ES2314931T3 - Utilizacion de 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina para el tratamiento de sintomas de la enfermedad de huntington. - Google Patents
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Abstract
Compuesto para su utilización para la detención o el retraso de la progresión de uno o más síntomas de la enfermedad de Huntington en un paciente cuyos síntomas se seleccionan entre movimientos involuntarios y/o degeneración ambulatoria, siendo dicho compuesto un isómero (+) de 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Description
Utilización de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina para el tratamiento de
síntomas de la enfermedad de Huntington.
Esta invención se refiere a la utilización de
dihidrotetrabenazina para el tratamiento de la enfermedad de
Huntington.
La enfermedad de Huntington, antes conocida como
Corea de Huntington, es una enfermedad neurodegenerativa
hereditaria actualmente incurable. La enfermedad está causada por
una expansión de repetición del trinucleótido CAG (denominada
mutación HD) en el gen IT15 localizado en el cromosoma 4p16.3 que
produce una forma anormal de una proteína denominada huntingtina.
Esta proteína anormal desencadena un proceso que conduce a la muerte
neuronal en la región del cuerpo estriado del cerebro, posiblemente
debido a la aglutinación o a la agregación de la proteína anormal
dentro de muchos tipos de neuronas.
El gen de la enfermedad de Huntington (HD)
comprende un segmento de DNA que contiene la secuencia repetitiva
de nucleótidos CAG que codifica el aminoácido glutamina. Se ha
comprobado que cuando existen treinta o menos repeticiones CAG
dentro del gen la persona que tiene dicho gen no contraerá HD. Sin
embargo, las personas que tienen un gen en el que hay más de
cuarenta repeticiones CAG tienden a contraer la enfermedad.
La enfermedad de Huntington se transmite a
través de un patrón hereditario dominante autosómico, de modo que
cada hijo de un progenitor afectado por HD tiene un 50% de
posibilidades de heredar el trastorno. Los síntomas de la
enfermedad de Huntington aparecen típicamente a edades comprendidas
entre aproximadamente los 30 y los 50 años y la enfermedad progresa
normalmente a lo largo de un período de 10 - 25 años. Las
características y síntomas de la enfermedad incluyen cambios de
personalidad, depresión, cambios de estado de ánimo, paso
vacilante, corea involuntaria, tics y movimientos y temblores
espasmódicos, demencia, mala articulación de las palabras,
alteración del juicio, dificultad para tragar y aspecto de
embriaguez.
Una vez que un individuo muestra los síntomas de
la enfermedad de Huntington, el curso de la enfermedad puede durar
entre diez y treinta años. Típicamente, el curso de la HD se puede
dividir, en líneas generales, en tres etapas: precoz, intermedia y
tardía.
En la etapa precoz, los pacientes todavía pueden
desarrollar la mayor parte de sus actividades habituales. Todavía
pueden trabajar y conducir. Si bien pueden mostrar ligeros
movimientos incontrolables, tartamudeo y torpeza, falta de
concentración, lapsus de memoria a corto plazo y depresión, y
también cambios de estado de ánimo, los movimientos involuntarios
son relativamente suaves, el habla sigue siendo clara y la demencia,
de existir, es leve.
Durante la etapa intermedia, la discapacidad de
los pacientes es mayor y normalmente necesitan ayuda para algunas
de sus actividades rutinarias diarias. Caídas, pérdida de peso y
dificultades para tragar pueden ser algunos de los problemas
sufridos durante esta etapa, y la demencia resulta más obvia para el
observador ocasional.
Durante la etapa tardía, los pacientes se
deterioran hasta el punto de requerir prácticamente un cuidado total
y muchos necesitan una atención constante en hospitales o clínicas.
En esta etapa es posible que ya no puedan caminar o hablar y,
aunque pueden mostrar menos movimientos involuntarios, se pueden
volver más rígidos. Los pacientes en esta etapa frecuentemente no
pueden tragar los alimentos. En esta etapa, la mayor parte de los
pacientes pierde la perspicacia y aparentemente no es consciente de
su entorno. Cuando el paciente finalmente fallece, la causa de la
muerte normalmente está relacionada con las mismas causas naturales
que conducen a la muerte en otros pacientes gravemente debilitados,
como desnutrición o neumonía.
De acuerdo con el US National Institute of
Neurological Disorders and Stroke (NINDS), que forma parte del
National Institute of Health (NIH), actualmente no hay ningún modo
de detener o revertir el curso de la enfermedad de Huntington.
Ya ha habido intentos de desarrollar
tratamientos para la HD y un estudio de Karpuj y col., en Nature
Medicine, febrero de 2002, vol. 8, nº 2, páginas 143 - 149,
incluye la administración de cistamina. Aparentemente, la cistamina
inactiva la enzima transglutaminasa, que ayuda a crear las
aglutinaciones de la proteína huntingtina consideradas responsables
de la enfermedad. No obstante, de acuerdo con los conocimientos de
los solicitantes, actualmente no existe ninguna medicina en general
disponible para tratar o detener la progresión de la enfermedad.
El descubrimiento del gen responsable de la
enfermedad de Huntington (véase el trabajo del Huntington's Disease
Collaborative Group, Cell, vol. 72, 26 de marzo de 1993,
página 971) ha permitido el desarrollo de pruebas diagnósticas para
comprobar la presencia del la forma mutante del gen. Las pruebas
diagnósticas, que utilizan la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) para detectar la cantidad de repeticiones CAG en el gen
IT-15, se pueden conseguir fácilmente en la
actualidad y permiten predecir si un paciente va a desarrollar los
síntomas de la enfermedad de Huntington; véase por ejemplo la
publicación de M. Hayden y col., Am. J. Hum. Genet.
55:606-617 (1994); el artículo de S. Hersch, "The
Neurogenetics Genie: Testing for the Huntington's disease
mutation." Nuerol. 1994; 44:1369-1373; y
el artículo de R.R. Brinkman y col. (1997), "The likehood of
being affected with Huntington disease by a particular age, for a
specific CAG size", Am. J. Hum. Genet.
60:1202-1210.
La tetrabenazina (nombre químico:
1,3,4,6,7,11b-hexahidro-9,10-dimetoxi-3-(2-metilpropil)-2H-benzo(a)quinolizin-2-ona)
se utiliza como fármaco desde finales de los años 50. Desarrollada
inicialmente como antipsicótico, la tetrabenazina se utiliza en la
actualidad para el tratamiento sintomático de trastornos de
movimiento hipercinéticos, tales como la enfermedad de Huntington,
el hemibalismo, la corea senil, tics, la discinesia tardía y el
síndrome de Tourette, véase por ejemplo Jankovic y col., Am. J.
Psychiatry. (1999) Agosto; 156(8):1279-81
y Jankovic y col., Neurology (1997) Febrero;
48(2):358-62.
El principal efecto farmacológico de la
tetrabenazina consiste en reducir el suministro de monoaminas (por
ejemplo dopamina, serotonina y norepinefrina) en el sistema nervioso
central mediante la inhibición de la isoforma 2 del transportador
vesicular de monoamina humano (hVMAT2). El fármaco también bloquea
los receptores de la dopamina postsinápticos.
La tetrabenazina es un fármaco eficaz y seguro
para el tratamiento de diversos trastornos de movimiento
hipercinéticos y, a diferencia de los agentes neurolépticos
típicos, no se ha demostrado que provoque discinesia tardía. No
obstante, la tetrabenazina sí muestra una serie de efectos
secundarios relacionados con la dosis, incluyendo depresiones,
parkinsonismo, somnolencia, nerviosismo o ansiedad, insomnio y, en
casos excepcionales, síndrome neuroléptico maligno.
El efecto fundamental se parece mucho al de la
reserpina, pero se diferencia de éste en que carece de actividad en
el transportador VMAT1. La falta de actividad en el transportador
VMAT1 significa que la tetrabenazina tiene menos actividad
periférica que la reserpina y, en consecuencia, no produce efectos
secundarios relacionados con el VMAT1, por ejemplo hipotensión.
La siguiente Figura 1 muestra la estructura
química de la tetrabenazina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto tiene centros quirales en los
átomos de carbono 3 y 11b y, por tanto, teóricamente pueden existir
en total cuatro formas isoméricas, como se muestra en la Figura
2.
\vskip1.000000\baselineskip
En la Figura 2, la estereoquímica de cada
isómero se define utilizando la nomenclatura "R" y "S"
desarrollada por Cahn, Ingold y Prelog, véase Advanced Organic
Chemistry de Jerry March, 4ª edición, John Wiley & Sons,
Nueva York, 1992, páginas 109-114. En la Figura 2 y
en cualquier otro lugar de esta solicitud de patente, las
designaciones "R" y "S" se dan en el orden de los números
de posición de los átomos de carbono. Por ejemplo, RS es una
notación abreviada de 3R,11bS. De forma similar,
cuando hay tres centros quirales presentes, como en el caso de las
dihidrotetrabenazinas descritas más abajo, las designaciones
"R" o "S" están enumeradas en el orden de
los átomos de carbono 2, 3 y 11b. Por consiguiente, el isómero
2S,3R,11bR se denomina de forma abreviada
SRR y así sucesivamente.
La tetrabenazina comercial es una mezcla
racémica de los isómeros RR y SS y, según parece, los
isómeros RR y SS (denominados en lo sucesivo de forma
individual o colectiva como trans-tetrabenazina, ya que los
átomos de hidrógeno en las posiciones 3 y 11b tienen una orientación
relativa trans) son los isómeros termodinámicamente más
estables.
La tetrabenazina tiene una biodisponibilidad más
bien pobre y variable. Se metaboliza en gran parte mediante el
metabolismo en el primer paso, y en la orina típicamente se detecta
muy poca o ninguna tetrabenazina no metabolizada. El metabolito
principal es la dihidrotetrabenazina (nombre químico:
2-hidroxi-3-(2-metilpropil)-1,3,4,6,7,11b-hexahidro-9,10-dimetoxi-benzo(a)quinolizina),
que se forma por reducción del grupo 2-ceto en
tetrabenazina, y se cree que es la principal responsable de la
actividad del fármaco (véase Mehvar y col., Drug Metab. Disp,
15, 250-255 (1987) y J. Pharm. Sci., 76, nº
6, 461-465 (1987), y Roberts y col., Eur. J.
Clin. Pharmacol., 29: 703-708 (1986)).
Ya se han identificado y caracterizado cuatro
isómeros de la dihidrotetrabenazina, todos ellos derivados de los
isómeros RR y SS más estables de la tetrabenazina
precursora y con una orientación relativa trans entre los
átomos de hidrógeno en las posiciones 3 y 11b (véase Kilbourn y
col., Chirality, 9:59-62 (1997) y Brossi y
col., Helv. Chim. Acta, vol. XLI, nº 193, páginas
1793-1806 (1958)). Los cuatro isómeros son:
(+)-\alpha-dihidrotetrabenazina,
(-)-\alpha-dihidrotetrabenazina,
(+)-\beta-dihidrotetrabenazina y
(-)-\beta-dihidrotetrabenazina.
Se considera que los cuatro isómeros de la dihidrotetrabenazina
conocidos tienen la estructura mostrada en la Figura 3.
Kilbourn y col ., (véase Eur. J.
Pharmacol., 278:249-252 (1995) y Med. Chem.
Res., 5:113-126 (1994)) investigaron la unión
específica de los isómeros de dihidrotetrabenazina individuales con
marcado radiactivo en el cerebro de ratas conscientes. Descubrieron
que el isómero
(+)-\alpha-[^{11}C]dihidrotetrabenazina
(2R,3R,11bR) se acumulaba en las regiones del
cerebro asociadas a una mayor concentración del transportador de
dopamina de la membrana neuronal (DAT) y del transportador vesicular
de monoaminas (VMAT2). Sin embargo, el isómero
(-)-\alpha-[^{11}C]dihidrotetrabenazina,
esencialmente inactivo, se distribuía de forma prácticamente
uniforme en el cerebro, lo que sugería que no se estaba produciendo
una unión específica a DAT y VMAT2. Los estudios in vivo
estaban en correlación con estudios in vitro que demostraban
que el isómero
(+)-\alpha-[^{11}C]dihidrotetrabenazina
presenta un K_{i} para [^{3}H]metoxitetrabenazina más de
2.000 veces mayor que la K_{i} del isómero
(-)-\alpha-[^{11}C]dihidrotetrabenazina.
La solicitud de patente internacional número
PCT/GB2005/000464 (número de publicación WO 2005/077946) describe
la preparación y la utilización de isómeros de dihidrotetrabenazina
farmacéuticos derivados de los isómeros inestables RS y
SR de tetrabenazina (denominados en lo sucesivo de forma
individual o colectiva como cis-tetrabenazina, ya que los
átomos de hidrógeno en las posiciones 3 y 11b tienen una orientación
relativa cis).
Ahora se ha comprobado que la
cis-dihidrotetrabenazina descrita en nuestra solicitud
anterior nº PCT/GB2005/
000464 tiene la capacidad de detener o retrasar el desarrollo de como mínimo algunos de los síntomas de la enfermedad de Huntington. Más en particular, se ha comprobado que, mediante la administración de las cis-dihidrotetrabenazinas de la invención, se pueden detener o retrasar considerablemente el deterioro del andar y el aumento de los movimientos involuntarios (por ejemplo temblores y tics) asociados a la enfermedad de Huntington.
000464 tiene la capacidad de detener o retrasar el desarrollo de como mínimo algunos de los síntomas de la enfermedad de Huntington. Más en particular, se ha comprobado que, mediante la administración de las cis-dihidrotetrabenazinas de la invención, se pueden detener o retrasar considerablemente el deterioro del andar y el aumento de los movimientos involuntarios (por ejemplo temblores y tics) asociados a la enfermedad de Huntington.
Por consiguiente, en un primer aspecto, la
invención proporciona un compuesto útil para detener o retrasar la
progresión de uno o más síntomas de la enfermedad de Huntington en
un paciente, seleccionándose estos síntomas de entre movimientos
involuntarios y degeneración del andar, y siendo el compuesto un
isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o una
sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Actualmente existen pruebas diagnósticas para
determinar si un individuo tiene el gen mutante de la enfermedad de
Huntington. Dado que, de forma prácticamente invariable, una persona
que tenga el gen mutante desarrollará la enfermedad de Huntington,
resultaría ventajoso poder evitar, detener o retrasar la aparición
de la enfermedad durante el período de la vida de una persona en el
que ésta tiene más probabilidades de desarrollar la enfermedad.
Por consiguiente, en otro aspecto, la invención
proporciona un compuesto útil para el tratamiento profiláctico de
la enfermedad de Huntington en un paciente que tenga el gen mutante
responsable de ésta, siendo el compuesto un isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o una
sal farmacéuticamente aceptable del mismo tal como se define
aquí.
El tratamiento profiláctico puede estar dirigido
a la prevención o al retraso de la progresión subclínica de la
enfermedad en un paciente. La expresión "progresión subclínica"
se refiere al desarrollo de la enfermedad antes del punto en el que
los síntomas de la enfermedad se hacen patentes en la investigación
clínica, en contraposición a la investigación bioquímica o a la
investigación utilizando técnicas de exploración tales como
tomografía computarizada o la formación de imágenes por resonancia
magnética (MRI).
Por ejemplo, la cis-dihidrotetrabenazina
se puede administrar de forma profiláctica a personas con edades
comprendidas entre los 15 y los 50 años, por ejemplo de 20 - 50
años, 25 - 50 años o 30 - 50 años, que tengan la forma mutante del
gen de la HD pero que todavía no hayan desarrollado síntomas de la
enfermedad.
Las referencias a la forma mutante del gen de la
enfermedad de Huntington o expresiones similares en esta solicitud
se refieren a formas del gen que presentan como mínimo treinta y
cinco, más típicamente como mínimo cuarenta, por ejemplo como
mínimo 45 o como mínimo 50, repeticiones de CAG en el gen
IT-15. En algunos casos puede haber una cantidad
muy alta de repeticiones CAG (por ejemplo 70 ó más) y es probable
que las personas que tengan una forma mutante del gen con una
cantidad tan alta de repeticiones CAG desarrollen la forma juvenil
de la enfermedad.
La cis-dihidrotetrabenazina puede ser
administrada de forma profiláctica a personas de menos de 30 años
de edad, por ejemplo de 10-29, más típicamente
15-29 ó 20-29 años de edad, que
hayan sido sometidas a pruebas y hayan mostrado tener formas
mutantes del gen IT-15 en las que el número de
repeticiones de CAG es mayor de 60, más particularmente como mínimo
65 y preferentemente 70 ó más.
La cis-dihidrotetrabenazina utilizada en
la presente invención es
(+)-3,11b-cis-dihidrotetrabenazina.
La 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina
utilizada en la invención se puede encontrar en forma esencialmente
pura, por ejemplo con una pureza isomérica superior al 90%,
típicamente superior al 95% y preferiblemente superior al 98%.
En este contexto, la expresión "pureza
isomérica" se refiere a la cantidad de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina presente en relación con la
cantidad total o la concentración de dihidrotetrabenazina de todas
la formas isoméricas. Por ejemplo, si el 90% de toda la
dihidrotetrabenazina presente en la composición es
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina, la pureza isomérica es del
90%.
La 11b-cis-dihidrotetrabenazina utilizada
en la invención se puede encontrar en forma de una composición
esencialmente libre de 3,11b-trans-dihidrotetrabenazina,
preferentemente como una composición que contenga menos de un 5% de
3,11b-trans-dihidrotetrabenazina, de forma especialmente
preferente menos de un 3% de
3,11b-trans-dihidrotetrabenazina y de forma totalmente
preferente menos de un 1% de
3,11b-trans-dihidrotetrabenazina.
Tal como se utiliza aquí, la expresión
"3,11b-cis-" significa que los átomos de hidrógeno en
las posiciones 3 y 11b de la estructura de la dihidrotetrabenazina
están en la orientación relativa cis, tal como se muestra en
la siguiente fórmula I.
Existen cuatro isómeros posibles de la
dihidrotetrabenazina que tienen la configuración 3,11b-cis, y
éstos son el isómero 2S,3S,11bR, el isómero
2R,3R,11bS, el isómero
2R,3S,11bR y el isómero
2S,3R,11bS. Estos cuatro isómeros han sido
aislados y caracterizados y tienen las siguientes estructuras:
a) el isómero 2S,3S,11bR de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene la fórmula (Ia):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
b) el isómero
2R,3R,11bS de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene la fórmula
(Ib):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
c) el isómero
2R,3S,11bR de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene la fórmula
(Ic):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
d) el isómero
2S,3R,11bS de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene la fórmula
(Id):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los isómeros individuales de la invención se
pueden caracterizar por sus propiedades espectroscópicas, ópticas y
cromatográficas, y también por sus configuraciones estereoquímicas
absolutas, determinadas mediante cristalografía de rayos X.
Los isómeros a utilizar de acuerdo con la
presente invención son los isómeros (+) dextrógiros.
Un isómero particularmente preferente es el
isómero (Ia), es decir el isómero 2S,3S,11bR de
la 3,11b-cis-dihidrote-
trabenazina.
trabenazina.
Sin que ello implique ninguna configuración
absoluta o estereoquímica particular, los cuatro isómeros se pueden
caracterizar de la siguiente manera:
\vskip1.000000\baselineskip
Actividad óptica medida por ORD (metanol, 21ºC):
levógiro (-).
Espectro IR (KBr sólido), espectro
^{1}H-NMR (CDCl_{3}) y espectro
^{13}C-NMR (CDCl_{3}) esencialmente tal como se
describen en la Tabla 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Actividad óptica medida por ORD (metanol, 21ºC):
dextrógiro (+).
Espectro IR (KBr sólido), espectro
^{1}H-NMR (CDCl_{3}) y espectro
^{13}C-NMR (CDCl_{3}) esencialmente tal como se
describe en la Tabla 1, y propiedades cristalográficas de rayos X
tal como se describen en el Ejemplo 4.
\vskip1.000000\baselineskip
Actividad óptica medida por ORD (metanol, 21ºC):
dextrógiro (+).
Espectro IR (KBr sólido), espectro
^{1}H-NMR (CDCl_{3}) y espectro
^{13}C-NMR (CDCl_{3}) esencialmente tal como se
describe en la Tabla 2.
\vskip1.000000\baselineskip
Actividad óptica medida por ORD (metanol, 21ºC):
levógiro (-).
Espectro IR (KBr sólido), espectro
^{1}H-NMR (CDCl_{3}) y espectro
^{13}C-NMR (CDCl_{3}) esencialmente tal como se
describen en la Tabla 2.
Los valores ORD correspondientes a cada isómero
se indican en los siguientes ejemplos, pero se ha de señalar que
estos valores se dan a modo de ejemplo y pueden variar en función
del grado de pureza del isómero y según la influencia de otras
variables, como fluctuaciones de temperatura y el efecto de
moléculas de disolvente residuales.
En este contexto, las expresiones "pureza
enantiomérica" y "enantioméricamente puro" se refieren a la
cantidad de un determinado enantiómero de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina presente en relación con la
cantidad total o la concentración de dihidrotetrabenazina de todas
las formas enantioméricas e isoméricas. Por ejemplo, si el 90% de
la cantidad total de dihidrotetrabenazina presente en la composición
se encuentra en forma de un solo enantiómero, la pureza
enantiomérica es del 90%.
Por ejemplo, en cada aspecto y realización de la
invención, cada enantiómero individual puede estar presente en una
pureza enantiomérica de como mínimo el 55% (por ejemplo como mínimo
el 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o
100%).
\vskip1.000000\baselineskip
A no ser que el contexto lo requiera de otra
manera, una referencia en esta solicitud a la dihidrotetrabenazina y
sus isómeros incluye dentro de su alcance no sólo la base libre de
la dihidrotetrabenazina, sino también sus sales, y en particular sus
sales de adición de ácido.
Los ácidos particulares a partir de los cuales
se forman las sales de adición de ácido incluyen aquellos ácidos
que tienen un valor pKa inferior a 3,5, normalmente menor de 3. Por
ejemplo, las sales de adición de ácido se pueden formar a partir de
un ácido con un pKa entre +3,5 y -3,5.
Las sales de adición de ácido preferentes
incluyen las formadas con ácidos sulfónicos, como ácido
metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido
toluensulfónico, ácido canforsulfónico y ácido
naftalenosulfónico.
Un ácido particular a partir del cual se pueden
formar sales de adición de ácido es el ácido metanosulfónico.
Las sales de adición de ácido se pueden preparar
mediante los métodos aquí descritos o por métodos químicos
convencionales, tales como los descritos en Pharmaceutical Salts:
Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor),
Camille G. Wermuth (Editor), ISBN:
3-90639-026-8, tapa
dura, 388 páginas, agosto de 2002. En general, estas sales se
pueden preparar sometiendo a reacción la forma de base libre del
compuesto con el ácido o la base apropiados en agua o en un
disolvente orgánico, o en una mezcla de ambos. Generalmente se
utilizan medios no acuosos, como éter, acetato de etilo, etanol,
isopropanol o acetonitrilo.
Las sales son típicamente sales
farmacéuticamente aceptables. No obstante, también se pueden
preparar sales farmacéuticamente no aceptables como formas
intermedias para convertirlas después en sales farmacéuticamente
aceptables. Estas sales farmacéuticamente no aceptables también
forman parte de la invención.
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La dihidrotetrabenazina de la invención se puede
preparar mediante un proceso que comprende la reacción de un
compuesto de la fórmula (II):
con uno o más reactivos adecuados
para hidratar el enlace doble 2,3 en el compuesto de fórmula (II) y
después, si así se requiere, la separación y el aislamiento de la
forma isomérica de dihidrotetrabenazina
deseada.
La hidratación del enlace doble 2,3 se puede
llevar a cabo mediante hidroboración utilizando un reactivo de
borano, tal como diborano o un éter de boro (por ejemplo
borano-tetrahidrofurano (THF)), para obtener un
aducto alquilboro intermedio, seguida de oxidación del aducto
alquilboro e hidrólisis en presencia de una base. La hidroboración
se lleva a cabo típicamente en un disolvente aprótico polar seco
(por ejemplo THF), normalmente a una temperatura no elevada, por
ejemplo a temperatura ambiente. El aducto
boro-alqueno típicamente se oxida con un agente
oxidante, como peróxido de hidrógeno, en presencia de una base que
proporcione una fuente de iones hidróxido, como hidróxido de amonio
o un hidróxido de metal alcalino, por ejemplo hidróxido de potasio
o hidróxido de sodio. La secuencia de reacciones de
hidroboración-oxidación-hidrólisis
del Proceso A produce típicamente isómeros de dihidrotetrabenazina
en los que los átomos de hidrógeno de las posiciones 2 y 3 tienen
una orientación relativa trans.
Los compuestos de fórmula (II) se pueden
preparar reduciendo la tetrabenazina para obtener una
dihidrotetrabenazina y deshidratando después la
dihidrotetrabenazina. La reducción de la tetrabenazina se puede
llevar a cabo utilizando un reactivo de hidruro de aluminio, tal
como un hidruro de litio-aluminio, o un reactivo
borohidruro, como borohidruro de sodio, borohidruro de potasio o un
derivado borohidruro, por ejemplo un borohidruro de alquilo, como
borohidruro de tri-sec-butilo-litio.
Alternativamente, el paso de reducción se puede llevar a cabo
empleando una hidrogenación catalítica, por ejemplo mediante un
catalizador de níquel Raney o de óxido de platino. Las condiciones
adecuadas para llevar a cabo el paso de reducción se describen más
detalladamente más abajo o se pueden encontrar en el documento US
2,843,591 (Hoffmann - La Roche) y Brossi y col., Helv. Chim.
Acta., vol. XLI, nº 193, páginas 1793-1806
(1958).
Dado que la tetrabenazina utilizada como
material de partida para la reacción de reducción consiste
típicamente en una mezcla de los isómeros RR y SS (es
decir, trans-tetrabenazina), la dihidrotetrabenazina formada
mediante el paso de reducción tendrá la misma configuración
trans alrededor de las posiciones 3 y 11b y adoptará la
forma de uno o más de los isómeros de dihidrotetrabenazina conocidos
mostrados más arriba en la Figura 3. Por consiguiente, el Proceso A
puede consistir en tomar los isómeros de dihidrotetrabenazina
conocidos, deshidratarlos para formar el alqueno (II) y después
"rehidratar" el alqueno (II) empleando condiciones que den como
resultado los nuevos isómeros de cis-dihidrotetrabenazina de
la invención requeridos.
La deshidratación de la dihidrotetrabenazina
para formar el alqueno (II) se puede llevar a cabo utilizando
diversas condiciones estándar para deshidratar alcoholes y formar
alquenos, véase por ejemplo J, March (ídem), páginas
389-390 y las referencias incluidas en dicho
documento. Ejemplos de estas condiciones incluyen la utilización de
agentes deshidratantes basados en fósforo, como haluros de fósforo u
oxihaluros de fósforo, por ejemplo POCl_{3} y PCl_{5}. Como
alternativa a la deshidratación directa, el grupo hidroxilo de la
dihidrotetrabenazina se puede convertir en un grupo saliente L, tal
como un halógeno (por ejemplo cloro o bromo), y después someter a
condiciones (por ejemplo en presencia de una base) para eliminar
H-L. La conversión del grupo hidroxilo en un haluro
se puede llevar a cabo utilizando métodos conocidos por los químicos
especializados, por ejemplo mediante reacción con tetracloruro de
carbono o tetrabromuro de carbono en presencia de una
trialquil-fosfina o triaril-fosfina,
como trifenilfosfina o tributilfosfina.
La tetrabenazina utilizada como material de
partida en la reducción para producir la dihidrotetrabenazina se
puede obtener comercialmente o se puede sintetizar mediante el
método descrito en el documento US 2,830,993
(Hoffmann-La Roche).
Otro proceso (Proceso B) para preparar una
dihidrotetrabenazina de la invención consiste en someter un
compuesto de fórmula (III):
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a las condiciones necesarias de
apertura de anillo del grupo 2,3-epóxido en el
compuesto de fórmula (III), y después, si así se requiere, separar y
aislar la forma isomérica de dihidrotetrabenazina
deseada.
La apertura de anillo se puede llevar a cabo de
acuerdo con los métodos conocidos de apertura de anillos epóxido.
Sin embargo, un método actualmente preferente para abrir el anillo
epóxido consiste en una apertura de anillo por reducción, que se
puede lograr utilizando un agente reductor tal como
borano-THF. La reacción con
borano-THF se puede llevar a cabo en un disolvente
aprótico polar, como éter (por ejemplo tetrahidrofurano),
normalmente a temperatura ambiente, e hidrolizando a continuación
el complejo de boro así formado mediante calentamiento en presencia
de agua y una base a la temperatura de reflujo del disolvente. El
Proceso B da lugar típicamente a isómeros de dihidrotetrabenazina
en los que los átomos de hidrógeno de las posiciones 2 y 3 tienen
una orientación relativa cis.
Los compuestos epóxido de fórmula (III) se
pueden preparar mediante epoxidación de un alqueno de la fórmula
(II) arriba mostrada. La reacción de epoxidación se puede llevar a
cabo empleando condiciones y reactivos muy conocidos por los
químicos especializados, véase por ejemplo J. March (ídem),
páginas 826-829 y las referencias incluidas en
dicho documento. Típicamente, para provocar la epoxidación se puede
utilizar un perácido, tal como ácido meta-cloroperbenzoico
(MCPBA), y otro agente oxidante, como ácido perclórico.
Cuando los materiales de partida para los
procesos A y B consisten en mezclas de enantiómeros, los productos
de los procesos serán típicamente pares de enantiómeros, por ejemplo
mezclas racémicas, posiblemente junto con impurezas
diastereoisoméricas. Los diastereoisómeros no deseados se pueden
eliminar mediante técnicas tales como cromatografía (por ejemplo
HPLC) y los enantiómeros individuales se pueden separar mediante
diversos métodos conocidos por los químicos especializados. Por
ejemplo, se pueden separar mediante:
- i)
- cromatografía quiral (cromatografía sobre un soporte quiral); o
- ii)
- por formación de una sal con un ácido quiral ópticamente puro, separación de las sales de los dos diastereoisómeros mediante cristalización fraccionada y después separación de la dihidrotetrabenazina de la sal; o
- iii)
- formación de un derivado (como un éster) con un agente de derivación quiral ópticamente puro (por ejemplo un agente de esterificación), separación de los epímeros resultantes (por ejemplo mediante cromatografía) y después conversión del derivado en la dihidrotetrabenazina.
Un método para separar pares de enantiómeros
obtenidos de cada uno de los Procesos A y B, y que ha demostrado
ser particularmente eficaz, consiste en esterificar el grupo
hidroxilo de la dihidrotetrabenazina con una forma ópticamente
activa de un ácido de Mosher, como el isómero R (+) mostrado
más abajo, o una forma activa del mismo:
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Los ésteres resultantes de los dos enantiómeros
de la dihidrobenazina se pueden separar después mediante
cromatografía (por ejemplo HPLC) y los ésteres separados se pueden
hidrolizar para obtener los isómeros de dihidrobenazina
individuales utilizando una base, por ejemplo un hidróxido de metal
alcalino (por ejemplo NaOH), en un disolvente polar tal como
metanol.
Como alternativa al uso de mezclas de
enantiómeros como materiales de partida en los Procesos A y B y
separación subsiguiente de enantiómeros, los Procesos A y B se
pueden llevar a cabo en cada caso utilizando como materiales de
partida enantiómeros simples que conducen a productos en los que
predomina un enantiómero simple. Los enantiómeros simples del
alqueno (II) se pueden preparar sometiendo la RR/SS tetrabenazina a
una reducción estereoselectiva utilizando borohidruro de
tri-sec-butilo-litio para obtener una mezcla
de enantiómeros SRR y RSS de la dihidrotetrabenazina, separando los
enantiómeros (por ejemplo mediante cristalización fraccionada) y
deshidratando después un enantiómero simple de la
dihidrotetrabenazina separado para obtener, predominante o
exclusivamente, un enantiómero simple del compuesto de fórmula
(II).
Los Procesos A y B se ilustran más
detalladamente en los siguientes Esquemas 1 y 2,
respectivamente.
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(Esquema pasa a página
siguiente)
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Esquema
1
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El esquema 1 ilustra la preparación de isómeros
de dihidrotetrabenazina individuales que tienen las configuraciones
2S,3S,11bR y 2R,3R,11bS
donde los átomos de hidrógeno unidos en las posiciones 2 y 3 se
disponen en una orientación relativa trans. Este esquema de
reacción incluye el Proceso A arriba definido.
El punto de partida para la secuencia de
reacciones del Esquema 1 es la tetrabenazina comercialmente
disponible (IV), que consiste en una mezcla racémica de los
isómeros ópticos RR y SS de la tetrabenazina. En cada uno de los
isómeros RR y SS, los átomos de hidrógeno de las posiciones 3 y 11b
están dispuestos en una orientación relativa trans. Como
alternativa al uso del compuesto comercial, la tetrabenazina se
puede sintetizar de acuerdo con el procedimiento descrito en la
patente US número 2,830,993 (véase en particular el ejemplo 11).
La mezcla racémica de tetrabenazina RR y SS se
reduce utilizando un agente reductor de borohidruro, borohidruro de
tri-sec-butilo-litio
("L-Selectride"), para obtener la mezcla de los
isómeros 2S,3R,11bR y
2R,3S,11bS (V) de dihidrotetrabenazina
conocidos, de los cuales únicamente se muestra el isómero
2S,3R,11bR por simplicidad. La formación de los
isómeros RRR y SSS de dihidrotetrabenazina se reduce al mínimo o se
suprime gracias a la utilización de L-Selectride,
estéricamente menos exigente, como agente reductor, en lugar de
borohidruro de sodio.
Los isómeros de dihidrotetrabenazina (V) se
someten a reacción con un agente deshidratante, tal como
pentacloruro de fósforo, en un disolvente aprótico, tal como un
hidrocarburo clorado (por ejemplo cloroformo o diclorometano,
preferentemente diclorometano) para formar el compuesto insaturado
(II) en forma de un par de enantiómeros, de los cuáles sólo se
muestra el enantiómero R en el esquema. La reacción de
deshidratación se lleva a cabo típicamente a una temperatura
inferior a temperatura ambiente, por ejemplo a aproximadamente
0-5ºC.
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Después, el compuesto insaturado (II) se somete
a una rehidratación estereoselectiva para generar la
dihidrotetrabenazina (VI) y su imagen especular o antípoda (no
mostrada), en la que los átomos de hidrógeno de las posiciones 3 y
11b están dispuestos en una orientación relativa cis y los
átomos de hidrógeno de las posiciones 2 y 3 están dispuestos en una
orientación relativa trans. La rehidratación estereoselectiva
se lleva a cabo mediante un procedimiento de hidroboración
utilizando borano-THF en tetrahidrofurano (THF) para
formar un complejo de borano intermedio (no mostrado), que después
se oxida con peróxido de hidrógeno en presencia de una base, tal
como hidróxido de sodio.
Después se puede llevar a cabo un paso de
purificación inicial (por ejemplo mediante HPLC) para obtener el
producto (V) de la secuencia de reacciones de rehidratación en forma
de una mezcla de los isómeros 2S,3S,11bR y
2R,3R,11bS, de los cuales únicamente el isómero
2S,3S,11bR se muestra en el esquema. Para
separar los isómeros, la mezcla se trata con un ácido de Mosher
R(+) en presencia de cloruro de oxalilo y
dimetilaminopiridina (DMAP) en diclorometano para obtener un par de
ésteres diastereoisoméricos (VII) (de los cuales sólo se muestra un
diastereoisómero), que después se pueden separar mediante HPLC. A
continuación, los ésteres individuales se pueden hidrolizar
utilizando un hidróxido de metal alcalino, por ejemplo hidróxido de
sodio, para obtener un isómero único (VI).
En una variación de la secuencia de pasos
mostrada en el Esquema 1, después de la reducción de la
tetrabenazina RR/SS, la mezcla de enantiómeros de
dihidrotetrabenazina (V) resultante se puede separar para obtener
los enantiómeros individuales. La separación se puede llevar a cabo
formando una sal con un ácido quiral, tal como ácido (+) o (-)
canforsulfónico, separando los diastereoisómeros resultantes
mediante cristalización fraccionada, para obtener una sal de un
enantiómero simple y separando después la base libre de la sal.
El enantiómero de dihidrotetrabenazina separado
se puede deshidratar para obtener un enantiómero simple del alqueno
(II). La rehidratación subsiguiente del alqueno (II) dará como
resultado, predominante o exclusivamente, un enantiómero único de
la cis-dihidrotetrabenazina (VI). Una ventaja de
esta variante consiste en que no implica la formación de ésteres de
ácido de Mosher y, en consecuencia, evita la separación
cromatográfica utilizada típicamente para separar ésteres de ácido
de Mosher.
El Esquema 2 ilustra la preparación de isómeros
de dihidrotetrabenazina individuales que tienen las configuraciones
2R,3S,11bR y 2S,3R,11bS
donde los átomos de hidrógeno unidos en las posiciones 2 y 3 están
dispuestos en una orientación relativa cis. Este esquema de
reacción incluye el Proceso B arriba definido.
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(Esquema pasa a página
siguiente)
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Esquema
2
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En el Esquema 2, el compuesto insaturado (II) se
obtiene reduciendo la tetrabenazina para dar los isómeros
2S,3R,11bR y 2R,3S,11bS (V) de dihidrotetrabenazina y deshidratando
éstos con PCl_{5} del modo arriba descrito en el Esquema 1. Sin
embargo, en lugar de someter el compuesto (II) a hidroboración, el
enlace doble 2,3 se convierte en un epóxido mediante reacción con
ácido meta-cloroperbenzoico (MCPBA) y ácido perclórico. La
reacción de epoxidación se lleva a cabo convenientemente en un
disolvente alcohólico, como metanol, típicamente más o menos a
temperatura ambiente.
El epóxido (VII) se somete después a una
apertura de anillo por reducción utilizando
borano-THF como agente reductor electrófilo, para
obtener un complejo de boro intermedio (no mostrado), que después se
oxida y disocia con peróxido de hidrógeno en presencia de un
álcali, tal como hidróxido de sodio, para obtener la
dihidrotetrabenazina (VIII) en forma de una mezcla de los isómeros
2R,3S,11bR y 2S,3R,11bS,
de los cuales únicamente se muestra el isómero
2R,3S,11bR para simplificar. El tratamiento de
la mezcla de isómeros (VIII) con un ácido de Mosher R-(+) en
presencia de cloruro de oxalilo y dimetilaminopiridina (DMAP) en
diclorometano produce un par de ésteres epiméricos (IX) (de los que
sólo se muestra un epímero), que después se puede separar por
cromatografía e hidrolizar con hidróxido de sodio en metanol del
modo arriba descrito en relación con el Esquema 1.
La tetrabenazina ejerce sus efectos terapéuticos
inhibiendo el transportador vesicular de monoaminas VMAT2 en el
cerebro e inhibiendo tanto los receptores de dopamina presinápticos
como los postsinápticos.
Los isómeros de cis-dihidrotetrabenazina
también son inhibidores de VMAT2, produciendo los isómeros C y B el
mayor grado de inhibición. Como la tetrabenazina, los compuestos de
la invención sólo presentan una afinidad baja por VMAT1, la
isoforma de VMAT hallada en tejidos periféricos y algunas células
endocrinas, lo que indica que no deberían producir los efectos
secundarios asociados a la reserpina. Los compuestos C y B tampoco
muestran ninguna actividad inhibidora contra la
catecol-O-metil-transferasa
(COMT), las isoformas A y B de la monoamina-oxidasa
y las isoformas 1d y 1b de la
5-hidroxitriptamina.
Sorprendentemente, los isómeros C y B también
muestran una separación notable de la actividad de VMAT2 y del
receptor de dopamina, ya que, aunque presentan una alta actividad de
unión a VMAT2, los dos compuestos sólo muestran una actividad de
unión al receptor de la dopamina débil o inexistente y carecen de
una actividad de unión al transportador de dopamina (DAT). De
hecho, ninguno de los isómeros de cis-dihidrotetrabenazina
muestra una actividad de unión a DAT significativa. Esto parece
indicar que los compuestos pueden carecer de los efectos
secundarios dopamiérgicos producidos por la tetrabenazima. Los
isómeros C y B también son débilmente activos o inactivos como
inhibidores de los receptores adrenérgicos, lo que parece indicar
que los compuestos pueden carecer de los efectos secundarios
adrenérgicos frecuentemente encontrados en la tetrabenazina. De
hecho, en estudios locomotores realizados en ratas, la tetrabenazina
mostraba un efecto sedante dependiente de la dosis, mientras que,
después de la administración de los isómeros B y C de la
dihidrotetrabenazina de la invención, no se observó ningún efecto
sedante.
Además, tanto el isómero C como el isómero B son
potentes inhibidores de la proteína transportadora de la serotonina
SERT. La inhibición de la SERT es un mecanismo a través del cual
antidepresivos tales como la fluoxetina (Prozac®) ejercen sus
efectos terapéuticos. Por consiguiente, la capacidad de los isómeros
C y B de inhibir la SERT indica que estos isómeros pueden actuar
como antidepresivos, en marcado contraste con la tetrabenazina, que
produce depresión como uno de sus efectos secundarios
reconocidos.
El isómero B ha sido ensayado en un modelo de la
enfermedad de Huntington en ratones transgénicos y se ha comprobado
que detiene la progresión de una serie de síntomas de la enfermedad
de Huntington, incluyendo movimientos involuntarios como corea
involuntaria, temblores y tics, y el deterioro en el andar. En base
a los estudios realizados hasta la fecha, se prevé que los
compuestos de cis-dihidrotetrabenazina de la invención serán
útiles para el tratamiento de la enfermedad de Huntington, y en
particular para la detención o el retraso de la progresión de la
enfermedad, o para ser utilizados de forma profiláctica, para
prevenir el desarrollo de la enfermedad.
En general, los compuestos serán administrados a
un individuo que necesite dicha administración, por ejemplo un
paciente humano o animal, preferentemente humano.
Los compuestos se administrarán típicamente en
cantidades terapéutica o profilácticamente útiles y generalmente no
tóxicas. No obstante, en determinadas situaciones, las ventajas de
la administración de un compuesto de dihidrotetrabenazina de la
invención pueden pesar más que las desventajas de cualquier efecto
tóxico o efecto secundario, en cuyo caso puede considerarse
adecuado administrar el compuesto en cantidades asociadas a un
cierto grado de toxicidad.
Una dosis diaria típica del compuesto puede
llegar a ser de 1.000 mg al día, por ejemplo de entre 0,01
miligramos y 10 miligramos por kilogramo de peso corporal, más
habitualmente entre 0,025 miligramos y 5 miligramos por kilogramo
de peso corporal, por ejemplo hasta 3 miligramos por kilogramo de
peso corporal, y más típicamente entre 0,15 miligramos y 5
miligramos por kilogramo de peso corporal, aunque se pueden
administrar dosis mayores o menores si así se requiere.
Por ejemplo se puede administrar una dosis
inicial de 12,5 mg 2 ó 3 veces al día. La dosis se puede aumentar
en 12,5 mg al día cada 3-5 días hasta que el médico
determine que se ha alcanzado la dosis máxima tolerada y eficaz
para el individuo en cuestión. Finalmente, la cantidad de compuesto
administrado corresponderá a la naturaleza de la enfermedad o al
estado fisiológico tratado y a los beneficios terapéuticos y la
presencia o ausencia de efectos secundarios producidos por un
régimen de dosis dado, y se dejará a criterio del médico.
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Los compuestos de dihidrotetrabenazina se
administran típicamente en forma de composiciones farmacéuticas.
Las composiciones farmacéuticas se pueden
presentar en cualquier forma adecuada para la administración oral,
parenteral, tópica, intranasal, intrabronquial, oftálmica, óptica,
rectal, intravaginal o transdérmica. Cuando las composiciones están
previstas para la administración parenteral, se pueden formular para
la administración intravenosa, intramuscular, intraperitoneal,
subcutánea o para el suministro directo a un órgano o tejido diana
mediante inyección, infusión u otro medio de suministro.
Las formas de dosificación farmacéutica
adecuadas para la administración oral incluyen tabletas, cápsulas,
comprimidos, píldoras, pastillas, jarabes, soluciones,
pulverizadores, polvos, gránulos, elixires y suspensiones,
comprimidos, sprays, obleas o parches sublinguales y parches
bucales.
Las composiciones farmacéuticas que contienen
los compuestos de dihidrotetrabenazina de la invención se pueden
formular de acuerdo con técnicas conocidas, véase por ejemplo
Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company.,
Easton, PA, USA.
Las composiciones en comprimidos pueden contener
una dosis unitaria de compuesto activo junto con un diluyente o
excipiente inerte, tal como un azúcar o un alcohol azúcar, por
ejemplo lactosa, sacarosa, sorbitol o manitol; y/o un diluyente no
derivado de azúcar, como carbonato sódico, fosfato de calcio, talco,
carbonato de calcio, o una celulosa o un derivado de ésta, como
metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, y almidones
como almidón de maíz. Los comprimidos también pueden contener
ingredientes estándar, tales como agentes aglutinantes y
granuladores, como polivinilpirrolidona, desintegrantes (por ejemplo
polímeros reticulados hinchables como carboximetilcelulosa
reticulada), lubricantes (por ejemplo estearatos), conservantes (por
ejemplo parabenos), antioxidantes (por ejemplo BHT), agentes tampón
(por ejemplo tampones fosfato o citrato) y agentes efervescentes,
tales como mezclas citrato/bicarbonato. Estos excipientes son muy
conocidos y no es necesario describirlos detalladamente aquí.
Las formulaciones en cápsulas pueden ser de la
variedad de gelatina dura o de gelatina blanda y pueden contener el
componente activo en forma sólida, semisólida o líquida. Las
cápsulas de gelatina se pueden formar a partir de gelatina animal o
de equivalentes de ésta sintéticos o vegetales.
Las formas de dosificación sólidas (por ejemplo
comprimidos, cápsulas, etc.) pueden estar revestidas o no
revestidas, pero típicamente tienen un revestimiento, por ejemplo un
revestimiento de una película protectora (por ejemplo una cera o
barniz) o un revestimiento de control de liberación. El
revestimiento (por ejemplo un polímero de tipo Eudragit^{TM}) se
puede diseñar para liberar el componente activo en un lugar deseado
dentro del tracto gastrointestinal. Por ejemplo, se puede elegir un
revestimiento que se degrade bajo determinadas condiciones de pH
dentro del tracto gastrointestinal, liberando así el compuesto
selectivamente en el estómago o en el íleon o en el duodeno.
Alternativa o adicionalmente a un revestimiento,
el fármaco se puede presentar en una matriz sólida que incluya un
agente de control de liberación, por ejemplo un agente retardante de
la liberación que pueda ser adaptado para liberar selectivamente el
compuesto bajo distintas condiciones de acidez o alcalinidad en el
tracto gastrointestinal. Alternativamente, el material de matriz o
el revestimiento retardante de la liberación puede consistir en un
polímero erosionable (por ejemplo un polímero anhídrido maleico),
que se va erosionando de forma esencialmente continua a medida que
la forma de dosificación atraviesa el tracto gastrointestinal.
Las composiciones para uso tópico incluyen
pomadas, cremas, pulverizadores, parches, geles, gotas líquidas e
injertos (por ejemplo injertos intraoculares). Estas composiciones
se pueden formular de acuerdo con métodos conocidos.
Las composiciones para la administración
parenteral se presentan típicamente en forma de soluciones o
suspensiones finas acuosas u oleaginosas estériles, o se pueden
suministrar en forma de un polvo estéril finamente dividido para
producir un preparado magistral con agua estéril para inyección.
Los ejemplos de formulaciones para la
administración rectal o intravaginal incluyen supositorios y
supositorios vaginales, formados por ejemplo a partir de un
material moldeable o ceroso conformado que contiene el compuesto
activo.
Las composiciones para la administración por
inhalación pueden consistir en composiciones en polvo inhalables o
pulverizadores líquidos o en polvo, y se pueden administrar de forma
estándar utilizando dispositivos inhaladores de polvo o
dispositivos dispensadores de aerosol. Estos dispositivos son muy
conocidos. Para la administración por inhalación, las formulaciones
en polvo comprenden típicamente el compuesto activo junto con un
diluyente en polvo sólido inerte, tal como lactosa.
Los compuestos de la invención se presentarán
generalmente en forma de dosis unitarias y, como tales, típicamente
contendrán una cantidad suficiente de compuesto para proporcionar el
nivel deseado de actividad biológica. Por ejemplo, una formulación
prevista para administración oral puede contener entre 2 miligramos
y 200 miligramos de ingrediente activo, normalmente entre 10
miligramos y 100 miligramos, por ejemplo 12,5 miligramos, 25
miligramos y 50 miligramos.
El compuesto activo será administrado a un
paciente que lo necesite (por ejemplo un paciente humano o animal)
en una cantidad suficiente para lograr el efecto terapéutico
deseado.
Los siguientes ejemplos no limitativos ilustran
la síntesis y las propiedades de los compuestos de
dihidrotetrabenazina de la invención.
Se añadió lentamente
L-Selectride® 1M en tetrahidrofurano (135 ml, 135
mmol, 2,87 eq), a lo largo de 30 minutos, a una solución agitada
del racemato RR/SS de tetrabenazina (15 g, 47 mmol) en etanol
(75 ml) y tetrahidrofurano (75 ml) a 0ºC. Una vez completa la
adición, la mezcla se agitó a 0ºC durante 30 minutos y después se
dejó que se calentara a temperatura ambiente.
La mezcla se vertió sobre hielo triturado (300
g) y se añadió agua (100 ml). La solución se extrajo con dietil
éter (2 x 200 ml) y los extractos etéreos combinados se lavaron con
agua (100 ml) y se secaron parcialmente sobre carbonato de potasio
anhidro. El secado se completó utilizando sulfato de magnesio
anhidro y, después de filtrar la carga, el disolvente se retiró
bajo presión reducida (protegido de la luz, temperatura del baño
< 20ºC) para obtener un sólido amarillo pálido.
El sólido se suspendió con éter de petróleo
(30-40ºC) y se filtró para obtener un sólido en
polvo blanco (12 g, 80%).
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Se añadió por partes pentacloruro de fósforo
(32,8 g, 157 mmol, 2,5 eq), a lo largo de 30 minutos, a una solución
agitada del producto de tetrabenazina reducida del Ejemplo 1A (20
g, 62,7 mmol) en diclorometano (200 ml) a 0ºC. Una vez completa la
adición, la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante otros 30
minutos y la solución se vertió lentamente en una disolución de
carbonato sódico acuoso 2M que contenía hielo triturado (0ºC).
Cuando cesó la formación inicial de gases ácidos, la mezcla se
basificó (aproximadamente pH 12) utilizando carbonato sódico
sólido.
La solución alcalina se extrajo utilizando
acetato de etilo (800 ml) y los extractos orgánicos combinados se
secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de filtrar la
carga, el disolvente se retiró bajo presión reducida para obtener
un aceite marrón, que se purificó mediante cromatografía en columna
(sílice, acetato de etilo) para obtener el alqueno semipuro en forma
de un sólido amarillo (10,87 g, 58%).
\vskip1.000000\baselineskip
Se trató una solución del alqueno crudo (10,87
g, 36,11 mmol) del Ejemplo 1B en THF seco (52 ml) a temperatura
ambiente con borano-THF 1M (155,6 ml, 155,6 mmol,
4,30 eq) añadido gota a gota. La reacción se agitó durante 2 horas,
se añadió agua (20 ml) y la solución se basificó a un pH 12 con una
disolución acuosa de hidróxido de sodio al 30%.
Se añadió una disolución acuosa de peróxido de
hidrógeno al 30% (30 ml) a la mezcla de reacción alcalina agitada y
la solución se calentó a reflujo durante 1 hora y después se dejó
enfriar. Se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato
de etilo (3 x 250 ml). Los extractos orgánicos se combinaron y se
secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y, después de filtrar la
carga, se eliminó el disolvente bajo presión reducida, para obtener
un aceite amarillo (9 g).
El aceite se purificó utilizando HPLC de
preparación (columna: Lichrospher Si60, 5 \mum, 250 x 21,20 mm,
fase móvil: hexano:etanol: diclorometano (85:15:5); UV 254 nm,
caudal: 10 ml\cdotmin^{-1}) a 350 mg por inyección, seguida de
concentración de las fracciones de interés bajo vacío. El aceite
obtenido se disolvió después en éter y se concentró otra vez bajo
vacío para obtener el racemato de dihidrotetrabenazina arriba
mostrado en forma de una espuma amarilla (5,67 g, 50%).
\vskip1.000000\baselineskip
A diclorometano anhidro (50 ml) se añadió ácido
R(+)-\alpha-metoxi-\alpha-trifluorometilfenilacético
(5 g, 21,35 mmol), cloruro de oxalilo (2,02 ml) y DMF (0,16 ml) y
la solución se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La
solución se concentró bajo presión reducida y el residuo se adsorbió
otra vez en diclorometano anhidro (50 ml). La solución resultante
se enfrió utilizando un baño de agua helada y después se añadió
dimetilaminopiridina (3,83 g, 31,34 mmol), seguido de una solución
presecada (a través de tamices de 4\ring{A}) del producto sólido
del Ejemplo 1C (5 g, 15,6 mmol) en diclorometano anhidro. Después de
agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 45 minutos, se
añadió agua (234 ml) y la mezcla se extrajo con éter (2 x 200 ml).
El extracto de éter se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se
pasó a través de una compresa de sílice, y el producto se sometió a
elución con éter.
El producto de elución de éter recogido se
concentró bajo presión reducida para obtener un aceite, que se
purificó mediante cromatografía en columna (sílice, hexano:éter
(10:1)). La evaporación de las fracciones de columna de interés
recogidas y la eliminación del disolvente bajo presión reducida
produjo un sólido, que se purificó adicionalmente mediante
cromatografía el columna (sílice, hexano:acetato de etilo (1:1))
para obtener tres componentes principales, que se resolvieron
parcialmente en los picos 1 y 2 del éster de Mosher.
Mediante HPLC de preparación de los tres
componentes (columna: 2 x Lichrospher Si60, 5 \mum, 250 x 21,20
mm, fase móvil: hexano:isopropanol (97:3), UV 254 nm; caudal: 10
ml\cdotmin^{-1}) con 300 mg de carga y concentración
subsiguiente de las fracciones de interés bajo vacío se obtuvieron
los derivados éster de Mosher puros.
Pico 1 (3,89 g, 46,5%).
Pico 2 (2,78 g, 33%).
Las fracciones correspondientes a los dos picos
se sometieron a hidrólisis para liberar los isómeros de
dihidrotetrabenazina individuales identificados y caracterizados
como isómeros A y B. Se cree que cada uno de los isómeros A y B
tiene una de las siguientes estructuras:
Más específicamente, de acuerdo con los
experimentos de cristalografía de rayos X descrita más abajo en el
Ejemplo 4, se cree que el isómero B tiene la configuración absoluta
2S,3S,11bR.
\vskip1.000000\baselineskip
(Compuesto no correspondiente a la
invención)
Se añadió una disolución acuosa de hidróxido de
sodio al 20% (87,5 ml) a una solución de éster de Mosher del pico 1
(3,89 g, 7,27 mmol) en metanol (260 ml) y la mezcla se agitó y
calentó a reflujo durante 150 minutos. Tras enfriar la mezcla a
temperatura ambiente, se añadió agua (200 ml) y la solución se
extrajo con éter (60 ml), se sobre sulfato de magnesio anhidro y,
después de filtrarla, se concentró bajo presión reducida.
El residuo se disolvió con acetato de etilo (200
ml), la solución se lavó con agua (2 x 50 ml), la fase orgánica se
secó sobre sulfato de magnesio anhidro y, después de filtrarla, se
concentró bajo presión reducida, para obtener una espuma amarilla.
Este material se purificó mediante cromatografía en columna (sílice,
elución en gradiente de acetato de etilo:hexano (1:1) a acetato de
etilo). Las fracciones de interés se combinaron y el disolvente se
eliminó bajo presión reducida. El residuo se absorbió en éter y el
disolvente se eliminó de nuevo bajo presión reducida, para obtener
el isómero A en forma de una espuma de color hueso (1,1 g, 47%).
El isómero A, del que se cree que tiene la
configuración 2R,3R,11bS (no se determinó la
estereoquímica absoluta), se caracterizó mediante
^{1}H-NMR, ^{13}C-NMR, IR,
espectrometría de masas, HPLC quiral y ORD. Los datos de IR, NMR y
MS correspondientes al isómero A se muestran en la Tabla 1 y los
datos de HPLC quiral y ORD se muestran en la Tabla 3.
\vskip1.000000\baselineskip
(Compuesto de la invención)
Se añadió una disolución acuosa de hidróxido de
sodio al 20% (62,5 ml) a una solución del éster de Mosher de pico 2
(2,78 g, 5,19 mmol) en metanol (185 ml) y la mezcla se agitó y
calentó a reflujo durante 150 minutos. Tras enfriar la mezcla a
temperatura ambiente, se añadió agua (142 ml) y la solución se
extrajo con éter (440 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro
y, después de filtrarla, se concentró bajo presión reducida.
El residuo se disolvió con acetato de etilo (200
ml), la solución se lavó con agua (2 x 50 ml), la fase orgánica se
secó sobre sulfato de magnesio anhidro y, después de filtrarla, se
concentró bajo presión reducida. Después se añadió éter de petróleo
(30-40ºC) al residuo y la solución se concentró de
nuevo bajo vacío para obtener el isómero B en forma de una espuma
blanca (1,34 g, 81%).
El isómero B, del que se cree que tiene la
configuración 2S,3S,11bR, se caracterizó
mediante ^{1}H-NMR, ^{13}C-NMR,
IR, espectrometría de masas, HPLC quiral, ORD y cristalografía de
rayos X. Los datos de IR, NMR y MS correspondientes al isómero B se
muestran en la Tabla 1 y los datos de HPLC quiral y ORD se muestran
en la Tabla 3. Los datos de la cristalografía de rayos X se muestran
en el Ejemplo 4.
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución que contenía una mezcla racémica
(15 g, 47 mmol) de los enantiómeros de tetrabenazina RR y
SS en tetrahidrofurano se sometió a reducción con
L-Selectride® mediante el método del Ejemplo 1A para
obtener una mezcla de los enantiómeros
2S,3R,11bR y 2R,3S,11bS la
de dihidrotetrabenazina en forma de un sólido en polvo blanco (12
g, 80%). La dihidrotetrabenazina parcialmente purificada se
deshidrató después con PCl_{5} de acuerdo con el método del
Ejemplo 1B para obtener una mezcla semipura de isómeros 11bR
y 11bS de la 2,3-deshidrotetrabenazina (el
enantiómero 11bR se muestra más abajo) en forma de un sólido
amarillo (12,92 g, 68%).
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A una solución agitada del alqueno crudo del
Ejemplo 2A (12,92 g, 42,9 mmol) en metanol (215 ml) se añadió una
disolución de ácido perclórico al 70% (3,70 ml, 43 mmol) en metanol
(215 ml). Después se añadió ácido
3-cloroperoxibenzoico al 77% (15,50 g, 65 mmol) a la
reacción y la mezcla resultante se agitó durante 18 horas a
temperatura ambiente protegida de la luz.
La mezcla de reacción se vertió en una
disolución acuosa saturada de sulfito de sodio (200 ml) y se añadió
agua (200 ml). Luego se añadió cloroformo (300 ml) a la emulsión
resultante y la mezcla se basificó con bicarbonato sódico acuoso
saturado (400 ml).
La capa orgánica se recogió y la fase acuosa se
lavó con más cloroformo (2 x 150 ml). Las capas de cloroformo
combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y, después
de filtrarlas, se eliminó el disolvente bajo presión reducida, para
obtener un aceite marrón (14,35 g, rendimiento > 100% - posibles
residuos de disolvente en el producto). Este material se utilizó sin
purificación adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución agitada del epóxido crudo del
Ejemplo 2B (14,35 g, 42,9 mmol, suponiendo un rendimiento del 100%)
en THF seco (80 ml) se trató lentamente con borano 1M/THF (184,6 ml,
184,6 mmol) durante 15 minutos. La reacción se agitó durante dos
horas, se añadió agua (65 ml) y la solución se calentó a reflujo con
agitación durante 30 minutos.
Después de enfriar la mezcla de reacción, se
añadió una disolución de hidróxido de sodio al 30% (97 ml), seguida
de una disolución de peróxido de hidrógeno al 30% (48,6 ml) y la
mezcla de reacción se agitó y calentó a reflujo durante 1 hora
más.
La mezcla de reacción enfriada se extrajo con
acetato de etilo (500 ml), se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro y, después de filtrarla, se eliminó el disolvente bajo
presión reducida para obtener un aceite. Se añadió hexano (230 ml)
y el aceite y la solución se reconcentraron bajo presión
reducida.
El residuo oleoso se purificó mediante
cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo). Las fracciones
de interés se combinaron y el disolvente se eliminó bajo presión
reducida. El residuo se purificó de nuevo mediante cromatografía en
columna (sílice, gradiente, hexano a éter). Las fracciones de
interés se combinaron y los disolventes se evaporaron bajo presión
reducida para obtener un sólido amarillo pálido (5,18 g, 38%).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A diclorometano anhidro (46 ml) se añadió ácido
R(+)-\alpha-metoxi-\alpha-trifluorometilfenilacético
(4,68 g, 19,98 mmol), cloruro de oxalilo (1,90 ml) y DMF (0,13 ml)
y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos.
La solución se concentró bajo presión reducida y el residuo se
absorbió otra vez en diclorometano anhidro (40 ml). La solución
resultante se enfrió utilizando un baño de agua helada y después se
añadió dimetilaminopiridina (3,65 g, 29,87 mmol), seguida de una
solución presecada (a través de tamices de 4\ring{A}) del producto
sólido del Ejemplo 2C (4,68 g, 14,6 mmol) en diclorometano anhidro.
Después de agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 45
minutos, se añadió agua (234 ml) y la mezcla se extrajo con éter (2
x 200 ml). El extracto de éter se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro y se pasó a través de una compresa de sílice, y el producto
se sometió a elución con éter.
El producto de elución de éter recogido se
concentró bajo presión reducida para obtener un aceite, que se
purificó mediante cromatografía en columna (sílice, hexano:éter
(1:1)). La evaporación de las fracciones de columna de interés
recogidas y la eliminación del disolvente bajo presión reducida
produjo un sólido rosa (6,53 g).
Mediante HPLC de preparación del sólido
(columna: 2 x Lichrospher Si60, 5 \mum, 250 x 21,20 mm, fase
móvil: hexano:isopropanol (97:3), UV 254 nm; caudal: 10
ml\cdotmin^{-1}) con 100 mg de carga y concentración
subsiguiente de las fracciones de interés bajo vacío se obtuvo un
sólido, que se suspendió en éter de petróleo
(30-40ºC) y se recogió por filtración para obtener
los derivados éster de Mosher puros.
Pico 1 (2,37 g, 30%).
Pico 2 (2,42 g, 30%).
Las fracciones correspondientes a los dos picos
se sometieron a hidrólisis para liberar los isómeros de
dihidrotetrabenazina individuales identificados y caracterizados
como isómeros C y D. Se cree que cada uno de los isómeros C y D
tiene una de las siguientes estructuras:
\vskip1.000000\baselineskip
(Compuesto de la invención)
Se añadió una disolución acuosa de hidróxido de
sodio al 20% (53 ml) a una solución agitada del éster de Mosher de
pico 1 (2,37 g, 4,43 mmol) en metanol (158 ml), y la mezcla se agitó
a reflujo durante 150 minutos. Tras enfriar la mezcla de reacción
se añadió agua (88 ml) y la solución resultante se extrajo con éter
(576 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro y, después de filtrarlo, se eliminó el disolvente bajo
presión reducida. Entonces se añadió acetato de etilo (200 ml) al
residuo y la solución se lavó con agua (2 x 50 ml). La solución
orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y, después de
filtrarla, se eliminó el disolvente bajo presión reducida.
El residuo se trató con éter de petróleo
(30-40ºC) y el sólido suspendido resultante se
recogió por filtración. El filtrado se concentró bajo presión
reducida y la segunda carga de sólido suspendido se recogió por
filtración. Los dos sólidos recogidos se combinaron y se secaron
bajo presión reducida para obtener el isómero C (1,0 g, 70%).
El isómero C, del que se cree que tiene la
configuración 2R,3S,11bR o
2S,3R,11bS (no se determinó la estereoquímica
absoluta), se caracterizó mediante ^{1}H-NMR,
^{13}C-NMR, IR, espectrometría de masas, HPLC
quiral y ORD. Los datos de IR, NMR y MS correspondientes al isómero
C se muestran en la Tabla 2 y los datos de HPLC quiral y ORD se
muestran en la Tabla 4.
\vskip1.000000\baselineskip
(Compuesto no correspondiente a la
invención)
Se añadió una disolución acuosa de hidróxido de
sodio al 20% (53 ml) a una solución agitada del éster de Mosher de
pico 2 (2,42 g, 4,52 mmol) en metanol (158 ml), y la mezcla se agitó
a reflujo durante 150 minutos. Tras enfriar la mezcla de reacción,
se añadió agua (88 ml) y la solución resultante se extrajo con éter
(576 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro y, después de filtrarlo, se eliminó el disolvente bajo
presión reducida. Después se añadió acetato de etilo (200 ml) al
residuo y la solución se lavó con agua (2 x 50 ml). La solución
orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y, después de
filtrarla, se eliminó el disolvente bajo presión reducida.
El residuo se trató con éter de petróleo
(30-40ºC) y el sólido naranja suspendido resultante
se recogió por filtración. El sólido se disolvió en acetato de
etilo:hexano (15:85) y se purificó mediante cromatografía en
columna (sílice, gradiente acetato de etilo:hexano (15:85) a acetato
de etilo). Las fracciones de interés se combinaron y el disolvente
se eliminó bajo presión reducida. El residuo se suspendió con éter
de petróleo (30-40ºC) y la suspensión resultante se
recogió por filtración. El sólido recogido se secó bajo presión
reducida para obtener el isómero D en forma de un sólido blanco
(0,93 g, 64%).
El isómero D, del que se cree que tiene la
configuración 2R,3S,11bR o
2S,3R,11bS (no se determinó la estereoquímica
absoluta), se caracterizó mediante ^{1}H-NMR,
^{13}C-NMR, IR, espectrometría de masas, HPLC
quiral y ORD. Los datos de IR, NMR y MS correspondientes al isómero
D se muestran en la Tabla 2 y los datos de HPLC quiral y ORD se
muestran en la Tabla 4.
En las Tablas 1 y 2, los espectros de
infrarrojos se determinaron utilizando el método de disco de KBr.
Los espectros ^{1}H-NMR se llevaron a cabo en
soluciones en cloroformo deuterado utilizando un espectrómetro
Varian Gemini NMR (200 MHz). Los espectros
^{13}C-NMR se llevaron a cabo en soluciones en
cloroformo deuterado utilizando un espectrómetro Varian Gemini NMR
(50 MHz). Los espectros de masas se obtuvieron utilizando un
espectrómetro Micromass Platform II (condiciones ES^{+}). En las
Tablas 3 y 4, los datos de Dispersión Óptica Rotatoria (ORD) se
obtuvieron utilizando un instrumento Optical Activity PolAAr 2001 en
solución de metanol a 24ºC. Las medidas del tiempo de retención por
HPLC se llevaron a cabo utilizando un cromatógrafo HP1050 HPLC con
detección UV.
Se añadió lentamente a lo largo de 30 minutos
L-Selectride® 1M en tetrahidrofurano (52 ml, 52
mmol, 1,1 eq) a una solución agitada y enfriada (baño de hielo) del
racemato de tetrabenazina (15 g, 47 mmol) en tetrahidrofurano (56
ml). Una vez completa la adición, la mezcla se dejó calentar a
temperatura ambiente y se agitó durante otras seis horas. Los
análisis por TLC (sílice, acetato de etilo) mostraron que sólo
quedaban cantidades muy pequeñas del material de partida.
La mezcla se vertió sobre una mezcla agitada de
hielo triturado (112 g), agua (56 ml) y ácido acético glacial (12,2
g). La solución amarilla resultante se lavó con éter (2 x 50 ml) y
se basificó mediante la adición lenta de carbonato de sodio sólido
(aproximadamente 13 g). Después se añadió éter de petróleo
(30-40ºC) (56 ml) a la mezcla bajo agitación y el
\beta-DHTBZ crudo se recogió por filtración en
forma de un sólido blanco.
El sólido crudo se disolvió en diclorometano
(aprox. 150 ml) y la solución resultante se lavó con agua (40 ml),
se secó utilizando sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se
concentró bajo presión reducida hasta aprox. 40 ml. Se formó una
suspensión espesa de un sólido blanco. Después se añadió éter de
petróleo (30-40ºC) (56 ml) y la suspensión se agitó
durante quince minutos a la temperatura del laboratorio. El producto
se recogió por filtración y se lavó en el filtro con éter de
petróleo (30-40ºC) (40 a 60 ml) hasta que quedó
blanco como la nieve antes de secarlo al aire a temperatura
ambiente, para obtener \beta-DHTBZ (10,1 g, 67%)
en forma de un sólido blanco. Los análisis TLC (sílice, acetato de
etilo) mostraron un único componente.
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvió el producto del Ejemplo 3A y 1
equivalente de ácido
(S)-(+)-canfor-10-sulfónico,
con calentamiento, en una cantidad mínima de metanol. La solución
resultante se dejó enfriar y después se diluyó lentamente con éter
hasta que se completó la formación del precipitado sólido
resultante. El sólido cristalino blanco resultante se recogió por
filtración y se lavó con éter antes de secarlo.
La sal de ácido canforsulfónico (10 g) se
disolvió en una mezcla de etanol absoluto caliente (170 ml) y
metanol (30 ml). La solución resultante se agitó y se dejó enfriar.
Dos horas después, el precipitado formado se recogió por filtración
en forma de un sólido cristalino blanco (2,9 g). Una muestra del
material cristalino se agitó en un embudo de separación con un
exceso de carbonato sódico acuoso saturado y diclorometano. La fase
orgánica se separó, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se
filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se trituró
utilizando éter de petróleo (30-40ºC) y la solución
orgánica se concentró de nuevo. El análisis por HPLC quiral de la
sal utilizando una columna Chirex (S)-VAL y
(R)-NEA 250 x 4,6 mm, y un eluyente hexano:etanol
(98:2) con un caudal de 1 ml/minuto mostró que el
\beta-DHTBZ aislado estaba enriquecido en un
enantiómero (e.e. aprox. 80%).
La sal de ácido canforsulfónico enriquecida (14
g) se disolvió en etanol absoluto caliente (140 ml) y se añadió
2-propanol (420 ml). La solución resultante se agitó
y en un minuto comenzó a formarse un precipitado. La mezcla se dejó
enfriar a temperatura ambiente y se agitó durante una hora. El
precipitado formado se recogió por filtración, se lavó con éter y
se secó para obtener un sólido cristalino blanco (12 g).
El material cristalino se agitó en un embudo de
separación con un exceso de carbonato sódico acuoso saturado y
diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de
magnesio anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida.
El residuo se trituró utilizando éter de petróleo
(30-40ºC) y la solución orgánica se concentró de
nuevo para obtener (después de secado en vacío)
(+)-\beta-DHTBZ (6,6 g, ORD
+107,8º). El enantiómero aislado tiene un e.e. > 97%.
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Se añadió una disolución de pentacloruro de
fósforo (4,5 g, 21,6 mmol, 1,05 eq) en diclorometano (55 ml), a
ritmo constante a lo largo de diez minutos, a una solución agitada y
enfriada (baño de agua helada) del producto del Ejemplo 3B (6,6 g,
20,6 mmol) en diclorometano (90 ml). Una vez completa la adición, la
solución amarilla resultante se agitó durante otros diez minutos
antes de verterla en una mezcla de carbonato sódico (15 g) en agua
(90 ml) y hielo triturado (90 g) sometida a agitación rápida. La
mezcla se agitó durante otros 10 minutos y se transfirió a un embudo
de separación.
Una vez separadas las fases, se retiró la capa
de diclorometano marrón, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro,
se filtró y se concentró bajo presión reducida, para obtener el
alqueno crudo intermedio en forma de un aceite marrón
(aproximadamente 6,7 g). Los análisis por TLC (sílice, acetato de
etilo) mostraron que no quedaba nada de
(+)-\beta-DHTBZ en el producto
crudo.
El alqueno crudo se absorbió (atmósfera de
nitrógeno seco) en tetrahidrofurano anhidro (40 ml) y se añadió una
solución de borano en THF (solución 1M, 2,5 eq, 52 ml) bajo
agitación a lo largo de quince minutos. Después, la mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante dos horas. Los
análisis por TLC (sílice, acetato de etilo) mostraron que no
quedaba nada del alqueno intermedio en la mezcla de reacción.
A la mezcla de reacción agitada se añadió una
disolución de hidróxido de sodio (3,7 g) en agua (10 ml), seguido
de una disolución acuosa de peróxido de hidrógeno (50%, aprox. 7
ml), y la mezcla de dos fases formada se agitó bajo reflujo durante
una hora. Los análisis por TLC de la fase orgánica en ese momento
(sílice, acetato de etilo) mostraron el aspecto de un producto con
el Rf esperado para el isómero B. También se observó un componente
no polar característico.
La mezcla de reacción se dejó enfriar a
temperatura ambiente y se vertió en un embudo de separación. Se
retiró la capa orgánica superior y se concentró bajo presión
reducida para eliminar la mayor parte del THF. El residuo se
absorbió en éter (estabilizado (BHT), 75 ml), se lavó con agua (40
ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se
concentró bajo presión reducida para obtener un aceite amarillo
pálido (8,1 g).
El aceite amarillo se purificó mediante
cromatografía en columna (sílice, acetato de etilo:hexano (80:20),
aumentando hasta el 100% de acetato de etilo) y las fracciones de
columna deseadas se recogieron, combinaron y concentraron bajo
presión reducida, para obtener un aceite pálido, que se trató con
éter (estabilizado, 18 ml) y se concentró bajo presión reducida
para obtener el isómero B en forma de una espuma sólida de color
amarillo pálido (2,2 g).
La HPLC quiral utilizando las condiciones
indicadas en el Ejemplo 3B confirmó que se había producido el
isómero B en un exceso enantiomérico (e.e.) superior al 97%.
La rotación óptica se midió utilizando un
polarímetro Bellingham Stanley ADP220 y dio como resultado un
[\alpha_{D}] de +123,5º.
\vskip1.000000\baselineskip
La sal metanosulfonato del isómero B se preparó
disolviendo una mezcla de 1 equivalente del isómero B del Ejemplo
3C y 1 equivalente de ácido metanosulfónico en la cantidad mínima de
etanol y añadiendo después dietil éter. El precipitado blanco
resultante formado se recogió por filtración y se secó in
vacuo para obtener la sal mesilato con un rendimiento de aprox.
un 85% y una pureza (mediante HPLC) de aproximadamente un 96%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó la sal de ácido
(S)-(+)-canfor-10-sulfónico
del isómero B y un cristal simple se sometió a estudios
cristalográficos de rayos X bajo las siguientes condiciones:
Difractómetro: Nonius KappaCCD area detector
(exploraciones t/i y exploraciones OJ para llenar la unidad
asimétrica).
Determinación celular: DirAx (Duisenberg, A.J.M.
(1992). J. Appl. Cryst. 25, 92-96).
Recogida de datos: Collect (Collect:
software de recopilación de datos, R. Hooft, Nonius B. V.,
1998).
Reducción de datos y refinado celular: Demo (Z.
Otwinowski & W. Minor, Methods in Enzymology (1997) vol.
276: Macromolecular Crystallography, parte A, páginas
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Corrección de absorción: Sheldrick, G. M. SADABS
- Bruker Nonius area detector scaling and absorption correction -
V2.\0.
Solución de estructura: SHELXS97 (G. M.
Sheldrick, Acta Cryst. (1990) A46
467-473).
Refinación de estructura: SHELXL97 (G. M.
Sheldrick (1997), Universidad de Göttingen, Alemania).
Gráficos: Cameron - A Molecular Graphics Package
(D. M. Watkin, L. Pearce y C. K. Prout, Chemical Crystallography
Laboratory, Universidad de Oxford, 1993).
Detalles especiales: Todos los átomos de
hidrógeno se dispusieron en posiciones ideales y se refinaron
utilizando un modelo riding, excepto los del NH y OH que
estaban situados en el mapa de diferencias y se refinaron utilizando
restricciones. Quiralidad: NI=R, CI2=S, CI3=S, CI5=R, C21=S,
C24=R.
Los resultados de los estudios se muestran en
las Tablas A, B, C, D y E.
En las tablas, la etiqueta RUS0350 se refiere al
isómero B.
En base a los datos arriba mostrados, se
considera que el isómero B tiene la configuración 2S, 3S, 11bR, que
corresponde a la fórmula (Ia):
Los ratones transgénicos
B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/1J (R6/2) son
transgénicos para el extremo 5 del gen de HD humano que tiene
expansiones de repetición (CAG)115 - (CAG)150. Los
ratones transgénicos R6/2 muestran un fenotipo neurológico
progresivo que imita muchas de las características de la enfermedad
de Huntington, incluyendo movimientos de tipo coreiforme,
movimientos estereotípicos involuntarios, temblores y ataques
epilépticos. Orinan con frecuencia y muestran una pérdida de peso
corporal en el curso de la enfermedad. Estos síntomas aparecen entre
las 6 y las 8 semanas de edad.
Se llevó a cabo un estudio para evaluar el
efecto del isómero B en este modelo de la enfermedad de Huntington
en ratones transgénicos mediante la evaluación de los animales en
una serie de pruebas de conducta.
Se introdujeron en jaulas ratones transgénicos
B6CBa-Tg(HDexon1)62Gpb/1J hembra
(Jackson Laboratory, USA) a razón de 5 ratones por jaula en un
entorno enriquecido bajo un ciclo de luz-oscuridad
de 12 h - 12 h (la luz se encendía a las 7:00 am y se apagaba a las
7:00 pm), a una temperatura ambiente de 21 \pm 2ºC, con un 50
\pm 15% de humedad. Los ratones tenían acceso a una comida
comercial para ratones (mouse/rate breeding, ref. 9341 Provimi
Kliba, Suiza) y agua del grifo.
A ratones de 10 semanas de edad se les
administró repetidamente el isómero B en aceite maíz (5 mg/kg i.p.)
una vez al día durante 4 días.
En los días de ensayo, los animales fueron
sometidos a las siguientes pruebas, aplicando el protocolo descrito
en la sección de protocolo:
Dos horas antes de las observaciones, los
animales se introdujeron en jaulas individuales. Primero se
realizaron mediciones en las jaulas individuales. Se registraron
las convulsiones, temblores-tics, movimientos
estereotípicos y vocalizaciones del animal. Después se colocó el
animal en una superficie libre de 58,5 x 68,5 cm con un cerco de 6
cm y se observó durante aproximadamente 3 minutos. Se clasificaron
las características ambulatorias. De nuevo se anotó la presencia de
convulsiones o temblores-tics y movimientos
estereotípicos. Al finalizar los 3 minutos se registró el número de
bolos fecales y charcos de orina. Después de las pruebas, los
ratones fueron devueltos a sus jaulas individuales.
Los ratones se introdujeron en una caja de
plástico transparente con una dimensiones de suelo de 30 x 30 cm en
un espacio con baja intensidad luminosa (máximo 20 lux). La
actividad locomotora se determinó durante un período de 10 minutos
utilizando un analizador de imágenes de vídeo (Videotrack, View
Point, Lyon, Francia). Se midió la cantidad, distancia y velocidad
media de los movimientos ambulatorios. Después de las pruebas, los
ratones fueron devueltos a sus jaulas.
Dos días consecutivos antes de la primera
administración, los animales fueron entrenados para utilizar el
Rotarod: se colocaron sobre un Rotarod con aceleración (Ugo Basile,
Italia) durante un tiempo máximo de 450 segundos, Pasaron por 2
sesiones de entrenamiento comenzando con 4 r.p.m. durante 300
segundos y después permaneciendo a 40 r.p.m. durante 150 segundos.
Las dos sesiones de entrenamiento se dieron a intervalos de 1 hora.
Los días de los ensayos, cada animal fue sometido a una prueba bajo
las condiciones arriba descritas. Cada prueba se terminaba cuando
el ratón se caía o cuando permanecía sobre el Rotarod durante 450
segundos. Después de las pruebas, los ratones fueron devueltos a sus
jaulas.
Los resultados de los ensayos se muestran en las
Tablas 5 a 9.
Tamaño de los grupos experimentales: 10
Grupo 1: ratones transgénicos
B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/1J
hemicigóticos tratados con vehículo i.p. una vez al día durante 4
días (desde el día 0 hasta el día 3).
Grupo 2: ratones transgénicos
B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/1J
hemicigóticos tratados con 5 mg/kg i.p. del compuesto de ensayo una
vez al día durante 4 días (desde el día 0 hasta el día 3).
A la edad de 10 semanas, antes de la
administración (día 0) y cada día durante 3 días después de la
administración, los animales fueron sometidos a las pruebas abajo
descritas, de la siguiente manera:
Día -2
- \bullet
- Entrenamiento en el Rotarod, 2 sesiones con un intervalo de 1 hora.
\vskip1.000000\baselineskip
Día -1
- \bullet
- Entrenamiento en el Rotarod, 2 sesiones con un intervalo de 1 hora.
\vskip1.000000\baselineskip
Día 0
- \bullet
- Test de Irwin simplificado.
- \bullet
- Prueba de actividad locomotora, inmediatamente después del test de Irwin simplificado.
- \bullet
- Prueba con el Rotarod, inmediatamente después de la prueba de actividad locomotora.
- \bullet
- Administración del compuesto de ensayo, 1 hora después de la prueba con el Rotarod.
- \bullet
- Test de Irwin simplificado, 40 minutos después de la administración.
- \bullet
- Actividad locomotora, inmediatamente después del test de Irwin simplificado.
\vskip1.000000\baselineskip
Día 1
- \bullet
- Administración del compuesto de ensayo.
- \bullet
- Test de Irwin simplificado, 40 minutos después de la administración.
- \bullet
- Prueba con el Rotarod, inmediatamente después del test de Irwin simplificado.
\vskip1.000000\baselineskip
Día 2
- \bullet
- Administración del compuesto de ensayo.
- \bullet
- Test de Irwin simplificado, 40 minutos después de la administración.
- \bullet
- Prueba con el Rotarod, inmediatamente después del test de Irwin simplificado.
\vskip1.000000\baselineskip
Día 3
- \bullet
- Administración del compuesto de ensayo.
- \bullet
- Test de Irwin simplificado, 40 minutos después de la administración.
- \bullet
- Prueba de actividad locomotora, inmediatamente después del test de Irwin simplificado.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados del test de Irwin simplificado se
analizaron utilizando un test U de Mann-Whitney no
paramétrico. Los datos de actividad locomotora se analizaron
utilizando un test de Dunnett. Los resultados del Rotarod se
analizaron utilizando el test U de Mann-Whitney no
paramétrico. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el
software Statview SE^{+graphics}, Brain Power.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Los resultados demuestran que, aunque tanto los
ratones control como los ratones tratados con el isómero B
mostraron cierta progresión en los síntomas típicos de la enfermedad
de Huntington durante los tres primeros días después de la
administración, los ratones tratados con el isómero B mostraron un
deterioro significativamente menor que los ratones control durante
el período de los días 17 a 24 después de la administración. En
particular, durante dicho período se detuvo sustancialmente o se
retrasó el deterioro ambulatorio, y las incidencias de movimientos
involuntarios como corea involuntaria, temblores y tics en los
ratones tratados con el isómero B no eran peores después de 21 días
de lo que habían sido antes de la administración del isómero B. Es
posible que repitiendo la administración del isómero B a intervalos
apropiados (lo que no se hizo en las pruebas) se pudiera detener o
retrasar aún más el desarrollo de los síntomas.
Por consiguiente, los resultados indican que el
isómero B sería útil para prevenir la aparición o retrasar el
desarrollo de los síntomas asociados con la enfermedad de
Huntington.
\vskip1.000000\baselineskip
Se llevó a un estudio en ratas para determinar
si los isómeros de dihidrotetrabenazina de la invención tenían
propiedades sedantes. Los efectos de los isómeros en la actividad
locomotora espontánea de ratas se comparó con los efectos
producidos por la tetrabenazina y el haloperidol utilizando los
métodos descritos más abajo. Los resultados se muestran en la Tabla
10.
\vskip1.000000\baselineskip
Para los estudios se utilizaron ratas
Sprague-Dawley macho (Charles River Laboratories,
Saint-Germain/
L'Arbresle, Francia) con un peso de 200-250 g al comienzo del estudio. Las ratas se introdujeron en jaulas Makrolon de tipo III, a razón de 2 ó 3 ratas por jaula, en un espacio preparado con las siguientes condiciones ambientales: temperatura 20\pm2ºC, humedad: mínimo 45%, cambios de aire: > 12 por hora, ciclo luz/oscuridad de 12 h/12 h [encendiéndose la luz a las 7:00 a.m.]. Antes del comienzo del estudio se permitió que las ratas se aclimataran a estas condiciones durante como mínimo cinco días. Las ratas recibieron comida (Dietex, Vigny, Francia, ref. 811002) y agua (agua de grifo en botella) ad líbitum.
L'Arbresle, Francia) con un peso de 200-250 g al comienzo del estudio. Las ratas se introdujeron en jaulas Makrolon de tipo III, a razón de 2 ó 3 ratas por jaula, en un espacio preparado con las siguientes condiciones ambientales: temperatura 20\pm2ºC, humedad: mínimo 45%, cambios de aire: > 12 por hora, ciclo luz/oscuridad de 12 h/12 h [encendiéndose la luz a las 7:00 a.m.]. Antes del comienzo del estudio se permitió que las ratas se aclimataran a estas condiciones durante como mínimo cinco días. Las ratas recibieron comida (Dietex, Vigny, Francia, ref. 811002) y agua (agua de grifo en botella) ad líbitum.
El día del experimento se prepararon soluciones
frescas de cada compuesto de ensayo en aceite de maíz. El
haloperidol se preparó en hidroxietilcelulosa, al 0,5% en agua
desionizada. El vehículo o los compuestos de ensayo se
administraron en forma de una dosis única (0,3, 1, 3 y 10 mg/kg, 2
ml/kg i.p.). El compuesto de referencia, haloperidol (1 mg/kg), se
administró por vía i.p. (2 ml/kg).
Los animales se introdujeron en jaulas de
plexiglás vigiladas por una cámara de vídeo en un espacio con baja
intensidad luminosa (máximo 50 lux). Cuarenta y cinco minutos y 3
horas después de la administración se determinó la actividad
locomotora durante períodos de 20 minutos utilizando un analizador
de imágenes de vídeo (Videotrack, View Point, Francia). La
actividad locomotora se registró en el grupo de referencia
(haloperidol) 1 hora después de la administración. Se midió la
cantidad y la duración de los movimientos ambulatorios y la duración
de la inactividad. Al final de la medida de la actividad locomotora
(45 minutos y 3 horas), en la jaula de plexiglás se calificaron el
cierre palpebral y el nivel de alerta de la siguiente manera:
\vskip1.000000\baselineskip
- 0
- : (normal) párpados completamente abiertos
- 1
- : párpados ligeramente caídos
- 2
- : ptosis, párpados caídos aproximadamente a la mitad
- 3
- : párpados completamente cerrados
\vskip1.000000\baselineskip
- 1
- : muy bajo, estupor, coma, poca o ninguna sensibilidad
- 2
- : bajo, cierto estupor, "embotado", algo de movimiento de la cabeza o el cuerpo
- 3
- : un poco bajo, ligero estupor, algunos movimientos exploratorios con períodos de inmovilidad
- 4
- : normal, alerta, movimientos exploratorios/inmovilización lenta
- 5
- : algo alto, ligera excitación, tensión, movimientos rápidos e inmovilizaciones repentinos
- 6
- : muy alto, hiperalerta, excitado, rachas repentinas de carreras o movimientos corporales
La cantidad de incidencias y la duración (en
segundos) de los movimientos ambulatorios (grandes) y la duración
de los períodos de inactividad (segundos) se determinaron durante
períodos de 20 minutos (45 minutos y 3 horas después de la
administración) mediante un analizador de imágenes de vídeo
(Videotrack, View Point, Lyon, Francia). El seguimiento de imágenes
se llevó a cabo utilizando una cámara de vídeo situada por encima de
la jaula de plexiglás, que grababa la actividad locomotora general.
Las imágenes grabadas con la cámara de vídeo se digitalizaron y el
desplazamiento del centro de gravedad de los puntos de imagen
digital se sometió a seguimiento y se analizó utilizando el
siguiente método: se midió la velocidad de desplazamiento del centro
de gravedad del punto y se establecieron dos valores umbral para
definir el tipo de movimiento: umbral 1 (alta velocidad) y umbral 2
(baja velocidad). Cuando el animal se movía y la velocidad de
deplazamiento del centro de gravedad del punto era superior al
umbral 1, el movimiento se consideraba un movimiento ambulatorio.
Cuando el animal permanecía inactivo o cuando la velocidad era
inferior al umbral 2, el movimiento se consideraba como
inactividad.
Los resultados se expresaron como media\pmSEM
de los 12 valores individuales. Se realizaron análisis estadísticos
utilizando ANOVA (de un factor) y test t de Dunnett y con el test no
paramétrico de Kruskal-Wallis seguido de un test U
de Mann & Whitney para el acotamiento de la sedación. Se adoptó
un valor p < 0,05 como indicador de significación.
\vskip1.000000\baselineskip
Tamaño del grupo n = 12
Grupo 1: Referencia, haloperidol (1 mg/kg
i.p.)
Grupo 2: Grupo de control, vehículo (2 ml/kg
i.p.)
Grupo 3: Tetrabenazina (0,3 mg/kg i.p.)
Grupo 4: Tetrabenazina (1 mg/kg i.p.)
Grupo 5: Tetrabenazina (3 mg/kg i.p.)
Grupo 6: Tetrabenazina (10 mg/kg i.p.)
Grupo 7: Isómero C (0,3 mg/kg i.p.)
Grupo 8: Isómero C (1 mg/kg i.p.)
Grupo 9: Isómero C (3 mg/kg i.p.)
Grupo 10: Isómero C (10 mg/kg i.p.)
Grupo 11: Isómero B (0,3 mg/kg i.p.)
Grupo 12: Isómero B (1 mg/kg i.p.)
Grupo 13: Isómero B (3 mg/kg i.p.)
Grupo 14: Isómero B (10 mg/kg i.p.)
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados demuestran que la tetrabenazina
produce un efecto sedante dependiente de la dosis 45 minutos y 3
horas después de la administración, mientras que el isómero B y el
isómero C no muestran efectos sedantes en ningún momento, aunque el
isómero C presenta un ligero efecto hiperlocomotor no significativo
3 horas después de la administración.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepara una composición de tabletas que
contiene una dihidrotetrabenazina de la invención mezclando 50 mg de
la dihidrotetrabenazina con 197 mg de lactosa (BP) como diluyente y
3 mg de estearato de magnesio como lubricante, y comprimiendo la
mezcla para formar una tableta de modo conocido.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepara una composición de tabletas que
contiene una dihidrotetrabenazina de la invención mezclando el
compuesto (25 mg) con óxido de hierro, lactosa, estearato de
magnesio, almidón de maíz blanco y talco, y comprimiendo la mezcla
para formar una tableta de modo conocido.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepara una formulación para cápsulas
mezclando 100 mg de la dihidrotetrabenazina de la invención con 100
mg de lactosa y rellenando la mezcla resultante en cápsulas de
gelatina dura opacas estándar.
Claims (15)
1. Compuesto para su utilización para la
detención o el retraso de la progresión de uno o más síntomas de la
enfermedad de Huntington en un paciente cuyos síntomas se
seleccionan entre movimientos involuntarios y/o degeneración
ambulatoria, siendo dicho compuesto un isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo.
2. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 1, consistiendo los síntomas en movimientos
involuntarios seleccionados de entre corea involuntaria, temblores y
tics.
3. Compuesto para su utilización en el
tratamiento profiláctico de la enfermedad de Huntington en un
paciente identificado como portador del gen mutante responsable de
la enfermedad de Huntington, siendo dicho compuesto un isómero (+)
de 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo tal como se define en la reivindicación 1.
4. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 3, caracterizado porque el compuesto se
utiliza para el tratamiento profiláctico de un paciente con una edad
comprendida entre 15 y 50 años que porta la forma mutante del gen de
la HD pero que todavía no ha desarrollado síntomas de la enfermedad,
teniendo dicho tratamiento profiláctico el objetivo de prevenir o
retrasar la aparición de síntomas asociados con la enfermedad de
Huntington, siendo dicho compuesto un isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo tal como se define en la reivindicación 1.
5. Compuesto para su utilización según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado
porque el isómero (+) de 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene
la fórmula (Ia):
6. Compuesto para su utilización según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado
porque el isómero (+) de 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene
una pureza isomérica superior al 90%.
7. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 6, caracterizado porque el isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene una pureza isomérica
superior al 95%.
8. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 7, caracterizado porque el isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina tiene una pureza isomérica
superior al 98%.
9. Compuesto para su utilización según
cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado
porque el isómero (+) de 3,11b-cis-dihidrotetrabenazina se
encuentra en forma de una sal de adición de ácido.
10. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 9, caracterizado porque la sal es una sal
metanosulfonato.
11. Compuesto para su utilización según
cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado
porque un paciente al que se administra el compuesto tiene una forma
mutante del gen que presenta como mínimo treinta y cinco
repeticiones de CAG en el gen IT-15.
12. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 11, caracterizado porque un paciente al que se
administra el compuesto una forma mutante del gen que presenta como
mínimo cuarenta repeticiones de CAG en el gen
IT-15.
13. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 12, caracterizado porque un paciente al que se
administra el compuesto una forma mutante del gen que presenta como
mínimo 50 repeticiones de CAG en el gen IT-15.
14. Compuesto para su utilización según la
reivindicación 4, teniendo el tratamiento profiláctico el objetivo
de prevenir o retrasar la progresión subclínica de la enfermedad en
un paciente.
15. Utilización de un isómero (+) de
3,11b-cis-dihidrotetrabenazina o de una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo para producir un medicamento para su utilización
tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
14.
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