ES2304094B2 - Tratamiento de dolencias neurodegenerativas. - Google Patents
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Abstract
Tratamiento de dolencias neurodegenerativas.
Se proporciona un procedimiento para el
tratamiento de un paciente necesitado de terapia para una
enfermedad neurodegenerativa, que comprende la administración a ese
paciente de una dosis terapéuticamente eficaz de un glicérido lípido
que comprende un radical de glicerol y un radical de ácido graso,
seleccionándose el radical de ácido graso entre el grupo
constituido por ácido \gamma-linolénico, ácido
dihomo-\gamma-linolénico y ácido
araquidónico, caracterizado porque el radical de ácido graso
seleccionado está unido al radical de glicerol en su posición
sn-2. Preferentemente, el procedimiento es aquel en
el que el lípido se administra durante una duración y con una dosis
suficientes como para mantener o elevar los niveles de
TGF-\beta1 en el paciente hasta niveles
terapéuticos.
Description
Tratamiento de dolencias neurodegenerativas.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para el tratamiento de dolencias neurodegenerativas,
especialmente para el tratamiento de aquellas en las que es
beneficioso el aumento el factor de crecimiento transformador
\beta (TGF-\beta), especialmente el
TGF-\beta1. De forma más en particular, la
presente invención proporciona tratamiento para dolencias
neurodegenerativas, especialmente para aquellas tales como las
enfermedades desmielinizantes, tales como la esclerosis múltiple,
las enfermedades de Alzheimer y de Parkinson y proporciona
tratamiento para las secuelas degenerativas asociadas con trauma
craneal, ictus y hemorragias intracraneales, tratamiento por el
cual se puede mejorar o restablecer la función neuronal de una
dolencia que ha empeorado, por ejemplo mediante
remielinización.
remielinización.
Además, se proporciona el nuevo uso de
compuestos conocidos y de compuestos nuevos que comprenden
radicales de ácido graso insaturados para la fabricación de
medicamentos capaces de tratar de forma eficaz dichas dolencias,
más especialmente tratamientos que sean capaces de alcanzar niveles
de éxito que anteriormente no se podían alcanzar con respecto a la
recuperación de la función neurológica.
La solicitud de patente no publicada pendiente
de tramitación PCT/GB04/002089 del inventor, incorporada en esta
invención a modo de referencia, se refiere al uso de aceites de
plantas y de hongos para el tratamiento de enfermedades
neurodegenerativas. Estos aceites tienen altos porcentajes del
ácido graso esencial ácido \gamma-linolénico
(GLA) en la posición sn-2 de sus lípidos, siendo
típicamente el ácido graso en la posición sn-2
alrededor del 40% del total del aceite.
En la bibliografía está bien descrito que los
ácidos grasos esenciales (AGES) del patrón de insaturación
n-3 y n-6 tienen un efecto positivo
en una amplia variedad de trastornos fisiológicos humanos,
incluyendo enfermedades autoinmunes (WO 02/02105). Harbige (1998),
Proc. Nut. Soc. 57, 555-562, revisó el suplemento
de la dieta con ácidos n-3 y n-6 en
estados de enfermedad autoinmune y notó en particular evidencias
del beneficio de los aceites ricos en ácido
\gamma-linolénico (GLA) y/o linoleico (LA).
Bates y col. señalaron que se había sugerido
tiempo atrás en 1957 que los aceites de lípidos que comprenden una
mezcla de residuos de ácido linoleico y de ácido
\gamma-linolénico posiblemente eran más eficaces
en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias y autoinmunes,
aunque encontraron pacientes que con 3 g de aceite por día (aceite
de onagra Naudicelle 7:1 LA:GLA) que tenían recaídas llegaban a
estar más enfermos con el aceite de ensayo que con el aceite de
control.
Aunque la etiología de la EM sigue siendo
desconocida, los estudios han mostrado que los pacientes de EM
tienen niveles más altos de lo normal de células T autoreactivas
hacia neuroantígenos. Estas células T reaccionan inter alia
a la proteína básica de la mielina (PBM) y a la glucoproteína
mielínica de oligodendrocitos (MOG) y están en un estado de
activación incrementado comparado con los controles que se
encuentran cuando se goza de buena salud. Los procesos existentes
de daño axonal, por ejemplo inflamación crónica, desmielinación y
astrogliosis en la EM son complejos, aunque se considera que la
inflamación de la sustancia blanca y la desmielinación determinan
la gravedad de la enfermedad, mientras que estudios recientes
sugieren que en la EM el daño axonal comienza en las etapas
tempranas de la enfermedad y contribuye a la minusvalía (De Stefano
y col., 2001).
La encefalomielitis autoinmune experimental
(EAE) es el modelo animal usado con más frecuencia para estudiar
los efectos de origen inmune de la EM. Estudios en cobayas han
mostrado que el ácido linoleico suprime de forma parcial la
incidencia y la gravedad de la EAE (Meade y col. (1978)). (Harbige
y col (1995), 1997b) demostraron efectos del ácido linoleico y del
ácido \gamma-linolénico que modifican la
enfermedad sobre manifestaciones clínicas e histopatológicas de la
EAE. Dependiendo de la dosis, el ácido
\gamma-linolénico fue completamente protector en
la EAE aguda de rata, mientras que el ácido linoleico tenía una
acción dependiente de la dosis sobre la gravedad clínica, aunque no
la suprimía.
A pesar de estos resultados experimentales, se
reconoce que la enfermedad humana, la esclerosis múltiple, es muy
compleja y se puede exacerbar y mejorar a la inversa mediante la
actividad de las células T y mediante otros factores de respuesta
inmune. Se cree que los ácidos grasos n-6 promueven
la enfermedad autoinmune e inflamatoria basándose en los resultados
obtenidos sólo con ácido linoleico. Se ha demostrado que la
producción de TGF-\beta1 y de PGE_{2} aumenta
de forma no específica en ratones ex vivo alimentados con
ácido \gamma-linolénico. Se ha informado que el
TGF-\beta1 protege en la EAE aguda y recurrente
(Racke y col. (1993); Santambrogio y col. (1993)) y que los
inhibidores de la GP, tales como el aumento de la indometacina,
empeoran así la enfermedad (Ovadia y Paterson (1982)).
Las citoquinas están implicadas en la
patogénesis de la EM, existiendo muchos estudios que muestran un
aumento en las citoquinas inflamatorias mielinotóxicas
(TNF-\alpha, IL-1\beta e
IFN-\gamma) que coincide con la fase de recaída de
la enfermedad. Por el contrario, los niveles de la citoquina
anti-inflamatoria e inmunosupresora que transforman
el factor de crecimiento transformador beta1
(TGF-\beta-1) parecen reducirse
durante una fase de recaída y aumentan a medida que el paciente
entra en la fase de remisión. Así, el balance entre
TGF-\beta1 biológicamente activo y los
TNF-\alpha, IL-1\beta e
IFN-\gamma proinflamatorios parece estar alterado
durante la fases de recaída-remisión de la EM.
Durante la fase de recuperación natural de la
EAE, el TGF-\beta1 que secretan las células T
inhibe a las células efectoras de la EAE, el
TGF-\beta1 se expresa en el SNC y, en la
protección inducida mediante tolerancia por vía oral, el
TGF-\beta y el PGE_{2} se expresan en el cerebro
(Karpus y Swanborg (1991); Khoury y col. (1992)). Harbige (1998)
concluyó que los efectos del ácido
\gamma-linolénico dietético sobre la EAE están
mediados a través de mecanismos como el de las células Th_{3},
que implican al TGF-\beta1 y posiblemente a
través de la actividad antioxidante de la superóxido dismutasa.
Se ha mostrado que el aceite de borraja
(típicamente entre el 20% y el 23% de ácido
\gamma-linolénico y entre el 34 y el 40% de ácido
linoleico por el 100% de contenido de ácido graso) y el aceite del
hongo Mucor javanicus (véase la Figura 1) son eficaces en el
modelo animal de la EAE usado para identificar candidatos a la EM,
aunque nunca ha mostrado ser significativamente eficaz en la
enfermedad humana. Niveles elevados de aceite rico en ácido
linoleico que contiene niveles bajos de ácido
\gamma-linolénico (EPO: ácido linoleico:ácido
\gamma-linolénico 7:1) suprimieron de forma
parcial la incidencia y la gravedad de la EAE en ratas (Mertin y
Stackpoole, 1978), mientras que el estudio de Bates con Naudicelle
citado anteriormente condujo a un empeoramiento de los pacientes. A
pesar del uso de aceite de borraja y de otros aceites que contienen
GLA/LA tales como el aceite de onagra por afectados de esclerosis
múltiple durante aproximadamente los últimos 30 años, la gran
mayoría de los pacientes no se recuperaron de la enfermedad y no
mostraron una mejora significativa, continuando con la enfermedad
subyacente para progresar hasta la
muerte.
muerte.
Se ha sugerido el uso, inter alia, de
aceite de borraja rico en ácido \gamma-linolénico
y en ácido linoleico como medio para proporcionar inmunosupresión
en la esclerosis múltiple (documento US 4.058.594). Críticamente,
la dosis sugerida es de 2,4 gramos de aceite por día y no se
proporciona evidencia real de eficacia. Esto es mucho más bajo que
la dosis baja de 5 g/día que se encontró que era ineficaz in
vivo en hombres en el estudio del documento
PCT/GB04/002089.
Otros tratamientos inmunosupresores más
drásticos, incluyendo a destructores y a moduladores de las células
T tales como la ciclofosfamida, también han mostrado ser eficaces
en el modelo de la EAE, aunque cuando estos se emplean en la
enfermedad de esclerosis múltiple humana mejoran los síntomas, pero
la enfermedad subyacente continua su avance. De hecho las células T
producen citoquinas beneficiosas, tales como el
TGF-\beta1, así como otras peligrosas para el
hombre. David Baker del Instituto de Neurología del Reino Unido,
resumió la disparidad entre lo que es eficaz en la EAE y en la EM
con un artículo titulado "Everything stops EAE, nothing stops
MS" en la reunión de la Sociedad de EM del Reino Unido (UK
MS Society) Fronteras de la EM en el Reino Unido (UK MS
Frontiers), el 10 de Mayo de 2004.
Está claro que la inmunosupresión sola no puede
curar la EM. Casi con certeza esto se debe a un trastorno
metabólico subyacente fundamental en los pacientes con EM, además
de la enfermedad autoinmune, que conduce a una anormalidad en la
membrana, a la alteración de la citoquina y al posterior ataque
inmune y al proceso lesional. Aunque los pacientes vayan en
remisión en la enfermedad de recurrencia-remisión,
prosigue la desmielinación subyacente.
El tratamiento "estándar de oro" para la EM
sigue siendo el interferón, tal como Avonex®, Rebif® y otros
preparados de interferón. Este tratamiento estándar de oro sólo
atiende las necesidades de algunos de los pacientes, por ejemplo
del 30%, e incluso en esta mejora de los síntomas, el tratamiento
se limita a reducir la gravedad de las recaídas. Aunque los
síntomas se pueden disminuir en una proporción de los pacientes, la
enfermedad tiende a progresar hacia más incapacidad y hacia la
muerte debido a la degeneración subyacente.
En su estudio PCT/GB04/002089 hasta el momento
sin publicar, los inventores de la presente invención han
determinado de forma sorprendente que de conformidad con un
tratamiento con una "dosis elevada" con aceite triglicérido
que contenga altos niveles de ácido
\gamma-linolénico sn-2 (siendo
> 40% de los residuos en la posición sn-2 de
ácido \gamma-linolénico) con un contenido
adecuado de ácido graso acompañante, se pueden alcanzar niveles
notables de mejora en casi todos los síntomas de la EM, forma sin
igual que se proporciona mediante el presente tratamiento estándar
de oro. Dicho éxito es especialmente sorprendente a la luz del uso
anterior de otros preparados que contenían ácido
\gamma-linolénico que no tuvieron éxito, tal como
en el estudio con Naudicelle.
El estudio PCT/GB04/002089 muestra que durante
un periodo de 18 meses, los pacientes que toman una dosis elevada
(15 g/día) de aceite de borraja seleccionada con alto contenido de
ácido \gamma-linolénico sn-2
mostraban mejoras significativas y marcadas (p < 0,001) en la
puntuación de la EDSS, una tasa reducida de recaída, alivio
sintomático de la espasticidad muscular y de los síntomas
sensoriales dolorosos y medidas objetivas mejoradas de las
funciones cognitivas. Las dosis bajas de 5 g/día de este aceite de
borraja no tuvieron efecto.
Los pacientes que tomaron la dosis más alta de
este aceite de borraja mantuvieron su nivel de producción de
células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de
TGF-\beta1 durante el periodo de ensayo, sus
citoquinas proinflamatorias TNF-\alpha e
IL-1\beta se redujeron de forma significativa y
marcada (< 70%) y mantuvieron o incrementaron ácidos grasos
omega-6 de cadena larga de la membrana de
producción de CMSP ácido
dihomo-\gamma-linolénico (DHLA) y
ácido araquidónico (AA), en contraste con los pacientes que tomaron
placebo, que evidenciaron la pérdida de estos ácidos grasos durante
el curso del periodo de ensayo.
Aunque se esperaría que esta inmunosupresión
reduciría el aumento del proceso lesional activo y de la
neurodegeneración, el tratamiento con aceite con alto contenido de
GLA sn-2 aparentemente se dirige al mantenimiento
y/o al aumento de componentes clave de la membrana lipídica que de
otra forma se pierden específicamente en la EM, siendo consistente
con una corrección de un defecto metabólico que no se trata de
forma eficaz de otra manera mediante las terapias actuales. El
hecho de que la dosis baja (5 gramos/día) no tuvo efecto sobre
esto, respaldó dicha determinación.
Se sabe que el ácido
\gamma-linolénico (18:3n-6, o GLA)
se convierte rápidamente en los ácidos grasos poliinsaturados
omega-6 de cadena más larga ácido
dihomo-\gamma-linolénico y ácido
araquidónico in vivo (Phylactos y col. 1994, Harbige y col.
1995, 2000). Por consiguiente, para determinar como aumentar el
nivel de ácidos grasos omega-6 de cadena larga de
la membrana en la EM, los inventores han revisado sus resultados
obtenidos con varios aceites que contenían GLA: tanto aceites de
hongos (del hongo Mucor javanicus), como de plantas
(Borago officianalis), de onagra Oenothera spp. o de
grosella negra Ribes spp, así como de aceite de
tri-GLA sintético como sistemas de administración
de GLA en un modelo animal experimental in vivo de EM
conocido como encefalomielitis autoinmune experimental crónica
recurrente (CREAE).
La inducción de la EAE en ratas no produce
características histológicas de desmielinación (Brosnan y col.
1988), pero induce un patrón de enfermedad monofásica aguda, a
diferencia de la EM que se caracteriza por la desmielinación del
SNC y porque en la mayoría de los casos es clínicamente del tipo
recurrente-remitente. Sin embargo, los modelos de
EAE desmielinizante y crónica recurrente (CREAE) se caracterizan
por fases de desmielinación y de recaída. Con la demostración de
que la glucoproteína mielínica de oligodendrocitos (MOG) es una
diana neuroantigénica importante en la EM (Genain y col. 1999) y
con la demostración de respuestas mucho mayores de los linfocitos
autoreactivos de la sangre periférica a este neuroantígeno,
comparado con la PBM, en la EM (Kerlero de Rosbo y col. 1993,1997)
la CREAE inducida por MOG se ha convertido en el modelo animal de
elección con características estrechamente parecidas a aquellas
observadas en la EM (Fazakerely y col. 1997, Genain y col. 1999,
Amor y col. 1994).
Las evidencias procedentes del modelo de CREAE
del inventor y de los estudios de alimentación de ratas con EAE
indican que un aceite de semilla de grosella negra (72% p/p
18:3n-6, GLA) no protegía frente a la EAE (véase la
Tabla 3). Es importante destacar que el aceite de semilla de
grosella negra tiene un bajo contenido de GLA sn-2
con la mayoría del GLA en las posiciones sn-1 y
sn-3 (Lawson y Hughes 1988). Además, un
triacilglicerol estructurado que contiene tres radicales
(TG-GLA) proporcionó efectos protectores similares
a los del aceite de borraja usado en el modelo de CREAE (Tabla 2).
Esto sería coherente con que el GLA sn-2 sea
importante, es decir eliminándose la pareja exterior de GLA
sn-1 y sn-3 in vivo y
probablemente sufriendo una oxidación que deja sólo GLA
sn-2. Esta hidrólisis selectiva proviene de la
capacidad conocida que tienen las lipasas específicas para eliminar
los ácidos grasos sn-1 y sn-3 de las
moléculas de triacilglicerol, aunque hay una protección aparente de
la posición sn-2 in vivo (Lawson y Hughes
1988, Kyle 1990).
Esta revisión ha conducido a los inventores a
postular que los glicéridos que tienen residuos de ácido
\gamma-linolénico sn-2, de ácido
dihomo-\gamma-linolénico o de
ácido araquidónico serán mejores en la corrección del metabolismo
de la EM, que incluso el aceite de borraja con alto contenido de
ácido \gamma-linolénico sn-2 de su
ensayo anterior. Esto permitiría reducir las dosis de lípido que
deben tomarse y/o posiblemente reduciría el tiempo de tratamiento,
lo que daría como resultado un efecto beneficioso.
La Tabla 3 del documento EP 0520624 (Efamol
Holdings) compara el contenido de triglicéridos de aceites de
onagra y de borraja, instruyendo al primero para ser más eficaz
terapéuticamente que el último para una variedad de trastornos
sensibles al GLA. Este documento indica que el aceite de borraja
tiene veintisiete componentes de triglicérido diferentes, de los
cuales sólo el 20% tiene GLA sn-2. La página 3, en
las líneas 40-42, menciona que el ensayo biológico
ha mostrado que cantidades iguales de GLA pueden tener de hecho
distintos efectos cuando el GLA se suministra como aceite de
distintas fuentes. De forma crucial, se dirige entonces al lector a
una fracción en particular presente en el aceite de onagra (EPO),
aunque no en el aceite de borraja, como que es la responsable del
efecto superior del primero en el aumento de PGE1 (véase el gráfico
del documento EP 0520624 página 4 y la Tabla 2) y así es la
responsable del efecto anti-inflamatorio,
identificándose esa fracción como
di-linoeoil-mono-gamma-linolenil-glicerol
(DLMG), la cual se afirma que es entre el 18 y el 19% del total de
triglicérido en el EPO. De forma crítica, la página 6 enseña
claramente que la posición del GLA, en sn-1, 2 ó 3,
no es importante para este efecto.
Dines y col. (1994) en Proceedings of the
Physiological Society, Aberdeen Meeting 14-16
Septiembre de 1994, informan sobre estudios de tratamiento de daño
neuronal por neuropatía diabética con ácido
\gamma-linolénico que contiene aceites del tipo
postulado en el documento EP 0520624 y de nuevo indican que el
aceite de borraja no fue muy eficaz en el tratamiento de esta
neurodegeneración, mientras que el aceite de onagra sí lo fue. El
artículo concluye que el aceite de borraja contiene otros
constituyentes que interfieren con la actividad del GLA.
Los inventores de la presente invención ahora
tienen la intención de demostrar, a la vista de sus resultados con
aceite de borraja con alto contenido en ácido
\gamma-linolénico sn-2, que
efectivamente la presencia de un residuo de ácido
\gamma-linolénico sn-2, de ácido
dihomo-\gamma-linolénico o de
ácido araquidónico en un glicérido, especialmente en un
triglicérido, proporciona eficacia en el tratamiento de la EAE,
CREAE y en la enfermedad humana de EM.
En un primer aspecto, la presente invención
proporciona un procedimiento de tratamiento de un paciente
necesitado de terapia para una enfermedad neurodegenerativa que
comprende la administración a ese paciente de una dosis
terapéuticamente eficaz de un glicérido lípido de estructura
definida que comprende un radical de glicerol esterificado con uno
o más radicales de ácido graso, caracterizado porque el lípido
tiene un radical de ácido graso en la posición sn-2
seleccionado entre el grupo de residuos constituido por residuos de
ácido \gamma-linolénico, ácido
dihomo-\gamma-linolénico y ácido
araquidónico.
Las enfermedades neurodegenerativas tratadas de
forma especialmente ventajosa son aquellas que implican la
desmielinación. El procedimiento de la presente invención detiene
la neurodegeneración subyacente y restablece la función neuronal.
De forma especial, el procedimiento normaliza la composición de la
membrana neuronal y restablece las proporciones de
TGF-\beta1/TNF\alpha liberadas de forma
espontánea por las CMSP sanas y restablece las proporciones de
TGF-\beta1 con otras citoquinas liberadas por las
CMSP. Lo más ventajosamente, el procedimiento detiene la
neurodegeneración de todos los tipos de la esclerosis múltiple,
aunque lo hace especialmente en la EM remitente recurrente,
progresiva primaria y progresiva crónica y sirve para el
restablecimiento, en parte o de forma completa, de la función
neuronal tal como se mide, por ejemplo, mediante escáner IRM o TAC
o mediante la puntuación de la EDSS. Dicho procedimiento también se
puede usar en el tratamiento del empeoramiento cerebral después de
un ictus, de un trauma craneal y de hemorragias intracraneales en
los que hay desmielinación o daño neuronal. Además se proporciona
aplicación en el tratamiento de otras enfermedades con
desmielinación crónica, tales como en las enfermedades de Alzheimer
y de Parkinson.
Preferentemente, el lípido se administra durante
una duración y con una dosis suficiente como para mantener o
elevar los niveles de TGF-\beta en el paciente
hasta niveles terapéuticos. Por niveles terapéuticos se quiere
decir niveles al menos muy parecidos con los de los sujetos sanos.
Preferentemente, la dosis es tal como para producir una proporción
de TGF-\beta1/TNF-\alpha
liberada de forma espontánea desde las células mononucleares de
sangre periférica (CMSPs) aisladas de la sangre de un paciente,
después de 18 meses de dosificación diaria, de entre 0,4 y 3,0, al
menos 0,5, de forma más preferente al menos 0,75 y lo más
preferentemente al menos 1. Preferentemente, la dosis es tal como
para producir una proporción de
TGF-\beta1/IL-1\beta en la
sangre de un paciente, después de 18 meses de dosificación diaria,
de al menos 0,5, más preferentemente de al menos 0,75 y lo más
preferentemente de al menos 1. Preferentemente dichos niveles se
producen después de 12 meses y más preferentemente después de 6
meses.
Típicamente, la cantidad de lípido administrada
diariamente estará entre 0,5 y 30 gramos, dosificados por vía oral,
aún más preferentemente entre 1 y 20 gramos y lo más
preferentemente entre 1 y 18 gramos, típicamente entre 3 y 5
gramos.
En el caso de que el radical
sn-2 sea el de un residuo de ácido
\gamma-linolénico, la dosis puede estar hacia el
extremo más alto de estos intervalos, especialmente en el caso de
que los radicales sn-1 y sn-3 sean
relativamente inertes, por ejemplo siendo ácidos utilizados
metabólicamente tales como los ácidos grasos saturados. En el caso
de que el radical sn-2 sea el de un residuo de
ácido dihomo-\gamma-linolénico, la
dosis puede ser menor, mientras que en el caso de que el radical
sn-2 sea el de un residuo de ácido araquidónico, la
eficacia es mayor, aunque la dosificación debería ser más
cui-
dadosa, debido a las posibilidades existentes de aparición de efectos secundarios no deseados a niveles más elevados.
dadosa, debido a las posibilidades existentes de aparición de efectos secundarios no deseados a niveles más elevados.
De forma más preferible, el procedimiento se
caracteriza porque el lípido es un monoglicérido, diglicérido o
triglicérido que contiene al menos un radical del ácido
\gamma-linolénico, del ácido
dihomo-\gamma-linolénico o del
ácido araquidónico sn-2 de fórmula general I
mostrada a continuación:
en la
que
R^{1} y R^{3} se seleccionan de forma
independiente entre hidrógeno y grupos acilo, y
R^{2} se selecciona entre el grupo constituido
por residuos de ácido \gamma-linolénico, de ácido
dihomo-\gamma-linolénico y de
ácido araquidónico.
Para el propósito de la presente invención, los
grupos acilo se definen como aquellos que comprenden al menos un
grupo carbonilo sobre el extremo de una cadena de hidrocarburo
seleccionado entre cadenas de alquilo y de alquenilo, estando unido
directamente el grupo carbonilo mediante su átomo de carbono al
oxígeno del residuo de glicerol mostrado en la fórmula I.
Los grupos acilo preferidos R^{1} y R^{3}
son radicales de ácido graso saturado de fórmula
-CO-(CH_{2})_{n}-CH_{3}, en la que n
es un número entero seleccionado entre 1 y 22, siendo más
preferentemente entre 4 y 16, siendo aún más preferentemente entre 5
y 12, siendo lo más preferentemente entre 6 y 10. Los grupos acilo
especialmente preferidos son aquellos de los ácidos caprílico y
cáprico, siendo especialmente gliceroles de ácido
1,3-dicaprílico o 1,3-dicáprico que
tienen el radical de ácido \gamma-linolénico,
ácido dihomo-\gamma-linolénico o
de ácido araquidónico en la posición sn-2.
Los glicéridos preferidos para uso en la
presente invención son los triglicéridos.
El documento US 4701469 describe algunos
triglicéridos potenciales para uso nutracéutico que los inventores
de la presente invención han determinado que se pueden usar en el
procedimiento de la presente invención, aunque dicho documento sólo
describe de forma específica triglicéridos de
1,3-dioctanilo en los que el ácido
sn-2 es de un AGE, sólo se describe que se ha
preparado el 1,3-dioctanoilo eicosapenta glicerol.
Se dice que estos son útiles en inter alia la
inmunomodulación, pero aunque se especifican varias enfermedades, no
se incluye el uso en inmunosupresión en la neurodegeneración y en
la EM.
Aunque los grupos R^{1} a R^{3} más
preferidos para inclusión en el compuesto de fórmula I son ácidos
grasos saturados simples o ácidos grasos de origen natural con
función estructural o metabólica, tales como ácidos grasos de
cadena media o de cadena larga, hay otras posibilidades. Los ácidos
grasos especialmente preferidos son aquellos que se utilizan
principalmente por parte del metabolismo para producir energía. En
el caso de que los ácidos grasos sean estructurales, es decir, que
se utilicen en membranas, éstos son de forma conveniente residuos
de ácidos tales como ácido \gamma-linolénico,
ácido linoleico, ácido
dihomo-\gamma-linolénico y ácido
araquidónico. Por residuo se quiere decir el radical que permanece
después de que el grupo carboxilo del ácido graso esterifica a uno
de los grupos hidroxi de la molécula de glicerol.
Otros ácidos grasos preferidos para las
posiciones sn-1 y sn-3 se
seleccionan entre ácidos grasos que se metabolizan en el ser humano
para producir energía, en oposición a un ácido graso que se dirige
principalmente a la mezcla de la membrana estructural: dichos
ácidos preferidos incluyen al ácido oleico y al ácido
palmítico.
En el caso de que la cadena de ácido graso
sn-1 y sn-3 (R^{1} y R^{3}) sea
insaturada, ésta también puede ser la de otros ácidos grasos
esenciales, tales como los ácidos n-3 tales como
ácido estearidónico, ácido eicosapentanoico y ácido
docosahexanoico. En el caso de que el ácido graso esté
opcionalmente sustituido, estos estarán sustituidos preferentemente
por grupos hidroxi, oxo, carboxilo, alquilo, alquenilo y alcoxi. La
cadena de hidrocarburo es preferentemente una de entre 1 y 30
átomos de carbono de longitud, más preferentemente de entre 4 y 28
átomos de carbono de longitud, aún más preferentemente de entre 4 y
24 átomos de carbono de longitud. Lo más preferentemente, la cadena
de hidrocarburo es la de un ácido graso, de forma más particular es
un ácido graso mono o poliinsaturado.
Muchos de los lípidos preferidos para su uso en
el procedimiento de la presente invención se conocen y se pueden
preparar mediante procedimientos químicos conocidos en la técnica.
Por ejemplo, muchos se encuentran disponibles comercialmente, tales
como la trigamma-linolenina, conocida como TLG,
aunque citada en esta invención como GGG, que refleja la identidad
de los grupos R^{1}R^{2}R^{3}, en la que G representa
residuos de ácido \gamma-linolénico.
La GGG se encuentra disponible comercialmente en
Nu-Check-Prep Inc. El documento EP
0300844 describe su síntesis usando una reacción de
transesterificación de triacetina con gamma linolenato de metilo
catalizada por una base, para proporcionar una mezcla que contiene
el 80% de GGG, \gamma-linolenato de metilo sin
reaccionar y el 10% de mono- y de diglicéridos.
La triaraquidina es conocida y se pueden obtener
pequeñas cantidades comercialmente por ejemplo de Sigma. La AAA se
ha sintetizado a partir de ácido araquidónico mediante el uso de
una lipasa inmovilizada patentada para la mejora de la actividad de
angiogénesis en el documento US 4888324.
Sin embargo, aunque se pueden usar los di o
triglicéridos de ácido tri y
di-\gamma-linolénico, de ácido
dihomo-\gamma-linolénico o de
ácido araquidónico, los inventores de la presente invención
prefieren el uso del éster sn-2 del ácido
mono-\gamma-linolénico, del ácido
dihomo-\gamma-linolénico o del
ácido araquidónico porque administran menos cantidad de los ácidos
grasos inmunomodulatorios y proinflamatorios ácido
\gamma-linolénico, ácido
dihomo-\gamma-linolénico o ácido
araquidónico mientras que se retiene la actividad mejorada que
proporciona el radical sn-2 del ácido
\gamma-linolénico, del ácido
dihomo-\gamma-linolénico o del
ácido araquidónico en lo que respecta al efecto deseado de
normalización de la membrana y de modificación de la
enfermedad.
Los nuevos lípidos que se prefieren están
accesibles mediante los procesos y los procedimientos presentados
en los ejemplos de esta invención. La mayoría de los lípidos
preferidos son aquellos en los que precisamente hay un radical de
ácido \gamma-linolénico, de ácido
dihomo-\gamma-linolénico o de
ácido araquidónico individual esterificando al glicerol en la
posición sn-2, siendo los ácidos que están en las
posiciones sn-1 y sn-3 ácidos de
cadena media insaturada o de cadena larga insaturada.
Así, un aspecto adicional de la presente
invención proporciona nuevos lípidos descritos en esta invención
que incluyen a compuestos de fórmula II
en la que R^{1} y R^{3} son
iguales y son -C(O)(CH_{2})_{n}CH_{3}, en la
que n se selecciona entre 4 y 14, más preferentemente entre 6 y 10
y lo más preferentemente entre 7, 8 ó 9 y en la que R^{2} se
selecciona entre \gamma-linolenilo,
dihomo-\gamma-linolenilo y
araquidonilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Un aspecto adicional de la presente invención
proporciona un procedimiento para la síntesis de un compuesto de
fórmula general III
en la que R^{1} y R^{3} son
iguales y son -C(O)(CH_{2})_{n}CH_{3}, en la
que n se selecciona entre 4 y 14, más preferentemente entre 6 y 10 y
lo más preferentemente entre 7, 8 ó 9 y en la que R^{2} es un
residuo \gamma-linolenilo,
dihomo-\gamma-linolenilo o
araquidonilo
que comprende la reacción de
1,3-dihidroxiacetona con un compuesto de fórmula
X-C(O)(CH_{2})_{n}CH_{3}, en la
que X se selecciona entre Cl, Br y I,
para proporcionar el compuesto
1,3-di-(C(O)(CH_{2})_{n}CH_{3})2-ceto
correspondiente
la reducción del grupo ceto al
1,3-di-(C(O)(CH_{2})_{n}CH_{3})2-ol
correspondiente y la reacción de ese con cloruro de
\gamma-linolenilo o con cloruro de
dihomo-\gamma-linolenilo o con
cloruro de araquidonilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Un aspecto aún adicional de la presente
invención proporciona un procedimiento para la síntesis de un
compuesto de fórmula general IV
en la que R^{1} a R^{3} son
iguales y se seleccionan entre residuo de
\gamma-linolenilo, residuo de
dihomo-\gamma-linolenilo o
residuo de
araquidonilo
que comprende la reacción del cloruro de
\gamma-linolenilo, cloruro de
dihomo-\gamma-linolenilo o cloruro
de araquidonilo correspondiente con glicerol.
La síntesis de algunos de estos compuestos se
describe a continuación y en los esquemas mostrados en las figuras
que siguen a continuación.
Por ejemplo, se puede llevar a cabo una
esterificación de glicerol en una sola etapa que use GLA y un
agente de acoplamiento, tal como los reactivos de acoplamiento
DCCl/DMAP
(1,1-diciclohexilcarbodiimida/4-dimetilaminopiridina).
Este procedimiento proporciona un buen rendimiento, aunque genera
impurezas que, a menos que se eliminen, hacen que el aceite final
esté turbio. Esto se puede evitar mediante el uso de un agente de
acoplamiento tal como EDCI (clorhidrato de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida),
que da lugar a subproductos solubles en agua que son más fáciles de
eliminar. La Kokai de solicitud de patente japonesa Tokio Koho JP
05310638 A2 del 22 de Noviembre de 1993 Heisei, 6 páginas, describe
la preparación de
tri-\alpha-linolenina (LnLnLn en
la que Ln es ácido linoleico) usando DCCI y una reacción análoga
aunque distinta.
Una propuesta alternativa proporciona una
secuencia de dos etapas, que usa la reacción de
GLA-Cl (preparado a partir de ácido
\gamma-linolénico y de cloruro de oxalilo) y de
glicerol en diclorometano/piridina, con buenos rendimientos, a una
escala de hasta 250 g y en el que se purifica mediante
cromatografía en columna. La Kokai de solicitud de patente japonesa
Tokio Koho JP 04328199 A2 del 17 de Noviembre de 1992 Heisei, 5
páginas (Japón) Concentration of a-linolenic acid
triglyceride by flash chromatography. Ando, Yukiki, Watanebe,
Yoichi, Takagi, Yoshiaki (Nisshin Oil Mills Ltd, Japón), describe
una técnica relacionada, aunque distinta, para la purificación de
tri-\alpha-linolenina
(LnLnLn).
El ejemplo comparativo con tricaprina
(tridecanato de glicerol) es un compuesto conocido disponible
comercialmente en Sigma. Éste se ha preparado mediante la reacción
de dodecanoato de metilo y de gliceróxido de sodio con la
purificación posterior del producto bruto mediante cromatografía en
columna (véase E. S. Lutton y A. J. Fehl, Lipids, 5,
90-99 (1970)).
Un procedimiento alternativo implica la reacción
catalizada por ácido de glicerol con ácido decanoico seguido por
cuatro recristalizaciones (véase L. H. Jenson y A. J. Mabis,
Acta Cryst., 21, 770 (1966)).
El solicitante proporciona además un
procedimiento mejorado que permite reaccionar al glicerol con más de
3 equivalentes de cloruro de decanoilo y que permite purificar el
producto de tricaprina mediante recristalización.
Los aspectos adicionales de la presente
invención proporcionan el uso de aceites triglicéridos tal como se
describió anteriormente para la fabricación de un medicamento para
el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas tal como se
expuso en el procedimiento de la presente invención. Los
medicamentos especialmente preferidos son para la detención y para
la reversión de la neurodegeneración en la EM de todos los tipos,
aunque especialmente en la EM de tipo remitente recurrente,
progresiva primaria y progresiva crónica y para el
restablecimiento, en parte o de forma completa, de la integridad de
la función neuronal tal como se mide, por ejemplo, mediante escáner
IRM o TAC o mediante la puntuación de la EDSS. Se pueden tratar
otras enfermedades sensibles al TGF-\beta1 tal
como se expuso anteriormente.
Los lípidos para uso en la presente invención se
pueden administrar mediante cualquiera de los vehículos conocidos
en farmacia. Lo más convenientemente, se administran como aceites
puros o en una mezcla con productos alimenticios, en forma de
cápsulas que contienen dichos aceites, o en formas recubiertas de
forma entérica. A los expertos en la técnica se les ocurrirán otras
formas además de las de Remington Pharmaceutical Sciences, 19ª
edición.
Los expertos en la técnica se darán cuenta de
que se pueden combinar otros agentes beneficiosos con los lípidos
para uso en la presente invención o que pueden formar parte de otra
manera de un régimen de tratamiento con los lípidos. Estos pueden
ser bloqueantes de los canales iónicos, por ejemplo bloqueantes del
canal de sodio, interferones (\alpha, \beta o \gamma),
destructores de células T, esteroides u otros agentes paliativos.
Además se comprenderá que en el caso de que se estén modulando las
respuestas inmune e inflamatoria, dichas combinaciones necesitarán
hacerse de forma cuidadosa, dada la compleja naturaleza de estos
sistemas. Sin embargo, dada la respuesta retrasada a los aceites de
la presente invención, en los primeros meses de tratamiento pueden
ser beneficiosos agentes de acción más rápida antes de que se
normalicen los niveles de TGF-\beta1, con tal de
que el tratamiento adicional no impida este proceso de
normalización.
A continuación se describe la síntesis de
lípidos estructurados para uso en la presente invención, junto con
la síntesis de ejemplos comparativos. Algunos de estos lípidos son
nuevos, mientras que otros son conocidos aunque no se han usado
para el tratamiento de la presente invención.
La presente invención se describirá ahora a modo
de ejemplo, sólo mediante referencia a las siguientes tablas,
ejemplos y figuras no limitantes. Las formas de realización
adicionales que están dentro del alcance de la presente invención
se les ocurrirán a los expertos en la técnica a la luz de
estas.
- Tabla 1:
- Muestra la composición del % de contenido de ácido graso total de distintos aceites triglicéridos y el efecto protector en la EAE.
- Tabla 2:
- Muestra los parámetros de tres grupos de tratamiento en un ensayo con aceite de borraja con alto contenido de GLA sn-2 descrita en el documento PCT/GB04/002089.
- Tabla 3:
- Muestra el efecto de distintas formas de GLA sobre la incidencia de la EAE y sobre los resultados clínicos en ratones SJL: las puntuaciones más bajas indican un efecto terapéutico mejorado.
- Tabla 4:
- Muestra el fracaso del aceite de grosella negra, un aceite con alto contenido de GLA, aunque con bajo contenido de GLA sn-2, aceite de planta, para comparar los aceites de hongo y de borraja en la EAE.
Figura 1: Muestra la producción espontánea de
citoquina de células mononucleares de sangre periférica con un
placebo y con un contenido elevado de ácido
\gamma-linolénico sn-2, el aceite
de ensayo del documento PCT/GB04/002089 trató a pacientes humanos
con EM durante 18 meses.
Figura 2: Muestra el efecto de un placebo y de
una dosis baja (5 g/día) de un aceite de borraja con alto contenido
de GLA sn-2 sobre la puntuación en la EDSS de
pacientes con EM en comparación con el efecto de una dosis elevada
(15 g/día) mostrado en forma de histograma con los meses de
tratamiento reflejados en el eje x.
Figura 3: Muestra el efecto de un placebo, de
una dosis baja y de una dosis elevada de aceite de borraja con alto
contenido de GLA sn-2 sobre la tasa media de
recaída (%) de pacientes humanos con EM en forma de histograma con
los meses reflejados sobre el eje x.
Figura 4: Muestra el esquema de reacción para
la síntesis de un triacilglicérido de ácido graso individual para
su uso en el procedimiento y en el uso de la presente
invención.
Figura 5: Muestra el esquema de reacción para
la síntesis del compuesto de control tricaprina.
Figura 6: Muestra el esquema de reacción para la
síntesis de CGC, un triacilglicérido de ácido graso mezclado de la
presente invención.
Figura 7: Muestra el esquema de reacción para la
síntesis de C-DHGLA-C, un
triacilglicérido de ácido graso mezclado de la presente
invención.
Figura 8: Muestra el esquema de reacción para
la síntesis del compuesto de control GCG,
1,3-dicaprilo, ácido
2-\gamma-linolénico.
Figura 9: Muestra el esquema de reacción para la
síntesis de C-AA-C, un
triacilglicérido de ácido graso mezclado de la presente
invención.
Las Figuras 10 a 19 muestran los resultados de
los estudios de la EAE en ratones SJL y C57BL, tal como se expuso
en los ejemplos anteriores. (DHLA=DHGLA: A=AA)
Veintiocho pacientes de esclerosis múltiple (con
edades que variaban entre los 18 y los 65 años) del tipo
remitente-recurrente activo (dos recaídas en los 18
meses anteriores) se metieron en un ensayo controlado mediante
placebo, doble ciego, para investigar los efectos de aceite de
borraja encapsulada sobre la actividad clínica y sobre parámetros
de laboratorio durante 18 meses. Este aceite era de alto contenido
en ácido \gamma-linolénico (GLA)
sn-2 (siendo > del 40% de los residuos
sn-2 ácido \gamma-linolénico) con
bajo contenido en moneno (por ejemplo, ácido erúsico) y no tenía
vitamina E añadida, un conocido inmunomodulador.
Los pacientes se reclutaron entre pacientes
ambulatorios de neurología de clínicas en dos hospitales de ciudad;
el consentimiento informado del hospital se obtuvo en la primera
visita (visita inicial). Los criterios de exclusión incluyen
cualquier forma de tratamiento con fármaco de esteroides o
inmunosupresor, embarazo, hiperlipidemia, uso habitual de aspirina
o de fármacos relacionados y suplemento con vitaminas o con ácidos
grasos dentro de los tres meses anteriores.
Sólo se incluyeron en el ensayo los pacientes
que reunían todos los criterios que se muestran a continuación:
(a) pacientes capaces de proporcionar consentimiento informado
antes del tratamiento, con pleno conocimiento de que podrían ser
retirados en cualquier momento sin perjuicio; (b) pacientes
ambulatorios hombres o mujeres de entre 18 y 60 años, inclusive;
(c) pacientes que tienen un diagnóstico confirmado de EM de tipo
recurrente definido clínicamente; (d) pacientes que han tenido al
menos tres recaídas clínicas documentadas en los dos años
anteriores; (e) pacientes que tienen una puntuación inicial en la
escala expandida del estado de discapacidad (EDSS) de entre
0,0-5,5 ambos inclusive, a condición de que tengan
exacerbaciones bien documentadas y (f) pacientes sanos, aparte de
los síntomas relacionados con la EM, tal como se confirma mediante
la historia clínica, el examen físico y mediante las pruebas de
química clínica, de orina y hematológicas.
Los pacientes se distribuyeron de forma
aleatoria por parte del Departamento de Farmacia entre uno de los
tres grupos siguientes, conteniendo cada grupo 12 pacientes:
- \bullet
- Un grupo clínico (n= 12) para recibir placebo (5 g de polietilenglicol 400)
- \bullet
- Un segundo grupo clínico (n= 12) para recibir una dosis baja (5 g) de aceite de Borago officinalis refinado
- \bullet
- Un tercer grupo clínico (n= 12) para recibir una dosis alta (15 g) de aceite de Borago officinalis refinado
El suplemento estaba en forma de cápsulas de un
gramo de aceite administradas diariamente (5/día para las de dosis
baja y 15/día para las de dosis alta) durante una duración de 18
meses. El aceite de Borago officinalis y los ácidos grasos
omega-6 poliinsaturados son ingredientes
alimentarios que son generalmente reconocidos como seguros (GRCS)
para el consumo humano. Bajo las reglamentaciones de la CE no hay
requisitos de clasificación o de etiquetado. La evaluación clínica
incluyó: Puntuaciones en la Escala Expandida del Estado de
Discapacidad (EDSS) y registro de las recaídas clínicas. Se obtuvo
sangre venosa (50 ml) para estudios de laboratorio en los meses 1º,
3º, 6º, 12º, 15º y 18º de administración del suplemento.
Se investigaron los siguientes parámetros
bioquímicos e inmunológicos en cada visita para la comparación con
los datos previos al tratamiento y para la comparación de los datos
entre los grupos:
- \bullet
- Producción estimulada y no estimulada de citoquina de células mononucleares de sangre periférica ex vivo: cambios en TGF-\beta1, IFN-\gamma, TNF-\alpha, IL-1\beta, IL-6 e IFN-\beta, que están implicados en la patogénesis de la EM. Citoquina y expresión genética relacionada.
- \bullet
- Moléculas de adhesión en su forma soluble en suero, especialmente ICAM-1 y VCAM-1
- \bullet
- Composición de los ácidos grasos de membrana de células mononucleares de sangre periférica y de los ácidos grasos de fosfolípidos en plasma.
Los resultados se muestran en las Tablas 1 y 2 y
en las Figuras 1 a 5.
El parámetro clínico principal fue el número de
recaídas clínicas entre la línea base (mes 0) y el final del
tratamiento (mes 18). Los parámetros clínicos secundarios incluían:
el tiempo hasta la primera recaída; la gravedad de las recaídas tal
como se evalúa mediante la puntuación EDSS y mediante el uso de
tratamiento con esteroides e incluían además los cambios en la EDSS
en los meses 3, 6, 9, 12 y 18 comparado con el mes inicial y
definido como al menos un aumento de 1,0 puntos en la EDSS que se
mantiene durante 3 meses o un aumento de al menos 1,5 puntos en la
EDSS desde la EDSS inicial que se mantiene durante 3 meses.
Once pacientes estaban en el grupo de placebo,
siete pacientes habían estado tomando una dosis baja de aceite de
borraja y diez pacientes habían estado tomando una dosis alta de
aceite de borraja. El estudio con fármaco se toleró bien y no hubo
eventos adversos serios durante el ensayo de 18 meses.
\vskip1.000000\baselineskip
La sangre total heparinizada se diluyó con un
volumen igual de solución salina equilibrada de Hanks (Sigma, Reino
Unido) y la sangre diluida resultante se depositó sobre Lymphoprep
(Nycomed, Oslo, Noruega). Después de la centrifugación en gradiente
de densidad a 800 g durante 30 minutos, las CMSP se retiraron de la
interfase y se diluyeron con solución de Hanks. A continuación se
lavaron las células dos veces mediante centrifugación a 250 g
durante 10 minutos. A continuación, el sedimento final resultante
se puso de nuevo en suspensión en un medio de cultivo constituido
por medio RPMI-1640 (Sigma, Reino Unido)
suplementado con L-glutamina 2 mM, 100U de
penicilina y 100 \mug de estreptomicina (Sigma, Reino Unido) y
con 10% de plasma antólogo. Se añadieron 2x10^{6} CMSP por ml,
> del 95% viables tal como se juzgó mediante la exclusión con
azul de tripano, a los tubos de cultivo de tejido (Bibby Sterilin
Ltd, Stone, Reino Unido) y se incubaron durante 24 h a 37ºC con el
5% de CO_{2}. La concentración de antígeno, la densidad celular y
el tiempo de cultivo se determinaron todos en experimentos
cinéticos anteriores para determinar la producción de citoquina
máxima (datos no mostrados). Los preparados de citospina de rutina
también se prepararon para los contajes diferenciales posteriores.
Después de la incubación, las células se retiraron del cultivo
mediante centrifugación a 250 g durante 10 minutos, a continuación
se retiraron los sobrenadantes resultantes, se prepararon alícuotas
y se almacenaron a -70ºC.
Se centrifugaron a 250 g 10 ml de sangre
heparinizada durante 10 minutos. A continuación, se retiró la capa
de plasma resultante, se prepararon alícuotas y se almacenaron a
-70ºC.
Se detectaron TNF-\alpha,
IL-1\beta e IFN-\gamma en los
sobrenadantes del cultivo celular y en el plasma usando anticuerpos
apareados disponibles comercialmente que permiten la detección de
citoquina en un formato ELISA (R & D systems Ltd, Abingdon,
Reino Unido). Las sensibilidades en los kit de ELISA para
TNF-\alpha e IFN-\gamma fueron
de 15,6-1000 pg/ml y de 3,9-250
pg/ml para IL-1\beta.
El TGF-\beta1 biológicamente
activo en los sobrenadantes del cultivo celular y en el plasma se
detectó usando el sistema ELISA E_{max} disponible
comercialmente, con una sensibilidad de 15,6-1000
pg/ml (Promega, Southampton, Reino Unido).
Las diferencias en la producción de citoquina se
compararon usando la prueba T de Student y usando la prueba U de
Mann-Whitney y se consideraron significativas
cuando los valores de p fueron menores de 0,05.
Dos pacientes habían desarrollado diarrea y más
tarde se confirmó que ambos habían tomado la dosis alta del aceite
de borraja. En un paciente la diarrea fue suave, aunque en el
segundo paciente fue moderadamente grave, el cual suspendió más
tarde el fármaco de estudio. El código de tratamiento no se rompió
y después de suspender el fármaco la diarrea había desaparecido,
aunque reapareció después de una nueva dosis de provocación. Por
lo tanto, este paciente se retiró del ensayo. Los pacientes
restantes que se trataron con dosis alta de aceite de borraja
mostraron una mejora clínica excelente en todos los criterios de
los parámetros clínicos primarios y secundarios. Por ejemplo, su
puntuación EDSS media después de 6 meses de tratamiento había
mejorado desde la puntuación EDSS inicial (Figura 1). De forma más
importante, el número medio de recaídas clínicas se había reducido
de forma significativa después de 6 meses de tratamiento cuando se
comparó con el número de recaídas en el grupo de placebo (Figura
2). Por el contrario, los pacientes que habían recibido una dosis
baja de aceite de borraja no muestran ninguna mejora clínica cuando
se comparan con el grupo de placebo. Además de su efecto
beneficioso sobre la actividad de la enfermedad de EM, la dosis
alta de aceite de borraja proporcionó algún alivio sintomático en
la espasticidad muscular (agarrotamiento) y en los síntomas
sensoriales de dolor y también mejoró las funciones cognitivas.
Tal como se puede ver para las figuras que
siguen a continuación, la tasa de recaídas después de 9, 12 y 18
meses se redujo a cero en el grupo de dosis alta. El aumento visto a
los 15 meses se debió al paciente que abandonó este grupo.
Lo siguiente son tres resúmenes de historial
clínico para ilustrar los beneficios terapéuticos de la dosis alta
de aceite de borraja con alto contenido de GLA sn-2.
Los dos primeros provienen del ensayo, mientras que el tercero es
un paciente post ensayo del que se obtuvieron estudios mediante
IRM.
\vskip1.000000\baselineskip
Paciente
1
El primer paciente fue una mujer de 48 años que
había tenido una EM remitente recurrente, clínicamente activa,
durante 9 años. La mujer había trabajado anteriormente como
administradora a tiempo completo en la autoridad sanitaria local,
aunque fue incapaz de llevar a cabo sus responsabilidades debido a
su enfermedad de EM grave. Por tanto, la mujer trabajó más tarde
como secretaria a tiempo parcial, aunque aún tenía dificultades de
movimiento debido al agarrotamiento de los músculos y a los
trastornos sensoriales. También experimentó varias recaídas
clínicas graves a un promedio de una recaída cada nueve meses. La
mayoría de estas recaídas habían acarreado como resultado
hospitalizaciones para recibir terapia con esteroides. A la vista
de su enfermedad de EM activa, se reclutó a esta mujer para el
ensayo con aceite de borraja. No hubo eventos adversos relacionados
con el estudio y después de tomar la medicación durante cuatro
meses, la mujer experimentó una buena mejoría en sus síntomas para
andar y en sus síntomas sensoriales.
Aproximadamente nueve meses después de la
terapia, esta mujer se encontró lo suficientemente bien como para
comenzar un trabajo a jornada completa. Además, la mujer permaneció
libre de recaídas durante los 18 meses de duración del ensayo
clínico. Después de la finalización del ensayo, el código de
tratamiento reveló que la mujer estaba tomando la dosis alta de
aceite de borraja.
\vskip1.000000\baselineskip
Paciente
2
El segundo caso fue una mujer de 46 años que
también había tenido una EM remitente recurrente, clínicamente
activa, durante 8 años. En un principio la mujer había trabajado
como dependienta, pero se quedó sin empleo después de que se le
diagnosticó la EM.
Sus síntomas incluían dificultad con la
movilidad y síntomas sensoriales de dolor en ambas piernas. La
mujer había experimentado tres recaídas clínicas en los dos años
anteriores al ensayo clínico y había sido hospitalizada dos veces
para recibir terapia con esteroides. Por lo tanto, se reclutó a
esta mujer en un ensayo clínico con aceite de borraja, aunque su
capacidad para andar continuó deteriorándose. A los seis meses de
empezar el ensayo clínico, la mujer necesita usar un bastón para
caminar y también recibió tratamiento con Baclofen para reducir la
espacticidad de los miembros inferiores. Aproximadamente diez meses
después de comenzar el ensayo clínico con aceite de borraja, la
mujer fue hospitalizada debido a una recaída clínica grave, que se
trató con esteroides. Más tarde, la mujer desarrolló trastornos de
vejiga y comenzó a usar una silla de ruedas para hacer recorridos
largos. El código de tratamiento se rompió después de la
finalización del ensayo clínico de 18 meses y se encontró que la
mujer había estado tomando placebo. Desde entonces, la mujer
comenzó a usar un andador para recorridos mayores de 45,72 m
(50
yardas).
yardas).
\newpage
Paciente
3
El tercer caso fue un hombre de 26 años al que
se le había diagnosticado EM definitiva en Abril de 2001. Sus
síntomas habían comenzado en 1999 cuando el hombre se quejó de
dolor intratable, difuso, que afectaba a distintas partes de su
cuerpo, especialmente el lado izquierdo del pecho y del abdomen.
Esto fue seguido por entumecimiento intermitente en las manos y en
los pies, asociado con debilidad fluctuante. También hubo síntomas
angustiosos de vejiga en la forma de frecuencia urinaria y de
urgencia. El diagnóstico de EM en 2001 se basó en estos síntomas
remitentes recurrentes y se confirmó mediante análisis positivo del
fluido cerebroespinal y mediante imagen por resonancia magnética
(IRM) del cerebro, que mostró múltiples anormalidades en la
sustancia blanca en los dos hemisferios cerebrales. Los síntomas no
respondieron a distintas terapias farmacéuticas.
En Abril de 2003, se inició el suplemento con el
aceite de borraja de dosis alta de la presente invención. El
paciente informó de una mejoría espectacular en sus síntomas en el
espacio de tres meses desde el comienzo de su suplemento por vía
oral. Sus síntomas sensoriales de dolor desaparecieron por
completo. El hombre no informó ni de entumecimiento ni de debilidad
desde Mayo de 2003 y experimentó una mejora significativa en el
control de su vejiga. El suplemento por vía oral no causó eventos
adversos. Se repitió una IRM del cerebro para verificar la mejora
informada en los síntomas del Sr. N. La IRM repetida mostró una
reducción en el tamaño y en la distribución de las anormalidades de
la sustancia blanca.
\vskip1.000000\baselineskip
En todos los ejemplos que siguen a continuación,
se obtiene una pureza más alta mediante el uso de un material de
partida de ácido \gamma-linolénico,
dihomo-\gamma-linolénico o
araquidónico de una pureza más alta, tal como se encuentra
disponible, por ejemplo, en Sigma Aldrich. GLA 95 indica ácido
\gamma-linolénico puro al 95%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de síntesis
1
Se disolvieron 2,0 g (7,2 mmol, 3,1
equivalentes) de GLA 95 (ácido \gamma-linolénico
puro al 95%) en 10 ml de DCM. Se añadieron gota a gota 1,01 g (0,71
ml, 8,0 mmol, 3,4 equivalentes) de cloruro de oxalilo en 5 ml de
DCM durante 2-3 minutos bajo atmósfera de nitrógeno.
Se agitó a TA durante la noche. La mezcla de reacción se concentró
a vacío para eliminar el DCM y el exceso de cloruro de oxalilo. A
continuación se añadió gota a gota este cloruro ácido durante
2-3 minutos a una mezcla agitada de 215 mg (2,3
mmol, 1 equivalente) de glicerol, 0,58 ml (3,1 equivalentes) de
piridina y 10 ml de DCM bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla se
agitó a TA durante la noche. A continuación se filtró el
clorhidrato de piridina formado y se lavó con DCM. La disolución se
lavó con 1 x 4 ml de agua, HCl 0,1 N y disolución de bicarbonato de
sodio al 5% y con disolución de NaCl al 5%. Se secó sobre sulfato
de magnesio, se filtró y se concentró a vacío hasta obtener un
aceite de color amarillo. Este aceite se purificó en una columna de
gel de sílice usando éter al 10% en hexano como disolvente de
elución. Se obtuvo un aceite incoloro transparente y una muestra
del mismo se transesterificó y se analizó posteriormente mediante
CG. El producto contenía GLA al 96,3% de pureza.
Se agitaron 2,19 g de GLA 95 (3,15
equivalentes), 230 mg (1 equivalente) de glicerol y 153 mg de DMAP
(0,5 equivalentes) en 10 ml de DCM bajo atmósfera de nitrógeno. Se
añadieron 1,85 g de DCCI (3,6 equivalentes) en 5 ml de DCM. La
mezcla de reacción se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno
durante la noche. El DCU formado se filtró y se lavó con DCM. El
DCU se lavó con 1 x 5 ml de HCl N, agua, disolución de bicarbonato
de sodio al 5% y agua. Se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró
y se concentró a vacío hasta obtener un aceite. A continuación,
este aceite se purificó en una columna de gel de sílice usando éter
al 10% en hexano como disolvente de elución. Se obtuvieron 1,47 g
(67%) de un aceite ligeramente turbio. Se transesterificó una
muestra de este producto y se sometió a análisis mediante CG. El
producto contenía GLA al 95,8% de pureza.
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron 20 g (0,072 moles, 3,1
equivalentes) de GLA 95 (ácido gamma linolénico, 95%) en 100 ml de
DCM. Se añadieron 13,7 g (9,3 ml, 0,11 moles, 4,78 equivalentes)
de cloruro de oxalilo durante 3-4 minutos bajo
atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó bajo
atmósfera de nitrógeno durante la noche. A continuación, la mezcla
de reacción se concentró a vacío para eliminar el DCM y el exceso
de cloruro de oxalilo. Este aceite se añadió a continuación gota a
gota durante aproximadamente 5 min a una mezcla agitada de 2,14 g
(0,023 moles, 1 equivalente) de glicerol, 100 ml de DCM y 5,8 ml
(5,68 g, 0,072 moles, 3,1 equivalentes) de piridina bajo atmósfera
de nitrógeno. Se añadieron 85 mg (0,7 mmol, 0,03 equivalentes) de
DMAP (4-dimetilaminopiridina) como catalizador. La
mezcla se agitó a TA durante la noche. El clorhidrato de piridina
se filtró y se lavó con DCM. La disolución de DCM se lavó con 1 x
25 ml de: agua, disolución de bicarbonato de sodio al 10%, HCl 0,1
N y disolución de NaCl al 5%. (Durante este procedimiento se
formaron emulsiones, especialmente al comienzo). El DCM se secó
sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío hasta
obtener un aceite de color marrón (\sim 21 g).
El aceite se purificó en una columna de gel de
sílice usando al principio éter al 5% en hexano y luego al 10%. Se
obtuvieron 15,6 g (77% de rendimiento) de un aceite transparente.
Mediante CCF se determinó que este material contenía una pequeña
cantidad de GLA libre, (Este material se purificó de nuevo
posteriormente).
\vskip1.000000\baselineskip
La reacción anterior se repitió a una escala 10
veces mayor. Así, se usaron 200 g de GLA 95, 1 L de DCM, 137 g de
cloruro de oxalilo y 21,4 g de glicerol. En la adición del cloruro
de ácido, la mezcla de reacción se enfrió en un baño de agua fría y
la temperatura se mantuvo por debajo de 35ºC. Se produjeron 250 g
de un aceite de color marrón. Este aceite se purificó inicialmente
en una columna con 500 gramos de gel de sílice. El aceite se
disolvió en 200 ml de hexano y se aplicó a la columna. La columna
se eluyó primero con hexano, a continuación con éter al 5% en
hexano y luego con éter al 10% en hexano. Se recogieron las
fracciones y se analizaron mediante CCF, produciendo finalmente dos
lotes de aceites. La primera fracción A (66 g) contenía una pequeña
cantidad de impurezas de cabeza y un poco de GLA (fluye de forma
más lenta que la TLG), la segunda fracción B (99 g) estaba libre
de la impureza de cabeza y contenía un poco de GLA.
La reacción a gran escala se repitió usando 169
g de GLA y proporcionó dos fracciones tal y como se indicó
anteriormente. En esta ocasión hubo 85 g de la fracción "A" y
54 g de la fracción Se combinaron los dos lotes de "A" y se
purificaron de nuevo sobre una columna con 500 g de gel de sílice.
Las fracciones "B" se trataron de una forma similar (a este
lote también se añadieron 15 g de material procedente de la
reacción a pequeña escala).
Algunas fracciones obtenidas a partir de lo
anterior se purificaron de nuevo para proporcionar finalmente 259
gramos de aceite. El aceite se bombeó en un evaporador rotatorio
bajo alto vacío hasta obtener un peso constante de \sim256 g.
Esto representa un rendimiento global del 65%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se transesterificó una muestra pequeña y se
sometió a análisis mediante CG:
El contenido de GLA fue del 97,1%. La principal
impureza fue el ácido linoleico - 1,91%.
Nota: El GLA 95 original que se usó para la
síntesis contenía el 96,2% de GLA y el 2,42% de ácido
linoleico.
\vskip1.000000\baselineskip
Se desarrolló un procedimiento mediante HPLC
usando una columna de fase inversa (Hypersil C18 4,6 x 100 mm),
eluyendo con acetonitrilo/THF 80/20. La detección fue mediante UV a
210 nm. Esto mostró que el producto era una mezcla de tres
componentes. El pico principal (93,6%) era el producto requerido.
Una impureza que fluye de forma más lenta (que representa el 5,0%
del producto) era probablemente un triglicérido GGLI (LI = ácido
linoleico). Una segunda impureza fluía ligeramente más rápido y
representaba el 1,4% del producto.
Nota: La absorción a 210 nm varía
considerablemente entre triglicéridos con distinto contenido de
ácido graso. Por ejemplo, la trigammalinolenina tiene una absorción
UV 5-6 veces mayor que la de la trilinolenina.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon 254 g de
tri-6,9,12-linolenato de glicerol
(triglicérido de ácido gamma linolénico, trigammalinolenina, GGG) a
partir de GLA con el 96,2% de pureza mediante una ruta con cloruro
ácido en dos etapas. Es un aceite de color amarillo claro,
transparente y se almacenó bajo atmósfera de nitrógeno en el
congelador. El contenido de GLA fue del 97,1% y no se detectaron
ácidos C20:1, C22:1 o C24:1. La pureza determinada mediante HPLC
fue del 93,6%.
La síntesis de un GGG de pureza más alta sería
fácilmente alcanzable usando GLA 98 (ácido
\gamma-linolénico con el 98% de pureza: Scotia) o
un material de partida superior.
\newpage
\global\parskip0.970000\baselineskip
Lípido comparativo
1
Se agitaron glicerol (3,0 g, 0,0325 moles, 1
equivalente), piridina (8,1 ml, 0,10 moles, 3,1 equivalentes) y
diclorometano (100 ml) a temperatura ambiente bajo atmósfera de
nitrógeno. A continuación se añadió gota a gota durante 5 minutos
cloruro de decanoilo (21 ml, 19,25 g, 0,10 moles, 3,1
equivalentes), con enfriamiento externo en un baño de agua para
mantener la temperatura a 30-35ºC. Cuando se
completó la adición, se añadió
4-dimetilaminopiridina (DMAP (0,12 g, 1 mmol, 0,03
equivalentes)) la mezcla y se agitó bajo atmósfera de nitrógeno a
temperatura ambiente durante la noche. El clorhidrato de piridina
precipitado se eliminó mediante filtración y se lavaron con
diclorometano. El filtrado y el lavado combinado se lavaron a
continuación con disoluciones acuosas (20 ml) de cloruro de sodio
al 5%, bicarbonato de sodio al 5%, ácido clorhídrico 0,1 N y con
disolución acuosa de cloruro de sodio al 5%. A continuación se secó
la capa de diclorometano sobre MgSO_{4} y el disolvente se
eliminó a vacío. El aceite residual cristalizó en ausencia de
movimiento. Este material se cristalizó de nuevo en isopropanol (40
ml) para proporcionar 15,6 g (86% de rendimiento) de un sólido
céreo de color blanco.
Análisis
- \quad
- GC - puro al 99,8%
- \quad
- HPLC
- \quad
- (C18 4,6 x 100 mm, ACN/THF 85/15 1 ml/min, \lambda 210 nm)
- puro al 94,9%.
La reacción anterior se repitió a una escala 15
veces mayor. Se agitaron glicerol (45,0 g, 0,49 moles, 1
equivalente), piridina (121,5 ml, 1,50 moles, 3,1 equivalentes) y
diclorometano (1,5 L) a temperatura ambiente bajo atmósfera de
nitrógeno. A continuación se añadió gota a gota durante 15 minutos
cloruro de decanoilo (315 ml, 288,8 g, 1,50 moles, 3,1
equivalentes), con enfriamiento externo en un baño de agua para
mantener la temperatura a 30-35ºC. Cuando se
completó la adición, se añadió
4-dimetilaminopiridina (DMAP (1,8 g, 15 mmol, 0,03
equivalentes)) y la mezcla se agitó bajo atmósfera de nitrógeno a
temperatura ambiente durante la noche. El clorhidrato de piridina
precipitado se eliminó mediante filtración y se lavó con
diclorometano. El filtrado y el lavado combinado se lavaron a
continuación con disoluciones acuosas (300 ml) de cloruro de sodio
al 5%, bicarbonato de sodio al 5%, ácido clorhídrico 0,1 N y con
disolución acuosa de cloruro de sodio al 5%. A continuación se secó
la capa de diclorometano sobre MgSO_{4} y el disolvente se
eliminó a vacío. El aceite residual cristalizó en ausencia de
movimiento. Este material se cristalizó de nuevo en isopropanol
(400 ml) para proporcionar 228 g (86% de rendimiento) de un sólido
céreo de color blanco.
Análisis
- \quad
- GC - puro al 99,8%.
- \quad
- HPLC
- \quad
- (C18 4,6 x 100 mm, ACN/THF 85/15 1 ml/min, \lambda 210 nm)
- puro al 94,9%.
Se preparó un lote adicional y se combinó con el
lote anterior preparado a pequeña escala y se cristalizó de nuevo
en isopropanol para proporcionar 44 g de producto. Los lotes
anteriores se combinaron (268 g) y se analizaron de nuevo:
- \quad
- CG
- \quad
- puro al 99,9%
- \quad
- HPLC
- \quad
- 97,9%
Se prepararon 263 g de tridecanoato de glicerol
(tricaprina, CCC) a partir de cloruro de decanoilo (98%) mediante
un procedimiento en una etapa (según el esquema proporcionado a
continuación). Es un sólido de color blanco, de bajo punto de
fusión y se almacenó bajo atmósfera de nitrógeno en el congelador.
El contenido de C fue del 99,9% de contenido de ácido graso y la
pureza determinada mediante HPLC fue del 97,9%.
\global\parskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de síntesis
2
Este glicérido es nuevo. A diferencia del CGC,
su isómero CLnC (Ln = ácido \alpha-linolénico) se
ha identificado (véase K. Long y col. Biotechnol. Lett.,
20, 369-372 (1998) y H. Mu, P. Kalo y col.,
Eur. J. Lipid Sci. Technol., 102,
202-211 (2000)) como uno de los componentes del
aceite de coco. Además, se ha descrito el isómero CLxC (Lx = ácido
linolénico con la posición del doble enlace sin especificar) (véase
J. Gresti y col. J. Dairy Sci., 76,
1850-1869 (1993)).
Los dos compuestos intermedios usados en la
síntesis de CGC son conocidos (véase L. El Kihel y col.
Arzneim-Forsch./DrugRes., 46,
1040-1044 (1996) y el documento US 4178299). La
última etapa descrita a continuación es nueva y las dos primeras
etapas también son innovadoras ya que son más apropiadas para la
producción a gran escala que aquellas que se describieron
anteriormente.
El CGC se preparó mediante la reacción de
1,3-dicaprina con cloruro de GLA en
diclorometano-piridina. La
1,3-dicaprina se preparó mediante reducción en
borohidruro de sodio de
1,3-didecanoiloxipropan-2-ona,
que a su vez se preparó mediante la reacción de cloruro de
decanoilo con 1,3-dihidroxiacetona. El compuesto
intermedio 1,3-dicaprina s e debe manipular con
precaución ya que ésta experimenta la migración del grupo acilo con
la exposición a los ácidos, a las bases y al calor. Se ha descrito
un procedimiento más antiguo de producción de
1,3-dicaprina (véase A. P. J. Mank y col. Chem.
Physics Lipids, 16, 107-114 (1976)).
Una síntesis versátil, flexible, de
1,3-diglicéridos y de triglicéridos mediante la
adición catalizada de ácido decanoico a un éster de glicidol (de
epiclorhidrina) es menos atractiva debido a que las condiciones de
reacción son más drásticas y a problemas de migración de grupos
acilo. El producto final, CGC, se purificó mediante una cuidadosa
cromatografía en columna sobre gel de sílice, lo cual eliminó los
subproductos.
Se añadió gota a gota cloruro de decanoilo (40,0
ml, 36,8 g, 0,19 moles, 1,98 equivalentes) durante
10-15 min a una suspensión agitada de dímero de
1,3-dihidroxiacetona (8,68 g, 0,048 moles, 1,0
equivalente), piridina (15,6 ml, 0,19 moles),
4-dimetilaminopiridina (0,18 g, 0,0014 moles, 0,03
equivalentes) y diclorometano (DCM, 150 ml) a temperatura ambiente
bajo atmósfera de nitrógeno. La temperatura de la mezcla de
reacción se mantuvo por debajo de 30ºC mediante enfriamiento en un
baño de agua fría. La mezcla de reacción se agitó a TA bajo
atmósfera de nitrógeno durante la noche. El clorhidrato de piridina
formado se eliminó mediante filtración y se lavó con DCM. A
continuación, el filtrado y los lavados combinados se lavaron con
porciones de 1 x 25 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución de
NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A
continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y se concentró
a vacío para proporcionar un semisólido amarillento. Éste se
cristalizó a continuación en metanol (150 ml) para proporcionar un
sólido de color blanco. El rendimiento fue de 28,2 g (73%).
Se disolvió la cetona anterior (28,2 g, 0,071
moles) en tetrahidrofurano (THF, 200 ml). A continuación se añadió
agua (10 ml), la disolución se enfrió a 5ºC y se añadió por partes
borohidruro de sodio (5,38 g, 0,14 moles) por debajo de 10ºC. La
mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h y a continuación se
concentró a vacío para eliminar el THF. El residuo se dividió entre
acetato de etilo y una disolución de cloruro de sodio al 5%. La
fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo y los
extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron
a vacío hasta proporcionar un sólido céreo. Éste se cristalizó dos
veces en hexano para proporcionar 11,2 g (40%) de un sólido de
color blanco. (pureza del 99% mediante HPLC).
Se disolvió ácido
gamma-linolénico (GLA 95, 34 g, 0,03 moles) en
diclorometano (DCM, 60 ml). La disolución resultante se agitó a TA
bajo atmósfera de nitrógeno y se añadió gota a gota cloruro de
oxalilo (3,9 ml, 5,67 g, 0,044 moles) durante 5 minutos. La mezcla
se agitó a TA durante la noche y a continuación se concentró a
vacío para eliminar el DCM y el exceso de cloruro de oxalilo. El
cloruro ácido aceitoso residual (GLA-Cl) se añadió a
continuación gota a gota durante 15 min (enfriando con agua/hielo)
a una disolución agitada de 1,3-dicaprina (11,2 g,
0,028 moles), DCM (50 ml), piridina (2,42 ml, 2,37 g, 0,03 moles) y
4-dimetilaminopiridina (0,10 g, 0,0008 moles, 0,03
equivalentes) a 10-15ºC. La temperatura se mantuvo
mediante enfriamiento con agua-hielo. La mezcla de
reacción se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno durante la
noche. El clorhidrato de piridina se eliminó mediante filtración y
se lavó con DCM. El filtrado y los lavados combinados se lavaron
con porciones de 1 x 20 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución
de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A
continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y el disolvente
se eliminó a vacío. El aceite residual de color marrón se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución
con hexano y a continuación con éter al 5%/hexano, proporcionó 10,3
g (56%) de un aceite incoloro. La estructura se confirmó mediante
RMN ^{13}C y mediante CLG. La pureza se determinó mediante
HPLC.
Se añadió gota a gota cloruro de decanoilo (272
ml, 250 g, 1,3 moles, 2 equivalentes) durante 10-15
min a una suspensión agitada de dímero de
1,3-dihidroxiacetona (59,1 g, 0,65 moles, 1,0
equivalente), piridina (106 ml, 103,7 g, 1,3 moles),
4-dimetilaminopiridina (2,38 g, 0,02 moles, 0,03
equivalentes) y diclorometano (DCM, 750 ml) a temperatura ambiente
bajo atmósfera de nitrógeno. La temperatura de la mezcla de
reacción se mantuvo por debajo de 30ºC mediante enfriamiento en un
baño de agua fría. La mezcla de reacción se agitó a TA bajo
atmósfera de nitrógeno durante la noche. El clorhidrato de piridina
formado se eliminó mediante filtración y se lavó con DCM. A
continuación, el filtrado y los lavados combinados se lavaron con
porciones de 1 x 150 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución de
NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A
continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y se concentró
a vacío para proporcionar un semisólido amarillento. Éste se
cristalizó a continuación en metanol (500 ml) para proporcionar un
sólido de color blanco. El rendimiento fue de 158 g
(60%).
(60%).
Se disolvió la cetona anterior (158 g, 0,40
moles) en tetrahidrofurano (THF, 2,25 L). A continuación se añadió
agua (50 ml), la disolución se enfrió a 5ºC y se añadió por partes
borohidruro de sodio (5,66 g, 1,5 equivalentes) por debajo de 10ºC.
La mezcla de reacción se controló mediante HPLC (C18, eluida con
ACN a 1 ml/min \lambda 210 nm) (Nota: de hecho, sólo se añadieron
aproximadamente 4,5 g del borohidruro, ya que todo el SM había
reaccionado). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h y a
continuación se concentró a vacío para eliminar el THF. El residuo
se dividió entre acetato de etilo y una disolución de cloruro de
sodio al 5%. La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de
etilo y los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se
concentraron a vacío hasta proporcionar un sólido céreo. Éste se
cristalizó dos veces en hexano para proporcionar 96 g (60%) de un
sólido de color blanco. (Pureza del 98% mediante HPLC).
Se disolvió ácido
gamma-linolénico (GLA 95, 120,2 g, 0,43 moles) en
diclorometano (DCM, 750 ml). La disolución resultante se agitó a TA
bajo atmósfera de nitrógeno y se añadió gota a gota cloruro de
oxalilo (55,7 ml, 82,3 g, 0,65 moles, 1,5 equivalentes) a
15-20ºC durante 15 minutos. La mezcla se agitó a TA
durante la noche y a continuación se concentró a vacío para
eliminar el DCM y el exceso de cloruro de oxalilo. El cloruro ácido
aceitoso residual (GLA-Cl) se añadió a continuación
gota a gota durante 30-40 min a
10-15ºC (enfriando con agua/hielo) a una disolución
agitada de 1,3-dicaprina (164,7 g, 0,41 moles), DCM
(650 ml), piridina (33,3 ml, 32,5 g, 0,41 moles) y
4-dimetilaminopiridina (1,50 g, 0,012 moles, 0,03
equivalentes) a 10-15ºC. El clorhidrato de piridina
se eliminó mediante filtración y se lavó con DCM. El filtrado y el
lavado combinados se lavaron con porciones de 1 x 150 ml de
disolución de NaCl al 5%, disolución de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1
N y disolución de NaCl al 5%. A continuación la disolución se secó
sobre MgSO_{4} y el disolvente se eliminó a vacío para obtener un
aceite de color marrón
(275 g).
(275 g).
La escala de las tres reacciones anteriores fue
la más grande en la que se llevó a cabo cada una de ellas. La
reducción del borohidruro produjo, además de
1,3-dicaprina, un subproducto con un rendimiento
variable. La presencia de este subproducto afectó mucho al
rendimiento de la 1,3-dicaprina pura aislada; el
subproducto sólo se pudo eliminar mediante dos cristalizaciones del
producto bruto. Como el producto final, CGC, se purifica
mediante cromatografía en columna, es imperativo que la
1,3-dicaprina usada para la etapa final sea tan
pura como sea posible.
A partir de las reacciones anteriores se
produjeron aproximadamente 440 g de CGC bruto en forma de un
aceite de color marrón. Este aceite se purificó en una serie de
columnas de gel de sílice usando hexano, seguido de éter al
2-3%/hexano. La purificación requirió 7 u 8
columnas, usando 3-4 kilogramos de gel de sílice,
25-30 litros de disolvente (el reciclado del
disolvente mantuvo esta cifra baja - en la práctica se usaron
alrededor de 100 litros).
El producto resultante, un aceite incoloro casi
transparente, (264 gramos) era puro al 96,4% mediante HPLC (C18 4,6
x 100 mm, se eluyó con 85/15 ACN/THF a 1 ml/min. Detección UV
\lambda 210 nm). La CG indicó una proporción de 66,1/33,9 de C/G.
El análisis mediante RMN indicó que el producto tenía la estructura
de CGC correcta y que tenía una pureza de al menos el 95%:
\delta_{c} (500 MHz, CDCl_{3}) 172,65 (carbonilo
2-GLA), 173,25 (carbonilo
1,3-cáprico). La proporción de señales fue 2,04:1.
La ausencia de señal a 173,0 indica la ausencia de
1,3-GLA. La señal traza a 172,79 pudo ser una
impureza de ácido oleico en GLA o ácido
2-cáprico.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon 264 g de
1,3-didecanoato-2-gammalinolenoato
de glicerol
(1,3-dicaprin-2-GLA,
CGC) a partir de cloruro de decanoilo (98%) mediante un
procedimiento en tres etapas (según el esquema proporcionado a
continuación). Es un aceite casi incoloro (con un matiz de color
amarillo claro) y se almacenó bajo atmósfera de nitrógeno en el
congelador. La pureza determinada mediante HPLC fue del 96,4%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de síntesis
3
El triglicérido parece ser nuevo - no se ha
descubierto ninguna referencia suya.
Se disolvió DHLA (3,93 g, 12,8 mmol, 1
equivalente) en diclorometano (DCM, 20 ml) y se agitó a temperatura
ambiente bajo atmósfera de nitrógeno. Se añadió gota a gota
cloruro de oxalilo (1,69 ml, 2,46 g. 19,4 mmol, 1,5 equivalentes)
durante 1-2 min y se mantuvo la agitación a
temperatura ambiente durante la noche. La disolución resultante se
concentró a vacío para eliminar el DCM y el exceso de cloruro de
oxalilo. El cloruro ácido aceitoso residual
(DHLA-Cl) se añadió a continuación gota a gota
durante 5 min a 25ºC a una mezcla agitada de
1,3-dicaprina (4,91 g, 12,2 mmol, 0,95
equivalentes), piridina (0,98 ml, 0,96 g, 12,1 mmol, 0,95
equivalentes) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 8 mg,
0,07 mmol, 0,03 equivalentes). Durante la adición la temperatura de
reacción aumentó a 32ºC. La mezcla de reacción se agitó a
30-35ºC y se controló mediante HPLC. La reacción se
detuvo después de 1,5 h. El clorhidrato de piridina precipitado se
filtró y se lavó con DCM. A continuación, el filtrado y los lavados
combinados se lavaron con porciones de 1 x 10 ml de disolución de
NaCl al 5%, disolución de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con
disolución de NaCl al 5%. A continuación la disolución se secó
sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío para proporcionar el
producto bruto en forma de un aceite de color amarillo anaranjado
(8,9 g, pureza del 86% mediante HPLC). Este aceite se purificó por
cromatografía sobre gel de sílice (250 g). La elución con hexano y
con dietil éter-hexano (2-6%)
proporcionó un producto purificado en forma de un aceite de color
amarillo claro. El tratamiento de una disolución de hexano con
carbón decolorante y la eliminación del disolvente a vacío,
proporcionó C(DHLA)C en forma de un aceite
incoloro transparente (6,48 g, pureza del 98,9% mediante HPLC).
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Ejemplo de síntesis
4
Se disolvió ácido araquidónico (50,9 g, 0,17
mmol, 3 equivalentes) en diclorometano (DCM, 175 ml) y se agitó a
temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno. A continuación se
añadió cloruro de oxalilo (21,9 ml, 31,9 g, 0,25 moles, 4,4
equivalentes) a la disolución agitada durante 5 min y la
temperatura aumentó 4ºC. La mezcla resultante de color amarillo
verdoso se agitó a TA durante la noche y a continuación se
concentró a vacío para eliminar el DCM y el exceso de cloruro de
oxalilo. El cloruro ácido aceitoso residual (A-Cl)
se añadió a continuación gota a gota durante 15 min a 25ºC a una
mezcla agitada precalentada (25ºC) de glicerol (5,11 g 0,055 moles,
1 equivalente), piridina (13,5 ml, 13,2 g, 0,17 mol, 3
equivalentes) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,20
g, 0,002 mmol, 0,03 equivalentes). La temperatura de la mezcla de
reacción ascendió hasta 42ºC durante la adición y se observó un
suave reflujo. La mezcla de reacción se agitó a
30-40ºC y se controló mediante HPLC. Después de 2
h, no se observó formación de producto adicional. El clorhidrato de
piridina precipitado se filtró y se lavó con DCM. A continuación,
el filtrado y los lavados combinados se lavaron con porciones de 1
x 50 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución de NaHCO_{3} al
5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A continuación la
disolución se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío para
proporcionar el producto bruto en forma de un aceite de color
amarillo anaranjado (57 g). Este aceite se purificó mediante
cromatografía en columna de gel de sílice (aproximadamente 600 g).
La elución con hexano y con dietil éter
(2-4%)-hexano proporcionó 22,8 g del
producto en forma de un aceite. A partir de 39,8 g de ácido
araquidónico se produjo un segundo lote (17,8 g). Se combinaron los
dos lotes y los disolventes residuales se eliminaron a vacío para
proporcionar 40,5 g (43%) de un aceite móvil de color amarillo
claro. Pureza mediante HPLC del 84,8%, análisis mediante CLG 94,3%
de AA (ácido araquidónico).
Lípido comparativo
2
Se disolvió ácido
gamma-linolénico (GLA 95, 197 g, 0,71 moles, 2,2
equivalentes) en diclorometano (DCM, 600 ml) contenido en un matraz
de 3 bocas de 2 L. La disolución resultante se agitó a TA bajo
atmósfera de nitrógeno. Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo
(93 ml, 136 g, 1,07 moles 3,3 equivalentes) a
15-20ºC durante 15 min. La mezcla de color marrón
se agitó a TA durante la noche y a continuación se concentró a
vacío para eliminar el DCM y el exceso de cloruro de oxalilo. A
continuación, el cloruro ácido residual (GLA-Cl) se
añadió gota a gota durante 20 min a 25ºC a una mezcla agitada de
dímero de 1,3-dihidroxiacetona (28,99 g, 0,32
moles, 1,0 equivalente), piridina (52 ml, 50,9 g, 0,64 moles, 2,0
equivalentes), 4-dimetilaminopiridina (2,36 g, 0,02
moles, 0,06 equivalentes) y diclorometano (DCM, 600 ml) a
temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno. Se permitió que
la temperatura de la mezcla de reacción aumentase hasta 40ºC y la
mezcla de reacción se agitó durante 2 h adicionales bajo atmósfera
de nitrógeno (se controló mediante HPLC). El clorhidrato de
piridina que se formó se eliminó mediante filtración y se lavó con
DCM. A continuación, el filtrado y los lavados combinados se
lavaron con porciones de 1 x 150 ml de disolución de NaCl al 5%,
disolución de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl
al 5%. A continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró a vacío para proporcionar aproximadamente 200 g de un
aceite de color amarillo. Este material se purificó de forma
parcial mediante cromatografía en columna de gel de sílice (600 g).
La elución con hexano y a continuación con mezclas de
éter-hexano (2-15%), proporcionó 42
g de un aceite de color amarillo claro. Este aceite se purificó de
nuevo por cromatografía sobre gel de sílice (600 g) y se eluyó con
hexano y a continuación con éter al 1-10%-hexano
para proporcionar el producto (con una pureza del 95,9%) en forma
de un aceite de color amarillo claro. El rendimiento fue de 42 g
(17%).
Se disolvió
1,3-di(\gamma-linolenoiloxi)propan-2-ona
(GonG, 25,5 g, 0,04 moles, 1 equivalente) en
tetrahidrofurano (THF, 375 ml) y agua (12,7 ml). La disolución se
agitó de forma vigorosa a -20ºC y se tomó la precaución de mantener
la temperatura de la mezcla de reacción por debajo de -15ºC. Se
añadió por partes borohidruro de sodio (790 mg, 0,02 moles, 1,25
equivalentes) a la disolución agitada durante 3 minutos. La mezcla
de reacción se agitó durante 10 minutos adicionales a -20ºC y a
continuación se añadió hexano (380 ml). La mezcla aún fría se lavó
a continuación con agua (2 x 200 ml), se secó sobre MgSO_{4} y se
concentró a vacío para proporcionar el compuesto del título en
forma de un aceite de color marrón (27,8 g) (pureza del 82,6%
mediante HPLC, menos del 1% de material emigrado). Se preparó otro
lote y se combinó con el primero para proporcionar 50 g de
producto bruto. Este material se purificó mediante cromatografía en
columna de gel de sílice (400 g). La elución con hexano y con una
mezcla de dietil éter-hexano (5-20%)
proporcionó 36,1 g del producto en forma de un aceite de color
claro (91,5% de pureza).
(Prestar atención: Se deben tomar precauciones
para no dejar el compuesto sobre la gel de sílice durante la noche
ya que parece que éste experimenta una reacción de migración,
proporcionando GGol).
Se añadió cloruro de decanoilo (13,5 ml, 12,4 g,
0,065 moles, 1,1 equivalentes) a una disolución agitada de
1,3-di-\gamma-linolenina
(36,1 g, 0,059 moles, 1 equivalente), piridina seca (5,7 ml, 5,6 g,
0,07 moles, 1,1 equivalentes),
4-dimetilaminopiridina (0,2 g, 0,002 moles, 0,03
equivalentes) y diclorometano (DCM, 150 ml) durante aproximadamente
10 minutos. Durante la adición, la temperatura se mantuvo a entre
17-23ºC. A continuación, la mezcla de reacción se
agitó a 30-35ºC y se controló mediante HPLC.
Después de 1 h, de 1,5 h y de 2 h, se añadieron 1-2
ml de cloruro de decanoilo adicionales. La adición adicional
parecía aumentar la conversión a producto según se determinó
mediante HPLC. Después de 3 h, la mezcla de reacción se filtró y el
filtrado se lavó con DCM. A continuación, el filtrado y los lavados
combinados se lavaron con porciones de 1 x 50 ml de disolución de
NaCl al 5%, disolución de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con
disolución de NaCl al 5%. A continuación el extracto de DCM se secó
sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío para proporcionar el
producto bruto en forma de un aceite de color amarillo claro;
(pureza del 90% mediante HPLC). El aceite se purificó mediante
cromatografía en columna de gel de sílice (600 g). La elución con
hexano y con dietil éter-hexano
(1,5-2,5 y a continuación 3,5%) proporcionó el
producto (GCG) en forma de un aceite transparente; (35,5 g,
pureza del 96,1% mediante HPLC). Se obtuvieron otros 7,5 g de
lípido puro mediante la purificación adicional por cromatografía de
algunas de las fracciones que contenían sólo una pequeña cantidad
de impureza.
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Ejemplo de síntesis
5
Este glicérido es conocido. El CAC se ha
identificado como un constituyente de los lípidos de la linfa
después de la administración de aceite de cártamo a ratas. El
documento WO 03 013.497 describe un triglicérido que contiene ácido
araquidónico (producido mediante cultivo de Mortierella alpina)
útil para enfermedades causadas por la hipofunción cerebral, aunque
de forma específica es útil para la mejora de la cognición. Los dos
compuestos intermedios usados en la síntesis de CAC son
conocidos.
La síntesis de CAC a partir de
1,3-dicaprina y la purificación de éste son
completamente nuevos.
Aquí, el CAC se preparó mediante la
reacción de 1,3-dicaprina con cloruro de
araquidonilo en diclorometano-piridina. La
1,3-dicaprina se preparó mediante reducción en
borohidruro de sodio de
1,3-didecanoiloxipropan-2-ona,
que a su vez se preparó mediante la reacción de cloruro de
decanoilo con 1,3-dihidroxiacetona. El compuesto
intermedio 1,3-dicaprina se debe manipular con
precaución, ya que ésta experimenta la migración del grupo acilo
con la exposición a los ácidos, a las bases y al calor. Un
procedimiento más antiguo^{6} de obtención de
1,3-dicaprina, mediante la adición catalizada de
ácido decanoico a un éster de glicidol (de epiclorhidrina), se
estimó que era menos atractivo debido a que las condiciones de
reacción son más drásticas y a problemas de migración de grupos
acilo. El producto final, CAC, se purificó mediante una
cuidadosa cromatografía en columna sobre gel de sílice, lo cual
eliminó los subproductos.
Se disolvió ácido araquidónico (AA 96, 8,34 g,
0,03 moles) en diclorometano (DCM, 60 ml). La disolución
resultante se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno y se añadió
gota a gota cloruro de oxalilo (3,9 ml, 5,67 g, 0,044 moles)
durante 5 minutos. La mezcla se agitó a TA durante la noche y a
continuación se concentró a vacío para eliminar el DCM y el exceso
de cloruro de oxalilo. El cloruro ácido aceitoso residual
(GLA-Cl) se añadió a continuación gota a gota
durante 15 min (enfriando con agua/hielo) a una disolución agitada
de 1,3-dicaprina (11,2 g, 0,028 moles), DCM (50
ml), piridina (2,42 ml, 2,37 g, 0,03 moles) y
4-dimetilaminopiridina (0,10 g, 0,0008 moles, 0,03
equivalentes) a 10-15ºC. La temperatura se mantuvo
mediante enfriamiento con agua-hielo. La mezcla de
reacción se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno durante la
noche. El clorhidrato de piridina se eliminó mediante filtración y
se lavó con DCM. El filtrado y los lavados combinados se lavaron
con porciones de 1 x 20 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución
de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A
continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y el disolvente
se eliminó a vacío. El aceite residual de color marrón se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución
con hexano y a continuación con éter al 5%/hexano, proporcionó 10,3
g (56%) de un aceite incoloro. La estructura se confirmó mediante
RMN ^{13}C y mediante CLG. La pureza se determinó mediante
HPLC.
HPLC.
Se añadió gota a gota cloruro de decanoilo (272
ml, 250 g, 1,3 moles, 2 equivalentes) durante 10-15
min a una suspensión agitada de dímero de
1,3-dihidroxiacetona (59,1 g, 0,65 moles, 1,0
equivalente), piridina (106 ml, 103,7 g, 1,3 moles),
4-dimetilaminopiridina (2,38 g, 0,02 moles, 0,03
equivalentes) y diclorometano (DCM, 750 ml) a temperatura ambiente
bajo atmósfera de nitrógeno. La temperatura de la mezcla de
reacción se mantuvo por debajo de 30ºC mediante enfriamiento en un
baño de agua fría. La mezcla de reacción se agitó a TA bajo
atmósfera de nitrógeno durante la noche. El clorhidrato de piridina
formado se eliminó mediante filtración y se lavó con DCM. A
continuación, el filtrado y los lavados combinados se lavaron con
porciones de 1 x 150 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución de
NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A
continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y se concentró
a vacío para proporcionar un semisólido amarillento. Éste se
cristalizó a continuación en metanol (500 ml) para proporcionar un
sólido de color blanco. El rendimiento fue de 158 g (60%).
Se disolvió la cetona anterior (158 g, 0,40
moles) en tetrahidrofurano (THF, 2,25 L). A continuación se añadió
agua (50 ml), la disolución se enfrió a 5ºC y se añadió por partes
borohidruro de sodio (5,66 g, 1,5 equivalentes) por debajo de 10ºC.
La mezcla de reacción se controló mediante HPLC (C18, eluida con
ACN a 1 ml/min A. 210 nm) (Nota: de hecho, sólo se añadieron
aproximadamente 4,5 g del borohidruro, ya que todo el SM había
reaccionado). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h y a
continuación se concentró a vacío para eliminar el THF. El residuo
se dividió entre acetato de etilo y una disolución de cloruro de
sodio al 5%. La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de
etilo y los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se
concentraron a vacío hasta proporcionar un sólido céreo. Éste se
cristalizó dos veces en hexano para proporcionar 96 g (60%) de un
sólido de color blanco. (Pureza del 98% mediante HPLC).
Se disolvió ácido araquidónico (AA 96, 78,8 g,
0,26 moles) en diclorometano (DCM, 425 ml). La disolución
resultante se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno y se añadió
gota a gota cloruro de oxalilo (33,9 ml, 49,4 g, 0,39 moles, 1,5
equivalentes) a 15-20ºC durante 15 minutos. La
mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación se concentró
a vacío para eliminar el DCM y el exceso de cloruro de oxalilo. El
cloruro ácido aceitoso residual (GLA-Cl) se añadió
a continuación gota a gota durante 30-40 min a
10-15ºC (enfriando con agua/hielo) a una disolución
agitada de 1,3-dicaprina (94,2 g, 0,24 moles), DCM
(450 ml), piridina (19,1 ml, 18,6 g, 0,24 moles) y
4-dimetilaminopiridina (1,72, 1,50 g, 0,014 moles,
0,06 equivalentes) a 10-15ºC. El clorhidrato de
piridina se eliminó mediante filtración y se lavó con DCM. El
filtrado y los lavados combinados se lavaron con porciones de 1 x
150 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución de NaHCO_{3} al
5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A continuación la
disolución se secó sobre MgSO_{4} y el disolvente se eliminó a
vacío para obtener un aceite de color marrón (171 g).
La escala de las tres reacciones anteriores fue
la más grande en la que se llevó a cabo cada una de ellas. La
reducción del borohidruro produjo, además de
1,3-dicaprina, un subproducto con un rendimiento
variable. La presencia de este subproducto afectó mucho al
rendimiento de la 1,3-dicaprina pura aislada; el
subproducto sólo se pudo eliminar mediante dos cristalizaciones del
producto bruto. Como el producto final, CAC, se purifica
mediante cromatografía en columna, es imperativo que la
1,3-dicaprina usada para la etapa final sea tan
pura como sea posible
A partir de las reacciones anteriores, se
produjeron 412 g de CAC bruto en forma de un aceite de color
marrón. Este material se purificó en una serie de columnas de gel
de sílice usando hexano, seguido de éter al
1-3%/hexano. La purificación requirió 7 u 8
columnas, que usaban 3-4 kilogramos de gel de
sílice y 100 litros de disolvente.
El producto resultante, un aceite de color
amarillo muy claro, transparente, (295 gramos) era puro al 95,8%
mediante HPLC (C18 4,6 x 100 mm, se eluyó con 85/15 ACN/THF a 1
ml/min. Detección UV \lambda 210 nm). La CG indicó una proporción
de 66,3/32,1 C/A (1,6% de impureza trasladada a partir del 5% de
impureza en A).
Se prepararon 295 g de
1,3-didecanoato-2-araquidonato
de glicerol
(1,3-dicaprin-2-AA,
CAC) a partir de cloruro de decanoilo (98%) y de ácido
araquidónico mediante un procedimiento en tres etapas (según el
esquema proporcionado a continuación). Es un aceite de color
amarillo muy claro y se almacenó bajo atmósfera de nitrógeno en el
congelador. La pureza determinada mediante HPLC es del 95,8%.
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Ejemplo de síntesis
7
Este glicérido se conoce: se ha preparado una
versión marcada con carbono 14 mediante síntesis química normal y
la forma normal sin marcar se ha preparado mediante síntesis
bioquímica usando lipasas. El OGO no es un componente
principal del aceite de borraja, aunque su isómero OOG sí lo
es (9%). Los dos compuestos intermedios usados en la síntesis de
CGC son conocidos. La última etapa es nueva.
Se cree que el uso, la síntesis de
1,3-dioleoina y la purificación del CGC son todos
nuevos. En general, se prefieren los triglicéridos CXC sobre los
OXO en la patente y por razones de coste de los productos.
En la presente invención el OGO se
preparó mediante la reacción de 1,3-dioleina con
cloruro de GLA en diclorometano-piridina. La
1,3-dioleina se preparó mediante reducción en
borohidruro de sodio de
1,3-dioleoilpropan-2-ona,
que a su vez se preparó mediante la reacción de cloruro de oleoilo
con 1,3-dihidroxiacetona. El compuesto intermedio
1,3-dioleina se debe manipular con precaución, ya
que ésta experimenta la migración del grupo acilo con la exposición
a los ácidos, a las bases y al calor. Los procedimientos
antiguos^{7,8} para la preparación de
1,3-dioleina, a través de
mono-triacilgliceroles o de ésteres de glicidilo,
se estimaron que eran menos atractivos debido a que tenían más
etapas y a problemas de migración de grupos acilo. El producto
final, OGO, se purificó mediante una cuidadosa cromatografía
en columna sobre gel de sílice, lo cual eliminó los
subproductos.
Se disolvieron 155,1 g de ácido oleico (155,1 g,
0,55 moles, 1,0 equivalentes, Croda 094 RV05192) en diclorometano
(DCM, 500 ml). La disolución se agitó a temperatura ambiente (TA)
bajo atmósfera de nitrógeno y se añadieron gota a gota 104,4 g (1,5
equivalentes, 71 ml) de cloruro de oxalilo (104,4 g, 71,8 ml, 0,82
moles, 1,5 equivalentes) a 15-20ºC durante
aproximadamente 20 minutos. La mezcla de reacción se agitó a TA
durante la noche. El exceso de cloruro de oxalilo y de DCM se
eliminaron a vacío y el cloruro ácido aceitoso residual se añadió
gota a gota durante 15-20 minutos a una suspensión
agitada de dímero de 1,3-dihidroxiacetona (22,5 g,
0,24 moles de monómero), piridina (40,4 ml),
4-dimetilaminopiridina (1,83 g) y diclorometano
(DCM, 500 ml), a temperatura ambiente, bajo atmósfera de nitrógeno.
La temperatura de la mezcla de reacción se mantuvo por debajo de
20ºC mediante enfriamiento en un baño de agua/hielo. La mezcla de
reacción se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno durante la
noche. El clorhidrato de piridina formado se eliminó mediante
filtración y se lavó con DCM. A continuación, el filtrado y los
lavados combinados se lavaron con porciones de 1 x 150 ml de
disolución de NaCl al 5%, disolución de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1
N y con disolución de NaCl al 5%. A continuación la disolución se
secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío para proporcionar un
semisólido de color naranja/marrón. Este sólido se trituró en
metanol y se almacenó en la nevera durante la noche. A
continuación, el sólido depositado (puro al 90% mediante HPLC) se
cristalizó en diisopropil éter (DIPE) y metanol para proporcionar
51,3 g de un sólido blanquecino que tenía una pureza del 95%
mediante HPLC. La cristalización adicional en DIPE/metanol produjo
41 g (27%) de un producto puro al 98%.
Se disolvió la cetona anterior (32,8 g, 0,053
moles) en tetrahidrofurano (THF, 250 ml). A continuación se añadió
agua (10 ml), la disolución se enfrió a 5ºC y se añadió por partes
borohidruro de sodio por debajo de 10ºC. La reacción se siguió
mediante HPLC (C18, ACN/THF 90/10 a 2 ml/min, \lambda 210 nm) y
después de que había reaccionado toda la cetona de partida se
detuvo la adición de borohidruro (se añadieron 830 mg, 0,022
moles). A continuación, la mezcla se concentró a vacío para
eliminar el THF. El residuo se repartió entre acetato de etilo y
agua. La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo y los
extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron
a vacío hasta proporcionar un aceite (\sim33 g) que solidificó
tras un enfriamiento. El producto (puro al 68% mediante HPLC) se
cristalizó en 100 ml de hexano a -20ºC (en el congelador) durante
la noche. Este producto (21,1 g, puro al 92%) se cristalizó de
nuevo en hexano (50 ml) para proporcionar 18,28 g (56% de
rendimiento) de un producto puro al 97,5% mediante HPLC.
Se disolvió ácido
\gamma-linolénico (GLA 95, 41,2 g, 0,15 moles, 1,1
equivalentes) en diclorometano (DCM, 250 ml). La disolución
resultante se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno y se añadió
gota a gota cloruro de oxalilo (19,1 ml, 28,2 g, 0,22 moles, 1,65
equivalentes) durante 5 minutos. La mezcla se agitó a TA durante la
noche y a continuación se concentró a vacío para eliminar el DCM y
el exceso de cloruro de oxalilo. El cloruro ácido aceitoso residual
(GLA-Cl) se añadió a continuación gota a gota
durante 15 min (enfriando con agua/hielo) a una disolución agitada
de 1,3-dioleina (83,5 g, 0,13 moles), DCM (250 ml),
piridina (10,9 ml, 10,6 g, 0,14 moles) y
4-dimetilaminopiridina (0,49 g, 0,004 moles, 0,15
equivalentes) a 10-15ºC. La temperatura se mantuvo
mediante enfriamiento con agua-hielo. La mezcla de
reacción se agitó a TA bajo atmósfera de nitrógeno durante la
noche. El clorhidrato de piridina se eliminó mediante filtración y
se lavó con DCM. El filtrado y los lavados combinados se lavaron
con porciones de 1 x 80 ml de disolución de NaCl al 5%, disolución
de NaHCO_{3} al 5%, HCl 0,1 N y con disolución de NaCl al 5%. A
continuación la disolución se secó sobre MgSO_{4} y el disolvente
se eliminó a vacío. El aceite residual de color marrón se purificó
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución
con hexano y a continuación con éter al 5%/hexano, proporcionó 63,6
g (54%) de un aceite incoloro. La pureza se determinó mediante
HPLC.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon 64 g de
1,3-oleoato-2-gammalinolenoato
de glicerol
(1,3-dioleato-2-GLA,
OGO) a partir de cloruro de oleoilo (98%) mediante un procedimiento
en tres etapas (según el esquema proporcionado a continuación). Era
un aceite casi incoloro (con un matiz de color amarillo claro) y
se almacenó bajo atmósfera de nitrógeno en el congelador. La pureza
determinada mediante HPLC fue del 89,4%.
\vskip1.000000\baselineskip
- GGG\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,69 (1C, carbonilo C-2), 173,09 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- CGC\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,76 (1C, carbonilo C-2), 173,17 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- CAC\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,65 (1C, carbonilo C-2), 173,28 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- C(DHLA)C\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,83 (1C, carbonilo C-2), 173,30 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- GCG\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,91 (1C, carbonilo C-2), 173,11 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- OGO\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,69 (1C, carbonilo C-2), 173,25 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- AAA\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,66 (1C, carbonilo C-2), 173,04 (2C, carbonilos C-1, C-3).
- CCC\delta_{c}
- (125,7 MHz, CDCl_{3}) 172,81 (1C, carbonilo C-2), 173,21 (2C, carbonilos C-1, C-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Los espectros de RMN ^{13}C de protón
desacoplado con el NOE eliminado se recogieron a 21ºC en una sonda
de banda ancha de 5 mm en un espectrómetro Joel 500 MHz que operaba
a 125,728 MHz. El modo de desacoplamiento escogido fue el modo de
waltz y se activó sólo durante los 14,89 s del tiempo de
adquisición. El retraso de relajación se ajustó a 30 segundos y el
ángulo del pulso fue de 90º. La ventana espectral usada fue de
aproximadamente 35 ppm (entre 173,5 y 172,6 ppm) con una
compensación de 170 ppm. Para los espectros se utilizó como
referencia interna el CDCl_{3} a 77,0 ppm. Típicamente, el número
aproximado de barridos recogidos para una relación señal/ruido
adecuada varió entre 300 y 1200 barridos, dependiendo de la
concentración y de la pureza de la muestra. El tiempo total de
adquisición para los experimentos varió entre 2-8 h,
por ejemplo con 1272 barridos; 65.536 puntos experimentales.
Cuando fue posible, se emplearon disoluciones concentradas hasta el
20% p/v para reducir el tiempo de adquisición. Los desplazamientos
químicos mencionados varían con la concentración de la
disolución.
\vskip1.000000\baselineskip
La CREAE se indujo en ratones C57B1/6 y SJL. A
los animales se les inyectaron por vía subcutánea 100 \mug del
péptido neuroantígeno MOG 35-55 (secuencia de
aminoácidos MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK Genemed Synthesis, Inc) o 1 mg de
homogeneizado de médula espinal (SCH) de ratón, en solución salina
tamponada con fosfato (PBS), emulsionada mediante sonicación
durante 10 min a temperatura ambiente, en adyuvante de Freund
incompleto, (DIFCO, Detroit, EE.UU.) suplementado con 480 \mug de
mycobacteria tuberculosis y con 60 \mug de Mycobacteria
butyricium (DIFCO, Detroit, EE.UU.) en los días 0 y 7, tal como
se describió anteriormente (Morris-Downes, MM., y
col. 2002). Además de optimizar la enfermedad, los ratones también
recibieron 200 ng (por vía intraperitoneal) de toxina de
Bordetella pertussis disuelta en PBS y administrada 1 h y 24
horas después de la inmunización con el neuroantígeno MOG y durante
los días 0, 1, 7 y 8 de SCH.
Los animales se pesaron desde el día 5 en
adelante y se examinaron diariamente para buscar indicios
neurológicos clínicos por parte de dos investigadores
experimentados, indicios que fueron clasificados de acuerdo con un
esquema de clasificación refrendado anteriormente
(Morris-Downes, MM. y col. 2002 y otros): 0 =
normal; 1 = pata y cola flácidas; 2 = reacción de recuperación
empeorada; 3 = parálisis parcial de las extremidades traseras; 4 =
parálisis completa de las extremidades traseras; 5 = moribundo; 6 =
muerte. Los animales que mostraban signos clínicos de una
clasificación de menor gravedad que la observada típicamente, se
clasificaron con 0,5 puntos menos que la puntuación indicada para
esa clasificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Morris-Downes, MM., y
col. (2002). Pathological and regulatory effects of
anti-myelin antibodies in experimental allergic
encephalomyelitis in mice. J. Neuroimmunol. 125.
114-124.
La puntuación media del grupo de EAE se comparó
para cada grupo de ensayo en comparación con un grupo de control
respectivo mediante análisis estadístico no paramétrico (prueba U
de Mann Whitney).
Todos los estudios MOG-CREAE
comprendían un grupo de tratamiento de control
(C-C-C o solución salina, tal
como se seleccionó a partir del estudio anterior). Cada lípido
estructurado se ensayó con 3 niveles de dosis, administrándose
todos los tratamientos por vía oral durante 2 semanas desde el día
7 después de la inoculación. Todos los grupos de tratamiento
contenían 10 animales. Tras la terminación de los estudios (día
21), se retiraron el cerebro y la médula espinal y la mitad de las
muestras se procesaron para buscar signos de regiones
perivasculares del SNC infiltradas por leucocitos mononucleares y
para buscar signos de desmielinación.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudio 2: Homogeneizado de médula espinal
(SCH), EAE en ratones SJL
Inducción de EAE: 1 mg de SCH día 0 + día 7 por
vía subcutánea, 200 ng de toxina Pertussis días 0, 1, 7 y 8 por
vía intraperitoneal 10 ratones/grupo. Los ratones se trataron entre
el día 7 y el día 21 con CCC o con CGC.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudio 3: SCH EAE en ratones SJL
El tratamiento fue desde PSD 7 a 21, ambos días
incluidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudio 4: MOG EAE en ratones C57BL
El tratamiento fue desde PSD 7 a 21, ambos días
incluidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudio 5: SCH EAE en ratones SJL
El tratamiento fue desde PSD 5 a 18, ambos días
incluidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudio 6: MOG EAE en ratones C57BL
El tratamiento fue entre los días 5 y 21 ambos
incluidos, excepto en el grupo con
C-DHLA-C, en el que el tratamiento
fue entre los días 5 a 15, ambos incluidos. Los animales se
seleccionaron en el PSD 25. [Se tomaron muestras de cinco animales
de un grupo sin tratar, de 3 animales del grupo de tratamiento de
control con CCC, de 5 animales del grupo de tratamiento con 150
\mul de GGG y de 2 animales del grupo de tratamiento con 350
\mul de GGG para el análisis histológico en el PSD 20].
\vskip1.000000\baselineskip
Estudio 7: SCH EAE en ratones SJL
El tratamiento fue entre los días 6 y 20, ambos
incluidos.
\vskip1.000000\baselineskip
- Estudio 2
- - Homogeneizado de médula espinal (SCH), EAE en ratones SJL: - Ensayado
- \quad
- CGC (50/150/350 \mul); CCC (350 \mul).
- \quad
- GGG . (50/350 \mul)
- \quad
- [Observada enfermedad grave]
\global\parskip0.950000\baselineskip
- Estudio 3
- - SCH/ratones SJL:- Ensayado
- \quad
- CCC (50/150/350 \mul)
- \quad
- CGC (25/50/150/350 \mul)
- \quad
- GGG (50/150/350 \mul)
- \quad
- OGO .(25/50/150/350 \mul)
- \quad
- [Observada enfermedad grave]
\vskip1.000000\baselineskip
- Estudio 4
- - MOG/ratones C57BL:- Ensayado
- \quad
- CCC (50/150/350 \mul)
- \quad
- CGC (25/50/150/350 \mul)
- \quad
- GGG (50/150/350 \mul)
- \quad
- OGO . (25/50/150/350 \mul)
\vskip1.000000\baselineskip
- Estudio 6
- - MOG/ratones C57BL:- Ensayado
- \quad
- CCC (150 \mul)
- \quad
- C-DHLA-C (50 \mul)
- \quad
- CAC (50/350 \mul)
- \quad
- AAA (50/150 \mul)
- \quad
- GCG (50 \mul)
- \quad
- CGC (50 \mul)
- \quad
- GGG . (150/350 \mul)
- \quad
- [Patología: CCC; GGG]
\vskip1.000000\baselineskip
El examen histológico de las muestras
presentadas de cerebro y de médula espinal mostró lesiones típicas
de encefalomielitis alérgica experimental.
Las lesiones localizadas y las lesiones difusas
se caracterizaban por gliosis, vacuolación de la mielina,
degeneración axonal y por infiltración perivascular con linfocitos,
macrófagos y neutrófilos.
Las lesiones de la médula espinal se localizaban
en su mayor parte en la sustancia blanca subpial y las lesiones
cerebrales se encontraban en su mayor parte en la sustancia blanca
cerebelar. Las lesiones eran más graves en las médulas espinales
que en los cerebros y mientras que todos los animales con lesiones
en el cerebro tenían lesiones en la médula espinal, no todos los
animales con lesiones en la médula espinal tenían lesiones en el
cerebro.
La variación en la gravedad de los cambios entre
ratones individuales se resume usando un sistema de clasificación
de cinco puntos.
Los ratones sin tratar tenían puntuaciones
histológicas de 3-4, lo que se correlaciona con
puntuaciones de EAE de 1,5-3. Un ratón mostró un
ligero cambio patológico con una puntuación de cero. En los
ratones tratados con GGG, la mayoría no mostraron anormalidades.
Dos ratones de este grupo tuvieron puntuaciones histológicas de 2 y
de 3, respectivamente, lo que se correlacionó con unas puntuaciones
de gravedad de la EAE de 1 y de 1, 5.
Los resultados de los cuatro estudios se
muestran a continuación en las Figuras 11 a 20.
Estas figuras muestran que los compuestos
G-G-G,
A-A-A,
C-G-C,
C-DHGLA-C y
C-A-C son todos capaces de reducir
la gravedad de la CREAE, mientras que los compuestos
G-C-G y
C-C-C fallaron en el tratamiento de
la dolencia. Se cree que el compuesto
O-G-O da resultado si la dosis es
ajustada.
Tal y como se advirtió en la descripción, los
compuestos de ácido araquidónico son eficaces, aunque conducen a la
muerte de algunos animales. Los animales que sobrevivieron tuvieron
una enfermedad muy reducida. Se cree que la
dosis de estos compuestos se puede reducir aún más para proporcionar una supervivencia con un tratamiento satisfactorio.
dosis de estos compuestos se puede reducir aún más para proporcionar una supervivencia con un tratamiento satisfactorio.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Algunos de los estudios muestran una curva de
respuesta con forma de campana para los compuestos
C-G-C y
G-G-G, lo que sugiere que las dosis
muy elevadas no son óptimas, tal como se expuso anteriormente.
Dicha dosificación se puede determinar de forma conveniente por
parte de los expertos en la técnica, por ejemplo mediante
incremento escalonado de las dosis y controlando los cambios en la
tasa de liberación de forma espontánea de
TGF-\beta1/TNF-\alpha desde las
CMSPs.
Dados los resultados del alto contenido de ácido
\gamma-linolénico sn-2 del
documento PCT/GB04/002089, la falta de eficacia del aceite de
grosella negra con bajo contenido sn-2 y del
G-C-G en la CREAE y dada la eficacia
de la dosis baja de C-G-C y de
C-DHGLA-C en la Figura 20, se puede
ver que los lípidos de ácido \gamma-linolénico, de
ácido dihomo-\gamma-linolénico y
de ácido araquidónico sn-2 proporcionan un nuevo
tratamiento para la EM que excede con creces cualquier resultado de
parámetros clínicos de una terapia actual, puesto que se corrigen
las lesiones y se resuelven los síntomas difíciles: la disminución
de la EDSS durante un periodo de años es hasta ahora inalcanzable
en otros tratamientos.
Amor S, Groome N, Linington
C, Morris MM, Dornmair K, Gardinier MV,
Matthieu JM, Baker D. Identification of epitopes of
myelin oligodendrocyte glycoprotein for the induction of
experimental allergic encephalomyelitis in SJL and BiozziAB/H mice.
J Immunol. 1994 Nov 15; 153(10):
4349-56.
Beck J, Rondot P, Catinot L
y col. Increased production of interferon gamma and tumor necrosis
factor precedes clinical manifestation in multiple sclerosis: do
cytokines trigger off exacerbations? Acta Neurol Scand
1988; 78: 318-23.
Bertolotto A, Capobianco M,
Malucchi S y col. Transforming growth factor betal
(TGFbetal) mRNA level correlates with magnetic resonance imaging
disease activity in multiple sclerosis patients. Neurosci
Lett 1999; 263: 21-4.
Bertolotto A, Malucchi S,
Capobianco M y col. Quantitative PCR reveals increased
levels of tumor necrosis factor-alpha mRNA in
peripheral blood mononuclear cells of multiple sclerosis patients
during relapses. J Interferon Cytokine Res 1999;
19: 575-81.
Brosnan CF., Selmaj K y
Raine CS. Hypothesis: a role for tumor necrosis factor in
immune-mediated demyelination and its relevance to
multiple sclerosis. J Neuroimmunol 1988: 18,
87-94.
Brosnan CF and Raine CS.
Mechanisms of immune injury in multiple sclerosis. Brain
Pathol. 1996: 6, 243-257.
Burns J, Bartholomew B,
Lobo S. Isolation of myelin basic
protein-specific T cells predominantly from the
memory T-cell compartment in multiple sclerosis.
Ann Neurol 1999; 45: 33-9.
Cannella B, Raine CS. The adhesion
molecule and cytokine profile of multiple sclerosis lesions. Ann
Neurol 1995; 37: 424-35.
Chou YK, Bourdette DN,
Offner H y col. Frequency of T cells specific for myelin
basic protein and myelin proteolipid protein in blood and
cerebrospinal fluid in multiple sclerosis. J Neuroimmunol
1992; 38: 105-14.
De Stefano N., Narayanan S.,
Francis GS., Arnaoutelis R., Tartaglia MC.,
Antel JP., Matthews PM y Arnold DL. Evidence
of axonal damage in the early stages of multiple sclerosis and its
relevance to disability. Arch Neurol. 2001:
58(1), 65-70.
Ewing C, Bernard CC. Insights into
the aetiology and pathogenesis of multiple sclerosis. Immunol
Cell Biol 1998; 76: 47-54.
Fazakerly JK. Molecular biology of
multiple sclerosis. Wiley and Sons Ltd. 1997,
255-273.
Fredrikson S, Soderstrom M,
Hillert J y col. Multiple sclerosis: occurrence of myelin
basic protein peptide-reactive T cells in healthy
family members. Acta Neurol Scand 1994; 89:
184-9.
Genain CP., Cannella B.,
Hauser SL y Raine CS. Identification of
autoantibodies associated with myelin damage in multiple sclerosis.
Nature Med 1999: 5, 170-175.
Gross CE, Bednar MM, Howard
DB and Spom MB (1993) Transforming growth factor beta
I reduces infarct size after experimental cerebral ischemia in a
rabbit model. Stroke 24, 558-562.
Harbige, LS, Crawford MA,
Jones J, Preece AW y Forti A. Dietary
intervention studies on the phosphoglyceride fatty acids and
electrophoreitic mobility of erythrocytes in multiple sclerosis.
Prog. Lipid Res 1986: 25, 243-248.
Harbige LS. Nutrition and immunity with
emphasis on infection and autoimmune disease. (1996) Nutr
Health, 10 (4): 285-312.
Harbige LS (1998). Dietary
n-6 and n-3 fatty acids in immunity
and autoimmune disease. Proceedings of the Nutrition Society
57, 555-562.
Harbige LS, Yeatman N, Amor
S y Crawford MA (1995) Prevention of experimental
autoimmune encephalomyelitis in Lewis rats by a novel source of
y-linolenic acid. British Journal of
Nutrition 74, 701-715.
Harbige LS., Layward L.,
Morris-Downes MM., Dumonde DC y
Amor S. The protective effects of omega-6
fatty acids in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in
relation to transforming growth factor-beta 1
(TGF-beta1) up-regulation and
increased prostaglandin E2 (PGE2) production. Clin Exp
Immunol 2000: 122, 445-452.
Henrich Noack P, Prehn JH y
Kriegistein J. (1996) TGF-beta I
protects hippocampal neurons against degeneration caused by
transient global ischaemia. Dose-response
relationship and potential neuroprotective mechanisms.
Stroke, 27, 1609-1614.
Hirsch RL, Panitch HS,
Johnson KP. Lymphocytes from multiple sclerosis patients
produce elevated levels of gamma interferon in vitro. J
Clin Immunol 1985; 5: 386-9.
Hollifield RD, Harbige LS,
PhM-Dinh D, Sharief M. Evidence for
cytokine Dysregulation in Multiple Sclerosis: Peripheral Blood
Mononuclear cell production of pro-inflammmatory
and anti-inflammatory cytokines during relapse and
remission. Autoimmunity, 2003 36(3):
133-141.
Imamura K, Suzumura A,
Hayashi F y col. Cytokine production by peripheral blood
monocytes/macrophages in multiple sclerosis patients. Acta
Neurol Scand 1993; 87: 281-5.
Issazadeh S, Lorentzen JC,
Mustafa MI y col. Cytokines in relapsing experimental
autoimmune encephalomyelitis in DA rats: persistent mRNA expression
of proinflammatory cytokines and absent expression of
interleukin-10 and transforming growth
factor-beta. J Neuroimmunol 1996;
69: 103-15.
Johns LD, Sriram S. Experimental
allergic encephalomyelitis: neutralizing antibody to TGF beta 1
enhances the clinical severity of the disease. J
Neuroimmunol 1993; 47: 1-7.
Kerlero de Rosbo N, Hoffinan M,
Mendel I y col. Predominance of the autoimmune response to
myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) in multiple sclerosis:
reactivity to the extracellular domain of MOG is directed against
three main regions. Eur J Immunol 1997; 27:
3059-69.
Kerlero de Rosbo N, Milo R,
Lees MB y col. Reactivity to myelin antigens in multiple
sclerosis. Peripheral blood lymphocytes respond predominantly to
myelin oligodendrocyte glycoprotein. J Clin Invest
1993; 92: 2602-8.
Khalil N. TGF-beta: from
latent to active. Microbes Infect 1999; 1:
1255-63.
Krupinski J, Kumar P, Kumar
S y Kaluza J. (1996) Increased expression of
TGF-beta I in brain tissue after ischemic stroke in
humans. Stroke, 27, 852-857.
Kuroda Y, Shimamoto Y. Human tumor
necrosis factor-alpha augments experimental
allergic encephalomyelitis in rats. J Neuroimmunol
1991; 34: 159-64.
Lu CZ, Jensen MA, Arnason
BG. Interferon gamma-and
interleukin-4-secreting cells in
multiple sclerosis. J Neuroimmunol 1993; 46:
123-8.
Maimone D, Reder AT,
Gregory S. T cell lymphokine-induced
secretion of cytokines by monocytes from patients with multiple
sclerosis. Cell Immunol 1993; 146:
96-106.
Martino G, Hartung
H-P. Immunopathogenesis of multiple sclerosis: the
role of T cells. Curr Opin Neurol 1999; 12:
309-21.
McCarron RM, Wang L, Racke
MK y col. Cytokine-regulated adhesion between
encephalitogenic T lymphocytes and cerebrovascular endothelial
cells. J Neuroimmunol 1993; 43:
23-30.
McDonald WI, Compston A,
Edan G, Goodkin D, Hartung HP, Lublin
FD, McFarland HF, Paty DW, Polman CH,
Reingold SC, Sandberg-Wollheim M,
Sibley W, Thompson A, van den Noort S,
Weinshenker BY, Wolinsky JS. Recommended diagnostic
criteria for multiple sclerosis: guidelines from the International
Panel on the diagnosis of multiple sclerosis. Ann Neurol.
2001 Jul; 50(1): 121-7.
Merrill JE, Strom SR,
Ellison GW y col. In vitro study of mediators of
inflammation in multiple sclerosis. J Clin Immunol
1989; 9: 84-96.
\newpage
Merrill JE, Zimmerman RP. Natural
and induced cytotoxicity of oligodendrocytes by microglia is
inhibitable by TGF beta. Glia 1991; 4:
327-31.
Miyazono K, Hellman U,
Wernstedt C y col. Latent high molecular weight complex of
transforming growth factor beta 1. Purification from human
platelets and structural characterization. J Biol Chem
1988; 263: 6407-15.
Mokhtarian F, Shi Y,
Shirazian D y col. Defective production of
anti-inflammatory cytokine, TGF-beta
by T cell lines of patients with active multiple sclerosis. J
Immunol 1994; 152: 6003-10.
Navikas V, Link H. Review:
cytokines and the pathogenesis of multiple sclerosis. J Neurosci
Res 1996; 45: 322-33.
Noseworthy JH. Progress in determining
the causes and treatment of multiple sclerosis. Nature
1999: 399 (6738 Suppl), A40-47.
Ota K, Matsui M, Milford EL
y col. T-cell recognition of an immunodominant
myelin basic protein epitope in multiple sclerosis. Nature
1990; 346: 183-7.
Perkin GD, Wolinsky JS. Fast
facts-Multiple Sclerosis, Ist Edn. Oxford, UK:
Health Press, 2000.
Philippe J, Debruyne J,
Leroux-Roels G y col. In vitro
TNF-alpha, IL-2 and
IFN-gamma production as markers of relapses in
multiple sclerosis. Clin Neurol Neurosurg 1996;
98: 286-90.
Phylactos AC, Ghebremeskel K,
Costeloe K, Leaf AA, Harbige LS,
Crawford MA. (1994). Polyunsaturated fatty acids and
antioxidants in early development. Possible prevention of
oxygen-induced disorders. Eur J Clin Nutr.
48 Suppl 2: S17-23.
Prehn JH, Peruche B,
Unsicker K and Kriegistein J. (1993).
Isoform-specific effects of transforming growth
factor-beta on degeneration of primary neuronal
cultures induced by cytotoxic hypoxia or glutamate. J.
Neurochem. 60, 1665-1672.
Rack MK, Sriram S, Calrimi
J, Cannella B, Raine CS y McFarim DE
(1993). Long-term treatment of chronic
relapsing experimental allergic encephalomyelitis by transforming
growth factor-p2. Journal of Neuroimmunology,
46, 175-183.
Racke MK, Cannella B,
Albert P y col. Evidence of endogenous regulatory function
of transforming growth factor-beta 1 in
experimental allergic encephalomyelitis. Int Immunol
1992; 4: 615-20.
Rieckmann P, Albrecht M,
Kitze B y col. Cytokine mRNA levels in mononuclear blood
cells from patients with multiple sclerosis. Neurology
1994; 44: 1523-6.
Rieckmann P, Albrecht M,
Kitze B y col. Tumor necrosis factor-alpha
messenger RNA expression in patients with
relapsing-remitting multiple sclerosis is associated
with disease activity. Ann Neurol 1995; 37:
82-8.
Ruddle NH, Bergman CM,
McGrath KM y col. An antibody to lymphotoxin and tumor
necrosis factor prevents transfer of experimental allergic
encephalomyelitis. J Exp Med 1990; 172:
1193-200.
Santambrogio L, Hochwald GM,
Saxena B, Leu CH, Martz JE, Carlino JA,
Ruddle NH, Palladino MA, Gold LI y
Thorbecke GJ (1993). Studies on the mechanisms by
which Transforming Growth Factor-p protects against
allergic encephalomyelitis. Journal of Immunology 151,
1116-1127.
Schiefer HB, Hancock DS,
Loew FM. Long-term effects of partially
hydrogenated herring oil on the rat myocardium. Drug Nutr
Interact. 1982; 1(2): 89-102.
Schluesener HJ, Lider O.
Transforming growth factors beta 1 and beta 2: cytokines with
identical immunosuppressive effects and a potential role in the
regulation of autoimmune T cell function. J Neuroimmunol
1989; 24: 249-58.
Selmaj K, Raine CS,
Cannella B y col. Identification of lymphotoxin and tumor
necrosis factor in multiple sclerosis lesions. J Clin Invest
1991; 87: 949-54.
Selmaj K, Raine CS, Farooq
M y col. Cytokine cytotoxicity against oligodendrocytes. Apoptosis
induced by lymphotoxin. J Immunol 1991; 147:
1522-9.
Sharief MK, Thompson EJ. In
vivo relationship of tumor necrosis
factor-alpha to blood-brain barrier
damage in patients with active multiple sclerosis. J
Neuroimmunol 1992; 38: 27-33.
\newpage
Tejada-Simon MV,
Hong J, Rivera VM y col. Reactivity pattern and
cytokine profile of T cells primed by myelin peptides in multiple
sclerosis and healthy individuals. Eur J Immunol
2001; 31: 907-17.
Vartanian T, Li Y, Zhao M y
col. Interferon-gamma-induced
oligodendrocyte cell death: implications for the pathogenesis of
multiple sclerosis. Mol Med 1995; 1:
732-43.
Vivien D, Bemaudin M,
Buisson A, Divoux D, MacKenzie ET y
Nouvelot A. (1998). Evidence of type I and type II
transforming growth factor-beta
receptors in central nervous tissues: changes induced by focal
cerebral ischemia. J. Neurochem. 70,
2296-2304.
Zhang J,
Markovic-Plese S, Lacet B y col.
Increased frequency of interleukin 2-responsive T
cells specific for myelin basic protein and proteolipid protein in
peripheral blood and cerebrospinal fluid of patients with multiple
sclerosis. J Exp Med 1994; 179:
973-84.
Patente de Japón 6172263 (1994) Y.
Kosugi y col., Agency of Industrial Science & Technology
High-purity arachidonic acid triglyceride and its
production.
Patente de EE.UU. Nº 4,888,324 (1989) N.
Catsimpoolas y col., Angio-Medical Corporation
Method for enhancing angiogenesis with lipid containing
molecules.
Y. Kosugi y N. Azuma, J Amer.
Oil Chem. Soc., 71, 1397-1403
(1994). Synthesis of Triacylglycerol from polyunsaturated
fatty acid by immobilized ipase.
J. W. Hageman y col., J. Amer, Oil
Chem. Soc., 49,118-xxx (1972)
Preparation of glycerin and their uses.
E. S. Lutton y A. J. Fehl,
Lipids, 5, 90-99 (1970). The
polymorphism of odd and even saturated single acid triglycerides,
C8-C22.
D. Horrobin, A. McMordie, M. S.
Manku (Scotia Holdings PLC UK) Solicitud de patente europea
Nº EP 609078, 3 de Agosto de 1994. Phospholipids containing
two different unsaturated fatty acids for use in therapy,
nutrition, and cosmetics.
Y.-S. Huang, X. Lin, P. R.
Redden y D. F. Horrobin, J. Am. Oil Chem.
Soc., 72, 625-631, (1995). In
vitro Hydrolysis of Natural and Synthetic
y-Linolenic Acid-Containing
Triacylglycerols by Pancreatic Lipase.
K. Osada, K. Takahashi, M.
Hatano y M. Hosokawa, Nipón Suisan Gakkaishi.,
57, 119-125 (1991). Chem. Abstr.,
115:278299 Molecular Species of
Enzymically-synthesized Polyunsaturated Fatty
acid-rich Triglycerides.
J.-W. Liu, S. DeMichele, M.
Bergana, E. Bobik, Jr., C. Hastilow,
Lu-Te Chuang, P. Mukerji y J.-S.
Huang., J. Am. Oil Chem. Soc., 78,
489-493 (2001) Characterization of Oil
Exhibiting High y-Linolenic Acid from a Genetically
transformed Canola Strain.
D. R. Kodali, D. Atkinson, T. G.
Redgrave and D. Small, J Lipid Res., 28,
403-413 (1987). Structure and polymorphism
of 18-Carbon Fatty Acid Triacylglycerols: Effect of
Unsaturation and Substitution in the 2-Position.
P. H. Bentley Y W. McCrae. J.
Org. Chem. 35, 2082-2083 (1970).
An Efficient Synthesis of Symmetrical
1,3-Diglycerides.
M. Berger, K. Laumen y M. P.
Schneider, J. Am. Oil. Chem. Soc., 69,
955-959, (1992). Enzymatic Esterification of
Glycerol 1. Lipase-Catalyzed Synthesis of
Regioisomerically Pure
1,3-sn-Diacylglycerols.
A. P. J. Mank, J. P. Ward y D. A.
van Dorp, Chem. Physics Lipids, 16,
107-114 (1976). A versatile, flexible
synthesis of 1,3-diglycerides and triglycerides.
L. Hartman, Chem. Rev., 58,
845-867 (1958) y las referencias del mismo.
Advances in the Synthesis of Glycerides of Fatty Acids.
Claims (11)
1. Uso de un glicérido lipídico de estructura
definida de fórmula II
en la que R^{1} y R^{3} son
iguales y son -C(O)(CH_{2})_{n}CH_{3}, en la que
n se selecciona de 4 a 14 y R^{2} se selecciona entre residuos de
\gamma-linolenilo y
dihomo-\gamma-linolenilo, para la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad
neurodegenerativa
desmielinizante.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Uso según la Reivindicación 1,
caracterizado porque la enfermedad es esclerosis
múltiple.
3. Uso según la Reivindicación 1 o la
Reivindicación 2, en el que el medicamento repara lesiones del SNC
en enfermedades neurodegenerativas desmielinizantes.
4. Uso según la Reivindicación 1 o la
Reivindicación 2, en el que el medicamento es para aliviar los
espasmos y/o el dolor muscular en enfermedades neurodegenerativas
desmielinizantes.
5. Uso según la Reivindicación 2, en el que el
medicamento es para mejorar la puntuación en la escala EDSS en, al
menos, 1 unidad, en un periódo de 1 año de tratamiento de la
enfermedad neurodegenerativa desmielinizante.
6. Uso según la Reivindicación 2, en el que el
medicamento es para recuperar la EDSS de un paciente con una EDSS
por encima de 2,5 a por debajo de 2, en un periodo de 1 año de
tratamiento de la enfermedad neurodegenerativa desmielinizante.
7. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la dosis
diaria de lípido está entre 1 y 20 gramos.
8. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la dosis
diaria de lípido es de 3 a 5 gramos.
9. Un lípido seleccionado del grupo que consiste
en
1,3-didecanoato-2-octadecatri-(6Z,9Z,12Z)-enoato
de glicerol
1,3-didecanoato-2-eicosatri-(8Z,11Z,14Z)-enoato
de glicerol.
\vskip1.000000\baselineskip
10. Un lípido, según la Reivindicación 9, para
su uso en terapia.
11. Una composición farmacéutica para el
tratamiento de la enfermedad desmielinizante que comprende un lípido
de fórmula II.
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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GB0504333D0 (en) * | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Treatment of cytokine dysregulation |
GB0504362D0 (en) | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Cytokine modulators |
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US20070112592A1 (en) | 2005-11-17 | 2007-05-17 | Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware | Payments in providing assistance related to health |
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US20080004909A1 (en) * | 2005-11-30 | 2008-01-03 | Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware | Computational systems related to nutraceuticals |
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KR101430214B1 (ko) | 2006-12-28 | 2014-08-18 | 산토리 홀딩스 가부시키가이샤 | 신경 재생제 |
US8697138B2 (en) | 2007-03-28 | 2014-04-15 | Aker Biomarine As | Methods of using krill oil to treat risk factors for cardiovascular, metabolic, and inflammatory disorders |
PL2144618T3 (pl) | 2007-03-28 | 2014-03-31 | Aker Biomarine As | Bio-skuteczne kompozycje z oleju krylowego |
JP6105846B2 (ja) * | 2008-09-12 | 2017-03-29 | クライオプラキス クライオバイオロヒア エリテーデーアー. | 虚血組織の細胞療法 |
US8372812B2 (en) | 2009-02-26 | 2013-02-12 | Aker Biomarine Asa | Phospholipid and protein tablets |
ES2667011T3 (es) * | 2010-07-05 | 2018-05-09 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Monoacilgliceroles sn-2 y malabsorción lipídica |
AU2014203179C1 (en) | 2013-06-14 | 2017-05-04 | Aker Biomarine Antarctic As | Lipid extraction processes |
GB201400431D0 (en) | 2014-01-10 | 2014-02-26 | Aker Biomarine As | Phospholipid compositions and their preparation |
JP2016023163A (ja) * | 2014-07-22 | 2016-02-08 | 出光興産株式会社 | γ−リノレン酸を含む神経細胞の酸化ストレス軽減剤 |
US10864223B2 (en) | 2015-02-11 | 2020-12-15 | Aker Biomarine Antarctic As | Lipid compositions |
AU2016217559A1 (en) | 2015-02-11 | 2017-08-31 | Aker Biomarine Antarctic As | Lipid extraction processes |
CN105468156A (zh) * | 2015-11-25 | 2016-04-06 | 新乡医学院 | 一种基于α波控制的新型异步脑-机接口系统 |
KR102054401B1 (ko) * | 2018-03-26 | 2019-12-10 | 주식회사 엔지켐생명과학 | 1,2-디아실글리세롤 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 면역조절제 |
JP2022505215A (ja) * | 2018-10-18 | 2022-01-14 | ディーエス バイオファーマ リミテッド | 炎症性、線維性、および増殖性状態を治療するためのdglaおよび/または15-hetre |
Family Cites Families (135)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2077371A (en) | 1937-04-13 | Synthetic drx | ||
US655579A (en) * | 1900-02-27 | 1900-08-07 | Draper Co | Lease-forming mechanism. |
US2617791A (en) | 1949-09-15 | 1952-11-11 | Trojan Powder Co | Recovery of valuable products from pentaerythritol mother liquor |
US3158541A (en) | 1959-12-18 | 1964-11-24 | Escambia Chem Corp | Product for reduction of blood cholesterol concentration |
US3082228A (en) | 1959-12-18 | 1963-03-19 | Escambia Chem Corp | Method for producing monoesters of polyunsaturated fatty acids |
IE32979B1 (en) | 1968-03-07 | 1974-02-06 | Unilever Ltd | Spreadable fats |
US3671563A (en) | 1968-04-19 | 1972-06-20 | Smith Kline French Lab | Glycerol 3-(2,2,2-trichloroethyl) carbonate |
US3558656A (en) | 1968-04-19 | 1971-01-26 | Smith Kline French Lab | Glycerol trichloroethyl carbonate and derivatives |
US3676472A (en) | 1969-07-28 | 1972-07-11 | American Home Prod | Certain linoleic and linolenic acid ester fractions of vegetable oils and derivatives thereof |
US3748348A (en) | 1970-07-27 | 1973-07-24 | Lever Brothers Ltd | Directed-interesterified glyceridic oils having a high linoleic acid content and process for their production |
US3671557A (en) | 1970-09-17 | 1972-06-20 | Smith Kline French Lab | 1,2-diacylglycerol 3-(2,2,2-trichloroethyl) carbonates |
GB1370021A (en) | 1971-03-25 | 1974-10-09 | Unilever Ltd | Process for preparing usaturated carboxylic acids |
US3855254A (en) | 1972-03-31 | 1974-12-17 | Lever Brothers Ltd | Interesterification process |
GB1506563A (en) * | 1974-04-25 | 1978-04-05 | Williams J | Immunosuppressive agents |
US4058594A (en) * | 1974-04-25 | 1977-11-15 | John Williams | Immuno-suppressive agents |
US3988446A (en) | 1974-11-07 | 1976-10-26 | Abbott Laboratories | Glycerides with anti-inflammatory properties |
US3972907A (en) | 1975-03-24 | 1976-08-03 | G. D. Searle & Co. | Anti-hyperlipidemic fatty acids and esters |
US4048202A (en) | 1975-04-11 | 1977-09-13 | G. D. Searle & Co. | 3-O-Alkanoylglyceric acids |
US4178299A (en) | 1978-03-27 | 1979-12-11 | Abbott Laboratories | Process for preparing 1,3-diacyl glycerols |
EP0004770B1 (en) * | 1978-04-11 | 1984-06-13 | Efamol Limited | Pharmaceutical and dietary composition comprising gamma-linolenic acids |
US4181670A (en) | 1978-12-11 | 1980-01-01 | G. D. Searle & Co. | Phenyl 5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoate and congeners |
ATE24266T1 (de) | 1982-04-16 | 1987-01-15 | Nestle Sa | Lipidhaltige zusammensetzung fuer die orale, enterale oder parenterale ernaehrung. |
US4607052A (en) | 1983-04-15 | 1986-08-19 | Roussel-Uclaf | Triglycerides, dietetic and therapeutical applications and compositions containing them |
US4701468A (en) | 1983-04-15 | 1987-10-20 | Roussel-Uclaf | Oxidized triglycerides having therapeutic utility |
US4701469A (en) * | 1983-04-15 | 1987-10-20 | Roussel Uclaf | Triglycerides, process for therapeutical applications and compositions containing them |
GB8404463D0 (en) | 1984-02-21 | 1984-03-28 | Efamol Ltd | Microbiological production of essential fatty acids |
AT383130B (de) * | 1984-05-15 | 1987-05-25 | Chemie Linz Ag | Verfahren zur herstellung von an c1 und c2 verschieden substituierten phosphatidylcholinen und phosphatidylethanolaminen ueber die neuen verbindungen 1-0-tritylglycerophosphocholin beziehungsweise (1-0,n-ditrityl)-glycerophosphoethanolamin |
US5077312A (en) | 1984-07-08 | 1991-12-31 | Oncogen | Biologically active lipids binding membrane receptors |
GB2178752B (en) | 1985-07-12 | 1989-10-11 | Unilever Plc | Substitute milk fat |
US4888324A (en) | 1985-10-01 | 1989-12-19 | Angio-Medical Corporation | Method for enhancing angiogenesis with lipid containing molecules |
GB8524275D0 (en) * | 1985-10-02 | 1985-11-06 | Efamol Ltd | Pharmaceutical & dietary compositions |
US5151291A (en) | 1985-12-27 | 1992-09-29 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Glycerides of eicosapentaenoic acid, processes for preparing the same and oil and fat products containing the same |
US5306730A (en) | 1986-02-03 | 1994-04-26 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Botulinum toxin neutralizer |
US5227403A (en) | 1986-10-01 | 1993-07-13 | The Nisshin Oil Mills, Ltd. | Fats and oils having superior digestibility and absorptivity |
US4867965A (en) | 1986-10-02 | 1989-09-19 | Revlon, Inc. | Fatty acid diesters |
FR2617161B1 (fr) | 1987-06-29 | 1989-10-27 | Azar Robert | Nouveaux glycerides d'acide gras insature et leur procede d'obtention |
US4832975A (en) | 1987-09-29 | 1989-05-23 | The Procter & Gamble Company | Tailored triglycerides having improved autoignition characteristics |
DK565288D0 (da) * | 1988-10-11 | 1988-10-11 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til fremstilling af triglycerider, anvendelse af saadanne triglycerider og en emulsion, der indeholder saadanne triglycerider |
US5008126A (en) | 1989-06-27 | 1991-04-16 | Nabisco Brands, Inc. | Long chain diol diesters as low calorie fat mimetics |
US5922345A (en) | 1990-12-07 | 1999-07-13 | Scotia Holdings Plc | Nutrition |
GB9026648D0 (en) | 1990-12-07 | 1991-01-23 | Efamol Holdings | Nutrition |
PH11992043811B1 (en) | 1991-01-24 | 2002-08-22 | Martek Corp | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
US5658767A (en) | 1991-01-24 | 1997-08-19 | Martek Corporation | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
IT1247165B (it) | 1991-03-15 | 1994-12-12 | Fidia Spa | Uso terapeutico della fosfatidilserina e derivati in patologie degenerative anche associate a disfunsioni immunitarie. |
JPH04328199A (ja) | 1991-04-26 | 1992-11-17 | Nisshin Oil Mills Ltd:The | α−リノレン酸高含有トリグリセライドの濃縮方法 |
GB9111900D0 (en) | 1991-06-03 | 1991-07-24 | Efamol Holdings | Fatty acid compositions |
US5674901A (en) | 1995-06-01 | 1997-10-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Methods of treating animals to maintain or increase CD-4 and CD-8 cell populations |
JPH05310638A (ja) | 1992-05-01 | 1993-11-22 | Idemitsu Petrochem Co Ltd | 不飽和脂肪酸トリグリセライドの製造法 |
JPH06172263A (ja) | 1992-08-14 | 1994-06-21 | Agency Of Ind Science & Technol | 高純度アラキドン酸トリグリセリド及びその製造方法 |
US5618955A (en) | 1992-11-30 | 1997-04-08 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Fatty acid derivatives and pharmaceutical compositions containing same |
EP0679057B1 (en) * | 1993-01-15 | 1999-08-18 | Abbott Laboratories | Structured lipids |
GB9301446D0 (en) | 1993-01-26 | 1993-03-17 | Scotia Holdings Plc | Internal radiation damage |
GB9301629D0 (en) | 1993-01-27 | 1993-03-17 | Scotia Holdings Plc | Formulations containing unsaturated fatty acids |
JPH06279311A (ja) | 1993-03-26 | 1994-10-04 | Sagami Chem Res Center | プロテインキナーゼcアイソザイムの活性化剤 |
JPH0741421A (ja) | 1993-05-28 | 1995-02-10 | Suntory Ltd | ロイコトリエンb4 (ltb4 )による医学的症状の予防及び改善剤 |
US20050027004A1 (en) | 1993-06-09 | 2005-02-03 | Martek Biosciences Corporation | Methods of treating senile dementia and Alzheimer's diseases using docosahexaenoic acid and arachidonic acid compositions |
US5663450A (en) | 1993-08-17 | 1997-09-02 | Cv Therapeutics | Macrophage lipid chemoattractant |
EP0734723A4 (en) | 1993-12-29 | 2001-04-11 | Kowa Tekuno Sachi Co Ltd | THERAPEUTIC COMPOSITION USEFUL FOR TREATING HYPERPARATHYROIDIA OF A PATIENT ON ARTIFICIAL DIALYSIS |
JPH07309773A (ja) | 1994-05-16 | 1995-11-28 | Sagami Chem Res Center | アセチルコリン放出促進剤 |
FR2722410B1 (fr) | 1994-07-15 | 1996-10-04 | Grinda Jean Robert | Procede de stabilisation des acides gras poly-insatures et utilisation de ces produits stabilises entherapeutique |
JP3770628B2 (ja) | 1994-08-09 | 2006-04-26 | サントリー株式会社 | 遅延型アレルギー反応を介する医学的症状の予防及び改善剤 |
EP0707850A1 (en) | 1994-09-21 | 1996-04-24 | Scotia Holdings Plc | Use of polyunsaturated fatty acids for the manufacture of a medicament for the treatment of brest pain |
EP0711503A3 (en) | 1994-11-14 | 1997-11-26 | Scotia Holdings Plc | Milk fortified with GLA and/or DGLA |
US5990163A (en) | 1995-01-13 | 1999-11-23 | The Salk Institute For Biological Studies | Selective modulation of processes mediated by retinoid X receptors, and compounds useful therefor |
US6410078B1 (en) | 1995-04-28 | 2002-06-25 | Loders-Croklaan B.V. | Triglycerides, rich in polyunsaturated fatty acids |
KR100458659B1 (ko) | 1995-08-07 | 2005-06-27 | 산토리 가부시키가이샤 | 오메가9계불포화지방산을포함하는연골조직의이상에기인하는의학적증상의예방또는개선작용을갖는음식품및이의제조방법 |
GB9519661D0 (en) | 1995-09-27 | 1995-11-29 | Scotia Holdings Plc | Fatty acid treatment |
US6015798A (en) | 1995-10-10 | 2000-01-18 | Colgate Palmolive Company | Method for reducing the damaging effects of radiation therapy on animal skin and mucosa |
US5776913A (en) | 1995-10-10 | 1998-07-07 | Colgate Palmolive Company | Therapeutic diet for metabolic abnormalities found in animals with lymphoma |
WO1997038688A1 (en) | 1996-04-12 | 1997-10-23 | Peptide Technology Pty. Limited | Methods of treating immunopathologies using polyunsaturated fattyacids |
US5753702A (en) | 1996-05-22 | 1998-05-19 | University Of Vermont | Arachidonic acid metabolite, 16-hete |
EP0928185B1 (en) | 1996-06-03 | 2003-09-03 | CRODA INTERNATIONAL plc | Compositions and uses thereof |
US6340485B1 (en) | 1996-06-03 | 2002-01-22 | Croda International Plc | Compositions and uses thereof |
AU3349697A (en) | 1996-06-29 | 1998-01-21 | Scottish Agricultural College | Improvement of male fertility with antioxidants and/or polyunsaturated fatty acids |
GB9617847D0 (en) | 1996-08-27 | 1996-10-09 | Scotia Holdings Plc | Fatty acid treatment |
PL190181B1 (pl) | 1996-10-11 | 2005-11-30 | Scarista Ltd | Zastosowanie oleju zawierającego kwas eikozapentaenowy (KEP) i/lub kwas stearydonowy (KS) oraz preparat farmaceutyczny zawierający olej |
US6080787A (en) | 1997-02-21 | 2000-06-27 | Abbott Laboratories | Methods for reducing the incidence of necrotizing enterocolitis |
WO1998036745A2 (en) | 1997-02-21 | 1998-08-27 | Abbot Laboratories | Use of polyunsaturated fatty acids for reducing the incidence of necrotizing enterocolitis |
US6201022B1 (en) | 1997-03-27 | 2001-03-13 | Myorx, Inc. | Methods for treating neurotransmitter-mediated pain syndromes by topically administering an omega fatty acid |
US5968809A (en) | 1997-04-11 | 1999-10-19 | Abbot Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
US6051754A (en) | 1997-04-11 | 2000-04-18 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
US6432684B1 (en) | 1997-04-11 | 2002-08-13 | Abbott Laboratories | Human desaturase gene and uses thereof |
US20020037876A1 (en) | 1998-06-25 | 2002-03-28 | Yissum Research Development Company Of Hebrew University Of Jerusalem | Carboxylic acids and derivatives thereof and pharmaceutical compositions containing them |
GB9715444D0 (en) | 1997-07-22 | 1997-09-24 | Scotia Holdings Plc | Therapeutic and dietary compositions |
US6369252B1 (en) * | 1998-02-26 | 2002-04-09 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Structured lipids |
EP1066235B1 (en) | 1998-04-03 | 2003-10-01 | Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Synthetic endogenous cannabinoid analogues and uses thereof |
US6214372B1 (en) | 1998-05-04 | 2001-04-10 | Con Lin Co., Inc. | Method of using isomer enriched conjugated linoleic acid compositions |
US6696584B2 (en) | 1998-05-04 | 2004-02-24 | Natural Asa | Isomer enriched conjugated linoleic acid compositions |
US7101914B2 (en) | 1998-05-04 | 2006-09-05 | Natural Asa | Isomer enriched conjugated linoleic acid compositions |
ATE375712T1 (de) | 1998-08-04 | 2007-11-15 | Cargill Inc | Promotoren der fettsäure-desaturase aus pflanzen |
KR100325581B1 (ko) | 1998-08-07 | 2002-08-24 | 오우택 | 아라키토닉산의리폭시게네이즈대사결과물질을함유하는진통제용조성물 |
WO2000009118A1 (en) | 1998-08-13 | 2000-02-24 | The Wistar Institute | Methods for reducing atherosclerotic plaques |
GB9901809D0 (en) | 1999-01-27 | 1999-03-17 | Scarista Limited | Highly purified ethgyl epa and other epa derivatives for psychiatric and neurological disorderes |
JP3779505B2 (ja) | 1999-08-24 | 2006-05-31 | 花王株式会社 | 油脂組成物 |
US6426367B1 (en) | 1999-09-09 | 2002-07-30 | Efa Sciences Llc | Methods for selectively occluding blood supplies to neoplasias |
US6340705B1 (en) | 1999-09-10 | 2002-01-22 | Monsanto Technology, Llc | Use of α-linolenic acid metabolites for treatment or prevention of cancer |
EP1088552B1 (en) | 1999-09-30 | 2006-04-19 | Loders Croklaan B.V. | Compositions containing pinolenic acid and its use a health component |
GB9923738D0 (en) | 1999-10-07 | 1999-12-08 | Nestle Sa | Nutritional composition |
US20010047036A1 (en) | 1999-12-17 | 2001-11-29 | Vanderhoof Jon A. | Composition for improving the proliferative response during adaptation of the gastrointestinal tract and use in short bowel syndrome |
EG22407A (en) | 2000-02-17 | 2003-01-29 | Iams Company | Method for improving bone modeling and chondrocyte functioning in growing canines |
US6361806B1 (en) | 2000-02-23 | 2002-03-26 | Michael P. Allen | Composition for and method of topical administration to effect changes in subcutaneous adipose tissue |
ES2213666T3 (es) | 2000-02-24 | 2004-09-01 | Unilever N.V. | Acido pinolenico contra la diabetes. |
ES2227220T3 (es) * | 2000-06-23 | 2005-04-01 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | 2-arachidonylglycerol (2-ag) - inhibidor de factor de necrosis tumoral alfa y neuroprotector cerebral en traumatismo craneoencefalico cerrado. |
GB0016045D0 (en) | 2000-06-29 | 2000-08-23 | Laxdale Limited | Therapeutic combinations of fatty acids |
JP2002047176A (ja) | 2000-08-04 | 2002-02-12 | Idemitsu Technofine Co Ltd | IgE産生抑制剤 |
US6664230B1 (en) * | 2000-08-24 | 2003-12-16 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
FR2815227B1 (fr) | 2000-10-17 | 2003-04-11 | Schwartz Laboratoires Robert | Composition anti-stress destinee a etre incorporee principalement a des vehicules nutritionnels |
NO20005718A (no) | 2000-11-13 | 2001-06-05 | Ethics Cosmeceuticals Ab | Sammensetning for hud som inneholder kitosan-konjugert CLA og kitosankonjugert vitamin A eller et <beta>-cyklodekstrin-konjugert vitamin A samt fremgangsmåte for fremstilling og anvendelse av denne |
US6528040B1 (en) | 2001-01-18 | 2003-03-04 | Maurine Pearson | EMU oil-based formulations for use as an analgesic, anesthetic and antipruritic |
EP1372641A4 (en) | 2001-03-05 | 2004-08-25 | Stephen P Ernest | ENTERAL FORMULATION |
EE200300599A (et) | 2001-05-30 | 2004-02-16 | Laxdale Limited | Koensüüm Q ja EPA või muu asendamatu rasvhape |
WO2003004667A1 (fr) * | 2001-07-02 | 2003-01-16 | Suntory Limited | Methode de production d'une matiere grasse comprenant un triglyceride contenant un acide gras fortement insature |
JP2003048831A (ja) * | 2001-08-02 | 2003-02-21 | Suntory Ltd | 脳機能の低下に起因する症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物 |
EP1285590A1 (en) | 2001-08-08 | 2003-02-26 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lipid blends |
AU784852B2 (en) | 2001-08-10 | 2006-07-06 | Mars, Incorporated | Canine support diet |
US20030032674A1 (en) * | 2001-08-13 | 2003-02-13 | Hwang Daniel H. | Use of unsaturated fatty acids to treat severe inflammatory diseases |
NL1019368C2 (nl) | 2001-11-14 | 2003-05-20 | Nutricia Nv | Preparaat voor het verbeteren van receptorwerking. |
US6677470B2 (en) | 2001-11-20 | 2004-01-13 | Natural Asa | Functional acylglycerides |
ITMI20012732A1 (it) | 2001-12-20 | 2003-06-20 | Health Pharma S R L | Integratore alimentare per neuropatici |
AUPS082102A0 (en) | 2002-03-01 | 2002-03-21 | Women's And Children's Hospital | Therapeutic properties of oils |
CA2478245A1 (en) | 2002-03-08 | 2003-09-18 | Monsanto Technology Llc | Treatment and prevention of inflammatory disorders |
US20040048926A1 (en) | 2002-03-15 | 2004-03-11 | Hoffman Dennis Robert | Use of docosahexaenoic acid and arachidonic acid to enhance the visual development of term infants breast-fed up to the age of six months |
ES2470369T3 (es) | 2002-05-17 | 2014-06-23 | Kowa Company, Ltd. | Inhibidores de la expresión de TGF-a |
US7335481B2 (en) | 2002-07-24 | 2008-02-26 | Christer Owman | Methods of identifying compounds that affect a fatty acid cell-surface receptor |
WO2004098570A1 (en) | 2002-10-30 | 2004-11-18 | Spherics, Inc. | Nanoparticulate bioactive agents |
US7074418B2 (en) | 2002-11-18 | 2006-07-11 | Changaris David G | Conjugated fatty acid based emulsion and methods for preparing and using same |
US20040229950A1 (en) | 2002-11-26 | 2004-11-18 | Vanderhoek Jack Y. | Method and composition with conjugated linoleic acid esters |
US6841573B2 (en) | 2002-11-27 | 2005-01-11 | Molecular Nutrition | Use of arachidonic acid as a method of increasing skeletal muscle mass |
US20040209953A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-10-21 | Wai Lee Theresa Siu-Ling | Glyceride compositions and methods of making and using same |
US20040208939A1 (en) | 2003-04-18 | 2004-10-21 | Barry Sears | Novel dietary compositions to reduce inflammation |
GB0311081D0 (en) * | 2003-05-14 | 2003-06-18 | Btg Internat Limted | Treatment of neurodegenerative conditions |
WO2005011605A2 (en) * | 2003-08-01 | 2005-02-10 | Medarex, Inc. | Combination therapies for multiple sclerosis |
JP2007502805A (ja) | 2003-08-18 | 2007-02-15 | ビーティージー・インターナショナル・リミテッド | 神経変性状態の処置 |
WO2005063231A2 (en) | 2003-12-31 | 2005-07-14 | Igennus Limited | Formulation containing an eicosapentaenoic acid or an ester thereof and a triterpene or esther thereof |
GB0504362D0 (en) * | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Cytokine modulators |
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