registraron
en un espectrómetro Varian-400 MHz en disolventes
deuterados tales como DMSO-d_{6}, CDCl_{3},
acetonitrilo-d_{3} o
acetona-d_{6}. Los desplazamientos químicos se
dan en partes por millón (ppm) con tetrametilsilano (TMS) como
estándar interno a cero ppm. Las constantes de acoplamiento (J) se
dan en hercios y las abreviaturas s, d, t, q y m se refieren a
singlete, doblete, triplete, cuadruplete y multiplete,
respectivamente. Se realizó TLC sobre placas 60F_{254}
prerevestidas Merck. Se realizó cromatografía en columna usando gel
de sílice 60 (malla 230-400, Merck).
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Se preparó un fluorociclopentenol apropiadamente
substituido a partir de
isopropilideno-D-ribosa 1 como se
resume en el Esquema 1.
Un intermedio importante en la síntesis es el
\beta-alcohol alílico terciario 6. El epímero
\alpha correspondiente es resistente a la oxidación, y de este
modo dificulta la formación del intermedio 7. El
\beta-alcohol alílico terciario 6 se prepara
selectivamente a partir de su equivalente de anillo abierto,
intermedio 5. Se encontró que la presencia de grupos protectores
voluminosos sobre el alcohol primario favorece la formación del
compuesto 5 sobre su epímero diastereoisómero, facilitando de este
modo la preparación del intermedio \beta-alcohol
alílico terciario 6 y, finalmente, el producto 7 oxidado. En este
aspecto, el grupo protector bencilo dio el
\alpha-epímero equivocado, el grupo protector
terc-butildimetilsililo mostró alguna selectividad
(alrededor de 75:8 \beta:\alpha), el grupo protector
terc-butildifenilsililo mostró mejor rendimiento e
incluso más alta selectividad y el grupo tritilo proporcionó alto
rendimiento y alta estereoselectividad.
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Esquema
1
Una disolución de
isopropilideno-D-ribosa 1 (10 g,
52,58 mmol) y cloruro de tritilo (21,95 g, 78,88 mmol) en piridina
(250 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Después
de añadir agua, la mezcla de reacción se extrajo con acetato de
etilo, se secó, se filtró, y se evaporó a vacío. El residuo
resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de
sílice usando hexano y acetato de etilo (4:1) como eluyente para
dar éter tritílico 2 (21,53 g, 95%) en forma de un aceite incoloro;
^{1}RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40-7.21
(m, 15H), 5,72 (d, J=4,0 Hz, 0,4H), 5,32 (s, 0,6H), 4,76 (d, J=5,6
Hz, 0,6H), 4,72 (dd, J=6,0, 4,0H), 4,63 (d, J=6,0 Hz, 0,6H), 4,57
(dd, J=6,4, 1,2 Hz, 0,4H), 4,34-4,33 (m, 0,6H),
4,18-4,17 (m, 0,4H), 4,09 (s ancho, 2H), 3,40 (dd,
J=10,4, 2,8 Hz, 0,4H), 3,39 (dd, J=10,0, 3,6 Hz, 0,6H), 3,32 (dd,
J=10,0, 3,6 Hz, 0,6H), 3,00 (dd, J=10,4, 3,2 Hz, 0,4H), 1,53 (s,
1,2H), 1,46 (s, 1,8H), 1,35 (s, 1,2H), 1,32 (s, 1,8H).
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A una suspensión agitada de bromuro de
metil-trifenilfosfonio (32,28 g, 90,36 mmol) en
tetrahidrofurano (300 ml) se añadió terc-butóxido
de potasio (10,79 g, 88,26 mmol), la pureza del reactivo: 95%) a
0ºC, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora.
Después de que se enfrió la muestra de nuevo hasta 0ºC, se añadió
una disolución de lactol 2 (18,18 g, 42,03 mmol) en tetrahidrofurano
(50 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 3 horas, y a
temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se
repartió entre agua y acetato de etilo, se lavó con salmuera, se
secó, se filtró, y se evaporó a vacío. El residuo resultante se
purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando hexano
y acetato de etilo (8:1) como eluyente para dar olefina 3 (15,20 g,
82%) en forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,45-7.21 (m, 15H), 5,96 (td, J=10,4, 6,8
Hz, 1H), 5,37 (td, J=16,8, 1,6 Hz, 1H), 5,23 (td, J=10,8, 1,6 Hz,
1H), 4,67 (t, J=6,4, 1H), 4,15 (dd, J=8,8, 6,4 Hz, 1H),
3,77-3,71 (m, 1H), 3,36 (dd, J=9,6, 3,6 Hz, 1H),
3,32 (dd, J=9,6, 6,0 Hz, 1H), 2,37 (d, J=4,8 Hz, 1H), 1,36 (s, 3H),
1,34 (s, 3H).
A una disolución agitada de (COCl)_{2}
(28,69 ml, 57,38 mmol, disolución 2M en CH_{2}Cl_{2}) en
CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se añadió gota a gota una disolución de
DMSO (8,9 ml, 125,51 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) a -78ºC, y
la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 30
minutos. Se añadió una disolución de alcohol 3 (15,44 g, 35,86
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) y la mezcla de reacción se agitó a
-78ºC durante 1 hora. Se añadió trietilamina (32,99 ml, 236,68
mmol) a -78ºC y a continuación la mezcla de reacción se dejó
calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Se añadió
cuidadosamente una disolución saturada de cloruro de amonio a 0ºC y
la mezcla de reacción se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y agua. La
capa orgánica se secó, se filtró, y se evaporó a presión reducida.
El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de
sílice usando hexano y acetato de etilo (6:1) para dar cetona 4
(13,83 g, 90%) en forma de un sólido blanco; ^{1}RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,46-7,23 (m, 15H), 5,56 (ddd,
J=17,2, 10,4, 6,8 Hz, 1H), 5,26 (td, J=16,8, 1,2 Hz, 1H), 5,13 (td,
J=10,4, 1,2 Hz, 1H), 4,88-4,84 (m, 1H), 4,76 (d,
J=7,6 Hz, 1H), 4,06 (d, J=18,0 Hz, 1 H), 3,72 (d, J=18,4 Hz, 1H),
1,41 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
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A una disolución agitada de 4 (14,66 g, 34,22
mmol) en tetrahidrofurano (150 ml) se añadió gota a gota bromuro de
vinilmagnesio (68,44 ml, 68,44 mmol, disolución 1M en
tetrahidrofurano) a -78ºC, y la mezcla de reacción se agitó durante
1 hora a la misma temperatura. La mezcla de reacción se enfrió
rápidamente en disolución saturada de cloruro de amonio y salmuera,
y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre
sulfato de magnesio anhidro, se filtró, y se evaporó. El aceite
resultante se purificó por cromatografía en columna (hexano:acetato
de etilo = 9:1) para dar 5 (15,62 g, 100%) en forma de un semisólido
blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,43-7,22 (m, 15H), 6,16 (dd, J=17,2, 10,8 Hz, 1H),
6,01-5,93 (m, 1H), 5,42 (dd, J=17,2, 1,2 Hz, 1H),
5,27 (dd, J=10,8, 1,2 Hz, 1H), 4,99 (d, J=16,0 Hz, 1H), 4,98 (d,
J=11,2 Hz, 1H), 4,54-4,47 (m, 2H), 3,33 (d, J=8,8
Hz, 1H), 3,05 (d, J=8,4 Hz, 1H), 2,54 (s ancho, 1H), 1,46 (s, 3H),
1,40 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de 5 (14,55 g, 31,86
mmol) en cloruro de metileno (100 ml) se añadió dihidrocloruro de
triciclohexilfosfina[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-ilideno]-[bencilideno]rutenio
(VI) (270 mg, 0,32 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 2 días. Los compuestos volátiles se
retiraron a presión reducida y el residuo se purificó por
cromatografía en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo
= 5:1) para dar 6 (12,38 g, 94%) en forma de un semisólido blanco;
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,47-7,21 (m, 15H), 5,93 (dd, J=5,6, 1,6 Hz, 1H),
5,73 (d, J=5,6 Hz, 1H), 5,31 (d, J=6,5 Hz, 1H), 4,56 (d, J=5,6 Hz,
1H), 3,59 (d, J=9,2 Hz, 1H), 3,15 (d, J=9,2 Hz, 1H), 3,02 (s, 1H),
1,32 (s, 3H), 1,21 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de 6 (12,17 g, 28,40 mmol),
tamices moleculares de 4 \ring{A} (14,2 g), y dicromato de
piridinio (32,05 g, 85,20 mmol) en DMF (100 ml) se agitó a
temperatura ambiente durante 2 días. Después de que la mezcla se
diluyó con éter dietílico y acetato de etilo, la mezcla se filtró a
través de una almohadilla corta de una mezcla de gel de sílice y
Celite. El filtrado se evaporó y el residuo resultante se purificó
por cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de
etilo = 4:1) para dar cetona 7 (11,14 g, 92%) en forma de un sólido
blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,44-7,22 (m, 15H), 6,42 (t, J=2,0 Hz, 1H), 4,96
(d, J=5,2 Hz, 1H), 4,45 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,23 (dd, J=18,4, 2,0 Hz,
1H), 3,93 (dd, J=18,0, 2,0 Hz, 1H), 1,34 (s, 6H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada 7 (17,19 g, 40,30 mmol)
y yodo (12,37 g, 43,86 mmol) en cloruro de metileno (80 ml) se
añadió piridina (3,0 ml, 36,27 mmol) en atmósfera de nitrógeno a
0ºC, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente
durante 6 horas. La mezcla se diluyó con cloruro de metileno y agua
y la capa orgánica se lavó con agua, disolución saturada de
tiosulfato de sodio, salmuera, y se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro. Después de la evaporación de los disolventes, el residuo se
purificó por cromatografía en columna de gel de sílice
(hexano:acetato de etilo = 7:1) para dar cetona 8 (16,03 g, 72%) en
forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,43-7,15 (m, 15H), 5,35 (d, J=5,6 Hz, 1H),
4,45 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,19 (d, J=16,0 Hz, 1H), 4,08 (d, J=16,0
Hz, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada 8 (8,97 g, 16,25 mmol)
y cloruro de cerio (III) heptahidrato (6,66 g, 17,88 mmol) en
metanol (80 ml) se añadió borohidruro de sodio (676 mg, 17,88 mmol)
a 0ºC, y la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 1 hora.
La mezcla se diluyó con salmuera y se extrajo con acetatol de etilo.
La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de
magnesio anhidro y se evaporó. El residuo se purificó por
cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de
etilo = 6:1) para dar 9 (8,56 g, 95%) en forma de un sólido blanco;
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,48-7,20
(m, 15H), 5,20 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,76 (t, J=5,6 Hz, 1H), 3,88 (d,
J=12,0 Hz, 1H), 3,79 (d, J=12,0 Hz, 1H), 2,78 (d, J=10,4 Hz, 1H),
1,40 (s, 3H), 1,30 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de 9 (8,53 g, 15,39
mmol) e imidazol (3,14 g, 46,17 mmol) en
N,N-dimetilformamida (70 ml) anhidra se añadió
TBDPSCl (4,80 ml, 18,47 mmol) a temperatura ambiente en atmósfera de
nitrógeno, y la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura
durante la noche. La mezcla se enfrió rápidamente con agua, se
extrajo con éter dietílico, se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro, y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía
flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 30:1)
para dar 10 (11,66 g, 96%) en forma de un aceite incoloro; ^{1}H
RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,82-7,18 (m,
25H), 4,94 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,47 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,05 (d, J=5,6
Hz, 1H), 3,89 (d, J=12,0 Hz, 1H), 3,78 (d, J=12,0 Hz, 1H), 1,29 (s,
3H), 1,25 (s, 3H), 1,13 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de 10 (11,66 g, 14,71
mmol) y N-fluorobencenosulfonimida (5,566 g, 17,65
mmol) en tetrahidrofurano seco (100 ml) se añadió lentamente
n-butil-litio (27,6 ml, 44,13 mmol,
disolución 1,6M en hexanos) a -78ºC en atmósfera de nitrógeno, y la
mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 1 hora.
La mezcla se enfrió rápidamente con disolución saturada de cloruro
de amonio y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se
secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se evaporó. El residuo se
purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice
(hexano:acetato de etilo = 6:1) para dar 11 (7,35 g, 73%) en forma
de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,81-7,17 (m, 25H), 4,94 (d, J=7,2 Hz, 1H), 4,35
(m, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,89 (t, J=12,0 Hz, 1H), 3,77 (t, J=12,0 Hz,
1H), 1,42 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,08 (s, 9H).
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de 11 (7,35 g, 10,73
mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se añadió gota a gota fluoruro de
tetra-n-butilamonio (12,88 ml, 12,88
mmol, 1,0 M en tetrahidrofurano) y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 1 hora. Después de la retirada del disolvente, el
residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de
sílice (hexano:acetato de etilo = 4:1) para dar 12 (4,31 g, 90%) en
forma de un aceite incoloro; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,43-7,18 (m, 15H), 5,12 (t, J=5,6 Hz, 1H),
4,69 (m, 1H), 4,38 (t, J=5,6 Hz, 1H), 3,91 (d, J=13,2 Hz, 1H), 3,74
(d, J=13,2 Hz, 1H), 2,75 (d, J=10,4 Hz, 1H), 1,43 (s, 3H), 1,39 (s,
3H).
\vskip1.000000\baselineskip
El fluoro-ciclopentenol 12 se
copuló con una N^{3}-benzoilbase protegida, según
se resume en el Esquema 2.
Una disolución de dietilazodicarboxilato (780
mg, 4,48 mmol) en tetrahidrofurano seco (30 ml) se añadió gota a
gota a una disolución del fluorociclopentenol 12 (800 mg, 1,79
mmol), trifenilfosfina (1.174,8 mg, 4,48 mmol), y una seleccionada
N^{3}-benzoilbase (derivados de uracilo, 3,58
mmol) en tetrahidrofurano seco (10 ml) a 0ºC en atmósfera de
nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente
durante 15 horas, y a continuación los compuestos volátiles se
evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó por
cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de
etilo = 4:1) para dar el producto condensado con base.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
2
El rendimiento y los datos espectroscópicos para
los productos de condensación 13-18 eran como
sigue:
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-1H-
pirimidina-2,4-diona (13). 865
mg, 75%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,97-7,24 (m, 15H), 7,66 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,92
(d, J=8,0 Hz, 1H), 5,49 (s ancho, 1H), 4,72 (t, J=6,0 Hz, 1H), 4,35
(d, J=13,2 Hz, 1H), 4,29 (t, J=6,0 Hz, 1H), 4,15 (dt, J=13,2, 2,4
Hz, 1H), 1,43 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-5-
fluoro-1H-pirimidina-2,4-diona
(14). 924,6 mg, 78%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,94-7,24 (m, 15H), 7,13 (d, J=5,2 Hz, 1H), 5,33
(td, J=6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,27 (s ancho, 1H), 4,62 (t, J=7,2 Hz, 1H),
4,03 (d, J=12,8 Hz, 1H), 3,87 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,44 (s,
3H), 1,36 (s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-5-cloro-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-
4-il)-1H-pirimidina-2,4-diona
(15). 875,3 mg, 72%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,95-7,21 (m, 15H), 7,83 (s, 1H), 5,42 (td, J=6,0,
0,8 Hz, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,65 (t, J=7,2 Hz, 1H), 3,99 (t,
J=12,8 Hz, 1H), 3,75 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,43 (s, 3H), 1,32
(s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-5-bromo-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-
4-il)-1H-pirimidina-2,4-diona
(16). 893,7 mg, 69%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
8,04 (s, 1H), 7,97-7,28 (m, 15H), 5,29 (td, J=6,0,
0,8 Hz, 1H), 5,25 (s ancho, 1H), 4,71 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,15 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 3,95 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,41 (s, 3H), 1,37
(s, 3H).
\newpage
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-5-yodo-1H-pirimidina-2,4-diona
(17). 855,2 mg, 62%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
8,26 (s, 1H), 7,93-7,22 (m, 15H), 5,38 (td, J=6,0,
0,8 Hz, 1H), 5,29 (s ancho, 1H), 4,73 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,14 (t,
J=12,8 Hz, 1H), 3,97 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,34
(s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona
(18). 990,4 mg, 84%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,94-7,22 (m, 15H), 7,25 (s, 1H), 5,43 (td, J=6,0,
0,8 Hz, 1H), 5,19 (s ancho, 1H), 4,52 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,13 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,01 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 2,02 (s, 3H), 1,44
(s, 3H), 1,36 (s, 3H).
Un compuesto protegido 13-18
(1,00 mmol) se disolvió en 10 ml de HCl/metanol 1N (2:1, v/v) y la
mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20
horas. El disolvente se retiró a presión reducida, y el residuo
resultante se purificó por cromatografía flash en columna de gel de
sílice (cloruro de metileno:metanol = 10:1) para dar un derivado de
N-benzoil-uracilo.
El derivado de
N-benzoil-uracilo obtenido
anteriormente se trató con 10 ml de amoniaco metanólico, y la mezcla
se agitó en un tubo cerrado a temperatura ambiente durante la
noche. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se purificó
por cromatografía flash en columna de gel de sílice (cloruro de
metileno:metanol = 5:1) para dar un derivado de uracilo de la Tabla
1, que se cristalizó en éter dietílico/metanol.
\vskip1.000000\baselineskip
El rendimiento y los datos espectroscópicos para
los derivados de uracilo 19-24 eran como sigue:
(1S,4R,5S)-1-(2-Fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(19, RX-3116).
170,4 mg, 66%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,48 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,74 (d, J=8,0, 1H), 5,44 (s ancho, 1H), 4,68 (t, J=5,2 Hz, 1H), 4,37 (t, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
170,4 mg, 66%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,48 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,74 (d, J=8,0, 1H), 5,44 (s ancho, 1H), 4,68 (t, J=5,2 Hz, 1H), 4,37 (t, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-5-Fluoro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(20, RX-3116A). 168,5 mg, 61%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,74 (dd, J=6,4, 0,8 Hz, 1H), 5,46 (s
ancho, 1H), 4,67 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H),
4,18 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-5-Cloro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(21, RX-3116B). 190,2 mg, 65%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,43 (s, 1H), 5,45 (s ancho, 1H), 4,69
(td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,35 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (td, J=5,6,
1,2 Hz, 1H), 4,15 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\newpage
(1S,4R,5S)-5-Bromo-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(22, RX-3116C). 192,1 mg, 57%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,59 (s, 1H), 5,43 (s ancho, 1H), 4,64
(td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,35 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,16 (td, J=5,6,
0,8 Hz, 1H), 4,11 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-1-(2-Fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidina-2,4-diona
(23, RX-3116D). 195,9 mg, 51%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,67 (s, 1H), 5,46 (s ancho, 1H), 4,66
(td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,15 (td, J=5,6,
1,2 Hz, 1H), 4,08 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-1-(2-Fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona
(24, RX-3116E). 202,4 mg, 75%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,62 (s, 1H), 5,49 (s ancho, 1H), 4,69
(td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J=13,2 Hz, 1H), 4,17 (td, J=5,6,
1,2 Hz, 1H), 4,10 (dt, J=13,2, 2,4 Hz, 1H), 1,82 (s, 3H).
Una disolución de un compuesto de uracilo
19-24 de la Tabla 1 (1,00 mmol) en piridina anhidra
(10 ml) se trató con anhídrido acético (940 \mul, 10,0 mmol), y
la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El
residuo obtenido después de la evaporación de todos los compuestos
volátiles se diluyó con cloruro de metileno; se lavó con HCl
diluido, disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera; se secó
(MgSO_{4}); se filtró, y se evaporó. El residuo que contiene el
triacetato se usó en la siguiente etapa sin purificación
adicional.
Una disolución de 1,2,4-triazol
(760 mg, 11,0 mmol) y oxicloruro de fósforo (915 \mul, 10,0 mmol)
en acetonitrilo (10 ml) se trató con trietilamina (1,25 ml, 9,0
mmol) y triacetato (1,00 mmol) en 4 ml de acetonitrilo. La mezcla
de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. Se
añadió trietilamina (1,5 ml) y agua (4,5 ml) adicional, y la mezcla
se agitó durante 10 minutos. Después de la dilución con cloruro de
metileno, la mezcla se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} y
salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó. El residuo
se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional
A una disolución del residuo anterior en
1,4-dioxano (8 ml) se añadió hidróxido de amonio
(28%, 2 ml) a 0ºC, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 10 horas. Después de la retirada de todos los
componentes volátiles, el residuo se disolvió en amoníaco metanólico
(5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. La
mezcla de reacción se evaporó, y el residuo se purificó por
cromatografía en columna ODS (agua:acetona = 20:1) para dar el
derivado de citosina deseado de la Tabla 2, que se cristalizó en
éter dietílico/metanol.
El rendimiento y los datos espectroscópicos para
los derivados de citosina 25-29 eran como sigue:
(1S,4R,5S)-4-Amino-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(25, RX-3117). 133,8 mg, 52%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,47 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,92 (d, J=7,6 Hz,
1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,69 (t, J=5,6 Hz, 1H), 4,36 (d, J=12,8
Hz, 1H), 4,26 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,11 (dt, J=12,8, 2,4 Hz,
1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-4-Amino-5-fluoro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(26, RX-3117A). 156,9 mg, 57%; ^{1}H
RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,79 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,41 (s
ancho, 1H), 4,68 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H),
4,23 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-4-Amino-5-cloro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(27, RX-3117B). 134,2 mg, 46%; ^{1}H
RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,50 (s, 1H), 5,37 (s ancho, 1H),
4,70 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,41 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,25 (td,
J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,17 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-4-Amino-5-bromo-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(28, RX-3117C). 164,7 mg, 49%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,62 (s, 1H), 5,41 (s ancho, 1H), 4,69
(td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,40 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,22 (td, J=5,6,
1,2 Hz, 1H), 4,14 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R,5S)-4-Amino-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidin-2-ona
(29, RX-3117D). 160,9 mg, 42%; ^{1}H
RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,70 (s, 1H), 5,43 (s ancho, 1H),
4,66 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,34 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,21 (td,
J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,08 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
A una disolución agitada de un derivado de
uracilo de la Tabla 1 (0,50 ml) en piridina (5 ml) se añadió DMAP
(1,00 mmol) y
1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano
(0,75 mmol) a temperatura ambiente. Diez horas después, el
disolvente se retiró y el residuo se repartió entre cloruro de
metileno y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó a
continuación sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se
retiró a presión reducida y el residuo en bruto se usó en la
siguiente etapa sin purificación adicional.
A una disolución agitada del residuo en bruto en
acetonitrilo anhidro (5 ml) se añadió
4-dimetilamino-piridina (1,00 mmol)
y clorotioformiato de fenilo (0,60 mmol), y a continuación la mezcla
de reacción se dejó calentar para agitar a temperatura ambiente
durante 5 horas. La mezcla se repartió entre cloruro de metileno y
salmuera, y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre
sulfato de magnesio anhidro, y se filtró. Los componentes volátiles
se retiraron y el residuo que contiene el tioéster de fenilo se usó
en la siguiente reacción de radicales sin purificación
adicional.
A una disolución agitada del residuo que
contiene tioéster de fenilo en benceno seco se añadió trietilborano
(1,00 mmol, disolución 1,0 M en hexanos) e hidruro de tributilestaño
(1,00 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a
temperatura ambiente. La mezcla se evaporó, y el residuo se purificó
por cromatografía en columna de gel de sílice (cloruro de
metileno:metanol = 20:1) para dar el producto desoxigenado.
A una disolución agitada del producto
desoxigenado en tetrahidrofurano (5 ml) se añadió gota a gota
fluoruro de tetra-n-butilamonio
(1,20 mmol, 1,0 M en tetrahidrofurano) y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 5 horas. Después de la retirada del
disolvente, el residuo se purificó por cromatografía flash en
columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 5:1) para
dar un derivado de uracilo 2'-desoxigenado de la
Tabla 3, que se cristalizó en éter dietílico/metanol.
Los rendimientos y datos espectroscópicos para
los derivados de uracilo desoxigenado 30-35 eran
como sigue:
(1S,4R)-1-(2-Fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(30, RX-3216). 63,0 mg, 52%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,50 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,85 (d, J=8,0 Hz,
1H), 5,52 (s ancho, 1H), 4,62 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,39 (d, J=12,8
Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 2,05-2,18 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-5-Fluoro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(31, RX-3216A). 63,7 mg, 49%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,75 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,5 (s ancho, 1H),
4,65 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,34 (d, J=12,8 Hz), 4,15 (m, 1H),
2,04-2,20 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-5-Cloro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(32, RX-3216B). 65,0 mg, 47%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,39 (s, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,69 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H),
2,05-2,18 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-5-Bromo-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona
(33, RX-3216C). 72,2 mg, 45%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,57 (s, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,69 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H),
2,08-2,22 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-1-(2-Fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidina-2,4-diona
(34, RX-3216D). 75,5 mg, 41%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 8,69 (s, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,67 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,16 (m, 1H),
2,01-2,17 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-1-(2-Fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona
(35, RX-3216E). 67,9 mg, 53%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,72 (s, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,68 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,15 (m, 1H),
2,10-2,25 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de un compuesto de uracilo de la
Tabla 3 (0,5 mmol) en piridina anhidra (5 ml) se trató con
anhídrido acético (470 \mul, 5.0 mmol), y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 5 horas. El residuo obtenido después
de la evaporación de todos los compuestos volátiles se diluyó con
cloruro de metileno; se lavó con HCl diluido, disolución saturada
de NaHCO_{3} y salmuera; se secó (MgSO_{4}); se filtró, y se
evaporó. El residuo que contiene triacetato se usó en la siguiente
etapa sin purificación adicional.
Una disolución de 1,2,4-triazol
(760 mg, 11,0 mmol) y oxicloruro de fósforo (915 \mul, 10,0 mmol)
en acetonitrilo (10 ml) se trató con trietilamina (1,25 ml, 9,0
mmol) y triacetato (1,00 mmol) en 4 ml de acetonitrilo. La mezcla
de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. Se
añadieron trietilamina (1,5 ml) y agua (4,5 ml) adicionales, y la
mezcla se agitó durante 10 minutos. Después de la dilución con
cloruro de metileno, la mezcla se lavó con disolución saturada de
NaHCO_{3}, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó. El
residuo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una disolución del residuo anterior en
1,4-dioxano (8 ml) se añadió hidróxido de amonio
(28%, 2 ml) a 0ºC, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura
ambiente durante 10 horas. Después de la retirada de todos los
componentes volátiles, el residuo se disolvió en amoniaco metanólico
(5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. La
mezcla de reacción se evaporó, y el residuo se purificó por
cromatografía en columna ODS (agua:acetona =20:1) para dar el
derivado de citosina 2'-desoxigenada de la Tabla 4,
que se cristalizó en éter dietílico/metanólico.
Los rendimientos y los datos espectroscópicos
para los derivados de citosina desoxigenada 36-40
eran como sigue:
(1S,4R)-4-Amino-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(36, RX-3217). 63,9 mg, 53%; ^{1}H RMN (400
MHz, CD_{3}OD) \delta 7,48 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,95 (d, J=8,0 Hz,
1H), 5,40 (s ancho, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H),
4,08 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,04-2,19 (m, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-4-Amino-5-fluoro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(37, RX- 3217A). 53,1 mg, 41%; ^{1}H RMN (400 MHz,
CD_{3}OD) \delta 7,81 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,39 (s ancho, 1H),
4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,11 (d, J=12,8 Hz, 1H),
2,08-2,21 (m, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-4-Amino-5-cloro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(38, RX- 3217B). 62,0 mg, 45%; ^{1}H RMN (400 MHz,
CD_{3}OD) \delta 8,51 (s, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,45 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,23 (m, 1H), 4,18 (d, J=12,8 Hz, 1H),
2,05-2,16 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-4-Amino-5-bromo-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona
(39, RX- 3217C). 76,8 mg, 48%; ^{1}H RMN (400 MHz,
CD_{3}OD) \delta 8,61 (s, 1H), 5,46 (s ancho, 1H), 4,41 (d,
J=12,8 Hz, 1H), 4,23 (m, 1H), 4,16 (d, J=12,8 Hz, 1H),
2,08-2,17 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
(1S,4R)-4-Amino-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidin-2-ona
(40, RX- 3217D). 64,2 mg, 35%; ^{1}H RMN (400 MHz,
CD_{3}OD) \delta 8,63 (s, 1H), 5,38 (s, 1H), 4,35 (d, J=12,8 Hz,
1H), 4,19 (m, 1H), 4,11 (d, J=12,8 Hz, 1H),
2,11-2,23 (m, 2H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtuvieron líneas celulares de cáncer para
determinar el efecto de los compuestos nucleósidos de las siguientes
fuentes: OVCAR-3 (ovario) humano,
MCF-7 (pecho, dependiente de hormonas),
MDA-MB-231 (pecho), HeLa (cervix),
PC3 (próstata), LNCap (próstata), HepG2 (hígado),
A-549 (pulmón), NCI-H226 (pulmón),
HT-29 (colon), HTCT116 (colon),
SK-MEL-28 (melanoma) y
PANC-1 (páncreas) de la American Type Culture
Collection (ATCC) (Manassas, VA); U251 (cerebro) de Riken (Japón);
MKN-45 (estómago) de DSMZ (Alemania); UMRC2 (riñón)
del United States National Cancer Institute (Bethesda, MD). Todas
las líneas celulares excepto
MDA-MB-231, HCT116, UMRC2 y
PAN-1 se cultivaron en medio RPMI1640 (Invitrogen,
Carlsbad, CA) enriquecido con suero bovino fetal al 10%
("FBS"), piruvirato de sodio 1 mM, HEPES 10 mM y 100 U/ml de
penicilina y 100 \mug/ml de estreptomicina ("P/S"). Se
mantuvieron células MDA-MB-231,
HCT116, UMRC2 y PANC-1 en medio de Eagle modificado
con Dulbecco ("DMEM", Invitrogen) enriquecido con FBS al 10%,
P/S, HEPES 10 mM y L-glutamina 2 mM. Todas las
células se incubaron a 37ºC en CO_{2} al 5% humidificado.
Se puede evaluar la inhibición del crecimiento
de los derivados de nucleósido contra varias células tumorales
humanas. Se puede estudiar la importancia relativa de los grupos
substituyentes particulares en los compuestos. Los derivados de
nucleósido, preparados como se describen anteriormente, se ensayan
con DMSO como control.
El ensayo de inhibición del crecimiento de
RX-3117 contra 16 líneas celulares de tumor humano
se realizó usando el método de la Sulforhodamina B ("SRB")
(Skehan et al., J. National Cancer Institute, 82:
1107-1112 (1990)). Brevemente, células tumorales
que crecen exponencialmente se sembraron en una placa de 96 pocillos
con una densidad de 2-3 x 10^{3} células/pocillo
y se trataron con compuestos nucleósidos al día siguiente. Se usaron
para cada tratamiento pocillos por triplicado. Las células se
incubaron con los diferentes compuestos durante 96 horas a 37ºC en
un atmósfera de CO_{2} al 5% humidificado. Después de 96 horas de
incubación, las células se fijaron con ácido tricloroacético al 10%
("TCA"), se incubaron durante 1 hora a 4ºC, y se lavaron 3
veces con agua del grifo. Subsecuentemente, las células se tiñeron
con sulforhodamina B al 0,4% en ácido acético al 1% durante 30
minutos, se lavaron 4 veces con ácido acético al 1%, y se secaron al
aire de nuevo. Después de 5 minutos de agitación en disolución de
Tris 10 mM, se midió la absorbancia de cada pocillo a 530 nm usando
el Benchmark Plus Microplate reader (Bio-Rad
Laboratories, Hercules, CA).
Para trasladar los valores de OD_{530} al
número de células vivas en cada pocillo, los valores de OD_{530}
se compararon con aquellos de OD_{530} estándar frente a la curvas
del número de células generadas para cada línea celular. El
porcentaje de supervivencia se calculó usando la fórmula:
% de
supervivencia = número de células vivas [ensayo]/número de células
vivas [control] x
100
Los valores de IC_{50} se calcularon por medio
de análisis de regresión no lineal.
La tabla 5 resume la inhibición del crecimiento
celular (IC_{50}, \muM) determinada para
RX-3117.
Como se muestra en la tabla 5, los derivados de
nucleósido de la invención son activos contra una amplia gama de
líneas celulares tumorales.
\vskip1.000000\baselineskip
Para observar la inhibición del crecimiento del
tumor en un modelo animal, se realizó un estudio de xenoinjerto
ex vivo en ratones sin pelo utilizando
RX-3117. Las líneas celulares de cáncer humano
apropiadas son aquellas que se han ensayado ya para ver la
inhibición del crecimiento celular del cáncer, y particularmente
preferido era el carcinoma de colon HCT116. La eficacia antitumor
del RX-3117 se evaluó contra xenoinjertos tumorales
inyectados subcutáneamente en ratones sin pelo y se midió el volumen
del tumor después del tratamiento de RX-3117.
La suspensión de células HCT116 (2 x 10^{6}
células en 0,1 ml de RPMI) se inyectó subcutáneamente en el flanco
derecho de ratones macho atímicos de seis semanas de edad (BALB/c
nu/nu) el día 0. Se inyectó a un número suficiente de ratones
suspensión de células HCT116 de modo que se seleccionaran tumores en
un intervalo de volumen tan estrecho como sea posible para el
ensayo el día del inicio del tratamiento. Los animales con tumores
dentro del intervalo de tamaño apropiado se asignaron a varios
grupos de tratamiento. El RX-3117 se disolvió en
DMSO al 10% en PBS y el disolvente solo sirvió como control. Todas
las medicaciones del estudio (control, RX-3117: 2
mg/kg/día, RX-3117: 10 mg/kg/día) se efectuaron por
medio de inyecciones intraperitoneales tres veces por semana
comenzando desde el día 5 y terminando el día 37. Para cuantizar el
crecimiento del tumor, se midieron tres diámetros perpendiculares
de los tumores con calibres cada 3-5 días, y se
controló el peso corporal de los ratones para ver la toxicidad. El
volumen del tumor se calculó usando la fórmula: volumen tumoral
(mm^{3}) = (anchura) x (longitud) x (altura) x \pi/6.
El volumen del tumor (media\pmSEM) en cada
grupo de animales se presenta en la Fig. 1, que muestra una medida
del volumen del tumor como indicador de la eficacia del
RX-3117 contra xenoinjertos de carcinoma de colon
humano HCT116. El tratamiento con RX-3117 fue bien
tolerado sin muertes y no se observó más de 1 g de fluctuación de
peso corporal. Después del día 37, el volumen del tumor se redujo
significativamente en los ratones tratados con
RX-3117 a 2 a 10 mg/kg de tratamiento comparado con
los controles. De este modo, como se demuestra en la Fig. 1, el
RX-3117 causa la inhibición del crecimiento del
tumor en ratones sin pelo inyectados sc con células de carcinoma de
colon humano HCT116.
Las realizaciones ilustradas y discutidas en
esta memoria descriptiva se desean solo para enseñar a aquellos
expertos en la técnica el mejor modo conocido por los inventores
para hacer uso de la invención.
Claims (13)
1. El uso, en la fabricación de un medicamento
para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, de un
compuesto que es un nucleósido de la siguiente fórmula I':
en la
que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
o la siguiente fórmula II':
en la
que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br o I;
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable.
2. El uso según la reivindicación 1, en el que
dicho trastorno antiproliferativo comprende un tumor.
3. El uso según la reivindicación 2, en el que
dicho tumor se selecciona de tumores del ovario, tumores del pecho,
tumores cervicales, tumores de la próstata, tumores del hígado,
tumores pulmonares, tumores renales, tumores de colon, tumores
pancreáticos, tumores cerebrales, tumores del estómago y
melanoma.
4. Un compuesto que es un nucleósido de la
siguiente fórmula III: @lin
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Y es H o OH;
y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
con la condición de que, cuando A es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
X no es
CH_{3};
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable.
\newpage
5. Un compuesto según la reivindicación 4, o un
uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que
el nucleósido tiene la siguiente fórmula I:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
o la siguiente fórmula II:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br o I.
\newpage
6. Un compuesto según la reivindicación 4 o la
reivindicación 5, o un uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que el nucleósido es:
7. Una composición farmacéutica que comprende
una cantidad terapéuticamente activa de un compuesto como se define
en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y un vehículo o
diluyente farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto según una cualquiera de las
reivindicaciones 4 a 6 que tiene un IC_{50} no mayor de 10 \mum
con respecto a por lo menos una línea celular para un tumor
seleccionado de tumores del ovario, tumores del pecho, tumores
cervicales, tumores de la próstata, tumores del hígado, tumores de
pulmón, tumores de riñón, tumores de colon, tumores pancreáticos,
tumores cerebrales, tumores de estómago y melanoma.
9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el
que dicha línea celular se selecciona de OVCAR-3
humano para tumores del ovario, MCF-7 o
MDA-MB-231 para tumores del pecho,
HeLa para tumores cervicales, PC3 o LNCap para tumores de la
próstata, HepG2 para tumores del hígado, A549 o
NCI-H226 para tumores de pulmón, UMRC2 para tumores
de riñón, HT-29 o HCT116 para tumores de colon,
PANC-1 para tumores pancreáticos, U251 para tumores
cerebrales, MKN-45 para tumores de estómago y
SK-MEL-28 para melanoma.
10. Un compuesto según la reivindicación 8 o la
reivindicación 9 que tiene un IC_{50} no mayor de 1,0 \mum.
11. Un compuesto como se define en una
cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y 8 a 10 para uso en un
método de tratamiento del cuerpo humano o animal por medio de
terapia.
12. Un compuesto como se define en una
cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y 8 a 10 para uso en el
tratamiento de un trastorno hiperproliferativo.
13. Un procedimiento para producir un compuesto
que es un nucleósido de la siguiente fórmula I:
en la
que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
o la siguiente fórmula II:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br o I;
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptable;
comprendiendo el procedimiento por lo menos una
etapa seleccionada de:
\vskip1.000000\baselineskip
en la que B se selecciona de
terc-butildimetilsililo,
terc-butildifenilsililo, bencilo y
tritilo.
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