ES2299090T3

ES2299090T3 - Antagonistas de bradiquinina no peptidicos y composiciones farmaceuticas de los mismos.

Info

Publication number: ES2299090T3
Application number: ES05789989T
Authority: ES
Inventors: Patrizia Felicetti; Christopher Ingo Fincham; Alessandro Giolitti; Carlo Alberto Maggi; Laura Quartara; Cristina Rossi
Original assignee: Istituto Luso Farmaco dItalia SpA
Current assignee: Istituto Luso Farmaco dItalia SpA
Priority date: 2004-10-15
Filing date: 2005-09-27
Publication date: 2008-05-16
Anticipated expiration: 2025-09-27
Also published as: WO2006040004A1; CA2583920C; NO20071840L; ATE381931T1; EP1799214B1; DE602005004039D1; MA29007B1; JP4980917B2; US7645759B2; CN101039671B; EP1799214A1; GEP20115322B; EP1799214B8; CY1107254T1; RS50563B; JP2008516901A; AR051392A1; ZA200703009B; ITMI20041963A1; DK1799214T3

Abstract

Los compuestos de la fórmula general (I): en la que: - R es hidrógeno o metilo; - W es un enlace simple o un átomo de oxígeno; - n = 3; - X es hidrógeno o un grupo amino -NR1R2 en el que R1 y R2 pueden ser independientemente hidrógeno o un grupo seleccionado de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo; - Y es un grupo de amonio cuaternario -NR3R4R5 en el que R3, R4, R5 pueden ser independientemente un grupo seleccionado de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, n-pentilo; y las sales, enantiómeros y mezclas enantiómeras de los mismos farmacéuticamente aceptables.

Description

Antagonistas de bradiquinina no peptídicos y composiciones farmacéuticas de los mismos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos no peptídicos que contienen un grupo amonio cuaternario, que tienen actividad como antagonistas específicos del receptor B2 de bradiquinina (BK), composiciones farmacéuticas que los contienen y el uso de los mismos para el tratamiento de las afecciones en las que está implicada la activación de receptores de bradiquinina B2.

Técnica previa

La bradiquinina (BK) pertenece a las Quininas y forma, conjuntamente con Kalidina y T-Kinina, el subgrupo de quininas presente en mamíferos. Las Kininas juegan un papel importante como mediadores de dolor e inflamación, tanto en el sistema nervioso central como en el periférico. La bradiquinina es, en particular, un nonapéptido

(H-Arg^{1}-Pro^{2}-Pro^{3}-Gly^{4}-Phes^{5}-Ser^{6}-Pro^{7}-Phe^{8}-Arg^{9}-OH)

producido por el cuerpo en condiciones fisiopatológicas.

Existen dos tipos de receptores de Quininas, B1 y B2. La característica principal del receptor B1 es que es más inducible que constitutivo. Se expresa en tejidos en condiciones de inflamación o estrés. Por otro lado, B2 es un receptor constitutivo presente normalmente en todos los tejidos y actúa como un mediador durante los procesos inflamatorios. La bradiquinina y la Kalidina se liberan a partir de sus precursores proteicos (conocidos como quininógenos) mediante enzimas proteolíticas llamadas quininogenasas. Entre éstas, el papel principal se juega por las Kalicreínas que sin embargo, una vez liberadas por el precursor, pueden ejercer su acción sólo durante un tiempo corto ya que se destruyen rápidamente por una serie de enzimas circulantes y membranas definidas generalmente como Kininasas. Una de estas Kininasas escinde bradiquinina en la arginina C-terminal formando así una des-Arg-BK que actúa como agonista de receptor B1.

La activación de los receptores de bradiquinina B1 y B2 induce relajación de músculos de los vasos con la consiguiente hipotensión, incremento en permeabilidad vascular, contracción de músculos lisos del intestino y tracto respiratorio, estimulación de neuronas nociceptivas, alteración de secreción epitelial iónica, producción de nitrósido y liberación de citoquinas por leucocitos y eicosanoides de diferentes tipos celulares. Como una consecuencia, los compuestos agonistas de los receptores de BK se pueden considerar una clase novedosa de medicamentos supuestamente activos en diversos trastornos. Posibles aplicaciones terapéuticas para dichos antagonistas son trastornos inflamatorios, alérgicos y autoinmunes, tales como asma y bronquitis crónica (también inducida por irritantes), rinitis alérgica, vasomotora y viral, enfermedad pulmonar obstructiva (COPD), artritis reumatoide, enfermedades inflamatorias crónicas del intestino (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), glomerulonefritis, soriasis, sarpullido, cistitis aguda y crónica; trastornos degenerativos caracterizados por fibrosis, tales como cirrosis hepáticas, glomerulopatías y fibrosis pulmonares, aterosclerosis; gracias a su actividad analgésica, en el tratamiento de dolor tanto agudo como crónico, por ejemplo en quemaduras, cefalea, picaduras de insectos, dolor crónico en pacientes de cáncer; en trastornos del aparato cardiovasculares tales como choques sépticos, alérgicos y postraumáticos, y cirrosis hepática por síndrome hepatorrenal; como anticáncer y antiangiogénicos; en el tratamiento de la hipotensión y de alopecia.

Se conocen diferentes antagonistas peptídicos y no peptídicos de receptor B2 de bradiquinina en la bibliografía. El documento WO03103671 describe una gran familia de compuestos con actividad antagonista en receptor B2 de bradiquinina. Los compuestos de la presente invención, aunque incluyéndose en la fórmula general del documento WO03103671, no se describen o caracterizan en dicho documento.

Descripción detallada

La presente invención se refiere a compuestos no peptídicos que muestran alta afinidad y actividad antagonista al receptor B2, que tienen la fórmula general (I):

2

en la que:

-: R es hidrógeno o metilo;

-: W es un enlace simple o un átomo de oxígeno;

-: n = 3;

-: X es hidrógeno o un grupo amino -NR_{1}R_{2} en el que R_{1} y_{ }R_{2} pueden ser independientemente hidrógeno o un grupo seleccionado de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo;

-: Y es un grupo de amonio cuaternario -NR_{3}R_{4}R_{5} en el que R_{3}, R_{4}, R_{5} pueden ser independientemente un grupo seleccionado de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, n-pentilo; y

las sales de los mismos con ácidos farmacéuticamente aceptables.

Preferiblemente, compuestos (I) se salifican con ácidos inorgánicos u orgánicos seleccionados de ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, oxálico, málico, maleico, succínico, malónico, aspártico, glutámico. Además, debido a la presencia de un centro quiral, la invención comprende también los dos enantiómeros o mezclas de los mismos, en cualquier proporción, incluyendo mezclas racémicas.

Los compuestos de la fórmula general (I) tienen actividad antagonista tanto in vivo como in vitro al receptor B2 más alta que los análogos más similares estructuralmente como se describen en el documento WO03103671.

Se prefieren los compuestos de fórmula general (I) en la que:

n = 3;

X = hidrógeno o un grupo -NH_{2};

Y = grupo de amonio cuaternario -N(CH_{3})_{3}^{+};

siendo los otros sustituyentes como se definen anteriormente.

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Se prefieren particularmente los compuestos (I) en los que:

R es hidrógeno o metilo;

W es un átomo de oxígeno;

n = 3;

X es un hidrógeno o un grupo -NH_{2};

Y es un grupo amonio cuaternario -N(CH_{3})_{3}^{+}.

Los compuestos objeto de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con vías sintéticas bien conocidas.

Preferiblemente, los compuestos de fórmula general (I) como se definen anteriormente se preparan mediante condensación, en la presencia de un agente condensador adecuado, del intermedio de fórmula general (II), obtenida como se describe en el documento WO03103671

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con el compuesto de fórmula (10)

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o un derivado del mismo en el que el grupo carboxílico está adecuadamente activado.

El procedimiento sintético está ilustrado en el esquema 1

Esquema 1

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El compuesto de fórmula (2) se prepara como se describe en J. Med. Chem. 2001, 44, 1674-1689 mediante brominación del derivado de tolueno correspondiente, que se obtiene a su vez como se describe en J. Fluorine Chemistry, 2000. 101: 85-89.

La primera etapa se refiere a la formación del puente de sulfonamido (4) obtenido mediante condensación de intermedios (2) y (3). Esta reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente, preferiblemente en agua/acetonitrilo (2:1), en presencia de carbonato de sodio hidrógeno (NaHCO_{3}). Dicha reacción tiene lugar con intercambio de cloro y bromo en la posición de bencilo: la mezcla de los productos resultante se usa directamente en la etapa subsiguiente. La reacción de la mezcla de los derivados de halógeno con una hidroxiquinolina disustituida (5), en presencia de un carbonato de potasio (K_{2}CO_{3}) y yoduro de potasio (KI), en acetona bajo reflujo, proporciona el derivado éster (6).

Se prepara compuesto de fórmula (5) es decir 2,4-dimetil-8-hidroxiquinolina, en la que R_{4}=R_{5}=CH_{3}, como se describe en el documento WO964039.

El éster metílico de fórmula (6) se hidroliza bajo condiciones básicas a ácido carboxílico (7), que se condensa con Boc-piperazidina (8), para proporcionar intermedio (9). Dicha reacción de condensación se lleva a cabo de acuerdo con un procedimiento conocido para la síntesis de péptidos, usando hidroxibenzotriazol para activar el resto carboxílico, un agente condensador tal como 1-etil-3-(3'-dimetilpropil)carbodiimida y una cantidad de amina terciaria, concretamente diisopropiletilamina, de tres equivalentes sobre la base del agente condensador. El compuesto (II) se obtiene mediante escisión del grupo Boc del intermedio (9), por medio de una solución de ácido clorhídrico (4N) en dioxano y aislando la amina libre en vez del clorhidrato.

El derivado (11) se obtiene mediante condensación de intermedio (10) con el aminoácido (11) de acuerdo con el procedimiento descrito para la preparación de (9) a partir de (7). Cualquier grupo Boc presente se puede retirar de intermedio (11), con una solución de ácido clorhídrico (4N) en dioxano, obteniendo así el compuesto final. Cuando es el caso que el grupo trialquilamonio no está presente en cualesquiera intermedios comercialmente disponibles, se puede sintetizar comenzando a partir de la amina correspondiente con procedimientos conocidos (Rapoport y col., J. Org. Chem, 1977, 42: 139-141; Chen y col., J. Biochem., 1978, 56: 150-152).

Los compuestos de la invención se usan en el tratamiento de todos aquellos trastornos en los que la activación de receptor de bradiquinina tiene que bloquearse o reducirse. Son particularmente adecuados para el tratamiento de trastornos inflamatorios, alérgicos y autoinmunes, tales como asma y bronquitis crónica, trastornos alérgicos, rinitis vasomotora o viral, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), artritis reumatoide, enfermedades inflamatorias crónicas del intestino (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), glomerulonefritis, soriasis, sarpullido, cistitis aguda y crónica, cirrosis hepática, glomerulopatías y fibrosis pulmonar, aterosclerosis, dolor tanto agudo como crónico, choques séptico, alérgico y postraumático, cirrosis hepática por síndrome hepatorrenal, hipotensión, alopecia, o como anticáncer y antiangiogénicos.

Para usar en terapia, los compuestos de la invención se formularán adecuadamente conjuntamente con vehículos/excipientes farmacéuticamente aceptables. Se prefieren formas farmacéuticas adecuadas para la administración oral, tales como comprimidos, cápsulas, gránulos, polvos, soluciones, suspensiones, jarabes o similares. Estas preparaciones farmacéuticas se pueden preparar con procedimientos convencionales usando ingredientes conocidos en la técnica, tales como ligandos, disgregantes, lubricantes, agentes de carga, agentes estabilizadores, diluyentes, tinciones, aromas, agentes humectantes y otros excipientes conocidos por aquellos expertos en la técnica. Las formulaciones orales comprenden también formas de liberación prolongada, tales como comprimidos o gránulos con recubrimiento gastrorresistente. Las composiciones orales sólidas se pueden preparar con procedimientos de mezclado, carga o compresión convencionales. Las preparaciones orales líquidas pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensiones o soluciones acuosas o aceitosas, emulsiones, jarabes, o pueden estar presentes como producto seco para reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de usar.

La dosificación puede variar dependiendo de la edad y condiciones generales del paciente, naturaleza y gravedad de la enfermedad o trastorno y vía y tipo de administración. Como una regla, en el caso de administración oral a un paciente humano adulto, los compuestos de la presente invención se administrarán generalmente en una dosificación diaria total que varía de 1 a 1000 mg, preferiblemente de 5 a 300 mg, en una dosis única o en dosis subdivididas.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención en mayor detalle.

Ejemplo 1 Diclorhidrato de cloruro de (4-(S)-amino-5-(4-{4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino]tetrahidropiran-4-carbonil}piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]trimetilamonio

(Compuesto de fórmula general I en el que R = CH_{3}, W = -O-, X = NH_{2}, n = 3, Y = N(CH_{3})_{3}^{+}Cl^{-}).

El compuesto se sintetiza siguiendo la vía sintética ilustrada en esquema 2.

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Esquema 2

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Procedimientos generales: HPLC analítica:

Flujo: 1 ml/minuto; Fase móvil: A-ácido trifluoroacético al 0,1% en agua, B-ácido trifluoroacético al 0,1% en acetonitrilo; Columna: Zorbax Eclipse XBD C8, 5 micrones, 150 x 4,6 mm.

Intermedio (2)

Cloruro de 2,4-dicloro-3-bromometil-bencenosulfonilo

Se añadieron gota a gota 10 ml de ácido clorosulfónico con 4,8 ml de 2,6-diclorotolueno en dos horas, bajo agitación magnética a temperatura ambiente. Después de la completación de la adición, la mezcla se calentó a 40ºC durante dos horas, obteniendo por lo tanto una solución púrpura, que se enfría y se vierte cuidadosamente en agua helada (0,5 l), agitando vigorosamente. El sólido blanco separado se filtró, se trituró, se lavó con agua, se secó sobre KOH y se purificó lavándose con n-hexano, añadiendo 200 ml de disolvente bajo agitación fuerte. La mezcla se filtró, el sólido se descartó y el disolvente se evaporó hasta sequedad obteniéndose cloruro de 2,4-dicloro-3-metil-bencenosulfonilo como un sólido blanco cristalino. Rendimiento: 85%.

Pureza de HPLC: 86% (B al 30%, 3%/minuto, Rt = 19,7 minutos).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}): 8 (ppm) 2,6 (s, 3H), 7,5 (d, 1H), 7,95 (d, 1H);

ESI(+)EM: m/z 260 [M+H]^{+}.

Este intermedio se brominó bajo las siguientes condiciones: 20 mmoles de cloruro de 2,4-dicloro-3-metil-bencenosulfonilo se disuelven en acetonitrilo, se añaden 2 eq. de NBS bajo agitación a temperatura ambiente hasta completarse la solubilización de NBS. Finalmente, se añaden 0,1 eq. de azo-bisisobutironitrilo (AIBN) y la mezcla se calentó a 70ºC durante aproximadamente 6 horas. La solución se evaporó, el residuo se llevó con acetato de etilo, se lavó con H_{2}O y NaHCO_{3} al 5%, se secó sobre Na_{2}SO_{4} seco y se filtró. La fase orgánica se evaporó de este modo obteniéndose un líquido viscoso, de color claro que se lleva en éter de petróleo. Se filtró el residuo, y la solución proporciona (2') como un sólido cristalino de color claro. Pureza de HPLC: 95% (B al 50%-5%/min., Rt = 18,72).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}): \delta (ppm) 4,85 (s, 2H), 7,58 (d, 1H), 8,08 (d, 1H);

ESI(+)EM: m/z 338,1 [M+H]^{+}.

Intermedio (3')

Clorhidrato de éster metílico de ácido 4-amino-tetrahidropirano-4-carboxílico

Se suspende clorhidrato de ácido 4-amino-tetrahidropirano-4-carboxílico (0,025 moles) en 13 ml de CH_{3}OH, se enfría a -60ºC y se añade gota a gota con SOCl_{2} (3 eq) bajo agitación. Después de la completación de la adición, la mezcla se deja calentar a temperatura ambiente, después se calienta gradualmente a ebullición obteniendo una solución transparente (aprox. 2 horas), que se enfría, el residuo se filtra y se concentra a vacío.

Rendimiento al 80%. Pureza (RMN) al 85%.

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta (ppm) 1,91-2,04 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 3,60-3,85 (m, 4H), 9,00 (s, 3H). ESI(+)EM: m/z 160,1 [M+H]^{+}.

Intermedio (4')

Éster metílico del ácido 4-(3-bromometil-2,4-dicloro-bencenosulfonilamino)-tetrahidropirano-4-carboxílico

El intermedio (3') (1,1 eq.) se disuelve en agua conjuntamente con 4 equivalentes de K_{2}CO_{3}. Esta solución se añade con una solución de 1 equivalente (10 mmoles) de intermedio (2) en acetonitrilo y se agita a temperatura ambiente hasta que se forma un precipitado (4 horas). El disolvente se evapora aparte y el residuo se disuelve en acetato de etilo y HCl 0,1 M (1/1). La fase orgánica se separa y se seca sobre Na_{2}SO_{4}. El disolvente se evapora aparte, el sólido resultante se lava con ciclohexano, obteniéndose de este modo un sólido blanco en el que los derivados de cloro/bromo están presentes en razón 10/1. Rendimiento: 60%. Pureza de HPLC: 88% (B al 20% a 3%/minuto; Rt = 14,11 (Br) y 14,47 (C1)).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}): 8 (ppm) 1,81-1,99 (2H, m), 2,07-2,25 (2H, m), 3,49-3,71 (7H, m), 4,81 (1,5H, s, [Br]), 4,94 (0,3H, s, [C1]), 5,30 (1H, sa), 7,47-7,53 (1H, m), [7,49 (d, J 8,5 Hz, X = Br), 7,51 (d, J 8,5 Hz, X = Cl)], 7,91-7,98 (1H, m), [7,94 (d, J 8,5 Hz, X = Br), 7,96 (d, J 8,5 Hz, X = Cl)].

Intermedio (6')

Éster metílico del ácido 4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino]tetrahidropirano-4-carboxílico

Se mezclan quinolina (5') (0,48 mmoles) y LiOH (2,5 eq.) a temperatura ambiente bajo nitrógeno en metiletilcetona (MEK). La mezcla se mantiene bajo agitación y bajo nitrógeno durante 90 minutos. El intermedio (4) se disuelve en MEK/DMF seco (2/1) (42 ml, 12 ml/mmol), y la solución que contiene la quinolina se añade gota a gota a la mezcla de reacción, bajo agitación. La agitación se mantiene durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentra a vacío y el residuo se disuelve en acetato de etilo (50 ml, 100 ml/mol). La fase orgánica se lava (3 x 50 ml) con una solución tampón pH = 4,2, se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra a vacío obteniéndose un aceite amarillo. Rendimiento: 33%. Pureza de HPLC: 77% (B al 20%, 3%/min.; Rt = 9,54).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta (ppm) 1,80-1,95 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,32-3,40 (m, 3H), 3,42-3,55 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 5,57 (s, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,39 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,78 (d, 1H), 8,02 (d, 1H), 8,77 (sa, 1H); ESI (+)EM: m/z 553,1 [M+H]^{+}.

Intermedio (7')

Ácido 4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino]tetrapirano-4-carboxílico

El intermedio de fórmula (6') se disuelve en THF y la solución se añade con 10 eq. de LiOH 1 M en agua. La mezcla se agita durante 4 horas a 40ºC, después el disolvente se evapora aparte. El residuo se disuelve en agua y se añade a HCl 0,1 M a pH = 4. La fase acuosa se extrae con diclorometano y la fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}. El disolvente se evapora aparte y obteniéndose un residuo sólido amarillo. Rendimiento: 90%. Pureza de HPLC: 99% (B al 20%, 3%/minuto; Rt = 7,72).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta (ppm) 1,75-1,90 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,10-3,35 (m, 2H), 3,38-3,50 (m, 2H), 5,58 (s, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,46 (t, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 8,03 (d, 1H), 8,64 (sa, 1H). ESI(+)EM: m/z 539,1 [M+1]^{+}.

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Intermedio (9')

4-terc-butoxicarbonil-((4-(2,4-dicloro-3-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)bencenosulfonilamino)-tetrahidropira- no-4-carbonil)-piperazin-1-il)

Se suspenden (7') (1,3 mmol) y HOBt (1,1 eq) en 50 ml de DMF seco en un matraz de fondo redondo de 100 ml bajo nitrógeno. La mezcla se enfría a +4ºC y se añade con EDCL. HCl (1,1 eq.) bajo agitación, La agitación a +4ºC se continúa durante 1 hora, después se añaden DIPEA (2 eq.) y Boc-piperazina (1 eq.) y la mezcla se deja calentar a temperatura ambiente, bajo agitación. Después de 12 horas el disolvente se evapora, el residuo se disuelve en 40 ml de DCM y la fase orgánica se lava con salmuera (20 ml) y se seca sobre Na_{2}SO_{4}. El disolvente se evapora aparte obteniendo un aceite que se purifica en una columna de 70 g (acetato de etilo, Rf = 0,50) de Varian Mega Bond (sistema principal ultrarrápido), obteniéndose de este modo un sólido amarillo. Rendimiento: 96%. Pureza de HPLC: 98% (B al 20%, B al 3%/min., Rt = 11,14).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}): 8 (ppm) 1,45 (s, 9H);1,55-1,80 (m, 2H), 2,05-2,20 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,38-3,90 (m, 10H), 5,58 (s, 2H), 7,10 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,46 (t, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 8,03 (d, 1H), 8,64 (sa, 1H). ESI(+)EM: m/z 707,2 [M+H]^{+}.

Intermedio (1')

(4-(2,4-dicloro-3-(2,4-dimetilquinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carbonil)-piperazin- 1-ilo

Se añaden 0,62 mmoles de (9') con 10 ml de HCl/dioxano 4 M y la mezcla se mantiene bajo agitación durante 3 horas. El disolvente se evapora y el residuo se seca en frío, obteniéndose clorhidrato (1') como un sólido amarillo Rendimiento: 98%.Pureza de HPLC: 92% (B al 20%, 3%/min., Rt = 5,34).

RMN-^{1}H (D_{2}O): \delta (ppm): 1,55-2,10 (m, 7H), 2,90-3,10 (m, 9H), 6,0 (s, 2H), 7,60-8,10 (m, 8H), 8,95 (d, 1H).

ESI(+)EM: m/z 609,1 [M+H]^{+}.

Intermedio (10')

(4-terc-butoxicarbonilamino-4-carboxi-butil)-trimetilamonio

Se suspenden 10 mmoles de Boc-Orn-OH en metanol (20 ml) y se añade la suspensión con 44 mmoles de isourea. El matraz se tapó y se mantuvo bajo agitación a temperatura ambiente durante 2 días. La solución resultante se somete a seguimiento mediante TLC (eluyente: CHCl_{3}/CH_{3}OH/NH_{4}OH 40/54/6; Boc-Orn-OH Ref. = 0,29; (10') Rf: 0,11, detección KMnO_{4}).

Se evapora aparte metanol a vacío y el residuo se digiere en 150 ml de agua y se filtra. El matraz de fondo redondo y el sólido se lavan con agua (2 x 50 ml) y se combinan todas las fracciones acuosas de lavado, después se concentran a vacío (40 ml). El sólido resultante (4,068 g) se suspende en agua (40 ml), se filtra (eliminando cualesquiera trazas de urea) y se purifica mediante FCC en LiChroprep RP-18 (40-63 micrómetros) en fase reversa. La columna (19 x 7 cm) se eluye con CH_{3}CN al 3% en agua y las fracciones (aproximadamente 100 ml) se analizan mediante TLC. Las fracciones que contienen el producto puro (500 ml) se combinan, se concentran a vacío retirando CH_{3}CN, se secan por congelación, y finalmente se evaporan a partir de 150 ml de etanol absoluto, dando 442 mg de un sólido blanco, altamente higroscópico. Rendimiento: 16%.

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta (ppm) 1,38 (s, 9H), 1,58-1,75 (m, 4H), 3,03 (s, 9H), 3,29 (m, 2H), 3,45 (m, 1H), 6,49 (d, d, 1H); ESI(+)EM: m/z 275,2 [M+H]^{+}.

Intermedio (11')

Cloruro de (4-(S)-terc-butoxicarbonilamino-5-(4-{4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)bencenosulfonilamino]tetrahidropirano-4-carbonil}piperazin-carbonil}piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]trimetil-amonio

1,2 mmoles, de intermedio (10'), se disuelven en DMF y se añade la solución con diciclohexilcarbodiimida (1,2 eq.) y HOBt (1,2 eq.). La mezcla se mantiene bajo agitación durante 30 minutos, después se añade con diisopropilaminometilpoliestireno (1,5 eq.) e intermedio (1') (1 eq.). La mezcla se deja bajo agitación durante 24 horas. La resina se filtra, el disolvente se evapora aparte y el residuo se disuelve en agua y acetato de etilo. La fase acuosa se separa y se congela en seco. El producto en bruto se purifica mediante HPLC preparativa (columna Vydac 218TP, C18, 250 x 50 mm, flujo 60 ml/min., gradiente de CH_{3}CN del 10% al 70%/TFA al 0,1% en 120 minutos, detector UV a 240 nm, recogida de 55 a 75 minutos) proporcionando de esta manera intermedio (11') que se seca por congelación como un sólido blanco. Rendimiento: 46%. Pureza de HPLC: 98% (B al 20%, 3%/min.; Rt = 7,68).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 1,4 (s, 9H), 1,8-1,45 (m, 6H), 1,95-1,85 (m, 2H), 2,81 (m, 6H), 3,08 (s, 9H), 3,70-3,18 (m, 7H), 4,01-3,56 (5H, m), 4,57-4,45 (m, 1H), 5,59 (s, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,90-7,43 (m, 4H), 8,02 (d, 1H), 8,85 (s, 1H). ESI(+) EM: m/z 863,2 [M+H]^{+}.

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Diclorhidrato de cloruro de (4-(S)-amino-5-(4{4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino]tetrahidropirano-4-carbonilpiperazin-1-il)-5-oxo-pentil]trimetilamonio

Se añaden 0,45 mmoles de (11') con 10 ml de HCl/dioxano 4 M. La mezcla se mantiene bajo agitación durante 6 horas, el disolvente se evapora y el residuo se seca por congelación, obteniendo de este modo el compuesto final como un sólido blanco. Rendimiento: 87%. Pureza de HPLC: 98% (B al 20%, 3%/min.; Rt = 5,14).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 1,95-1,60 (m, 8H), 2,81 (m, 6H), 3,08 (s, 9H), 3,70-3,18 (m, 12H), 4,57-4,45 (m, 1H), 5,59 (s, 2H), 7,90-7,60 (m, 4H), 8,02 (d, 1H), 8,5 (s, 3H), 8,85 (s, 1H).

ESI(+)EM: m/z 763,1 [M+H]^{+}.

Ejemplo 2 Clorhidrato de cloruro de (4-(S)-amino-5-(4-(4-(2,4-dicloro-3-(2-metil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino)tetrahidropirano-4-carbonil)-piperazin-1-il-)5-oxo-pentil)-trimetilamonio

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta: 8,90 (1H, s), 8,47-8,34 (4H, m), 8,02 (1H, d), 7,81 (1H, d), 7,73-7,37 (4H, m), 5,62 (2H, s), 4,57-4,45 (1H, m), 4,01-3,56 (5H, m), 3,43-3,18 (7H, m), 3,06 (9H, s), 2,78-2,61 (4H, m), 2,89 (1H, s), 1,97-1,60 (9H, m). HPLC: tR = 9,26 min. EM: [M]^{+} 749.

Ejemplo 3 Trifluoroacetato de [5-(4-{4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-benceno-sulfonilamino]tetrahidropirano-4-carbonil}piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]-trimetilamonio

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta (ppm): 1,53 (s, 2H, m); 1,69 (m, 4H); 1,90 (m, 2H); 2,45 (t, 2 H); 2,78 (m, 6H); 3,04 (9H, s); 3,23-3,57 (7H, m); 5,68 (2H, s); 7,38-8,18 (5H, m), 8,04 (1H, d, J = 8,42 Hz); 8,82 (1H, s). HPLC: t_{R} = 5,65 min. EM: [M]^{+} 7,48.

Ejemplo 4 Diclorhidrato de cloruro de [4-(S)-amino-5-(4-{1-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino]ciclopentanocarbonil}piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]-trimetilamonio

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta: 8,90 (1H, s), 8,48 (3H, s), 8,02 (1H, d), 7,95-7,63 (3H, m), 5,59 (2H, s), 4,57-4,45 (1H, m), 3,97-3,24 (10H, m), 3,08 (9H, s), 2,95-2,61 (5H, m), 1,97-1,72 (8H, m), 1,42 (4H, s); HPLC: t_{R} = 5,88 min. EM: [M]^{+} 747,2.

Actividad Biológica

La evaluación de la afinidad del receptor B2 de los compuestos de la presente invención se llevó a cabo con estudios de unión al receptor B2 humano expresado en células CHO, siguiendo el procedimiento descrito por Bellucci y col., Br. J. Pharmacol. 203, 140: 500-506; los valores de unión se comunican expresados como pKi.

Se evaluó la actividad antagonista (expresada como pA2) como la inhibición de la producción inducida por bradiquinina de inositoles en células CHO transfectadas con receptor B2 humano, de acuerdo con el procedimiento descrito en Bellucci y col., Br. J. Pharmacol. 2003, 140: 500-506.

La actividad in vivo de los compuestos de la presente invención se evaluó como efectividad en inhibir broncoespasmo en el conejillo de Indias (Tramontana y col., J. Pharmacol. Exp. Therap., 296: 1051-1057, 2001), midiendo la dosis de it (it: administración intracraneal) (en nmoles/kg) que inhibe en un 80% la constricción bronquial durante al menos 210 minutos.

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Los compuestos preferidos de la presente invención se compararon con aquellos más estructuralmente similares descritos en el documento WO03103671. Se ha encontrado sorprendentemente que los compuestos de la invención tienen actividades in vivo e in vitro mayores que los análogos estructuralmente relacionados del documento WO03103671. Tanto la prueba de actividad antagonista en células transfectadas con el receptor humano como la prueba in vivo son altamente predictivas de la dosis esperada para aplicaciones terapéuticas en seres humanos.

Abreviaturas

it = administración intracraneal; iv = administración intravenosa; eq = equivalente; DCM = diclorometano; MeOH = metanol; THF = tetrahidrofurano; DMSO = dimetilsulfóxido; DMF = dimetilformamida; AcOEt = acetato de etilo; AcOH = ácido acético; TFA = ácido trifluoroacético; NBS = N\alpha-bromosuccinimida; bpo = peróxido de benzoílo; Boc = terc-butoxicarbonilo; HOBt = 1-hidroxi-benzotriazol; EDC = 1-etil-3-(3'-dimetilpropil)carbodiimida; DIPEA = diisopropiletilamina; HPLC = cromatografía líquida de alta presión; TLC = cromatografía en capa fina; RMN = resonancia magnética nuclear; ESI = ionización de pulverización de electrones; EM = espectrometría de masas; FCC = Cromatografía en Columna Ultrarrápida; Rt = tiempo de retención.

Claims

1. Los compuestos de la fórmula general (I):

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en la que:

-: R es hidrógeno o metilo;

-: W es un enlace simple o un átomo de oxígeno;

-: n = 3;

-: X es hidrógeno o un grupo amino -NR_{1}R_{2} en el que R_{1} y R_{2} pueden ser independientemente hidrógeno o un grupo seleccionado de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo;

las sales, enantiómeros y mezclas enantiómeras de los mismos farmacéuticamente aceptables.

2. Sales de los compuestos de fórmula general (I) con ácidos inorgánicos u orgánicos seleccionados de ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, oxálico, málico, maleico, succínico, malónico, aspártico, glutámico.

3. Compuestos como se reivindican en la reivindicación 1 ó 2, en los que:

W es un enlace simple;

n = 3;

X se selecciona de hidrógeno o un grupo -NH_{2};

Y es un grupo de amonio cuaternario -N(CH_{3})_{3}^{+};

siendo los otros sustituyentes como se definen en la reivindicación 1.

4. Compuestos como se reivindican en la reivindicación 1 ó 2, en los que:

R se selecciona de hidrógeno o metilo;

W es un átomo de oxígeno;

n = 3;

X se selecciona de hidrógeno o un grupo -NH_{2};

Y es un grupo amonio cuaternario -N(CH_{3})_{3}^{+};

siendo los otros sustituyentes como se definen en la reivindicación 1.

5. Los siguientes compuestos como se reivindican en la reivindicación 3:

diclorhidrato de cloruro de [4-(S)-amino-5-(4-{1-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)bencenosulfonilamino]-ciclopentanocarbonilo}piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]trimetilamonio.

6. Los siguientes compuestos como se reivindican en la reivindicación 4:

\bullet diclorhidrato de cloruro de (4-(S)-amino-5-(4-{4-[2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloxi-metil)bencenosulfonilamino]tetrahidropirano-4-carbonil}-piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]trimetil-amonio;

\bullet clorhidrato de cloruro de (4-(S)-amino-5-(4-(4-(2,4-dicloro-3-(2-metil-quinolin-8-iloxi-metil)-bencenosulfonilamino)-tetrahidropirano-4-carbonil)-piperazin-1-il-)5-oxo-pentil)-trimetil-amonio;

\bullet trifluoroacetato de [5-(4-{4-(2,4-dicloro-3-(2,4-dimetil-quinolin-8-iloximetil)-bencenosulfonilamino]tetrahidropirano-4-carbonil}-piperazin-1-il)-5-oxo-pentil]trimetilamonio.

7. Las composiciones farmacéuticas que contienen como el ingrediente activo un compuesto como se reivindica en las reivindicaciones 1 a 6 conjuntamente con excipientes farmacéuticamente aceptables.

8. El uso de un compuesto como se reivindica en las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de todas las afecciones en las que está implicada la activación de receptores B2 de bradiquinina.

9. El uso de un compuesto como se reivindica en la reivindicación 8 para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de afecciones inflamatorias, alérgicas y autoinmunes.

10. El uso de un compuesto como se reivindica en la reivindicación 8 para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de asma y bronquitis crónica, rinitis alérgica, vasomotora y viral, enfermedad pulmonar obstructiva (COPD), artritis reumatoide, enfermedades inflamatorias crónicas del intestino (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), glomerulonefritis, soriasis, sarpullido, cistitis aguda y crónica, cirrosis hepática, glomerulopatías y fibrosis pulmonares, aterosclerosis; dolor tanto agudo como crónico, choques sépticos, alérgicos y postraumáticos, síndrome hepatorrenal por cirrosis hepática, hipotensión, alopecia, cáncer y enfermedades antiangiogénicas.