ES2313076T3 - Tratamiento y diagnostico de neoplasias usando linfopoyetina estromal timica. - Google Patents
Tratamiento y diagnostico de neoplasias usando linfopoyetina estromal timica. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2313076T3 ES2313076T3 ES04778434T ES04778434T ES2313076T3 ES 2313076 T3 ES2313076 T3 ES 2313076T3 ES 04778434 T ES04778434 T ES 04778434T ES 04778434 T ES04778434 T ES 04778434T ES 2313076 T3 ES2313076 T3 ES 2313076T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- tumor
- tslp
- pharmaceutical composition
- baselineskip
- neoplasm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2046—IL-7
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57488—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds identifable in body fluids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/54—Interleukins [IL]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/715—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Uso de TSLP (Linfopoyetina Estromal Tímica) o un agonista de la misma para la preparación de una composición farmacéutica para tratar una neoplasia o prevenir el desarrollo de una neoplasia.
Description
Tratamiento y diagnóstico de neoplasias usando
linfopoyetina estromal tímica.
Esta solicitud reivindica el beneficio de la
Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos de Nº de Serie
60/488.263, presentada el 18 de julio de 2003.
La presente invención se refiere generalmente a
usos de moléculas de citoquinas de mamíferos y reactivos
relacionados. Más específicamente, la invención se refiere a la
identificación de proteínas similares a citoquinas de mamíferos e
inhibidores de las mismas que pueden usarse en el tratamiento del
cáncer.
El cáncer es una enfermedad progresiva, que
aparece en una serie de etapas bien definidas, habitualmente como
consecuencia de la activación o desactivación de mutaciones. Estas
mutaciones con frecuencia dan células proliferantes autosuficientes
para su desarrollo, insensibles a señales inhibidoras del
crecimiento, resistentes a programas de diferenciación terminal,
senescencia o apoptosis, así como las dotan de una capacidad de
autorrenovación ilimitada, la capacidad de orquestar y dirigir una
angiogénesis sostenida y la capacidad de invadir y prosperar en
entornos tisulares ectópicos (véase, por ejemplo, Hanahan y Weinberg
(2000) Cell 100: 57-70).
La respuesta inmune de mamíferos se basa en una
serie de interacciones celulares complejas, denominadas "red
inmune". Investigaciones recientes han proporcionado nuevas
percepciones del funcionamiento interno de esta red. Aunque
continúa estando claro que muchas de las respuestas, de hecho, giran
alrededor de las interacciones de tipo red de linfocitos,
macrófagos, granulocitos y otras células, en general los inmunólogos
sostienen ahora la opinión de que las proteínas solubles, conocidas
como linfoquinas, citoquinas o monoquinas, desempeñan un papel
crítico en controlar estas interacciones celulares.
Las linfoquinas median actividades celulares de
una diversidad de formas. Se ha demostrado que apoyan la
proliferación, el crecimiento y la diferenciación de células madre
hematopoyéticas pluripotenciales en una enorme cantidad de
progenitores que comprenden linajes celulares diversos, componiendo
un sistema inmune complejo. Son necesarias interacciones apropiadas
y equilibradas entre los componentes celulares para una respuesta
inmune sana.
Recientemente, se identificó una nueva citoquina
similar a IL-7, clonada a partir de una línea de
células estromales tímicas murinas, como linfopoyetina estromal
tímica (TSLP) (véase, por ejemplo, J. E. Sims et al., (2000)
J. Exp. Med. 192: 671-680; USSN 09/963.347,
presentada el 24 de septiembre de 2000; y la SEC ID Nº: 1 y 2). Las
actividades de TSLP coinciden con las de IL-7; ambas
estimulan los timocitos y las células T maduras y facilitan la
linfopoyesis B en cultivos de hígado fetal y precursores de
linfocitos de médula ósea. También se ha descubierto que el
receptor para TSLP es un heterodímero que consiste en una cadena
\alpha de IL-7-R y una cadena de
receptor similar a \gamma común (véase, por ejemplo, Reche et
al., (2001) J. de Immunol. 167: 336-343; Y.
Tonozuka et al., (2001) Cytogenet Cell Genet. 93:
23-25; A Pandey et al., (2000) Nat. Immunol.
1: 59-64; L. S. Park et al., (2000) J. Exp.
Med. 192: 659-670; y SEC ID Nº: 3, 4, 5 y 6).
El desarrollo del cáncer y la metástasis son un
proceso multietapa que implica crecimientos locales neoplásicos e
invasión seguida de diseminación a y reestablecimiento en lugares
lejanos. La neoplasia o tumor puede consistir en células
transformadas e infiltración de células estromales y células del
sistema inmune. La capacidad de un tumor para metastatizar es el
determinante principal de la mortalidad del paciente con cáncer. Se
ha implicado al TGF-\beta tanto en la supresión
como en la progresión de tumores (véase por ejemplo, Oft et
al., (2002) Nat. Cell Bio. 4: 487-494).
Muchos de los mecanismos moleculares y celulares
que median la relación entre metástasis, inmunidad innata y cáncer
no se han resuelto todavía. La expresión de
TGF-\beta en tumores facilita la formación de
metástasis. La presente invención sugiere que TSLP se suprime por
TGF-\beta.
La presente invención se basa en el
descubrimiento de que la expresión del modulador inmune, TSLP, se
reduce durante la progresión tumoral y la adición de TSLP exógeno
causa regresión tumoral.
La presente invención proporciona un uso de TSLP
o un agonista del mismo para la preparación de una composición
farmacéutica para tratar una neoplasia o prevenir el desarrollo de
una neoplasia. La neoplasia es un tumor que es canceroso y de
origen epitelial que incluye un tumor de mama, tumor de colon, tumor
pulmonar, tumor ovárico o un tumor de próstata. La inhibición de la
progresión tumoral puede ser por rechazo del tumor. El rechazo
tumoral puede ser por reducción del tamaño del tumor o pérdida del
potencial metastásico. En realizaciones adicionales, la neoplasia
contiene células dendríticas y el agonista puede ser una muteína de
TSLP, una molécula pequeña o un anticuerpo agonista.
En ciertas realizaciones, puede prepararse TSLP
o un agonista del mismo como un adyuvante de vacuna.
La presente invención también proporciona un
método in vitro de diagnóstico de un neoplasia, que comprende
poner en contacto una muestra biológica de un sujeto con un
anticuerpo de TSLP o TLSPR en condiciones adecuadas para la
formación de un complejo antígeno:anticuerpo y detectar el
complejo.
El término "TSLP" se refiere al ácido
nucleico y a los aminoácidos de la SEC ID Nº: 1 y SEC ID Nº: 2. El
"TSLPR" está compuesto por dos subunidades, TSLPR e
IL-7\alpha, SEC ID Nº: 4 y 6. Las subunidades
están codificadas por los ácidos nucleicos de TSLPR e
IL-7\alpha, SEC ID Nº: 3 y 5.
La expresión "cantidad eficaz" se refiere a
una cantidad suficiente para mejorar un síntoma o signo de la
afección médica. Los hospedadores mamíferos típicos incluirán
ratones, ratas, gatos, perros y primates, incluyendo seres humanos.
Una cantidad eficaz para un paciente particular puede variar
dependiendo de factores tales como la afección que se trate, la
salud en conjunto del paciente, el método, la vía y la dosis de
administración y la gravedad de los efectos secundarios. Cuando
está en combinación, es una cantidad eficaz en proporción a una
combinación de componentes y el efecto no se limita sólo a los
componentes individuales.
Típicamente, una cantidad eficaz de agente
terapéutico disminuirá los síntomas en al menos aproximadamente el
10%; habitualmente en al menos aproximadamente el 20%;
preferiblemente, en al menos aproximadamente el 30%; o más
preferiblemente, en al menos aproximadamente el 50%. La presente
invención proporciona reactivos que servirán en aplicaciones
terapéuticas como se describen en otra parte en este documento, por
ejemplo, en la descripción general para tratar trastornos asociados
con las indicaciones descritas anteriormente. Berkow (ed.) The
Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Merck & Co., Rahway, N.
J.; Thorn, et al. Harrison's Principles of Internal
Medicine, McGraw-Hill, NY; Gilman, et al.
(eds.) (1990) Goodman y Gilman's: The Pharmacological Bases of
Therapeutics, 8ª Ed., Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical
Sciences, 17ª ed. (1990), Mack Publishing Co., Easton, Penn; Langer
(1990) Science 249: 1527-1533; Merck Index, Merck
& Co., Rahway, Nueva Jersey; y Physician's Desk Reference
(PDR); Cotran, et al. (eds), anteriormente; y Dale y Federman
(eds.) (2000) Scientific American Medicine, Heattheon/WebMD, Nueva
York.
El término "neoplasia" se refiere a una
masa anormal o colonia de células y/o células infiltrantes
producidas o atraídas por un nuevo crecimiento de tejido
relativamente autónomo. Las células infiltrantes pueden ser células
dendríticas, células T y células B. La mayoría de las neoplasias
surgen de la expansión clonal de una sola célula que ha
experimentado una transformación neoplásica. La transformación de
una célula normal en neoplásica puede estar causada por un agente
(o acontecimiento) químico, físico o biológico que modifique
directamente e irreversiblemente el genoma de la célula. Las células
neoplásicas se caracterizan por la pérdida de algunas funciones
especializadas y la adquisición de nuevas propiedades biológicas,
principalmente la propiedad de desarrollo relativamente autónomo
(descontrolado). Las células neoplásicas pasan sus características
biológicas hereditarias a las células de la progenie.
El comportamiento biológico pasado, presente y
futuro predicho o el curso clínico de un neoplasia se clasifica
adicionalmente como benigno o maligno, una distinción de gran
importancia en el diagnóstico, tratamiento y pronóstico. Una
neoplasia maligna manifiesta un mayor grado de autonomía, es capaz
de la invasión y de la propagación metastásica, puede ser
resistente al tratamiento y puede provocar la muerte. Una neoplasia
benigna tiene un menor grado de autonomía, habitualmente no es
invasiva, no metastatiza y generalmente no produce grandes daños si
se trata adecuadamente.
La expresión "inhibición de la progresión
tumoral" se refiere a detener el crecimiento de la célula
tumoral, la invasión o la metástasis dependiendo del estado del
tumor. Debería abarcar todas las etapas necesarias de la evolución
de un tumor, incluyendo la neovascularización y la angiogénesis.
La expresión "potencial metastásico o
metástasis" se refiere al proceso por el que se propaga el cáncer
de una parte del cuerpo a otra, la forma en la que viaja del lugar
en el que surgió primero como un tumor primario a localizaciones
alejadas en el cuerpo.
El grado en el que aparecen metástasis varía con
el tipo individual de tumor. El melanoma, el cáncer de mama, el
cáncer pulmonar, el cáncer de colon y el cáncer de próstata están
entre los tipos de cáncer que son propensos a metastatizar. Cuando
tiene lugar la metástasis, pueden formarse las metástasis en una
diversidad de sitios en el cuerpo, siendo los sitios más comunes
los ganglios linfáticos, pulmones, hígado, cerebro y médula
ósea.
El término "muteína" o nuevas proteínas
mutantes incluye fragmentos, derivados y análogos de polipéptidos.
Puede usarse la tecnología de ADN recombinante conocida por los
especialistas en la técnica para generar nuevas proteínas mutantes
o muteínas, incluyendo sustituciones, deleciones o adiciones de un
solo aminoácido o de múltiples aminoácidos o proteínas de fusión.
Dichos polipéptidos modificados pueden mostrar, por ejemplo, una
actividad mejorada o una estabilidad aumentada. Además, pueden
purificarse a mayores rendimientos y mostrar una solubilidad mejor
que el polipéptido natural correspondiente, al menos en ciertas
condiciones de purificación y almacenamiento.
\newpage
La expresión "adyuvante de vacuna" en el
contexto del cáncer se refiere a un péptido usado sólo o combinado
con diferentes citoquinas, estimuladores inespecíficos, células
presentadoras de antígenos o tumores de células completas, tales
como células dendríticas (véase, por ejemplo, Kochman et al,
(1999) Current Medical Research and Opinion, 15:
321-326 y Jager et al, (2002) Current Opinion
in Immunol., 14: 178-182 y Mendelsohn et al;
(2001) The Molecular Basis of Cancer, 2ª Edición). El adyuvante de
vacuna puede administrarse para la prevención, mejora o tratamiento
de tumores.
\vskip1.000000\baselineskip
La Linfopoyetina Estromal Tímica (TSLP) se
descubrió originariamente en el ratón y se descubrió que desempeñaba
un papel similar al de su homólogo IL-7 en
contribuir al desarrollo temprano de células B y T (véase, por
ejemplo, J. E. Sims, anteriormente; S. D. Levin et al.,
anteriormente; y R. J. Ray, et al., anteriormente). La TSLP
es una nueva citoquina derivada de células epiteliales que induce
respuestas de células T CD4^{+} y CD8^{+} mediadas por células
dendríticas (DC). Las DC CD 11c^{+} activadas por TSLP activan
fuertemente y expanden células T CD8+ e inducen su diferenciación
en efectores que producen interleuquina (IL)-5 e
IL-13, que presentan una escasa actividad
catalítica. Se ha descubierto que el desencadenamiento adicional de
CD40L de DC activadas por TSLP inducía células T CD8+ con potente
actividad citolítica, que producía grandes cantidades de interferón
(IFN)-\gamma, al tiempo que conservaban su
capacidad para producir IL-5 e
IL-13. Se ha descubierto que TSLP desempeña un
papel como un iniciador de respuestas de células T y sugiere que las
células que expresan CD40L pueden actuar en combinación con TSLP
(véase, por ejemplo, Gilliet, et al. (2003) J. Exp. Med. 197:
1 059-1 063). La presente invención se basa en los
sorprendentes resultados de que TSLP es un mediador crítico en el
desarrollo de neoplasias.
Estudios recientes que analizan TSLP sugieren
que tiene efectos potentes sobre la capacidad de DC para inducir la
activación de células T CD8+ sin estimulación previa y la
diferenciación en células T productoras de IL-5 e
IL-13 (véase, por ejemplo, Gilliet, et al.
(2003) J. Exp. Med. 197: 1059-1063). La activación
de DC parece ser una etapa crítica en la patogénesis de respuestas
mediadas por células T contra tumores. El mecanismo molecular que
subyace a la señalización de DC para inducir enfermedades por
células T no se conoce con claridad. Los presentes descubrimientos
de que TSLP se expresa mucho por una línea celular de carcinoma
escamoso de ratón B9 sugieren que TSLP representa un factor crítico
en la compresión del cáncer. Los estudios en modelos de ratón
confirman el papel que desempeña TSLP en la supresión de
tumores.
Se estudiaron la línea celular de carcinoma
escamoso de ratón B9 y una línea derivada, RS1, que lleva Smad2 y
H-ras sobreexpresados y activados, para determinar
el nivel de expresión de ARNm de la citoquina inflamatoria, TSLP.
Se observó que la línea celular B9 expresa altos niveles de TSLP,
mientras que la línea celular RS1 expresa niveles fuertemente
reducidos de TSLP. Se realizaron estudios adicionales mediante el
pase de células tumorales a ratones inmunocompetentes para observar
la expresión de TSLP.
Se midieron los niveles de expresión de TSLP en
diversos tejidos normales y que llevaban tumores. La expresión de
TSLP era significativamente mayor en tejidos de mama normales cuando
se comparaba con tejidos de carcinoma de mama proximales. Se
observaron resultados similares con tejidos de cáncer de colon,
pulmón, ovario y próstata normales y tejidos de cáncer de colon,
pulmón, ovario y próstata proximales. Una observación interesante
era que las células tumorales humanas expresaban cantidades
significativamente disminuidas de TSLP cuando se comparaban con las
homólogas sin transformar.
La expresión de TSLP en piel de ratón tratado
con carcinógeno (DMBA, un carcinógeno específico de sitio y TPA, un
promotor tumoral) se elevaba inicialmente a los puntos de tiempo de
5 y 24 horas y, posteriormente, disminuía a o por debajo de los
niveles de control en puntos de tiempo posteriores, demostrando de
nuevo que la progresión del trastorno proliferativo coincide con
una caída en la expresión de TSLP.
Se ha demostrado que TSLP e IL-7
se involucran en mecanismos de transducción de señales similares.
Ambos inducen la fosforilación de tirosina del factor de
transcripción Stat5. Mientras que la señalización mediada por
IL-7 se produce a través de la activación de las
quinasas Janus Jak1 y Jak 3; TSLP es incapaz de activar ninguna
enzima, pero en su lugar puede interaccionar con Jak 2. Se demostró
adicionalmente que el receptor funcional para TSLP, TSLPR, cuando
se activaba conducía a la fosforilación tanto de Stat5 como de Stat3
(véase, por ejemplo, Reche, et al. (2001) J. Immunol. 167:
336-343).
En un modelo in vivo de rechazo tumoral,
se trataron tumores inducidos en ratones por células
Ep-ras mediante una sola administración de
adenovirus que contenía mTSLP (Ad-TSLP) o mediante
varias administraciones de proteína mTSLP. En ambos casos, parecía
que mTSLP inhibía significativamente el crecimiento tumoral cuando
se comparaba con el tratamiento de control (Ad-GFP
o PBS). Estos datos indican que TSLP presenta una potente actividad
de rechazo tumoral, probablemente causada por la reactivación de la
respuesta inmune contra tumores establecidos.
Como se ha indicado anteriormente, la
inflamación parece ser un componente crítico de la progresión
tumoral, puesto que muchos cánceres surgen en áreas de infección,
irritación crónica e inflamación. El microentorno del tumor es un
participante indispensable en el proceso neoplásico, albergando la
proliferación, supervivencia y migración. Este microentorno parece
estar enormemente orquestado por células inflamatorias. El papel
crítico de TSLP en el proceso inflamatorio y la actividad del
factor de crecimiento endotelial, con los datos presentados
anteriormente, un especialista en la técnica reconocería que la
modulación de la expresión y la actividad de TSLP es un componente
importante en la progresión de tumores.
La presente invención proporciona métodos y
reactivos para potenciar la respuesta mediada por Th2 por agonismo
de las actividades de TSLP. La potenciación de esta respuesta es
útil en el tratamiento de trastornos debido a la supresión del
sistema inmune, por ejemplo, cáncer. El aumento de la actividad de
células dendríticas inducido por TSLP será útil en el tratamiento
del cáncer. También será útil la TSLP y/o agonistas de la misma como
un adyuvante de vacunas. II. Agonistas y antagonistas
Los agonistas incluyen la proteína citoquina de
longitud completa, TSLP (véase, por ejemplo, SEC ID Nº: 2). Se
usarán péptidos de esas secuencias o variantes de las mismas para
inducir la señalización del receptor. Estas variantes incluyen las
que están conservativamente sustituidas y con vidas medias
prolongadas. Los agonistas pueden modificarse para tener vidas
medias más prolongadas por pegilación (PEG) o por marcaje del
agonista con la porción Fc de un anticuerpo IgG (véase, por
ejemplo, Karmonos, (2001) BioDrugs, 15: 705-711).
Ambos métodos proporcionan un método para evadir la respuesta
inmune no degradándose tan rápido. Por ejemplo, la conjugación del
agonista con PEG disminuye significativamente el aclaramiento de
proteínas del plasma. También se contemplan moléculas pequeñas que
también inducen la señalización del receptor.
Pueden generarse anticuerpos contra diversos
epítopos de las proteínas TSLP, incluyendo especies, polimórficos o
variantes alélicas y fragmentos de las mismas, tanto en sus formas
de origen natural como en sus formas recombinantes. Además, pueden
generarse anticuerpos contra TSLP en sus formas activas o en sus
formas inactivas, incluyendo versiones nativas o desnaturalizadas.
También se contemplan anticuerpos antiidiotípicos.
Los anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión
y versiones de cadena sencilla, frente a fragmentos predeterminados
de los antígenos pueden generarse por inmunización de animales con
conjugados de los fragmentos con proteínas inmunogénicas. Se
preparan anticuerpos monoclonales a partir de células que secretan
el anticuerpo deseado. Estos anticuerpos pueden explorarse para la
unión a TSLP normales o defectuosas o explorarse para actividad
agonista o antagonista, por ejemplo, mediada a través de un
receptor.
También puede ser útil un anticuerpo de TSLP en
aplicaciones de diagnóstico. Como anticuerpos de captura o no
neutralizantes, pueden explorarse por la capacidad para unirse a los
antígenos sin inhibir la unión a un receptor. Como anticuerpos
neutralizantes, pueden ser útiles en ensayos de unión competitiva.
También serán útiles en la detección o cuantificación de proteína
TSLP o de sus receptores (véase, por ejemplo, Chan (ed. 1987)
Immunology: A Practical Guide, Academic Press, Orlando, FL; Price y
Newman (eds. 1991) Principles and Practice of Immunoassay, Stockton
Press, N. Y.; y Ngo (ed. 1988) Nonisotopic Immunoassay, Plenum
Press, N. Y.). Absorciones cruzadas, agotamientos u otros medios
proporcionarán preparaciones de selectividad definida, por ejemplo,
especificidades de especie únicas o compartidas. Esta puede ser la
base para ensayos que identificarán diversos grupos de
antígenos.
Además, los anticuerpos, incluyendo fragmentos
de unión a antígeno, de esta invención pueden ser antagonistas
potentes que se unen al antígeno e inhiben la unión funcional, por
ejemplo, a un receptor que puede provocar una respuesta biológica.
También pueden ser útiles como anticuerpos no neutralizantes y
pueden acoplarse a toxinas o radionúclidos, de tal modo que cuando
el anticuerpo se une a un antígeno, se destruye una célula que lo
expresa, por ejemplo, en su superficie. Además, estos anticuerpos
pueden conjugarse con fármacos u otros agentes terapéuticos, ya sea
directa o indirectamente por medio de un enlazador y pueden efectuar
la dirección de fármacos.
Pueden usarse inmunoensayos en el formato de
unión competitiva para las determinaciones de reactividad cruzada.
Los anticuerpos de esta invención también pueden ser útiles en
aplicaciones de diagnóstico. Como anticuerpos de captura o no
neutralizantes, pueden explorarse por su capacidad para unirse a los
antígenos sin inhibir la unión a un receptor. Como anticuerpos
neutralizantes pueden ser útiles en ensayos de unión competitiva.
También serán útiles en la detección o cuantificación de proteína
TSLP o de sus receptores (véase, por ejemplo, Chan (ed. 1987)
Immunology: A Practical Guide, Academic Press, Orlando, FL; Price y
Newman (eds. 1991) Principles and Practice of Immunoassay, Stockton
Press, N. Y.; y Ngo (ed. 1988) Nonisotopic Immunoassay, Plenum
Press, N. Y.). Absorciones cruzadas, agotamientos u otros medios
proporcionarán preparaciones de selectividad definida, por ejemplo,
especificidades de especie únicas o compartidas. Esta puede ser la
base para ensayos que identificarán diversos grupos de
antígenos.
También serán útiles anticuerpos generados
contra cada TSLP para generar anticuerpos antiidiotípicos. Esto
será útil en la detección o diagnóstico de diversas afecciones
inmunológicas relacionadas con la expresión de los antígenos
respectivos. III. Composiciones terapéuticas y métodos de
diagnóstico.
Las citoquinas, tales como IL-7,
IL-12 o IL-23, antagonistas y
agonistas de las mismas se administran normalmente por vía
parenteral, preferiblemente por vía intravenosa. Puesto que dichas
proteínas o péptidos pueden ser inmunogénicos se administran
preferiblemente de forma lenta, mediante un equipo de administración
IV convencional o mediante una formulación de liberación prolongada
subcutánea, por ejemplo, como se muestra en Tomasi, et al., Patente
de Estados Unidos 4.732.863. Pueden aplicarse medios para minimizar
las reacciones inmunológicas. Las entidades moleculares pequeñas
pueden ser activas por vía oral.
Pueden administrarse agentes terapéuticos
parenterales en vehículos acuosos tales como agua, solución salina
o vehículos tamponados con o sin diversos aditivos y/o agentes de
dilución. Como alternativa, puede prepararse un adyuvante de vacuna
o una suspensión, tal como una suspensión de cinc, para incluir el
péptido. Dicha suspensión puede ser útil para la inyección
subcutánea (SC) o intramuscular (IM) (véase, por ejemplo, Avis,
et al., (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms:
Parenteral Medications 2ª ed., Dekker, NY; Lieberman, et al.
(eds. 1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets 2ª ed., Dekker,
NY; Lieberman, et al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosage
Forms: Disperse Systems Dekker, NY; Fodor; et al. (1991)
Science 251; 767-773, Coligan (ed.) Current
Protocols in Immunology; Hood, et al., Immunology
Benjamin/Cummings; Paul (ed.) Fundamental Immunology; Academic
Press; Parce, et al. (1989) Science 246:
243-247; Owicki, et al. (1990) Proc. Nat'l
Acad. Sci. USA 87: 4007-4011; y Blundell y Johnson
(1976) Protein Cristallography, Academic Press, Nueva York).
La selección de un régimen de administración
para un agente terapéutico depende de varios factores, incluyendo
la velocidad de renovación sérica o tisular de la entidad, el nivel
de síntomas, la inmunogenicidad de la entidad y la accesibilidad de
las células diana, el momento de administración, la absorción a
través de las capas epiteliales, etc. Preferiblemente, un régimen
de administración maximiza la cantidad de agente terapéutico
administrado al paciente de acuerdo con un nivel aceptable de
efectos secundarios. Por consiguiente, la cantidad de agentes
biológico administrado depende en parte de la entidad particular y
de la gravedad de la afección que se trate. Se determinan
directrices en la selección de dosis apropiadas de citoquinas y
moléculas pequeñas usando metodologías convencionales.
La determinación de la dosis apropiada se
realiza por el médico, por ejemplo; usando parámetros o factores o
conocidos o que se sospecha en la técnica que afectan al tratamiento
o que se predice que afectan al tratamiento. Generalmente, la dosis
comienza con una cantidad algo menor que la dosis óptima y se
aumenta en pequeños incrementos a partir de entonces hasta que se
consigue el efecto deseado u óptimo en relación con cualquier efecto
secundario negativo. Las medidas de diagnóstico importantes
incluyen las de síntomas de, por ejemplo, la inflamación o el nivel
de citoquinas inflamatorias producidas. Preferiblemente, un agente
biológico que se va a usar procede de la misma especie que el
animal al que se dirige el tratamiento, minimizando de este modo una
respuesta humoral al reactivo.
Pueden proporcionarse anticuerpos, fragmentos de
anticuerpos y proteínas o polipéptidos mediante infusión continua o
mediante dosis a intervalos de, por ejemplo, un día, una semana o
1-7 veces por semana. Pueden proporcionarse dosis
por vía intravenosa, subcutánea, tópica, oral, nasal, rectal,
intramuscular, intracerebral o por inhalación. Un protocolo de
dosis preferida es uno que implica la dosis o la frecuencia de dosis
máxima que evita efectos secundarios indeseables significativos.
Generalmente, una dosis semanal total es de al menos 0,05 \mug/kg
de peso corporal, más generalmente de al menos 0,2 \mug/kg, más
generalmente de al menos 0,5 \mug/kg, típicamente de al menos 1
\mug/kg, más típicamente de al menos 10 \mug/kg, más típicamente
de al menos 100 \mug/kg, preferiblemente de al menos 0,2 mg/kg,
más preferiblemente de al menos 1,0 mg/kg, más preferiblemente de
al menos 2,0 mg/kg, de forma óptima de al menos 10 mg/kg, de forma
más óptima de al menos 25 mg/kg y, más óptimamente, de al menos 50
mg/kg, véase, por ejemplo, Yang, et al. (2003) New Engl. J.
Med. 349: 427-434; Herold, et al., (2002) New
Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Lui, et al.
(1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456:
Portielji, et al., (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:
133-144. La dosis deseada de una molécula
terapéutica pequeña, por ejemplo, un peptidomimético, un producto
natural o un químico orgánico es aproximadamente la misma que para
un anticuerpo o polipéptido, en base a moles/kg.
La presente invención también proporciona la
administración de agentes biológicos en combinación con terapias
conocidas, por ejemplo, esteroides, particularmente
glucocorticoides, que alivian los síntomas, por ejemplo, asociados
con inflamación o antibióticos o antiinfecciosos. Las dosificaciones
diarias para glucocorticoides variarán de al menos aproximadamente
1 mg, generalmente de al menos aproximadamente 2 mg y,
preferiblemente, de al menos aproximadamente 5 mg por día.
Generalmente, la dosificación será menor de aproximadamente 100 mg,
típicamente menor de aproximadamente 50 mg, preferiblemente menor de
aproximadamente 20 mg y, más preferiblemente, de al menos
aproximadamente 10 mg por día. En general, los intervalos serán de
al menos aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg,
preferiblemente de aproximadamente 2 mg a 50 mg por día. También se
conocen combinaciones de dosis adecuadas con antibióticos,
antiinfecciosos o antiinflamatorios.
Pueden usarse anticuerpos que se unen
específicamente a TSLP o TSLPR para el diagnóstico de afecciones o
enfermedades caracterizadas por la expresión de TSLP o TSLPR, o en
ensayos para controlar pacientes que se están tratando con TSLP o
TSLPR, agonistas, antagonistas o inhibidores. Los anticuerpos útiles
para fines de diagnóstico pueden prepararse de la misma forma que
la descrita anteriormente para los agentes terapéuticos. Los ensayos
de diagnóstico para TSLP o TSLPR incluyen métodos que utilizan el
anticuerpo y un marcador para detectar TSLP o TSPLPR en fluidos
corporales humanos o extractos de células o tejidos. Los anticuerpos
pueden usarse con o sin modificación y pueden marcarse por unión de
los mismos, ya sea covalentemente o no covalentemente, con una
molécula indicadora. Pueden usarse una amplia diversidad de
moléculas indicadoras que se conocen en la técnica, varias de las
cuales se han descrito anteriormente.
Se conocen en la técnica una diversidad de
protocolos que incluyen ELISA, RIA y FACS para TSLP o TSLPR y
proporcionan una base para diagnosticar niveles alterados o
anormales de expresión de TSLP o TSLPR. Se establecen los valores
normales o patrón para la expresión de TSLP o TSLPR por combinación
de fluidos corporales o de extractos celulares tomados de sujetos
mamíferos normales, preferiblemente seres humanos, con anticuerpo
contra TSLP o TSLPR en condiciones adecuadas para la formación de
complejos. La cantidad de formación de complejos patrón puede
cuantificarse por diversos métodos, pero preferiblemente por medios
fotométricos. Las cantidades de TSLP o TSLPR expresadas en muestras
de sujetos, de control y enfermos, de tejidos biopsiados se comparan
con los valores patrón. La desviación entre los valores patrón y
del sujeto establece los parámetros para diagnosticar la enfermedad.
Los polinucleótidos que pueden usarse incluyen secuencias
oligonucleotídicas, moléculas de ARN y ADN complementarias y PNA.
Los polinucleótidos pueden usarse para detectar y cuantificar la
expresión génica en tejidos biopsiados en los que la expresión de
TSLP o TSLPR puede correlacionarse con enfermedad. El ensayo de
diagnóstico puede usarse para diferenciar entre ausencia, presencia
y exceso de expresión de TSLP o TSLPR y para controlar la regulación
de los niveles de TSLP o TSLPR durante la intervención
terapéutica.
En un aspecto, la hibridación con sondas de PCR
que son capaces de detectar secuencias polinucleotídicas,
incluyendo secuencias genómicas que codifican TSLP o TSLPR o
moléculas estrechamente relacionadas puede usarse para identificar
secuencias de ácido nucleico que codifican TLSP o TSLPR. La
especificidad de la sonda, ya esté generada a partir de una región
altamente específica, por ejemplo, de 10 nucleótidos únicos en la
región reguladora 5' o una región menos específica, por ejemplo,
especialmente en la región codificante 3', y la rigurosidad de la
hibridación o amplificación (máxima, elevada, intermedia o reducida)
determinará si la sonda identifica sólo secuencias de origen
natural que codifican TSLP o TSLPR, alelos o secuencias
relacionadas. También pueden usarse sondas para la detección de
secuencias relacionadas y deberían contener preferiblemente al
menos el 50% de los nucleótidos de cualquiera de las secuencias
codificantes de TSLP o TSLPR. Las sondas de hibridación de la
presente invención pueden ser ADN o ARN y proceder de la secuencia
de nucleótidos de la SEC ID Nº: 1 o de la secuencia genómica que
incluye un promotor, elementos potenciadores e intrones de la TSLP o
TSLPR de origen natural.
Los medios para producir sondas de hibridación
específicas para ADN que codifican TSLP o TSLPR incluyen la
clonación de secuencias de ácido nucleico de TSLP o TSLPR o
derivados de las mismas en vectores para la producción de sondas de
ARNm. Dichos vectores se conocen en la técnica, están disponibles en
el mercado y pueden usarse para sintetizar sondas de ARN in
vitro por medio de adición de las ARN polimerasas apropiadas y
los nucleótidos marcados apropiados. Las sondas de hibridación
pueden marcarse mediante una diversidad de grupos indicadores, por
ejemplo, radionúclidos tales como 32P o 35S o marcadores enzimáticos
tales como fosfatasa alcalina acoplada con la sonda a través de
sistemas de acoplamiento de avidina/biotina y similares.
Pueden usarse anticuerpos así como secuencias
polinucleotídicas que codifican TSLP o TSLPR para el diagnóstico de
afecciones o trastornos que están asociadas con la expresión de TSLP
o TSLPR. Los ejemplos de dichas afecciones o trastornos incluyen
carcinoma, leucemia, linfoma, melanoma, mieloma, sarcoma y
teratocarcinoma y, particularmente, cánceres de la glándula
suprarrenal, vejiga, hueso, médula ósea, cerebro, mama, cuello
uterino, vesícula biliar, ganglios, tracto gastrointestinal,
corazón, riñón, hígado, pulmón, músculo, ovario, páncreas,
paratiroides, pene, próstata, glándulas salivales, piel, bazo,
testículos, timo, tiroides y útero. Las secuencias polinucleotídicas
que codifican TSLP o TSLPR pueden usarse en análisis de Southern o
northern, transferencia puntual u otras tecnologías basadas en
membranas; en tecnologías de PCR, o en varillas, pins, ensayos de
ELISA o micromatrices, utilizando fluidos o tejidos de biopsias del
paciente para detectar expresión de TSLP o TSLPR. Dichos métodos
cualitativos o cuantitativos se conocen bien en la técnica.
Con respecto al cáncer, la presencia de una
cantidad relativamente elevada de transcrito en tejido biopsiado de
un individuo puede indicar una predisposición para el desarrollo de
la enfermedad o puede proporcionar un medio para detectar la
enfermedad antes de la aparición de los síntomas clínicos reales. Un
diagnóstico más definitivo de este tipo puede permitir a los
profesionales de la salud emplear medidas preventivas o un
tratamiento agresivo más temprano, previniendo de este modo el
desarrollo o una progresión adicional del cáncer.
El amplio alcance de esta invención se entiende
mejor con respecto a los siguientes ejemplos, que no pretenden
limitar las invenciones a las realizaciones específicas.
Algunos de los métodos convencionales se
describen o se citan, por ejemplo, en Maniatis, et al. (1982)
Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor
Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook, et al. (1989)
Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2ª ed.), vols.
1-3, CSH Press, NY; Ausubel, et al., Biology
Greene Publishing Associates Brooklyn, NY; o Ausubel, et al.
(1987 y Suplementos) Current Protocols in Molecular Biology,
Greene/Wiley, Nueva York. Los métodos para purificación de proteínas
incluyen métodos tales como precipitación con sulfato de amonio,
cromatografía en columna, electroforesis, centrifugación,
cristalización y otros (véase, por ejemplo, Ausubel et al.
(1987 y suplementos periódicos); Deutscher (1990) "Guide to
Protein Purification" en Meth. Enzymol., vol. 182, y otros
volúmenes de esta serie; y bibliografía del fabricante sobre el uso
de productos de purificación de proteínas, por ejemplo, Pharmacia,
Piscataway, N. J. o Bio-Rad, Richmond, CA). Las
combinaciones con técnicas recombinantes permiten la fusión con
segmentos apropiados, por ejemplo, con una secuencia FLAG o un
equivalente que puede fusionarse a través de una secuencia
escindible por proteasas (véase, por ejemplo, Hochuli (1990)
"Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate
Absorbent" en Setlow (ed.) Genetic Engineering, Principle and
Methods 12: 87-98, Plenum Press, N. Y.; y Crowe,
et al. (1992) QIAexpress: The High Level Expression &
Protein Purification System QIAGEN, Inc., Chastsworth, CA).
Se realizan análisis de secuencias por
ordenador, por ejemplo, usando programas informáticos disponibles,
incluyendo los de las fuentes GCG (U. Wisconsin) y GenBank. También
se usaron bases de datos de secuencias públicas, por ejemplo, de
GenBank y otras.
\vskip1.000000\baselineskip
Se seleccionaron líneas celulares de carcinoma
humano que eran parte del panel NCI 60
(http://dtp.nci.nih.gov/
docs/misc/common files/cell list.html, A. Monks et al., J. Natl. Cancer Inst. (1991) 83, 757) o que se usan comúnmente en la bibliografía. Se obtuvieron los tipos celulares normales correspondientes de cada órgano o sistema de la ATCC, Cascade biologics (Portland, OR) o Clonetics (Division of Biowhittaker, Walkersville, MD). En cada caso, éstas eran células normales sin transformar y no inmortalizadas y representan tipos celulares de la región anatómica particular, por ejemplo, fibroblastos, melanocitos y queratinocitos para servir como controles normales para líneas celulares de melanoma, células epiteliales mamarias normales para servir como controles normales para líneas celulares de carcinoma mamario, etc.
docs/misc/common files/cell list.html, A. Monks et al., J. Natl. Cancer Inst. (1991) 83, 757) o que se usan comúnmente en la bibliografía. Se obtuvieron los tipos celulares normales correspondientes de cada órgano o sistema de la ATCC, Cascade biologics (Portland, OR) o Clonetics (Division of Biowhittaker, Walkersville, MD). En cada caso, éstas eran células normales sin transformar y no inmortalizadas y representan tipos celulares de la región anatómica particular, por ejemplo, fibroblastos, melanocitos y queratinocitos para servir como controles normales para líneas celulares de melanoma, células epiteliales mamarias normales para servir como controles normales para líneas celulares de carcinoma mamario, etc.
Las células se cultivaron en cultivo de tejidos
en condiciones de cultivo convencionales, después se recogieron. Se
aisló el ARN total usando gradientes de isotiocianato de
guanidio/cloruro de cesio convencionales (Sambrook, J., Fritsch EF,
Maniatis T: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Nueva York; Cold
Spring Harbor Laboratory Press, 1989). El ARN total se sometió a
tratamiento con ADNasa para eliminar una posible contaminación con
ADN genómico. El ARN total tratado con ADNasa se sometió a una
transcripción inversa usando Superscript II (Gibco/BRL) de acuerdo
con las instrucciones del fabricante. Se diseñaron cebadores usando
Primer Express (PE Biosystems, Foster City, CA). Se realizó una PCR
cuantitativa a tiempo real sobre 50 ng de ADNc de cada muestra
usando ensayos de PCR cuantitativa a tiempo real con SYBR green de
Perkin Elmer, usando un instrumento ABI 5700. También se midieron
los niveles de ubiquitina para cada muestra y se usaron para
normalizar las cantidades de partida de ARN. Los valores
representan los datos normalizados para ubiquitina.
\vskip1.000000\baselineskip
La línea celular de queratinocitos de ratón
transformados con H-Ras PDV y la línea celular
mamaria de ratón transformada con H-Ras EP2 se
trataron durante 5 días con TGFbeta 1 5 ng/ml (R&D systems) o se
dejaron sin tratar. Se preparó el ARNm usando columnas RNeasy
(Qiagen) (véase, por ejemplo, Oft et al., (1996) Genes and
Dev. 10: 2462-2477).
Se cultivaron células de carcinoma escamoso B9 y
sus derivados que sobreexpresaban de forma estable
H-ras mutante y un mutante activado de mSmad2
(véase, por ejemplo, Oft et al. (2002) Nature Cell Biol. 4:
487-494) hasta la confluencia. Se aisló el ARNm
usando el kit de aislamiento de ARN Qiagen RNAeasy. Posteriormente,
el ARN se analizó mediante PCR a tiempo real usando cebadores
específicos de ARN de mTSLP y se normalizaron para controles de ARNm
de ubiquitina.
\vskip1.000000\baselineskip
La línea celular epitelial mamaria de ratón
Balb/C transformada con Ras, EP2, se inyectó en ratones desnudos y
en ratones Balb/C singénicos. Se reaislaron células tumorales a
partir del tumor, seleccionadas en G418 0,8 mg/ml (Invitrogen)
durante 4 días. Se aisló el ARNm como se ha descrito anteriormente
(véase, por ejemplo, Oft et al., (1996) Genes and Dev. 10:
2462-2477).
\vskip1.000000\baselineskip
Las líneas celulares Ep2 y PDV (queratinocitos
de ratón transformados con DMBA) se cultivaron hasta una confluencia
del 60%. Las células se trataron con TGF\beta1 5 ng/ml durante
tres días consecutivos. Las células se rasparon, se centrifugaron y
se congelaron de golpe inmediatamente en nitrógeno líquido. Se aisló
ARNm de TSLP y se analizó la expresión mediante PCR a tiempo real
usando cebadores de ARN específicos para TSLP. Se normalizaron los
niveles de expresión para controles de ARNm de ubiquitina.
\vskip1.000000\baselineskip
Se inyectaron por vía subcutánea células
epiteliales transformadas con Ras en ratones singénicos y se
volvieron a seleccionar después de que los tumores alcanzaran 1
cm^{3} en volumen (véase, por ejemplo, Oft et al. (1996)
Genes & Devel. 10: 2462-2477). Todas las células
se cultivaron hasta una confluencia del 90%. Las células se
rasparon, se centrifugaron y se congelaron de golpe inmediatamente
en nitrógeno líquido. Se aisló el ARNm y posteriormente se analizó
mediante PCR a tiempo real. Los valores de expresión se normalizaron
para controles de ARNm de ubiquitina.
\vskip1.000000\baselineskip
Se indujeron tumores en ratones Balb/C
inmunocompetentes mediante inyección por vía subcutánea de 1 x
10^{6} células tumorales EPXB. El grupo experimental se inyectó
posteriormente con 0,5 mg de TSLP dos veces por semana después de
la pérdida de peso corporal (véase, por ejemplo, Oft et al.,
(1996) Genes and Dev. 10: 2462-2477).
\vskip1.000000\baselineskip
Se trataron por vía tópica ratones C57B/6/129 en
el lomo con 50 \mug de DMBA o 30 \mug de TPA en 200 \mul de
acetona cada uno, o con acetona sola (control). Se recogieron
pequeñas biopsias tisulares del mismo ratón en diversos puntos de
tiempo (es decir, 0, 5 h, 24 h, 48 h y 120 h para DMBA; y 0, 5 h, 24
h y 72 h para TPA). Las muestras se congelaron de golpe
inmediatamente en nitrógeno líquido. Posteriormente, se extrajo el
ARNm y se analizó mediante PCR a tiempo real usando cebadores
específicos de ARN de mTSLP y se normalizaron para controles de ARNm
de ubiquitina.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cultivaron células NHEK primarias (Clonetics,
Cambrex) en medios de cultivo de queratinocitos definidos
(Invitrogen) durante cinco pases. Las células se infectaron a una
confluencia del 60% con adenovirus que expresaba GFP (MOI 100) o se
dejaron sin tratar. Las células se rasparon, se centrifugaron y se
congelaron de golpe inmediatamente en nitrógeno líquido.
Posteriormente, se extrajo el ARN y se analizó mediante PCR a tiempo
real usando cebadores específicos de ARN de hTSLP y se normalizó
para controles de ARNm de ubiquitina. La expresión de ARNm de TSLP
mostraba un aumento significativo en la expresión en los
queratinocitos infectados con adenovirus.
Para ensayar si los datos in vitro
anteriores se traducían a un entorno in vivo, se inyectaron
10^{6} células Ep-ras por vía subcutánea en
ratones Balb/C singénicos. Cuando el tamaño tumoral alcanzó 200
mm^{3}, se inyectaron adenovirus que expresaban mTSLP o GFP en la
vena de la cola a 10^{10} partículas/ratón. Por separado, también
se inyectó proteína mTSLP o PBS (control) (5 \mug 3X por semana)
en las venas de la cola en varios momentos desde el día 1 hasta el
día 18. En ambos, se midió el tamaño tumoral durante 30 días.
\vskip1.000000\baselineskip
SECUENCIA ID Nº: 1 Secuencia de ácido nucleico
de TSLP humana
SECUENCIA ID Nº: 2 Secuencia de aminoácidos de
TSLP humana
SECUENCIA ID Nº: 3 Secuencia de ácido nucleico
de IL-7R\alpha humano
SECUENCIA ID Nº: 4 Secuencia de aminoácidos de
IL-7R\alpha humano
SECUENCIA ID Nº: 5 Secuencia de ácido nucleico
de TSLPR humano
SECUENCIA ID Nº: 6 Secuencia de aminoácidos de
TSLPR humano
<110> Schering Corporation
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> USOS DE CITOQUINAS DE MAMÍFEROS Y
AGONISTAS; REACTIVOS RELACIONADOS
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> DX06029K-WI
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140>
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
16-07-2004
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/488.263
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
18-07-1003
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1419
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 159
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1658
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1557
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 371
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (13)
1. Uso de TSLP (Linfopoyetina Estromal Tímica) o
un agonista de la misma para la preparación de una composición
farmacéutica para tratar una neoplasia o prevenir el desarrollo de
una neoplasia.
2. Una composición farmacéutica que comprende
TSLP o un agonista de la misma, para tratar una neoplasia o prevenir
el desarrollo de una neoplasia.
3. El uso de la reivindicación 1, o la
composición farmacéutica de la reivindicación 2, en el que la
neoplasia es un tumor.
4. El uso o la composición farmacéutica de la
reivindicación 3, en el que el tumor es un tumor canceroso.
5. El uso o la composición farmacéutica de la
reivindicación 3, en el que la neoplasia es un tumor de origen
epitelial.
6. El uso o la composición farmacéutica de la
reivindicación 5, en el que el tumor de origen epitelial es un:
a) tumor de mama;
b) tumor de colon;
c) tumor de pulmón;
d) tumor de ovario; o
e) tumor de próstata.
7. El uso de la reivindicación 1, o la
composición farmacéutica de la reivindicación 2, en el que el
tratamiento comprende la inhibición de la progresión tumoral.
8. El uso o la composición farmacéutica de la
reivindicación 7, en el que la inhibición de la progresión tumoral
es rechazo tumoral.
9. El uso o la composición farmacéutica de la
reivindicación 8, en el que el rechazo tumoral consiste en:
a) una reducción del tamaño del tumor;
b) pérdida del potencial metastásico.
10. El uso de la reivindicación 1, o la
composición farmacéutica de la reivindicación 2, en el que la
neoplasia contiene células dendríticas.
11. El uso de la reivindicación 1, o la
composición farmacéutica de la reivindicación 2, en el que el
agonista es una:
a) muteína de TSLP;
b) molécula pequeña; o
c) anticuerpo agonista.
12. El uso de la reivindicación 1, o la
composición farmacéutica de la reivindicación 2, en el que la TSLP o
el agonista de la misma se preparan para la administración como un
adyuvante de vacuna.
13. Un método in vitro de diagnóstico de
una neoplasia en un sujeto que comprende poner en contacto una
muestra biológica del sujeto con un anticuerpo
anti-TSLP o anti-TLSPR en
condiciones adecuadas para la formación de un complejo
antígeno:anticuerpo y detectar el complejo.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US48826303P | 2003-07-18 | 2003-07-18 | |
| US488263P | 2003-07-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2313076T3 true ES2313076T3 (es) | 2009-03-01 |
Family
ID=34079411
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES04778434T Active ES2313076T3 (es) | 2003-07-18 | 2004-07-16 | Tratamiento y diagnostico de neoplasias usando linfopoyetina estromal timica. |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20050048061A1 (es) |
| EP (1) | EP1651247B1 (es) |
| JP (3) | JP5436753B2 (es) |
| AT (1) | ATE407691T1 (es) |
| AU (1) | AU2004257781B2 (es) |
| CA (1) | CA2532595A1 (es) |
| CY (1) | CY1108645T1 (es) |
| DE (1) | DE602004016522D1 (es) |
| DK (1) | DK1651247T3 (es) |
| ES (1) | ES2313076T3 (es) |
| HR (1) | HRP20080617T3 (es) |
| MX (1) | MXPA06000659A (es) |
| NZ (1) | NZ544456A (es) |
| PL (1) | PL1651247T3 (es) |
| PT (1) | PT1651247E (es) |
| SI (1) | SI1651247T1 (es) |
| WO (1) | WO2005007186A1 (es) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2288036T5 (es) | 1998-11-13 | 2017-07-06 | Immunex Corporation | ADN de TSLP humano y polipéptidos |
| US7288633B2 (en) | 2001-07-23 | 2007-10-30 | Immunex Corporation | Modified human thymic stromal lymphopoietin |
| ES2313076T3 (es) * | 2003-07-18 | 2009-03-01 | Schering Corporation | Tratamiento y diagnostico de neoplasias usando linfopoyetina estromal timica. |
| EP1777523A1 (en) | 2005-10-19 | 2007-04-25 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | An in vitro method for the prognosis of progression of a cancer and of the outcome in a patient and means for performing said method |
| SE532251C2 (sv) * | 2006-11-28 | 2009-11-24 | Theravac Pharmaceuticals Ab | Nya formuleringar av TSLP för behandling av TH2-medierade inflammatoriska sjukdomar genom vaccinering |
| US7718772B2 (en) * | 2006-12-14 | 2010-05-18 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Canine thymic stromal lymphopoietin protein and uses thereof |
| CA2691157A1 (en) * | 2007-06-20 | 2008-12-24 | Irm Llc | Methods and compositions for treating allergic diseases |
| US7982016B2 (en) * | 2007-09-10 | 2011-07-19 | Amgen Inc. | Antigen binding proteins capable of binding thymic stromal lymphopoietin |
| EP2213682A1 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-04 | Institut Curie | TSLP promotes immune evasion and persistence of viruses |
| GB0918782D0 (en) * | 2009-10-26 | 2009-12-09 | St Georges Hosp Medical School | A protein as an adjuvant for a vaccine |
| JPWO2012001889A1 (ja) * | 2010-06-28 | 2013-08-22 | 国立大学法人東北大学 | Ｔｓｌｐを恒常的に高発現する細胞、及び前記細胞を利用したｔｓｌｐ調節剤のスクリーニング方法 |
| WO2012015696A1 (en) * | 2010-07-26 | 2012-02-02 | Baylor Research Institute | Thymic stromal lymphopoietin (tslp) and ox40 ligand in cancer |
| WO2014162007A2 (en) | 2013-04-04 | 2014-10-09 | Ieo - Istituto Europeo Di Oncologia Srl | Thymic stromal lymphopoietin fragments and uses thereof |
| WO2018156649A1 (en) * | 2017-02-22 | 2018-08-30 | Flagship Pioneering, Inc. | Compositions of t cell modulator (tcm) molecules and uses thereof |
| JP7239181B2 (ja) * | 2017-04-04 | 2023-03-14 | ロマ リンダ ユニヴァーシティ | 癌治療のための生物製剤 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2002A (en) * | 1841-03-12 | Tor and planter for plowing | ||
| US20030099947A1 (en) * | 1998-09-21 | 2003-05-29 | Bazan J. Fernando | Mammalian cytokines; related reagents and methods |
| CA2343979C (en) | 1998-09-21 | 2011-11-15 | Schering Corporation | Human interleukin-b50, therapeutic uses |
| ES2288036T5 (es) * | 1998-11-13 | 2017-07-06 | Immunex Corporation | ADN de TSLP humano y polipéptidos |
| CA2413673C (en) * | 2000-06-28 | 2018-01-09 | Amgen Inc. | Thymic stromal lymphopoietin receptor molecules and uses thereof |
| US6890734B2 (en) | 2000-11-10 | 2005-05-10 | Schering Corporation | Nucleic acids encoding a cytokine receptor complex |
| WO2002059260A2 (en) * | 2000-11-17 | 2002-08-01 | Hyseq, Inc. | Nucleic acids and polypeptides |
| CN1234728C (zh) * | 2001-05-16 | 2006-01-04 | 上海睿星基因技术有限公司 | 新的人淋巴因子、其编码序列及用途 |
| US7288633B2 (en) * | 2001-07-23 | 2007-10-30 | Immunex Corporation | Modified human thymic stromal lymphopoietin |
| JP2005516606A (ja) | 2002-02-01 | 2005-06-09 | シェーリング コーポレイション | 哺乳動物のサイトカイン；関連する試薬の使用 |
| US20040022813A1 (en) * | 2002-08-05 | 2004-02-05 | Jean-Claude Bystryn | Shed antigen vaccine with dendritic cells adjuvant |
| ES2313076T3 (es) * | 2003-07-18 | 2009-03-01 | Schering Corporation | Tratamiento y diagnostico de neoplasias usando linfopoyetina estromal timica. |
-
2004
- 2004-07-16 ES ES04778434T patent/ES2313076T3/es active Active
- 2004-07-16 SI SI200430939T patent/SI1651247T1/sl unknown
- 2004-07-16 CA CA002532595A patent/CA2532595A1/en not_active Abandoned
- 2004-07-16 PL PL04778434T patent/PL1651247T3/pl unknown
- 2004-07-16 DE DE602004016522T patent/DE602004016522D1/de active Active
- 2004-07-16 EP EP04778434A patent/EP1651247B1/en active Active
- 2004-07-16 PT PT04778434T patent/PT1651247E/pt unknown
- 2004-07-16 AT AT04778434T patent/ATE407691T1/de active
- 2004-07-16 NZ NZ544456A patent/NZ544456A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-07-16 US US10/893,562 patent/US20050048061A1/en not_active Abandoned
- 2004-07-16 DK DK04778434T patent/DK1651247T3/da active
- 2004-07-16 MX MXPA06000659A patent/MXPA06000659A/es active IP Right Grant
- 2004-07-16 JP JP2006520375A patent/JP5436753B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-07-16 AU AU2004257781A patent/AU2004257781B2/en not_active Ceased
- 2004-07-16 WO PCT/US2004/022928 patent/WO2005007186A1/en active Application Filing
-
2007
- 2007-07-04 JP JP2007176805A patent/JP2007314547A/ja active Pending
-
2008
- 2008-11-26 HR HR20080617T patent/HRP20080617T3/xx unknown
- 2008-12-09 CY CY20081101420T patent/CY1108645T1/el unknown
-
2009
- 2009-08-27 US US12/548,784 patent/US8822405B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-08-19 JP JP2011179831A patent/JP2011236252A/ja active Pending
-
2014
- 2014-08-29 US US14/473,019 patent/US20140370025A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8822405B2 (en) | 2014-09-02 |
| EP1651247B1 (en) | 2008-09-10 |
| US20140370025A1 (en) | 2014-12-18 |
| DE602004016522D1 (de) | 2008-10-23 |
| US20100015132A1 (en) | 2010-01-21 |
| JP2011236252A (ja) | 2011-11-24 |
| AU2004257781B2 (en) | 2009-07-16 |
| MXPA06000659A (es) | 2006-03-30 |
| JP2007314547A (ja) | 2007-12-06 |
| PL1651247T3 (pl) | 2009-04-30 |
| US20050048061A1 (en) | 2005-03-03 |
| AU2004257781A1 (en) | 2005-01-27 |
| WO2005007186A1 (en) | 2005-01-27 |
| DK1651247T3 (da) | 2009-01-12 |
| CY1108645T1 (el) | 2014-04-09 |
| CA2532595A1 (en) | 2005-01-27 |
| JP2007534623A (ja) | 2007-11-29 |
| ATE407691T1 (de) | 2008-09-15 |
| JP5436753B2 (ja) | 2014-03-05 |
| EP1651247A1 (en) | 2006-05-03 |
| SI1651247T1 (sl) | 2009-02-28 |
| PT1651247E (pt) | 2008-12-15 |
| HRP20080617T3 (en) | 2009-01-31 |
| NZ544456A (en) | 2009-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8822405B2 (en) | Uses of mammalian cytokines and agonists; related reagents | |
| Garbers et al. | Interleukin-6 and interleukin-11: same same but different | |
| Liotti et al. | Inflammation in thyroid oncogenesis | |
| EP2496607B1 (en) | Vault complexes for cytokine delivery | |
| JP5697119B1 (ja) | そう痒を伴う疾患に罹患した患者のｉｌ−３１アンタゴニストによる治療に対する応答を予測する方法 | |
| WO2006023791A2 (en) | Methods and compositions for treating allergic inflammation | |
| KR20060052681A (ko) | Ｇｉｔｒ 리간드, ｇｉｔｒ 리간드-연관 분자, 항체 및그의 용도 | |
| Jurcak et al. | Signaling in the microenvironment of pancreatic cancer: Transmitting along the nerve | |
| Jaén et al. | Interleukin 13 receptor alpha 2 (IL13Rα2): Expression, signaling pathways and therapeutic applications in cancer | |
| Takahashi et al. | T cell autoimmunity and immune regulation to desmoglein 3, a pemphigus autoantigen | |
| KR20070090156A (ko) | 오토크라인 성장 인자 수용체 및 방법 | |
| US20090131346A1 (en) | Antibody and method for identification of dendritic cells | |
| JP2006230407A (ja) | Ｐｉｂｆ活性をもつタンパク質及びこれをコードする核酸分子 | |
| US20220127332A1 (en) | Multi-functional and multi-valent interleukin-tgf-beta receptor fusion polypeptides | |
| CA2502663C (en) | Methods to prevent tumor recurrence by blockade of tgf-.beta. | |
| Burvall et al. | Expression of TNFalpha and its receptors R1 and R2 in human alveolar epithelial cells exposed to organic dust and the effects of 8-bromo-cAMP and protein kinase A modulation | |
| Shilovskiy et al. | Role and Molecular Mechanisms of Alternative Splicing of Th2-Cytokines IL-4 and IL-5 in Atopic Bronchial Asthma | |
| KR20210146495A (ko) | Lsp1 결핍 t 세포 | |
| Mango | Stromal promotion of metastasis by erythroid differentiation regulator 1 | |
| Herlyn | POSTGRADUATE TRAINING AND FELLOWSHIP APPOINTMENTS | |
| López-Macías et al. | Control and Resolution Mechanisms of the Inflammatory Response 2016 | |
| MARROW | 151 EXPRESSION OF THE FOUR AND A HALF LIM ONLY PROTEIN FHL2 IN RHEUMATOID ARTHRITIS AND INVOLVEMENT IN MIGRATORY AND INVASIVE BEHAVIOUR IN RASF | |
| Hamilton | Role of suppressor of cytokine signaling 3 in colorectal cancer | |
| Debets | Inflammatory cytokines and their receptors in psoriatic skin: emphasis on the epidermal interleukin 1 system | |
| KR20160013401A (ko) | Ell3 단백질을 이용한 항염증제의 스크리닝 방법 및 상기 ell3 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 포함하는 항염 조성물 |