ES2304135T3 - Compuestos tipo pirrol, composiciones y metodos para tratar el cancer, tratar enfermedades virales y causar inmunosupresion. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de Fórmula general (XI): (Ver fórmula) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que: R1 es -H, -CH3, -CH2C6H5, -COCH3, -C(O)OC(CH3)3, o -C(O)CH2C6H5; R2 es un alquilo de cadena lineal C1-C10 o -CH2C6H5; R3 es -H, -CH3, -CH2C6H5, -C(O)OC(CH3)3, o -C(O)CH2C6H5; R4 es -H o -CH3; R5 es -H, un alquilo de cadena lineal C1-C10, -OR6, -F, -Cl, -Br, -I, -CN, -COOH, - COOR6, -NH2; NHCOR6, -NO2, -OH, o -OCH2C6H5; y R6 es un alquilo de cadena lineal C1-C6.
Description
\global\parskip0.900000\baselineskip
Compuestos tipo pirrol, composiciones, y métodos
para tratar el cáncer, tratar enfermedades virales y causar
inmunosupresión.
La presente invención se refiere a compuestos
tipo pirrol, composiciones que comprenden compuestos tipo pirrol, y
métodos útiles para tratar o prevenir el cáncer o un trastorno
neoplásico que comprende administrar un compuesto tipo pirrol. Los
compuestos, composiciones, y métodos de la invención también son
útiles para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa o célula
neoplásica. La presente invención también se refiere a compuestos
tipo pirrol, composiciones, y métodos útiles para tratar o prevenir
una infección viral. Los compuestos, composiciones, y métodos de la
invención también son útiles para inhibir la replicación o
infectividad de un virus. La presente invención también se refiere
a compuestos tipo pirrol, composiciones, y métodos útiles para
causar inmunosupresión. Los compuestos y métodos también son útiles
para tratar o prevenir una enfermedad autoinmune.
El cáncer afecta a aproximadamente 20 millones
de adultos y niños en todo el mundo, y este año, se diagnosticarán
9 millones de nuevos casos (International Agency for Research on
Cancer; www.irac.fr). De acuerdo con la American Cancer Society, se
espera que aproximadamente 563.100 americanos mueran de cáncer este
año, más de 1.500 personas al día. Desde 1990, solamente en los
Estados Unidos, se han perdido casi cinco millones de vidas por el
cáncer, y se han diagnosticado aproximadamente 12 millones de
nuevos casos.
Actualmente, la terapia contra el cáncer implica
cirugía, quimioterapia y/o tratamiento de radiación para erradicar
las células neoplásicas en un paciente (véase, por ejemplo,
Stockdale, 1998, "Principies of Cancer Patient Management", en
Scientific American: Medicine: vol: 3-Rubenstein y
Federman, eds., Capítulo 12, Sección IV). Todos estos enfoques
tienen inconvenientes significativos para el paciente. La cirugía,
por ejemplo, puede estar contraindicada debido a la salud del
paciente o puede ser inaceptable para el paciente. Además; la
cirugía puede no retirar completamente el tejido neoplásico. La
terapia de radiación es eficaz solamente cuando el tejido
neoplásico irradiado muestra una sensibilidad mayor a la radiación
que el tejido normal, y la terapia de radiación por tanto también
puede a menudo provocar graves efectos secundarios. (Id.)
Con respecto a la quimioterapia, hay una diversidad de agentes
quimioterapéuticos disponibles para el tratamiento de una
enfermedad neoplásica. Sin embargo, a pesar de la disponibilidad de
una diversidad de agentes quimioterapéuticos, la quimioterapia
tiene muchos inconvenientes (véase, por ejemplo, Stockdale, 1998,
"Principies Of Cancer Patient Management" en Scientific
American Medicine, vol. 3, Rubenstein y Federman, eds., cap. 12,
sec. 10). Casi todos los agentes quimioterapéuticos son tóxicos, y
la quimioterapia causa efectos secundarios significativos, y a
menudo peligrosos, incluyendo náuseas graves, depresión de la médula
ósea, inmunosupresión, etc. Además, muchas células tumorales son
resistentes o desarrollan resistencia a agentes quimioterapéuticos a
través de resistencia a múltiples fármacos.
Tamura et al., documento JP93086374,
describe metacicloprodigiosina y/o prodigiosina-25C
como útiles para tratar la leucemia, pero proporciona datos
solamente para la actividad de la prodigiosina-25C
contra células L-5178Y in vitro. Hirata
et al., documento JP-10120562, describe el
uso de cicloprodigiosina como un inhibidor de la bomba de protones
ATPasa vacuolar y establece que la cicloprodigiosina puede tener
actividad potenciadora anti-tumoral. Hirata et
al., documento JP-10120563 describe el uso de
cicloprodigiosina como un fármaco terapéutico para la leucemia,
como un inmunosupresor, y como un inductor de la apoptosis. El
documento JP61034403, de Kirin Brewery Co. Ltd, describe la
prodigiosina para aumentar el tiempo de supervivencia de ratones con
leucemia. Boger, 1988, J. Org. Chem. 53:1405-1415
describe la actividad citotóxica in vitro de la prodigiosina,
prodigioseno, y
2-metil-3-pentilprodigioseno
contra células con leucemia P388 de ratón. El National Cancer
Institute, http://dtp.nci.nih.gov, describe datos obtenidos de los
resultados de una exploración de una línea celular tumoral humana,
incluyendo la exploración de
butilcicloheptil-prodiginina HCl; sin embargo, la
exploración no proporciona indicaciones de que los compuestos de la
exploración sean selectivos para células
\hbox{cancerosas (por
ejemplo, en comparación con células normales).}
Por lo tanto, hay una necesidad significativa en
la técnica de nuevos compuestos y composiciones, y métodos que sean
útiles para tratar un cáncer o enfermedad neoplásica con los efectos
secundarios mencionados anteriormente reducidos o sin ellos.
Además, hay una necesidad de tratamientos contra el cáncer que
proporcionen terapias específicas de células cancerosas con
especificidad aumentada y toxicidad disminuida.
Además del cáncer, una gran cantidad de
enfermedades humanas y animales están provocadas por infecciones
virales virulentas y oportunistas (véase Belshe (Ed.) 1984
Textbook of Human Virology, PSG Publishing, Littleton, MA).
Las enfermedades virales de una amplia serie de tejidos, incluyendo
el tracto respiratorio, SNC, piel, tracto genitourinario, ojos,
orejas, sistema inmune, tracto gastrointestinal, y sistema
musculoesquelético, afectan a una gran cantidad de seres humanos de
todas las edades (véase la Tabla 328-2 En:
Wyngaarden y Smith, 1988, Cecil Textbook of medicine, 18ª Ed., W.B.
Saunders Co., Philadelphia, pág. 1750-1753).
Aunque se ha invertido un considerable esfuerzo
en el diseño de terapias anti-virales eficaces, las
infecciones virales siguen amenazando las vidas de millones de
personas en todo el mundo. En general, los intentos por desarrollar
fármacos anti-virales se han centrado en varias
fases del ciclo de vida viral (véase, por ejemplo, Mitsuya, H.,
et al., 1991, FASEBJ. 5:2369-2381, que
analiza el VIH). Sin embargo, un inconveniente común asociado con
el uso de muchos fármacos anti-virales actuales es
sus efectos secundarios nocivos, tales como toxicidad para el
hospedador o resistencia por ciertas cepas virales.
Por consiguiente, hay una necesidad en la
técnica de compuestos anti-virales, composiciones, y
métodos que permitan un tratamiento seguro y eficaz de una
enfermedad viral sin las desventajas mencionadas anteriormente.
El sistema inmune, cuando funciona
apropiadamente, protege a un individuo de infección y de crecimiento
de cánceres. Para realizar estas funciones, sin embargo, el sistema
inmune debe ser capaz de reconocer y montar un ataque contra
antígenos extraños (incluyendo antígenos específicos de cáncer),
pero no contra antígenos propios que están presentes en células
normales en todo el cuerpo.
Para mejorar su nivel de protección, es posible
estimular el sistema inmune. Las vacunas, incluyendo antígenos de
una única proteína tales como el toxoide diftérico, se usan
ampliamente para generar inmunidad contra un antígeno específico y
por tanto una enfermedad específica asociada con ese antígeno.
Cuando se desea la estimulación general del sistema inmune, este
tipo de estimulación a veces puede conseguirse usando agentes no
específicos tales como adyuvantes, interleuquinas, interferones, y
factores estimuladores de colonias.
Ocasionalmente, el sistema inmune pierde su
capacidad crítica de distinguir los antígenos propios de los no
propios. El asalto inmunológico resultante sobre los propios tejidos
del individuo puede adoptar la forma de una enfermedad autoinmune,
por ejemplo, lupus sistémico eritematoso, diabetes de Tipo 1, o
artritis reumatoide. En dicho caso; o como alternativa cuando el
individuo es el receptor de un órgano o tejido transplantado, es
deseable la supresión en lugar de la estimulación de la respuesta
inmune. La regulación negativa no específica de la respuesta inmune
se consigue típicamente por tratamiento con corticosteroides,
azatioprina, ciclosporina, tacrolimus (FK506), rapamicina, o
micofenolato mofetil. Ciertas inmunoglobulinas, incluyendo el
anticuerpo monoclonal OKT3, también se ha usado para este
propósito. La supresión de la inmunidad contra un antígeno
específico, llamada "inducción a tolerancia", también puede ser
posible. Los métodos que se han usado para inducir tolerancia
contra un antígeno particular incluyen administración intravenosa o
tópica repetida del antígeno en forma diluida, tratamiento con una
dosis muy alta del antígeno, y administración oral del antígeno.
Los agentes inmunosupresores actualmente usados,
tales como Ciclosporina A y esteroides, son potentes pero pueden
causar graves efectos secundarios de un modo dependiente de la
dosis.
Por consiguiente, hay una necesidad de nuevos
compuestos seguros, composiciones, y métodos que sean útiles para
tratar enfermedades que sean sensibles a la inmunomodulación.
La citación o identificación de cualquier
referencia en la Sección 2 de esta solicitud es sin la admisión de
que dicha referencia esté disponible como técnica anterior a la
presente invención.
La presente invención abarca nuevos compuestos
que tienen la Fórmula general (XI):
y sales farmacéuticamente
aceptables de los mismos, en los
que:
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{1}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CHC_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}, -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos son útiles para prevenir
un cáncer o enfermedad neoplásica en un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención. Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos también son útiles para
inhibir el crecimiento de una célula cancerosa o célula neoplásica.
Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable
de los mismos son útiles para tratar o prevenir una infección viral
en un paciente que necesite dicho tratamiento o prevención. Los
compuestos de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable de
los mismos también son útiles para inhibir la replicación o
infectividad de un virus. Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos también son útiles para
causar inmunosupresión en un paciente que lo necesite. Los
compuestos de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable de
los mismos también son útiles para tratar o prevenir un trastorno
autoinmune en un paciente que necesite dicho tratamiento o
prevención.
La presente invención proporciona composiciones
que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y una
cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo. Las composiciones que
comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de
Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo son
útiles para tratar o prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica en
un paciente que necesite dicho tratamiento o prevención. Estas
composiciones también son útiles para inhibir el crecimiento de una
célula cancerosa o célula neoplásica. Las composiciones que
comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto
de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo
también son útiles para tratar o prevenir una infección viral en un
paciente que necesite dicho tratamiento o prevención. Estas
composiciones también son útiles para inhibir la replicación o
infectividad de un virus. Las composiciones que comprenden un
vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de Fórmula (XI)
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo también son útiles
para causar inmunosupresión en un paciente que lo necesite. Las
composiciones que comprenden un vehículo farmacéuticamente
aceptable y un compuesto de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo también son útiles para tratar o prevenir un
trastorno
\hbox{autoinmune en un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención.}
La invención proporciona adicionalmente métodos
para tratar o prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica en un
paciente, que comprende administrar a un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención una cantidad eficaz de un compuesto de
Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa o célula
neoplásica, que comprenden poner en contacto una célula cancerosa o
célula neoplásica con una cantidad eficaz de un compuesto que tiene
la Fórmula general (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para tratar o prevenir una infección viral en un paciente, que
comprende administrar a un paciente que necesite dicho tratamiento o
prevención una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (XI) o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para inhibir la replicación o infectividad de un virus, que
comprende poner en contacto un virus o una célula infectada con
virus con una cantidad eficaz de un compuesto que tiene la Fórmula
general (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para causar inmunosupresión en un paciente, que comprende
administrar a un paciente que lo necesite una cantidad eficaz de un
compuesto de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para tratar o prevenir una enfermedad autoinmune en un paciente,
que comprende administrar a un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención una cantidad eficaz de un compuesto de
Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Ejemplos de halógenos son flúor, cloro, bromo, y
yodo.
Los ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
o ramificada C_{1}-C_{3} incluyen, aunque sin
limitación, metilo, etilo, 1-propilo, y
2-propilo.
Los ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
o ramificada C_{1}-C_{4} incluyen, aunque sin
limitación, metilo, etilo, 1-propilo,
2-propilo, 1-butilo,
2-butilo,
2-metil-1-propilo, y
2-metil-2-propilo.
Los ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
o ramificada C_{1}-C_{6} incluyen, aunque sin
limitación, metilo, etilo, 1-propilo,
2-propilo, 1-butilo,
2-butilo,
2-metil-1-propilo,
2-metil-2-propilo,
1-pentilo, 2-pentilo,
3-pentilo,
2-metil-1-butilo,
3-metil-1-butilo,
2-metil-3-butilo,
2,2-dimetil-1-propilo,
1-hexilo, 2-hexilo,
3-hexilo,
2-metil-1-pentilo,
3-metil-1-pentilo,
4-metil-1-pentilo,
2-metil-2-pentilo,
3-metil-2-pentilo,
4-metil-2-pentilo,
2,2-dimetil-1-butilo,
3,3-dimetil-1-butilo,
y
2-etil-1-butilo.
Los ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{5} incluyen, aunque sin limitación,
metilo, etilo, 1-propilo, 1-butilo,
y 1-pentilo.
Ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6} son metilo, etilo,
1-propilo, 1-butilo,
1-pentilo, y 1-hexilo.
Ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} son metilo, etilo,
1-propilo, 1-butilo,
1-pentilo, 1-hexilo,
1-heptilo, 1-octilo,
1-nonilo, y 1-decilo.
Ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{12} son metilo, etilo,
1-propilo, 1-butilo,
1-pentilo, 1-hexilo,
1-heptilo, 1-octilo,
1-nonilo, 1-decilo,
1-undecilo, y 1-dodecilo.
Ejemplos de grupos alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{15} son metilo, etilo,
1-propilo, 1-butilo,
1-pentilo, 1-hexilo,
1-heptilo, 1-octilo,
1-nonilo, 1-decilo,
1-undecilo, 1-dodecilo,
1-tridecilo, 1-tetradecilo, y
1-pentadecilo.
Los ejemplos de grupos cicloalquilo
C_{3}-C_{7} incluyen, aunque sin limitación,
ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y
cicloheptilo.
Las siguientes abreviaturas y sus definiciones,
salvo que se definan de otro modo, se usan en esta memoria
descriptiva:
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
Cuando se administra a un paciente, por ejemplo,
un mamífero para uso veterinario o un ser humano para uso clínico,
los compuestos tipo pirrol se administran en forma aislada. Como se
usa en este documento, "aislado" significa que los compuestos
tipo pirrol se separan a partir de otros componentes de (a) una
fuente natural, tal como una planta o célula, preferiblemente
cultivo bacteriano, o (b) una mezcla de reacción química orgánica
sintética. Preferiblemente, mediante técnicas convencionales, los
compuestos tipo pirrol se purifican. Como se usa en este documento,
"purificado" significa que cuando se aísla, el aislado contiene
al menos un 95%, preferiblemente al menos un 98%, de un único
compuesto tipo pirrol en peso del aislado.
La Fig. 1 es un gráfico de barras que representa
la supervivencia celular después de 72 horas de tratamiento con
Compuesto 79
(4-metoxi-5-(1H-indol-2il-metileno)-2,2'-bi-1H-pirrol).
La presente invención abarca nuevos compuestos
que tienen la Fórmula general (XI) y sales farmacéuticamente
aceptables de los mismos, en los que:
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos son útiles para tratar o
prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica en un paciente que
necesite dicho tratamiento o prevención. Los compuestos de Fórmula
(XI) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos también son
útiles para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa o célula
neoplásica. Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos son útiles para tratar o
prevenir una infección viral en un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención. Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos también son útiles para
inhibir la replicación o infectividad de un virus. Los compuestos de
Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos
también son útiles para causar inmunosupresión en un paciente que
lo necesite. Los compuestos de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos también son útiles para
tratar una enfermedad autoinmune en un paciente que necesite dicho
tratamiento o
prevención.
prevención.
Una subclase preferida de los compuestos de
Fórmula (XI) es aquella en la que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3}.
Una subclase más preferida de los compuestos de
Fórmula (XI) es aquella en la que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es-H o Cl.
La presente invención también proporciona
composiciones que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable
y una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (XI) o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, en las que, en el compuesto
de Fórmula (XI):
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Las composiciones que comprenden un vehículo
farmacéuticamente aceptable y un compuesto de Fórmula (XI) o una
sal farmacéuticamente aceptable del mismo son útiles para tratar o
prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica en un paciente que
necesite dicho tratamiento o prevención. Estas composiciones también
son útiles para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa o
célula neoplásica. Las composiciones que comprenden un vehículo
farmacéuticamente aceptable y un compuesto de Fórmula (XI) o una
sal farmacéuticamente aceptable del mismo son útiles para tratar o
prevenir una infección viral en un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención. Estas composiciones también son útiles
para inhibir la replicación o infectividad de un virus. Las
composiciones que comprenden un vehículo farmacéuticamente
aceptable y un compuesto de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo también son útiles para causar inmunosupresión
en un paciente que lo necesite. Las composiciones que comprenden un
vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de Fórmula (XI)
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo también son útiles
para tratar una enfermedad autoinmune en un paciente que necesite
dicho tratamiento o prevención.
Una subclase preferida de las composiciones que
comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto
de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es
aquella en la que, en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3}.
Una subclase más preferida de las composiciones
que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y un
compuesto de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo es aquella en la que, en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para tratar o prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica en un
paciente, que comprende administrar a un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención una cantidad eficaz de un compuesto de
Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en los
que, en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN, -COOH,
-COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Para su uso en los métodos para tratar o
prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica, una subclase preferida
de los compuestos de Fórmula (XI) es aquella en la que, en el
compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3,}
Para su uso en los métodos para tratar o
prevenir un cáncer o enfermedad neoplásica, una subclase más
preferida de los compuestos de Fórmula (XI) es aquella en la que,
en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa o célula
neoplásica, que comprende poner en contacto una célula cancerosa o
célula neoplásica con una cantidad eficaz de un compuesto que tiene
la Fórmula general (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo, en los que; en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H, -CH_{3}
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Para su uso en los métodos para inhibir el
crecimiento de un cáncer o célula neoplásica, una subclase preferida
de los compuestos de Fórmula (XI) es aquella en la que, en el
compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3}.
Para su uso en los métodos para inhibir el
crecimiento de un cáncer o célula neoplásica, una subclase más
preferida de los compuestos de Fórmula (XI) es aquella en la que, en
el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para tratar o prevenir una infección viral en un paciente, que
comprende administrar a un paciente que necesite dicho tratamiento o
prevención una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (XI) o
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en los que, en el
compuesto de Fórmula
(XI):
(XI):
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Para su uso en los presentes métodos para tratar
o prevenir una infección viral, una subclase preferida de los
compuestos de Fórmula (XI) es aquella en la que, en el compuesto de
Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3}.
Para su uso en los presentes métodos para tratar
o prevenir una infección viral, una subclase más preferida de los
compuestos de Fórmula (XI) es aquella en la que, en el compuesto de
Fórmula (XI):
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para inhibir la replicación o infectividad de un virus, que
comprende poner en contacto un virus o una célula infectada con
virus con una cantidad eficaz de un compuesto que tiene la Fórmula
general (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en los
que, en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3}
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Para su uso en los métodos para inhibir la
replicación o infectividad de un virus, una subclase preferida de
los compuestos de Fórmula (XI) son aquellos en los que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3.}
Para su uso en los métodos para inhibir la
replicación o infectividad de un virus, una subclase más preferida
de los compuestos de Fórmula (XI) son aquellos en los que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para causar inmunosupresión en un paciente, que comprende
administrar a un paciente que lo necesite una cantidad eficaz de un
compuesto de Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo, en los que, en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{3}C_{6}H_{5};
R_{2} es a alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{3}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Para su uso en los métodos para causar
inmunosupresión, una subclase preferida de los compuestos de Fórmula
(XI) son aquellos en los que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3,}
Para su uso en los métodos para causar
inmunosupresión, una subclase más preferida de los compuestos de
Fórmula (XI) son aquellos en los que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
La invención proporciona adicionalmente métodos
para tratar o prevenir una enfermedad autoinmune en un paciente,
que comprende administrar a un paciente que necesite dicho
tratamiento o prevención una cantidad eficaz de un compuesto de
Fórmula (XI) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en los
que, en el compuesto de Fórmula (XI):
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, -COOR_{6}, -NH_{2}; -NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
Para su uso en los métodos para tratar o
prevenir una enfermedad autoinmune, una subclase preferida de los
compuestos de Fórmula (XI) son aquellos en los que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3}.
Para su uso en los métodos para tratar o
prevenir una enfermedad autoinmune, una subclase más preferida de
los compuestos de Fórmula (XI) son aquellos en los que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
\vskip1.000000\baselineskip
Como se usa en este documento, la expresión
"compuestos tipo pirrol" significa, de forma colectiva, los
compuestos de Fórmula (XI) y racematos y enantiómeros de los
mismos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la invención pueden obtenerse
mediante síntesis orgánica convencional, por ejemplo, como se
describe a continuación. Los Esquemas A-O indican
métodos por los que pueden obtenerse los compuestos de la
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de Fórmula (XI) pueden obtenerse
usando síntesis orgánica convencional o por los métodos mostrados
en el Esquema L:
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\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
L
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
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El aldehído dipirrol 49 se condensa con el
compuesto 51 usando POCl, o H^{+} para proporcionar el compuesto
de Fórmula (XI).
El aldehído dipirrol 49 puede prepararse por el
método de D.L. Boger et al., J. Org. Chem, 1988, 53,
1405-1415. El compuesto 51 puede prepararse a
partir de materiales de partida disponibles en el mercado usando
métodos bien conocidos para los especialistas en la técnica (véase,
por ejemplo, B. Robinson, "The Fischer Indole Synthesis",
Wiley, NY, 1983; H. Ishii, Accts. Chem. Res., 1981, 14,
275-283; D.C. Soderberg et al., J. Org.
Chem., 1999, 64, 9731-9734, Anderson y Loader,
Synthesis, 1985, 353-364; y E. Abel et al.,
Chem. Comm., 2000, 433-
434).
434).
\newpage
Se proporcionan ejemplos específicos de la
síntesis de compuestos de Fórmula (XI) en los siguientes Esquemas
L.1., L.2., y L.3.:
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
L.1.
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\vskip1.000000\baselineskip
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Esquema
L.2.
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\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
L.3.
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Una vez que los compuestos de Fórmula (XI) se
han sintetizado, pueden purificarse o purificarse sustancialmente,
usando cromatografía convencional, recristalización u otras técnicas
de purificación conocidas para los especialistas en la técnica.
Un compuesto ilustrativo de Fórmula (XI) es:
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2-(4-Metoxi-1'H-[2,2']bipirrolil-5-ilidenometil)-1H-indol;
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
\vskip1.000000\baselineskip
Como se usa en este documento, los nuevos
compuestos de la presente invención, los compuestos de las presentes
composiciones, los compuestos de los presentes métodos, y sales
farmacéuticamente aceptables de estos compuestos se mencionan
colectivamente en este documento como "compuestos tipo
pirrol".
Debido a la actividad de los compuestos tipo
pirrol, los compuestos tipo pirrol son ventajosamente útiles en
medicina veterinaria y humana. Por ejemplo, los compuestos tipo
pirrol son útiles para el tratamiento o prevención de un cáncer o
enfermedad neoplásica o para inhibir el crecimiento de una célula
cancerosa o célula neoplásica. Los compuestos tipo pirrol también
son útiles para el tratamiento o prevención de una infección viral
o para inhibir la replicación o infectividad de un virus. Los
compuestos tipo pirrol también son útiles para causar
inmunosupresión. Los compuestos tipo pirrol también son útiles para
tratar o prevenir una enfermedad autoinmu-
ne.
ne.
Cuando se administran a un sujeto, por ejemplo,
un animal para uso veterinario o a un ser humano para uso clínico,
o cuando se hacen entrar en contacto con una célula o tejido, los
compuestos tipo pirrol están preferiblemente en forma aislada. Por
"aislado" se entiende que antes de la administración o
contacto, un compuesto tipo pirrol se separa de otros componentes
de una mezcla de reacción química orgánica sintética o fuente del
producto natural, por ejemplo, materia vegetal, cultivo tisular,
caldo bacteriano, etc. Preferiblemente, los compuestos tipo pirrol
se aíslan mediante técnicas convencionales, por ejemplo, extracción
seguida de cromatografía, recristalización, u otra técnica
convencional. Cuando están en forma aislada, los compuestos tipo
pirrol son al menos un 90%, preferiblemente al menos un 95%, de un
único compuesto tipo pirrol en peso de lo que se aísla.
"Compuesto tipo pirrol único" significa un enantiómero o un
racemato de un compuesto tipo pirrol.
La invención proporciona métodos de tratamiento
y profilaxis por administración a un sujeto de una cantidad eficaz
de un compuesto tipo pirrol. El sujeto es preferiblemente un animal,
incluyendo, aunque sin limitación, un animal tal como una vaca,
caballo, oveja, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, ratón,
rata, conejo, cobaya, etc., y es más preferiblemente un mamífero, y
mucho más preferiblemente un ser humano.
Las presentes composiciones, que comprenden uno
o más compuestos tipo pirrol, pueden administrarse por cualquier
vía conveniente, por ejemplo por infusión o inyección en embolada,
por absorción a través de los revestimientos epitelial o
mucocutáneo (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal,
etc.) y pueden administrarse junto con otro agente biológicamente
activo. La administración puede ser sistémica o local. Se conocen
diversos sistemas de suministro, por ejemplo, encapsulación en
liposomas, micropartículas, microcápsulas, cápsulas, etc., y pueden
usarse para administrar un compuesto tipo pirrol de la invención. En
ciertas realizaciones, se administra más de un compuesto tipo
pirrol de la invención a un sujeto. Los métodos de administración
incluyen, aunque sin limitación, intradérmico, intramuscular,
intraperitoneal, intravenoso, subcutáneo, intranasal, epidural,
oral, sublingual, intranasal, intracerebral, intravaginal,
transdérmico, rectal, por inhalación, o tópico a las orejas, nariz,
ojos, o piel. El modo preferido de administración se deja a la
discreción del médico, y dependerá en parte del sitio de la
afección médica (tal como el sitio del cáncer o la infección
viral).
En realizaciones específicas, puede ser deseable
administrar uno o más compuestos tipo pirrol de la invención de
forma local al área que necesita tratamiento. Esto puede
conseguirse, por ejemplo, y sin ser a modo de limitación, por
infusión local durante la cirugía, aplicación tópica, por ejemplo,
junto con un vendaje para las heridas después de la cirugía, por
inyección, mediante un catéter, mediante un supositorio, o mediante
un implante, siendo dicho implante de un material poroso, no poroso,
o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas
silásticas, o fibras. En una realización, la administración puede
ser por inyección directa en el sitio (o sitio anterior) de un
cáncer, tumor o tejido neoplásico o pre-neoplásico.
En otra realización, la administración puede ser por inyección
directa en el sitio (o sitio anterior) de una infección viral,
transplante de tejido u órgano, o respuesta
autoinmune.
autoinmune.
En ciertas realizaciones, puede ser deseable
introducir uno o más compuestos tipo pirrol de la invención en el
sistema nervioso central por cualquier vía adecuada, incluyendo
inyección intraventricular e intratecal. La inyección
intraventricular puede estar facilitada por un catéter
intraventricular, por ejemplo, unido a un depósito, tal como un
depósito Ommaya.
También puede emplearse administración pulmonar,
por ejemplo, por el uso de un inhalador o nebulizador, y una
formulación con un agente de aerosol, o por perfusión en un
fluorocarbono o tensioactivo pulmonar sintético. En ciertas
realizaciones, los compuestos tipo pirrol pueden formularse en forma
de supositorio, con aglutinantes tradicionales y vehículos tales
como triglicéridos.
En otra realización, los compuestos tipo pirrol
de la invención pueden suministrarse en una vesícula, en particular
un liposoma (véase Langer, Science 249:1527-1533
(1990); Treat et al., en Liposomes in the Therapy of
Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein y
Fidler (eds.), Liss, New York, pág. 353-365 (1989);
Lopez-Berestein, ibid, pág.
317-327; véase en líneas generales ibid)
En otra realización más, los compuestos tipo
pirrol pueden suministrarse en un sistema de liberación controlada.
En una realización, puede usarse una bomba (véase Langer,
supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987);
Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al.,
N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)). En otra realización, pueden
usarse materiales poliméricos (véase Medical Applications of
Controlled Release, Langer y Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton,
Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design
and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley, New York (1984);
Ranger y Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61
(1983); véase también Levy et al., Science 228:190 (1985);
During et al., Ann. Neurol. 25:351 (1989); Howard et
al., J. Neurosurg. 71:105 (1989)). En otra realización más,
puede colocarse un sistema de liberación controlada en la
proximidad de la diana de los compuestos tipo pirrol, por ejemplo,
el cerebro, requiriendo de este modo solamente una fracción de la
dosis sistémica (véase,por ejemplo, Goodson, en Medical Applications
of Controlled Release, supra, vol. 2, pág.
115-138 (1984)). Pueden usarse otros sistemas de
liberación controlada analizados en la revisión de Langer (Science
249:1527-1533 (1990)).
Las presentes composiciones contendrán una
cantidad eficaz de un compuesto tipo pirrol, preferiblemente en
forma purificada, junto con una cantidad adecuada de un vehículo
farmacéuticamente aceptable para proporcionar la forma para la
administración apropiada al paciente.
En una realización específica, el término
"farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una
agencia reguladora del gobierno federal o estatal o enumerado en la
Farmacopea de los Estados Unidos u otra farmacopea generalmente
reconocida para su uso en animales, y más particularmente en seres
humanos. El término "vehículo" se refiere a un diluyente,
adyuvante, excipiente, o medio con el que se administra un compuesto
tipo pirrol. Dichos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos,
tales como agua y aceites, incluyendo los de origen del petróleo,
animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite
de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Los
vehículos farmacéuticos pueden ser solución salina, goma arábiga,
gelatina, pasta de almidón, talco, queratina, sílice coloidal,
urea, y similares. Además, pueden usarse agentes auxiliares,
estabilizantes, espesantes, lubricantes y colorantes. Cuando se
administran a un sujeto, los compuestos tipo pirrol y los vehículos
farmacéuticamente aceptables preferiblemente son estériles. El agua
es un vehículo preferido cuando el compuesto tipo pirrol se
administra por vía intravenosa. También pueden emplearse soluciones
salinas y soluciones de dextrosa y glicerol acuosas como vehículos
líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los
vehículos farmacéuticos adecuados también incluyen excipientes tales
como almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz,
harina, tiza, gel de sílice, estearato sódico, monoestearato de
glicerol, talco, cloruro sódico, leche desnatada en polvo, glicerol,
propileno, glicol, agua, etanol y similares. Las presentes
composiciones, si se desea, también pueden contener cantidades
minoritarias de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes
tamponantes del
pH.
pH.
Las presentes composiciones pueden tomar la
forma de soluciones, suspensiones, emulsión, comprimidos, píldoras,
gránulos, cápsulas, cápsulas que contienen líquidos, polvos,
formulaciones de liberación sostenida, supositorios, emulsiones,
aerosoles, pulverizaciones, suspensiones, o cualquier otra forma
adecuada para su uso. En una realización, el vehículo
farmacéuticamente aceptable es una cápsula (véase, por ejemplo, la
Patente de Estados Unidos Nº 5.698.155). Otros ejemplos de
vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's
Pharmaceutical Sciences" por E.W. Martin.
La expresión "sal(es) farmacéuticamente
aceptable(s)", como se usa en este documento incluye,
aunque sin limitación, sales de grupos ácidos o básicos que pueden
estar presentes en compuestos usados en las presentes composiciones.
Los compuestos incluidos en las presentes composiciones que son de
naturaleza básica son capaces de formar una amplia diversidad de
sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Los ácidos que
pueden usarse para preparar sales de adición de ácidos
farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos básicos son los
que forman sales de adición de ácidos no tóxicas, es decir, sales
que contienen aniones farmacológicamente aceptables, incluyendo,
aunque sin limitación, sales de ácido sulfúrico, cítrico, maleico,
acético, oxálico, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato,
sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, acetato,
lactato, salicilato, citrato, citrato ácido, tartrato, oleato,
tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato,
gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato,
benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato,
bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato (es
decir,
1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)).
Los compuestos incluidos en las presentes composiciones que
incluyen un resto amino pueden formar sales farmacéutica o
cosméticamente aceptables con diversos aminoácidos, además de los
ácidos mencionados anteriormente. Los compuestos, incluidos en las
presentes composiciones, que son de naturaleza ácida son capaces de
formar sales de bases con diversos cationes farmacológica o
cosméticamente aceptables. Los ejemplos de dichas sales incluyen
sales de metales alcalinos o alcalino-térreos y,
particularmente, sales de calcio, magnesio, sodio, litio, zinc,
potasio, y hierro.
En una realización preferida, los compuestos
tipo pirrol se formulan de acuerdo con procedimientos rutinarios en
forma de una composición farmacéutica adaptada para administración
intravenosa para seres humanos. Típicamente, los compuestos tipo
pirrol para administración intravenosa son soluciones en tampón
acuoso isotónico estéril. Cuando sea necesario, las composiciones
también pueden incluir un agente solubilizante. Las composiciones
para administración intravenosa pueden incluir opcionalmente un
anestésico local tal como lignocaína para aliviar el dolor en el
sitio de la inyección. Generalmente, los ingredientes se suministran
por separado o mezclados juntos en forma de dosificación unitaria,
por ejemplo, en forma de un polvo liofilizado seco o concentrado
sin agua en un recipiente herméticamente precintado tal como una
ampolla o sobre que indique la cantidad de agente activo. Cuando el
compuesto tipo pirrol tiene que administrarse por infusión, puede
distribuirse, por ejemplo, con un frasco de infusión que contiene
agua o solución salina de calidad farmacéutica estéril. Cuando el
compuesto tipo pirrol se administra por inyección, puede
proporcionarse una ampolla de agua estéril para inyección o
solución salina de modo que los ingredientes puedan mezclarse antes
de la administración.
Las composiciones para suministro oral pueden
estar en forma de comprimidos, grageas, suspensiones acuosas u
oleosas, gránulos, polvos, emulsiones, cápsulas, jarabes, o
elixires, por ejemplo. Las composiciones administradas por vía oral
pueden contener uno o más agentes opcionales, por ejemplo, agentes
edulcorantes tales como fructosa, aspartamo o sacarina; agentes
aromatizantes tales como menta, aceite de gaulteria, o cereza;
agentes colorantes; y agentes conservantes, para proporcionar una
preparación farmacéuticamente apetecible. Además, cuando están en
forma de comprimido o píldora, las composiciones pueden estar
recubiertas para una disgregación y absorción retardadas en el
tracto gastrointestinal proporcionando de este modo una acción
sostenida durante un periodo prolongado de tiempo. También son
adecuadas membranas selectivamente permeables que rodean un
compuesto de acción osmóticamente activo para compuestos tipo
pirrol administrados por vía oral. En estas últimas plataformas, el
fluido del entorno que rodea la cápsula empapa el compuesto de
acción, que se hincha para desplazar el agente o composición de
agente a través de una abertura. Estas plataformas de suministro
pueden proporcionar un perfil de suministro de orden esencialmente
cero en oposición a los perfiles con picos de formulaciones de
liberación inmediata. También puede usarse un material de retardo en
el tiempo tal como monoestearato de glicerol o estearato de
glicerol. Las composiciones orales pueden incluir vehículos
convencionales tales como manitol, lactosa, almidón, estearato de
magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, etc.
Dichos vehículos son preferiblemente de calidad
farmacéutica.
farmacéutica.
La cantidad del compuesto tipo pirrol que será
eficaz en el tratamiento de un trastorno o afección particular
dependerá de la naturaleza del trastorno o afección, y puede
determinarse por técnicas clínicas convencionales. Además, pueden
emplearse opcionalmente ensayos in vitro o in vivo
para ayudar a identificar los intervalos de dosificación óptimos.
La dosis precisa a emplear en las composiciones también dependerá de
la vía de administración, y la gravedad de la enfermedad o
trastorno, y debe decidirse de acuerdo con el criterio del médico y
las circunstancias de cada paciente. Sin embargo, los intervalos de
dosificación adecuados para administración intravenosa generalmente
son de aproximadamente 10 microgramos-1 miligramo,
preferiblemente aproximadamente 20-500 microgramos
de compuesto tipo pirrol por kilogramo de peso corporal. En
realizaciones preferidas específicas de la invención, la dosis i.v.
es de 10-40, 30-60,
60-100, o 100-200 microgramos por
kilogramo de peso corporal. En otras realizaciones, la dosis i.v.
es de 75-150, 150-250,
250-375 o 375-500 microgramos por
kilogramo de peso corporal. Los intervalos de dosificación
adecuados para administración intranasal generalmente son de
aproximadamente 0,01 pg/kg de peso corporal a 1 mg/kg de peso
corporal. Los supositorios generalmente contienen ingrediente activo
en el intervalo del 0,5% al 10% en peso. Las composiciones orales
preferiblemente contienen del 10% al 95% de ingrediente activo. En
realizaciones preferidas específicas de la invención, los intervalos
de dosis adecuados para administración oral generalmente son de
aproximadamente 0,1 microgramos-10 miligramos,
preferiblemente aproximadamente 0,75 microgramos-1
miligramo, y más preferiblemente aproximadamente
1-500 microgramos de compuesto activo por kilogramo
de peso corporal. En realizaciones preferidas específicas, la dosis
oral es de 1-10, 10-30,
30-90, o 90-150 microgramos por
kilogramo de peso corporal. En otras realizaciones, la dosis oral es
de 150-250, 250-325,
325-450 o 450-1000 microgramos por
kilogramo de peso corporal. Las dosis eficaces pueden extrapolarse
de curvas de respuesta a dosis obtenidas de sistemas de ensayo
in vitro o modelos animales. Dichos moldeos animales y
sistemas son bien conocidos en la
técnica.
técnica.
La invención también proporciona envases o kits
farmacéuticos que comprenden uno o más recipientes llenados con uno
o más compuestos tipo pirrol de la invención. Opcionalmente asociado
con dicho(s) recipiente(s) puede haber un aviso en el
impreso prescrito por una agencia gubernamental que regula la
fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos,
reflejando dicho aviso la aprobación por la agencia de fabricación,
uso o venta para administración humana. En cierta realización
preferida, por ejemplo, cuando se administra para el tratamiento o
prevención del cáncer, el kit también puede contener uno o más
agentes quimioterapéuticos útiles para tratar un cáncer o
enfermedad neoplásica a administrar en combinación con un compuesto
tipo pirrol de la invención. En ciertas realizaciones preferidas,
por ejemplo, cuando se administra para el tratamiento o prevención
de una enfermedad viral o autoinmune, el kit puede contener uno o
más compuestos tipo pirrol de la invención y uno o más agentes
anti-virales o inmunosupresores.
Los compuestos tipo pirrol de la invención
preferiblemente se ensayan in vitro, y después in
vivo, para la actividad terapéutica o profiláctica deseada,
antes de su uso en seres humanos. Por ejemplo, pueden usarse
ensayos in vitro para determinar si se prefiere la
administración de un compuesto tipo pirrol específico o una
combinación de compuestos tipo pirrol.
En una realización, se cultiva una muestra
tisular de un paciente en cultivo, y se pone en contacto o se le
administra de otro modo un compuesto tipo pirrol, y se observa el
efecto de dicho compuesto tipo pirrol sobre la muestra tisular y se
compara con un tejido que no se ha puesto en contacto. En otras
realizaciones, se usa un modelo de cultivo celular en el que las
células del cultivo celular se ponen en contacto o se les administra
de otro modo un compuesto tipo pirrol, y se observa el efecto de
dicho compuesto tipo pirrol sobre la muestra tisular y se compara
con un cultivo celular que no se ha puesto en contacto.
Generalmente, un nivel inferior de proliferación o supervivencia de
las células que están en contacto en comparación con las células que
no se han puesto en contacto indica que el compuesto tipo pirrol es
eficaz para tratar al paciente. Dichos compuestos tipo pirrol
también pueden demostrar ser eficaces y seguros usando sistemas de
modelos animales.
Los especialistas en la técnica conocerán otros
métodos y están dentro del alcance de la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Puede demostrarse que los compuestos tipo pirrol
inhiben la proliferación de células tumorales, transformación
celular y tumorigénesis in vitro e in vivo usando una
diversidad de ensayos conocidos en la técnica, o descritos en este
documento. Dichos ensayos pueden usar células de una línea de
células cancerosas, o células de un paciente. Pueden usarse muchos
ensayos bien conocidos en la técnica para evaluar dicha
supervivencia y/o crecimiento; por ejemplo, puede ensayarse la
proliferación celular midiendo la incorporación de
(^{3}H)-timidina, por recuento celular directo,
detectando cambios en la transcripción, traducción o actividad de
genes conocidos tales como proto-oncogenes (por
ejemplo, fos, myc) o marcadores del ciclo celular (Rb,
cdc2, ciclina A, D1, D2, D3, E, etc.). Los niveles de dicha
proteína y ARNm y actividad pueden determinarse por cualquier
método bien conocido en la técnica. Por ejemplo, las proteínas
pueden cuantificarse por métodos de inmunodiagnóstico conocidos
tales como transferencia de Western o inmunoprecipitación usando
anticuerpos disponibles en el mercado (por ejemplo, muchos
anticuerpos contra marcadores del ciclo celular son de Santa Cruz
Inc.). El ARNm puede cuantificarse por métodos que son bien
conocidos y rutinarios en la técnica, por ejemplo por análisis de
northern, protección contra RNasa, la reacción en cadena de la
polimerasa en combinación con la transcripción inversa, etc. La
viabilidad celular puede evaluarse usando tinción con azul tripano u
otros marcadores de muerte o viabilidad celular conocidos en la
técnica. La diferenciación puede evaluarse de forma visual en base a
cambios en la morfología,
etc.
etc.
La presente invención proporciona el análisis
del ciclo celular y proliferación celular por una diversidad de
técnicas conocidas en la técnica, incluyendo, aunque sin limitación,
las siguientes:
Como un ejemplo, puede usarse la incorporación
de bromodesoxiuridina (BRDU) como un ensayo para identificar
células en proliferación. El ensayo de BRDU identifica una población
celular que está experimentando síntesis de ADN por la
incorporación de BRDU en el ADN recién sintetizado. El ADN recién
sintetizado después puede detectarse usando un anticuerpo
anti-BRDU (véase Hoshino et al., 1986, Int.
J. Cancer 38, 369; Campana et al., 1988, J. Immunol. Meth.
107, 79).
La proliferación celular también puede
examinarse usando la incorporación de
(^{3}H)-timidina (véase, por ejemplo, Chen, J.,
1996, Oncogene 13:1395-403; Jeoung, J., 1995, J.
Biol. Chem. 270:18367-73). Este ensayo permite la
caracterización cuantitativa de la síntesis de ADN en fase S. En
este ensayo, las células que están sintetizando ADN incorporarán
(^{3}H)-timidina en el ADN recién sintetizado. La
incorporación después puede medirse por técnicas convencionales en
la técnica tales como recuento de radioisótopos en un contador de
centelleo (por ejemplo Beckman LS 3800 Liquid Scintillation
Counter).
La detección del antígeno nuclear celular
proliferante (PCNA) también puede usarse para medir la proliferación
celular. El PCNA es una proteína de 36 kilodalton cuya expresión
está elevada en células en proliferación, particularmente en las
fases G1 temprana y S del ciclo celular y por lo tanto puede servir
como un marcador de células en proliferación. Las células positivas
se identifican por inmunotinción usando un anticuerpo
anti-PCNA (véase Li et al., 1996, Curr.
Biol. 6:189-199; Vassilev et al., 1995, J.
Cell Sci. 108:1205-15).
La proliferación celular puede medirse contando
muestras de una población celular en el tiempo (por ejemplo,
recuentos celulares diarios). Las células pueden contarse usando un
hemocitómetro y microscopía óptica (por ejemplo, hemocitómetro
HyLite, Hausser Scientific). La cantidad de células puede
representarse frente al tiempo para obtener una curva de
crecimiento para la población de interés. En una realización
preferida, las células contadas por este método se mezclan primero
con el colorante azul tripano (Sigma), de modo que las células
vivas excluyan el colorante, y se cuenten como miembros viables de
la población.
El contenido de ADN y/o el índice mitótico de
las células puede medirse, por ejemplo, en base al valor de ploidía
del ADN de la célula. Por ejemplo, las células en la fase G1 del
ciclo celular generalmente contienen un valor de ploidía de ADN 2N.
Las células en las que el ADN se ha replicado pero no han progresado
a través de la mitosis (por ejemplo, células en fase S) mostrarán
un valor de ploidía mayor de 2N y hasta 4N en el contenido de ADN.
El valor de ploidía y la cinética del ciclo celular puede medirse
adicionalmente usando un ensayo con yoduro de propidio (véase, por
ejemplo, Turner, T., et al., 1998, Prostate
34:175-81). Como alternativa, la ploidía del ADN
puede determinarse por cuantificación de la tinción de Feulgen del
ADN (que se une a ADN de un modo estequiométrico) en un sistema de
tinción microdensitométrica informatizado (véase, por ejemplo,
Bacus, S., 1989, Am. J. Pathol. 135:783-92). En
otra realización, el contenido de ADN puede analizarse por
preparación de una distribución cromosómica (Zabalou, S., 1994,
Hereditas. 120:127-40; Pardue, 1994, Meth. Cell
Biol. 44:333-
351).
351).
La expresión de proteínas del ciclo celular (por
ejemplo, CycA. CycB, CycE, CycD, cdc2, Cdk4/6, Rb, p21, p27, etc.)
proporciona información crucial con relación al estado proliferativo
de una célula o población de células. Por ejemplo, la
identificación en una vía de señalización
anti-proliferación puede estar indicada por la
inducción de niveles aumentados de p21^{cip\ 1}. Niveles
aumentados de la expresión de p21 en células provoca la entrada
retardada en G1 del ciclo celular (Harper et al., 1993, Cell
75:805-816; Li et al., 1996, Curr. Biol. 6:
189-199). La inducción de p21 puede identificarse
por inmunotinción usando un anticuerpo anti-p21
específico disponible en el mercado (por ejemplo, Santa Cruz).
Asimismo, las proteínas del ciclo celular pueden examinarse por
análisis de transferencia de Western usando anticuerpos disponibles
en el mercado. En otra realización, las poblaciones celulares se
sincronizan antes de la detección de una proteína del ciclo celular.
Las proteínas del ciclo celular también se pueden detectar por
análisis FACS (clasificación celular activada por fluorescencia)
usando anticuerpos contra la proteína de
interés.
interés.
La detección de cambios en la longitud del ciclo
celular o velocidad del ciclo celular también puede usarse para
medir la inhibición de la proliferación celular por los compuestos
tipo pirrol de la invención. En una realización, la longitud del
ciclo celular se determina por el tiempo de duplicación de una
población de células (por ejemplo, usando células en contacto o no
con uno o más compuestos tipo pirrol de la invención). En otra
realización, se usa el análisis FACS para analizar la fase del
progreso del ciclo celular, o purificar fracciones G1, S, y G2/M
(véase, por ejemplo, Delia, D. et al., 1997, Oncogene
14:2137-47).
El fallo del(de los) punto(s) de
control del ciclo celular, y/o la inducción del(de los)
punto(s) de control del ciclo celular, puede examinarse por
los métodos descritos en este documento, o por cualquier método
conocido en la técnica. Sin limitación, un punto de control del
ciclo celular es un mecanismo que asegura que suceden ciertos
acontecimientos celulares en un orden particular. Los genes de punto
de control se definen por mutaciones que permiten que sucedan
acontecimientos posteriores sin completarse anteriormente un
acontecimiento previo (Weinert, T., y Hartwell, L., 1993, Genetics,
134:63-80). La inducción o inhibición de los genes
de punto de control del ciclo celular pueden ensayarse, por
ejemplo, por análisis de transferencia de Western, o por
inmunotinción, etc. El fallo de los puntos de control del ciclo
celular puede evaluarse adicionalmente por el progreso de una
célula a través del punto de control sin la existencia previa de
acontecimientos específicos (por ejemplo, el progreso en la mitosis
son la replicación completa del ADN genómico).
Además de los efectos de la expresión de una
proteína particular del ciclo celular, la actividad y modificaciones
post-traduccionales de proteínas implicadas en el
ciclo celular pueden desempeñar un papel integral en la regulación
y estado proliferativo de una célula. La invención proporciona
ensayos implicados en la detección de modificaciones
post-traduccionales (por ejemplo, fosforilación) por
cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, están
disponibles en el mercado anticuerpos que detectan restos de
tirosina fosforilados, y pueden usarse en análisis de transferencia
de Western para detectar proteínas con dichas modificaciones. En
otro ejemplo, pueden detectarse modificaciones tales como
miristilación, en cromatografía en capa fina o h.p.l.c. de fase
inversa (véase, por ejemplo, Glover, C, 1988, Biochem. J.
250:485-91; Paige, L, 1988, Biochem J.;
250:485-91).
La actividad de la señalización y proteínas del
ciclo celular y/o complejos proteicos a menudo está mediada por una
actividad quinasa. La presente invención proporciona el análisis de
la actividad quinasa por ensayos tales como el ensayo de histona H1
(véase, por ejemplo, Delia, D. et al., 1997, Oncogene
14:2137-47).
También se puede demostrar que los compuestos
tipo pirrol alteran la proliferación celular en células cultivadas
in vitro usando métodos que son bien conocidos en la técnica.
Los ejemplos específicos de modelos de cultivo celular incluyen,
aunque sin limitación, para cáncer pulmonar, células tumorales de
pulmón de rata primarias (Swafford et al., 1997, Mol. Cell.
Biol., 17:1366-1374) y líneas celulares de cáncer
indiferenciado macrocítico (Mabry et al., 1991, Cancer
Cells, 3:53-58); líneas de células colorrectales
para cáncer de colon (Park y Gazdar, 1996, J. Cell Biochem. Supl.
24:131-141); múltiples líneas celulares establecidas
para cáncer de mama (Hambly et al., 1997, Breast Cancer Res.
Treat. 43:247-258; Gierthy et al., 1997,
Chemosphere 34:1495-1505; Prasad y Church, 1997,
Biochem. Biophys. Res. Commun. 232: 14-19); varios
modelos celulares bien caracterizados para cáncer de próstata
(Webber et al., 1996, Prostate, Parte 1,
29:386-394; Parte 2, 30:58-64; y
Parte 3, 30:136-142; Boulikas, 1997, Anticancer
Res. 17: 1471-1505); para cánceres genitourinarios,
líneas celulares de cáncer de vejiga humana continua (Ribeiro et
al., 1997, Int. J. Radiat. Biol. 72:11-20);
cultivos orgánicos de carcinomas de células transitorias (Booth
et al., 1997 Lab Invest. 76:843-857) y
modelos de progreso de rata (Vet et al., 1997, Biochim.
Biophys Acta 1360:39-44); y líneas celulares
establecidas para leucemias y linfomas (Drexler, 1994, Leuk. Res.
18:919-927, Tohyama, 1997, Int. J. Hematol.
65:309-317).
También puede demostrarse que los compuestos
tipo pirrol inhiben la transformación celular (o progreso a fenotipo
maligno) in vitro. En esta realización, las células con un
fenotipo celular transformado se ponen en contacto con uno o más
compuestos tipo pirrol, y se examinan para el cambio en las
características asociadas con un fenotipo transformado (un conjunto
de características in vitro asociadas con una capacidad
tumorigénica in vivo), por ejemplo, aunque sin limitación,
formación de colonias en agar blando, una morfología celular más
redondeada, unión débil al sustrato, pérdida de inhibición por
contacto, pérdida de dependencia de anclaje, liberación de
proteasas tales como activador de plasminógenos, transporte
aumentado de azúcar, necesidad disminuida de suero, o expresión de
antígenos fetales, etc. (véase, Luria et al., 1978, General
Virology, 3ª Ed., John Wiley & Sons, New York, pág. 436-
446).
446).
La pérdida de capacidad de invasión o adhesión
disminuida también puede usarse para demostrar los efectos
anti-cáncer de los compuestos tipo pirrol. Por
ejemplo, un aspecto crítico de la formación de un cáncer metastático
es la capacidad de una célula precancerosa o cancerosa para
desprenderse del sitio primario de enfermedad y establecer una
nueva colonia de crecimiento en un sitio secundario. La capacidad de
una célula de invadir sitios periféricos refleja un potencial de
estado canceroso. La pérdida de capacidad de invasión puede medirse
por una diversidad de técnicas conocidas en la técnica incluyendo,
por ejemplo, la inducción de la adhesión
célula-célula mediada por cadherina E. Dicha
adhesión mediada por cadherina E puede provocar la reversión
fenotípica y la pérdida de capacidad de invasión (Hordijk et
al., 1997, Science 278:1464-66).
La pérdida de la capacidad de invasión puede
examinarse adicionalmente por la inhibición de la migración celular.
Está disponible en el mercado una diversidad de matrices celulares
bi-dimensionales y tri-dimensionales
(Calbiochem-Novabiochem Corp. San Diego, CA). La
migración celular a través de o dentro de una matriz puede
examinarse por microscopía, fotografía o videografía en el tiempo,
o por cualquier método de la técnica que permita medir la migración
celular. En una realización relacionada, la pérdida de capacidad de
invasión se examina por respuesta al factor de crecimiento de
hepatocitos (HGF). La dispersión celular inducida por HGF está
correlacionada con la capacidad de invasión de células tales como
células de riñón canino de Madin-Darby (MDCK). Este
ensayo identifica una población celular que ha perdido la actividad
de dispersión celular en respuesta a HGF (Hordijk et al.,
1997, Science 278:1464-66).
Como alternativa, la pérdida de capacidad de
invasión puede medirse por migración celular a través de una cámara
de quimiotaxis (Neuroprobe/Precision Biochemicals Inc. Vancouver,
BC). En dicho ensayo, se incuba un agente quimioatrayente en un
lado de la cámara (por ejemplo, la cámara inferior) y las células se
siembran sobre un filtro que separa el lado opuesto (por ejemplo,
la cámara superior). Para que las células pasen desde la cámara
superior hasta la cámara inferior, las células deben migrar de forma
activa a través de pequeños poros en el filtro. Después puede
correlacionarse el análisis de "tablero de damas"
(checkerboard) de la cantidad de células que han migrado con la
capacidad de invasión (véase, por ejemplo, Ohnishi, T., 1993,
Biochem. Biophys. Res. Commun. 193:
518-25).
518-25).
También puede demostrarse que los compuestos
tipo pirrol inhiben la formación de tumores in vivo. Se
conoce una inmensa cantidad de modelos animales de trastornos
hiperproliferativos, incluyendo tumorigénesis y propagación
metastásica, en la técnica (véase la Tabla 317-1,
Capítulo 317, "Principals of Neoplasia," en Harrison's
Principals of Internal Medicine, 13ª Edición, Isselbacher et
al., eds., McGraw-Hill, New York, pág. 1814, y
Lovejoy et al., 1997, J. Pathol.
181:130-135). Los ejemplos específicos incluyen para
cáncer pulmonar, transplante de nódulos tumorales en ratas (Wang
et al., 1997, Ann. Thorac. Surg. 64:216-219)
o el establecimiento de metástasis cancerosa pulmonar en ratones
SCID desprovistos de células NK (Yono y Sone, 1997, Gan To Kagaku
Ryoho 24:489-494); para cáncer de colon, el
transplante del cáncer de colon de células cancerosas de colon
humano en ratones desnudos (Gutman y Fidler, 1995, World J. Surg.
19:226-234), el modelo de tamarino de cabeza
algodonosa de colitis ulcerosa humana (Warren, 1996, Aliment.
Pharmacol. Ther. 10 Sup. 12:45-47) y modelos de
ratón con mutaciones del supresor tumoral de poliposis adenomatosa
(Polakis, 1997, Biochim. Biophys. Acta
1332:F127-F147); para cáncer de mama, modelos
transgénicos de cáncer de mama (Dankort y Muller, 1996, Cancer
Treat. Res. 83:71-88; Amundadittir et al.,
1996, Breast Cancer Res. Treat. 39:119-135) e
inducción química de tumores en ratas (Russo y Russo, 1996, Breast
Cancer Res. Treat. 39:7-20); para cáncer de
próstata, modelos de roedores inducidos químicamente y
transgénicos, y modelos de xenoinjerto humano (Royai et al.,
1996, Semin. Oncol. 23:35-40); para cánceres
genitourinarios, neoplasma de vejiga inducido en ratas y ratones
(Oyasu, 1995, Food Chem. Toxicol 33:747-755) y
xenoinjertos de carcinomas de células transitorias humanas en ratas
desnudas (Jarrett et al., 1995, J. Endourol.
9:1-7); y para cánceres hematopoyéticos, médula
alogénica transplantada en animales (Appelbaum, 1997, Leukemia 11
(Supl. 4):S15-S17). Además, se han descrito modelos
animales generales aplicables a muchos tipos de cáncer, incluyendo,
aunque sin restricción, el modelo de ratón deficiente en p53
(Donehower, 1996, Semin. Cancer Biol. 7:269-278),
el ratón Min (Shoemaker et al., 1997, Biochem. Biophys. Acta,
1332:F25-F48), y respuestas inmunes a tumores en
rata (Frey, 1997, Methods, 12:173-188).
Por ejemplo, puede administrarse un compuesto
tipo pirrol a un animal de ensayo, preferiblemente un animal de
ensayo predispuesto a desarrollar un tipo de tumor, y posteriormente
el animal de ensayo se puede examinar para una incidencia
disminuida de formación de tumores en comparación con controles a
los que no se ha administrado el compuesto tipo pirrol. Como
alternativa, puede administrarse un compuesto tipo pirrol a animales
de ensayo que tienen tumores (por ejemplo, animales en los que los
tumores se han inducido por introducción de células malignas,
neoplásicas, o transformadas, o por administración de un
carcinógeno) y posteriormente examinar los tumores en los animales
de ensayo para la regresión tumoral en comparación con controles a
los que no se ha administrado el compuesto tipo pirrol.
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Un cáncer o una enfermedad neoplásica
incluyendo, aunque sin limitación, neoplasmas, tumores, metástasis,
o cualquier enfermedad o trastorno caracterizado por crecimiento
celular incontrolado, puede tratarse o prevenirse por la
administración de una composición que comprende un vehículo
farmacéuticamente aceptable y un compuesto tipo pirrol o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo. Las composiciones pueden
comprender uno o más compuestos tipo pirrol, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo.
En ciertas realizaciones, se usan uno o más
compuestos tipo pirrol de la invención para tratar o prevenir un
cáncer o enfermedad neoplásica en combinación con uno o más agentes
quimioterapéuticos anti-cáncer incluyendo, aunque
sin limitación, metotrexato, taxol, mercaptopurina, tioguanina,
hidroxiurea, citarabina, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureas,
cisplatino, carboplatino, mitomicina, dacarbazina, procarbizina,
etopósidos, camptotecinas, bleomicina, doxorrubicina, idarrubicina,
daunorrubicina, dactinomicina, plicamicina, mitoxantrona,
asparaginasa, vinblastina, vincristina, vinorelbina, paclitaxel, y
docetaxel. En una realización preferida, se usa uno o más
compuestos tipo pirrol de la invención para tratar o prevenir un
cáncer o enfermedad neoplásica en combinación con uno o más agentes
quimioterapéuticos u otros agentes anti-cáncer
incluyendo, aunque sin limitación, los presentados en la
Tabla 1.
Tabla 1.
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\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
En otras realizaciones, se administra una
composición que comprende uno o más compuestos tipo pirrol junto
con terapia de radiación y/o con uno o una combinación de agentes
quimioterapéuticos, preferiblemente con uno o más agentes
quimioterapéuticos con los que no se ha descubierto que el
tratamiento del cáncer sea refractario. El compuesto tipo pirrol
puede administrarse a un paciente que también ha
\hbox{experimentado cirugía como tratamiento para el
cáncer.}
En otra realización específica, la invención
proporciona un método para tratar o prevenir un cáncer que ha
demostrado ser refractario al tratamiento con una quimioterapia y/o
terapia de radiación.
En una realización específica, una composición
que comprende uno o más compuestos tipo pirrol se administra
simultáneamente con quimioterapia o terapia de radiación. En otra
realización específica, se administra quimioterapia o terapia de
radiación antes o después de la administración de una de las
presentes composiciones, preferiblemente al menos una hora, cinco
horas, 12 horas, un día, una semana, un mes, más preferiblemente
varios meses (por ejemplo, hasta tres meses), después de la
administración de un compuesto terapéutico de la invención.
La quimioterapia o terapia de radiación
administrada simultáneamente con, o antes o después de la
administración de una de las presentes composiciones puede
conseguirse por cualquier método conocido en la técnica. Los agentes
quimioterapéuticos se administran preferiblemente en una serie de
sesiones, puede administrarse uno cualquiera o una combinación de
los agentes quimioterapéuticos enumerados anteriormente. Con
respecto a la terapia de radiación, puede usarse cualquier
protocolo de terapia de radiación dependiendo del tipo de cáncer a
tratar. Por ejemplo, aunque sin limitación, puede administrarse
radiación de rayos x; en particular, puede usarse megavoltaje de
elevada energía (radiación de más de 1 MeV de energía) para tumores
profundos, y pueden usarse rayos de electrones y radiación de rayos
x de ortovoltaje para cánceres cutáneos. También pueden
administrarse radioisótopos que emiten rayos gamma, tales como
isótopos radiactivos de radio, cobalto y otros elementos, para
exponer los tejidos a radiación.
Además, la invención proporciona métodos de
tratamiento del cáncer o enfermedad neoplásica con una de las
presentes composiciones como una alternativa a la quimioterapia o
terapia de radiación donde la quimioterapia o la terapia de
radiación ha demostrado o puede demostrar demasiada toxicidad, por
ejemplo, que provoca efectos secundarios inaceptables o
insostenibles, para el sujeto que se está tratando. El sujeto que se
está tratando con las presentes composiciones puede, opcionalmente,
tratarse con otros tratamientos contra el cáncer tales como
cirugía, terapia de radiación o quimioterapia, dependiendo del
tratamiento que se encuentre que sea aceptable o sostenible.
Los cánceres o enfermedades neoplásicas y
trastornos relacionados que pueden tratarse o prevenirse por la
administración de las presentes composiciones incluyen, aunque sin
limitación, los enumerados en la Tabla 2 (para una revisión de
dichos trastornos, véase Fishman et al., 1985, Medicine, 2ª
Ed., J.B. Lippincott Co., Philadelphia):
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En realizaciones específicas, el cáncer, los
cambios malignos o proliferativos anormales (tales como metaplasias
y displasias), o los trastornos hiperproliferativos, se tratan o
previenen en el ovario, mama, colon, pulmón, piel, páncreas,
próstata, vejiga, o útero. En otras realizaciones específicas, se
trata o previene el sarcoma, melanoma, o
leucemia.
leucemia.
En una realización altamente preferida, las
presentes composiciones se usan para tratar o prevenir cánceres que
incluyen de próstata (más preferiblemente insensible a hormonas),
neuroblastoma, linfoma (preferiblemente folicular o de células B
grandes difusas), mama (preferiblemente positivo al receptor de
estrógenos), colorrectal, endometrial, de ovario, linfoma
(preferiblemente no Hodgkin), de pulmón (preferiblemente
microcítico), o testicular (preferiblemente de células
germinales).
En una realización preferida, las presentes
composiciones se usan para inhibir el crecimiento de una célula
derivada de un cáncer o neoplasma tal como de próstata (más
preferiblemente insensible a hormonas), neuroblastoma, linfoma
(preferiblemente folicular o de células B grandes difusas), de mama
(preferiblemente positivo al receptor de estrógenos), colorrectal,
endometrial, de ovario, linfoma (preferiblemente no Hodgkin), de
pulmón (preferiblemente microcítico), o testicular (preferiblemente
de células germinales).
En realizaciones específicas de la invención,
las presentes composiciones se usan para inhibir el crecimiento de
una célula, obteniéndose dicha célula de un cáncer o neoplasma de la
Tabla 2 o de este documento.
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Puede demostrarse que los compuestos tipo pirrol
inhiben la replicación o infectividad de un virus o una célula
infectada con virus in vitro o in vivo usando una
diversidad de ensayos conocidos en la técnica, o descritos en este
documento. En ciertas realizaciones, dichos ensayos pueden usar
células de una línea celular, o células de un paciente. En
realizaciones específicas, las células pueden infectarse con un
virus antes del ensayo, o durante el ensayo. Las células pueden
ponerse en contacto con un virus. En ciertas realizaciones
diferentes, los ensayos pueden emplear cultivos virales sin
células.
En una realización, se demuestra que un
compuesto tipo pirrol tiene actividad para tratar o prevenir una
enfermedad viral poniendo en contacto células cultivadas que
muestran un indicador de una reacción viral (por ejemplo, formación
de cuerpos de inclusión) in vitro con el compuesto tipo
pirrol, y comparando el nivel de dicho indicador en las células en
contacto con el compuesto tipo pirrol con dicho nivel de dicho
indicador en células que no se han puesto en contacto, donde un
nivel inferior en dichas células en contacto indica que el compuesto
tipo pirrol tiene actividad para tratar o prevenir una enfermedad
viral. Los modelos celulares que pueden usarse para dichos ensayos
incluyen, aunque sin limitación, la infección viral de linfocitos T
(Selin et al., 1996, J. Exp. Med. 183:
2489-2499); infección por hepatitis B de células de
hepatoma desdiferenciadas (Raney et al., 1997, J. Virol.
71:1058-1071); infección viral de células
epiteliales de la glándula salival cultivadas (Clark et al.,
1994, Autoimmunity 18:7-14); infección por
VIH-1 sincrónica de líneas celulares linfocíticas
CD4+ (Wainberg et al., 1997, Virology
233:364-373); infección viral de células del
epitelio respiratorio (Stark et al., 1996, Human Gene Ther.
7:1669-1681); e infección retroviral anfotrópica de
células NIH-3T3 (Morgan et al., 1995, J.
Virol. 69:6994-
7000).
7000).
En otra realización, puede demostrarse que un
compuesto tipo pirrol tiene actividad para tratar o prevenir una
enfermedad viral administrando dicho compuesto tipo pirrol a un
animal de ensayo que tiene síntomas de una infección viral, tales
como síntomas respiratorios característicos en modelos animales, o
dicho animal de ensayo no muestra una reacción viral y se estimula
posteriormente con un agente que provoca una reacción viral, y
midiendo el cambio en la reacción viral después de la administración
de dicho compuesto tipo pirrol, donde una reducción en dicha
reacción viral o una prevención de dicha reacción viral indica que
el compuesto tipo pirrol tiene actividad para tratar o prevenir una
infección viral. Los modelos animales que pueden usarse para dicho
ensayos incluyen, aunque sin limitación, cobayas para infecciones
virales respiratorias (Kudlacz y Knippenberg, 1995, Inflamm. Res.
44: 105-110); ratones para infección por virus de la
influenza (Dobbs et al., 1996, J. Immunol. 157:
1870-1877); corderos para infección por el virus
sincitial respiratorio (Masot et al., 1996, Zentralbl.
Veterinarmed. 43:233-243); ratones para infección
por virus neurotrópico (Barna et al., 1996, Virology
223:331-343); hámster para infección por sarampión
(Fukuda et al., 1994, Acta Otolaryngol. Suppl (Stockh.)
514:111-116); ratones para infección por
encefalomiocarditis (Hirasawa et al., 1997, J. Virol.
71:4024-4031); y ratones para infección por
citomegalovirus (Orange y Biron, 1996, J. Immunol. 156:
1138-1142). En ciertas realizaciones de la
invención se administra más de un compuesto tipo pirrol a un animal
de ensayo, virus, o célula infectada por virus.
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Los virus e infecciones virales que pueden
tratarse o prevenirse por la administración de una composición de
la invención incluyen, aunque sin limitación, los enumerados en la
Tabla 3 incluyendo, aunque sin limitación virus ADN tales como el
virus de la hepatitis tipo B y la hepatitis tipo C; parvovirus,
tales como virus adeno-asociados y citomegalovirus;
papovavirus tales como papilomavirus, poliomavirus, y SV40;
adenovirus; herpesvirus tales como el virus del herpes simple tipo
1 (HSV-I), del herpes simple tipo II
(HSV-II), y de Epstein-Barr;
poxvirus, tales como el virus variola (viruela) y vaccinia; y virus
ARN, tales como el virus de la inmunodeficiencia humana tipo I
(VIH-I), el virus de la inmunodeficiencia humana
tipo II (VIH-II), el virus linfotrópico de células
T tipo I (HTLV-I), el virus linfotrópico de células
T humanas tipo II (HTLV-II), el virus de la
influenza, el virus del sarampión, el virus de la rabia, el virus
Sendai, picornavirus tales como el virus de la poliomielitis,
coxsackievirus, rinovirus, reovirus, togavirus tales como el virus
de la rubéola (sarampión alemán) y el virus Semliki forest,
arbovirus, y el virus de la hepatitis
tipo A.
tipo A.
En una realización preferida de la invención,
las composiciones de la invención se usan para tratar o prevenir
una infección viral asociada con un virus enumerado en la Tabla 3.
En otra realización preferida, las composiciones de la invención se
usan para inhibir la replicación o infectividad de un virus
enumerado en la Tabla 3. En otra realización preferida más, se usa
uno o más compuestos tipo pirrol de la invención para inhibir el
crecimiento de una célula infectada con un virus enumerado en la
Tabla 3.
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Muchas enfermedades humanas se caracterizan por
respuestas inmunes excesivas o inapropiadas. Los ejemplos de dichas
enfermedades incluyen reacciones alérgicas, enfermedades
auto-inmunes, y rechazo en transplantes alogénicos,
también conocido como "rechazo de injertos". Los tejidos y
órganos alogénicos son tejidos y órganos de un miembro
genéticamente diferente de la misma especie. El "rechazo de
injertos" sucede cuando el sistema inmune de un cuerpo ataca y
destruye el tejido transplantado, por ejemplo, en un transplante de
corazón, riñón, o médula ósea, con contenido alogénico. En estas
enfermedades, es beneficiosa la supresión de la respuesta inmune en
un paciente, ya que la respuesta inmunológica del individuo causa
más daño o malestar que los microbios invasores o material extraño.
Ahora está reconocido que la terapia inmunosupresora es apropiada
para tratar cada uno de estos trastornos (Blood Reviews, 1995,
9:117-133). Los compuestos tipo pirrol de la
invención son útiles para causar inmunosupresión en un paciente que
lo necesite. Por consiguiente, los compuestos tipo pirrol de la
invención son útiles para tratar o prevenir alergias, enfermedades
autoinmunes, y rechazo asociado con un transplante alogénico o
"rechazo de injertos".
En la alergia, el sistema inmune es
hiper-sensible a antígenos ambientales por lo demás
inofensivos. La supresión del sistema inmune puede aliviar el
malestar asociado con la reacción excesiva del cuerpo a un antígeno
ambiental por lo demás inofensivo. Por consiguiente, los compuestos
tipo pirrol de la invención son útiles para tratar o prevenir una
alergia.
En una enfermedad autoinmune, el sistema inmune
ataca a tejidos normales. Los mecanismos inmunológicos llegan a
estar sensibilizados a algunas partes del cuerpo del propio
individuo causando interferencia con o incluso destrucción de esa
parte. La capacidad de distinguir entre antígenos "propios" y
"no propios", que es vital para el funcionamiento del sistema
inmune como una defensa específica contra los microorganismo
invasores, se altera y el cuerpo comienzan a destruirse a sí mismo.
Los antígenos "no propios" son aquellos antígenos sobre
sustancias en el cuerpo que son detectablemente diferentes de o
extraños para los propios constituyentes del cuerpo. Los antígenos
"propios" son aquellos antígenos que no son detectablemente
diferentes de o extraños para los propios constituyentes del
cuerpo. En otros casos, la autoinmunidad sucede como resultado de
traumatismo a un área habitualmente no expuesta a linfocitos tales
como tejido neural o el cristalino del ojo. Cuando los tejidos en
estas áreas llegan a exponerse a linfocitos, sus proteínas
superficiales pueden funcionar como antígenos y desencadenar la
producción de anticuerpos y respuestas inmunes celulares que después
comienzan a destruir esos tejidos. Otras enfermedades autoinmunes
se desarrollan después de la exposición del individuo a antígenos
que son antigénicamente similares a, que reaccionan de forma cruzada
con, el propio tejido del individuo. La fiebre reumática es un
ejemplo de este tipo de enfermedad, en la que el antígeno de una
bacteria de estreptococos, que causa fiebre reumática, reacciona de
forma cruzada con partes del corazón humano. Los anticuerpos no
pueden diferenciar entre los antígenos bacterianos y los antígenos
del músculo cardíaco y en consecuencia, pueden destruir células que
tienen cualquiera de esos antígenos. La supresión del sistema inmune
sería útil para minimizar o eliminar los efectos de enfermedades
autoinmunes. Por consiguiente, los compuestos tipo pirrol de la
invención son útiles para tratar o prevenir enfermedades
autoinmunes.
autoinmunes.
Los ejemplos de enfermedades autoinmunes que
pueden tratarse o prevenirse administrando los compuestos tipo
pirrol de la invención incluyen, aunque sin limitación, artritis
reumatoide, diabetes mellitus insulino-dependiente
(que implica la destrucción autoinmune de las células \beta de los
islotes de Langerhans que son responsables de la secreción de
insulina), ciertas anemias hemolíticas, fiebre reumática,
tiroiditis, colitis ulcerosa, miastenia grave, glomerulonefritis,
encefalomielitis alérgica, destrucción nerviosa y hepática
continuada después de hepatitis viral, esclerosis múltiple, lupus
sistémico eritematoso, diabetes juvenil, anemia hemolítica
autoinmune, psoriasis, púrpura trombocitopénica idiopática,
hepatitis crónica activa, leucopenia idiopática, cirrosis biliar
primaria, tirotoxicosis, dermatomiositis, lupus discoide
eritematoso, artritis psoriásica, enteritis regional, síndrome
nefrótico, nefritis por lupus, hepatitis lupoide, síndrome de
Sjogren, síndrome de Goodpasture, granulomatosis de Wegener,
esclerodermia, enfermedad de Sezary, uveítis, y orquitis por
paperas. En una realización más preferida, los compuestos tipo
pirrol de la invención se usan para tratar o prevenir la artritis
reumatoide, lupus sistémico eritematoso, diabetes juvenil, miastenia
grave, esclerosis múltiple, o psoriasis.
Asimismo, cuando el cuerpo rechaza transplantes
alogénicos y padece "rechazo de injertos", sería extremadamente
útil suprimir la respuesta inmune para prevenir el rechazo de
tejidos u órganos transplantados útiles. La supresión de la
respuesta inmune es útil para prevenir el rechazo de aloinjertos de
tejidos y órganos. Por consiguiente, los compuestos tipo pirrol de
la invención son útiles para tratar o prevenir el rechazo asociado
con transplantes alogénicos de tejidos y órganos.
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La preparación del Compuesto 79 implicó en
líneas generales la preparación del ácido bórico 8 del
1-Boc pirrol (73) y el correspondiente triflato 78
(véase el siguiente Esquema 1). El acoplamiento de Suzuki de esos
dos intermedios dio el producto deseado Compuesto 79
(4-metoxi-5-(1H-indol-2-il-metileno)-2,2'-bi-1H-pirrol).
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\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
1
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Se preparó una solución de diisopropilamina
anhidra (3,35 ml, 23,9 mmol) en 100 ml de THF anhidro y se enfrió a
-78ºC. Se añadió lentamente una solución de 2,5 M de
n-butillitio (10,5 ml, 26,3 mmol) a la solución de
THF en 10 minutos. La mezcla resultante se agitó a -78ºC durante 15
minutos y después se calentó hasta 0ºC durante 15 minutos. La
mezcla resultante se enfrió de nuevo a -78ºC y se añadió el
1-pirrol carboxilato de terc-butilo
(73) (4,00 ml, 23,9 mmol). La solución resultante se agitó durante 1
hora a -78ºC y se añadió borato de trimetilo (2,70 ml, 23,9 mmol).
La solución resultante se dejó calentar hasta temperatura ambiente
durante una noche. Se añadieron 20 ml de HCl diluido (0,25 N) a la
solución a temperatura ambiente, que se agitó a temperatura
ambiente durante 15 minutos. El THF se retiró a presión reducida. El
residuo se extrajo con éter dietílico (3 x 100 ml). La capa
orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se
concentró al vacío. La trituración con hexano (10 ml) y la
filtración dieron el Compuesto 8 en forma de un sólido de color
beige (2,56 g, 51%). ^{1}H RMN (500 MHz, CDCl_{3}): \delta
(ppm), 7,71 (s, 2H); 7,48 (t, 1H, J = 2 Hz); 7,15 (t, 1H, J = 1,8
Hz); 6,29 (t, 1H, J = 3,1 Hz); 1,65 (3, 9H). ^{13}C RMN (500 MHz,
CDCl_{3}): \delta (ppm), 153,22; 129,67; 127,92; 112,96; 86,47;
28,84.
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El indol (74) (1,00 g, 8,54 mmol) se disolvió en
50 ml de THF seco. La solución resultante se enfrió a -78ºC. Se
añadió lentamente una solución 2,5 M de n-butillitio
(3,80 ml, 9,39 mmol) a la solución de THF y se agitó durante 30
min. Se pasó dióxido de carbono a través de la mezcla de reacción
durante 10 min. La solución resultante se dejó calentar hasta
temperatura ambiente. El exceso de dióxido de carbono se retiró a
presión reducida mientras que la solución se concentró a 25 ml. Se
añadieron 50 ml de THF seco a la solución concentrada, que se
enfrió de nuevo hasta -78ºC. Se añadió lentamente una solución 1,7 M
de terc-butillitio (5,00 ml, 8,54 mmol) a la solución de
THF, que se agitó a -78ºC durante 1 hora. Se añadió
N,N-dimetilformamida anhidra (0,83 ml, 8,5 mmol) a
la solución. La mezcla resultante se calentó hasta temperatura
ambiente durante un periodo de 1,5 horas. Se añadió agua (10 ml) y
la mezcla se agitó durante 15 min. Se añadió éter dietílico. La capa
orgánica se lavó con salmuera (3x). La capa orgánica se secó sobre
sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío. El sólido
se purificó sobre gel de sílice usando hexanos/acetato de etilo
80/20 como eluyente para dar el Compuesto 75 (0,7129 g, 58%).
^{1}H RMN (500 MHz, CDCl_{3}): \delta (ppm), 9,88 (s, 1H);
7,77 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 7,48 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,41 (t, 1H, J =
7,0 Hz); 7,3 (s, 1H); 7,20 (t, 1H, J = 7,4 Hz). ^{13}C RMN (500
MHz, CDCl_{3}): \delta (ppm), 182,89; 138,80; 136,87; 128,25;
124,37; 122,20; 115,60; 113,28.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de indol
2-carboxaldehído (75) (0,1500 g, 1,033 mmol) y
4-metoxi-3-pirrolin-2-ona
(76) (0,2330 g, 2,060 mmol) en DMSO (10 ml) se añadieron 5 ml de
una solución de NaOH 2 N. La mezcla resultante se agitó durante una
noche a 60ºC. La mezcla agitada se dejó enfriar a temperatura
ambiente y después se vertió en 250 ml de agua. El precipitado
sólido amarillo resultante se filtró y se secó en una desecadora
para dar el Compuesto 77 (0,1257 g, 51%). ^{1}H RMN (500 MHz,
DMSO): \delta (ppm), 11,14 (s, 1H); 9,69 (s, 1H); 7,49 (d, 1H, J
= 7,9 Hz); 7,34 (d, 1H, 8,1 Hz); 7,11 (t, 1H, J = 7,4 Hz); 6,99 (m,
2H); 6,25 (s, 1H); 5,35 (s, 1H) 3,89 (s, 3H). ^{13}C RMN (500
MHz, DMSO): \delta (ppm) 172,47; 168,25; 138,41; 133,78; 131,53;
129,92; 123,80; 121,60; 120,98; 112,46; 105,91; 98,22; 93,71;
59,95.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 77 (8,4 mg, 35 \mumol) en 5
ml de diclorometano seco se añadieron 1,1 equivalentes de anhídrido
trifluorometanosulfónico a 0ºC. La solución resultante se agitó a
0ºC durante 5 min. y después se vertió en 5 ml de NaHCO_{3}
acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se
filtró y se concentró rápidamente para dar el triflato bruto 78,
que se usó inmediatamente, sin purificación adicional. ^{1}H RMN
(500 MHz, CD_{2}Cl_{2}): \delta (ppm), 11,15 (s, 1H); 7,72 (m,
3H); 7,61 (s, 1H); 7,50 (m, 1H), 7,20 (m, 1H); 6,01 (s, 1H); 4,16
(s, 3H).
\vskip1.000000\baselineskip
El triflato bruto 78 se mezcló con
aproximadamente 3 equivalentes de ácido bórico 8, 8 equivalentes de
carbonato potásico y aproximadamente 0,1 equivalentes de
tetraquistrifenilfosfina paladio en atmósfera de argón. Se añadió
1,4-dioxano anhidro (10 ml) a la mezcla de reacción,
y se calentó a 90ºC en un baño de arena. Después de tres horas, la
mezcla se enfrió y se añadió a acetato de etilo (100 ml). La capa
orgánica se lavó con salmuera (3 x 100 ml) y después se secó sobre
sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío. La mezcla bruta
resultante se pasó a través de una corta columna de alúmina neutra
usando hexanos/acetato de etilo 50/50 como eluyente. Las fracciones
pertinentes se combinaron y se concentraron, y el producto bruto
resultante se purificó usando una placa preparativa de alúmina
neutra y se eluyó usando hexanos/acetato de etilo 80/20. La banda
de alúmina que contenía el Compuesto 79 se lavó con acetato de etilo
y se concentró para proporcionar el Compuesto 79 en forma de un
sólido rojo oscuro (2 mg, 20%) (500-MHz, CD_{3}OD)
\delta (ppm), 7,55 (m, 2H); 7,20 (t, 1H); 7,13 (s, 1H); 7,03 (t,
1H); 6,90 (s, 1H), 6,88 (s, 1H); 6,85 (s, 1H); 6,32 (s, 1H), 6,17
(s, 1H); 3,97 (s, 3H). MS (M + H): 290,0.
\vskip1.000000\baselineskip
La toxicidad selectiva del Compuesto 79 contra
células cancerosas por apoptosis se muestra a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Sin el deseo de limitarse por la teoría, una
disminución marcada en la producción de ATP mitocondrial está
asociada con el progreso hacia disfunción celular irreversible y
muerte. Para determinar el efecto del compuesto 79
(4-metoxi-5-(1H-indol-2-il-metileno)-2,2'-bi-1H-pirrol)
sobre la viabilidad celular, se midieron los niveles de ATP celular
después del tratamiento con compuesto 79. Se cultivaron células de
carcinoma pulmonar macrocítico H1299, células de carcinoma cervical
C33A, fibroblastos pulmonares normales Mrc-5
(American Type Culture Collection, Manassas, VA USA) y células del
epitelio mamario normales HMEC (Clonetics San Diego, CA, USA) en los
medios recomendados por la American Type Culture Collection. Las
cuatro líneas celulares se sembraron en placas de microtitulación
de 96 pocillos (PerkinElmer Life Sciences Inc, Boston, MA USA) a una
densidad que permitió que alcanzaran la confluencia después de 4
días de crecimiento. Un día después de la siembra en placas, las
células se trataron con Compuesto 79 10 \muM. Se prepararon
soluciones madre de Compuesto 79 50 mM en dimetilsulfóxido
(Sigma-Aldrich Inc., St Louis, Missouri USA), se
diluyeron en los medios y después se añadieron a las células. El
dimetilsulfóxido total en las células fue del 1%. Después de 3 días
de incubación, los niveles de ATP en las células se cuantificaron
usando el sistema de detección luminescente VIALIGHT (BioWhittaker,
MD, USA). Los resultados se representaron con relación a células de
control no tratadas, que se establecieron a 100 (Figura 1).
Los resultados mostrados en la Figura 1
demuestran que un tratamiento de 72 horas con 10 \muM de compuesto
79 disminuía los niveles de ATP de las líneas celulares cancerosas
H1299 y C33A a un grado mayor que los niveles de ATP de las líneas
celulares normales HMEC y MRC-5. Por lo tanto, el
Compuesto 79 es selectivamente tóxico para células cancerosas,
particularmente para células de carcinoma pulmonar macrocítico y
carcinoma cervical.
\vskip1.000000\baselineskip
Para demostrar la capacidad del Compuesto 79 de
desencadenar la activación de caspasas y, por lo tanto, la
apoptosis, se prepararon lisados de células tratadas con diversas
concentraciones de Compuesto 79. Se mantuvieron células de
carcinoma pulmonar macrocítico H1299, células de carcinoma cervical
C33A, fibroblastos pulmonares normales Mrc-5
(American Type Culture Collection, Manassas, VA USA) y células del
epitelio mamario normales HMEC (Clonetics San Diego, CA, USA) en
los medios recomendados por la American Type Culture Collection. Las
células se recogieron y suspendieron a 2,5-5 x
10^{5} células/ml en los medios. Se añadió una alícuota de 45
\mul de suspensión celular a cada pocillo de una placa de
microtitulación de 96 pocillos (PerkinElmer Life Sciences Inc,
Boston, MA USA). Las células se incubaron durante una noche en una
incubadora de CO_{2} al 5% y humedad del 95% a 37ºC y después, se
añadieron 5 \mul de una solución de dimetilsulfóxido al 10%
(Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, Missouri USA) que
contenía diversas concentraciones de Compuesto 79 o 5 \mul de
dimetilsulfóxido al 10% (control de disolvente). Las palcas se
incubaron adicionalmente durante 16 h. Las células se lisaron en
tampón de lisis (Hepes 50 mM pH 7,4; Chaps al 0,1%; EDTA 10 mM; DTT
10 mM) y se dejaron aparte para el ensayo de actividad
caspasa.
caspasa.
Para demostrar la actividad caspasa en los
lisados celulares, se marcaron 0,35 \mug de péptido
EGKRKGDEVDGVPDRRASV biotinilado en el extremo
N-terminal (Phoenix Pharmaceuticals Inc, Belmont CA
USA) con 1 mCi de [^{32}P]-\gammaATP
(PerkinElmer Life Sciences Inc, Boston, MA USA) usando 250 unidades
de la subunidad catalítica de la Proteína Quinasa A de corazón
bovino (Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, Missouri USA)
en 500 \mul de tampón HMK (Tris-HCl 20 mM pH 7,5;
NaCl 0,1 M; MgCl_{2} 12 mM; DTT 1 mM) a 37ºC durante una hora. La
reacción después se filtró usando la columna de cromatografía
Sephadex G-10 Poly-Prep (Amersham
Biosciences, Inc, Piscataway, NJ, USA). El péptido marcado se
acopló a 1,25 ml de perlas de sepharose estreptavidina (Amersham
Biosciences, Inc, Piscataway, NJ, USA) durante 15 minutos a
temperatura ambiente en una mezcladora rotaria. Las perlas se
lavaron siete veces con 6 ml de NaCl 0,5 M en PBS y se
resuspendieron en un volumen total de 7,25 ml de NaCl 0,5 M en
solución de PBS a la que se añadieron 9 ml de medio RPMI 1640
(BioWhittaker, MD, USA). Después se prehumedecieron placas de
filtro de 0,45 \mum MultiScreen-HV de 96 pocillos
(Millipore, Bedford, Mass USA) con 200 \mul de NaCl 0,5 M en PBS
y se añadieron 40 \mul de suspensión de perlas a cada pocillo.
Cada pocillo se lavó cinco veces con 200 \mul de NaCl 0,5 M en
PBS. En cada pocillo, se añadieron 50 \mul de lisado celular junto
con 12,5 \mul de NaCl 0,5 M en solución de glicerol al 30% a cada
pocillo. Las placas se incubaron a 30ºC con agitación a 220 rpm
durante una noche. El siguiente día, las placas de filtro que
contenían las perlas y el extracto se centrifugaron en placas de
muestra de 96 pocillos (PerkinElmer Life Sciences Inc, Boston, MA
USA) que contenían 100 \mul de fluido de centelleo líquido
Optiphase SuperMix (PerkinElmer Life Sciences Inc, Boston, MA USA)
en cada pocillo y se centrifugaron a 1500 rpm durante 10 minutos a
temperatura ambiente. Se midió la cantidad de recuentos radiactivos
por minuto (cpm) en cada pocillo de la placa de muestra usando un
contador de centelleo líquido (PerkinElmer Life Sciences Inc,
Boston, MA USA). La potencia de la activación de la cascada de
caspasas se determinó por el porcentaje de aumento en cpm en los
pocillos en comparación con las células tratadas solamente con
dimetilsulfóxido. Valores 1,5 veces mayores (150%) que el control se
consideraron positivos e indicaban que el compuesto desencadenaba
la activación de caspasas en las células y, por lo tanto, la
apoptosis.
La concentración de Compuesto 79 necesaria para
activar de forma positiva las caspasas y, por lo tanto, para causar
la apoptosis en líneas de células cancerosas era 250 \muM y 125
\muM para las líneas de células cancerosas H1299 y C3AA,
respectivamente (Tabla 4). Sin embargo, en líneas de células
normales son necesarias concentraciones de más de 500 \muM para
obtener dicha activación de caspasas (Tabla 4). Estos resultados
demuestran que las caspasas se activaban en líneas de células
cancerosas pero no en la línea celular normal después de 16 horas
de incubación con Compuesto 79. Por consiguiente, el Compuesto 79
induce la apoptosis selectivamente en células cancerosas,
particularmente células de carcinoma pulmonar macrocítico y
carcinoma cervical.
\vskip1.000000\baselineskip
El ejemplo anterior muestra que un compuesto
tipo pirrol ilustrativo es selectivamente citotóxico para células
cancerosas. Este ejemplo también demuestra que los compuestos tipo
pirrol son útiles para el tratamiento y prevención del cáncer,
particularmente carcinoma pulmonar y carcinoma cervical. Este
ejemplo demuestra adicionalmente que los compuestos tipo pirrol son
útiles para la inhibición del crecimiento canceroso, particularmente
crecimiento de carcinoma pulmonar y crecimiento de carcinoma
cervical.
La presente invención no está limitada en
alcance por las realizaciones específicas descritas en los ejemplos
que se pretenden como ilustraciones de unos pocos aspectos de la
invención.
Claims (13)
1. Un compuesto de Fórmula general (XI):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, en el
que:
R_{1} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5}, -COCH_{3},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{2} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10} o -CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H, -CH_{3},
-CH_{2}C_{6}H_{5},
-C(O)OC(CH_{3})_{3}, o
-C(O)CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{10}, -OR_{6}, -F, -Cl, -Br, -I, -CN,
-COOH, - COOR_{6}, -NH_{2}; NHCOR_{6}, -NO_{2}, -OH, o
-OCH_{2}C_{6}H_{5}; y
R_{6} es un alquilo de cadena lineal
C_{1}-C_{6}.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3} o
-CH_{2}C_{6}H_{5};
R_{3} es -H;
R_{4} es -H o -CH_{3};
R_{5} es -H, -CH_{3}, halógeno, o
COOR_{6}; y
R_{6} es -CH_{3}.
3. El compuesto de la reivindicación 2, en el
que:
R_{1} es -H;
R_{2} es -CH_{3};
R_{3} es -H;
R_{4} es -CH_{3}; y
R_{5} es -H o Cl.
4. Uso de una cantidad eficaz del compuesto de
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar una
composición farmacéutica para tratar o prevenir un cáncer o
enfermedad neoplásica.
5. Uso de una cantidad eficaz del compuesto de
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar una
composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de una célula
cancerosa o célula neoplásica.
6. Un método in vitro para inhibir el
crecimiento de una célula cancerosa o célula neoplásica que
comprende poner en contacto una célula cancerosa o célula
neoplásica con una cantidad eficaz del compuesto de cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 3.
7. Uso de una cantidad eficaz del compuesto de
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar una
composición farmacéutica para tratar o prevenir una infección viral
en un paciente.
8. Uso de una cantidad eficaz del compuesto de
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar una
composición farmacéutica para inhibir la replicación o infectividad
de un virus.
9. Un método in vitro para inhibir la
replicación o infectividad de un virus que comprende poner en
contacto un virus o una célula infectada con virus con una cantidad
eficaz del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a
3.
10. Uso de una cantidad eficaz del compuesto de
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar una
composición farmacéutica para causar inmunosupresión en un
paciente.
11. Uso de una cantidad eficaz del compuesto de
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar una
composición farmacéutica para tratar o prevenir una enfermedad
autoinmune en un paciente.
12. El uso de la reivindicación 11, en el que la
enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, diabetes mellitus
insulino-dependiente, anemia hemolítica, fiebre
reumática, tiroiditis, colitis ulcerosa, miastenia grave,
glomerulonefritis, encefalomielitis alérgica, destrucción nerviosa y
hepática continuada después de hepatitis viral, esclerosis
múltiple, lupus sistémico eritematoso, diabetes juvenil, anemia
hemolítica autoinmune, psoriasis, púrpura trombocitopénica
idiopática, hepatitis crónica activa, leucopenia idiopática,
cirrosis biliar primaria, tirotoxicosis, dermatomiositis, lupus
discoide eritematoso, artritis psoriásica, enteritis regional,
síndrome nefrótico, nefritis por lupus, hepatitis lupoide, síndrome
de Sjogren, síndrome de Goodpasture, granulomatosis de Wegener,
esclerodermia, enfermedad de Sezary, uveítis, u orquitis por
paperas.
13. Una composición farmacéutica que comprende
el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
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