KR20080030666A

KR20080030666A - 헌팅턴병의 증상의 치료를 위한３,１１ｂ-시스-디하이드로테트라베나진의 용도

Info

Publication number: KR20080030666A
Application number: KR1020087003481A
Authority: KR
Inventors: 로버트 트리드게트; 띠에리 필로
Original assignee: 캠브리지 래버러토리스 (아일랜드) 리미티드
Priority date: 2005-07-14
Filing date: 2006-07-13
Publication date: 2008-04-04
Also published as: RU2409365C2; PT1885363E; PL1885363T3; DK1885363T3; AU2006268098A1; DE602006002982D1; EP1885363A1; ZA200800905B; CA2615077A1; SI1885363T1; EP1885363B1; EP2027861B1; RS50626B; HK1111085A1; NZ565522A; ATE409481T1; RU2008105590A; ES2314931T3; CY1108653T1; HRP20080677T3

Abstract

본 발명은 헌틴턴병의 환자에 있어서 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 진전 및 연축의 불수의적 움직임 및 퇴행 보행으로부터 선택되는 증상의 진행을 정지 또는 지연시키는데 사용되는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 제공한다.

헌팅턴병, 불수의적 무도증, 진전, 연축, 퇴행 보행.

Description

헌팅턴병의 증상의 치료를 위한 ３,１１ｂ-시스-디하이드로테트라베나진의 용도 {Use of ３,１１ｂ-cis-dihydrotetrabenazine for the Treatment of Symptoms of Huntington's Disease}

본 발명은 헌팅턴병의 치료에 사용되는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 용도에 관한 것이다.

헌팅턴 무도병이라고도 알려진 헌팅턴병은 현재 불치병인 유전성 신경퇴행성질환이다. 상기 질병은 염색체 4p16.3 상에 위치한 IT-15 유전자에서의 CAG 삼핵산 반복서열 확장(HD 돌연변이로 칭명됨)에 의하여 헌팅턴이라 칭명되는 비정상적인 형태의 단백질이 생성됨으로써 발병된다. 상기 비정상적인 단백질은 추측컨대 여러가지 유형의 뉴런(neuron) 내에서 응괴 또는 응집됨으로써, 뇌의 선조체 영역에서의 뉴런의 괴사를 유발하는 과정을 촉발시킨다.

헌팅턴병(HD) 유전자는 글루타민 아미노산을 암호화하는 뉴클레오티드 CAG 반복 염기서열을 가진 DNA 단편을 포함한다. 만약, 유전자 내의 CAG 염기서열의 반복 수가 30 이하인 경우에는, 그 유전자를 보유하는 사람은 헌팅턴병에 감염되지 않을 것으로 확인되었다. 그러나, CAG 염기서열의 반복수가 40을 초과하는 유전자를 보유하는 사람은 헌팅턴병에 감염되기 쉽다.

헌팅턴병은 상염색체 우성형질 유전 방식을 통해 전달되므로, 부모 중 한명이 헌팅턴병에 걸린 경우 각각의 아이가 상기 질병을 유전받게 확률은 50%이다. 헌팅턴병의 증상은 전형적으로 약 30 내지 50세의 연령에서 나타나며, 상기 질병은 일반적으로 10 내지 25년에 걸쳐 진행된다. 상기 질병의 특징 및 증상으로는 성격변화, 우울증, 조울증, 불안전한 보행, 불수의적 무도증, 연축, 경련, 진전, 치매, 불분명한 발음, 손상된 판단력, 연하곤란(difficulty in swallowing) 및 취한 듯한 외관이 포함된다.

일단 한 개인이 헌팅턴병의 증상을 보이면, 헌팅턴병의 경과는 대체로 10년 부터 30년까지 지속될 수 있다. 전형적으로,헌팅턴병의 경과는 대략적으로 초기,중기, 말기의 세 단계로 나뉘어진다.

초기 단계에 있어서, 초기 단계의 환자들은 여전히 일상적 활동의 대부분을 수행할 수 있다. 그들은 여전히 일을 하고, 운전을 할 수도 있다. 그들은 약간의 통제 불능의 움직임, 비틀거림 및 서툼, 집중력 저하, 단기 기억의 결핍, 우울증 뿐만이 아니라 조울증을 나타내는 반면, 불수의적인 움직임들은 상대적으로 가볍고, 발음은 여전히 정확하며, 치매 증상은 나타날 수 있지만, 그 증상이 가볍다.

중기 단계에서는, 환자들은 더욱 활동에 장애를 받으며 대체로 그들의 일상 적인 활동 중 몇몇에 있어서도 도움을 필요로 하게 된다. 넘어짐, 체중 감소, 및 연하곤란이 중기 단계의 문제점일 수 있고, 치매 증상은 일반인이 보기에도 더욱 뚜렷해 질 수 있다. 또한, 조절불능의 움직임들이 더욱 뚜렷해진다.

말기 단계에서는, 환자들은 거의 전면적인 치료를 필요로 하며, 다수는 병원 또는 요양원에서 지속적인 간호를 받아야 할 정도로 상태가 악화된다. 이러한 말기 단계에서, 그들은 더 이상 걷거나 말할 수 없으며, 가끔 비자발적으로 움직일지라도, 그들의 몸은 더욱 경직될 수 있다. 이 단계의 환자들은 종종 음식을 삼키지 못한다. 말기 단계의 대부분의 환자들은 체중이 감소하며 외관상으로 그들의 주위 환경을 인식하지 못한다. 결국 환자가 죽게 될 때의 사망 원인은 영양 실조나 결핵과 같이, 심하게 쇠약한 환자가 죽음에 이르게 되는 일반적인 사망원인과 관련되어 있다.

건강 국제 기관(NIH)의 부서인, 신경유전질환 및 뇌졸증의 US 국제 기관(NINDS)에 따르면, 현재로서는 헌팅턴병을 정지 또는 회복시키는 방법이 존재하지 않는다.

헌팅턴병의 치료제 개발을 위한 시도가 있었으며 문헌[참조: Kapuj et al in nature medicine, February 2002, Vol.8, no.2, pp. 143-149]에 의한 연구 결과는 시스타민의 투여와 관계있다. 트랜스글루타미나제는 헌팅턴병을 유발하는 것으로 생각되는 헌팅턴 단백질의 응집을 돕는데, 명백히, 시스타민은 효소인 트랜스글루타미나제를 불활성화 시킨다. 그럼에도 불구하고, 현재 관련자들이 알고 있는 한에서는, 현재 헌팅턴 질병의 진행을 치료 또는 정지시키기 위해 일반적으로 사용 가능한 약이 없다.

헌팅턴 질병을 유발하는 유전자의 발견[참조 : 헌팅턴병의 공동 연구에 의한 논문, Vol. 72, March 26, 1993, p. 971]은 발현된 돌연변이 형태의 유전자의 존재 여부에 관한 진단 실험을 가능토록 하였다. 진단 실험은 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 IT-15 유전자 상의 CAG 염기 서열의 반복 수를 조사하는 실험으로서, 현재 널리 사용 가능하며, 환자가 헌팅턴 질병의 증상을 나타낼지 여부를 예측 가능하도록 한다[참조: 예를 들면, M. Hayden et al ., Am . J. Hum . Genet .의 논문, 55:606-617(1994); S. Hersch 의 논문, “신경 유전학 Genie: 헌팅턴병 돌연변이 실험” Neurol. 1994; 44:1369-1373; 및 R. R. Brinkman et al.(1997)의 논문 “CAG 크기에 관하여, 특정 나이에 헌팅턴병에 걸릴 가능성”, Am . J. Hum . Genet. 60:1202-1210]

테트라베나진(화학명: 1,3,4,6,7,11b-헥사하이드로-9,10-다이메톡시-3-(2-메틸프로필)-2H-벤조(아)퀴놀리진-2-온)은 1950년대 후반부터 약제학적 약물로서 사용되어져왔다. 처음에 테트라베나진은 항정신병제 약으로 개발되었으나 현재에는 헌팅턴병, 편무도병, 노인무노병, 안면 경련, 지연성 운동 장애 및 뚜 렛(Tourette's) 증후군과 같은 과다운동성 장애의 증상 치료제로 사용되고 있다[참조: 예를 들어, Jankovic et al ., Am . J. Psychiatry .(1999) Aug; 156(8):1279-81 및 Jankovic et al., Neurology(1997) Feb; 48(2):358-62].

테트라베나진의 주된 약학적 작용은 인간 소포 모노아민 전달체의 이성질체 형태 2(hVMAT2)를 억제함으로써 중추신경계 내의 모노 아민(예: 도파민, 세로토닌 및 노르에피네프린)의 공급을 감소시키는 것이다. 상기 약물은 또한 시냅스 후의 도파민 리셉터를 차단한다.

테트라베나진은 여러가지 과다 운동성 장애의 치료제로서 효과적이고 안전한 약이고, 전형적인 향정신병 약물과는 반대로 만발성 운동장애를 유발하는 것으로 증명되지 않았다. 그럼에도 불구하고, 테트라베나진은 우울증, 파킨슨증, 졸음, 신경과민, 불면증, 및 드물게는 항정신병약물악성증후군을 포함하는 여러 가지 복용 부작용을 보이고 있다.

테트라베나진의 중심 효과는 레세르핀의 중심 효과와 매우 유사하지만, VMAT1 전달체에 대한 활성이 없다는 점에 있어서 레세르핀과 다르다. VMAT1 전달체에 대한 활성의 결핍은 테트라베나진이 레세르핀보다 말초적 활성이 열등함을 의미하며, 결과적으로 저혈압과 같은 VMAT1 관련 부작용을 유발하지 않는다.

테트라베나진의 화학적 구조는 아래 형태 1과 같다.

[형태 1]

테트라베나진의 구조

상기 화합물은 탄소 3과 11b에 키랄중심을 가지고 있어서, 이론적으로 아래 형태 2와 같이 총 네 가지의 이성질체 형태가 존재할 수 있다.

[형태 2]

테트라베나진의 가능한 이성질체

형태 2에서, 각각의 이성질체의 입체 화학은 칸, 인골드 및 프렐로그(Cahn, Ingold and Prelog)에 의해 개발된 "R" 및 "S"의 화학명명법을 이용하여 정의된다[ 참조: advanced Organic Chmistry, Jerry March, Vol. 4, John Wiley & Sons, New York, 1992, pages 019-114]. 형태 2 및 본원의 다른 곳에서, "R"과 "S"의 명칭은 탄소 원자의 위치 번호들의 순서에 의하여 결정된다. 따라서, 예를 들면, RS는 3R과 11bS의 단축 표현이다. 비슷하게 3개의 키랄중심이 존재하는 경우에는 아래에 기술된 디하이드로테트라베나진에서와 같이 "R" 또는 "S"의 명칭은 2, 3 및 11b 탄소의 순서대로 작성된다. 따라서, 2S,3R,11bR 이성질체는 단축형태로서 SRR 등과 같이 칭명된다.

상업적으로 이용가능한 테트라베나진은 RR 및 SS 이성질체의 라세미체 혼합물이며, RR과 SS의 이성질체(3과 11b에 위치한 수소원자들이 트랜스인 상대적 방향에 놓여 있으므로, 이하에서는 개별적으로 또는 집단적으로 트랜스-테트라베나진으로 칭한다)는 열역학적으로 가정 안정한 이성질체들일 것이다.

테트라베라진은 다소 낮고 다양한 생체 이용률을 가진다. 테트라베나진은 광법위하게 일차 통과 물질 대사(first-pass metabolism)되며, 변하지 않은 테트라베나진은 전형적으로 소변에서 거의 또는 전형 발견되지 않는다. 주요 물질 대사는 테트라베나진의 2-케토 그룹이 환원된 형태이며, 약물 활성의 주요 책임물질이라 여겨지는 디하이드로테트라베나진은(화학명: 2-하이드록시-3-(2-메틸프로필)-1,3,4,6,7,11b-헥사하이드로-9,10-디메톡시-벤조(아)퀴놀리진)이다[참조: Mehvar et al., Drug Metab.Disp, 15, 250-255(1987) and J. Pharm. Sci., 76, No.6, 461-465(1987)), and Roberts et al., Eur. J. Clin. Pharmacol., 29: 703-708(1986)].

네개의 디하이드로테트라베나진의 이성질체는 예전에 확인되고, 특징지워졌으며, 그 모두는 모(parent) 테트라베나진의 더욱 안전한 RR 및 SS 이성질체로부터 얻어지고 3과 11b 위치의 수소들 간에 있어 트랜스 상대 위치를 갖는다[참조: Kilbourn et al., Chirality, 9:59-62(1997) and Brossi et al., Helv. Chim. Acta., vol. XLI, No. 193, pp1793-1806(1958)]. 네 개의 이성질체는(+)-α-디하이 드테트라베나진,(-)-α-디하이드로테트라베나진,(+)-β-디하이드로테트라베나진 및(-)-β-디하이드로테트라베나진이다. 공지된 네 개의 디하이드로테트라베나진 이성질체의 구조는 형태 3에 나타난 바와 같은 것으로 간주된다.

[형태 3]

디하이드로테트라베나진의 공지된 이성질체의 구조

캘버른(Kilbourn) 등은(참조)의식적인 래트 뇌에 있어서 개별적으로 방사선 라벨 처리된 디하이드로테트라베나진 이성질체의 특이 결합에 관하여 연구하였다. 그들은(+)- α-[¹¹C]디하이드로테트라베나진(2R,3R,11bR) 이성질체가 신경막 도파민 전달체(DAT)와 소포 모노아민 운반체(VMAT2)의 고농도와 연관된 뇌의 부분에 축척되는 것을 발견하였다. 그러나 본질적으로 비활성인(-)-α-[¹¹C]디하이드로테트라베나진 이성질체는 뇌에서 거의 균일하게 분포되어 있는데, 이는 DAT와 VMAT2으로의 특이 결합을 하지 않는다는 것을 제시한다. 생체 내에서의 연구는(+)-α-[¹¹C]디하이드로테트라베나진 이성질체가(-)-α-[¹¹C]디하이드로테트라베나진의 K_i 보다 2000 배 더 큰 [³H]메톡시테트라하이드로베나진 의 K_i를 나타냄을 반증하는 시험관 내의 연구와 연관이 있다.

국제 특허 출원 제PCT/GB2005/000464호(공개번호: WO 2005/077946)는 테트라베나진의 불안정한 RS와 SR의 이성질체(3과 11b에 위치한 수소 원자들이 시스 상대적 방향에 놓여 있으므로 이하에서는 개별적으로 또는 집단적으로 시스-테트라베나진으로 칭한다)로부터 얻어진 약제학적 디하이드로테트라베나진 이성질체의 제조 및 용도를 공개하고 있다.

발명의 요약

현재, 우리의 선출원 제PCT/GB2005/000464호에서 기술되었던 시스-디하이드로테트라베나진은 헌팅턴병(Huntington's Disease)의 적어도 몇몇의 증상의 진행을 저지하거나 지연시키는 효능이 있음이 밝혀졌다. 더욱 구체적으로는, 헌팅턴병과 관련된 퇴행 보행 및 불수의적인 운동(예: 진전 또는 연축)의 증가는 본 발명의 시스-디하이드로테트라베나진을 투여함으로써 저지되거나 상당히 지연될 수 있음이 밝혀졌다.

따라서, 첫 번째 측면에 있어서, 본 발명은 헌팅턴병의 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 진전 및 연축 같은 불수의적 움직임 및 퇴행 보행으로부터 선택되는 증상의 진행을 정지 또는 지연시키는데 사용되는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 제공하고 있다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 헌팅턴병의 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 진전 및 연축 같은 불수의적 움직임 및 퇴행 보행으로부터 선택되는 증상의 진행을 정지 또는 지연시키는 약제 제조를 위한 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 용도를 제공하고 있다.

추가의 측면에 있어서, 본 발명은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것으로 헌팅턴병의 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 진전 및 연축 같은 불수의적 움직임 및 퇴행 보행으로부터 선택되는 증상의 치료를 요하는 환자에게, 이들 증상의 진행을 정지 또는 지연시키는 방법을 제공하고 있다.

진단 실험은 개인이 헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유하는지 여부를 결정짓는데 현재 사용가능하다. 돌연변이 유전자를 보유한 사람에게는 언제나 헌팅턴병이 유발되기 때문에, 인생에서 병이 유발될 것 같은 기간 동안 병의 유발 또는 전개가 예방, 전진 또는 지연된다면 유리할 것이다.

따라서, 본 발명의 추가의 측면에 있어서, 앞에서 언급한 바와 같이 헌팅턴병의 유발 또는 진행을 예방하거나 또는 지연시키는 유효량의 시스-디하이드로테트라베나진을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유하는 것으로 확인된 환자의 예방적 치료 방법이 제공된다.

본 발병의 또 다른 측면에 있어서, 앞에서 언급한 바와 같이 헌틴텅 병의 잠재성 진행을 예방하거나 지연시키는 유효량의 시스-디하이드로테트라베나진을 환자에게 투여하는 것을 포함한 방법으로서, 헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유한 것으로 확인된 환자의 예방적 치료 방법이 제공되고 있다. 잠재성 진행은 생화학 연구 또는 컴퓨터 단층 사진 또는 자기공명영상과 같은 스캐닝 기법을 이용한 연구와는 대조적으로 임상적으로 질명의 증상이 명백한 시점 이전 질병의 전개를 의미한다.

예를 들면, 시스-하이드로테트라베나진은 헌팅턴병의 돌연변이 유전자를 보유하고 있지만 병의 증상이 아직 발현되지 않은 15 내지 50세, 예로서 20 내지 50세, 25 내지 50세 또는 30 내지 50세의 환자에 있어서 예방적으로 투여될 수 있다.

본원에서 헌팅턴병 유전자의 돌연변이 형태 또는 유사 표현에 관한 언급은 IT-15 유전자 상의 CAG 반복서열의 수가 35 이상, 더욱 전형적으로 40 이상, 예를 들어, 45 이상 또는 50 이상인 유전자의 형태를 말한다. 몇몇 경우, 매우 높은 CAG 반복서열의 수(예를 들어 70 이상)가 존재할 수 있고, 이러한 거대한 CAG 반복서열의 수를 갖는 유전자의 돌연변이 형태를 보유하는 사람은 연소성 발병 형태의 상기 질병의 발병이 용이하다.

그러므로, 추가의 측면에서, 시스- 디하이드로테트라베나진은 검사를 받고 CAG 반복서열의 수가 60을 초과하는, 더욱 구체적으로 65 이상, 바람직하게는 70 이상인 돌연변이 형태의 IT-50 유전자를 갖는 것으로 밝혀진 나이가 30세 미만, 예를 들면 10 내지 29세, 더욱 전형적으로 15 내지 29세 또는 20 내지 29세인 사람들에게 예방적으로 투여될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 시스-디하이드로테트라베나진은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진이다.

본 발명에서 사용되는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진은 실질적으로 순수한 형태로서, 예를 들면 이성질체 순도가 90%를 초과, 전형적으로 95%를 초과. 더욱 바람직하게는 98%를 초과한다.

본원 내용에 있어서, 용어 "이성질체 순도"는 디하이드로테트라베나진의 모든 이성질체 형태의 디하이드로테트라베나진의 총 함량 또는 농도에 대한 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 상대적인 현존량을 일컫는다. 예를 들어, 조성물에 존재하는 디하이드로테트라베나진 총 량의 90%가 3,11b-시스-디하이드로베나진이라면, 이성질체 순도는 90%이다.

본 발명에서 사용되는 11b-시스-디하이드로테트라베나진은 실질적으로 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진이 없는, 바람직하게는 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진이 5% 미만, 더욱 바람직하게는 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진이 3% 미만, 가장 바람직하게는 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진이 1% 미만 포함된 조성물 형태일 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "3,11b-시스-"는 디하이드로테트라베나진 구조에서 3과 11b 위치의 수소 원자들이 시스 상대적 배열에 놓여 있음을 의미한다. 따라서 본 발명의 이성질체들은 화학식 1의 화합물 및 그것의 거울상체(거울상)이다.

3,11b-시스 형태를 가지는 디하이드로테트라베나진의 네 가지 가능한 이성질체가 존재하며, 이것들은 2S,3S,11bR 이성질체, 2R,3R,11bS 이성질체, 2R,3S,11bR 이성질체 및 2S,3R,11bS 이성질체이다. 네 개의 이성질체는 분리되고 특징지워졌으며, 또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 개별적 이성질체를 제공하고 있다. 특별히, 본 발명은 다음을 제공한다:

(a) 화학식(1a)의 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3S,11bR 이성질체

(b) 화학식(1b)의 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2R,3R,11bS 이성질체

(c) 화학식(1c)의 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2R,3S,11bR 이성질체

(d) 화학식(1d)의 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3R,11bS 이성질체

본 발명의 각각의 이성질체들은 그들의 적외선분광, 광학 및 크로마토그래피의 특성에 의하여 특징지어지며, 또한 X선 회절에 의하여 결정된 절대적 입체 화학 형태에 의하여 특징지어질 수 있다.

바람직한 이성질체들은 우선성(+) 이성질체들이다.

특히 바람직한 이성질체는 이성질체(1a), 즉 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3S,11bR 이성질체이다.

어떤 특별한 절배 배열 또는 입체화학의 언급없이, 네 개의 새로운 이성질체들은 아래와 같이 특징지어질 수 있다.

이성질체 A

ORD(메탄올, 21℃)에 의해 측정된 광학 활성: 표 1에 기술된 것과 실질적으로 동일한 좌선성(-) IR 스펙트럼(KBr 고체), ¹H-NMR 스펙트럼(CDCl₃) 및 ¹³C-NMR 스펙트럼(CDCl₃).

이성질체 B

ORD(메탄올, 21℃)에 의해 측정된 광학 활성: 표 1에 기술된 것과 실질적으로 동리한 우선성(+) IR 스펙트럼(KBr 고체), ¹H-NMR 스펙트럼(CDCl₃) 및 ¹³C-NMR 스펙트럼(CDCl₃), 및 실시예 4에 기술된 것과 실질적으로 동일한 ¹³C-NMR 스펙트럼(CDCl₃).

이성질체 C

ORD(메탄올, 21℃)에 의해 측정된 광학 활성: 표 2에 기술된 것과 실질적으로 동일한 우선성(+) IR 스펙트럼(KBr 고체), ¹H-NMR 스펙트럼(CDCl₃) 및 ¹³C-NMR 스 펙트럼(CDCl₃).

이성질체 D

ORD(메탄올, 21℃)에 의해 측정된 거울상 활성: 표 2에 기술된 것과 실질적으로 동일한 좌선성(-) IR 스펙트럼(KBr 고체), ¹H-NMR 스펙트럼(CDCl₃) 및 ¹³C-NMR 스펙트럼(CDCl₃)

각 이성질체의 ORD 값은 아래의 실시예에 주어져 있으나, 그와 같은 값은 예로서 주어진 것이며, 이성질체 순도의 정도 및 온도 변화와 잔여 용매 분자의 효과와 같은 다른 인자의 영향에 따라 바뀔 수 있다.

거울상 이성질체 A,B,C 및 D 는 각각 실질적으로 거울상체의 순수한 형태로 존재하거나 본 발명의 다른 거울상 이성질체들과의 혼합물로서 존재할 수 있다.

본원 내용에 있어서, 용어 "거울상체 순도" 및 "거울상체의 순수한" 은 디하이드로테트라베나진의 모든 거울상체 및 이성질체의 총 함량 또는 농도에 대하여 현존하는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 주어진 거울상 이성질체 함량을 의미한다. 예를 들면, 조성물에 존재하는 총 디하이드로테트라베나진의 90%가 단일 거울상체의 형태인 경우, 거울상체 순도는 90%이다.

예를 들면, 본 발명의 각 측면과 양태에 있어서, 이성질체 A, B, C 및 D로부터 선택된 각각의 개별적 이성질체는 55% 이상(예를 들면, 60% 이상, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 100%)의 거울상체 순도로 존재할 수 있다.

본 발명의 이성질체들은 이성질체 A, B, C 및 D 중의 하나 이상의 혼합물 형태로 존재할 수 있다. 그러한 혼합물은 라세미체 혼합물이거나 비라세미체 혼합물일 수 있다. 라세미체 혼합물의 예는 이성질체 A와 이성질체 B의 라세미체 혼합물 및 이성질체 C와 이성질체 D의 라세미체 혼합물을 포함한다.

약제학적으로 허용가능한 염

본 내용이 달리 요구하지 않는 한, 본원에서 디하이드로테트라베나진 및 그의 이성질체에 관한 언급은 그의 범주 내에서 디하이드로테트라베나진의 자유 염기뿐만 아니라 그의 염, 특히 산 부가 염을 포함한다.

산 부가 염을 형성하는 특정 산은 pKa 값이 3.5 미만, 더욱 일반적으로 3 미만인 산을 포함한다. 예를 들어, 산 부가 염은 pKa가 +3.5 내지 -3.5dls 산으로부터 형성될 수 있다.

바람직한 산 부가 염은 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠 설폰산, 톨루엔 설폰산, 캄포 설폰산 및 나프탈렌 설폰산 같은 설폰산으로부터 형성되는 것을 포함한다.

산 부가 염을 형성할 수 있는 하나의 특정 산은 메탄설폰산이다.

산 부가 염은 본원에 기술된 방법 또는 문헌[참조: Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl(Editor), Camille G. Wermuth(Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002]에 기술된 방법 같은 통상적인 화학적 방법에 의해 제조할 수 있다. 일반적으로, 상기 염들은 자유 염기 형태의 화합물을 물 또는 유기 용매, 또는 이들의 혼합물 내에서 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있고, 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴 같은 비수성 매질이 사용된다.

상기 염은 전형적으로 약제학적으로 허용가능한 염이다. 그러나, 약제학적으로 허용가능하지 않은 염들도 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있는 중간체 형태로서 제조될 수 있다. 이러한 약제학적으로 허용불가능한 염은 또한 본 발명의 일부 형태를 형성한다.

디하이드로테트라베나진 이성질체의 제조 방법

본 발명의 디하이드로테트라베나진은 화학식(2)의 화합물과 화학식(2)의 화합물에서 2,3-이중결합을 수화하는데 적합한 시약(들)과의 반응을 포함하는 처리에 의하여 제조될 수 있고, 그 후 목적한 디하이드로테트라베나진 이성질체 형태를 분리하고 추출될 수 있다.

2,3-이중결합의 수화반응은 디보란 또는 보란-에테르(예를 들어, 보란-테트라하이드로퓨란(THF)) 같은 보란 시약을 이용한 수소화 붕소 첨가반응에 의해 중간 체 알킬 보란 부가물을 수득하고, 보란 부가물의 산화 및 염기 존재하에서의 가수분해에 의해 수행할 수 있다. 수소화 붕소 첨가 반응은 전형적으로 에테르와 같은(예를 들면, THF) 건조 비양성자성 극성 용매내에서, 일반적으로 상승되지 않은 온도, 예를 들면 실온에서 수행된다. 보란 알켄 부가물은 수산화암모늄, 또는 수산화 알카리 금속, 예를 들면 수산화 칼륨 또는 수산화 나트륨 같은 수산화 이온화물을 제공하는 염기의 존재하에서 과산화수소와 같은 산화제에 의해 전형적으로 산화된다. 방법 A의 수소화 붕소 첨가반응-산화-가수분해 연속반응은 2- 및 3- 위치의 수소 원자들이 트랜스 상대적 위치를 가진 디하이드로테트라베나진의 이성질체를 제공한다.

화학식(2)의 화합물은 테트라베나진을 환원시켜 디하이드로테트라베나진을 수득하고, 이를 탈수시킴으로써 제조될 수 있다.

테트라베나진의 환원은 수화알루미늄리튬과 같은 알루미늄 수화물 시약이나 나트륨 보로하이드라이드, 칼륨 보로하이드라이드, 또는 보로하이드라이드 유도체, 예를 들면 리튬 트리-2급-보로하이드라이드와 같은 알킬 보로하이드라이드 같은 보로하이드라이드 시약을 이용하여 수행할 수 있다.

또는, 환원 단계는 수화 촉매, 예를 들면 레이니(Raney) 니켈 또는 산화백금 촉매를 사용함으로써 효율을 높일 수 있다. 환원 단계를 수행하기 위한 적절한 조건은 아래에 더욱 자세하게 기술되어 있으며, 미국 특허 제2,843,591호(hoffmann-La Roche) 및 문헌[참조: Brossi et al., Helv. Chim. Acta., vol. XLI, No. 193, pp1793-1806(1958)]에서 찾을 수 있다.

환원반응의 출발 물질로서 사용되는 테트라하이드로베나진은 전형적으로 RR과 SS 이성질체(즉, 트랜스-테트라베나진)의 혼합물이기 때문에, 환원 단계에 의하여 형성된 디하이드로테트라베나진은 3-과 11b 위치에 있어서 동일한 트랜스 배위를 가질 것이며, 상기 형태 3에서 본 바와 같이 공지된 디하이드로테트라베나진 이성질체의 하나 이상의 형태를 가질 것이다. 따라서, 방법 A는 디하이드로테트라베나진의 알려진 이성질체를 가지고, 알켄(Ⅱ)을 형성하기 위하여 그것들을 탈수시키고, 그 후 본 발명의 목적한 신규 시스 디하이드로테트라베나진을 얻는 조건하에서 알켄(Ⅱ)을 "재수화" 시키는 단계를 포함한다.

디하이드로테트라베나진을 알켄(Ⅱ)로 전환하는 탈수는 알켄을 형성하기 위해 알코올을 탈수시키는 여러가지 표준 조건을 이용함으로써 실행될 수 있다[참조: 예를 들어, J. March(idem) pages 389-390 및 그의 참고문헌]. 그러한 조건의 예는 인 할라이드 또는 인 옥시할라이드, 예를 들어 POCl₃ 및 PCl₅ 같은 인계열 탈수제의 사용을 포함한다. 직접 탈수반응의 대안으로서, 디하이드로테트라베나진의 하이드록시 그룹은 할로겐(예를 들어, 염소 또는 브롬) 같은 이탈기 L로 전환된 후, H-L을 제거하기 위한 조건(예를 들어, 염기의 존재)에 적용될 수 있다. 하이드록시 그룹의 할라이드로의 전환은 숙련된 화학자에게 널리 공지된 방법을 이용하여, 예를 들어 트리알킬이나 트리페닐 포스핀 또는 트리부틸 포스핀 같은 트리알킬 포스핀의 존재하에 카본 테트라클로라이드 또는 카본 테트라브로마이드를 반응시킴으로써 수행될 수 있다.

디하이드로테트라베나진을 얻기 위한 환원반응의 출발 물질로 사용되는 테트라베나진은 상업적으로 얻어지거나 또는 미국 특허 제2,830,993호(hoffmann-La Roche)에 기술된 방법에 의하여 합성될 수 있다.

본 발명의 디하이드로테트라벤진을 제조하기 위한 또 다른 방법(방법 B)은 화학식(3)의 화합물 내의 2,3- 에폭사이드 그룹을 개환하는 조건하에 화학식(3)의 화합물을 처리하는 단계를 포함하며, 여기서 그 후 목적한 디하이드로테트라베나진 이성질체 형태를 분리하고 추출하는 것이 필요하다.

개환반응은 공지된 에폭사이드 개환 방법에 따라 이루어질 수 있다. 그러나, 현재 에폭사이드 개환의 바람직한 방법은 보란-THF와 같은 환원제를 이용하여 수행되는 환원적 개환반응이다. 보란-THF를 이용하는 반응은 에테르(예를 들어, 테트라하이드로퓨란)와 같은 극성 비양성자성 용매 내에서, 일반적으로 상온에서 수행될 수 있고, 이렇게 형성된 보란 착물은 용매의 환류 온도에서 물 및 염기의 존재하의 가열에 의해 연속적으로 가수분해된다. 방법 B는 전형적으로 2-와 3- 위치의 수소 원자들이 시스 상대적 배향을 가지고 있는 디하이드로테트라베나진 이성질체를 생성한다.

화학식(3)의 에폭사이드 화합물은 상기 화학식(2)의 알켄을 에폭시화함으로 써 제조될 수 있다. 에폭시화 반응은 숙련된 화학자들에게 잘 알려진 조건과 시약을 이용하여 수행될 수 있다[참조: 예를 들어, J. March(idem), pages 826-829 및 그의 참조문헌]. 전형적으로, 메타-클로로과벤조산(MCPBA)과 같은 과산, 또는 과산과 염소산과 같은 추가의 산화제의 혼합물이 에폭시화를 일으키는데 사용되어질 수 있다.

상기 방법 A와 B의 출발 물질이 거울상 이성질체의 혼합물인 경우, 본 반응의 생성물은 전형적으로 거울상 이성질체의 한 쌍, 예를 들어 라세미체 혼합물이고, 가능하게는 부분입체이성질체 불순물과 공존할 것이다. 원치 않는 부분입체이성질체는 크로마토그래피(예를 들어, HPLC)와 같은 기법에 의하여 제거될 수 있으며, 개별적인 거울상 이성질체는 숙력된 화학자들에게 잘 알려진 다양한 방법에 의하여 분리될 수 있다. 예를 들면 아래와 같은 방법에 의하여 분리될 수 있다.

(ⅰ) 키랄 크로마토그래피(키랄 지지체 상의 크로마토그래피);

(ⅱ) 광학적으로 순수한 키랄 산으로 염을 형성하고, 분별결정작용에 의하여 두 개의 부분입체이성질체의 염을 분리하며, 그 후 염으로부터 디하이드로테트라베나진을 배출하는 방법; 또는

(ⅲ) 광학적 순수한 키랄 유도체(예: 에스테르화제)로 유도체(예:에스테르)를 형성하고, 생성된 에피머(예를 들어, 크로마토그래피에 의하여)를 분리하고, 그 후 유도체들을 디하이드로테트라베나진으로 전환하는 방법.

방법 A와 B로부터 얻어진 거울상 이성질체의 쌍들을 분리하는 특히 효과적이라고 밝혀진 한가지 방법은 아래 나타난 R(+) 이성질체와 같은 모셔 산의 광학적 활성 형태 또는 그의 활성 형태를 이용하여 디하이드로테트라베나진의 하이드록실기를 에스테르화하는 것이다.

디하이드로베나진의 두 가지 거울상 이성질체로부터 얻어진 에스테르는 크로마토그래피(예: HPLC)에 의해서 분리될 수 있으며, 분리된 에스테르는 메탄올과 같은 극성 용매에서 알칼리 금속 수산화물(예: 수산화나트륨)과 같은 염기를 이용하여 가수분해시켜 각각의 디하이드로베나진의 이성질체를 생성한다.

방법 A와 B에서 출발 물질로서 거울상 이성질체의 혼합물을 사용하고 그 후 연속하여 거울상 이성질체를 분리하는 것의 대안으로서, 방법 A와 B는 하나의 거울상 이성질체가 우세한 생성물을 만드는 하나의 거울상 이성질체를 출발 물질로 하여 수행될 수 있다. 알켄(Ⅱ)의 한가지 거울상 이성질체는 RR/SS 테트라베나진을 리튬 트리-이금-부틸 보로하이드라이드를 이용하여 입체선택적 환원에 적용시킴으로써 디하이드로테트라베나진의 SRR과 RSS 거울상 이성질체를 얻어내고, 거울상 이성질체들을 분리한 뒤(예를 들면 분별결정작용에 의하여), 디하이드로테트라베나진의 분리된 단일 거울상 이성질체를 탈수시켜 주로 또는 배타적으로 화학식(2) 화합물의 단일 거울상 이성질체를 얻음으로써 제조될 수 있다.

방법 A와 B는 아래 각각의 반응식 1 및 2에 더욱 자세하게 나타나 있다.

반응식 1에서는 2-와 3-위치의 수소 원자들이 트랜스 상대적 위치에 있어 2S,3S,11bR 및 2R,3R,11bS의 배위를 갖는 각각의 디하이드로테트라베나진의 이성질체들을 제조하는 방법을 도시하고 있다. 상기 반응식은 상기 정의된 방법 A를 포함한다.

반응식 1에서의 연속반응의 시작점은 테트라베나진의 RR과 SS 광학적 이성질체의 라세미체 혼합물인 상업적으로 이용가능한 테트라베나진(Ⅳ)이다. RR 및 SS 각각의 이성질체에 있어서, 3-및 11b-위치의 수소 원자들은 트랜스 상대적 배열로 정렬되어있다. 상업적으로 이용가능한 화합물을 사용하는 것의 대안으로서, 테트라베나진은 미국 특허 제2,830,993호에 기술된 과정에 따라 합성되어 질 수 있다(참 조: 특별히 실시예 11).

디하이드로테트라베나진의 알려진 2S,3R,11bR 및 2R,3S,11bS 이성질체(Ⅴ)들 중에 2S,3R,11bR 이성질체만이 단순성(simplicity) 보여주는데, 이 이성질체들의 혼합물을 얻기 위하여 테트라베나진의 RR 및 SS의 라세믹 혼합물은 보로하이드라이드 환원제인 리튬 트리-2급-부틸 보로하이드라이드("L-셀렉트라이드")를 이용하여 환원된다. 보로수화 나트륨이 아닌 보로하이드라이드 환원제로 더욱 입체적으로 요구되는 L-셀렉트라이드를 사용함으로써, 디하이드로테트라베나진의 RRR 및 SSS 이성질체의 형성은 최소화되거나 억제된다.

디하이드로테트라베나진 이성체(Ⅴ)는 염소화 탄화수소(예를 들어, 클로로포름 또는 디클로로메탄, 바람직하게는 디클로로메탐) 같은 비양자성 용매 내에서 오염화인과 반응하여, 한 쌍의 거울상 이성질체로서 불포화 화합물(Ⅱ)을 생성하고, 이의 R-거울상체만이 반응식에 나타나 있다. 탈수 반응은 전형적으로 실온 미만의 온도, 예를 들어 약 0 내지 5℃에서 수행된다.

불포화 화합물(Ⅱ)은 입체선택적 재수화에 적용되어 디하이드로테트라베나진(VI) 및 그의 거울상 또는 거울상체(도시되지 않음)를 생성하고, 여기서 거울상 또는 거울상체는 3 및 11b 위치의 수소원자가 시스 상대적 배향으로 배열되고, 2 및 3 위치의 수소원자가 트랜스 상대적 배향으로 배열된다. 입체선택적 재수화는 테트라하이드로퓨란(THF) 내에서 보란-THF를 이용하여 중간체 보란 착물(도시되지 않음)을 형성하고, 이를 수산화나트륨 같은 염기의 존재하에서 과산화수소로 산화시키는 수소화 붕소 첨가반응에 의해 수행된다.

초기 정제 단계는 (예를 들어, HPLC에 의해) 수행되어 2S,3S,11bR 및 2R,3R,11bS 이성질체의 혼합물인 재수화 연속반응의 생성물(V)을 수득할 수 있고, 여기서 2S,3S,11bR 이성질체만이 반응식에 도시되어 있다. 이성질체들을 분리시키기 위해, 상기 혼합물은 디클로로메탄 내의 옥살릴 클로라이드 및 디메틸아미노피리딘(DMAP)의 존재하에서 R(+) 모셔 산으로 처리되어 한 쌍의 부분입체이성질체의 에스테르(VII)(이 중 하나의 부분입체이성질체만이 도시됨)를 제공하고, 이는 HPLC를 이용하여 분리될 수 있다.

반응식 1에 도시된 연속반응의 변형에서, RR/SS 테트라베나진의 환원 다음으로, 디하이드로테트라베나진(V)의 거울상 이성질체의 생성 혼합물은 분리되어 각각의 거울상 이성질체를 제공할 수 있다. 분리반응은 (+) 또는 (-) 캄포설폰산 같은 키랄산으로 염을 형성하고, 분별결정에 의해 생성된 부분입체이성질체를 분리하여 단일 거울상 이성질체의 염을 수득한 후, 염으로부터 자유 염기를 배출함으로써 수행할 수 있다.

분리된 디하이드로테트라베나진 거울상 이성질체는 탈수되어 알켄(Ⅱ)의 단일 거울상 이성질체를 제공할 수 있다. 이 후, 알켄(Ⅱ)의 후속적 재수화는 주로 또는 배타적으로 시스-디하이드로테트라베나진(VI)의 단일 거울상 이성질체를 제공할 것이다. 이러한 변형방법의 장점은 모셔 산의 형성을 포함하지 아니하므로, 모셔 산 에스테르의 분리에 전형적으로 사용되는 크로마토그래피의 분리를 회피한다는 것이다.

반응식 2는 2 및 3 위치에 결합된 수소원자가 시스 상대적 배향으로 배열된 2R,3S,11bR 및 2S,3R,11bS 배위를 갖는 각각의 디하이드로테트라베나진 이성질체의 제조방법을 도시한다. 이러한 반응식은 위에서 정의된 방법 B를 포함한다.

반응식 2에서, 불포화 화합물(Ⅱ)은 테트라베나진을 환원되어 디하이드로테트라베나진의 2S,3R,11bR 및 2R,3S,11bS 이성질체(Ⅴ)를 제공하고, 상기 반응식 1에서 기술된 방법에서 PCl₅로 탈수함으로써 얻어질 수 있다. 그러나, 화합물(Ⅱ)을 붕소화수소 반응을 시키는 대신에, 메타-클로로퍼벤조산(MCPBA) 및 과염소산으로 반응시켜 2,3-이중결합을 에폭사이드로 전환 시킬 수 있다. 에폭시화 반응은 전형적으로 실온 주변에서, 메탄올과 같은 알코올 용매에서 편리하게 반응시킬 수 있 다.

에폭사이드(Ⅶ)는 친전자성 환원제인 보란-THF를 이용하여 환원적 개환반응을 시켜서 중간체인 보란 착물(제시되지 않음)을 얻으며, 보란 착물은 수산화 나트륨과 같은 알칼리의 존재하에 과산화수소로 산화되고 분해되어 2R,3S,11bR 및 2S,3R,11bS 이성질체의 혼합물로 된 디하이드로테트라베나진(Ⅷ)을 수득하고, 여기서 오직 2R,3S,11bR 만이 단순성을 보인다. 디클로로메탄 내의 옥살릴클로라이드와 디메틸아미노피리딘(DMAP)의 존재하에서 이성질체(VIII) 혼합물을 R(+) 모셔(Mosher) 산으로 처리하여 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있고, 상기 반응식 1과 관련하여 기술된 기법에 따라 메탄올 내에서 수산화나트륨으로 가수분해될 수 있는 에피머 에스테르(Ⅸ) 한 쌍(오직 하나의 에피머만이 도시됨)을 얻을 수 있다.

생물학적 특성과 약제학적 용도

테트라베나진은 뇌에 존재하는 소포성 모노아민 운반체(VMAT2)를 억제하고 시냅스 전 및 시냅스후 도파민 수용체를 억제함으로써 약재학적 효능을 발휘한다.

억제 활성이 가장 큰 이성질체와 C및 D와 같이, 본 발명의 새로운 디하이드로테트라베나진 이성질체는 또한 VMAT2의 억제제이다. 테트라베나진과 같이, 본 발명의 화합물들은 VMAT1(말초 조직과 내분비 세포에서 발견되는 VMAT의 이성질체 형태)에 대하여 낮은 결합력을 가지며, 이는 화합물들이 레세르핀과 관련된 부작용을 유발하지 않음을 나타낸다. 화합물 C와 B는 카테콜 O-메틸 이전효소(COMT), 모노아민산화효소 이성질체 형태 A와 B , 5-하이드록시트립타민 이성질체 형태 1d 와 1b 및 카테콜 O-메틸 이전효소(COMT)에 대하여 억제 활성이 없음을 보여준다.

놀랍게도, 이성질체 C와 B는 VMAT2에 대하여는 높은 결합력을 갖지만, 두 이성질체는 도파민 수용체 결합활성이 약하거나 없으며 도파민 운반체(DAT)의 결합활성이 없다는 점에서, 이성질체 C와 B는 VMAT2와 도파민 수용체 활성에 대한 구분이 뛰어나다. 실제적으로 어떠한 이성질체들도 주목할 만한 DAT 결합활성을 보이지 않았다. 이것은 화합물이 테트라베나진에 의하여 야기되는 도파민의 부작용이 없음을 제시한다. 이성질체 C와 D는 아드레날린성 수용체의 억제제로서 약한 활성 또는 비활성을 가지며, 이것은 상기 화합물들이 테트라베나진과 만나 발생하는 아드레날린성 부작용이 없음을 시사한다. 사실, 쥐의 운동 연구에 있어서, 테트라베나진은 진정 효과와 관련하여 복용량을 제시하였으나, 반면 본 발명의 이성질체 B와 C를 투여한 후에는 진정 효과가 관찰되지 않았다.

더 나아가, 이성질체 C와 이성질체 B는 세로토닌 운반체 단백질 SERT의 잠재성 억제제이다. SERT의 억제는 프루오세틴(프로잭(Prozac®))과 같은 항우울증제가 약제학적 효과를 발휘하는 하나의 메카니즘이다. 따라서, 우울증이 부작용으로 잘 알려진 테트라베나진과는 현저히 대조적으로, 이성질체 C와 B가 SERT를 억제하는 효능은 이 이성질체들이 항우울증제로 작용할 수 있음을 보여준다.

이성질체 B는 헌팅턴병의 이식유전자 쥐에 대하여 실험되어졌으며, 불수의적 무도증, 연축 및 불수의적 움직임 같은 불수의적 움직임 및 퇴행 보행을 포함하는 여러가지 헌팅턴병의 증상의진행을 억제하는 것이 밝혀졌다. 따라서, 현재까지 이루어진 연구에 기초하여, 본 발명의 시스-디하이드로테트라베나진 화합물이 헌팅턴병의 치료, 특별히 헌팅턴병의 진행을 억제 또는 지연시키거나, 헌팅턴병의 유발을 막기 위한 예방적 치료로 사용되는데 있어 유용할 것이라 예상된다.

상기 화합물들은 일반적으로 투여가 필요한 대상, 예를 들면 사람 또는 동물 환자, 바람직하게는 사람에게 투여될 것이다.

상기 화합물은 대게 약제학적 또는 예방적으로 유용하며, 일반적으로 독성이 없는 양 만큼 투여될 것이다. 그러나, 어떤 상황에서는, 본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물을 투여하는 이익이 독성이나 부작용의 불이익을 매우기에 충분한 경우로,독성을 가지는 정도의 양의 화합물을 투여하는 것이 바람직할 수도 있다.

상기 화합물의 전형적인 하루 복용량은 1000 mg 까지 가능하다.(예를 들면 몸무게 1 kg 당 0.01 mg 내지 10 mg , 더욱 일반적으로는 몸무게1 kg 당 0.025 mg 내지 5 mg , 예를 들면 몸무게 1kg 당 3mg 까지, 그리고 더 많이 또는 더 적게 투여될수 있지만 더욱 전형적으로 0.15 mg 내지 5 mg )

예를 들면 12.5 mg의 처음 시작 복용량이 하루에 2 내지 3번 투여될 수 있다. 복용량은 내과 의사에 의하여 처방된 개인의 최대 내성 용량 및 유효량까지 매일 3 내지 5일 동안 일일 12.5 mg까지 증가 될 수 있다. 궁극적으로 투여되는 화합물의 양은 병의 특징 또는 치료받는 건강 상태 및 약제학적 이익, 주어진 복용량에 의하여 발생되는 존재 또는 부존재하는 부작용과 상응하며, 내과 의사의 판단에 따른다.

약제학적 제형

디하이드로테트라베나진의 화합물은 전형적으로 약제학적 조성물의 형태로서 투여된다.

약제학적 조성물은 경구, 비경구, 국소, 비강, 기관지, 안구, 귀, 직장, 질내 또는 피부 투여에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 당해 조성물이 비경구 투여용인 경우, 이는 동맥내, 근육내, 복강내, 피하내 투여를 위해, 또는 주사, 주입 또는 기타 이송 수단에 의해 대상 기관 또는 조직으로 바로 이송하기 위해 제형화될 수 있다.

경구 투여에 적합한 약제학적 투여 형태는 정제, 캡슐, 캐플릿, 환약, 마름모꼴 정제, 시럽, 용액, 스프레이, 분말, 과립, 엘릭시르 및 현탁액, 설하선 정제, 스프레이, 웨이퍼 또는 패치 및 구강 패치를 포함한다.

본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물을 함유하는 약제학적 조성물은 공지된 기술[참조: 예를 들어 Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA]에 따라 제형화할 수 있다.

따라서, 정제 조성물은 불활성 희석제 또는 당류 또는 당류 알코올 같은 담체, 예를 들어, 락토오스, 수크로스, 소르비톨 또는 만니톨, 및/또는 탄산나트륨, 인산칼슘, 활석, 탄산칼슘 같은 비당류 유래 희석제, 또는 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스 같은 셀룰로스 또는 그의 유도체 및 옥수수 전분 같은 전분과 함께 활성 화합물의 단위 투여량을 함유할 수 있다. 정제는 또한 폴리비닐피롤리돈 같은 결합 및 과립화제, 붕해제(예를 들어, 가교결합된 카르복시메틸셀룰로스 같은 팽윤성 가교결합 중합체), 윤활제(예를 들어, 스테아레이트), 방부제(예를 들어, 파라벤), 항산화제(예를 들어, BHT), 완충제(예를 들어, 인산염 또는 시트르산염 완충제) 및 시트르산염/중탄산염 혼합물 같은 발포제의 표 준 성분을 함유할 수 있다. 이러한 부형제들은 널리 공지되어 있고, 본원에서 상세히 논의할 필요 없다.

캡슐 제형은 경질 젤라틴 또는 연질 젤라틴 형태일 수 있고, 고체, 반고체 또는 액체 형태 내에 활성 성분을 함유할 수 있다. 젤라틴 캡슐은 동물성 젤라틴이나 그의 합성 또는 식물 유래 등가물로부터 형성할 수 있다.

고체 투여 형태(예를 들어, 정제, 캡슐 등)는 코팅되거나 코팅되지 않을 수 있으나, 전형적으로 코팅, 예를 들어 보호 필름 코팅(예를 들어, 왁스 또는 광택제) 또는 방출 조절 코팅을 갖는다. 상기 코팅(예를 들어, 유드라짓(Eudragit)™ 유형 중합체)은 활성 성분을 장관계 내의 목적한 위치에서 방출하도록 설계될 수 있다. 따라서, 상기 코팅은 장관계 내에서 특정 pH 조건하에 분해되도록 선택될 수 있고, 이로써 위 내에서 또는 회장 또는 십이지장 내에서 당해 화합물을 선택적으로 배출한다.

코팅 대신에 또는 이에 부가하여, 약물은 방출 조절제, 예를 들어 장관계에서 다양한 산성 또는 알칼리성의 조건하에서 당해 화합물을 선택적으로 방출하기 위해 채택될 수 있는 방출 지연제를 포함하는 고체 매트릭스로 존재할 수 있다. 또는, 상기 매트릭스 물질 또는 방출 지연 코팅은 장관계를 관통하는 투여 형태로서 실질적이고 지속적으로 붕괴되는 붕괴성 중합체(예를 들어, 말레산 무수 중합체)의 형태를 취할 수 있다.

국소용 조성물은 연고, 크림, 스프레이, 패치, 젤, 액적 및 삽입물(예를 들어, 안구 삽입물)을 포함한다. 이러한 조성물들은 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다.

비경구 투여용 조성물은 전형적으로 무균 수성 또는 유성 용액이나 미세 현탁액으로서 존재하거나, 주사용 무균수와 함께 임시적으로 제조되는 미분된 무균 분말 형태에서 제공될 수 있다.

직장 도는 질내 투여용 제형의 예는, 예를 들어 활성 성분을 함유하는 형상 주조성 또는 왁스성 물질로부터 형성될 수 있는 패서리(passary) 및 좌약을 포함한다.

흡입에 의한 투여용 조성물은 흡입 가능한 분말 조성물이나 액체 또는 분말 스프레이의 형태를 취할 수 있고, 분말 흡입 장치 또는 에어로졸 분산 장치를 이용하여 표준 형태로 투여될 수 있다. 상기 장치는 널리 공지되어 있다. 흡입에 의한 투여를 위해, 분말 제형은 전형적으로 락토오스 같은 불활성 고체 분말 희석제와 함께 활성 화합물을 포함한다.

본 발명의 화합물은 일반적으로 단위 투여 형태로 존재할 것이고, 그러한 것으로서, 전형적으로 충분한 화합물을 함유하여 목적한 수준의 생물학적 활성을 제공할 것이다. 예를 들어, 경구 투여용 제형은 활성 성분 2 내지 200mg, 더욱 일반적으로 10 내지 100mg, 예를 들어, 12.5mg, 25mg 및 50mg을 함유할 수 있다.

활성 화합물은 필요로 하는 환자(예를 들어, 인간 또는 동물 환자)에게 목적한 치료효과를 달성하기에 충분한 양으로 투여될 것이다.

아래의 제한하지 않는 실시예는 본 발명인 디하이드로베나진의 합성 및 특성에 대하여 기술하였다.

실시예 1

디하이드로테트라베나진의 2S,3S,11 bR 및 2R,3R,11 bS 이성질체들의 제조

1A. RR / SS 테트라베나진의 환원

테트로하이드로퓨란 내의 1M L-셀레트라이드®(135 ml, 135 mmol, 2.87 당량)을 0℃ 에서 에탄올 용매(75 ml) 내의 테트라베나진의 RR/SS 라세믹 혼합물(15 g, 47 mmol)과 테트라하이드로퓨란(75 ml)이 교반된 용액에 30분에 걸쳐 서서히 첨가했다. 첨가가 끝나고 혼합물을 0℃ 에서 30분간 섞은 다음 실온으로 가열했다.

혼합물을 분쇄된 얼음(300 g)에 부운 다음 물(100 ml)을 넣는다. 용매는 디에틸 에테르(2 x 200 ml)로 추출하고, 결합된 에테르의 추출물을 물(100 ml)로 씻어낸 뒤, 무수탄산칼륨으로 어느 정도 건조시켰다. 무수환산나트륨에 의하여 완전히 건조시키고, 여과 후, 감압 하(빛을 차단하고, 물중탕 온도 20℃ 미만)에서 용매를 제거하여 옅은 황색 고체를 수득했다.

고체는 석유 에테르(30-40℃)로 현택액을 만들고, 이를 여과시켜 희 가루 고체(12 g, 80%)를 수득했다.

1B. 환원된 테트라베나진의 탈수

오염화인(32.8 g, 157.5 mmol, 2.5 당량)을 0℃의 디틀로로메탄(200 ml)내에서 실시예 1A로부터 얻은 환원된 테트라베나진 생성물(20 g, 62.7 mmol)의 교반된 용액에 30분에 걸쳐 부분적으로 첨가했다. 첨가가 끝난 뒤에는, 반응 혼합물을 0℃ 에서 30분 교반시키며, 그 용액을 분쇄된 얼음(0℃)을 넣은 2M 수성 탄산나트륨에 서서히 첨가했다. 일단 개시 산 기체 전개가 정지되면, 고체 탄산나트륨을 이용하여 혼합물을 염기화했다(계산값 pH 12).

에틸 아세테이트(800 ml)을 이용하여 알칼리 용액을 추출하고, 결합된 유기 추출물은 무수황산마그네슘으로 건조시켰다. 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하여 갈색 오일을 얻어내고, 칼럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트)를 이용하여 정제한 뒤, 황색 고체(10.87 g, 58%)인 불완전-순수 알켄을 수득했다.

1C. 실시예 1B로부터 얻은 미정제된 알켄의 수화

실온에서 건조 THF(52 ml)내 실시예 1B로부터 얻은 미정제된 알켄(10.87 g, 36.11 mmol)용액을 한 방울씩 첨가하는 방법으로 1M 보란-THF(155.6 ml, 155.6 mmol, 4.30 당량)로 처리했다. 반응은 두 시간 동안 교반시키고, 물(20 ml)을 첨가한 뒤, 30% 수성 수산화나트륨 용액으로 용액을 pH 12 까지 염기화했다.

수성 30% 과산화수소 용액(30 ml)을 교반된 알칼리 반응 혼합물 용액에 첨가하고, 냉각되기 전에 한 시간 동안 환류시켜서 가열한다. 물(100 ml)을 첨가하고 에틸 아세테이트(3 x 250 ml)로 혼합물을 추출한다. 유기 혼합물을 혼합시켜 무수황산나트륨으로 건조시키고, 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하여 황색 오일(9 g)을 수득한다.

오일은 350 mg 씩 주입하는 분취 HPLC(칼럼: Lichrospher Si60, 5 mm, 250 x 21.20 mm, 이동상: 헥산: 에탄올: 디하이드로케메탄(85:15:5); UV 254 nm, 유속: 10 ml min^-1)를 이용하여 정제하고, 그 후 진공 하에서 원하는 부분들을 고농축했다. 생산물인 오일을 에테르에 용해시키고, 진공 하에서 한번 더 농축시켜 상기 제시된 황색 거품(5.76 g, 50%)과 같은 디하이드로테트라베나진 라세믹 화합물을 수 득했다.

1D. 모셔( Mosher ) 에스테르 유도체의 제조

R-(+)-α-메톡시-α-투리플로로메틸페닐 아세트산(5 g, 21.35 mmol), 옥살릴 클로라이드(2.02 ml) 및 DMF(0.16 ml)를 무수 디클로로메탄(50 ml)에 첨가하고, 실온에서 45 분 동안 용액을 교반시켰다. 용액을 감압 하에서 농축시키고, 한번 더 무수 디틀로로메탄(50 ml)을 사용하여 잔여물을 수득했다. 얼음물조를 이용하여 생성된 용액을 냉각시키고, 디메틸아미노피리딘(3.83 g, 31.34 mmol)을 첨가한뒤 실시예 1C로부터 얻어진 고체 생성물의 무수 디클로로메탄(5 g, 15.6 mmol) 내의 (4Å 체 위에서) 예비 건조된 용액을 첨가했다. 실온에서 45 분 동안 교반시킨 뒤 물(234 ml)을 첨가하고, 에테르(2 x 200 ml)로 혼합물을 추출했다. 에테르 추출물은 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 실리카 패드를 통과시키고, 에테르를 이용해 생성물을 용리시켰다.

수집한 에테르 용출액을 감압 하에서 농축시킨 후, 칼럼 크로마토그래피(실리카,헥산 :에테르(10:1))를 이용하여 정제하여 오일을 수득했다. 얻고자 하는 수집된 칼럼 부분들을 증발시키고 감압 하에서의 용매 제거하여 고체를 얻고, 이를 칼럼 크로마토그래피(실리카, 헥산: 에틸 아세테이트(1:1))로 정제하여 모셔(Mosher's) 에스테르 피크 1 및 2에 부분적으로 용해된 세 가지 주성분을 수득했다.

300 mg에서 세 가지 주성분을 분취 HPLC(칼럼: 2 x Lichrospher Si60, 5 mm, 250 x 21.20 mm, 이동상: 헥산: 이소프로판올(97:3), UV 254 nm; 유속: 10 ml min^-1)로 처리하고, 그 후 진공 하에서 원하는 부분들을 농축하여 순수한 모셔 에스테르 유도체를 수득했다.

피크 1(3.89 g, 46.5%)

피크 2(2.78 g, 33%)

두 피크에 상응하는 부분들을 가수분해시켜서 이성질체 A와 B로 확인되고 특정지어진 각각의 디하이드로테트라베나진을 유리시켰다. 이성질체 A와 B는 각각 다음과 같은 구조를 가진다고 추측된다.

더욱 구체적으로, 이성질체 B는 아래 실시예 4에 기술된 바와 같이 X 선 결정학 실험에 기초하여 2S,3S,11bR의 절대배열을 하고 있을 것이라 여겨진다.

1E. 이성질체 A를 얻기 위한 피크 1의 가수분해

수성 20% 수산화 나트륨(87.5 ml)을 메탄올(260 ml) 내 모셔(Mosher's) 에스테르 피크 1 용액(3.89 g, 7.27 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 교반한 뒤 150분 동안 환류하여 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후 물(200 ml)을 첨가하고, 에테르로 용액(600 ml)을 추출한 뒤. 무수 황산마그네슘으로 건조시켰으며 여과 후, 감압 하에서 농축시켰다.

에틸 아세트산(200 ml)을 이용하여 잔여물을 용해시키고, 용액을 물(2 x 50 ml)로 씻어고, 유기 용매는 무수황산나트륨으로 건조시켰으며, 여과 후, 감압 하에 농축하여 황색 거품을 수득하였다. 이 물질을 칼럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세트산:헥산(1:1)에서 에틸 아세테이트로 경사 용리)를 이용하여 정제하였다. 원하는 부분들을 혼합한 뒤 감압 하에서 용매를 제거하였다. 잔여물은 에테르 내에서 취득하였으며, 한번 더 감압 하에서 용매를 제거하여(1.1 g, 47%). 분리된 회색이 도는 흰 거품인 이성질체 A를 수득하였다.

이성질체 A는 2R,3R,11bS 배열을 가지는 것으로 여겨지며(절대적 입체화학은 결정되지 않았다.) ¹H-NMR, ¹³C-NMR, IR, 질량분광법, 키랄 HPLC 및 ORD에 의하여 분석되었다. 이성질체 A의 IR, NMR 및 MS 데이터는 표 1에 제시되어 있으며 키랄 HPLC 및 ORD 데이터는 표 3에 제시되어 있다.

1F. 이성질체 B를 얻기 위한 피크 2의 가수분해

메탄올(185 ml) 내 모셔 에스테르 피크 2(2.78 g, 5.19 mmol)의 용액에 수성 20% 수산화 나트륨 용액(62.5 ml)을 첨가하고, 그 혼합물을 교반하고, 150분 동안 환류시켜 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 물(142 ml)을 첨가하고 에테르(440 ml),롤 용액을 추출하였으며, 무수 황산마그네슘으로 건조시켜 여과 후에는 감압 하에서 농축시켰다.

에틸 아세테이트(200 ml)을 이용하여 잔여물을 용해시키고, 용액을 수용액(2 x 50 ml)으로 세척하였다. 유기상을 무수 황산 마그네슘으로 건조한 후 여과하고, 감압 농축하였다. 석유 에테르(30-40℃)를 잔류물에 첨가하고, 진공 하에서 용액을 다시 한번 농축시켜 흰 거품(1.34 g, 81%)으로 이성질체 B를 수득하였다.

이성질체 B는 2S,3S,11bR 배열을 가지는 것으로 예상되며 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량분석법, 키랄 HPLC, ORD 및 X 선 결정학에 의하여 결정되었다. 이성질체 B의 IR, NMR 및 MS 데이터는 표 1에 제시되어 있으며 키랄 HPLC 및 ORD 데이터는 표 3에 제시되어 있다. X선 결정학 데이터는 실시예 4에 제시되어 있다.

실시예 2

디하이드로테트라베나진의 2R,3S,11 bR 및 2S,3R,11 bS 이성질체의 제조

2A. 2,3- 디하이드로테트라베나진의 제조

테트라하이드로퓨란 내의 테트라베나진의 RR 및 SS 거울상 이성질체의 라세믹 화합물(15 g, 47 mmol)을 포함한 용액을 실시예 1A의 방법에 의하여 L-셀렉트라이드®로 환원 처리하여 흰색 가루 고체(12 g, 80%)로 디하이드로베나진의 2S,3R,11bR 및 2S,3S,11bS 거울상 이성질체 혼합물을 수득하였다. 부분적으로 정제된 디하이드로테트라베나진을 실시예 1B의 방법에 따라 PCl₅를 이용하여 탈수시킨 뒤 황색 고체(12.92 g, 68%)로 2,3-디하이드로테트라베나진의 11bR 및 11bS 이성질체(아래에 제시되어 있는 11bR 거울상 이성질체 )의 불완전-순수 혼합물을 수득하였다.

2B. 실시예 2A로부터 얻은 미정제된 알켄의 에폭시화

메탄올(215 ml) 내의 70% 과염소산(3.70 ml, 43 mmol) 용액을 실시예 2A로부터 얻어진 미정제된 알켄의 교반된 용액(12,92 g, 42.9 mmol)에 첨가하였다. 77% 3-클로로퍼옥시벤조산(15.50 g, 65 mmol) 을 반응에 첨가하고, 빛을 차단하여 실온에서 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다.

반응 혼합물을 포화된 수성 아황산나트륨(200 ml)에 부은 뒤 수용액(200 ml)을 첨가하였다. 클로로포름(300 ml)을 생성된 유탁약에 첨가하고, 혼합물을 수성 중탄산 나트륨(400 ml)으로 염기화하였다.

유기층을 수집하고 수상은 부가적인 클로포름(2 x 150 ml)으로 세척하였다. 혼합된 클로로포름 층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과 후 감압 농축하여 갈색 오일(14.35 g, 수득율 > 100% - 생산물 내에 용매가 남아 있는 가능성이 있다)을 수득하였다. 이 물질은 더 이상의 정제 없이 사용되었다.

2C. 2B에서 에폭사이드의 환원하는 개환

건조 THF(80 ml)내 실시예 2B에서 미정제된 에폭사이드의 교반된 용액(14.35 g, 42.9 mmol, 수율 100% 가정)을 15분에 걸쳐 1M 보란/THF(184.6 ml, 184.6 mmol)로 서서히 처리했다. 반응은 2 시간 동안 교반시키며, 수용액(65 ml)을 첨가하고 용액을 30분 동안 교반하면서 환류하여 가열시켰다.

냉각 후에, 30% 수산화나트륨 용액(97 ml)을 반응 혼합물에 첨가한 뒤, 20%과산화수소 용액(48.6 ml) 를 첨가하였다. 반응을 교반시키고 1시간 동안 부가적으로 환류하여 가열시켰다.

냉각된 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(500 ml)로 추출하며 무수 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하여 오일을 수득하였다. 헥산(230 ml)을 오일에 첨가하고 용액을 감압 하에서 재농축하였다.

오일의 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트)에 의하여 정제하였다. 원하는 부분들을 혼합한 후 감압 하에서 용매를 제거하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(실리카, 헥산에서 에테르로 경사)를 이용하여 다시 한번 정제하였다.

원하는 부분들을 혼합한 뒤, 감압 하에서 용매들을 증발시켜 옅은 황색 고체(5.18 g, 38%)를 수득하였다.

2D. 디하이드로테트라베나진 2R,3S,11 bR 및 2S,3R,11 bS 이성질체들의 모셔 에스테르 유도체 제조

R-(+)-α=메톡시-α-트리플루오로메틸페닐 아세트산(4.68 g, 19.98 mmol), 옥살릴 클로라이드(1.90 ml) 및 DMF(0.13 ml)를 무수 디클로로메탄(46 ml)에 첨가하고 실온에서 45분 동안 용액을 교반하였다. 용액을 감압 농축하고 무수 디클로로메탄(40 ml)에서 한번 더 잔류물을 수득하였다. 얻어진 용액을 얼음물조를 이용하 여 냉각시키고 디메틸아미노피리딘(3.65 g, 29.87 mmol) 을 첨가한 뒤, 실시예 2C 의 고체 생성물(4.68 g, 14.6 mmol)의 무수 디클로로메탄(20 ml) 내에서 (4 Å 체 위에서) 예비 건조된 용액을 첨가하였다. 실온에서 45분 동안 교반시킨 후, 수용액(234 ml)을 첨가하고 에테르(2 x 200 ml)로 혼합물을 추출하였다. 그 에테르 추출물을 무수 황산 마그네슘으로 건조시키고, 실리카 패드를 통과시킨 후, 에테르를 이용하여 생성물을 용리하였다.

수집된 에테르 용출액을 감압 농축시켜 오일을 수득하고, 이 오일을 칼럼 크로마토그래피(실리카, 헥산:에테르(1:1))를 이용하여 정제하였다. 수집된 목적 칼럼 분획물들을 증발시키고 감압 하에서 용매를 제거하여 분홍색 고체(6.53 g)를 얻었다.

100 mg 하중에서 고체의 분취 HPLC(칼럼: 2 x Lichrospher Si60, 5 μm, 250 x 21.20 mm; 이동상 헥산: 이소프로판올(97:3); UV 254 nm; 유속: 10 ml min^-1)로 처리한 후, 진공 하에서 대상 분획물을 농축하여 고체를 수득하며, 이 고체를 석유 에테르(30-40℃)로 슬러리화하고, 여과 후에 순수한 모셔(Mosher) 에스테르 유도체를 수득했다.

유도체

피크 1(2.37 g, 30%)

피크 2(2.42 g, 30%)

피크에 상응하는 분획물들을 가수분해하여 이성질체 C와 D로 확인되고 특징지어진 각각의 디하이드로베나진의 이성질체들을 유리하였다. 이성질체와 C와 D는 아래와 같은 구조를 가질 것이라 예상된다.

2F. 이성질체 C를 얻기 위한 피크 1의 가수분해

20% 수성 수산화 나트륨 용액(53 ml)을 메탄올(158 ml) 내의 교반된 모셔(Mosher's) 에스테르 피크 1(2.37 g, 4.43 mmol)용액에 첨가하고, 혼합물을 150분 동안 환류하여 교반시켰다. 차가운 수용액(88 ml)을 반응 혼합물에 첨가하고 에테르(576 ml)로 생성된 용액을 추출하였다. 유기 추출물을 무수 황산 마그네슘을 이용하여 건조시키고, 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하였다. 에틸 아세테이트(200 ml)를 잔류물에 첨가하고, 수용액(2 x 50 ml)로 용액을 씻어내었다. 유기 용액을 무수황산나트륨으로 건조시키고, 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하였다.

이 잔류물을 석유 에테르(30-40℃)로 처리하고, 여과를 통하여 생성된 현탁 고체를 수집했다. 여과액을 감압 농축시키고, 여과시켜 두 번째 분량의 현탁 고체를 수집하였다. 두 가지 수집된 고체들을 혼합하고, 감압 하에서 건조시켜 이성질체 C(1.0 g, 70%)를 수득하였다.

2R,3S,11bR 또는 2S,3R,11bS(절대 배열은 결정되지 않았다) 형태를 갖는 것 으로예상되는 이성질체 C는 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량 분석법, 키랄 HPLC 및 ORD에 의하여 밝혀졌다. IR, NMR 및 이성질체 C의 MS 데이터는 표 2에 제시되어 있으며, 키랄 HPLC 및 ORD 데이터는 표 4에 제시되어 있다.

2G. 이성질체 D를 얻기 위한 피크 2의 가수분해

메탄올(158ml) 내에서 20% 수성 수산화 나트륨 용액(53 ml)을 교반된 모셔(Mosher) 에스테르 피크 2(2.42 g, 4.52 mmol)에 첨가하고 혼합물을 150분 동안 환류하여 교반시켰다. 차가운 수용액(88 ml)을 반응 혼합물에 첨가하고, 에테르(576 ml)로 생성된 용액을 추출하였다. 유기 추출물은 무수 황산 나트륨을 이용하여 건조시키고, 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하였다. 에틸 아세테이트(200 ml)를 잔류물에 첨가하고, 수용액(2 x 50 ml)으로 용액을 세척하였다. 유기 용매는 무수 황산 나트륨을 이용하여 건조시키고, 여과 후 감압 하에서 용매를 제거하였다.

이 잔류물을 석유 에테르(30-40℃)로 처리하고, 여과하여 생성된 주황색 부유물질을 수집하였다. 부유 물질을 에틸 아세테이트: 헥산(15:85)에 용해시키고, 칼럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트:헥산(15:85)으로부터 에틸 아세테이트로 경사)에 의하여 정제한다. 대상 분획물을 혼합하고 용매는 감압 하에서 제거하였다. 잔류물은 에테르(30-40℃)로 슬러리화 하였고, 여과를 통하여 생성된 현택액을 수집하였다. 수집된 고체는 감압 하에서 건조시키고 흰 고체(0.93 g, 64%)로 이성질체 D를 수득하였다.

2R,3S,11bR 또는 2S,3R,11bS 배위(절대적 입체화학은 결정되지 않았다)를 가진 것으로 예상되는 이성질체 D는 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량 분석법, 키랄 HPLC 및ORD에 의하여 밝혀졌다. 이성질체 D의 IR, NMR 및 MS 데이터는 표 2에 제시되어 있으며 키랄 HPLC 및 ORD 데이터는 표 4에 제시되어 있다.

표 1과 2에서, 적외선 분광계는 KBR 디스크 방법을 이용하여 결정되어졌다.

베리안 제미니(Varian Gemini) 핵자기공명분광계(200 MHz)를 이용하여 중수화 클로로포름 용매 내 용액 상에서 ¹H 핵자기공명 분광계를 실시하였다. 베리안 제미니(Varian Gemini) 핵자기공명분광계(50 MHz)를 이용하여 중수화 클로로포름내 용액 상에서 ¹³C 핵자기공명분광계를 실행하였다. 질량 스펙트럼은 마이크로매스 플랫폼 Ⅱ(ES+ 조건) 분광계를 이용하여 얻었다. 표 3과 4에서, 광회전 분산도는 24℃에서 메탄올 용액 내 광학적 활성 PolAAr 2001 장치(Optical Activity PolAAR 2001 instruments)를 이용하여 얻는다. HPLC 체류 시간은 UV 탐지 HP1050 HPLC 크로마토그래피를 이용하여 측정하였다.

표 1 및 2-분광 데이터

표 3 및 4-크로마토그래피 및 ORD 데이터

실시예 3

이성질체 B 제조의 대체 방법과 메실레이트의 제조

3A. RR / SS 테트라베나진의 환원

테트라베나진(52 ml, 52 mmol, 1.1 당량) 내의 1M L-셀렉트라이드®을 테트라하이드로퓨란(56 ml) 내의 냉각 되고(얼음조) 교반된 테트라베나진 라세믹 화합물(15 g, 47 mmol)에 30분 동안 서서히 첨가하엿다. 첨가한 뒤. 혼합물을 실온으로가열하고 추가의 6시간 동안 교반시켰다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트 )은 남은 출발 물질의 양이 매우 적음을 나타내었다.

그 혼합물을 분쇄된 얼음(112 g), 물(56 ml) 및 빙초산(12.2 g)의 교반된 혼합물에 첨가하였다. 생성된 황색 용액을 에테르(2 x 50 ml)로 세척하였으며 탄산나트륨(계산값 13 g)을 서서히 첨가하여 염기화하였다. 석유 에테르(30-40℃)(56 ml)를 교반하면서 혼합물에 첨가하고, 여과하여 흰 고체로 미정제된 β-DHTBZ 를 획득하엿다.

미정제된 고체를 디클로로메탄(계산값 150 ml)에 용해시키고 생성된 용액을 물(40 ml)로 세척하였다. 그 후 무수 황산 마그네슘을 이용하여 건조시키고 여과한 뒤 감압하에서 계산값 40 ml까지 농축시켰다 두꺼운 흰색 고체의 부유물질이 형성되었다. 석유 에테르(30-40℃)(56 ml)를 첨가하고 연구실 온도에서 15분 동안 부유 물질을 교반시켰다. 여과하여 생성물을 수득하고 실온에서 공기 건조시키기 전에 석유 에테르를 이용하여 설백색 TLC 분석은(실리카, 에틸 아세테이트) 오직 한가지 구성 물질만을 검출 하였다. 여과에 의해 생성물을 수집하고 실온에서 공기-건조하기 전 석유 에테르(30-40℃)(40 내지 60 ml)를 이용하여 설백색까지 필터 상에서 세척하여 백색 고체인 β-DHTBZ(10.1 g, 67%)를 수득했다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)은 단지 하나의 성분만을 나타냈다.

3B. 라세미체의 β- DHTBZ 의 캄포설포산염의 제조와 분별 결정

실시예 3A의 생성물 및(S)-(+)-캄포-10-설폰산 1당량을 가열하면서 메탄올의 최소량에 용해시켰다. 생성된 용액을 냉각시킨 후 생성된 고체의 침전이 완료될 때까지 에테르로 서서히 희석하였다. 여과하여 생성된 흰색 고체를 수득하고, 건조하기 전에 에테르로 세척하였다.

캄포설폰산염(10 g)을 뜨거운 무수 에탄올(170 ml) 과 메탄올(30 ml)의 혼합물에 용해시켰다. 그 후 용액을 교반시키고 냉각시킨다. 두 시간 후 여과에 의하여 흰색 결정 고체로 형성된 침전물(2.9 g)을 수득하였다. 결정 물질의 견본을 포화된 수성 탄산 나트륨의 과잉량과 디클로로메탄과 함께 분별 깔때기 내에서 흔들어 혼합하였다. 유기상을 분리하고, 무수 황산 나트륨으로 건조시켜 여과 후 감압 농축하였다. 잔류물을 석유 에테르(30-40℃)를 이용하여 하고 유기 옹액을 한번더 농축시켰다. 석유 에테르(30-40℃)를 이용하여 잔류물을 제분하고, 유기 용액을 한번 더 농축했다. 유속 1 ml/분에서 Chirex(S)-VAL 및 (R)-NEA 250 x 4.6 mm 칼럼, 및 헥산:에탄올(98:2) 희석을 이용하는 염의 키랄 HPLC 분석은 분취된 β-DHTBZ가 하나의 거울상 이성질체(거울상체 잉여 계산값 80%)로 농축됨을 나타냈다.

농축된 캄포설폰산염(14 g)을 가열 무수 에탄올(140 ml)에 용해시키고, 프로판-2-올(420 ml)을 첨가했다. 생성 용액을 교반하고, 침전물이 1분 이내에 생성되기 시작했다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 1시간 동안 교반했다. 생성된 침전물을 여과로 수집하고, 에테르로 세척하고 건조시켜 백색 결정 고체(12 g)를 수득했다.

결정 물질을 과량의 포화 수성 탄산수소나트륨 및 디클로로메탄으로 분리 깔대기에서 휘저었다. 유기상을 분리하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압에서 농축시켰다. 석유 에테르(30-40℃)를 이용하여 잔류물을 제분하고, 유기 용액을 한번 더 농축하여 (진공에서 건조한 후) (+)-β-DHTBZ(6.6 g, ORD +107.8°)를 수득했다. 분리된 거울상 이성질체는 거울상체 잉여가 97%를 초과했다.

3C. 이성질체 B의 제조

디클로로메탄(55 ml) 내의 오염화인산(4.5 g, 21.6 mmol, 1.05 당량) 용액을 교반되고 냉각된(얼음조) 디클로로메탄(90 ml) 내의 실시예 3B(6.6 g, 20.6 mmol) 생산물 용액에 10분간 지속적으로 첨가하였다. 첨가 후, 생성된 황색 용액을 10분간 교반하고, 그 후 물(90 ml) 내의 탄산 나트륨(15 g)과 부서진 얼음(90 g) 혼합물에 빠르게 붓는다.그 혼합물은 10분간 더 교반한 다음 분별 깔때기로 옮긴다.

상이 분리된 후에는, 갈색 디클로로메탄 층을 제거하고, 무수 황산 나트륨으로 건조한 뒤, 여과하고 감압 농축하여 갈색 오일(계산값 6.7 g)으로 미정제된 알켄을 수득한다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)에서 미정제된 생산물 내에(+)-β-DHTBZ은 검출되지 않았다.

무수 테트라하이드로퓨란(40 ml) 내의 미정제된 알켄을 수득하였으며(건조 질소 대기 THF(1 M 용액, 2.5 당량, 52 ml) 내의 보란 용액을 15분 동안 교반하면서 첨가하였다. 그 후 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)에서 반응 혼합물에 남아있는 알켄 중간 물질은 발견되지 않았다.

물(10 ml) 내의 수산화 나트륨(3.7 g)을 교반한 반응 혼합물에 첨가한 뒤, 과산화수소(50%, 계산값 7 ml) 수성 용액과 형성된 두 가지 상의 혼합물을 4시간 동안 환류에서 교반하였다. 이때 유기상의 TLC 분석에서는 이성질체 B에 대하여 기대되는 Rf를 갖는 생성물을 나타냈다. 특정한 비극성 성분도 또한 나타났다.

반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 분별 깔대기에 부어, 위 유기층을 제거하고 감압 농축하여 대부분의 THF를 제거하였다. 에테르(안정화된 (BHT), 75 ml) 내의 잔류물을 수득하여, 수용액(40 ml)으로 세척하고, 무수 황산 나트륨으로 건조하며 여과 후, 감압 농축 하여 옅은 황색 오일(8.1 g)을 수득하였다.

황색 오일을 칼럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트:헥산(80:20), 100% 에틸 아세테이트로 증가)를 이용하여 정제했고, 목적한 칼럼 분획물을 수집했고, 혼합했고, 감압에서 농축하여 옅은 오일을 수득하여, 이를 에테르(안정화된, 18 ml)로 처리하고 감압에서 농축하여 옅은 황색 고체 거품(2.2 g)인 이성질체 B를 수득했다.

실시예 3B에 제시된 조건을 이용하여 키랄 HPLC 실험을 하여 거울상체 잉여가 97% 초과된 이성질체 B가 생산되는 것을 확인하였다.

벨링햄 스탠리(Bellingham Stanley) ADP220 편광계를 이용하여 광회전을 측정하였으며 [α_D] 값은 +123.5°이었다.

3D. 이성질체 B의 메실레이트 제조

이성질체 B의 메탄설폰산 염을 실시예 3C로부터 얻어진 이성질체 B의 1당량및 에탄올의 최소량 내 메탄설폰산 1당량의 혼합물에 용해시키고 디에틸 에테르를 첨가함으로써 준비하였다. 생성된 침전물을 여과하여 수득하고 진공 내에서 건조시켜 수들율이 계산값 85% 이며 순도가(HPLC에 의하여) 계산값 96%인 메실레이트를 수득하였다.

실시예 4

이성질체 B의 X 선 결정학 연구

이성질체 B의(S)-(+)-캄포-10-설폰산염을 제조했고, 하나의 결정을 다음과 같은 조건 하에서 X선 결정학 연구에 적용했다.

자동 회절계: Nonius KappaCCD 면적 검출기(비대칭 단위를 충전하는 t/i 스캔 및 OJ 스캔).

세포 측정 : DirAx[참조: Duisenberg, A.J.M.(1992). J. Appl. Cryst. 25, 92-96].

데이터 수집: 수집(수집: Data collection software, R. Hooft, Nonius B. V, 1998)

데이터 정리 및 세포 정제: 데모[참조: Z. Otwinowski & W. Minor, Methods in Enzymology(1997) Vol. 276: Macromolecular Crystallography, part A, pp. 307-326; C. W. Carter, Jr & R. M. Sweet, Eds., Academic Press).

흡수 보정(Adsorption correction): Sheldrick, G. M. SADABS - Bruker Nonius area detector scaling and absorption correction - V2.＼0

구조 용액(Structure solution): SHELXS97[참조: G. M. Sheldrick, Acta Cryst.(1990) A46 467-473].

구조 정제(Structure refinement): SHELXL97[참조: G. M. Sheldrick(1997), University of Gottingen, Germany].

그래픽: Cameron - A Molecular Graphics Package[참조: D. M. Watkin, L. Pearce 및 C. K. Prout, Chemical Crystallography Laboratory, University of Oxford, 1993].

특이한 세부사항(Special details): 모든 수소 원자들은 이상적인 위치에 자리에 놓여졌으며, 디른 지도 상에 위치하고 있는 NH 와 OH를 제외하고 riding model을 이용하여 정제하였다. 키랄성 : NI=R, CI2=S, CI3=S, CI5=R, C21=S, C24=R

연구 결과는 아래 표 A, B, C, D 및 E 에 제시되어 있다.

표에서, 라벨 RUS0350은 이성질체 B를 의미한다.

30% 개연성 수준에서 도시한 열적 타원체

상기 제시된 데이터에 기초하여, 이성질체 B는 2S,3S,11bR 배열을 가질 것이라 예상되며, 그 배열은 화학식(1a)과 같다:

[화학식 1a]

실시예 5

헌팅턴병의 유전자 형질전환 쥐 모델에서 이성질체 B 효과의 분석

B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/1J 유전자형질 전환(R6/2) 쥐는 (CAG)115 -(CAG)150 염기 반복 확장을 가진 인간 헌팅턴병 유전자의 5-말단 부분에 대한 유전자 형질 전환이다.

R6/2 형질 전환 유전자는 무도병 같은 움직임, 불수의적 전형적 움직임, 진전 및 간질병 발작을 포함한 헌팅턴병의 여러가지 특징을 모방한 점진적인 신경상의 표현형을 보인다. 그들은 병의 경과 동안 소변을 자주 보며 체중 감량 증상을 보였다. 이런 증상들은 6 내지 8주 사이에 나타난다.

연구는 헌팅턴병의 유전자 형질전환쥐 모델에서 이성질체 B의 효과를 평가하기 위하여 행동 실험 배터리 안에서 동물들을 관측하였다.

방법

21 ± 2℃의 실온, 50 ± 15%의 습도에서, 12 h -12 h(7.00 am에 점등하여 7.00 pm에 소등)의 명암 주기로 풍요로운 환경 안에서 암컷 B6CBa-Tg(HDexon1)62Gpb/1J 형질 전환 쥐(잭슨 연구소, USA)를 한 우리 안에 다섯 마리씩 넣었다. 쥐들에게는 쥐 먹이용 사료(쥐/번식률, 참조. 9341 Provimi Kliba, 스위스) 와 수돗물을 공급하였다.

옥수수 오일 내의 이성질체 B를 10 주된 쥐에게 4일 동안 하루에 한 번씩 반복적으로 투여(5 mg/kg i.p)하였다.

실험하는 날에는, 동물들을 프로토콜 부분에 묘사된 프로토콜에 따라 다음 실험을 하였다.

1. 간이 아리린(Irwin) 실험

관찰 2 시간 전에, 동물들을 개별적인 우리에 넣어두어 처음에는 개별적인 우리에서 관찰하였다. 동물의 경련, 진전-연축, 상동증 및 발성을 관측하였다. 그 후 동물들을 6 cm 테두리가 있는 58.5 x 68.5 cm 열린 장에 두어약 3분 동안 관측하였다. 보행특성이 나타났으며 경련 또는 진전-연축 및 상동증의 실재가 재관측되었다. 3분 말에는, 배설물 덩어리의 수 및 소변 웅덩이를 기록했다. 실험 후에 쥐들을 개별 우리로 다시 넣었다.

2. 운동 활성

저강도 조명 아래(최대치 20 lux)의 방에서 바닥의 면적이 30 x 30 cm 인 투명한 플라스틱 상자 안에 쥐들을 넣어 두었다. 비디오 분석기(제품명: 비디오트랙, 제조원: 프랑스 리옹 소재의 뷰포인트)를 이용하여서 10분 주기 동안 운동 활성을 결정하였다. 보행의 수, 거리, 평균 속도 등을 측정하였다. 그 후 쥐들을 다시 그들의 원래 우리에 넣었다.

3. 로타로드(Rotarod)

첫 번째 투여 전의 이틀 동안, 동물들을 로타로드 실험을 위해 훈련시켰다.:

최대치 시간을 450초로하여 쥐들을 가속 로타르드(Ugo Basile, 이탈리아)에 올려 두었다. 쥐들은 300초 동안 4 rpm으로 시작하는 두 번의 훈련 기간을 통과했다. 두 가시 훈련 기간을 1시간 간격으로 하였다. 실험 날에, 각각의 동물들을 상기의 조건 하에서 한 시험을 하였다. 각각의 시험은 쥐가 로타로드에서 떨어지거나 450 초 동안 로타로드 위에 머무른 경우에 끝났다. 실험 후, 쥐들을 다시 원래 우리에 넣었다.

실험 결과는 표 5 내지 9에 제시되어 있다.

실험 프로토콜

실험 집단의 크기: 10

집단 1: 접합체 유전자형질전환 B6CBA-Tg(HDexon 1)62Gpb/1J 쥐를 4일(0일부터 3일까지) 동안 매일 부형약(vehicle) i.p.로 처리하였다.

집단 2: 접합체 유전자형질전환 B6CBA-Tg(HDexon 1)62Gpb/1J 쥐를 4일(0일부터 3일까지) 동안 매일 실험 아이템의 5 mg/kg i.p.로 처리하였다.

실험 프로토콜

쥐가 생후 10주일 때, 투여 전 및 3일 동안 매일 투여를 한 후, 동물들에게 아래에 기술된 실험을 적용하였다.

-2일

1 시간 간격으로 2 회 로타로드 훈련

-1일

1 시간 간격으로 2 회 로타로드 훈련

0일

간이 아이린(Iwrin) 실험

간이 아이린(Iwrin) 실험 바로 직후, 운동 활성 실험

운동 활성 실험 직후, 로타로드(Rotarod) 실험

로타로드(Rotarod) 실험 1 시간 후, 실험 아이템 투여

투여 40분 후, 간이 아이린(Iwrin) 실험

간이 아이린(Iwrin) 실험 직 후, 운동 활성 실험

1일

실험 아이템 투여

투여 40분 뒤, 간이 아이린(Iwrin) 실험

간이 아이린(Iwrin) 실험 직후, 로타로드(Rotarod) 실험

2일

실험 아이템 투여

투여 40분 뒤, 간이 아이린(Iwrin) 실험

간이 아이린 실험 직후, 로타로드(Rotarod) 실험

3일

실험 아이템 투여

투여 40분 후, 간이 아이린(Iwrin) 실험

간이 아이린 실험 바로 직후, 운동 활성 실험

통계 분석

간이 아이린 수치는 비모수적 맨-휘트니(Mann-Whitney) U 실험을 이용하여 분석하였으며 운동 활성 데이터는 두넷(Dunnett) t-실험을 이용하여 분석하였다. 로타로드 수치는 비모수적 맨-휘트니(Mann-Whitney) U 실험을 이용하여 분석하였으며, 통계 분석은 소프트웨어 스테트뷰(statveiew) SE⁺ ^graphics 소프트웨어(Brain Power)를 이용하여 수행하였다.

-: 신호가 관찰되지 않음(0.00±0.00과 동일)

a: p=0.06 대 대조군, 맨-휘트니 U-실험

X: 관찰을 수행하지 않음

*;**: 대조군(p<0.05;p<0.01)과 현저히 상이함, 맨-휘트지 U-실험

결과는 비록 대조 쥐와 이성질체 B로 처리된 쥐 모두가 투여 후 처음 3일 동안 헌팅턴병의 전형적 증상에 있어서 약간의 진행을 보였으나, 이성질체 B로 처리된 쥐는 투여 후 17 내지 24 일의 기간 동안 대조 쥐보다 상당히 덜 악화되었음을 나타내고 있다. 특히, 보행의 악화는 실제적으로 이 기간 동안 정지되거나 지연되었으며, 이성질체 B로 처리한 쥐에 있어서 투여 후 21일 후에는 불수의적 무도증, 진전 및 연축과 같은 불수의적 움직임의 발생률이 이성질체 B를 투여하기 전보다 더 이상 악화되지 않았다. 적당한 간격(이 실헌에서는 수행되지 않음)으로 이성질체 B를 반복 투여함으로써, 증상의 진전이 정지되거나 더욱 지연될 것이라 예상된다.

따라서, 결론적으로 이성질체 B가 헌팅턴병과 관련된 증상의 유발을 방지하거나 증상의 진전을 지연시키는데 유용하다는 것을 알 수 있다.

실시예 6

테트라베나진과 디하이드로테트라베나진의 이성질체 B 및 C의 진정 특성의 비교

본 발명의 이성질체의 진정제 특성 여부를 확인하기 위해 쥐를 가지고 연구하였다. 쥐의 자발적인 운동 활성에 있어 이성질체의 효과와 아래에 제시된 방법을 이용했을 시의 테트라베나진 및 할로페리돌에 의한 효과를 비교하였다. 그 결과가 표 10에 나타나있다.

방법

연구 초에 무게가 200-250g 인 수컷 Sprague-Dawley 래트(프랑스 생-게르망/라르브레슬 소재 찰스 리버 연구실(Charles River Laboratories))를 실험에 사용하였다. 다음과 같은 환경 조건이 갖추어진 방에서 Makrolon type III 우리 안에, 쥐를 한 우리당 2 또는 3 마리씩 가두어 놓았다: 온도: 20 ± 2℃, 습도 : 최소치 45 %, 공기 변화: > 시간당 12 , 밝음/어둠 주기 12 h/12 h [ 7:00 a.m.에 점등 ]. 연구의 개시 전에 5일 이상 동안 쥐들이 그들의 환경에 순응하도록 하였다. 쥐들에게는 음식(제조원: 프랑스 비그니 소재 디에텍스(Dietex), 참조. 811002)과 리비툼(libitum)이 첨가된 물(물병에 든 수돗물)을 제공하였다.

옥수수 오일에 든 각각의 실험 혼합물의 용액을 실험 당일에 준비하였다. 탈이온수 내의 0.5% 의 하이드로에틸셀룰로오스 내에서 할로페리돌을 준비하였다. 매개물 또는 실험 혼합물 중 어느 하나를 단회(0.3, 1, 3 및 10 mg/kg, 2 mL/kg i.p.) 투여하였다. 참조 혼합물 할로페리돌(1 mg/kg) 을 투여하였다. i.p.(2 mL/kg).

저강도의 불빛(최대치 50 lux)의 방 안에서 비디오 카메라를 설치 하에 플렉시 유리(plexiglass) 우리 안에 쥐들을 가두어 놓았다. 투여하고 난 3시간 45분뒤 ,비디오 영상 분석기(비디오트랙, 관점, 프랑스)를 사용하여 20분 기간 동안 운동 활성을 측정하였다. 투여 후 1 시간 뒤에 참조 집단(할로페리돌) 내에서 운동활성을 기록하였다. 보행 동작의 수와 기간 및 불활성 기간을 측정하였다. 운동 활성 측정 후(3시간 45분) 플렉시유리 내에서 눈꺼풀의 닫힘과 각성을 아래와 같이 점수로 계산하였다.

눈꺼풀의 닫힘:

0 :(정상) 눈꺼풀이 크게 열림

1 : 눈꺼풀이 약간 감김

2 : 안검 하수증, 눈꺼풀이 대략 반쯤 감김

3 : 눈꺼풀이 완전히 닫힘

각성:

1 : 매우 낮은, 마비된, 혼수 상태의,거의 없는 또는 무반응

2 : 낮게, 약간 마비된, ≪둔한 ≫, 약간의 머리 또는 몸의 움직임

3 : 다소 낮게, 약간 마비된, 부동 기간 동안의 약간의 예비적 움직임

4 : 정상의, 민감한, 예비적 움직임/느린 경직

5 : 다소 고조된, 약간의 흥분, 긴장된, 갑작스런 돌진과 경직

6 : 매우 높은, 매우 민첩한, 흥분된, 갑자스런 한 차례의 달리기 또는 몸의 움직임

발생 횟수, 보행(큰) 동작의 지속 기간(초 단위), 불활성(초) 주기의 지속 기간을 비디오 영상 분석기(제품명: 비디오 트랙, 제조원: 프랑스 리온 소재의 뷰포인트)를 이용하여 두 번의 20분 주기(투여한 뒤 3시간 45분 후) 동안에 측정하였다.

플렉시 유리 위에 놓여진 비디오 카메라를 이용하여 전반적인 운동 활성을 녹화하면서, 영상 트래킹을 수행하였다. 비디오 카메라로 녹화한 영상을 디지털화하였고 디지털 영상 스팟의 중력 중심 이동을 다음과 같은 방법에 따라 추적하고 분석하였다. : 스팟의 중력 중심의 이동 속도를 측정하고, 동작의 유형(역치 1(고속) 및 역치 2(저속) )을 정의하기 위하여 두 역치 값을 지정하였다. 동물들이 움직이고 스팟의 중력 중심 이동 속도가 역치 1 보다 높은 경우, 동작들은 보행 동작이라 추측된다. 동물들이 비활동적으로 남아 있고, 속도가 역치 2 보다 낮은 경우, 동작들은 비활성이라 생각된다.

결과는 개별적인 12 개의 값의 평균 ± SEMs 으로 나타내었다. 통계 분석은 일원변량분석(ANOVA(one way)), 두넷(Dunnett's) t-실험 및 카루스칼-월리스(Kruskal-Wallis) 의 비모수적 실험을 한 뒤 맨 앤 휘트니(Mann & Whitney) U-실험을 하여 수행하였다. p 값(p<0.05)은 나타난 중요한 값으로 취해졌다.

프로토콜

집단 크기 n=12

집단 1: 대표, 할로페리돌(1 mg/kg i.p.)

집단 2: 부형약 대조 집단(2 ml/kg i.p.)

집단 3: 테트라베나진(0.3 mg/kg i.p)

집단 4: 테트라베나진(1 mg/kg i.p)

집단 5: 테트라베나진(3 mg/kg i.p)

집단 6: 테트라베나진(10 mg/kg i.p)

집단 7: 이성질체 C(0.3 mg/kg i.p)

집단 8: 이성질체 C(1 mg/kg i.p)

집단 9: 이성질체 C(3 mg/kg i.p)

집단 10: 이성질체 C(10 mg/kg i.p)

집단 11: 이성질체 B(0.3 mg/kg i.p)

집단 12: 이성질체 B(1 mg/kg i.p)

집단 13: 이성질체 B(3 mg/kg i.p)

집단 14: 이성질체 B(10 mg/kg i.p)

결과

** 두넷 실험에 따른 일원변량분석(ANOVA one way)에서 부형약 그룹(p<0.01)과 현저히 상이함.

이성질체 C가 투여 후 3시간 뒤에 약간의 slight and non-significant hyperlocomotor 를 보이긴 하지만, 이성질체 B 및 C가 항상 진전 효과를 보이지 않는 반면, 테트라베나진은 투여후 3시간 45분 뒤에 투약 의존 진정 효과를 보임이 밝혀졌다.

실시예 7

약제학적 조성물

(i) 정제 제형-I

본 발명의 디하이드로테트라베나진을 포함한 정제 조성물은 디하이드로베나진 50 mg 을 희석제인 락토오스(BP) 197mg 및 유활제인 스테아르산 마그네슘 3 mg과 혼합하고, 공지 방법에 따라 압축하여 정제를 형성함으로써 제조된다.

( ii ) 정제 제형- II

본 발명의 디하이드로테트라베나진을 포함한 정제 조성물은 상기 화합물(25mg)을 산화철, 락토오스, 스테아르산 마그네슘, 전분, 옥수수, 밀 및 활석과 함께 혼합하고 공지 방법에 따라 압축하여 정제를 형성함으로써 제조된다.

( iii ) 캡슐 제형

캡슐 제형은 본 발명의 디하이드로테트라베나진 100 mg을 락토오스 100mg과 혼합하고, 그 생성된 혼합물을 표준 불투명 경질 젤라틴 캡슐에 충전함으로써 제조할 수 있다.

등가물

본 발명을 개괄하는 이론으로부터 이탈하지 않고, 다수의 변형 및 개조가 위에서 기술한 본 발명의 특정 양태에 수행될 수 있음은 이미 명백할 것이다. 상기 모든 변형 및 개조는 본원에 포함된다.

Claims

헌팅턴병(Huntington's disease) 환자의 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 진전 및 연축 같은 불수의적 움직임 및 퇴행 보행(degeneration in gait)으로부터 선택되는 증상의 진행을 정지 또는 지연시키는데 사용되는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.
헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유하는 것으로 확인된 환자의 예방적 치료에 사용되는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.
헌팅턴병 유전자의 돌연변이 형태를 보유하고 있지만 헌팅턴병의 증상이 아직 발달되지 않은 15 내지 50 세의 환자의 예방적 치료를 위한 것이되, 상기 예방적 치료가 헌팅턴병과 관련된 증상의 발병을 예방 또는 지연시키기 위한 것인 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 실질적으로 순수한 형태, 예를 들면 90% 초과, 전형적으로는 95% 초과, 더욱 바람직하게는 98% 초과의 이성체 순 도를 가지는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,(+)-이성체 형태인 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 1a를 가지는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.

[화학식 1a]
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 산 부가염 형태인 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.
제 7항에 있어서, 염이 메탄 설포네이트인 3,11b-시스-디하이드로테트라베나 진.
헌팅턴병의 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 전진과 연축 및 퇴행 보행 같은 불수의적 움직임으로부터 선택되는 증상의 진행을 정지 또는 지연시키기 위한 약제를 제조하기 위한, 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에서 정의된 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 용도.
헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유하는 것으로 확인된 환자의 예방적 치료를 위한 약제를 제조하기 위한, 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 정의된 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 용도.
헌팅턴 유전자의 돌연변이 형태를 보유하고 있지만 헌팅턴병의 증상이 아직 발병되지 않은 15 내지 50세의 환자의 예방적 치료를 위한 것이되, 상기 예방적 치료가 헌팅턴병과 관련된 증상의 발병을 예방 또는 지연시키기 위한 것인, 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 따르는 3,11b-시스-디테트라하이드로베나진.
제 1항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에서 정의된 3,11b-시스-디이하이드로테트라베나진을 치료학적 유효랑으로 투여하는 것을 포함하여, 헌팅턴병의 하나 이상의 증상, 더욱 구체적으로 불수의적 무도증, 진전 및 연축 같은 불수의적 움직임 및 퇴행 보행으로부터 선택되는 증상의 진행을 정지 또는 지연시키는 방법.
제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에서 정의된 시스- 디하이드로테트라베나진을 헌팅턴병의 발병 또는 진행을 예방하거나 지연시키는 유효량으로 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유하는 것으로 확인된 환자들을 예방적으로 치료하는 방법.
제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 시스- 디하이드로테트라베나진이 투여되는 환자가, IT-15 유전자 상의 CAG 반복서열의 수가 35이상, 더욱 전형적으로는 40이상, 예를 들면 45이상, 또는 50이상인 유전자의 돌연변이 형태를 보유하는, 화합물, 방법 또는 용도.
제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 정의된 시스-디하이드로테트라베나진을 헌팅턴병의 잠재성 진행을 예방하거나 지연시키는 유효량으로 투여하는 것을 포 함하여, 헌팅턴병을 유발하는 돌연변이 유전자를 보유하는 것으로 확인된 환자를 예방적으로 치료하는 방법.
본원의 실시예에 관하여 기술된 것과 실질적으로 동일한 화합물, 방법 또는 용도.