JP2005516606A - 哺乳動物のサイトカイン；関連する試薬の使用 - Google Patents

Abstract

哺乳動物サイトカインのアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、樹状細胞活性を調節する方法が提供される。免疫障害を処置する方法もまた、提供される。具体的には、本発明は、Ｔ細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ）刺激を調節する方法を提供し、この方法は、以下の工程：該ＡＰＣと、ａ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプター（ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ）（配列番号２、３）のアゴニスト；またはｂ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニストとを接触させる工程、を包含する。

Description

（発明の分野）
本発明は、一般的に、哺乳動物のサイトカインの使用に関する。より詳細には、本発明は、医学的状態（例えば、アレルギーおよび炎症）に影響する哺乳動物のサイトカインおよびそのインヒビターの同定に関する。

（発明の背景）
時に、哺乳動物の免疫応答は、一連の複雑な細胞性相互作用（「免疫ネットワーク」といわれる）に基づくことが知られている。近年の研究により、このネットワークの内部の作用への新規な洞察が提供された。実際に、多くの応答が、リンパ球、マクロファージ、顆粒球、および他の細胞のネットワーク様相互作用の周辺で周期的に起こることは明らかなままであるが、ここで、免疫学者は、一般的に、サイトカインとして知られる可溶性タンパク質は、これらの細胞性相互作用を制御する際に重要な役割を果たしているという意見を持っている。従って、細胞調節因子の単離、特性、および機構にかなりの関心が集まっており、これを理解することで、多くの医学的異常（例えば、免疫系障害）の診断および治療におけるかなりの進歩がもたらされる。これらの因子のうちのいくつかは、造血性増殖因子および／または分化因子（例えば、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＩＬ−７）である。例えば、Ｍｉｒｅ−ＳｌｕｉｓおよびＴｈｏｒｐｅ（１９９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｔｈｏｍｓｏｎ（編１９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，第３版．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ；ならびにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｍａｌｄｅｎ，ＭＡを参照こと。

サイトカインは、多くの方法で細胞活性を媒介する。サイトカインは、多能性造血幹細胞から膨大な数の前駆体（複雑な免疫系を構成する分岐細胞系統を含む）への増殖、成長、および分化を支持する。細胞構成要素間の適切かつ均衡の取れた相互作用は、健常な免疫応答に必要である。異なる細胞系統は、しばしば、サイトカインが他の因子と組み合わせて投与される場合に、異なる様式で応答する。

サイトカインは、免疫系の細胞（例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）およびＴリンパ球）間の連絡を媒介する。樹状細胞（ＤＣ）は、最も強力な抗原提示細胞である。例えば、Ｐａｕｌ（編）（１９９３）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．第３版．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。抗原提示は、タンパク質様抗原が取り込まれ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって処理されて、次いで、認識されて免疫応答を開始する細胞事象をいう。最も活性な抗原提示細胞は、マクロファージ（これは、単球から直接発達する産物である）、樹状細胞、および特定のＢ細胞として特徴付けられている。ＤＣは、炎症性刺激（例えば、細菌性リポ多糖類（ＬＰＳ））、およびサイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα））に非常に応答性である。サイトカインまたは刺激（例えば、ＬＰＳ）は、一連の表現型および成熟として集合的に称される、ＤＣにおける機能的変化を誘導し得る。例えば、ＢａｎｃｈｅｒｅａｕおよびＳｃｈｍｉｔｔ（編）（１９９５）Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。

樹状細胞は、例えば、以下のように分類され得る：心臓、腎臓、腸、および肺の間質性樹状細胞；皮膚および粘膜におけるランゲルハンス細胞；胸腺髄質および二次的リンパ組織における指状突起（ｉｎｔｅｒｄｉｇｉｔａｔｉｎｇ）樹状細胞；ならびに血液およびリンパ樹状細胞。これらの構成要素の各々における樹状細胞は、骨髄から明らかに生じるＣＤ４５^＋白血球であるが、それらは、成熟状態および微小環境に関連する差異を呈し得る。ＤＣにおける成熟変化としては、例えば、エンドサイトーシスによる抗原取り込みのサイレンシング、Ｔ細胞活性化に関連する表面分子のアップレギュレーション、および多くのサイトカイン（ＴＮＦαおよびＩＬ−１２を含む）の活性産生が挙げられる。ＴＮＦαが局所集積すると、ＤＣは、二次的リンパ器官のＴ細胞領域に移動し、抗原特異的Ｔ細胞を活性化する。

サイトカインおよび免疫細胞は、特定の生理学的機構または経路（例えば、種々の炎症性障害を導く経路）を媒介する。西洋の国々の人工の約２０％は、炎症性障害（例えば、アレルギー性疾患（これには、ぜん息、鼻炎、アトピー性皮膚炎、および食物アレルギーが挙げられる）（例えば、Ａ．Ｂ．Ｋａｙ（２００１）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：３０−３７を参照のこと））に罹患している。アレルギー性炎症は、複雑な免疫学的カスケードの結果であり、これにより、Ｔ細胞は、制御されないＴＨ−２由来サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３）を産生し、ここで、これらのサイトカインは、気管支過反応、ＩｇＥ産生、好酸球増加、ならびに粘液生成を誘発する（例えば、ＢｕｓｓｅおよびＬｅｍａｎｓｋｅ，Ｊｒ．（２００１）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：３５０−６２；Ｈｏｌｇａｔｅ（２０００）Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．３２０：２３１−２３４）；ならびにＲｅｎａｕｌｄ（２００１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．５４：５７７−５８９を参照のこと）。

炎症および免疫再構成は、例えば、ＡＰＣとＴ細胞との間の相互作用を調節することによって、リンパ球活性または増殖を調節するために、医薬的介入または治療的介入を使用することが望まれる２つの状況である。ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に依存する炎症性状態としては、例えば、乾癬、アレルギー、および気管支過反応性が挙げられる。免疫再構成（免疫系の補充）は、ウイルス感染（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）の処置ならびに細胞切除（ｃｙｔｏａｂｌａｔｉｏｎ）を受けた患者を処置する際に有用であり、ここで、細胞切除は、例えば、放射線治療または化学療法により実施される。

皮膚の炎症性疾患である乾癬は、西洋の国々において４％を越える有病率を有する（Ｇｒａｎｓｔｅｉｎ（１９９６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．９８：１６９５−１６９６；Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓ（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２６：３１４−３２０）。この疾患は、頻繁に再発し、場合によっては、生命を脅かすものであり、そして頻繁にぜん息（すなわち、乾癬ぜん息）に関連する。Ｔ細胞およびケラチノサイトは、乾癬の発生および存続に必要である（ＧｒｅａｖｅｓおよびＷｅｉｎｓｔｅｉｎ（１９９５）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：５８１−５８８；ＲｏｂｅｒｔおよびＫｕｐｐｅｒ（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１８１７−１８２８；ＦｅａｒｏｎおよびＶｅａｌｅ（２００１ Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２６：３３３−３３７））。樹状細胞および肥満細胞はまた、例えば、乾癬炎症の一因となる（Ｍｒｏｗｉｅｔｚら（２００１）Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０：２３８−２４５；Ａｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９９）Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４０：６２４−６３３）。

気管支過反応は、肺炎症性疾患（ぜん息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ；慢性閉塞性肺疾患）、慢性気管支炎、好酸球増加気管支炎、ならびにウイルス性気管支炎（Ｒｉｆｆｏ−ＶａｓｑｕｅｚおよびＳｐｉｎａ（２００２）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ９４：１８５−２１１）が挙げられる）の発現である。

ぜん息は、増大した気管支応答ならびに気道閉塞および炎症によって特徴付けられる慢性疾患である。この疾患は、例えば、小児急患の１５％にのぼる（Ｃｒａｉｎら（１９９５）Ａｒｃｈ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ａｄｏｌｅｓｃ．Ｍｅｄ．１４９：８９３−９０１）。ＡＰＣ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好酸球、肥満細胞、および好塩基球は、ぜん息の機構に寄与する。ＡＰＣは、Ｔ細胞に抗原を提示し、次いで、Ｂ細胞を誘発してＩｇＥを産生する。好酸球、好塩基球、および肥満細胞は、ＩＬ−４を放出し、次いで、抗原刺激後に、ＴＨ２細胞（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３を分泌する）へのＴ細胞の分化を促進する。ＴＨ２細胞および他の細胞によって分泌されるＩＬ−４およびＩＬ−１３は、Ｂ細胞の活性化を促進する（Ｍａｒｏｎｅ（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １９：５−９）。Ｂ細胞は刺激されて、２つの型のシグナル（ＩＬ−４またはＩＬ−１３）によってＩｇＥを産生し、そしてＴ細胞からの直接接触を生成する（ＢａｒｎｅｓおよびＬｅｍａｎｓｋｅ（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｓｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：３５０−３６２）。放出されたＩｇＥは、肥満細胞を活性化し、次いで、気道の狭窄を引き起こす。好酸球は、気道を直接損傷する主要な塩基性タンパク質を産生する。ＩＬ−５は、好酸球の発達、生存、および補充において中心的な役割を果たす（ＢａｒｎｅｓおよびＬｅｍａｎｓｋｅ（前出））。

ＣＯＰＤ（これは、リンパ球による気管支の浸潤に関与する）は、北アメリカにおける死因で４番目である（Ｂａｒｎｅｓ（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：２６９−２８０）。この疾患は、気道平滑筋の薄化および気道の炎症（すなわち、肺における単球、マクロファージ、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ならびに好中球による浸潤を含む）によって特徴付けられる（Ｂａｒｎｅｓ（２０００）Ｃｈｅｓｔ １１７：１０Ｓ−１４Ｓ；Ｊｅｆｆｅｒｙ（１９９８）Ｔｈｏｒａｘ ５３：１２９−１３６）。

免疫再構成は、リンパ球増殖の調節が望まれる状態である。免疫再構成は、例えば、骨髄移植によって達成される。Ｔ細胞増殖の増強または刺激は、化学療法後の骨髄移植および免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）（Ｐａｎｔｅｌｅｏら（１９９３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２８：３２７−３３５；Ｋｏｖａｃｓら（１９９５）Ｎｅｗ Ｅｎｓｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：５６７−５７５）ならびに治療的Ｔ細胞（遺伝的に変更されたＴ細胞を含む）の使用（ＴｅｒａｎｄｏおよびＣｈａｎｇ（２００２）Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．１１：６２１−６４３；Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら（２００２）Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８４：１７５−２０１）において望まれる。骨髄移植または幹細胞移植を使用する免疫再構成は、骨髄腫切除（ｍｙｅｌｏａｂａｌｔｉｖｅ）療法および免疫抑制療法後に使用される（Ｐａｌｏｃｚｉ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．７４：１７７−１８１；Ｒｅｎ−ＨｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈおよびＬｕｍ（２００１）Ｃｕｒｒ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１：２５３−２５５）。

幹細胞移植のレシピエントは、完全に機能的リンパ球の取得において遅延を経験し、ここで、これらの遅延は、移植から１年を超え得る。非刺激細胞は、発達の間、能力のある胸腺を必要とする。従って、ＣＤ４^＋Ｔ細胞数は、骨髄移植において正常以下であり得、すなわち、この胸腺は、放射線治療によって損傷している（ＮｏｖｉｔｚｋｙおよびＤａｖｉｓｏｎ（２００１）Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｖ ３：２１１−２２０）。従って、リンパ球増殖の刺激は、骨髄移植後のＴ細胞増殖、ならびに胸腺が損傷している移植物における遅延に起因して望ましい目的である。

細胞切除に続く骨髄移植または幹細胞治療は、多くの自己免疫疾患（例えば、慢性関節リウマチ、全身性狼瘡エリテマトーデス、クローン病、および多発性硬化症）の処置（Ｂｒｅｅｄｖｅｌｄ（２０００）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．２：２６８−２６９；ＭｃＣｏｌｌら（１９９９）Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１３１：５０７−５０９；Ｌａａｒ（２０００）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．２：２７０−２７５）、ならびに、癌（例えば、非ホジキンスリンパ腫および白血病）の処置（Ｋａｙら（２００２）Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｅｄｕｃ．Ｐｒｏｇｒａｍ）１９３−２１３；Ｈａｇｅｍｅｉｓｔｅｒ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ．４９ Ｓｕｐｐｌ．１：Ｓ１３−２０）において使用される。従って、細胞切除後のＴ細胞増殖を刺激する必要性が増加している。

対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）は、骨髄移植に伴う問題である。ＧＶＨＤは、アレルギー性移植物の結果であり、ＧＶＨＤは、移植片におけるＴ細胞のエキソビボでの除去によって予防され得る（Ａｎｄｒｅ−Ｓｃｈｍｕｔｚら（２００２）Ｌａｎｃｅｔ ３６０：１３０−１３７；Ａｖｅｒｓａら（１９９８）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３９：１１８６−１１９３）。例えば、サイトカインまたは核酸による処置、その後の被験体への導入によるリンパ球のエキソビボでの処置が記載される。例えば、Ｅｒｎｅｒｕｄｈら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９：１４９７−１５０５；Ｃａｖａｚｚａｎａ−Ｃａｌｖｏら（２００２）Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３９：３２−４０；ＧｕｎｚｅｒおよびＧｒａｂｂｅ（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｏｌ．２１：１３３−１４５；Ｇｏｋｍｅｎら（２００１）Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．１０：５３−６６を参照のこと。しかし、上記のＴ細胞のエキソビボでの除去は、Ｔ細胞不全を悪化させる。従って、Ｔ細胞増殖を刺激して、免疫再構成を促進するための必要性（ここで、Ｔ細胞は、移植片より前にエキソビボで除去される）が増加している。

現在、造血性増殖因子およびサイトカインを使用して、骨髄移植後にＴ細胞増殖を刺激することに関心が寄せられている（Ｓｙｍａｎｎら（１９８９）Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１６ Ｓｕｐｐｌ．Ａ：１５−１９；Ｌｅｎａｒｓｋｙ（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１５：４９−５５）。現在の方法に伴う問題は、オリゴクローン性に対するＴ細胞レパートリーを歪ませることである（Ｍａｒｋｔｅｌら（２００２）Ｂｌｏｏｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ３，２００２，ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ）。従って、ポリクローン性を維持する方法によってＴ細胞増殖を刺激する必要がある。

本発明は、ＡＰＣ／Ｔ細胞相互作用に依存性の炎症性状態の処置のための樹状細胞（ＤＣ）を調節するための方法、および免疫再構成を実施するための方法を提供する。樹状細胞（プロフェッショナル抗原提示細胞）は、Ｔ細胞の活性化および増殖の刺激において役割を果たす。ＤＣ（プロフェッショナル抗原提示細胞）は、アレルギー性疾患の病原において重要な役割を果たす。例えば、ＢａｎｃｈｅｒｅａｕおよびＳｔｅｉｎｍａｎ（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９２：２４５−２５２；Ｓｔｕｍｂｌｅｓ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．７７：４２８−４３３；Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｖ ３１，２０６−２１８；Ｓｅｍｐｅｒら（１９９５）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３７８：１３５−１３８を参照のこと。しかし、ＤＣをプライムして、アレルギー促進ＴＨ２サイトカインを産生するＴ細胞を誘導する初期シグナルは、知られていない（例えば、Ｄ．ｖｏｎ Ｂｕｂｎｏｆｆら（２００１）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８：３２９−３３９）。皮膚のケラチノサイトおよび粘膜上皮細胞は、活性化後に炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦα）を産生することが示されたが（Ｓ．Ｎｏｚａｋｉら（１９９２）Ａｄｖ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．７：８３−１００；ならびにｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ １０１；Ｔ．Ｓ．Ｋｕｐｐｅｒ（１９９０）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．９４：１４６Ｓ−１５０Ｓ；Ｐ．Ｆ．Ｐｉｇｕｅｔ（１９９２）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１３：３４５−３５４；ならびに１．Ｒ．ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＴ．Ｓ．Ｋｕｐｐｅｒ（１９９６）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５８：１４８５−１５０７）、これらのサイトカインのどれ１つとして、アレルギー性炎症の誘導の基礎となる機構を説明し得ない（例えば、Ｄ．ｖｏｎ Ｂｕｂｎｏｆｆ（前出）を参照のこと）。

胸腺間質リンホポエチン（ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０）（配列番号１）は、マウス胸腺間質細胞株からクローニングされた、新規なＩＬ−７様サイトカインである（例えば、Ｊ．Ｅ．Ｓｉｍｓら，（２０００）Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：６７１−６８０；および米国特許出願番号０９／９６３，３４７（２００１年９月２４日出願を参照のこと））。ヒトＴＳＬＰの成熟コード領域は、アミノ酸２９−１５９である（Ｒｅｃｈｅら（２００１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３３６−３４３）。ＴＬＳＰ／ＩＬ−５０レセプターは、ヘテロダイマーであり、ＩＬ−７Ｒ−α鎖（配列番号２）と、一般的γ様レセプター鎖（ＴＳＬＰレセプター；ＴＳＬＰＲ）（配列番号３）とからなる（例えば、Ｔｏｎｏｚｕｋａら（２００１）Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．９３：２３−２５；Ｐａｎｄｅｙら（２０００）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：５９−６４；Ｌ．Ｓ．Ｐａｒｋら，（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：６５９−６７０；およびＲｅｃｈｅら（上記）を参照のこと）。マウスＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、マウスの初期Ｂ細胞発生およびＴ細胞発生を支持する（例えば、Ｌｅｖｉｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：６７７−６８３；Ｒａｙら（１９９６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：１０−１６）。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、ＣＤ１１ｃ^＋ ＤＣを活性化するが、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球に対しても、マスト細胞に対しても、全く直接的な生物学的効果を有さない（例えば、Ｒｅｃｈｅ（上記）を参照のこと）。これは、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプターΔ２サブユニットのｍＲＮＡと、ＩＬ−７Ｒ−α鎖のｍＲＮＡとが、ＣＤ１１ｃ^＋ ＤＣにおいて共発現するが、他の細胞型では共発現しないことに従う。

炎症（特に、アレルギー性炎症）の機構および病因は、完全には理解されておらず、従って、いくつかの治療が、今のところ未知である。本発明は、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）が、免疫細胞の特定の部分集合（特に、樹状細胞）に対するその作用によって、種々の炎症障害を媒介し得る証拠を提供する。

（発明の要旨）
本発明は、部分的には、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞（ＤＣ））活性（特に、炎症（例えば、乾癬またはアレルギー性炎症）をもたらすＴ細胞のＤＣ刺激）に対するｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の効果の発見に基づく。

本発明は、Ｔ細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ）刺激を調節する方法を提供し、この方法は、そのＡＰＣを、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプター（ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ）（配列番号２、３）のアゴニスト；またはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニストと接触させる工程を包含する。そのＴ細胞が未刺激ＣＤ４^＋ Ｔ細胞、中心記憶Ｔ細胞、もしくはエフェクター記憶Ｔ細胞である、上記の方法もまた、提供される；そのＡＰＣが、ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞（ＤＣ）である、上記の方法もまた、提供される；その刺激が、そのＴ細胞の増殖を刺激する、上記の方法もまた、提供される；その増殖がポリクローン性である、上記方法もまた、提供される；または、そのＡＰＣとそのＴ細胞との間の相互作用が、自己由来もしくは同種異系である、上記方法もまた、提供される；またはその相互作用が、自己由来であり、かつ中心記憶Ｔ細胞表現型を生じる、上記方法もまた、提供される。

さらに、そのアゴニストまたはアンタゴニストが、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント；または抗体のペプチド模倣物を含む、上記方法が提供される；あるいは、そのアゴニストが、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）またはその抗原性フラグメントである、上記方法が提供される。

別の実施形態において、本発明は、免疫障害に罹患している被検体を処置する方法を包含し、その方法は、有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプター（ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ）（配列番号２、３）のアゴニスト；またはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニストで処置する工程を包含する。また、その免疫障害が炎症状態であり、かつその投与が、有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニストを含む、上記方法が包含される；その免疫障害が、乾癬、乾癬性関節炎、もしくは肺炎症応答である、上記方法が包含される；またはその肺炎症疾患が、喘息または慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）である、上記方法が包含される。さらに、その免疫障害が免疫欠損であり、その投与が有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストを含む、上記方法が提供される；その免疫不全が、免疫抑制を引き起こす細胞除去もしくはウイルス感染の結果である、上記方法が提供される；その投与が、自己由来抗原提示細胞（ＡＰＣ）もしくは同種異系抗原提示細胞（ＡＰＣ）のエキソビボ処置を含む、上記方法が提供される；またはその投与が、有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストでのＡＰＣのエキソビボ処置を含む、上記方法が提供される。本発明はまた、そのアゴニストまたはアンタゴニストが、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント；または抗体のペプチド模倣物を含む、上記方法を企図する；あるいは、本発明はまた、そのアゴニストが、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）またはその抗原性フラグメントである、上記方法を企図する。

ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３の生成をＴ細胞により誘導する方法が、さらに企図され、その方法は、ＡＰＣを、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプターのアゴニストと接触させる工程、およびそのＴ細胞をそのＡＰＣで刺激する工程を包含する。

本発明はまた、被検体においてＴＨ２応答を調節する方法を包含し、その方法は、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプター（ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ）（配列番号２、３）のアゴニスト；またはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニストを投与する工程を包含する。

（好ましい実施形態の詳細な説明）
本明細書（添付の特許請求の範囲を含む）中で使用される場合、単数形の語（例えば、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明示的に他のように示さない限り、対応する複数言及物を包含する。

本明細書中で引用されるすべての参考文献は、各々の個別の刊行物または特許出願が詳細かつ個別に参考として援用されると示されたのと同じ程度に、本明細書中に参考として援用される。

（Ｉ．定義）
「活性化」、「刺激」、および「処置」とは、それが細胞またはレセプターに適用される場合には、文脈によってかまたは明示的に他のように示されない限り、同じ意味（例えば、リガンドによる樹状細胞（ＤＣ）の活性化、刺激、または処置）を有し得る。

「投与」および「処置」は、それがヒト被検体または動物の処置に適用される場合、その被検体または動物への製剤、治療剤、もしくは診断剤、または薬学的組成物、治療組成物、もしくは診断組成物の接触を指す。「投与」および「処置」はまた、例えば、細胞、組織、または器官へのエキソビボ処置、およびその後の、その被検体または動物へのその細胞、組織、または器官の接触を意味し、これは、その薬剤または組成物が、そのエキソビボ処置の間に代謝、変化、または分解された場合さえも意味する。

「同種異系」とは、それが細胞に適用される場合または細胞間の反応に適用される場合に、例えば、第１の細胞の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）が第２の細胞によって異種であると認識される相互作用を指す。「自己（由来）」とは、それが細胞に適用される場合または細胞間の反応に適用される場合に、例えば、第１の細胞のＭＨＣが第２の細胞により自己として認識される相互作用を指す（Ａｂｂａｓら（２０００）Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４版，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）。

「有効量」とは、医学的状態の症状または徴候を改善するために十分である量を意味する。

「ポリクローン性」拡大または「ポリクローン性」増殖とは、細胞の増殖がその表現型の維持を含むことを意味し、一方「オリゴクローン性」拡大または「オリゴクローン性」増殖とは、その表現型が変化することを意味する（Ｄｕａｒｔｅら（２００２）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ９ ：１３５９−１３６８）。

「感受性」（例えば、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）の感受性）とは、ＴＣＲへのリガンドの結合が、そのＴＣＲの検出可能な変化、またはそのＴＣＲと特に関係する事象もしくは分子の検出可能な変化（例えば、ＴＣＲコンフォメーション変化またはリン酸化）、そのＴＣＲと関係するタンパク質の変化、またはＴＣＲ関連遺伝子発現の変化を生じることを意味する。

（ＩＩ．一般）
ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）（胸腺間質リンホポエチン（ＴＳＬＰ）としても公知である）は、元来マウスにおいて発見された。そしてこれは、初期Ｂ細胞および初期Ｔ細胞の発生を支持することにおいてそのホモログであるＩＬ−７と同様の役割を果すことが、見出された（例えば、Ｓｉｍｓ（上記）；Ｌｅｖｉｎら（上記）；およびＲａｙら（上記）を参照のこと）。マウスＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、脾臓から単離されたかまたは単球もしくは骨髄から生成された、マウスＤＣを活性化しなかった。本発明は、ヒトＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）が、新規なＤＣアクチベーターであることを示す。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、他のＤＣ活性化因子（例えば、ＣＤ４０−リガンド、ＬＰＳ、またはＩＬ−７）と比較した場合、いくつかの独特な特徴を提示する。例えば、これは、ＤＣ上に最高レベルのＣＤ４０およびＣＤ８０を誘導する；これは、ＤＣを活性化して、最も強力な未刺激（ｎａｉｖｅ）ＣＤ４ Ｔ細胞の増殖および拡大を誘導する；これは、公知の炎症促進性サイトカインのうちのいくつかを生成するようにＤＣを誘導するようではない。そうではなくむしろ、これは、ＴＨ２誘引ケモカインであるＴＡＲＣおよびＭＤＣの生成を誘導する；そしてこれは、ＤＣに未刺激ＣＤ４^＋ Ｔ細胞を刺激させて、ＴＨ２サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３およびＴＮＦαを高レベル生成する。興味深いことに、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０およびＴＨ１サイトカインＩＦＮ−γの生成は、阻害される。これらの特徴は、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）が、制御されていない炎症（特に、アレルギー性炎症）において重要なメディエーターを示すことを、強力に示唆する。

ＤＣの活性化は、ＴＨ２媒介性アレルギー炎症（例えば、喘息）の病因における重要な工程であるようである。Ｔｈ２細胞にアレルゲンを提示する樹状細胞は、Ｔｈ２細胞を活性化して、サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３）を放出し、これらのサイトカインは、種々の様式で、喘息の病因に寄与する。ＩＬ−４は、気道内皮細胞接着分子およびケモカイン産生を増加し、ＩＬ−５は、好酸球産生を誘発し、一方で、ＩＬ−１３は、平滑筋過剰反応性を促進する（Ｌｅｗｉｓ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：６４４−６５１）。ＩＬ−４刺激した細胞接着分子は、炎症細胞のレセプターとして作用する（Ｓｔｒｉｚら（１９９９）Ａｍ Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７７：Ｌ５８−Ｌ６４）。ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、Ｂ細胞を活性化し、Ｂ細胞増殖およびＩｇＥ合成をもたらす（ＢｕｓｓｅおよびＬｅｍａｎｓｋｅ（２００１ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：３５０−３６２）。ＩＬ−４は、アレルギー性喘息の気道において過剰発現され、一方、ＩＬ−１３は、アレルギー性喘息および非アレルギー性喘息の両方において、気道にて過剰発現される（Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８２：２２５８−２２６０）。ＩＬ−４は、一次アレルゲン感作において、より重要であるようであり、一方、ＩＬ−１３は、アレルゲンへの二次曝露の間において、より重要であるようである（Ｋｉｐｓ（２００１）Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐ．Ｊ．Ｓｕｐｐｌ．３４：２４ｓ−３３ｓ）。

アレルギー性個体由来のＤＣは、アレルゲンによる刺激によってＴＨ２型応答を優先的に誘導する（例えば、Ｈａｍｍａｄら（２００１）Ｂｌｏｏｄ ９８，１１３５−４１を参照のこと）か、またはアレルゲンによる刺激によらずにＴＨ２型応答を優先的に誘導する（例えば、Ｐ．Ａ．Ｓｔｕｍｂｌｅｓ（上記）；ＭｃＷｉｌｌｉａｍら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：２４２９−３２；Ｎ．Ｎｏｖａｋら（１９９９）Ａｌｌｅｒｇｙ ５４：７９２−８０３；Ｔｕｎｏｎ−Ｄｅ−Ｌａｒａら（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ ２６：６４８−６５５；およびＨｏｌｔ（１９９７）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４１７：３０１−３０６）が、ＴＨ２アレルギー疾患を誘導するためのＤＣのシグナル伝達の基礎となる分子機構は、明らかには理解されていない。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）がアトピー性皮膚炎のケラチノサイトにより高度に発現され、そしてｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）活性化ＤＣが未刺激ＣＤ４^＋ Ｔ細胞を強力に刺激してＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３およびＴＮＦαを生成するというこの発見は、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）が、アレルギー疾患の病因を理解することにおいて欠けている重要な因子を示すことを示唆する。

上皮細胞または抗原侵入部位にある他の間質細胞により生成されるｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、ＤＣを活性化しそしてＤＣを刺激して、ＴＨ２誘因性ケモカイン（例えば、ＴＡＲＣおよびＭＤＣ）を生成する。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）活性化ＤＣは、排出リンパ節中に遊走して、アレルゲン特異的Ｔ細胞増殖およびＴＨ２細胞への分化を誘導する。これらのアレルゲン特異的ＴＨ２ Ｔ細胞は、元の炎症部位にあるＴＡＲＣおよびＭＤＣに戻ってアレルギー性炎症を誘発し得、それにより、上皮細胞と、ＤＣと、Ｔ細胞媒介性免疫応答との間の直接的機能的関係を確立し得る。

ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を産生する古典的なＴＨ２細胞と違って、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０刺激−ＤＣによって活性化されるヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３を産生するが、ＩＬ−１０は産生しない。ＩＬ−１０が、ＴＨ２サイトカインとして歴史的に含まれるが（例えば、Ａｂｂａｓら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８３：７８７−７９３を参照のこと）、ＴＨ２媒介性アレルギー炎症に対する寄与は、異論が多かった。いくつかの研究は、肺、腸および皮膚におけるＩＬ−１０ｍＲＮＡレベルが、アレルギー喘息またはアトピー性皮膚炎に罹患する患者において上昇することが示され（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（１９９６）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４：１１３−１１７を参照のこと）、その一方で、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベント検定法）によるＩＬ−１０タンパク質の直接測定が、正常なコントロール被験体と比べると、アトピー患者由来の、気管支肺胞洗浄または活性化末梢血単核細胞の培養上清において著しくより低いＩＬ−１０レベルを示した（例えば、Ｂｏｒｉｓｈら（１９９６）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９７：１２８８−９６を参照のこと）。マウスモデルにおける研究は、気道炎症およびサイトカイン産生の抑制におけるＩＬ−１０の役割を確認する（例えば、Ａｋｂａｒｉら（２００１）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７２５−７３１；およびＺｕａｎｙ−Ａｍｏｒｉｍら（１９９５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：２６４４−２６５１を参照のこと）。従って、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０刺激−ＤＣ活性化Ｔ細胞によって産生される、高レベルのＩｌ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３およびＴＮＦα、ならびに低下したレベルのＩＬ−１０およびＩＦＮ−γは、アトピー性皮膚炎または喘息の病態生理学の基礎をなす実際のアレルギー炎症性サイトカインを代表し得る。ＩＬ−１０は、抗炎症性サイトカインであるが、プロアレルギー性ＴＨ２サイトカインではない。

皮膚上皮細胞および粘膜上皮細胞は、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）を産生することによって、アレルギー性炎症の間、ＤＣと直接相互作用するという第１の証拠がさらに記載される。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、潜在的にＤＣを活性化するだけでなく、非刺激Ｔ細胞を極性化し、プロアレルギー性ＴＨ２サイトカインを産生する能力を有するＤＣを支持する。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、炎症性疾患およびアレルギー性疾患をブロックする新規の標的を代表する。

本発明は、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の活性をアゴナイズすることによってＴＨ２媒介性応答を増大する、方法および試薬を提供する。この応答の増大は、免疫系の抑制に起因する障害（例えば、ＨＩＶ）の処置において有用である。樹状細胞活性の増強は、ウイルス感染、細菌感染、または真菌感染の処置において有用である。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）および／またはそのアゴニストはまた、ワクチンアジュバントとして有用である。

ＤＣ応答の抑制は、いくつかの免疫障害および状態（例えば、アレルギー性炎症、気管支過反応性、喘息、鼻炎、食物アレルギー、移植拒絶、対宿主性移植片病、自己免疫疾患、免疫抑制を引き起こすウイルス感染、乾癬、およびアトピー性皮膚炎）の処置について有用である。

（ＩＩＩ．アンタゴニストおよびアゴニスト）
ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の活性の遮断は、サイトカインのアンタゴニスト（例えば、リガンドに対する抗体、レセプターに対する抗体など）によって達成され得る。リガンド−レセプター相互作用との干渉は、アンタゴニストの開発に対する有効な戦略であることが示された。

リガンドによって媒介される活性をアンタゴナイズするための種々の手段が存在する。２つの明白な手段は、抗体を用いてリガンドをブロックすること；第２の手段は、抗体を用いてレセプターをブロックすることである。種々のエピトープは、各々の上に存在し、これらの相互作用をブロックし、例えば、立体障害ブロッキング相互作用を引き起こす。シグナル伝達をブロックする能力の相関は、リガンドまたはレセプターのいずれかに対する結合親和性と相関することが必ずしも予想されない。別の手段は、レセプター結合活性を保持するが、レセプターシグナル伝達活性を誘導しない、リガンドムテインを使用することである。ムテインは、シグナル伝達リガンドの競合インヒビターであり得る。

あるいは、低分子ライブラリーは、同定されたリガンド−レセプター対合によって媒介される相互作用またはシグナル伝達をブロックし得る化合物についてスクリーニングされ得る。

本発明は、特定のサイトカインリガンド（好ましくは、哺乳動物（例えば、霊長類、ヒト、ネコ、イヌ、ラット、またはマウス）のサイトカインリガンド）に特異的に結合する抗体または結合組成物の使用を提供する。抗体は、これらの天然に存在する（全長）形態またはこれらの組換え形態の両方において、種々のサイトカインタンパク質（個々の改変体、多型改変体、対立遺伝子改変体、株改変体、または種改変体、およびこれらのフラグメントを含む）に対して惹起される。さらに、抗体は、これらの天然（または活性）形態またはこれらの不活性（例えば、変性）形態の両方のレセプタータンパク質に対して惹起され得る。抗イディオタイプ抗体がまた、使用され得る。

多くの免疫原は、リガンドまたはレセプタータンパク質と特異的に反応性である抗体を産生するように選択され得る。組換えタンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の産生のための好ましい免疫原である。適切な供給源（例えば、霊長類、齧歯類など）由来の天然に存在するタンパク質はまた、純粋形態または非純粋形態のいずれかで使用され得る。適切なタンパク質配列を使用して作製される合成ペプチドはまた、抗体の産生のための免疫原として使用され得る。組換えタンパク質は、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（編）（１９９５および定期補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；およびＡｕｓｕｂｅｌら（編）（１９８７および定期補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに記載されるように真核生物細胞または原核生物細胞において発現され、精製され得る。天然に折りたたまれた材料および変性された材料は、適切な場合、抗体を産生するために使用され得る。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかは、例えば、続いての免疫アッセイにおける使用のために生成され、タンパク質を測定され得るか、または免疫精製法のために生成され得る。

ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当業者に周知である。代表的に、免疫原（好ましくは、精製タンパク質）は、アジュバントと混合され、動物は、この混合物を用いて免疫される。免疫原調製物に対する動物の免疫応答は、試験採血によってモニターされ、そして目的のタンパク質に対する反応性の力価を決定する。例えば、抗体の免疫原に対する適切に高い力価が得られる場合、通常、繰り返し免疫の後、血液が、動物から回収され、抗血清が調製される。タンパク質に対して反応性の抗体を富化のための抗血清のさらなる分画は、所望される場合、実施され得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ；またはＣｏｌｉｇａｎを参照のこと。免疫はまた、他の方法（例えば、ＤＮＡベクター免疫）によって実施され得る。例えば、Ｗａｎｇら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２８：２７８−２８４を参照のこと。

モノクローナル抗体は、当業者になじみの種々の技術によって得られ得る。代表的には、所望の抗原で免疫された動物由来の脾臓細胞は、通常、骨髄腫細胞と融合することによって不死化される。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照のこと。不死化の代替的方法としては、エプスタイン−バーウイルス、オンコジーン、またはレトロウイルスでの形質転換、あるいは当該分野で公知の他の方法が挙げられる。例えば、Ｄｏｙｌｅら（編）（１９９４および定期補遺）Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと。単一の不死化細胞から生じるコロニーは、抗原に対する所望の特異性および親和性の抗体の産生についてスクリーンされ、このような細胞によって産生されたモノクローナル抗体の収率は、種々の技術（脊椎動物宿主の腹膜腔への注射を含む）によって増強され得る。あるいは、例えば、Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１によって概略される一般的プロトコルに従って、モノクローナル抗体またはその結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列を、ヒトＢ細胞由来のＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、単離し得る。

リガンドまたはレセプタータンパク質の所定のフラグメントに対する抗体または結合組成物（結合フラグメント、単鎖抗体、抗体のＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、またはＦ（ａｂ’）_２フラグメントが挙げられる）は、リガンドまたはレセプタータンパク質のフラグメントのキャリアタンパク質との結合体で動物を免疫することによって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常タンパク質または欠損タンパク質に対する結合についてスクリーニングされ得る。これらのモノクローナル抗体は、通常は少なくとも約１ｍＭのＫ_Ｄで、より通常は少なくとも約３００μＭのＫ_Ｄで、代表的には少なくとも約１０μＭのＫ_Ｄで、より代表的には少なくとも約３０μＭのＫ_Ｄで、好ましくは少なくとも約１０μＭのＫ_Ｄで、そしてより好ましくは少なくとも約３μＭ以上のＫ_Ｄで結合する。

いくつかの例において、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯類、霊長類、ヒトなど）からモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。このようなモノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，ＣＡ，およびその中に引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ならびに特に、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（これは、モノクローナル抗体を生成する１つの方法を議論する）に見出され得る。簡単に要約すると、この方法は、免疫原を動物に注射する工程を包含する。次いで、動物が屠殺され、細胞が、その脾臓から採取され、次いで、これは、骨髄腫細胞と融合される。結果は、インビトロで再生産し得る、ハイブリッド細胞または「ハイブリドーマ」である。次いで、ハイブリドーマの集団は、スクリーンされ、個々のクローンを単離し、これらの各々は、免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。この様式において、得られた個々の抗体種は、免疫原性物質上で認識される特定の部位に応じて生成される免疫動物由来の不死化クローン化単一Ｂ細胞の産物である。

他の適切な技術は、ファージまたは類似のベクター中の抗体のライブラリーの選択を包含する。例えば、Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体は、改変（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）を有してかまたは有さずに使用され得る。頻繁に、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供する物質を、共有結合または非共有結合のいずれかによって標識される。広く種々の標識技術および結合体化技術が、公知であり、そして、科学文献および特許文献の両方において広く報告される。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁気粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組換え免疫グロブリンが産生され得（Ｃａｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＱｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３を参照のこと）；またはこれは、トランスジェニックマウス中で作製される（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６を参照のこと；またＡｂｇｅｎｉｘ技術およびＭｅｄａｒｅｘ技術を参照のこと）。

抗体は、特定の結合組成物のほんの１つの形態である。しばしば同様の医用を有する他の結合組成物は、例えば、結合パートナー−結合パートナー様式、抗体−抗原相互作用、または天然に生理学的に関連するタンパク質−タンパク質相互作用において、共有結合または非共有結合のいずれかで、リガンドまたはレセプターに対して特異性を有して結合する分子（例えば、所望のタンパク質と特異的に会合するタンパク質）を含む。分子は、ポリマーであっても化学試薬であってもよい。機能的アナログは、構造的改変を有するタンパク質であり得るか、または構造的に関連しない分子であり得、例えば、これは、適切な結合決定因子と相互作用する分子形態を有する。本発明の抗体結合化合物（結合フラグメントを含む）は、有意な診断的価値または治療的価値を有し得る。これらは、非中和結合化合物としても有用であり得、そして毒素または放射性核種と結合され得、その結果、結合化合物が、抗原に結合する場合、それを例えば、その表面上に発現する細胞が殺傷される。さらに、これらの結合化合物は、リンカーによって直接的または間接的のいずれかで、薬物または他の治療剤に結合体化され得、薬物標的化を実施し得る。

ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）に対する抗体が、入手可能である（Ｓｏｕｍｅｌｉｓら、上述）。ヒトＴＳＬＰ／ＩＬ−５０−Ｂ５０（配列番号１）における増大した抗原性の領域としては、ＫＡＡＹＬ（アミノ酸４０−４４）；ＫＤ（４９−５０）；ＫＳ（５９−６０）；ＰＨＣ（７３−７５）；ＡＳＬＡＫ（９１−９５）；ＴＫＡＡＬ（１０２−１０６）；ＫＫＲＲＫＲＫＶ（１２５−１３２）；およびＰＬＬＫＱ（１５４−１５８）が挙げられる。ＩＬ−７Ｒα（配列番号２）に対する抗体が、入手可能である（Ｐａｎｄｅｙら、上述）。抗−ＴＳＬＰＲ抗体が、入手可能である（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ｃａｔ．ｎｏ．ＭＡＢ９８１；ＤＮＡＸ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）。抗体はまた、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）スイートのＷｅｌｌｉｎｇプロット（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）によって決定される増加した抗原性の領域での免疫によって、ＴＳＬＰＲ（配列番号３）に対して調製される。ヒトＴＳＬＰＲにおける増加した抗原性の領域は、配列番号３由来のＨＹＲ（アミノ酸残基５９−６１）；ＹＹＬＫＰ（１１５−１１９）；ＫＨＶ（１２３−１２５）；ＷＨＱＤＡＶ（１２９−１３４）；ＫＰＫＬＳＫ（２２６−２３１）；およびＡＨＬＨＫＭ（２９４−２９９）を含み、ここで、Ｎ−末端領域は、細胞質性であり、ヒトＴＳＬＰＲの膜貫通領域は、残基約２０３−２０７に生じることが予測される（Ｂｌａｇｏｅｖら（２００２）Ｇｅｎｅ ２８４：１６１−１６８；Ｐａｒｋら、上述）。

アゴニストとしては、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）サイトカインタンパク質それ自体が挙げられ、これは、レセプターシグナル伝達を誘導するために使用され得る。

（ＩＶ．診断的使用、治療組成物、方法）
本発明は、種々の炎症関連障害（例えば、アレルギー性炎症）を扱うための手段を提供する。病因（ｅｔｉｏｌｏｇｙ）および病因（ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ）は、しばしば、良好に理解されるが、これらは、患者において有意な不快感または病的状態を引き起こす。以下に記載されるように、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のＣＤ１１ｃ^＋ＤＣへの投与は、非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞のプライミングを生じ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、およびＴＮＦαを産生し、それによって、アゴニストまたはアンタゴニストは、免疫系を増強するかまたは抑制するための治療様式を提供し得る。

診断方法は、予後の予測；特定の診断経過に対して応答するかまたは応答しない患者のサブセットの定義；骨関連障害もしくは免疫関連障害の診断またはこれらの障害のサブタイプ；あるいは、治療に対する応答を評価するような局面を含む。本発明は、検出可能な標識（例えば、蛍光標識、エピトープ標識、酵素活性標識、または放射能標識）を含む抗体またはその結合フラグメントを企図する。

ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）に対するアンタゴニスト活性またはアゴニスト活性は、有意な治療効果（例えば、症状の発生を減少するかまたは防止すること）を示唆する様式に関与し得る。本発明のアンタゴニストおよび／またはアゴニストは、単独でか、または同じ経路または伴行（ａｃｃｏｍｐａｎｙｉｎｇ）経路の別のインヒビターまたはアゴニスト；あるいは症状の処置のために使用される他の化合物（例えば、アンタゴニスト、またはステロイド（例えば、グルココルチコイド））と組み合わせて投与され得る。

これは、アゴニストもしくはアンタゴニストの直接投与によって、またはおそらく遺伝子治療戦略を使用して、実施され得る。拮抗作用は、例えば、アンチセンス処理、抗体、またはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）効果の他の抑制によって実施され得る。

薬学的組成物または滅菌組成物（抗体、その結合組成物、サイトカインアゴニスト、または低分子アンタゴニストが挙げられる）を調製するために、この実体は、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と混合され、これは、好ましくは不活性である。これらの薬学的組成物の調製は、当該分野で公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照のこと。

抗体、結合組成物、またはサイトカインは、通常、非経口的に、好ましくは、静脈的に投与される。これらのタンパク質またはペプチドが、免疫原性であり得るので、これらは、好ましくは、例えば、Ｔｏｍａｓｉら、米国特許第４，７３２，８６３号によって教示されるように、従来のｉ．ｖ．投与セットによってまたは皮下貯留からのいずれかで、ゆっくりと投与される。免疫学的反応を最小化するための手段が、適用され得る。低分子実体は、経口的に活性であり得る。

経口的に投与される場合、生物製剤は、薬学的に受容可能な非経口ビヒクルと共に、注射可能単回投薬形態（溶液、懸濁液、エマルジョン）で処方される。このようなビヒクルは、代表的には、本質的に非毒性であり、非治療的である。治療剤は、水性ビヒクル（例えば、水、生理食塩水、または種々の添加剤および／もしくは希釈剤を含むかもしくは含まない緩衝化ビヒクル）中で投与され得る。あるいは、懸濁液（例えば、亜鉛懸濁物）は、ペプチドを含むように調製され得る。このような懸濁液は、皮下（ＳＱ）注射または筋内（ＩＭ）注射のために有用であり得る。生物製剤と添加剤との比は、両者が、有効な量で存在する限り広い範囲にわたって変化され得る。抗体は、好ましくは、凝集物、他のタンパク質、外毒素などを実質的に含まない精製形態中に、約５〜３０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で処方される。好ましくは、外毒素レベルは、２．５ＥＵ／ｍｌ未満である。例えば、Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ．第２版、Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ 第２版、Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ）を参照のこと。

治療剤に対する投与レジメンの選択は、いくつかの因子に依存し、これらの因子としては、実体の血清代謝回転速度または組織代謝回転速度、症状のレベル、実体の免疫原性、および標的細胞の接近可能性、投与のタイミングなどが挙げられる。好ましくは、投与レジメンは、受容可能な副作用のレベルに支障のない患者に送達される治療剤の量を最大にする。従って、送達される生物製剤の量は、特定の実体および処置される状態の重篤度に、一部依存する。適切な抗体用量を選択する指針は、例えば、Ｂａｃｈら、第２２章，Ｆｅｒｒｏｎｅら（編）（１９８５）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｎｏｇｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ Ｒｉｄｇｅ，ＮＪ；およびＨａｂｅｒら（編）（１９７７）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（Ｒｕｓｓｅｌｌ、３０３−３５７頁、およびＳｍｉｔｈら、３６５〜３８９頁）に見出される。あるいは、サイトカインまたは低分子の用量は、標準的な方法論を使用して決定される。

適切な用量の決定は、臨床医によって、例えば、処置を実施することが当該分野で公知または推測されるか、または処置を実施すると推測されるパラメーターまたは因子を使用して、作製される。一般的に、用量は、最適用量よりいくらか下の量で開始され、その後、任意の負の副作用に比べて、所望の効果または最適効果が、達成されるまで、これは、低い増分で増加される。重要な診断指標としては、例えば、炎症の症状または産生される炎症性サイトカインのレベルが挙げられる。好ましくは、使用される生物製剤は、処置のために標的化される動物と同じ種に由来し、それによって試薬に対する体液性応答を最適化する。

リガンドまたはレセプターに特異的に結合する、抗体またはそのフラグメントについての総週間用量範囲は、体重１ｋｇ当たり、一般的には約１０μｇから、より一般的には約１００μｇから、代表的には約５００μｇから、より代表的には約１０００μｇから、好ましくは約５ｍｇから、そしてより好ましくは約１０ｍｇからの範囲にわたる。一般的に、この範囲は、体重１ｋｇ当たり、１００ｍｇ未満であり、好ましくは５０ｍｇ未満であり、そしてより好ましくは２５ｍｇ未満である。アゴニストまたは低分子治療剤は、類似のモル濃度で使用され得る。

サイトカインレセプター媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト（例えば、抗体または結合フラグメント）に対する週間用量範囲は、体重１ｋｇ当たり、約１μｇからであり、好ましくは少なくとも約５μｇからであり、そしてより好ましくは少なくとも約１０μｇからである。一般的に、この範囲は、体重１ｋｇ当たり、約１０００μｇ未満であり、好ましくは約５００μｇ未満であり、そしてより好ましくは約１００μｇ未満である。用量は、所望の処置を実施するスケジュールに対してであり、そしてより短い期間またはより長い期間にわたって周期的であり得る。一般的に、範囲としては、体重１ｋｇ当たり、少なくとも約１０μｇ〜約５０ｍｇであり、好ましくは約１００μｇ〜約１０ｍｇである。サイトカインアゴニストまたは低分子治療剤は、代表的に、類似のモル量で使用される。しかし、これらは、おそらく低い分子量を有するので、より低い重量用量を有する。

本発明はまた、公知の治療剤（例えば、ステロイド（特に、グルココルチコイド）（これは、症状（例えば、炎症に関連する症状）を緩和する）、または抗生物質もしくは抗感染剤）との組み合わせでの生物製剤の投与のために提供される。グルココルチコイドに対する１日用量は、１日当たり、少なくとも約１ｍｇからであり、一般的には少なくとも約２ｍｇからであり、そして好ましくは少なくとも約５ｍｇからである。一般的に、用量は、１日当たり、約１００ｍｇ未満であり、代表的には約５０ｍｇ未満であり、好ましくは約２０ｍｇ未満であり、そしてより好ましくは約１０ｍｇ未満である。一般的には、この範囲は、１日当たり、少なくとも約１ｍｇ〜約１００ｍｇであり、好ましくは約２ｍｇ〜約５０ｍｇである。抗生物質、抗感染剤、または抗炎症性剤と組み合わせての適切な用量はまた、公知である。

代表的な哺乳動物宿主としては、マウス、ラット、ネコ、イヌ、および霊長類（ヒトを含む）が挙げられる。特定の患者に対する有効量は、処置される状態、患者の全体的な健康状態、投与方法、投与経路および投与の量、ならびに副作用の重篤度のような因子に依存して変化し得る。組み合わせの場合、有効量は、成分の組み合わせに対する比であり、効果は、個々の成分単独に限定されない。

有効量の治療剤は、症状を、代表的に少なくとも約１０％；通常少なくとも約２０％；好ましくは少なくとも約３０％；またはより好ましくは少なくとも約５０％減少する。本発明は、上記される徴候に関連する障害を処置するための一般的記述において、本明細書の他の場所で記載されるように、治療適用における用途が見出される試薬を提供する。Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；Ｂｒａｕｎｗａｌｄら（編）（２００１）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ；Ｇｉｌｍａｎら（編）（１９９０）ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ；Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３；Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ；ならびにＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）；Ｃｏｔｒａｎら（編）上述；ならびにＤａｌｅ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒｍａｎ（編）（２０００）Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅａｌｔｈｅｏｎ／ＷｅｂＭＤ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ。

（１．一般の方法）
標準的な方法のいくつかは、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、１〜３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｒｏｏｋｌｙｎ、ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および増補） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載または参照されている。タンパク質精製方法は、例えばアンモニウム硫酸沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法を含む。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的な増補）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２巻の「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」およびこのシリーズの他の巻；およびタンパク質精製用製造物の使用に関する製造業者の文献、例えばＰｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、またはＢｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡを参照のこと。組換え技術との併用により、適切な断片（例えば、ＦＬＡＧ配列または、プロテアーゼ除去配列により融合され得る等価物）への融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」ｉｎ Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７〜９８、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ ＬｅｖｅｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡを参照のこと。

例えば、抗原性断片、シグナルおよびリーダー配列、タンパク質の折りたたみおよび機能ドメインを決定するためのソフトウェアパッケージが利用できる。例えば、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、およびＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．、Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ、Ｎａｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ１６：７４１〜７４２を参照のこと。公共の配列データベースも使用した（例えばＧｅｎＢａｎｋおよび他から）。

（ＩＩ ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）によるＣＤ１１ｃ^＋ＤＣの活性化）
ＣＤ１１ｃ^＋ＤＣは、フィコール遠心分離および磁性ビーズを用いたＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ５６およびグリコフォリンＡを発現する細胞のネガティブ除去により、ＰＢＭＣを分離した後、健康な血液提供志願者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓｔａｎｆｏｒｄ、ＣＡ）の成人の血液バフィーコートから精製した。除去した細胞は、抗ＣＤ４−ＴＣ（Ｃａｔａｇ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）、抗ＣＤ１１ｃ−ＰＥおよび抗ＣＤ３，ＣＤ１４、ＣＤ１６−ＦＩＴＣ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を用いてさらに染色した。ＣＤ１１ｃ^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、Ｖａｎｔａｇｅ ＦＡＣｓｏｒｔｅｒ（登録商標）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を用いて９９％より高い純度になるように単離した。

ＣＤ１１ｃ^＋ＤＣを、１０％ＦＣＳ、１％ピルビン酸、１％ＨＥＰＥＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩで選別後、すぐに培養した。細胞を、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）（１５ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−７（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＬＰＳ（１ｍｇ／ｍｌ）、ＣＤ４０のリガンドをトランスフェクトしたＬ−繊維芽細胞（２．５×１０^４／ウェル）または培養培地のみの存在下で、平底の９６ウェルプレートに０．５×１０^６／ｍｌの濃度で播種した。２４時間の培養後、ＤＣを回収し、クラスタを分離するために、ＥＤＴＡを含む培地に再懸濁した。トリパンブルーによる死んだ細胞を除去することにより、最初に生き残ったＤＣを計数した。

残った細胞を抗ＨＬＡ−ＤＲ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、抗ＣＤ４０、ＣＤ８０、およびＣＤ８６（全てＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａ）またはＩｇＧ１アイソタイプコントロール（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を含む様々なマウスの抗ヒトＦＩＴＣ結合型モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いて染色し、ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を用いて分析した。死んだ細胞を側方散乱および前方散乱する性質に基づいて除去した。アポトーシスの検出には、細胞を５〜１０分間、アネキシン Ｖ−ＦＩＴＣ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて染色し、死んだ細胞を除去せずに、ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）により分析した。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）、ＩＬ−７、ＣＤ４０−リガンドおよびＬＰＳは全て、培地のみの場合と比較して、ＤＣ上の表面ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ８３をアップレギュレートした。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）はＩＬ−７の能力の少なくとも２倍これらのマーカーをアップレギュレートした。興味深いことに、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）がＤＣ上でのＣＤ４０およびＣＤ８０の発現を最も高く誘導するのに対して、ＣＤ４０のリガンドはＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８３のレベルをより高く誘導した。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のＨＬＡ−ＤＲおよび共刺激分子をアップレギュレートする能力は、ヒトＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）に特異的な中和モノクローナル抗体により阻害された。このことは、観察されたＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のＣＤ１１ｃ^＋ＤＣに対する効果が特異的であることを示している。ＣＤ４０Ｌと同じように、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）はＤＣを活性化するだけではなく、アネクシンＶ染色および細胞数により示されるように、２４時間培養におけるＤＣの生存も維持した。形態的には、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０が刺激するＤＣおよびＣＤ４０Ｌ−ＤＣは、培地−ＤＣまたはＩＬ−７−ＤＣと比較したとき、長い樹状突起を示し、ＨＬＡ−ＤＲおよび樹状細胞−リソソーム結合膜糖タンパク質（ＤＣ−ＬＡＭＰ）を発現する。

ＤＣ−ＬＡＭＰはＤＣ活性化マーカーである。ＤＣ−ＬＡＭＰはＴＮＦα、ＬＰＳ、ＣＤ４０Ｌにより急速に誘導され、抗原の存在を示すのに用い得る（Ｓａｉｎｔ−Ｖｉｓら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ９：３２５〜３３６）。

（ＩＩＩ．非刺激ＣＤ４ Ｔ細胞の刺激）
ＣＤ１１ｃ^＋ＤＣは様々な条件で２４時間培養した後に回収し、サイトカインを完全に取り除くために２回洗浄し、５×１０^４の新しく精製した非刺激同種異系の非刺激ＣＤ４^＋Ｔと共に丸底の９６ウェル培養プレートで共培養した。共培養は、漸増のＤＣ／Ｔ細胞比で三連で行った。ＤＣおよびＴ細胞単独のものをコントロールとして用いた。５日後、細胞を１ｍＣｉ^３Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）に１６時間曝し、その後回収し、放射能を測定した。

最も注目すべきは、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣは、ＣＤ４０Ｌ−ＤＣ、ＬＰＳ−ＤＣまたはＩＬ−７ＤＣと比較して、同種異系の混合したリンパ球反応中に、最も強い非刺激ＣＤ４Ｔ細胞の増殖を誘導した。１５０個のＴ細胞あたり１個のＤＣの割合では、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）により活性化されたＤＣが、まだ非常に強い同種異系の非刺激ＣＤ４Ｔ細胞の増殖を誘導した。それはＣＤ４０Ｌ−ＤＣに誘導されるものに比較すると、約１０倍強かった。培養６日後、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０が刺激するＤＣは全Ｔ細胞数の２．５〜１０倍の増加を誘導した。それは、ＣＤ４０Ｌ−ＤＣ、ＬＰＳ−ＤＣまたはＩＬ−７−ＤＣにより誘導されるものより多かった。そのため、ヒトのＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、最も有力なＤＣ活性化因子の１つを代表し、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０が刺激するＤＣは、最も強く同種異系の非刺激ＣＤ４Ｔ細胞の増殖および拡大を誘導する。

（ＩＶ．ＤＣにより刺激された非刺激Ｔ細胞のサイトカインおよびケモカインの発現）
Ｔ細胞は共培養６日目に回収し、２回洗浄し、１×１０^６／ｍｌの濃度で、９６ウェルまたは４８ウェルの平底のプレート中、ＰＭＡおよびイオノマイシンで再度刺激した。２．５時間後、ブレフェルディンＡ（Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ）を１０ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した。５時間後、細胞を回収し、２％ホルムアルデヒドで固定し、１０％のサポニンで透過性にし、ＩＬ−４、ＩＬ−５，ＩＬ−１０、ＩＬ−１３に対してはＰＥ結合型ｍＡｂｓで、ＩＦＮ−γに対してはＴＮＦαおよびＦＩＴＣが結合したｍＡｂで染色した（全てＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。染色した細胞はＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）により分析した。

以前の研究で、ほぼ全てのＤＣ活性化シグナル（例えば、ＣＤ４０ＬおよびＬＰＳ）がＤＣを誘導して、炎症促進性のサイトカイン（ＩＬ−１α／β、ＩＬ−６およびＩＬ−１２）を生成し、非刺激ＣＤ４ Ｔ細胞のＴＨ１への分化を刺激することが示されている（Ｇｕｅｒｍｏｎｐｒｅｚら（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０巻：６２１〜６６７；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（２０００）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８巻：７６７〜８１１）。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のＤＣサイトカインの発現に対する効果を調べるために、まず、１１の異なるサイトカイン（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０，ＩＬ−１２ｐ３５ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３ｐ１９およびＴＮＦα）および１２の異なるケモカイン（ＴＡＲＣ，ＤＣＣＫ１、ＭＤＣ、ＭＣＰ１、ＭＣＰ２、ＭＣＰ３α、ＭＣＰ４、エオタクシン、ＭＩＰ３、ＭＩＧ、ランテスおよびＩＬ−８）の全定量ｍＲＮＡスクリーニングを行った。驚くべきことに、ＣＤ４０Ｌ−ＤＣと異なり、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０処理したＤＣは、試験した全ての炎症促進性サイトカインのｍＲＮＡを生産しなかったが、高レベルのケモカインＴＡＲＣおよびＭＤＣに対するｍＲＮＡを生成した。ＥＬＩＳＡ分析により、タンパク質レベルを確かめた。その結果、ＴＬＳＰに活性化されたＤＣは、検出できる量の炎症促進性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０およびＴＮＦαを生産しないが、高レベルのケモカインＴＡＲＣおよびＭＤＣを生成した（Ｒｅｃｈｅら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３３６〜３４３）。ＴＡＲＣおよびＭＤＣは、ＣＣＲ４発現ＴＨ２細胞を優先的に誘引する。

次に、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣが、非刺激ＣＤ４ Ｔ細胞を偏らせる（ｐｏｌａｒｉｚｅ）能力を、培地、ＩＬ−７、ＣＤ４０またはＬＰＳでそれぞれ培養したＤＣと比較した。成人の末梢血から精製した非刺激ヒトＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞を、１／５比のＤＣとともに、６日間共培養し、サイトカインを完全に除去するために洗浄し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で２４時間再刺激した。その後、培地上清中のサイトカインの生成量を、ＥＬＩＳＡにより測定した。顕著なことには、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣは、非刺激ＣＤ４Ｔ細胞を誘導して、炎症促進性のサイトカインＴＮＦαとともに、ＴＨ２サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の最も高いレベルを生じる。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣは、培地のみまたは他の活性化因子とともに培養したＤＣと比較して、抗炎症サイトカインＩＬ−１０およびＴＨ１サイトカインＩＦＮ−γの最低のレベルを生じる。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣが、非刺激ＣＤ４Ｔ細胞を誘導して、高いＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦα、ならびに低いＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０を生成する能力を、細胞内サイトカイン染色により確認した。その結果、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）−ＤＣは非刺激ＣＤ４Ｔ細胞を誘導して、ＴＨ１プロフィール（ＩＦＮ−γ）または典型的なＴＨ２プロフィール（ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０）とは異なる、非常に独特のセットのサイトカインを生成した。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣに活性化されたＣＤ４ Ｔ細胞は、培地−ＤＣ、ＩＬ−７−ＤＣ、ＣＤ４０Ｌ−ＤＣまたはＬＰＳ−ＤＣによってそれぞれで活性化されたＣＤ４Ｔ細胞と比較して、最も強力な炎症促進サイトカインの１つである、ＴＮＦαの最高のレベルを生じた。反対に、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を阻害して、強力な抗炎症サイトカインであるＩＬ−１０（例えば、Ｍｏｏｒｅら（２００１）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９：６８３〜７６５）、およびＴＨ２応答を交差して阻害し得るＴＨ１サイトカインであるＩＦＮ−γ（Ａｂｂａｓら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８３：７８７〜７９３）を生成するようである。従って、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣは、強い炎症促進性サイトカインＴＮＦαの存在下、および２つの生理的なＴｈ２炎症の阻害剤、ＩＬ−１０およびＩＦＮ−γの非存在下で、非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞を促進して、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３を生成させることにより、強いＴＨ２アレルギー性の炎症を誘導する。それに加えて、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に刺激されたＤＣは、ケモカイン（例えばＴＡＲＣおよびＭＤＣ）を生成することにより、ＴＨ２が介在する炎症をさらに強め、このケモカインは元の炎症の生じた組織にＴＨ２細胞を選択的に補充する（例えばＩｍａｉら（１９９９）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：８１〜８８；Ａｎｄｒｅｗら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：５０２７〜５０３８；Ａｎｄｒｅｗら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：１０３〜１１１；Ｖｅｓｔｅｒｇａａｄら（２０００）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１５：６４０〜６４６；およびＶｅｓｔｅｒｇａａｄら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０４：１０９７〜１１０５参照）。

（Ｖ．ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現）
（Ａ．間質細胞）
ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の生物学および病態生理学をさらに理解するために、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）ｍＲＮＡの発現を、様々な初代細胞または細胞株からのｃＤＮＡライブラリーのパネルおよびＦＡＣＳで分類した初代細胞のパネル（細胞の純度は９９％より高い）でリアルタイム定量ＰＣＲ（Ｔａｑｍａｎ（登録商標））することにより分析した。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の発現は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、マクロファージ、単球サブセット、およびＤＣサブセットを含むほとんどのタイプの造血性細胞で見られなかった。興味深いことに、ＩｇＥレセプターと高い親和力で架橋するモノクローナル抗体に活性化される肥満細胞は、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）を非常に高レベルで発現する。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、培養したヒト初代間質細胞（例えば、皮膚ケラチノサイト、上皮細胞、平滑筋細胞、および肺線維芽細胞）で多量に発現することがわかった。ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＴＮＦα、またはＴＮＦαおよびＩＬ−１β、それぞれにより活性化される気管支平滑筋細胞および皮膚ケラチノサイトは、培地のみコントロールと比較して、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）を多く発現するようである。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の発現は、内皮細胞において見いだされなかった。従って、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）ｍＲＮＡは主に、ほとんどのタイプの間質細胞および肥満細胞で発現するが、ほとんどのタイプの造血細胞および内皮細胞では発現しない。

気管支平滑筋細胞（ＢＳＭＣ）、健康なヒトの肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）、健康なヒトの表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）および肺線維芽細胞株（ＭＲＣ５）からなる初代細胞を、６ウェルの組織培養プレートに０．５×１０^６細胞の濃度で播種した。サイトカインまたはサイトカインの組み合わせを、示した濃度で添加し、３７℃で８時間培養した。

ヒト気管支平滑筋細胞（ＢＳＭＣ）を様々なサイトカインにさらすことによるＴＳＬＰ／ＩＬ−５０ｍＲＮＡの発現を、（Ｓｏｕｍｅｌｉｓら（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３巻６７３〜６８０；Ｒｅｃｈｅら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３３６〜３４３に記載されるように）様々なサイトカインで細胞を処理した後、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）およびＥＬＩＳＡにより評価した。ｍＲＮＡの発現レベルは、１８ｓＲＮＡの発現に対する単位として合わせた。細胞は培地のみ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦα、またはＩＬ−１βおよびＴＮＦαの組み合わせで、別個のインキュベーション混合物中で、０、０．００１、０．０１、０．１、１．０または１０ｎｇ／ｍｌで処理した。ＥＬＩＳＡの結果は、ＩＬ−１βおよびＴＮＦαの組み合わせが、ＢＳＭＣからＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現を最も高く誘発した、同様のパターンを示した。ＴａｑｍａｎおよびＥＬＩＳＡの結果を、表１にまとめる。

間質細胞からのＩＬ−８の生成を、コントロールとして用いた（表１）。試験した４つの細胞株の比較により、ＴＳＬＰ−ＩＬ−５０の発現およびＩＬ−８の発現における傾向の違いが明らかになった。このことはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０およびＩＬ−８の発現につながるメカニズムが同一ではないことを示している。

別々の試験により、ＩＬ−１３（２５ｎｇ／ｍｌ；８時間）処理により、健康なヒトの肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）および健康なヒトの皮膚の線維芽細胞が刺激されて、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０が発現されたことが示された。それに対して、ＩＬ−１７（２５ｎｇ／ｍｌ；８時間）による処理は、ＢＳＭＣ細胞および健康な皮膚線維芽細胞を誘導して、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０を発現させることが示された。ＩＬ−１３またはＩＬ−１７に応答しての発現は、例えば、健康なヒトの表皮ケラチノサイトからは検出されなかった。

（Ｂ．炎症を生じた扁桃腺）
例えば扁桃腺のような、ヒトの炎症を起こした組織が、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）タンパク質を発現するかどうか調べるために、免疫組織学的に調べた。試料は、ｍＡｂ ６ＮＥ０１１２Ｆ３（ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０を特異的に認識する）を用いて染色した。ヒトの扁桃腺は、陰窩上皮（この上皮は、陰窩に並び、しばしばウイルスおよびバクテリアを保有し、抗原の侵入および構成的な炎症の部位を示す）扁平上皮（これは扁桃の表面に並ぶ）を含む。５つの異なった扁桃腺のサンプル全ての内、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、陰窩上皮細胞によって構成的に発現していることがわかった。この陰窩上皮細胞は、ＤＣ−ＬＡＭＰ陽性のリンパ球と密着していて、樹状突起細胞を活性化する。興味深いことに、全ての扁桃腺サンプルで、扁平上皮の先端部分内で、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のきわめて少ない小さな病変が見いだされた。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の発現は、ＤＣ−ＬＡＭＰ陽性の活性化されたＤＣの浸潤、および同時に起こる、扁平上皮内のランゲリン（ｌａｎｇｅｒｉｎ）陽性ランゲルハンス細胞の喪失と関係していた。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）は、陰窩上皮内での構成的な炎症および扁平上皮内の散在する炎症に寄与している。

（Ｃ．アトピー性皮膚炎におけるケラチノサイト）
ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）の発現が、インビボでＴｈ２タイプのアレルギー性炎症と関係しているかどうか調べるために、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０タンパク質の発現を、アトピー性皮膚炎（ＴＨ２が介在するアレルギー性疾患）、ニッケル誘導性接触性皮膚炎（ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８^＋Ｔ細胞が介在するアレルギー性疾患）および播種性紅斑性狼瘡（ＴＨ１が介在する疾患）を含む皮膚の病変で分析した。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０は、健康な皮膚およびアトピー性皮膚炎の病変のない皮膚では検出されなかったが、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の高い発現が、急性（４名の患者）および慢性のアトピー性皮膚炎（６名の患者）のケラチノサイトで見いだされた。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現は、小さな病巣から、急性および慢性のアトピー性皮膚炎の両方における先端の領域全体にいたる、主に上皮の先端層のケラチノサイトで観察された。ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０は、ニッケル遊動性接触性アレルギー皮膚炎および播種性紅斑性狼瘡の皮膚の病変では見いだされなかった。

（ＶＩ．ランゲルハンス細胞の移動および活性化）
ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアトピー性皮膚炎での発現が、ＤＣの活性化に関係しているかどうか調べるために、ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０を、ランゲリン（ｌａｎｇｅｒｉｎ）（ランゲルハンス細胞のマーカー）、またはＤＣ−ＬＡＭＰ（ＤＣ活性マーカー）のどちらかで一緒に二重免疫組織学的に染色した。健康な皮膚では、またはアトピー性皮膚炎の病変のない皮膚では、多くのランゲリン（ｌａｎｇｅｒｉｎ）陽性ランゲルハンス細胞が表皮内のみで見いだされるが、真皮では見つからず、ＤＣ−ＬＡＭＰ^＋ＤＣは、表皮または真皮のどちらにおいても見つからなかった。アトピー性皮膚炎におけるｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の強い発現は、表皮中のランゲリン（ｌａｎｇｅｒｉｎ）陽性ランゲルハンス細胞の消失および同時に起こる真皮中のＤＣ−ＬＡＭＰ^＋ＤＣの出現と関係していた。真皮中の多量のＤＣ−ＬＡＭＰ^＋ＤＣは、ランゲリン（ｌａｎｇｅｒｉｎ）を発現する。このことは表皮のランゲルハンス細胞が活性化され、真皮に移動することを示している。従って、アトピー性皮膚炎のケラチノサイトによるｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現は、ランゲルハンス細胞の活性化に直接寄与し、このランゲルハンス細胞は、流出するリンパ節に移動し、アレルゲン特異的なＴＨ２応答を刺激する。

（ＶＩＩ．ヒト細胞でのＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現）
ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現を、前述のようにして、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）により決定した。示した細胞におけるＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の相対的な発現は：培養した肺線維芽細胞（＋＋＋＋）；培養した気管支平滑筋（＋＋＋＋）；前立腺間質細胞（＋＋）；乳房間質細胞（＋）；乳房上皮細胞（＋）；肝臓線維芽細胞（＋）；皮膚ケラチノサイト（＋）であった。

ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現もまた、組織学的方法で決定した。胸腺の上皮細胞を、Ｓｏｕｍｅｌｉｓら（前出）の記載のように、タグ化抗ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０抗体で染色した。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０は、健康な皮膚およびアトピー性皮膚炎の病変のない皮膚の切片からのケラチノサイトでは検出しなかった一方、急性および慢性のアトピー性皮膚炎のケラチノサイトでは高いレベルで発現していた。健康な皮膚では、汗腺、エクリン腺、および毛包では発現が見られなかった。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現はまた、組織学的に決定されるように、胸腺の上皮細胞（ハッサル小体）で発現していた。

（ＶＩＩＩ．同種異系および自己のｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０処理したＤＣは、両方とも非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を誘導する）
非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞を、５つの異なる試験条件下で準備した調製した同種異系の樹状突起細胞にさらし、その後、Ｔ細胞の増殖を評価した。その５つの条件を、表２に示す。増殖を、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイにより決定した。同種異系の反応では、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で処理したＤＣは、Ｔ細胞の増殖の最も大きな増大を誘導した一方で、他の薬剤で処理したＤＣは、Ｔ細胞の増殖がより少ないまたは非常に少なかった。

自己の細胞の相互作用（そこでは、ＣＤ１１ｃ＋樹状突起細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞は、同じヒトドナー由来である）を、試験した（表２）。再度、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で処理したＤＣの使用により、Ｔ細胞増殖において最も大きな増大を生じた一方で、ＤＣの他の調製物は、Ｔ細胞増殖のレベルがより少なかった。

（ＩＸ．ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）処理したＤＣは、非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を刺激する）
ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０により活性化されたＤＣを、自己の非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞と混合し、その後、拡大し、増殖しているＴ細胞のプールにおけるＴ細胞レセプターの亜種のプロフィールを評価した。アッセイに用いたＴ細胞レセプターの亜種は、ＴＣＲＶβ１、ＴＣＲＶβ２、ＴＣＲＶβ３、ＴＣＲＶβ５、ＴＣＲＶβ８、ＴＣＲＶβ１４、ＴＣＲＶβ１７、ＴＣＲＶβ２２およびＴＣＲＶβ２３であった。３つのタイプのコントロールのインキュベーションを用いた：（１）未処理Ｔ細胞；（２）ＩＬ−７で処理したＴ細胞；および（３）ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓのエンドトキシンＢで活性化されたＤＣで処理したＴ細胞。Ｔ細胞の未処理のコントロール集団を、以下に示されるＴ細胞レセプターのサブセットを含んでいた：ＴＣＲＶβ１（約３％）、ＴＣＲＶβ２（約８％）、ＴＣＲＶβ３（約６％）、ＴＣＲＶβ５（約２％）、ＴＣＲＶβ８（約４％）、ＴＣＲＶβ１４（約２．５％）、ＴＣＲＶβ１７（約７％）、ＴＣＲＶβ２２（約２．５％）、ＴＣＲＶβ２３（約０．２％）。非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）により活性化されたＤＣ（実験的）で処理し、その後、Ｔ細胞を増殖させるためにインキュベーションしたところ、培養していないＴ細胞で見出されたレセプターと非常に類似したＴ細胞レセプター亜種のプロフィールを示した。培養していないＴ細胞およびＴＳＬＰ／ＩＬ−５０で活性化されたＤＣで処理したＴ細胞で見出された類似のプロフィールは、Ｔ細胞の多クローン性の増殖が起こしたことを示した。ＩＬ−７とのコントロール培養（ＤＣなし）もまた、Ｔ細胞の多クローン性の増殖を生じた一方で、エンドトキシン処理ＤＣとのコントロール培養は、ＴＣＲＶβ３およぼＴＣＲＶβ１７を持つＴ細胞の選択的な増殖を生じた。

（Ｘ．ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０が介在するＴ細胞の増殖は長期間継続する）
ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０処理したＤＣを、自己の非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞とともにインキュベートした後、ｔ＝０、６、９、１２、１５、１８、２１日で細胞数を評価した。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）により活性化されたＤＣにさらすことで、Ｔ細胞数は１５日目で１０倍に増加し、その後の時点では細胞数は減少した。コントロールインキュベーションは、ＩＬ−７に活性化されたＤＣ、ＬＰＳに活性化されたＤＣ、ｐｏｌｙＩ：Ｃに活性化されたＤＣ、ＣＤ４０Ｌに活性化されたＤＣおよび培地処理したＤＣに曝した非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞を用いた。本質的に全てのコントロール培養は、Ｔ細胞の数を少ししか増加しない、または全く増加しなかったが、ＬＰＳで活性化したＤＣでは、６日目に、Ｔ細胞の数が３倍に増加したことが見出された。

（ＸＩ．Ｔ細胞の表現形の変化）
ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）により活性化されたＤＣを処理した前後で、非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞の表現型を決定した。表現型は、Ｔ細胞上の次のマーカー：ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ４５ＲＯ；ＣＤ２５；ＣＤ６２Ｌ；およびＣＣＲ７を測定することにより評価した。

非刺激Ｔ細胞は、表現型ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ４５ＲＯ⁻、ＣＤ２５−、ＣＤ６２Ｌ^＋およびＣＣＲ７^＋を有し；中心記憶Ｔ細胞は、表現型ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ２５＋／−、ＣＤ６２Ｌ^＋およびＣＣＲ７^＋を有し；エフェクター記憶Ｔ細胞は、表現型ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ２５^＋／−、ＣＤ６２Ｌ^＋／−およびＣＣＲ７を有する。ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）処理したＤＣにより活性化されたＣＤ４^＋Ｔ細胞は、中心記憶Ｔ細胞の表現型を持っていた。

コントロールインキュベーションにより、非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞をＩＬ−７で処理（ＤＣなし）すると、表現型は変化を生じないことが明らかになった。非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞をＤＣ＋ＩＬ−２で処理すると、表現型ＣＤ４５ＲＡ⁻、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋およびＣＣＲ７^＋／−のＴ細胞が見られた。

非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で活性化されたＤＣにさらすと、Ｔ細胞が拡大した。拡大したＴ細胞の数を、次のサイトカイン：ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３の分泌について試験した。その結果、ＩＬ−２は多量に分泌され、ＩＬ−５およびＩＬ−１３は少量分泌され、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０およびＩＬ−４はほとんど、または全く分泌されなかった。拡大したＣＤ４＋Ｔ細胞は、即時のエフェクターの機能を欠いていた。

非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、同種異系のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で活性化されたＤＣにさらした後、Ｔ細胞の拡大および上記サイトカインの分泌を評価した。その結果、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３は多量に分泌され、ＩＦＮ−γは、少量分泌された。このことは同種異系の拡大したＣＤ４^＋Ｔ細胞が、Ｔｈ２タイプのサイトカインプロフィールを有していたことを示した。上で同定したサイトカインの発現を、自己もしくは同種異系の反応、またはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に活性化されたＡＰＣが関与する病理学的状態の検出に用い得る。

同種異系の反応ではなく、自己の反応により拡大したＴ細胞の使用は、即時のエフェクター応答（例えば、炎症反応）が要求されない治療には好ましい。

自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で活性化されたＤＣにさらした非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、抗ＩＬ−４＋ＩＬ−１２（ＴＨ１プロフィールを促進することが公知の薬剤）と一緒に、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で処理する。その結果は、多量のＩＦＮ−γを分泌するが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３は低レベルであるＴ細胞、すなわちＴＨ１プロフィールを有するエフェクター細胞である。

従って、自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０により活性化されたＤＣにさらした非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、即時の効果機能を欠如しうるが、二次的な刺激によりエフェクター細胞へ分化するように刺激され得る。これらの結果は、自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０に活性化されたＤＣが、例えば、病原体に応答して、インビボの抗原依存的な応答を高め得ることを示す。

非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、７日間、自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０で活性化されたＤＣで処理した後、細胞を洗浄した。その後、ＴＣＲシグナル伝達を引き起こすために、細胞を、一定レベルの抗ＣＤ２８とともに抗ＣＤ３で力価測定した。コントロールとして、非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞もまた、一定レベルの抗ＣＤ２８とともに、抗ＣＤ３で力価測定した。別個のインキュベーション混合物に、０．０００１、０．０００３、０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１．０、３．０または１０．０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３を含める一方で、全てのインキュベーションに、１．０μｇ／ｍｌの一定レベルで、抗ＣＤ２８濃度を含めた。Ｔ細胞の増殖を、３Ｈ−チミジンの取り込みにより、測定した。この結果により、非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、約３．０μｇ／ｍｌの濃度のＣＤ２８で増殖するように、最大で刺激されが、低レベルの抗ＣＤ−２８では、ほとんどまたは全く刺激されなかったことを示した。対照的に、自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０で活性化されたＤＣで処理した非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、はるかに低レベルの抗ＣＤ２８で（すなわち約０．１μｇ／ｍｌで）増殖するように、最大に刺激された。従って、自己のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０で活性化されたＤＣで拡大したＣＤ４^＋Ｔ細胞は、活性化の閾値が減少した。

（ＸＩＩ．ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で活性化されたＤＣは、様々なＣＤ４^＋細胞の増殖を誘導する）
ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）で活性化されたＤＣを、自己の：（１）非刺激ＣＤ４^＋Ｔ細胞；（２）中心記憶４^＋Ｔ細胞；または（３）自己のエフェクター記憶ＣＤ４^＋Ｔ細胞とともにインキュベートした；Ｔ細胞の増殖を３Ｈチミジンの取り込みにより評価した。１：１；１：２；１：４；１：８；１：１６；１：３２；１：６４の比のＤＣ／Ｔ細胞で、インキュベーションを別々に行った。コントロールのインキュベーションに、Ｔ細胞のみおよび培地のみを含めた。増殖の評価により、Ｔ細胞の３つの集団のそれぞれの最大増殖は、１：１の比のＤＣ／Ｔ細胞で起こることがわかった。非刺激Ｔ細胞の増殖は、一般に、中心記憶Ｔ細胞の増殖より１．２〜１．８倍大きい一方で、中心記憶Ｔ細胞の増殖は、一般に、エフェクターＴ細胞の増殖より約２倍大きかった。

３つのタイプのＴ細胞のそれぞれを用いてインキュベートしたコントロールは、Ｔ細胞増殖の誘導を、ほとんどまたは全く生じなかった。

（ＸＩＩＩ．乾癬およびＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現）
異なる１０人の被験体それぞれからの、健常なヒトの皮膚および乾癬性の皮膚のサンプルを、組織学的方法により分析した。染色を、抗ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０抗体またはコントロールＩｇＧ２ａ抗体（カタログＮｏ．Ｍ６８１７８；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）（両方ともペルオキシダーゼＡＥＣ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）でタグ化した）で行った。２つの異なるクローンに由来する抗ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０抗体を用いた。ここで、両方の供給源の抗ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０からの結果は、互いに一致した。染色を、ケラチノサイト、毛包、およびエクリン腺で評価した。１０人全ての正常な被験体のケラチノサイトの染色は、陰性であった。１０人の正常被験体の毛包およびエクリン腺の染色は、陰性であるかまたは低い範囲であった。１０人の乾癬被験体のケラチノサイトの染色は高く、毛包およびエクリン腺の染色は、比較的低かった。結果により、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０の発現と乾癬との間の有意な関係が示された。

（配列の識別）
配列番号１はヒト胸腺の間質細胞である（ｈＴＳＬＰ／ＩＬ−５０）。
配列番号２はＩＬ−７Ｒ−α鎖である。
配列番号３はＴＳＬＰ受容体（ＴＳＬＰＲ）である。

本明細書中の全ての引用は、各個々の刊行物、特許出願、または特許が、具体的かつ個々に、全ての図および表を含め、参考として援用されることが示されるのと同程度に、本明細書中に参考として援用される。

本発明の多くの改変およびバリエーションは、当業者に明らかなように、本発明の目的、趣旨および発明の範囲を保護するように、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスの工程に適合するように行われ得る。全てのそのような改変は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書に添付した請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本明細書中に記載される特定の実施形態は、例示によってのみ提供され、本発明は、添付の請求の範囲によって権利が与えられる等価物の完全な範囲とともに、請求の範囲の用語によって限定されるべきである；および本発明は、例示によって本明細書中に示された特定の実施形態に限定されるべきでない。

【配列表】

Claims (21)

1. Ｔ細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ）刺激を調節する方法であって、該方法は、以下の工程：
   該ＡＰＣと、
   ａ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプター（ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ）（配列番号２、３）のアゴニスト；または
   ｂ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニスト、
   とを接触させる工程、
   を包含する、方法。
2. 請求項１に記載の方法であって、前記Ｔ細胞は、非刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞、中心的記憶Ｔ細胞、またはエフェクター記憶Ｔ細胞である、方法。
3. 請求項１に記載の方法，前記ＡＰＣは、ＣＤ１１ｃ^＋樹状細胞（ＤＣ）である、方法。
4. 請求項１に記載の方法であって、前記刺激は、前記Ｔ細胞の増殖を刺激する、方法。
5. 請求項４に記載の方法であって、前記増殖は、ポリクローン性である、方法。
6. 請求項１に記載の方法であって、前記ＡＰＣと前記Ｔ細胞との間の前記相互作用は、自己由来であるかまたは同種異系である、方法。
7. 請求項６に記載の方法であって、前記相互作用は、自己由来であり、中心的記憶Ｔ細胞表現型を生じる、方法。
8. 請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストまたはアンタゴニストは、以下：
   ａ）ヒト化抗体；
   ｂ）モノクローナル抗体；
   ｃ）ポリクローナル抗体；
   ｄ）Ｆａｂフラグメント；
   ｅ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント；または
   ｆ）抗体のペプチド模倣物
   を含む、方法。
9. 請求項１に記載の方法であって、前記アゴニストは、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）またはその抗原性フラグメントを含む、方法。
10. 免疫障害に罹患している被験体を処置する方法であって、該方法は、有効量の、以下の（ａ）または（ｂ）：
    ａ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアゴニスト；または
    ｂ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニスト
    で処置する工程、あるいは該（ａ）もしくは（ｂ）を投与する工程、
    を包含する、方法。
11. 請求項１０に記載の方法であって、前記免疫障害は、炎症状態であり、前記投与は、有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストをまたはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニストを含む、方法。
12. 請求項１１に記載の方法であって、前記免疫障害は、乾癬、乾癬性関節炎、または肺の炎症応答である、方法。
13. 請求項１２に記載の方法であって、前記肺の炎症疾患は、喘息または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、方法。
14. 請求項１０に記載の方法であって、前記免疫障害は、免疫不全であり、前記投与は、有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ５０（配列番号１）のアゴニストを含む、方法。
15. 請求項１４に記載の方法であって、前記免疫不全は、免疫抑制を引き起こす細胞除去またはウイルス感染の結果である、方法。
16. 請求項１０に記載の方法であって、前記投与は、自己由来または同種異系の抗原提示細胞（ＡＰＣ）のエキソビボ処置を含む、方法。
17. 請求項１６に記載の方法であって、前記投与は、有効量のＴＳＬＰ／ＩＬ５０（配列番号１）のアゴニストでのＡＰＣのエキソビボ処置を含む、方法。
18. 請求項１０に記載の方法であって、前記アゴニストまたはアンタゴニストは、以下：
    ａ）ヒト化抗体；
    ｂ）モノクローナル抗体；
    ｃ）ポリクローナル抗体；
    ｄ）Ｆａｂフラグメント；
    ｅ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント；または
    ｆ）抗体のペプチド模倣物
    を含む、方法。
19. 請求項１０に記載の方法であって、前記アゴニストは、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）またはその抗原性フラグメントを含む、方法。
20. Ｔ細胞によるＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３の生成を誘導する方法であって、該方法は、以下の工程：
    ａ）ＡＰＣと、ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０のアゴニストまたはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプターのアゴニストとを接触させる工程、および
    ｂ）該Ｔ細胞を該ＡＰＣで刺激する工程、
    を包含する、方法。
21. 被験体におけるＴＨ２応答を調節する方法であって、該方法は、以下の（ａ）、または（ｂ）：
    ａ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０レセプター（ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ）（配列番号２、３）のアゴニスト：または
    ｂ）ＴＳＬＰ／ＩＬ−５０（配列番号１）のアンタゴニストもしくはＴＳＬＰ／ＩＬ−５０Ｒ（配列番号２、３）のアンタゴニスト
    の投与を包含する、方法。