ES2327432T3

ES2327432T3 - Vacunas contra el vhc para pacientes con vhc cronica.

Info

Publication number: ES2327432T3
Application number: ES05794493T
Authority: ES
Inventors: Jurgen Frisch; Erich Tauber; Vera Burger; Christoph Klade; Michael c/o Glenmark Pharmaceuticals S.A. BUSCHLE; Katherine Cohen
Original assignee: Intercell Austria AG
Current assignee: Valneva Austria GmbH
Priority date: 2004-10-29
Filing date: 2005-09-23
Publication date: 2009-10-29
Anticipated expiration: 2025-09-23
Also published as: US20090060875A1; JP2008517973A; DE602005015605D1; US20100322972A1; AU2005298742B2; WO2006045677A1; CN101048172A; EP1804822B1; EP1804822A1; AU2005298742A1; CA2583026A1

Abstract

Uso de péptidos policatiónicos para la preparación y fabricación de medicamentos o composiciones farmacéuticas, que comprende antígenos del VHC o epítopos del VHC para el tratamiento de pacientes con infecciones de VHC crónica.

Description

Vacunas contra el VHC para pacientes con VHC crónica.

El virus de la hepatitis C (VHC) es un miembro de la familia flaviviridae que infecta crónicamente a aproximadamente 170 millones de personas en el mundo. Hay al menos 6 genotipos de VHC y se han descrito más de 50 subtipos. En América, Europa y Japón los genotipos 1, 2 y 3 son los más comunes. La distribución geográfica de los genotipos de VHC varía enormemente siendo el genotipo 1a predominante en USA y en partes de Europa Occidental, mientras que el 1b predomina en Europa del Sur y Central (Bellentani 2000). El VHC es transmitido por la ruta parenteral o percutánea, y se replica en hepatocitos. Aproximadamente el 15% de los pacientes experimentan hepatitis aguda autolimitada asociada con la depuración y la recuperación viral. Aproximadamente el 80% de las personas infectadas se convierten en portadores crónicos. Con frecuencia, la infección persiste asintomáticamente con progresión lenta durante años, sin embargo, finalmente el VHC es una causa principal de cirrosis, enfermedad hepática terminal y cáncer de hígado (Liang 2000). La fuerza y calidad de las respuestas de HTL y CTL determinan si los pacientes se recuperan (espontáneamente o como consecuencia de terapia) o desarrollan infección crónica (Liang 2000).

La terapia estándar contra el VHC comprende una combinación de interferón-alfa pegilado y el antiviral ribavirina (Fried 2002). Sin embargo, las respuestas virológicas (definidas como la ausencia de ARN de VHC detectable 24 semanas después del cese de la terapia) se consiguen, dependiendo del genotipo, en solo aproximadamente el 50% de los pacientes de VHC con la terapia estándar. Además, hay muchos efectos secundarios asociados tanto al interferón (IFN) como a la ribavirina. El IFN (también es su forma pegilada) estimula el sistema inmune en una manera no específica, lo que causa importantes efectos secundarios, incluyendo síndrome de tipo gripal, fiebre, dolor de cabeza, artralgia, mialgia, depresión, pérdida de peso, alopecia, leucopenia y trombopenia 6. Estos efectos secundarios pueden necesitar el cese del tratamiento en algunos sujetos. El tratamiento con IFN está también contraindicado en sujetos con enfermedad hematológica preexistente (leucopenia y trombopenia debido a cirrosis de hígado con esplenomegalia). La ribavirina puede causar elevaciones transitorias de enzimas hepáticas y síntomas psiquiátricos, hemólisis y anemia y ha sido asociada con infarto de miocardio en sujetos con enfermedad coronaria cardíaca. La ribavirina exhibe también potencia teratogénica, mutagénica y carcinogénica. Por lo tanto, la contracepción es obligada para los sujetos varones y mujeres fértiles tratados con ribavirina. Por lo tanto, la baja tolerabilidad y los considerables efectos secundarios de esta terapia necesitan claramente nueva intervención terapéutica, incluyendo vacunas terapéuticas, y se requieren urgentemente nuevas opciones de tratamiento para la infección crónica de HVC, debido a las limitaciones y falta de tratamientos efectivos (Cornberg 2002).

El documento WO 01/81359 A1 divulga derivados de ribavirina para el tratamiento de infecciones de hepatitis C crónica.

El problema subyacente de la presente invención es superar las limitaciones de la terapia estándar de combinación de interferón alfa/ribavirina proporcionando medicamentos o composiciones farmacéuticas efectivos, especialmente una vacuna para el tratamiento de infecciones de VHC crónica, especialmente para los pacientes que no han respondido o han respondido solo parcialmente a una terapia estándar principal contra el VHC o han sufrido una recaída después de la misma.

Por lo tanto, la presente invención proporciona el uso de péptidos policatiónicos para la preparación y fabricación de medicamentos o composiciones farmacéuticas, que comprenden antígenos de VHC o epítopos de VHC para el tratamiento de pacientes con infecciones crónicas de VHC. Preferentemente, los pacientes con infecciones crónicas de VHC son los que no han respondido, han respondido parcialmente a una terapia estándar principal contra el VHC mediante una combinación de interferón-alfa pegilado y el antiviral ribavirina o han sufrido una recaída después de la misma. Los medicamentos o composiciones farmacéuticas son preferentemente vacunas.

Se considera que un paciente ha recaído cuando el ARN del VHC se hace indetectable en la terapia estándar principal contra el VHC con Peg-interferón alfa y Ribavirina pero es detectado de nuevo después de la interrupción del tratamiento. Las personas cuyos niveles de ARN de VHC permanecen estables durante el tratamiento son consideradas como no-respondedoras, mientras que aquellas cuyos niveles de ARN de VHC disminuyen (por ejemplo, en >2 logs), pero nunca se hacen indetectables, son referidas como respondedoras parciales.

El péptido o los péptidos policatiónicos a ser usados según la presente invención pueden ser cualquier péptido policatiónico que muestre los efectos característicos según el documento WO 97/30721. Los péptidos policatiónicos preferentes son seleccionados de entre polipéptidos básicos, policationes orgánicos, poliaminoácidos básicos o mezclas de los mismos. Estos ácidos poliamino deben tener una longitud de cadena de al menos 4 residuos de aminoácidos (WO 97/30721). Especialmente preferentes son las sustancias tales como la polilisina, la poliarginina y los polipéptidos que contienen más del 20%, especialmente más del 50%, de aminoácidos básicos en un intervalo de más de 8, especialmente más de 20, residuos aminoácidos o mezclas de los mismos. Otros policationes preferentes y sus composiciones farmacéuticas se describen en WO 97/30721 (por ejemplo, polietilenimina) y en WO 99/38528. Preferentemente, estos polipéptidos contienen entre 20 y 500 residuos aminoácidos, especialmente entre 30 y 200 residuos.

Estos péptidos policatiónicos pueden ser producidos químicamente o mediante recombinación o pueden derivarse partiendo de fuentes naturales.

Los (poli)péptidos catiónicos pueden ser también antimicrobianos con propiedades como las analizadas en {Ganz, T. 1999}. Estos (poli)péptidos pueden ser de origen procariota o animal o vegetal o pueden ser producidos químicamente o mediante recombinación (WO 02/13857). Los péptidos pueden pertenecer también a la clase de las defensinas (WO 02/13857). Las secuencias de dichos péptidos pueden encontrarse, por ejemplo, en la Base de Datos de Secuencias Antimicrobianas en la dirección de internet siguiente: http://www.bbcm.univ.trieste.it/\simtossi/pag2.html

Tales péptidos de defensa del huésped o defensivos son también una forma preferente del polímero policatiónico según la presente invención. Generalmente, un compuesto que permite, como un producto final, la activación (o regulación a la baja) del sistema inmune adaptativo, preferentemente mediada por APCs (incluyendo células dendríticas) es usado como polímero policatiónico.

Especialmente preferentes para el uso como péptidos policatiónicos en la presente invención son la catelecidina derivada de péptidos antimicrobianos o los derivados de la misma (solicitud de patente internacional WO 02/13857), especialmente péptidos antimicrobianos derivados de catelicidina de mamífero, preferentemente de ser humano, de bovino o de ratón.

Los péptidos policatiónicos derivados de fuentes naturales incluyen HIV-REV o HIV-TAT (péptidos catiónicos derivados, péptidos antennapedia, quitosano y otros derivados de quitina) y otros péptidos derivados de estos péptidos o proteínas mediante la producción bioquímica o recombinante. Otros péptidos policatiónicos preferentes son la catelina o las sustancias derivadas o relacionadas con la catelina. Por ejemplo, la catelina de ratón es un péptido, que tiene la secuencia de aminoácidos NH_{2}-RLAGLLRKGGEKIGEKLKKIGQKIKNEFQKLVPQPE-COOH. Las sustancias relacionadas o derivadas de la catelina contienen la totalidad o partes de la secuencia de la catelina con al menos 15-20 residuos de aminoácidos. Las derivaciones pueden incluir la sustitución o modificación de los aminoácidos naturales por aminoácidos que no están entre los 20 aminoácidos estándar. Además, pueden introducirse residuos catiónicos adicionales en tales moléculas de catelina. Es preferente que estas moléculas de catelina se combinen con el antígeno. Sorpresivamente, estas moléculas de catelina han resultado ser efectivas también como adyuvante para un antígeno sin la adición de adyuvantes adicionales. Por lo tanto, es posible usar tales moléculas de catelina como adyuvantes evidentes en formulaciones de vacunas con o sin sustancias inmunoactivadoras adicionales.

Otro péptido policatiónico preferente a ser usado según la presente invención es un péptido sintético que contiene al menos 2 motivos KLK separados por un conector de 3 a 7 aminoácidos hidrofóbicos (solicitud de patente internacional WO 02/32451). En el documento WO 02/32451 se divulga un adyuvante inductor de tipo 1 (inmunizador) que es capaz de mejorar fuertemente la respuesta inmune a un antígeno coadministrado específico y por lo tanto constituye un adyuvante altamente efectivo. El adyuvante (inmunizador) según el documento WO 02/32451 es un péptido que comprende una secuencia R1-XZXZNXZX-R2, donde N es un número entero entre 3 y 7, preferentemente 5, X es un residuo de aminoácido natural y/o no natural cargado positivamente, Z es un residuo de aminoácido seleccionado de entre el grupo que comprende L, V, I, F y/o W, y R1 y R2 son seleccionados independientemente uno del otro de entre el grupo que comprende -H, -NH2, -COCH3, -COH, un péptido con hasta 20 residuos de aminoácidos o un grupo reactivo péptido o un conector de péptidos con o sin un péptido; X-R2 puede ser también una amida, éster o tioéster del residuo de aminoácido C terminal. Un péptido específicamente preferente es KLKLLLLLKLK.

Según la presente invención, los péptidos policatiónicos pueden ser usados para la fabricación de cualquier medicamento, composición farmacéutica, especialmente vacunas que pueden ser usadas para el tratamiento de infección del VHC crónica, particularmente para el tratamiento de los pacientes que no han respondido o han respondido parcialmente a una terapia estándar principal contra el VHC mediante una combinación de interferón-alfa pegilado y el antiviral ribavirina o han sufrido una recaída después de la misma.

Preferentemente, los péptidos policatiónicos son usados para la fabricación de medicamentos, composiciones farmacéuticas, especialmente vacunas que comprenden antígenos del VHC, epítopos del VHC con lugar caliente (hotspot) y epítopos del VHC. Más preferentemente, los epítopos del VHC que se describen en los documentos
WO 01/24822 y PCT/EP2004/007540. Por lo tanto, los epítopos del VHC específicamente preferentes incluyen: uno o más, especialmente dos, tres, cuatro, cinco o seis de los epítopos siguientes: 100 101

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o fragmentos que contienen el epítopo de la célula-T (al menos 7, preferentemente al menos 8, incluso más preferentemente al menos 9 residuos de aminoácidos de longitud). Preferentemente, la vacuna según la presente invención contiene dos o más, incluso más preferentemente tres o más, especialmente cuatro o más de tales epítopos en combinación. Las vacunas preferentes contienen 3, 4, 5, 6 ó 7 epítopos individuales en una preparación (o dos preparaciones almacenadas y reconstituidas separadamente y aplicadas conjuntamente).

El medicamento usado según la presente invención es usado preferentemente para la inducción de células-T auxiliares CD4+ y células-T citotóxicas CD8+. Un campo de uso específicamente preferente es la aplicación del medicamento a un grupo especial de pacientes: el uso del presente medicamento para remplazar o suplementar una terapia estándar contra el VHC con interferón alfa y ribavirina, especialmente en pacientes en los que dicha terapia estándar no es efectiva o ya no es efectiva.

Preferentemente, el medicamento según la presente invención es usado en combinación con el tratamiento estándar, tal como un tratamiento con interferón. Preferentemente, puede ser usado para inducir respuestas de células-T de tipo I en pacientes con el VHC crónica, y/o para inducir respuestas de células-T similares a las observadas durante/después de una terapia estándar exitosa, y/o para incrementar las tasas de respondedores y/o reducir las tasas de recaídas después de una terapia estándar. Particularmente, el medicamento según la presente invención es usado en ensayos clínicos como un añadido tardío a una terapia estándar; los resultados confirman la excelente seguridad del medicamento, el cual no exacerba los efectos secundarios de una terapia estándar, tales como la leucopenia.

Preferentemente, el medicamento según la presente invención está diseñado específicamente para el genotipo 1 del VHC. Los pacientes con genotipo 1 han mostrado las menores tasas de respondedores durante una terapia estándar. De esta manera, debido a su capacidad para inducir las respuestas de las células-T de tipo I en pacientes de VHC crónica, el medicamento según la presente invención es usado preferentemente para remplazar o suplementar la ribavirina (es decir, IFN/IC41 en vez de IFN/riba).

El medicamento según la presente invención puede ser usado también en combinación con inhibidores de proteasa de moléculas pequeñas. Preferentemente, puede ser usado para inducir las respuestas de las células-T de tipo I en pacientes de VHC crónica y/o para inducir respuestas de células-T similares a las observadas durante/después de una terapia estándar exitosa. Por lo tanto, el medicamento según la presente invención puede ofrecer un modo de acción marcadamente diferente de los inhibidores de moléculas pequeñas. Por lo tanto, puede complementar la eficacia de los inhibidores de moléculas pequeñas en términos de tasas de respuesta, duración de respuesta, tasas de recaída, programa de dosificación óptimo. El medicamento según la presente invención no tiene efectos secundarios importantes, particularmente puede mejorar la relación eficacia/efectos secundarios de un inhibidor de moléculas
pequeñas.

El medicamento según la presente invención puede ser usado en combinación con imiquimod (un agonista de TLR7 en el producto Aldara/3M ya autorizado). Especialmente la movilización local de las células presentadoras de antígeno puede incrementar la potencia inmunológica del medicamento según la presente invención. Particularmente, pueden esperarse respuestas más fuertes contra más péptidos después de menos vacunaciones; las tasas de respondedores inmunológicos y la duración de las respuestas y por lo tanto también las respuestas virológicas pueden ser incrementadas; las respuestas más fuertes de las células-T contra más péptidos pueden superar el efecto rebote de ARN, por ejemplo, tal como se observa en el estudio IC41-201 usando el medicamento según la presente
invención.

La presente invención abarca también un método de tratamiento de pacientes de VHC descrito en la presente memoria con una cantidad efectiva del medicamento descrito.

La presente invención se ilustra además mediante las figuras siguientes, de cuyos ejemplos pueden tomarse características, realizaciones y ventajas adicionales. Debe entenderse que los presentes ejemplos se proporcionan solo a modo de ilustración y no como una limitación de la divulgación.

Figura 1: Proliferación de células-T auxiliares CD4+ en pacientes de VHC crónica. La IC41 puede inducir una proliferación considerable, pero no los péptidos por sí solos, o la poli-L-arginina por sí sola. Las vacunaciones fueron proporcionadas en los meses 0, 1, 2, 3, 4, 5. Los índices de estimulación para los péptidos de IC41 capaces de inducir respuestas de las células-T auxiliares CD4+ fueron determinados individualmente, sumándose las respuestas importantes. Se muestra la mediana de las respuestas de la totalidad de los 12 pacientes por grupo de dosi-
ficación.

Figura 2: Tasas de respondedores al ELIspot de interferón-gamma de pacientes vacunados con IC41 o péptido por sí solo o poli-L-Arginina por sí sola. Cada grupo comprendía 12 pacientes. Panel superior: Células-T auxiliares CD4+ y citotóxicas CD8+, panel inferior: células-T citotóxicas CD8+ por sí solas.

Ejemplos Ejemplo I Estudio clínico en seres humanos de la vacuna de péptidos contra VHC en pacientes de VHC crónica

La primera vacuna, en la que la Poli-L-Arginina ha sido aplicada en seres humanos es una vacuna terapéutica contra el virus de la Hepatitis C (VHC) completamente sintética. Esta vacuna fue denominada IC41 y consiste en una mezcla de péptidos sintéticos que representan los epítopos conservados de células T del VHC más Poli-L-Arginina como adyuvante sintético de células-T. La IC41 comprende cinco péptidos de diferentes regiones del polipéptido del VHC, es decir, los tres epítopos siguientes: HMWNFISGIQYLAGLSTLPGNPA, CINGVCWTV y DLMGYIPAV. El propósito de esta aproximación terapéutica es recuperar la denominada una respuesta de las células-T de tipo I contra el VHC en pacientes infectados crónicamente. Dicha respuesta se observa típicamente en aproximadamente el 15% de las personas infectadas que no pasan a ser crónicos sino que pueden depurar el VHC durante la fase aguda de la infección. Debido a que la experiencia preclínica con la Poli-L-Arginina descrita anteriormente ha mostrado su capacidad para inducir respuestas inmunes de tipo I en modelos animales, representa un prometedor adyuvante de células-T para vacunas de péptidos para el tratamiento de VHC.

Ya se han ensayado varias dosis de la vacuna mencionada en varios ensayos clínicos que comprendían más de 200 sujetos: en un estudio de la fase inicial 1, se obtuvieron datos sobre la seguridad y la inmunogenicidad preliminar de diversas dosificaciones. Los resultados de ese ensayo marcaron el inicio de un estudio de optimización de dosificación que comprendía 128 voluntarios sanos en 10 grupos de dosificación diferentes. El estudio fue un estudio controlado, de grupos paralelos, simple ciego, aleatorizado dirigido para evaluar la optimización de la dosificación y la seguridad de la vacuna de péptidos contra el VHC, IC41, en sujetos sanos y fue dirigida en un centro en Austria. Ciento veintiocho sujetos fueron asignados aleatoriamente para recibir una de entre siete diferentes dosis y proporciones de vacuna de péptidos contra el VHC con Poli-L-Arginina, vacuna de péptidos contra el VHC por sí sola, Poli-L-Arginina por sí sola o solución salina. Todos los sujetos recibieron cuatro vacunaciones administradas en intervalos mensuales. La inmunogenicidad fue analizada en cada uno de estos puntos temporales después de un mes respectivamente y tres meses después de la última vacunación.

La eficacia estimuladora de células-T de la Poli-L-Arginina fue ensayada en un ensayo clínico de la fase 2 en pacientes del virus de la Hepatitis C crónica, que no respondieron a o sufrieron una recaída a una terapia estándar con interferón/ribavirina.

Para la presente invención, se realizó un estudio doble ciego aleatorizado de la vacuna de péptidos contra el VHC, IC41, en pacientes con VHC crónica que no habían respondido a una terapia estándar principal contra el VHC o habían sufrido una recaída después de la misma. El estudio se realizó en 11 centros en Alemania, Austria y Polonia. Sesenta pacientes fueron asignados aleatoriamente para recibir tres diferentes dosis y proporciones de vacuna de péptidos contra el VHC con Poli-L-Arginina, vacuna de péptidos contra el VHC por sí sola o Poli-L-Arginina por sí sola.

Los pacientes varones y mujeres que cumplían los siguientes criterios de inclusión fueron incluidos en este estudio:

\bullet: Diagnosis de hepatitis C crónica, con un curso documentado de al menos seis meses (ALT > 1,5 veces el límite superior de la normalidad [LSN] en dos o más puntos temporales).

\bullet: Sin respuesta a una terapia estándar principal contra el VHC de seis o 12 meses (dependiendo del genotipo del VHC) o con recaída después de la misma.

\bullet: Positivo para ARN-VHC.

\bullet: Positivo para HLA-A2

\bullet: Positivo para anticuerpos del VHC.

\bullet: Biopsia hepática dentro de los 30 meses anteriores a la inclusión, que demuestra inflamación hepática y/o fibrosis.

\bullet: Resultados de laboratorios de hematología y bioquímica dentro de los límites normalmente esperados para la población del paciente (máximos valores hepáticos de 5xLSN).

\bullet: Edad de entre 18 y 65 años.

\bullet: Consentimiento informado por escrito obtenido previamente a la entrada al estudio.

En el presente estudio clínico, cada grupo comprendía 12 sujetos, positivos para HLA-A2. Los sujetos recibieron 6 vacunaciones en intervalos mensuales (en las visitas 3 a 8). Se tomó sangre para análisis inmunológicos previamente a la vacunación y en las visitas 6 a 8, un mes después de la última vacunación (visita 9), 3 meses después de la última vacunación (visita 10) y 6 meses después de la última vacunación (visita 11). Para la monitorización inmunológica de los ensayos clínicos, se aplicaron ensayos de células-T de la técnica actual para determinar los criterios de valoración inmunológica conforme a GLP/GCP: ensayo ELIspot de interferón-gamma, Ensayo de Proliferación de células-T, ensayo HLA-tetrámero/FACS. Estos ensayos permiten mediciones fiables de las respuestas de células-T específicas de epítopo inducidas por la vacuna terapéutica IC41 contra el VHC. Las respuestas inmunes de las células-T inducidas por la vacuna sirven como parámetros subrogados de la eficacia (Keilholz et al. 2002).

Como criterio de valoración principal se determinó la inmunogenicidad de las células T mediante un ensayo de proliferación de células T. El ensayo de proliferación permite la detección de células T específicas de péptido en muestras biológicas, tales como la sangre humana. La base del ensayo es que, las células T después de la estimulación con un péptido reconocido específicamente por su receptor de células T, reaccionan con la secreción de citoquinas y la proliferación subsiguiente. La proliferación de células puede ser medida mediante una diversidad de medios; entre las aproximaciones más sensibles está la incorporación de timidina etiquetada radioactivamente en el ADN sintetizado previamente a la división celular. Esta reacción puede llevarse a cabo en una placa de 96 pocillos. Cada pocillo contiene un número fijo de células, que son cultivadas en presencia del antígeno/péptido durante un par de días. Durante las últimas 16-20 horas se añade timidina etiquetada con tritio (3H-timidina). A continuación, las células son recogidas en una placa de filtro: el medio que contiene radioactividad libre es arrastrado, mientras que el ADN se pega al filtro. La radioactividad incorporada puede ser cuantificada por medio de un contador de radiación beta por escintilación determinando las cuentas-por-minuto (cpm). La salida usual es proporcionada como índice de estimulación (S.I.), que se define como las cpm de la muestra de ensayo dividido por las cpm del control negativo.

Como criterio de valoración secundario se determinó la inmunogenicidad de las células T mediante ELIspot de interferón gamma. El ELIspot permite la cuantificación de células T funcionales específicas de péptido (es decir, secretoras de citoquina) en muestras biológicas, tales como sangre humana. La base del ensayo es que, las células T tras la estimulación con un péptido reconocido específicamente por el receptor de células T reaccionan secretando citoquinas como la IFN-\gamma. Esta reacción puede llevarse a cabo en una placa de 96 pocillos. Las paredes-filtro de esta placa están cubiertas con un anticuerpo monoclonal mab específico para IFN-\gamma. Consecuentemente, cada célula que secreta IFN-\gamma deja un punto IFN-\gamma, que puede ser visualizado con una reacción cromática subsiguiente. Los puntos pueden ser contados usando lectores de placa automatizados. Los números obtenidos son una medida de la frecuencia de las células T secretoras de IFN-\gamma específicas de péptido en la muestra.

Como criterio de valoración secundario adicional se realizó un análisis HLA-tetrámero/FACS. Los tetrámeros HLA de clase I, formas recombinantes solubles de un complejo de la molécula HLA y péptido antigénico, se unen al receptor de células T específicas de antígeno usado para el reconocimiento de las células T. Mediante el uso de citometría de flujo con tetrámeros fluorescentes, los linfocitos T CD8+ específicos de antígeno pueden ser caracterizados y enumerados de manera fiable. El ensayo usa tetrámeros HLA-A*0201 iTag^{TM} hechos a medida producidos por Beckman Coulter Immunomics formando complejos con los epítopos de clase I de la IC41.

Los sujetos fueron clasificados como respondedores si mostraban repuestas de células T considerables en cualquiera de las visitas 4 a 11 y no tenían respuesta previamente al tratamiento. En el caso de inmunidad preexistente (respuesta de células T considerable contra cualquier péptido en la IC41 ya previamente a la vacunación), se requería un incremento de al menos 3 veces del valor preexistente para clasificar el efecto como una respuesta.

Como primer resultado importante, estos ensayos clínicos confirmaron el excelente perfil de seguridad de los péptidos completamente sintéticos en general y de la Poli-L-Arginina en particular. Además, se aprendieron varias lecciones importantes en relación a la activación de las células T humanas: en ambos estudios, las respuestas de las células T fueron ensayadas usando los ensayos de proliferación de [^{3}H]-timidina e IFN-\gamma ELIspot y la citometría de flujo (FACS). Estos ensayos, que han sido estandarizados y validados en el Laboratorio de Inmunología Clínica de Intercell AG permiten mediciones fiables de las respuestas de las células T específicas de epítopo inducidas por la vacunación. Todos los ensayos fueron realizados cumpliendo con los requerimientos de Buena Práctica de Laboratorio (GLP)/Buena Práctica Clínica (GDP). La estandarización del procedimiento de aislamiento de células sanguíneas en los diferentes sitios de investigación llevó a una alta tasa de ensayos evaluables. Sin embargo, debido a la falta de estandarización de los ensayos de células T entre laboratorios, la comparación de los resultados de este estudio con los datos publicados en ensayos similares es difícil. Se usaron células sanguíneas crioconservadas, resultando en una posible estimación a la baja de las respuestas de las células T comparada con los ensayos que utilizan sangre fresca.

En la población de pacientes de VHC crónica del estudio de la fase 2 se obtuvo una imagen ligeramente diferente: en general, las respuestas de las células T CD4+ y CD8+ a péptidos de IC41 eran más frecuentes y más vigorosas en las muestras sanguíneas periféricas de los pacientes que fueron inmunizados con péptido y Poli-L-Arginina conjuntamente, que en las muestras de los pacientes que fueron inmunizados con péptido por sí solo o Poli-L-Arginina por sí sola, confirmando el requerimiento de Poli-L-Arginina como adyuvante de célula T. Las tasas de respondedores de la vacuna fueron aproximadamente de dos a tres veces superiores en los grupos verum que en los grupos de control
(Fig. 1). Los respondedores con proliferación de células T fueron más numerosos en los grupos verum (30-60%) que en los grupos de control (0-17%).

Más importantemente, sin embargo, los respondedores al ELIspot de interferón-gamma fueron observados exclusivamente en los grupos verum (Fig. 2). Estos resultados demostraron por primera vez que la Poli-L-Arginina es capaz de inducir respuestas de tipo I incluso en el escenario de la infección de VHC crónica en pacientes que no podían ser curados mediante una terapia estándar con interferón/ribavirina. Se detectaron respuestas considerables al ELIspot de interferón-gamma tanto contra péptidos HLA-clase II (reconocido mediante células T auxiliares) como contra péptidos HLA-clase I (reconocidos mediante células T citotóxicas). El análisis de los datos hasta los obtenidos en el segundo chequeo inmunológico (visita 11) inclusive realizada 6 meses después de la última inmunización no revelaron diferencias importantes en las tasas de respondedores inmunológicos en comparación con los datos obtenidos en las Visitas 1 a 10, indicando sostenibilidad de la respuesta inmune inducida por IC41. El estudio divulgó también que la inmunidad de las células T contra el virus puede elevarse a un nivel que no es muy diferente del inducido en las vacunas sanas. De esta manera, la inmunodepresión puede no estar tan extendida como se anticipaba en los pacientes. Falta por dilucidar como dichas respuestas de las células T pueden ser aplicadas óptimamente para reducir la progresión de la enfermedad o reducir los síntomas y eventualmente depurar la infección.

En conjunto, la Poli-L-Arginina representa uno de los primeros adyuvantes sintéticos de células T, que ha sido capaz consistentemente (desde experimentos in vitro hasta pacientes incurables infectados crónicamente) de inducir y aumentar el tipo deseado de respuesta inmune. Su fácil fabricabilidad, su excelente perfil de seguridad y su eficacia incluso en escenarios tan difíciles como la infección de VHC crónica, lo convierten en una prometedora nueva herramienta en la lucha contra las enfermedades infecciosas y el cáncer.

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Ejemplo II La Proliferación de células T auxiliares CD4+ en pacientes de VHC crónica puede ser inducida mediante IC41, pero no por péptidos por sí solos, o por poli-L-Arginina por sí sola

Tal como se muestra en la Figura 1, la IC41 es capaz de inducir una respuesta proliferativa considerable en pacientes de VHC crónica. De manera interesante, ni los péptidos por sí solos ni la poli-L-Arginina por sí sola tienen esta capacidad, lo que prueba el efecto adyuvante de la poli-L-Arginina.

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Ejemplo III Se requiere poli-L-Arginina para inducir respuestas de células T de tipo I (interferón gamma) en pacientes de VHC crónica

Tal como se muestra en la Figura 2, la IC41 puede inducir células T secretoras de interferón gamma en los pacientes de VHC crónica, mientras que los péptidos por sí solos o la poli-L-Arginina por sí sola no pueden inducir ninguna respuesta. De manera importante, tanto las células-T auxiliares CD4+ como las células-T citotóxicas CD8+ pueden ser inducidas.

La secreción de interferón gamma es un sello distintivo de las respuestas de células-T de tipo I. Dichas respuestas se observan durante la fase aguda de la infección en los subconjuntos de pacientes de VHC que eliminan el virus y no pasan a una infección crónica. Las respuestas de células T-de tipo I se observan también en pacientes que siguen una terapia estándar con interferón y ribavirina. De esta manera, la inducción de respuestas de células-T de tipo I como las conseguidas mediante IC41 es un primer objetivo de la vacunación terapéutica contra el VHC.

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Referencias

Bellentani S, Miglioli L, Masutti F, Saccoccio G, Tiribelli C. Epidemiology of hepatitis C virus infection in Italy: the slowly unraveling mystery. Microbes Infect. 2000 2 de Nov(14):1757-63.

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Fried M, Shiffman M, et al. Peginterferon Alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection. N Engl J Med, Vol. 347, No. 13. 26 de Septiembre, 2002; 975-982.

Claims

1. Uso de péptidos policatiónicos para la preparación y fabricación de medicamentos o composiciones farmacéuticas, que comprende antígenos del VHC o epítopos del VHC para el tratamiento de pacientes con infecciones de VHC crónica.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que los medicamentos o las composiciones farmacéuticas son vacunas.

3. Uso según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque los pacientes son aquellos pacientes que no han respondido o han respondido parcialmente a una terapia estándar principal contra el VHC mediante una combinación de interferón-alfa pegilado y el antiviral ribavirina o han sufrido una recaída después de la misma.

4. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque los péptidos policatiónicos contienen entre 20 y 500 residuos de aminoácidos.

5. Uso según la reivindicación 4, caracterizado porque los péptidos policatiónicos contienen entre 30 y 200 residuos aminoácidos.

6. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el péptido policatiónico es poliarginina o polilisina.

7. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el medicamento es usado para la inducción de células-T-auxiliares CD4+ y células-T citotóxicas CD8+.

8. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el medicamento es usado para remplazar o suplementar una terapia estándar contra el VHC con interferón alfa y ribavirina.

9. Uso según la reivindicación 8, caracterizado porque el medicamento es para pacientes en los que dicha terapia estándar no es efectiva o ya no es efectiva.