ES2296643T3 - Dispositivos para separacion de virus. - Google Patents
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Abstract
Un dispositivo para dirigir la separación, con flujo alto, de un virus a partir de una solución que contiene proteínas, comprendiendo el dispositivo: una carcasa (12) que tiene una entrada (20) para recibir la solución que se va a filtrar y una salida (22) para separar el filtrado, y que contiene tres membranas asimétricas (14, 16, 18) apiladas en la parte superior de cada una de las otras, en la que dichas membranas asimétricas (14, 16, 18) están, cada una de ellas, liofilizadas y cada una de ellas tiene una cara compacta y una cara abierta, siendo el tamaño medio de poro de dicha cara compacta más pequeña que el tamaño medio de poro de dicha cara abierta, dichas membranas asimétricas (14, 16, 18) están orientadas con sus caras compactas aguas abajo (TSDS), el flujo es superior a 0, 29 lmh/kPa, y dichas membranas asimétricas tiene un MPA en IPA de al menos 613, 63 kPa.
Description
Dispositivos para separación de virus.
Durante algún tiempo se ha practicado la
separación de los virus de una corriente líquida, en particular de
las corrientes de procedimiento en la biotecnología y en la
industria farmacéutica. Un alto aclaramiento viral, un alto flujo
del producto, el paso completo de las proteínas y la simplicidad de
la operación son los objetivos del operario, sin embargo la técnica
anterior no proporciona una solución que satisfaga la totalidad de
estos objetivos. Ya que se necesita siempre un alto aclaramiento
viral, es el otro de los objetivos del procedimiento que se ha
visto afectado. Satisfacer estos otros objetivos disminuiría
sustancialmente el coste del tratamiento.
Para el aclaramiento viral, la técnica anterior
proporciona varios tipos de membranas y modos de filtración. Para
una discusión general en lo que se refiere al estado de la técnica
anterior, véase el capítulo 20 de Filtration in the
Biopharmaceutical Industry (Filtración en la industria
biofarmacéutica), Marcel Dekker, Inc. (1988). El capítulo 20 se
titula "Filtration and the Removal of Viruses from
Biopharmaceuticals" (Filtración y la separación de virus de los
productos biofarmacéuticos).
Uno de los productos discutidos en "Filtration
and the Removal of Viruses from Biopharmaceuticals" era línea de
productos Viresolve^{TM} producida por Millipore Corporation. Este
es un sistema que usa una membrana de filtración de material
compuesto en una orientación que tiene la cara compacta hacia la
entrada de la corriente de alimentación (aguas arriba) (TSUS) (del
inglés; tight side up-stream) en un dispositivo de
filtración de flujo tangencial (FFT).
La Patente de EE.UU. número 5.017.292 describe
la tecnología usada para producir el producto Viresolve. Proporciona
una membrana de material compuesto que comprende un sustrato poroso
de la membrana, una cara compacta (la superficie que tiene los
poros con los diámetros más pequeños) que tiene propiedades de
separación por ultrafiltración y una zona porosa intermedia entre
el sustrato y la piel, zona intermedia que tiene un tamaño medio de
poro más pequeño que el del sustrato. La zona intermedia está
exenta de macroespacios vacíos que puedan romper la piel. El
material compuesto de la membrana es capaz de conseguir, de forma
selectiva, un valor logarítmico de reducción (VLR) de al menos 3
(separación del 99,9%) de partículas de virus (colectivamente
"virus") a partir de la solución. Una limitación de este
sistema es que para conseguir un flujo adecuado de la solución de
proteínas, se necesita un sistema complejo de bombeo que opere
eficazmente en un modo FFT. Esta complejidad necesaria da como
resultado un sustancial coste de la filtración.
Aunque, a partir de varios fabricantes, se puede
disponer de más aplicaciones convencionales de separación de virus,
no pueden conseguir todos los objetivos anteriormente expuestos. De
hecho, utilizan o bien membranas convencionales de ultrafiltración
con una orientación TSUS de su única capa, en un dispositivo de FFT,
o un dispositivo FFT de ultrafiltración con fibras huecas. De forma
similar, carecen de la simplicidad de uso y dan como resultado un
alto coste de filtración.
Los dispositivos de filtración de flujo normal
(FFN), conocidos también como dispositivos de filtración terminal,
se pueden conseguir actualmente para usarlos en la separación de
virus de las corrientes del proceso. De hecho, Pall Corp. of East
Hills, Nueva York, fabrica una membrana terminal para la separación
de virus, con la marca Ultipore® DV50 (de ahora en adelante el
"DV50") y la marca DV20 (de ahora en adelante el
"DV20").
El DV50 consta de tres capas de una membrana
porosa de poli(fluoruro de vinidileno) ("PVDF"), sin
piel, e isótropa. Mientras que este producto tiene las capacidades
deseadas de separación de virus y la simplicidad de uso para
grandes separaciones de virus, la estructura isótropa de las
membranas empleadas limita su permeabilidad. Una baja permeabilidad
(permeabilidad al agua de 0,29 lmh/kPa) aumenta los costes de la
filtración. Este producto tampoco satisface todos los objetivos
expuestos anteriormente.
El DV20 es un producto similar, pero diseñado
para la separación de virus pequeños. Tiene una permeabilidad de
0,087 lmh/kPa con la IgG.
La patente de EE.UU. número 5.736.051 describe
una membrana de PVDF y un método para separar virus de soluciones.
Más concretamente, proporciona una membrana porosa de PVDF, sin
piel, e isótropa. Se cree que esta es la membrana usada en DV50 y
DV20.
La Patente de EE.UU. número 5.788.862 describe
una membrana de ultrafiltración soportada con una piel recubierta.
En esta patente, se describe que la membrana se ha usado en una
configuración de 2 capas, en el modo FFN, con una piel recubierta
para filtrar virus de corrientes de proteínas. Aunque se
consiguieron niveles satisfactorios de separación de virus, el paso
de las proteínas y el flujo fueron muy bajos: el flujo máximo
descrito para la IgG fue de 0,087 lmh/kPa y el paso máximo de IgG
fue únicamente del 84%.
Además de proporcionar la técnica anterior
membranas multicapas para la separación de virus, la técnica
anterior proporciona también membranas multicapas con al menos una
membrana que está orientada TSDS (del inglés; tight side
down-stream), (aguas abajo; con la cara compacta
hacia la corriente que sale. La Patente de EE.UU. número 4.261.834
proporciona dos membranas de ultrafiltración anisótropas puestas en
serie con al menos una membrana yuxtapuesta con al menos otra
membrana, de forma que, sustancialmente, la totalidad de la
superficie de la piel de una membrana está en íntimo contacto con,
sustancialmente, la totalidad de la superficie de la otra membrana.
Esta invención, sin embargo, estaba dirigida para enmascarar
defectos de poros en las membranas de ultrafiltración usadas para
separar proteínas (pirogenes) de las corrientes acuosas en un
sistema de filtración de flujo tangencial (FFT).
El documento
EP-A-0083489 describe un sistema de
membranas, útil para filtrar un fluido, como por ejemplo un
líquido, que contiene partículas tales como bacterias, para que sean
separadas del fluido. El sistema de membranas comprende al menos
dos membranas seleccionadas del grupo consistente en al menos un
prefiltro y al menos una membrana simétrica porosa. La membrana
asimétrica tiene una piel o lado brillante y un soporte o lado sin
brillo. Las membranas están dispuestas en paralelo a, y en íntimo
contacto con, cada una de las otras, de forma que el fluido pasa a
través de cada membrana. La referencia describe un punto de burbujeo
de 379,21 kPa para una única capa y de 482,63 kPa para un sistema
de membranas de doble capa.
El documento
US-A-5017292 describe una membrana
asimétrica y un procedimiento para aislar virus de una solución de
proteínas. La membrana es una membrana de material compuesto que
tiene un sustrato poroso, una piel superficial que tiene
propiedades de ultrafiltración, y una zona porosa intermedia entre
la piel y el sustrato. La superficie de la piel, si se requiere,
puede hacerse hidrófila.
Es el objeto de la presente invención
proporcionar un dispositivo para separar virus de un líquido que
proporciona un flujo elevado, tiene una elevada capacidad de
separación de virus y un paso de proteínas sustancialmente
completo.
La presente invención proporciona un dispositivo
para separar virus de un líquido como se definió en la
reivindicación 1, y un método para separar virus de un líquido
usando el dispositivo de la invención.
En las reivindicaciones dependientes se definen
realizaciones preferidas del dispositivo.
La presente invención proporciona una membrana
adecuada para usarla en un dispositivo multicapas de separación de
virus, comprendiendo la membrana una cara compacta, un soporte
poroso, y un intervalo de tamaño de poro adecuado para la
ultrafiltración, membrana que además se caracteriza por tener una
estructura asimétrica sustancialmente exenta de macrohuecos (exenta
de huecos) y por tener superficies que si se exponen a una solución
cargada de proteínas, exhiben una baja unión con las proteínas.
La presente invención proporciona un dispositivo
para la separación de virus que comprende material de filtración y
que se caracteriza por tener un V_{máx} superior a 10 ml/cm^{2}
y un VLR >6 y un paso de proteínas >98%, cuando se pone a
prueba con una suspensión de al menos 10 ufp/ml de bacteriófagos
\phi6 (tamaño 78 nm) e IgG monoclonal a una concentración de 2,5
mg/ml hasta volúmenes de 50 ml/cm^{2} del filtro sometido a
ensayo. Preferiblemente, el V_{máx} es de al menos 18
ml/cm^{2}.
La presente invención proporciona un
procedimiento para producir una membrana polimérica de
ultrafiltración adecuada para la separación de virus, comprendiendo
el procedimiento disolver un material polimérico en un disolvente
adecuado, filtrar y desgasificar la solución de colada, calentar la
solución de colada hasta su punto de enturbiamiento, colar la
solución sobre una cinta que pasa sobre un tambor de colada
sumergido en agua, teniendo la solución un corto tiempo de
residencia sobre el tambor; usar una cuchilla para establecer el
espesor de la colada, exponer la película colada a aire seco,
sumergir la película colada en el baño de agua, extraer la membrana
del agua del baño, e hidrofilizar la membrana en una solución de
monómeros.
La Figura 1 proporciona una imagen, obtenida
mediante SEM, de una capa como la descrita en el Ejemplo 1. Esta
capa es representativa de una membrana de ultrafiltración de alta
integridad.
La Figura 2 proporciona un corte transversal de
una carcasa tipo "granada" usada en el dispositivo de la
presente invención.
La Figura 3 proporciona un gráfico que ilustra
el comportamiento y el aclaramiento proteínico de un dispositivo
para la separación de virus, de una sola capa o de doble capa, con
membrana de material compuesto como el material de filtración.
Hay una clara necesidad de materiales y de
dispositivos de filtración que separen virus en altos valores
logarítmicos de reducción (VLR), que tengan un paso esencialmente
completo del producto proteínico y que operen en flujo alto.
Además, hay una necesidad de que estos materiales y dispositivos
sean fáciles de operar, preferiblemente en un modo FFN.
A no ser que se defina de otra forma, los
términos usados es esta solicitud se van a interpretar de acuerdo
con la publicación titulada "Terminology for membranes and
membrane processes" (Terminología de las membranas y de los
procedimientos con membranas) preparada bajo los auspicios de la
INTERNATIONBAL UNION OF PURE AND APPLIED CHEMISTRY (IUPAC) (Unión
Internacional de la Química Pura y Aplicada) y que se encuentra
en
http://www.che.uteax.edu/nams/IUPAC/iupac.html.
El medio de filtración de la presente invención
se puede usar en filtros adecuados, cartuchos de filtración, y
similares. Por supuesto, en vista de la excelente eficacia de la
separación del medio de filtración de la presente invención, así
como de su baja susceptibilidad a la absorción de proteínas, el
medio de filtración de la presente invención se puede usar en
aplicaciones de filtración terminal, así como en flujo transversal,
tangencial, y aplicaciones de filtración dinámica.
A efectos de esta invención, una "membrana de
ultrafiltración de alta integridad" es una membrana asimétrica
de ultrafiltración sustancialmente exenta de macrohuecos y que
consigue un punto de burbujeo mínimo en rampa automatizada (APB) de
599,84 kPa cuando se prueba en una orientación TSDS.
En una realización preferida, la proteína se une
mínimamente a las superficies del material de filtración de la
presente invención.
A efectos de esta invención, una "capa
pre-filtro" significa cualquier material usado
para filtrar materia procedente de la corriente de interés con el
objetivo de aumentar el rendimiento total del dispositivo de
filtración. Una capa semejante de pre-filtro
típicamente tendrá una retención viral más baja que la capa aguas
arriba del material multicapa de ultrafiltración de la presente
invención.
A efectos de esta invención, un "material de
filtración de membranas multicapas" incluye membranas con una
distancia mínima entre ellas, e incluye membranas con una distancia
entre ellas que se puede medir, incluyendo la carcasa por separado.
La realización preferida de la presente invención es aquella en que
las capas de la membrana multicapas están apiladas unas sobre otras
y contenidas en la misma carcasa.
Se espera que el medio de filtración de la
presente invención sea especialmente útil en elementos filtrantes,
tales como cartuchos de filtración, que son conocidos por los
expertos normales en la técnica. Los elementos filtrantes
preferidos que utilizan el medio de filtración de la presente
invención comprenden el medio de filtración de la presente
invención en forma de láminas, en las que las capas de las membranas
están apiladas unas sobre otras y están unidas por dentro de la
carcasa con un cierre termoplástico hermético, como por ejemplo los
cartuchos de filtración Millex^{TM} vendidos por Millipore
Corporation.
La presente invención se usa preferiblemente en
forma de láminas planas, pero es adecuada para usarla en forma
ondulada (plegada) en un elemento filtrante, de forma que
proporcione una gran superficie específica de membrana para el
volumen del elemento filtrante. En este formato, una carcasa de tipo
cápsula, como la carcasa actualmente usada con el filtro
Opticap^{TM} vendido por Millipore Corporation. El elemento
filtrante puede comprender un único medio de filtración o puede
comprender múltiples medios de filtración adheridos conjuntamente.
Los otros aspectos del elemento filtrante pueden estar en cualquier
construcción adecuada y se pueden preparar a partir de cualquier
material adecuado. El elemento filtrante se puede construir usando
técnicas que son bien conocidas.
En una realización preferida de la presente
invención, las capas del material de filtración son sustancialmente
similares. Preferiblemente, las membranas están compuestas de
poliétersulfona o celulosa regenerada. Otra realización preferida
es cuando el material de filtración es una membrana de material
compuesto. Los expertos normales en la técnica pueden seleccionar
otros materiales que son adecuados para seleccionar o producir el
material de filtración de la presente invención.
En una realización preferida, la capa aguas
arriba del material de filtración es una membrana de ultrafiltración
de alta integridad. Preferiblemente, todas las capas de la membrana
del material de filtración son membranas de ultrafiltración de alta
integridad.
En la presente invención, el dispositivo tiene
un material de filtración que incluye tres capas y las capas están
orientadas TSDS.
En una realización preferida, el dispositivo de
la presente invención tiene una carcasa adecuada para la recepción
del líquido procedente de una jeringa.
En otra realización preferida, el dispositivo de
la presente invención está adaptado para la filtración terminal.
Preferiblemente, la carcasa de este dispositivo es una cápsula. En
otra realización de la presente invención, la carcasa está adaptada
para recibir el material de filtración en forma de disco y para que
pueda volver a usarse.
Los siguientes ejemplos ilustran más la presente
invención.
\newpage
Ejemplo
1
El siguiente ejemplo se ocupa de una membrana
polimérica de ultrafiltración, adecuada para el material multicapas
de la presente invención para separar virus. Es un ejemplo de
membrana de ultrafiltración de alta integridad.
Si elaboró una membrana de ultrafiltración
disolviendo 17-22%, en peso, de Radel A 200, una
poliétersulfona fabricada por Amoco Chemicals de Alpharetta, GA, en
una mezcla de trietilenglicol ("TEG") y
N-metilpirrolidona ("NMP") en una relación de
TEG/NMP de 1,8, luego la solución se filtró y se desgasificó. Hay
que indicar que el punto de enturbiamiento de la solución esperado
al calentar, tiene lugar a 50ºC. Luego, se coló la solución sobre
una cinta Mylar de 0,0381 mm de espesor que pasa sobre un tambor de
colada sumergido en agua mantenida a 57ºC, usando una cuchilla para
establecer el espesor de la colada en aproximadamente 200 \mum,
con únicamente aproximadamente 12,7 mm de película colada expuesta
al aire seco antes del momento de su inmersión en el baño de agua.
La velocidad de colada fue de 4,572 a 9,144 m/minuto.
La membrana formada se extrae haciéndola pasar a
través de baños de agua adicionales y se seca usando un secador de
choque con la temperatura del aire controlada a aproximadamente
70ºC. Se hidrofiliza luego la membrana haciéndola pasar a través
una solución de Sartomer 9035. El procedimiento de hidrofilización
seguido fue el descrito por la Patente de EE.UU. número
4.618.533.
El Sartomer 9035 es un triacrilato alcoxilado,
soluble en agua, fabricado por Sartomer Chemical Co. de West
Chester, PA. La solución de monómeros incluye el monómero disuelto
en una mezcla de Igracure 2959, acetona, hexilenglicol
(4-metil-2,4-pentanodiol,
MPD) y agua, en los siguientes % en peso: [3,0/0,25/2,0/25,0/69,75],
respectivamente. El Igracure 2959 es la
4-(2-hidroxietoxi)fenil-(2-hidroxi-2-propil)-cetona
y se puede conseguir de Ciba Additives de Tarrytown, NY.
La solución de monómeros moja completamente la
membrana, la cual se expone luego a radiación UV con el fin de
polimerizar y reticular un revestimiento hidrófilo sobre las
superficies de la membrana. Después de una extracción adicional en
agua y del secado, se recupera una membrana de ultrafiltración que,
normalmente, exhibe una permeabilidad al agua de
7,253-29,011 lmh/kPa cuando se somete a prueba en
una capa.
La membrana, preferiblemente, tenía un punto de
burbujeo mínimo en rampa automatizada (AMP), en alcohol isopropílico
(IPA), superior a 613,63 kPa cuando se sometió a prueba en una
orientación TSDS con un porómetro fabricado por PMI de Ithaca, NY.
Para el método de ensayo ABP, el punto de ebullición (p.e.) se
registra al darse una transición repentina entre las burbujas
"aleatorias, difusión" de bajo nivel que tiene lugar por
debajo de p.e. y un estallido de burbujas que tiene lugar en el p.e.
Esta transición era muy clara en la presente invención.
La Figura 1 proporciona una imagen de esta
membrana obtenida mediante SEM. Muestra una membrana de
ultrafiltración de cara compacta que es una membrana de
ultrafiltración de alta integridad, como se definió anteriormente.
Se va a usar al menos como la capa aguas arriba, pero desde luego,
es preferible usar esta membrana en todas las capas del material de
filtración de la presente invención. Para la separación de virus
según la presente invención, la capa aguas arriba está en la
orientación TSDS, con la(s) siguiente(s)
capa(s) que está(n) en la orientación TSDS. La configuración
de la membrana incluye 3 capas (TSDS/TSDS/TSDS), o más capas en
similares disposiciones, donde la nomenclatura entre paréntesis se
refiere a la orientación de las capas individuales con la capa
aguas arriba citada en primer lugar.
Como ejemplo, se mostró una configuración de 3
capas (TSDS/TSDS/TSDS) de una membrana preparada según se describió
anteriormente para retener completamente los virus, como se
demuestra por la separación absoluta de bacteriófagos \phi6
(tamaño 78 nm) cuando se pone a prueba con una suspensión de al
menos 10 ufp/ml a volúmenes de 50 ml/cm^{2} del filtro sometido a
prueba. No hubo virus detectados aguas abajo del filtro de 3 capas,
tanto únicamente en la solución tampón como en presencia de IgG
monoclonal en una concentración de 2,5 mg/ml. El paso de IgG fue
>98%. El flujo medio de tratamiento en presencia de IgG era de
aproximadamente 2,9 lmh/kPa, promediado sobre el volumen total
filtrado (\sim20 ml/cm^{2}).
Las capas estaban en forma de disco de 47 mm y
se apilaron en una carcasa representada por la Figura 2. No es
necesario pegar ni unir las capas de la presente invención. La
periferia del material de filtración se debe afianzar, no obstante,
para asegurarse de que el fluido fluya únicamente a través de la
membrana. La carcasa 12 contenía la capa 14 aguas arriba, la capa
16 intermedia y la tercera capa o capa 18 aguas abajo. Para
asegurar el fluido que fluye en la entrada 20, a través de las
membranas y a través de la salida 22, se emplearon en la carcasa
dos juntas tóricas 24 y 26.
Este ejemplo representa una gran separación de
virus mediante la presente invención, y demuestra que la separación
sustancial de grandes virus es posible con un alto flujo de
tratamiento con sustancial paso de proteínas relativamente grande,
tales como la IgG. Un producto semejante que se puede conseguir en
el mercado, el DV50, consigue un bajo flujo, únicamente 0,29
lmh/kPa, bajo condiciones similares. La presente invención está
dirigida a la separación de grandes virus con altos flujos en el
procedimiento, o sea, >0,725 lmh/kPa. Preferiblemente, el flujo
del procedimiento es >1,45 lmh/kPa. Más preferiblemente, el flujo
del procedimiento es >2,901 lmh/kPa.
\newpage
Ejemplo
2
La membrana descrita en el Ejemplo 1 se fabricó
en forma de cartuchos plegados. Se demostró que la completa
separación de virus \phi6 cuando se puso a prueba un cartucho
plegado hecho con tres capas (orientación TSDS/TSDS/
TSDS) de la membrana preparada como se describió en el ejemplo anterior, con una suspensión de virus de aproximadamente 10^{7} ufp/ml. Los cartuchos tenían, cada uno, una superficie específica eficaz de 4.900 cm^{2} y se usaron 4 litros de suspensión de virus como solución de prueba. No se detectaron virus en la corriente de salida de los tres cartuchos que se sometieron a prueba. El flujo medio del procedimiento era de aproximadamente 2,61 lmh/kPa, en sustancial concordancia con el flujo observado en la membrana plana de prueba.
TSDS) de la membrana preparada como se describió en el ejemplo anterior, con una suspensión de virus de aproximadamente 10^{7} ufp/ml. Los cartuchos tenían, cada uno, una superficie específica eficaz de 4.900 cm^{2} y se usaron 4 litros de suspensión de virus como solución de prueba. No se detectaron virus en la corriente de salida de los tres cartuchos que se sometieron a prueba. El flujo medio del procedimiento era de aproximadamente 2,61 lmh/kPa, en sustancial concordancia con el flujo observado en la membrana plana de prueba.
Ejemplo
3
Se usó una membrana de material compuesto, de
celulosa regenerada, (vendida como la membrana Ultracell^{TM} por
Millipore Corporation y que se encuentra catalogada como Nº PLCXK),
clasificada como de 300 kDa de peso molecular nominal, en un ensayo
de retención de virus en 1, 2 y 3 capas con orientaciones TSDS,
TSDS/TSDS, y TSDS/TSDS/TSDS, respectivamente. Se usaron
bacteriófagos modelo (tamaño 28 nm) \phiX174 en una solución
tampón de Sorensen con un nivel de prueba de aproximadamente
10^{7} ufp/ml. La filtración se hizo a 68,947 kPa y se recogieron
250 ml de filtrado de cada soporte de 47 mm (véase la Figura 2). Se
midió el flujo y el VLR. El flujo era solo ligeramente inferior a
los valores de flujo de agua estimados a partir de la permeabilidad
al agua conocida para esta membrana. La Tabla 1 proporciona los
resultados de probar la membrana de celulosa regenerada con un
número de capas.
Ejemplo
4
Se ajustó una solución de 25 mg/ml de
anticuerpos monoclonales (MAb, masa molar aproximada 160 kDa) en
solución tampón Tris-HCl, con bacteriófagos modelo
(tamaño 28 nm) \phiX174 en un nivel de prueba de aproximadamente
10^{7} ufp/ml. La solución se filtró a 206,84 kPa a través de
discos de 47 mm de membrana de material compuesto para
ultrafiltración, fabricados según la Patente de EE.UU. número
5.017.292, y comercializados con la marca comercial
Viresolve^{TM} por Millipore Corporation. Se hizo una comparación
de forma paralela. Un soporte contenía 1 capa de membrana en
orientación TSDS; otro soporte contenía 2 capas de membrana en
orientación TSDS/TSDS. Durante la filtración se midieron varias
veces el volumen de filtrado, el tiempo, la concentración de virus
y anticuerpos monoclonales en el filtrado. Se calculó el flujo, el
VLR del virus y el paso de Mab. La Figura 3 muestra los valores
resultantes del flujo y el VLR del virus. El paso de MAb (no
mostrado en la Figura 3) era >98% para todos los valores medidos
en puntos correspondientes a ellos en la Figura 3.
Este ejemplo representa la separación de
pequeños virus mediante la presente invención, y demuestra
sustancialmente que es posible la separación de pequeños virus con
un alto flujo de tratamiento, con sustancial paso de proteínas
relativamente grandes, tales como la IgG. Un producto comparable,
que se puede conseguir en el mercado, el DV20, consigue un flujo
bajo, únicamente 0,087 lmh/kPa, bajo condiciones similares. La
presente invención está dirigida a la separación de pequeños virus
con altos flujos en el procedimiento, es decir 0,25 lmh/kPa.
Preferiblemente, el flujo del procedimiento es de 0,43 lmh/kPa. Más
preferiblemente, el flujo del procedimiento es de 0,58 lmh/kPa.
Claims (9)
1. Un dispositivo para dirigir la separación,
con flujo alto, de un virus a partir de una solución que contiene
proteínas, comprendiendo el dispositivo:
una carcasa (12) que tiene una entrada (20) para
recibir la solución que se va a filtrar y una salida (22) para
separar el filtrado, y que contiene tres membranas asimétricas (14,
16, 18) apiladas en la parte superior de cada una de las otras, en
la que
dichas membranas asimétricas (14, 16, 18) están,
cada una de ellas, liofilizadas y cada una de ellas tiene una cara
compacta y una cara abierta, siendo el tamaño medio de poro de dicha
cara compacta más pequeña que el tamaño medio de poro de dicha cara
abierta,
dichas membranas asimétricas (14, 16, 18) están
orientadas con sus caras compactas aguas abajo (TSDS),
el flujo es superior a 0,29 lmh/kPa, y
dichas membranas asimétricas tiene un MPA en IPA
de al menos 613,63 kPa.
2. El dispositivo de la reivindicación 1, en el
que dichas membranas asimétricas están plegadas.
3. El dispositivo de la reivindicación 1, en el
que se define que dichas membranas asimétricas tienen un valor
logarítmico de reducción (VLR) superior a 6, y un paso de proteínas
superior al 98% cuando se prueba con una suspensión de al menos 10
ufp/ml de bacteriófagos de tamaño 78 nm e IgG monoclonal a una
concentración de 2,5 mg/ml hasta volúmenes de 50 ml/cm^{2}.
4. El dispositivo de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que la carcasa (12) es adecuada para
la recepción de un líquido procedente de una jeringa.
5. El dispositivo de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, en el que la carcasa es una cápsula.
6. El dispositivo de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que la carcasa (12) está adaptada
para recibir el material de filtración en forma de disco, y se puede
volver a usar.
7. El dispositivo de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que la carcasa está adaptada para
recibir el material de filtración en forma de cartucho, y se puede
volver a usar.
8. Un método para separar virus de una solución
que contiene proteínas, con un flujo alto, comprendiendo dicho
método filtrar la solución que contiene proteínas con el dispositivo
de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
9. El método de la reivindicación 8, en el que
el flujo alto es superior a 0,29 lmh/kPa.
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