ES2295011T3 - Medios en forma de dispersiones complejas, su procedimiento de preparacion y sus usos. - Google Patents
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Abstract
Medio complejo constituido por un primer medio en forma de gotas que contiene una dispersión de una fase liótropa formada por bicapas de tensioactivos, estando dichas gotas en emulsión dentro de un segundo medio llamado fase continua no miscible con el primer medio.
Description
Medio en forma de dispersiones complejas, su
procedimiento de preparación y sus usos.
La presente invención se refiere a nuevos medios
en forma de dispersiones complejas, a su procedimiento de
preparación y a sus usos.
Se han utilizado diversos enfoques para liberar
progresivamente principios activos recurriendo a medios
estructurados. Las emulsiones son los medios estructurados más
sencillos, con compartimentos por ejemplo oleosos, dispersados en
un medio continuo acuoso (emulsión llamada directa o de AC/AG, o por
el contrario, agua en aceite denominada emulsión inversa o AG/AC).
Sin embargo, estos sistemas aunque se utilizan ampliamente no
permiten separar dos medios de la misma naturaleza, como un soluto
hidrófilo que se desearía dispersar en un medio continuo acuoso,
impidiendo su disolución en este medio continuo.
Este inconveniente se ha evitado mediante el uso
de emulsiones múltiples, que consisten en una primera emulsión, por
ejemplo inversa AG_{1}/AC, de gotas de agua en un medio oleoso,
emulsionada a su vez en un medio acuoso AG_{2}. De este modo se
obtiene una emulsión AG_{1}/AC/AG_{2} en la que se separa
teóricamente un soluto del medio acuoso interno AG_{1} del medio
continuo AG_{2} y por lo tanto no se disuelve en este último.
También es posible por supuesto el caso contrario
AC_{1}/AG/AC_{2}. Para una revisión de las emulsiones múltiples
y de su preparación, podemos remitirnos a uno de los siguientes
documentos: S. Matsumoto et al., "Formation and
Application of Multiple Emulsions", J. Dispersion Science and
Technology, 10, 455-482 (1989), o C. Prybilsky
et al., "W/O/W Multiple emulsions: Manufacturing and
Formulation considerations", Cosmetics and Toiletries, 106,
143-150 (1994). Numerosas patentes se refieren a la
preparación y sobre todo a la estabilización de emulsiones
múltiples y sus aplicaciones en cosmética. Se mencionarán, en el
caso de las emulsiones AG/AC/AG: GB 1541463 (LION Dentifrice Co.),
WO 9517155 (Beierdsdorf), WO 9422414 (Henkel), FR 9302795
(Roussel-Uclaf), EP0731685 (IFAC), EP0692957
(Goldschmidt), US 5478561 (Lancaster) y EP 92915365 (Emory Univ.).
Estos documentos representan solamente una muestra de las numerosas
patentes en el campo, que se refieren principalmente a la cosmética
y a la farmacia.
Todos estos documentos presentan procedimientos
convencionales de preparación de emulsiones, partiendo inicialmente
de una fase acuosa emulsionada con ayuda de diversos tensioactivos
en un medio oleoso. Esta primera emulsión se emulsiona a
continuación en un medio continuo acuoso. Los métodos para preparar
la primera emulsión son métodos convencionales, que pueden
clasificarse en tres métodos principales: dispersión mecánica,
inversión de fase y emulsificación espontánea. El documento EP
92915365 (Emory Univ.) describe con precisión estos diferentes
métodos y proporciona varias referencias generales. En principio
todos los métodos utilizan para la emulsión de agua AG_{1} (fase
interna) en aceite un tensioactivo de bajo HLB, típicamente inferior
a 8, en general de tipo no iónico. Por el contrario, la emulsión
del sistema AG_{1}/AC en AG_{2} utiliza un tensioactivo de alto
HLB, que puede ser no iónico o iónico. Se han descrito numerosos
aditivos y su utilización en patentes para intentar estabilizar
estos sistemas complejos. La principal dificultad surge a partir de
la reducida estabilidad de la emulsión AG_{1}/AC y de la
tendencia del tensioactivo utilizado para la segunda emulsión a
desestabilizar la primera emulsión. Entre los aditivos más
utilizados, pueden mencionarse azúcares (véase GB 1541463) y
polímeros, para gelificar por ejemplo la fase acuosa (véase FR
9302795). Además, en la bibliografía se encuentran varios ejemplos
de utilización de tensioactivos de polímeros, que estabilizan
visiblemente las emulsiones múltiples (véase por ejemplo el
documento GB 1541563, que utiliza Pluronic®, US 5478561 que utiliza
ésteres de poliglicerol; o WO 9422414 que utiliza derivados
de
polialquileno).
polialquileno).
En la bibliografía se encuentran numerosos
documentos que describen medios en los que el principio activo se
encuentra encapsulado en vesículas denominadas vesículas lamelares
que comprenden al menos una bicapa de tensioactivos. Estas
vesículas se denominan a menudo vesículas unilamelares,
oligolamelares o multilamelares según comprendan una, un número
limitado o un número importante de bicapas. Los liposomas y los
niosomes® constituyen ejemplos de vesículas lamelares a base de
tensioactivos.
Entre las vesículas multilamelares, se
distinguen las que se denominan a continuación vesículas con
estructura de cebolla, que son vesículas de forma prácticamente
esférica constituidas por una sucesión regular de bicapas
concéntricas, desde el centro a la periferia de las vesículas.
Dichas vesículas se distinguen claramente de los
liposomas multilamelares convencionales por la regularidad del
apilamiento de bicapas de tensioactivos que las constituyen. La
regularidad de este apilamiento resulta del carácter termodinámico
de las vesículas y de su simetría
cristal-líquido.
Estas estructuras pueden demostrarse mediante un
examen microscópico de las composiciones. La observación se realiza
utilizando un microscopio óptico de luz polarizada, en el que es
visible una fase lamelar birrefringente. Ésta se manifiesta
mediante una textura característica, vinculada a la presencia de
defectos (uniones de granos) entre los campos de fase orientados de
forma diferente. En el caso de la fase concentrada de las vesículas,
la textura se caracteriza por su carácter uniforme y fino, unido al
tamaño de las vesículas. En la fase dispersada de las vesículas,
éstas son visibles en forma de puntos con mayor o menor resolución
(en función del tamaño), ligeramente birrefringentes. La
birrefringencia solamente se observa cuando la dispersión no está
demasiado diluida o cuando las vesículas son lo suficientemente
grandes (típicamente de un diámetro superior a 5 \mum). Esto
ocurrirá por lo tanto, si la dispersión se diluye relativamente
antes de realizar una operación previa de concentración para
demostrar claramente la birrefringencia característica de la
presencia de estas vesículas.
Dichas vesículas pueden obtenerse mediante
transformación de una fase de cristal-líquido
lamelar que incorpora al menos un agente tensioactivo bajo el
efecto de cizalladura. Los ejemplos de preparación y utilización de
dichas vesículas multilamelares, se proporcionan en particular en
las solicitudes internacionales WO 93/19735, WO 95/18601, WO
95/19707, WO 97/00623 y WO 98/02144.
Las vesículas multilamelares de tensioactivos,
en particular las vesículas con estructura de cebolla, son sistemas
que pueden encapsular o incorporar a los principios activos, creando
un medio interno, diferente del medio externo, en el que se
retienen los principios activos. La retención del principio activo
en el interior de la vesícula tiene dos puntos de origen:
\ding{51} Termodinámico: la diferencia de
afinidad entre el principio activo y el medio externo y el medio
interno conlleva su distribución entre los dos medios. Debido a
esto, en el ejemplo de una dispersión acuosa de las vesículas, un
principio activo anfífilo se situará preferiblemente en las
vesículas, mientras que un principio activo muy hidrófilo se
situará sobre todo en el medio externo y se encapsulará por lo tanto
muy poco.
\ding{51} Cinético: cada membrana a base de
tensioactivos forma una barrera de difusión que ralentiza el paso y
por lo tanto la fuga hacia el exterior del principio activo. Este
mecanismo es mucho más eficaz cuando el principio activo es una
molécula grande, cuyo coeficiente de difusión será bajo.
Se destaca por lo tanto la demostración de que
una pequeña molécula muy hidrófila no se encapsulará o se
encapsulará muy poco en las vesículas, ya que su afinidad le hará
preferir el medio externo (siempre en la hipótesis de una
dispersión de las vesículas en un medio acuoso) y que las barreras
formadas por las bicapas de tensioactivo serán muy poco eficaces
para retenerla. Por molécula pequeña o grande, se entiende una
molécula cuya masa molar es respectivamente inferior o superior a
500 o 1000 g/mol. El mismo razonamiento es válido para la
encapsulación de una molécula muy lipófila, cuando las vesículas se
dispersan en un medio oleoso.
De la misma manera, y de forma aún más marcada,
los mismos mecanismos se emplean durante la encapsulación de
moléculas en liposomas convencionales, que son vesículas formadas
por una pequeña cantidad de bicapas que rodean a uno (o a varios)
núcleos acuosos. En este caso, por un lado el medio del núcleo
acuoso tiene gran similitud con el medio externo, y por lo tanto la
diferencia de afinidad del principio activo encapsulado será muy
baja y por otro lado la reducida cantidad de membranas implica una
barrera global de difusión mucho menos eficaz.
Por lo tanto existe una necesidad técnica de
mejorar los sistemas de encapsulación basados en membranas de
tensioactivos, para otorgarles en particular una mejor estanqueidad.
En efecto, existe un pequeño margen de libertad de regulación
posible en el parámetro termodinámico, cuando éste no es una
elección particular de los tensioactivos. Sin embargo, cuando un
producto es soluble en agua, la modificación del tensioactivo no
puede otorgar casi ninguna mejora sobre su coeficiente de
distribución entre el agua de la fase externa y el interior de la
vesícula. Además, el medio externo a menudo es un medio complejo que
a su vez comprende tensioactivos (es el caso de emulsiones o
champús) u otros componentes (polímeros, electrolitos) que pueden
aumentar la afinidad del tensioactivo por este medio, y por lo tanto
desfavorecer aún más su coeficiente de distribución con el
exterior.
El único modo eficaz a priori es por lo
tanto modificar la cinética de la fuga. Para esto, puede modificarse
la estanqueidad de las barreras, por ejemplo cambiando de
tensioactivos o reforzando esta estanqueidad mediante la
incorporación de un polímero a las membranas o las capas acuosas.
Este método se enfrenta a dificultades de orden práctico (los
tensioactivos utilizables para formar las membranas tienen todos
propiedades de difusión bastante similares) y también teóricas: la
introducción de un polímero en una capa de algunos nanómetros en la
mayoría de los casos sólo aporta una barrera de difusión
relativamente poco eficaz, siendo la capa de polímero casi
monomolecular.
Otro método consiste en envolver la vesícula en
una "cáscara" de polímero mediante un método convencional de
encapsulación en polímero, como por ejemplo coacervación. Este
método, aunque es atractivo, presenta varias dificultades, por un
lado en el plano de la realización, y por otro lado en las
características de los objetos obtenidos. Las vesículas realizadas
en membranas de tensioactivo tienen en general tamaños cercanos al
micrómetro, mientras que las cápsulas obtenidas mediante
coacervación tienen diámetros comprendidos entre varias decenas y
varias centenas de micrómetros. Además, la coacervación se realiza
habitualmente utilizando una emulsión y el o los polímeros durante
su "insolubilización" se adsorben en el interfaz entre el
aceite y el agua alrededor de cada gota de la emulsión. No es
seguro por lo tanto que la adsorción del polímero sea posible o al
menos eficaz en el interfaz entre el agua y la capa externa de
tensioactivo de las vesículas. Las técnicas de coacervación no se
adaptan por lo tanto perfectamente a la envuelta de vesículas a base
de tensioactivos. Además, los objetos obtenidos mediante esta
técnica son microcápsulas que es preciso romper para liberar el
principio activo, al contrario que las vesículas que liberan su
principio activo lentamente por difusión. Por lo tanto envolver las
vesículas con una cáscara de polímero modificará profundamente la
naturaleza de las vesículas y sobre todo su destino y su
utilización. Esto ocurre también con las otras técnicas de envuelta
con polímeros, tales como atomización.
En la patente US 5 256 422 también se han
descrito medios constituidos por una emulsión de tipo agua en
aceite, en los que las gotas de agua contienen vesículas lipídicas
oligolamelares en dispersión.
Los inventores de la presente invención han
descubierto actualmente que es posible realizar medios dispersos
que no presentan los inconvenientes de los de la técnica anterior
descritos anteriormente, utilizando vesículas multilamelares a base
de tensioactivos como medio interno y dispersándolas en una fase
hidrófoba que a continuación se emulsiona en una fase acuosa.
Los inventores han aplicado a continuación el
mismo concepto a los medios acuosos obtenidos mediante emulsión en
un medio hidrófobo de un medio acuoso que contiene una dispersión de
vesículas a base de tensioactivos.
Se conoce bien que los tensioactivos, compuestos
anfífilos, tienen la facultad de autoasociarse en forma de
membranas que pueden formar objetos contenidos en ellos mismos, es
decir vesículas, o con una mayor concentración organizarse en forma
de estructura liótropa que tiene una organización
cristal-líquido.
Los inventores de la presente invención han
descubierto a continuación que podrían obtenerse las mismas ventajas
sustituyendo la fase inicial de vesículas con cualquier fase que
contenga membranas de tensioactivos en estado organizado.
Dichas fases que contienen membranas en estado
organizado pueden ser en particular cualquier fase de tipo fase
liótropa que pueda dispersarse en un medio.
Por fase liótropa, se entiende cualquier fase
organizada que tiene una simetría cristal-líquido
constituida al menos por un tensioactivo y un medio polar, por
ejemplo acuoso o apolar, por ejemplo oleoso. Las fases liótropas no
son solamente lamelares (también denominadas esmécticas A), sino
también pueden tener otras estructuras, de simetrías diferentes:
hexagonal, cúbica, etc.
Las fases liótropas son fases condensadas de
membranas de tensioactivo, en general concentradas en tensioactivos,
con equilibrio termodinámico, estando las membranas separadas unas
de otras por un medio de polaridad diferente. Si el medio es más
polar que la membrana de tensioactivo (por ejemplo agua) tenemos una
fase directa, en caso contrario (por ejemplo aceite) tenemos una
fase inversa. (Podemos encontrar una descripción y esquemas de
estas fases en el documento C.L. Khetrapol, A.C. Kunwar, A.S. Tracy,
P. Diles, en Nuclear magnetic resonance studies in lyotropic
liquid-crystals, 1975).
Las fases lamelares son ejemplos fáciles de
visualizar, en los que las membranas, globalmente planas, se apilan
simplemente unas sobre otras y se separan mediante capas de medio
polar o de aceite. En las fases hexagonales, los tensioactivos
forman tubos dispuestos en el espacio siguiendo una disposición
hexagonal. Todas estas fases son anisótropas y presentan un orden
cristal-líquido. Existen también fases cúbicas.
Además, estas fases presentan defectos de orientación y están
constituidas en general por una multitud de "granos" separados
por líneas de defectos (uniones de granos) que son también zonas de
fragilidad que permiten dispersarlas (a semejanza de un polvo para
un
cristal).
cristal).
De acuerdo con un primer aspecto de la
invención, se propone a continuación un nuevo medio complejo
constituido por un primer medio en forma de gotas que contiene una
dispersión de una fase liótropa formada por bicapas de
tensioactivos, estando dichas gotas en emulsión en un segundo medio
llamado fase continua no miscible con el primer medio.
Este nuevo medio y su método de preparación se
distinguen considerablemente de las emulsiones múltiples de la
técnica anterior esencialmente en que no se parte, de acuerdo con la
presente invención, de una emulsión sino de una dispersión de
objetos formados previamente, lo que evita particularmente recurrir
a una cizalladura importante tal como la que es necesaria en el
caso de una emulsión múltiple para realizar la primera emulsión.
Dicho medio se distingue fundamentalmente de una
emulsión múltiple, debido a que en el caso de este medio, la fase
interna está formada y estructurada previamente a la etapa de
dispersión mientras que en el caso de una emulsión múltiple, se
parte de una fase acuosa que se emulsiona de forma convencional en
el medio oleoso. Esta diferencia tiene consecuencias no
despreciables, debido a que esta preparación previa otorga a la fase
interna una estabilidad muy mejorada, vinculada a la estabilidad
intrínseca de esta fase pre-existente.
Otra ventaja es que, en el caso de las
vesículas, el tamaño de los objetos dispersados se fija previamente
a la etapa de dispersión.
Otra ventaja en el caso de los medios de la
presente invención es que, al menos en el caso de los medios
liótropos y de las vesículas multilamelares con estructura de
cebolla, los objetos dispersados son objetos que poseen una
estructura interna que se deriva de un equilibrio termodinámico.
Otra ventaja de los objetos dispersados en los
medios de la presente invención es que a priori no son
susceptibles de sufrir fenómenos de coalescencia y de maduración de
Ostwald, causas principales de desestabilización de las emulsiones
múltiples.
Otra ventaja de los medios de la invención es
que presentan las características organolépticas (tacto,
consistencia) de las emulsiones múltiples y constituyen como
consecuencia, sistemas particularmente atractivos para la industria
cosmética o dermatológica en la que pueden utilizarse como vehículos
de principios activos tanto hidrófilos como lipófilos y también
como base para los productos cosméticos o dermatológicos de acción
tópica.
Por otro lado, la presencia en los medios
complejos de la invención de la fase que contiene las bicapas otorga
al medio de la invención ventajas complementarias. En efecto, es
posible mejorar la protección y/o controlar la distribución de un
principio activo, en particular de un principio activo químico o
biológico, incorporando este principio activo dentro de la fase que
contiene las bicapas.
Otra utilización particularmente interesante
consiste en utilizar los medios de la invención como auténticos
micro-reactores, que permiten aislar temporalmente
algunos reactivos y/o controlar su pH.
Otra utilización de los medios complejos de la
invención es la posibilidad de utilizarlos como vectores de
antígenos, que conducen a una respuesta inmune amplificada.
En efecto, la vacunación moderna, en particular
la que utiliza antígenos sub-unitarios como
proteínas recombinantes, glicoproteínas, péptidos o polisacáridos,
se basa en la inducción de una respuesta inmune mediante la
administración del antígeno mediante diferentes vías. Sin embargo,
esta respuesta en general es insuficiente para otorgar una
protección mediante la vacuna cuando el antígeno se administra
directamente. La inducción de una protección eficaz requiere la
utilización de adyuvantes o de vectores, capaces de amplificar de
forma suficiente la respuesta del sistema inmune al antígeno
suministrado. Se han desarrollado muchos sistemas para responder a
esta exigencia. Podemos encontrar algunos ejemplos, por ejemplo en
los documentos Allison A.C., Arch. Immunol. Ther Exp., 1997, 45 p
141-7, O'Hagan D.T., J. Pharma. Pharmacol., 1998, 50
p 1-10 o Bennett B. et al., J. immunol.
Methods, 1992, 153 p 31-40. Varios de los ejemplos
mencionados en estos artículos demuestran la eficacia del uso de
emulsiones de antígeno en un aceite para que sirvan como adyuvante
para este antígeno.
La patente europea EP 0480 981 describe también
emulsiones múltiples de tipo AG/AC/AG que pueden utilizarse como
vacunas.
Los inventores han observado actualmente que los
medios de la invención constituyen vectores de antígenos
apropiados. Más exactamente, se ha descubierto que podría
incorporarse un antígeno en una fase que contiene bicapas de
tensioactivos en estado organizado, preferiblemente en vesículas
multilamelares, preferiblemente en vesículas multilamelares con
estructura de cebolla y que esto era posible además, mediante la
dispersión de esta fase que contiene las bicapas en estado
organizado en un aceite y después mediante la emulsión de este
aceite en un tampón adecuado, para obtener una preparación
particularmente inmunógena que inducía una respuesta inmune mucho
más fuerte que el antígeno en solitario o que el antígeno
incorporado simplemente dentro de dicha fase que contiene las
bicapas a base de tensioactivos.
Finalmente, otra aplicación consiste en utilizar
estos medios para preparar microesferas constituidas por polímeros
que contienen un principio activo.
De este modo, de acuerdo con un segundo aspecto,
la invención se refiere a diversas aplicaciones de los medios
complejos de la invención vinculados a las ventajas que se enumeran
a continuación.
Otras ventajas que justifican las aplicaciones
de los medios de la presente invención serán más evidentes con la
lectura de la descripción y de los ejemplos a continuación.
De acuerdo con una de sus características
esenciales, la invención se refiere a un medio complejo constituido
por un primer medio en forma de gotas en las que se dispersa una
fase que contiene bicapas organizadas de tensioactivos, estando
dichas gotas emulsionadas en un segundo medio llamado fase continua
no miscible con el primer medio.
Los tamaños de las gotas del primer medio están
comprendidos ventajosamente entre 1 y 100 \mum, preferiblemente
entre 1 y 50 \mum.
La emulsión contiene ventajosamente entre el 1 y
el 90% en masa de medio dispersado en el medio continuo,
preferiblemente entre el 1 y el 60%.
Las bicapas, en forma organizada, representan
ventajosamente entre el 1 y el 90% en masa, preferiblemente entre el
25 y el 75% con respecto a las gotas.
El primer medio podrá ser un medio acuoso y la
fase continua será entonces un medio hidrófobo.
Sin embargo, de acuerdo con una variante
preferida de la invención, el primer medio es un medio hidrófobo y
la fase continua un medio acuoso.
Como medio hidrófobo se utilizará por ejemplo un
aceite mineral o vegetal, un aceite de silicona o un disolvente
orgánico no miscible con agua.
Por fase que contiene bicapas organizadas, se
entiende también sistemas liótropos y vesículas lamelares.
Todas las fases liótropas, siempre que sean
dispersables en un medio pueden utilizarse para formar las
dispersiones complejas de acuerdo con la invención.
Los medios preferidos de la invención contienen
vesículas multilamelares en dispersión en un medio que a su vez
está en emulsión en una fase continua no miscible con este primer
medio.
Los medios preferidos de acuerdo con la
invención contienen una dispersión de vesículas multilamelares con
estructura de cebolla, tal como se han definido anteriormente.
El tamaño de las vesículas multilamelares está
comprendido ventajosamente entre 0,1 y 20 \mum, preferiblemente
entre 0,1 y 10 \mum.
Las proporciones de vesículas en las gotas,
ventajosamente en las gotas de aceite, están comprendidas
preferiblemente entre el 1 y el 90% en masa, típicamente
comprendidas entre el 25 y el 75%.
Como medida de simplificación, la descripción
detallada a continuación se realizará en el caso de vesículas con
estructura de cebolla dispersadas en un medio hidrófobo, que a su
vez se emulsiona en un medio acuoso.
Sin embargo, el especialista en la técnica podrá
generalizar fácilmente las enseñanzas contenidas en el presente
documento y aplicarlas a sistemas inversos en los que las vesículas
se dispersan en un medio acuoso, y después esta dispersión se
emulsiona en un medio hidrófobo. El especialista en la técnica no
encontrará la menor dificultad para generalizar las enseñanzas de
este documento al caso de fases organizadas de bicapas, ya sean
dispersiones directas o inversas.
Por lo tanto, de este modo las enseñanzas de
este documento podrán generalizarse fácilmente a sistemas inversos
en los que los objetos hidrófobos se dispersan en un medio acuoso y
esta dispersión se utiliza en una emulsión de tipo agua en aceite.
El especialista en la técnica sabe, en efecto, que existen fases
liótropas en las que se separan membranas de tensioactivos mediante
capas de aceite.
Dichas fases pueden dispersarse en medios
acuosos para otorgar una dispersión acuosa de pequeños "granos"
de fases liótropas. Este medio acuoso puede utilizarse a
continuación para preparar una emulsión de tipo agua en aceite. Se
obtiene de este modo el equivalente de una emulsión múltiple
AC/AG/AC. Ejemplos de emulsiones múltiples de tipo AC/AG/AC
(también representadas como emulsiones de tipo O/W/O correspondiente
a la abreviatura inglesa de Oil/Water/Oil) se proporcionan en las
solicitudes de patente EP 0 836 847, EP 0 782 646 o EP 0 559 013
así como en la solicitud francesa FR 96.10140 que utiliza aceites
fluorados.
El especialista en la técnica es capaz de
preparar vesículas, en particular vesículas con estructura
multilamelar de cebolla utilizando formulaciones que les hacen
dispersables en un medio hidrófobo. Dichas vesículas se describen
en particular en la solicitud internacional WO 95/18601 en la página
4, línea 32 así como en los ejemplos 11 y 12 de esta misma
solicitud.
A continuación es posible utilizar aceite en el
que se han dispersado previamente las vesículas para realizar una
emulsión en un medio continuo acuoso.
El especialista en la técnica no tendrá ninguna
dificultad para seleccionar el tensioactivo para crear la emulsión
AC/AG externa, para evitar desestabilizar la disposición
multilamelar de las vesículas y desestructurarlas, teniendo en
cuenta en particular que la gran concentración de tensioactivo en
las vesículas, si éstas no se han seleccionado juiciosamente, puede
desestabilizar la emulsión externa en periodos de tiempo cortos. Por
otro lado, la elección del aceite no debe ser aleatoria, ya que la
capacidad de dispersión de las vesículas varía enormemente según
que se seleccione un aceite vegetal, mineral o de silicona. En
general la elección del aceite viene determinada por el tipo de
aplicación prevista. Por lo tanto será preciso adaptar el sistema
tensioactivo al tipo de aceite
utilizado.
utilizado.
El especialista en la técnica entenderá
fácilmente que al seleccionar correctamente el sistemas de
tensioactivos utilizados para crear las vesículas, el tensioactivo
utilizado para formar la emulsión externa y el aceite de la fase
intermedia, es posible otorgar una excelente estabilidad, así como
una buena capacidad para retener un principio activo hidrosoluble
sin difusión del medio interno (vesículas) hacia el medio continuo
acuoso externo.
De este modo, de acuerdo con una variante
ventajosa, se utilizan tensioactivos de polímeros, para formar la
vesícula y/o para emulsionar el aceite que contiene la dispersión de
vesículas en agua. Los tensioactivos de tipo polímero se
seleccionan preferiblemente en una familia entre la que pueden
encontrarse compuestos de diferente HLB, para poder utilizar un
compuesto de HLB "bajo", para la preparación de vesículas, que
serán de este modo dispersables en aceite y un compuesto obtenido
de la misma familia, pero de "alto" HLB para la preparación de
una emulsión externa AC/AG. Es evidente para el especialista en la
técnica que la noción de HLB "bajo" y "alto" es
difícilmente estimable de forma muy precisa. Sin embargo, se sabe
que los tensioactivos de HLB bajo se pueden dispersar más
fácilmente en aceite. Por HLB bajo, puede entenderse un HLB inferior
a 8, pero no existe un límite exacto. En particular, los
fosfolípidos no tienen un valor de HLB claro, y pueden dispersarse
en medios oleosos y en medios acuosos. Sin embargo, es preferible
prever la obtención de un tensioactivo de polímero de bajo HLB a
partir de una familia dada para la preparación de las vesículas y un
tensioactivo de HLB alto de otra familia para la emulsión acuosa de
la dispersión oleosa de las vesículas. Existen varias familias
principales adecuadas para esta realización:
\ding{51} Poloxámeros, polímeros di o
tribloque de óxido de etileno y de óxido de propileno, jugando la
proporción entre las longitudes de cada bloque que fija el HLB (el
polióxido de propileno (también llamado polipropilenglicol) el
papel de parte lipófila, mientras que la parte basada en óxido de
etileno es hidrófila). Estos compuestos se representan en
particular en la familia de PLURONIC® y LUTROL® de BASF,
\ding{51} Copolímeros de polialquilenglicol y
de alquilglicol. La longitud de la parte PEG y la metoxilación
opcional de los grupos hidroxilo terminales permite modificar el HLB
del compuesto en un amplio intervalo. De este modo un copolímero de
metoxi PEG-17 dodecilglicol tendrá un HLB de 21, y
se adaptará por lo tanto a la emulsificación de la dispersión
oleosa de vesículas en agua, mientras que un copolímero de
PEG-45 y de dodecilglicol tendrá un HLB de 4,4 y se
adaptará por lo tanto a la formulación de vesículas dispersables en
aceite. Estos compuestos se comercializan por ejemplo por AZKO
NOBEL, en la gama ELFACOS®.
\ding{51} Poliglicéridos, ésteres de ácidos
grasos y de polímeros de glicerol. Modificando la longitud de la
cadena del ácido graso, la cantidad de cadenas sustituyentes y el
grado de polimerización del glicerol, se puede modificar el HLB en
un amplio intervalo.
\ding{51} Éteres de alcoholes grasos y de
polímeros de glicerol, en los que la función éster de los
poliglicéridos se ha sustituido con una función éter, más
resistente a la hidrólisis,
\ding{51} Ésteres de ácidos grasos y de
polietilenglicol, también llamados n estearato de polioxilo, en el
caso de un éster de ácido esteárico en el que n es la longitud media
de la cadena de polietilenglicol. La cadena de polietilenglicol
puede esterificarse en un único o en los dos extremos.
\ding{51} Éteres de alcoholes grasos y de
polietilenglicol, también llamados n alquil éteres de polioxilo, en
los que n representa la cantidad media de unidades de óxido de
etileno en la cadena.
\ding{51} Mezclas de ésteres de glicerol y de
ésteres de polietilenglicol. Modificando la longitud de la cadena
del ácido graso, la cantidad de cadenas y su sustitución, podemos
modificar el HLB. Estos productos se comercializan por ejemplo por
GATTEFOSSE (Lyon, Francia) con los nombres GELUCIRE® o
LABRAFIL®.
\ding{51} Aceite de ricino hidrogenado
polioxietilenado (éster de glicerol etoxilado), que resulta de la
reacción del aceite de ricino hidrogenado con óxido de etileno. El
HLB está regulado mediante la cantidad de óxido de etileno.
\ding{51} Aceite de ricino polioxietilenado
(ricinoleato de glicerol etoxilado).
\ding{51} Polimetilciclosiloxano por ejemplo,
productos de las familias de ciclometicona y copoliol de dimeticona,
como los productos de la compañía DOW CORNING (DC3225C y DC
5200).
\vskip1.000000\baselineskip
Estas familias se proporcionan como ejemplos y
no constituyen una lista limitante. La noción de polímero se toma
en este documento en el sentido más amplio de molécula de masa molar
grande, algunos de estos compuestos pueden considerarse como
oligómeros, otros no son polímeros en el sentido estricto de
molécula formada por una repetición de motivos idénticos. Es
difícil definir una masa molecular mínima para hablar de polímero.
Puede fijarse como límite una masa molar superior a 1.000 Da, que es
un valor a partir del cual la difusión comienza a ser reducida.
Al menos uno de los tensioactivos es
ventajosamente de tipo polímero, pero no es indispensable en
absoluto que estos tensioactivos de polímero se utilicen a la vez
en vesículas y en la emulsión externa. Por supuesto, la utilización
de tensioactivos de polímeros en los dos compartimentos refuerza la
estabilidad y sobre todo la estanqueidad del conjunto, pero en el
caso en el que el soluto a encapsular en el interior de las
vesículas no es muy pequeño, las vesículas formadas a partir de
tensioactivos no de polímeros pueden ser suficientes para obtener
una emulsión estable de gotas de aceite en agua, en el interior de
las cuales se dispersan las vesículas que encapsulan al principio
activo. En este caso las vesículas pueden obtenerse a partir de
cualquier tensioactivo cuyo HLB sea lo suficientemente bajo para
permitir su dispersión en el aceite. Este es el caso de los
fosfolípidos o de los ésteres de sacarosa de HLB bajo.
Como se ha expuesto anteriormente, los medios de
la invención pueden contener uno o varios principios activos en uno
o en otro de los medios que constituyen los medios complejos de la
invención. Pueden contener en particular uno o varios principios
activos incluidos dentro de la fase que contiene las bicapas y esto
con las ventajas presentes a continuación y vinculadas a diferentes
explicaciones que se exponen a continuación.
La preparación de los medios de la invención
comprende, de forma general, tres etapas:
- la preparación de una fase liótropa formada
por tensioactivos,
- la dispersión de esta fase en un primer
medio,
- la emulsión de la dispersión obtenida de este
modo en un segundo medio no miscible con el primer medio, por medio
de un tensioactivo, preferiblemente un tensioactivo de tipo
polímero.
Pueden incorporarse uno o varios principios
activos en la fase que contiene las bicapas o en el primer o segundo
medio.
Podrá tratarse en particular de principios
activos químicos o biológicos.
En el caso particular de los medios preferidos
de la invención constituidos por dispersiones de vesículas
multilamelares, preferiblemente vesículas multilamelares con
estructura de cebolla, en un medio hidrófobo que se emulsiona en un
medio continuo acuoso, se procederá preferiblemente de acuerdo con
las tres etapas siguientes:
- Preparación de vesículas a base de
tensioactivos, por ejemplo mediante el método descrito en una de las
patentes mencionadas anteriormente, mediante cizalladura homogénea
o no de una fase lamelar liótropa, pero también mediante cualquier
otro método de la bibliografía que conduce a vesículas por ejemplo
lipídicas. Utilización de vesículas multilamelares, por su mejor
estabilidad y su mejor estanqueidad, vinculada al mayor número de
membranas que las componen, podrá preferirse en el caso en el que
estas características sean importantes para el producto final.
- Dispersión de estas vesículas en un medio
hidrófobo, por ejemplo un aceite mineral o vegetal o de silicona,
pudiendo contener opcionalmente la fase hidrófoba un principio
activo o un aditivo lipófilo, por ejemplo un antioxidante o un
conservante. Uno o varios aditivos potenciadores de la viscosidad
pueden añadirse también al aceite, si no se desea utilizar
directamente un aceite muy viscoso. El aceite podrá seleccionarse en
función de sus características de solubilización del principio
activo (se seleccionará un aceite en el que el principio activo es
menos soluble para mejorar la estanqueidad) pero también de su
viscosidad (una viscosidad elevada disminuirá la difusión del
principio activo).
- Emulsión de esta dispersión de vesículas en
aceite en una fase acuosa continua, por medio de un tensioactivo,
preferiblemente un tensioactivo de polímero. El medio externo puede
ser agua, una solución acuosa o un medio complejo, como un champú o
un gel por ejemplo.
Las vesículas se formulan ventajosamente con
tensioactivos de bajo HLB, preferiblemente, ya sean polímeros o no
para que su dispersión en el aceite sea espontánea o se obtenga
mediante simple agitación. Esto es una gran diferencia con los
métodos convencionales de preparación de emulsiones múltiples, en
los que la primera etapa es una etapa de emulsificación, de las que
el especialista en la técnica conoce todas las dificultades
técnicas de realización, sobre todo en el caso de emulsiones
inversas. Es importante observar que la ausencia de esta etapa
inicial de emulsificación de una fase acuosa en aceite evita al
procedimiento la necesidad de someter al sistema a una gran
cizalladura o a temperaturas relativamente elevadas, lo que es más
importante en el caso de la encapsulación de moléculas frágiles,
por ejemplo biológicas.
Otra diferencia importante con los sistemas
convencionales de emulsiones múltiples es la presencia de la
vesícula que actúa como depósito del principio activo
encapsulándolo, lo que proporcionará una estanqueidad muy importante
a este tipo de sistema, limitando las posibilidades de migración
del principio activo entre la fase acuosa interna y la fase externa
continua. Además, el acoplamiento de dos tecnologías de
encapsulación mediante vesículas de tensioactivo y emulsiones
permite obtener una sinergia de las ventajas de estos dos métodos.
Del mismo modo, un principio activo cosmético o terapéutico de una
preparación tópica podrá protegerse por ejemplo de la oxidación
durante su almacenamiento (efecto de la emulsión) y ponerse a
disposición durante la aplicación en una forma que favorece su
penetración en la piel (efecto de las vesículas).
Una de los principales puntos de interés de la
invención es la posibilidad de conducir a un sistema de
encapsulación mucho más estanco que las técnicas habituales que
utilizan vesículas a base de tensioactivos, o que las técnicas de
emulsiones múltiples, sin los inconvenientes de las técnicas de
recubrimiento con polímeros (realización delicada y costosa,
cápsulas de gran tamaño que otorgan una textura desagradable,
necesidad de rotura de la cáscara de polímero para liberar el
principio activo, etc.).
De acuerdo con otro aspecto, la invención
también se refiere a la utilización de los medios de la
invención.
Estos medios, como se ha indicado anteriormente,
pueden utilizarse en particular en el campo de la cosmética o la
dermatología. En efecto, la cosmética busca constantemente nuevos
medios cuya consistencia y textura sean agradables para crear
nuevas bases para los productos para el cuidado de la piel. Las
emulsiones múltiples por ejemplo, se buscan particularmente en el
campo de la cosmética como base para cremas por su tacto
particularmente agradable. Sin embargo, éstas sufren su carencia de
estabilidad y su dificultad de preparación, debido a la
sensibilidad de la primera emulsión al procedimiento de fabricación
de la segunda emulsión. Los medios complejos de la presente
invención han demostrado ser particularmente interesantes en esta
aplicación ya que presentan las ventajas organolépticas (tacto,
consistencia, etc.) de las emulsiones múltiples sin tener sus
inconvenientes. Constituyen por lo tanto sistemas particularmente
interesantes para la industria cosmética, como tales e
independientemente de su capacidad para incorporar un principio
activo dentro de la fase que contiene las bicapas.
\newpage
A continuación se presentan otras utilizaciones,
vinculadas más particularmente a las ventajas obtenidas debido a la
incorporación de un principio activo dentro de la fase que contiene
las bicapas.
De este modo, debido al control cinético y no
termodinámico de la fuga, la invención será particularmente
interesante en todos los casos en los que se desea aislar un
principio activo hidrosoluble, pero de masa molar reducida (y por
lo tanto de gran coeficiente de difusión en las membranas de
tensioactivos) de un medio continuo acuoso. Esto es particularmente
útil para el caso en el que se desea proteger dicho principio activo
de una degradación, por ejemplo vinculada a hidrólisis o a
oxidación.
Los ejemplos de dichos principios activos son
numerosos y se mencionarán como ejemplos no limitantes:
\ding{51} Vitaminas hidrosolubles.
\ding{51} Hidroxi cetonas tales como
dihidroxiacetona y eritrulosa.
\ding{51}\alpha-hidroxiácidos (ácido glicólico, láctico,
etc.)
\ding{51} Electrolitos.
\ding{51} Extractos acuosos o hidroglicólicos
vegetales o marinos.
\ding{51} Oligómeros procianidólicos, y otros
derivados de polifenoles.
\vskip1.000000\baselineskip
Además, el método podrá utilizarse para proteger
un principio activo hidrosoluble de masa molar pequeña o grande, de
la acción de pequeños solutos contenidos en el medio externo, que
sin este método, emigrarían muy rápidamente desde el medio de
dispersión hacia el interior de las vesículas y podrían destruir o
modificar el principio activo.
Una aplicación particularmente interesante es el
caso en el que el principio activo debe mantenerse a un pH dado
mientras que el producto final debe, por ejemplo por razones de
seguridad, formularse a un pH diferente. Este es el caso de los
\alpha-hidroxiácidos, que para ser activos deben
permanecer a un pH inferior a 3 pero que se introducen en
preparaciones cosméticas cuyo pH debe ser cercano a 7. Éste es
también el caso del tioglicolato potásico utilizado en cremas
depilatorias, que es activo a un pH superior a 9, pero que se
presenta preferiblemente en cremas de pH cercano a 7. Al crear una
barrera cinética entre el medio externo y el medio externo, la
invención permite conseguir dicho resultado.
De forma más general, la invención permite
disponer de auténticos micro-reactores, en los que
un reactivo se incorpora en un compartimento del sistema y el otro
reactivo de una reacción deseada se incluye en el otro
compartimento. La reacción podrá producirse mediante activación,
gracias a la rotura de la emulsión externa (bajo el efecto de una
modificación de temperatura o por adición de un aditivo adecuado,
por ejemplo) o por el contrario muy lentamente mediante difusión de
los reactivos, lo que podría regularse mediante la elección de los
tensioactivos y del aceite intermedio.
Los medios complejos de acuerdo con la invención
también pueden utilizarse como vectores de antígenos para inducir
una respuesta inmune suficientemente fuerte. Para esto, el antígeno
se incluirá dentro de la fase que contiene las bicapas
organizadas.
De acuerdo con una variante particularmente
interesante, el antígeno se incluirá dentro de vesículas
multilamelares, preferiblemente con estructura de cebolla,
dispersadas a su vez en gotas de aceite en emulsión en agua. La
inclusión del antígeno en dicho medio permite al mismo tiempo
vectorizar el antígeno, protegerlo de las agresiones externas y en
particular de una destrucción por las enzimas presentes en el
organismo y ponerlo a disposición del sistema inmune. Con respecto
a las emulsiones convencionales utilizadas como adyuvante de
antígenos, de tipo agua en aceite, la invención se presenta en
forma de una emulsión de aceite en agua, mucho más estable y más
fácil de inyectar y de administrar.
De acuerdo con otra variante particularmente
interesante de la invención, el primer medio es un medio hidrófobo
que contiene una sustancia que puede solidificarse, espesarse,
polimerizarse o precipitar o una solución en un disolvente no
miscible con el agua que puede evaporarse de dicha sustancia. La
ventaja de dicho medio es reforzar la estanqueidad de la fase
hidrófoba, así como la solidez del sistema obtenido después de la
emulsificación.
Como sustancia que puede solidificarse o
espesarse, se mencionarán ceras y polímeros, cuyo punto de fusión o
de fluidización es tal que se puede formar el sistema que contiene
las bicapas dentro de la fase líquida de la sustancia, y después al
rebajar la temperatura, obtener un sistema en el que el medio
hidrófobo se solidifica o es lo suficientemente espeso para
ralentizar los fenómenos de difusión.
Puede disolverse también un monómero en el medio
hidrófobo o un polímero que puede reticularse y provocar después de
la formación de la dispersión compleja, la polimerización del
monómero o la reticulación del polímero mediante un método químico,
térmico, fotoquímico o radioquímico. En este caso, se sustituirá la
gota de dispersión de la fase que contiene las bicapas con una
esfera formada por una matriz de polímero que incorpora los granos
de esta fase, mucho más estable.
Del mismo modo, puede utilizarse como medio
hidrófobo para dispersar la fase que contiene las bicapas, una
solución de un polímero en un disolvente volátil hidrófobo. Después
de la formación de la dispersión compleja, la evaporación del
disolvente conduce a una precipitación del polímero en forma de
esferas duras que encierran a los granos de la fase que contiene las
bicapas.
La invención es por lo tanto también un método
original de preparación de microesferas que se presentan como
matrices de polímero que incorporan un principio activo, en este
caso en forma de (o incluido en) granos de fase que contiene las
bicapas y en particular de fase liótropa.
Dicho procedimiento comprende:
- la preparación de una fase liótropa que
contiene dicho principio activo,
- la dispersión de esta fase en un medio
hidrófobo en el que se encuentra disuelto un monómero o un polímero
que puede reticularse o en un medio constituido por un disolvente
hidrófobo en el que se disuelve un polímero,
- la realización de una emulsión en forma de
gotas de dicha dispersión en un medio no miscible con el medio
hidrófobo anterior,
- la transformación de dichas gotas en granos
sólidos, respectivamente mediante polimerización del monómero o
reticulación del polímero o precipitación del polímero.
Dicha variante es particularmente interesante en
el caso de vesículas multilamelares, en particular en el caso de
vesículas multilamelares con estructura de cebolla.
Esta variante particularmente interesante de la
invención permite la preparación de microesferas de polímeros en
las que pueden encapsularse principios activos, en particular
principios activos farmacéuticos como por ejemplo péptidos,
proteínas (entre las cuales enzimas), o cualquier molécula que puede
beneficiarse de dicha encapsulación (efecto de retardo, protección
de la molécula, etc.). En este caso el polímero podrá seleccionarse
ventajosamente entre polímeros reabsorbibles, utilizables en
inyección parenteral, como PlaGa (glucósido de poliláctido).
La invención propone por lo tanto, de acuerdo
con esta última variante, un medio para incorporar en un medio un
amplio intervalo de principios activos que pueden ser hidrosolubles
o liposolubles. Sin embargo, se aplica básicamente a principios
activos hidrosolubles.
Los siguientes principios activos ilustran de
forma no limitante la presente invención.
Más exactamente,
- el ejemplo 1 da un ejemplo de formulación e
ilustra la preparación de un medio complejo de acuerdo con la
invención constituido por una emulsión en un medio continuo acuoso
de gotas de aceite mineral en las que se encuentran dispersadas las
vesículas con estructura de cebolla que contienen vitamina C,
- el ejemplo 2 muestra, mediante microscopia
óptica de luz polarizada y de luz directa la estructura de los
medios complejos de la invención, en comparación con medios en forma
de emulsión doble,
- el ejemplo 3 presenta un estudio cinético de
fuga de un principio activo y demuestra el interés de los medios de
la invención para aislar un principio activo del medio externo,
- el ejemplo 4 muestra la diferencia de
estabilidad entre una emulsión doble y una dispersión compleja de
acuerdo con la invención,
- el ejemplo 5 muestra la utilización de los
medios de la invención para realizar medios complejos que presentan
diferenciales de pH entre diferentes compartimentos,
- el ejemplo 6 ilustra una utilización de los
medios complejos de acuerdo con la invención para crear un
diferencial de pH.
- el ejemplo 7 muestra el interés de los medios
de la invención en la preparación de una emulsión cosmética que
contiene un principio activo particularmente inestable,
- el ejemplo 8 ilustra la utilización de los
medios complejos de la invención para preparar microesferas
constituidas por un polímero reabsorbible,
\newpage
- el ejemplo 9 ilustra la utilización de los
medios complejos de la invención como vector de antígenos que
permite obtener una amplificación clara de la respuesta inmune.
Las figuras 1 a 8 se proporcionan en referencia
a los ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
Más exactamente:
- Las figuras 1 a 4 corresponden al ejemplo 2 y
representan negativos obtenidos con microscopia óptica de luz
directa (figura 1 y figura 2) o de luz polarizada (figura 3 y figura
4) con un objetivo de 20 aumentos y un ocular de 10 aumentos.
\vskip1.000000\baselineskip
Más exactamente:
- la figura 1 representa un negativo obtenido en
microscopia óptica de luz directa en el caso de una emulsión doble
convencional,
- la figura 2 representa el negativo obtenido en
luz directa en el caso del medio complejo de acuerdo con la
invención descrito en el ejemplo 2,
- la figura 3 representa el negativo obtenido
con luz polarizada en el caso de una emulsión doble
convencional.
- la figura 4 representa el negativo obtenido en
luz polarizada en el caso del medio complejo de acuerdo con la
invención obtenido en el ejemplo 2,
- la figura 5 que se da en referencia al ejemplo
3 y proporciona la cinética de fuga de vitamina C y representa, más
exactamente en ordenadas el porcentaje de vitamina C que permanece
encapsulado en función del tiempo indicado en días en las
abscisas.
- la figura 6 que se da en referencia al ejemplo
5 proporciona la evolución en función del tiempo del rendimiento de
encapsulación en las formulaciones A y B descritas en este
ejemplo,
- la figura 7 que se da en referencia al ejemplo
6 proporciona la evolución en función del tiempo del pH de tres
formulaciones diferentes de acuerdo con la invención.
- la figura 8 es un negativo obtenido en
microscopia óptica de luz polarizada en el caso de la emulsión
cosmética descrita en el ejemplo 7 con un objetivo de 20 aumentos y
un ocular de 10 aumentos.
\vskip1.000000\baselineskip
La realización del procedimiento de acuerdo con
la invención se realiza en varias etapas. La primera etapa
corresponde a la preparación de la fase liótropa lamelar. La segunda
etapa es la de dispersión de esta fase en aceite y la tercera etapa
corresponde a la emulsión de la dispersión oleosa en la fase
continua acuosa.
En este ejemplo, se encapsula una solución
acuosa de vitamina C que servirá como sonda para la medición de la
fuga del ejemplo 3.
Los porcentajes se expresan en peso. Este modo
operatorio es válido para cantidades del orden de 10 a 100 g.
Primera
etapa
Formulación
1
- \ding{51}
- 40% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS ST9 comercializado por AKZO NOBEL
- \ding{51}
- 10% de polisorbato 60
- \ding{51}
- 30% de aceite mineral comercializado como aceite espeso por SIGMA
- \ding{51}
- 20% de una solución acuosa al 20% de vitamina C.
\newpage
Después de mezclar los tres primeros
constituyentes, a temperatura ambiente, se añade la solución al 20%
de vitamina C y después se mezcla con una espátula durante de 10 a
15 minutos hasta la obtención de una mezcla homogénea.
\vskip1.000000\baselineskip
Segunda
etapa
Formulación
2
- \ding{51}
- 20% de la formulación 1
- \ding{51}
- 80% de aceite mineral.
Los dos constituyentes se dispersan a
temperatura ambiente y después la mezcla se mantiene en agitación de
10 a 15 minutos con una barra imantada.
\vskip1.000000\baselineskip
Tercera
etapa
- \ding{51}
- 20% de la formulación 2
- \ding{51}
- 80% de solución acuosa de polialquilenglicol de tipo ELFACOS OW 100 (AKZO NOBEL) al 1%.
Después de añadir la formulación 2, se agita
vigorosamente con la mano durante 10 minutos. También puede
utilizarse un agitador magnético, que gira a gran velocidad.
La preparación se lleva a pH = 6. El contenido
de vitamina C del producto final es del 0,2% (en masa).
Se obtiene una emulsión, cuya observación al
microscopio muestra la presencia, en el interior de las gotas de
aceite de las vesículas multilamelares. Su caracterización por
microscopia óptica se realiza como en el ejemplo 2.
En este ejemplo un producto análogo al obtenido
en el ejemplo 1, pero en el que la vitamina C se sustituye con un
oligómero procianidólico (OPC, denominado "Grape seed extract"
obtenido de la compañía VINYALS, Barcelona, España) se compara con
un producto obtenido de acuerdo con un procedimiento de emulsión
doble descrito en la bibliografía. El modo operatorio es el mismo
que en el ejemplo 1, pero con las siguientes formulaciones.
Formulación
A
- \ding{51}
- 40% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS ST9 comercializado por AKZO NOBEL
- \ding{51}
- 10% de polisorbato 60
- \ding{51}
- 20% de aceite mineral
- \ding{51}
- 30% de una solución acuosa al 10% de OPC.
\vskip1.000000\baselineskip
Formulación
B
- \ding{51}
- 20% de la formulación A
- \ding{51}
- 80% de aceite mineral
\vskip1.000000\baselineskip
Formulación
C
- \ding{51}
- 20% de la formulación B
- \ding{51}
- 80% de solución acuosa de polialquilenglicol de tipo ELFACOS OW 100 (AKZO NOBEL) al 1%.
La emulsión doble que sirve de comparación se
obtiene a partir de la siguiente formulación:
Los porcentajes se expresan en masa.
A. Una dispersión de tensioactivo lipófilo en
aceite se prepara previamente.
- \ding{51}
- 1% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS ST9 comercializado por AKZO NOBEL
- \ding{51}
- 99% de aceite mineral.
\vskip1.000000\baselineskip
B. Se prepara una emulsión de agua en aceite a
partir de la mezcla A
- \ding{51}
- 20% de solución acuosa de OPC al 10%
- \ding{51}
- 80% de la mezcla preparada en A.
La mezcla se realiza a temperatura ambiente,
mediante la adición con agitación magnética del agua en aceite.
\vskip1.000000\baselineskip
C. La emulsión de agua en aceite B se emulsiona
en un medio continuo acuoso.
- \ding{51}
- 20% de la mezcla obtenida en B
- \ding{51}
- 80% de solución acuosa al 1% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS OW 100 (AKZO NOBEL).
La mezcla se obtiene mediante agitación manual
vigorosa. Se obtiene una emulsión blanquecina.
\vskip1.000000\baselineskip
El método de caracterización es microscopia
óptica en luz polarizada, que permite demostrar la birrefringencia
de una estructura, vinculada a su carácter anisótropo y, en el caso
de la invención, al carácter cristal-líquido de la
estructura lamelar de las vesículas.
En referencia a las figuras 1 a 4, se constata
fácilmente la diferencia de aspecto de los negativos.
Las figuras 1 y 2 muestran que a la luz directa
las gotas de la emulsión múltiple son claras (transparentes) (ver
la figura 1) mientras que las gotas de la dispersión compleja de
acuerdo con la invención son opacas (véase la figura 2).
A la luz polarizada la emulsión múltiple (figura
3) no muestra birrefringencia (solamente un ligero efecto de borde,
convencional del interfaz agua/aceite que es visible), mientras que
la dispersión compleja de vesículas multilamelares (figura 4)
muestra una gran birrefringencia en el interior de las gotas
oleosas. Esta birrefringencia demuestra que las vesículas han
conservado su estructura lamelar anisótropa después de la dispersión
en el aceite. Se apreciará por otro lado que no se observa ninguna
birrefringencia en el medio continuo acuoso, lo que indica que las
vesículas están todas en el interior de las gotas oleosas.
\vskip1.000000\baselineskip
La medición de la cinética de fuga consisten
dosificar la vitamina C en el medio continuo acuoso de la dispersión
compleja preparado en el ejemplo 1. Para realizar esto se separan
en primer lugar los medios acuosos y oleosos de la emulsión
externa, y después se dosifica mediante una dosificación química la
vitamina C. Para la verificación, la estructura de una muestra del
sistema se rompe, mediante adición de detergente, para dosificar la
totalidad de la vitamina C (punto final).
\vskip1.000000\baselineskip
La dispersión compleja del ejemplo 1 se
centrifuga a temperatura ambiente, dos veces a 10.000 g. El
sobrenadante constituido por la parte oleosa se separa y la fracción
acuosa inferior se utiliza para la dosificación.
\vskip1.000000\baselineskip
La dosificación de la vitamina C se realiza
mediante dosificación con yodo, de acuerdo con un método
convencional.
A 20 g de solución acuosa se le añaden 30 g de
agua y 20 g de acetona. Se añaden 4 gotas de almidón para la
visualización del punto de viraje. La dosificación se realiza
mediante la adición gota a gota de una solución titulada de
yodo.
\vskip1.000000\baselineskip
Para la determinación de la cantidad total de
vitamina C contenida en la muestra, se rompe la dispersión compleja
mediante la adición de lauril sulfato sódico (SDS). A una toma de
ensayo de 30 g se le añaden 3 g de SDS. Después de la agitación, se
obtiene una solución homogénea sobre la cual se efectúa la
dosificación de yodo.
\vskip1.000000\baselineskip
La curva representada en la figura 5 da la fuga
de la vitamina C en un periodo de dos meses. Se constata una
disminución muy débil, inferior al 20%, y se estabiliza después de
este periodo. Por lo tanto puede concluirse que la dispersión
compleja de la invención es un medio eficaz para encapsular un
principio activo y aislarlo del medio externo.
\vskip1.000000\baselineskip
Para comparar la dispersión compleja de acuerdo
con la invención con una emulsión doble obtenida mediante un método
convencional, se prepara una emulsión doble utilizando los mismos
tensioactivos que los que están dentro de la formulación de la
dispersión compleja. El amaranto, un colorante, se encapsula en cada
caso y sirve como sonda para el seguimiento de la cinética de fuga
de cada una de las formulaciones.
\vskip1.000000\baselineskip
La dispersión compleja se prepara de acuerdo con
el modo operatorio del ejemplo 1, sustituyendo la solución acuosa de
vitamina C con una solución acuosa de amaranto 10^{-2} M.
\vskip1.000000\baselineskip
La emulsión doble se prepara de acuerdo con un
método convencional, a partir de una primera emulsión de agua en
aceite, emulsionada a su vez en agua. Los tensioactivos empleados
son los mismos que los que se utilizan para la formulación A.
La primera emulsión AG_{1}/AC se realiza de la
siguiente manera:
Una solución de amaranto 10^{-2} M se
emulsiona al 60% en aceite mineral que contiene el 1% de una mezcla
de tensioactivos Elfacos ST9/polisorbato 60 (4/1) con ayuda de una
agitación vigorosa.
Esta emulsión AG_{1}/AC se emulsión a
continuación en una fase acuosa que contiene el 1% de Elfacos OW
100. El rendimiento de encapsulación del amaranto para esta
formulación B se compara con el de la dispersión compleja,
formulación A, a lo largo del tiempo a 22ºC. Para hacer esto, la
formulación se separa mediante centrifugado, para que se aísle el
medio externo. En este medio externo, una medición de la densidad
óptica mediante espectrometría permite conocer la concentración de
amaranto que se ha fugado. El resultado aparece en la figura 6.
Se observa que mientras que en el caso de la
emulsión doble, todo el colorante se ha fugado en 15 días, todo el
colorante se encapsula siempre en la dispersión compleja de la
invención, después de 30 días. Esto demuestra la diferencia
fundamental de estabilidad, vinculada a la diferencia de naturaleza
entre una emulsión doble y la dispersión compleja de acuerdo con la
invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Una composición de acuerdo con la invención se
prepara encapsulando un indicador de pH (Rojo Congo: azul violeta a
pH 3, rojo a pH 5) en el interior de las vesículas
multilamelares.
- -
- 40% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS ST9 comercializado por AKZO NOBEL
- -
- 10% de polisorbato 60
- -
- 30% de aceite de parafina
- -
- 20% de solución acuosa de indicador coloreado, cuyo pH se ajusta mediante sosa.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparan dos muestras de vesículas,
- -
- una con una solución de indicador coloreado a pH 3, las vesículas son azules
- -
- o con una solución de indicador coloreada a pH 5,9, las vesículas son rojas.
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación se dispersa cada muestra al 20%
en aceite mineral, las dispersiones conservan la coloración y por lo
tanto el pH de las vesículas.
A partir de las dispersiones oleosas anteriores,
se realizan varias dispersiones complejas, dispersando el 20% de
dispersiones oleosas en una solución acuosa de polialquilenglicol de
tipo ELFACOS OW 100 al 1%.
La demostración de la estanqueidad de los
sistemas frente al indicador coloreado en estas dos formas de pH se
realiza con las siguientes dispersiones complejas:
- Dispersión oleosa de vesículas a pH 3 (azules)
en una solución de ELFACOS OW 100 a pH 3
- Dispersión oleosa de vesículas a pH 5,9
(rojas) en una solución de ELFACOS OW 100 a pH 6,5.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizan soluciones acuosas de ELFACOS OW 100
al 1% de indicador coloreado a pH 3,3 y 6,5 para verificar que la
concentración de indicador encapsulado en las vesículas es
suficiente para visualizar la coloración del medio externo en caso
de fuga.
Para los dos sistemas realizados a pH 3 y 6,5,
no se observa fuga del indicador coloreado de las vesículas hacia el
medio externo acuoso que permanece sin colorear.
Habiendo verificado este punto, se preparan
dispersiones complejas con diferencias de pH entre el medio acuoso
encapsulado en las vesículas y el medio acuoso externo:
- Dispersión oleosa de vesículas multilamelares
con estructura de cebolla a pH 3 (azules) en una solución de ELFACOS
OW 100 a pH 6,5.
- Dispersión oleosa se vesículas multilamelares
con estructura de cebolla a pH 5,9 (rojas) en una solución de
ELFACOS OW 100 a pH 3,3.
En las dos dispersiones complejas, las vesículas
conservan su coloración inicial, vinculada al pH de preparación, y
el medio externo permanece sin colorear. Estas preparaciones
presentan por lo tanto un desfase de pH entre dos compartimentos de
los sistemas, que permite de este modo conservar la acidez de un
principio activo mientras que se formula en una preparación a un pH
más elevado y viceversa.
\vskip1.000000\baselineskip
En este ejemplo, una molécula de pequeño tamaño,
el ácido salicílico insoluble en agua se encapsula a un pH bajo
(3,5), mientras que el pH del medio externo se fija a diferentes
valores cercanos a la neutralidad, compatibles con una utilización
cosmética (5 y 7).
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepara una formulación A de vesículas
multilamelares puras de acuerdo con la siguiente composición:
- \ding{118}
- 37% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS ST9 comercializado por AKZO NOBEL
- \ding{118}
- 9% de polisorbato 60
- \ding{118}
- 19% de aceite mineral
- \ding{118}
- 10% de ácido salicílico
- \ding{118}
- 25% de glicerol.
\vskip1.000000\baselineskip
Se mezcla el polialquilenglicol (ELFACOS ST9),
polisorbato 60, el aceite mineral y el ácido salicílico con ayuda
de un agitador mecánico calentándolos a 80ºC hasta la disolución
completa del ácido salicílico. A continuación se añade el glicerol
y se continúa la agitación hasta que la temperatura retorna a
temperatura ambiente. Se obtiene de este modo una fase pura de
vesículas multilamelares, dispersadas en el aceite.
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación de las vesículas multilamelares
concentradas A obtenida de este modo se dispersa en aceite mineral
en las siguientes proporciones mediante agitación mecánica, a
temperatura ambiente:
- \ding{118}
- 65% de la formulación A
- \ding{118}
- 35% de aceite mineral.
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación se emulsiona la dispersión oleosa
en medio acuoso.
El medio acuoso está constituido por una
dispersión en agua del 1% del polialquilenglicol de tipo ELFACOS OW
100 y del 6% de SEPIGEL 305 (mezcla de poliacrilamida, de
isoparafina C_{13-14} y de laureth 4
comercializada por SEPPIC, Paris). Las proporciones de los medios
son:
- \ding{118}
- 32% de la dispersión oleosa.
- \ding{118}
- 68% de la solución acuosa.
\vskip1.000000\baselineskip
La emulsificación se obtiene mediante la adición
lenta de la dispersión oleosa en la solución acuosa, con agitación
mecánica, a temperatura ambiente.
La dispersión compleja realizada de este modo
tiene una concentración de ácido salicílico del 2% y el pH es de
3,5. Tiene el aspecto y la textura de una crema cosmética.
A partir de esta formulación, se realizan dos
preparaciones ajustando el pH con trietanolamina a 5 y a 7.
La estabilidad del pH de las tres dispersiones
complejas se sigue a temperatura ambiente. El resultado se
proporciona en el gráfico que se representa en la figura 7 en el que
el pH de cada una de las preparaciones se proporciona en función del
tiempo.
Se observa que, cualquiera que sea el pH
inicial, no aparece ninguna variación de pH en la crema a lo largo
del tiempo. Esto significa que durante el periodo observado, no se
ha constatado ninguna fuga de ácido salicílico. El aceite que rodea
a las vesículas multilamelares actúa en este caso como una barrera
que evita cualquier difusión entre el medio interno, en el que se
encuentra el ácido salicílico y el medio externo en el que se ha
ajustado
el pH.
el pH.
\newpage
En este ejemplo se describe la preparación de
acuerdo con el procedimiento de la invención de una emulsión
cosmética, que contiene en forma de una dispersión compleja
vesículas multilamelares que encapsulan a un oligómero
procianidólico (OPC). Este compuesto es un potente
anti-radicalar, pero particularmente inestable, que
adquiere una coloración marrón bajo acción de la oxidación.
Los porcentajes son en masa.
Etapa
1
Esta es la etapa de la preparación de las
vesículas multilamelares que encapsulan al OPC.
- \ding{51}
- 40% de polialquilenglicol de tipo ELFACOS ST9 comercializado por AKZO NOBEL
- \ding{51}
- 10% de polisorbato 60
- \ding{51}
- 20% de aceite mineral
- \ding{51}
- 30% de solución acuosa que contiene el 10% de OPC.
Después de mezclar ELFACOS, polisorbato y el
aceite mineral, se añade la solución al 10% de OPC y después se
mezcla con una espátula durante de 10 a 15 minutos hasta la
obtención de una mezcla homogénea.
Se obtiene una crema espesa, fase concentrada en
vesículas multilamelares, que contiene el 3% de OPC.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
2
La formulación obtenida en la etapa 1,
constituida por una fase concentrada en vesículas multilamelares se
dispersa en un aceite mineral.
- \ding{51}
- 20% de la formulación 1
- \ding{51}
- 80% de aceite mineral.
La dispersión se realiza simplemente a
temperatura ambiente mediante incorporación lenta del aceite mineral
a la crema con agitación manual. La dispersión se mezcla a
continuación de 10 a 15 minutos con una barra imantada y un agitador
magnético.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
3
La dispersión oleosa de vesículas obtenida en la
etapa 2 se emulsiona en un medio acuoso. Para obtener la textura y
la estabilidad deseadas, se utiliza un agente gelificante de la fase
continua acuosa.
Se prepara una dispersión de polialquilenglicol
de tipo ELFACOS OW 100 al 1% que contiene el 1% de SEPIGEL 305
(mezcla de poliacrilamida, de isoparafina C13-14 y
de laureth 4, comercializada por la compañía SEPPIC). Esta
dispersión se obtiene incorporando el SEPIGEL a la dispersión de
tensioactivo, con agitación mecánica vigorosa.
\vskip1.000000\baselineskip
- \ding{51}
- 20% de la formulación obtenida en la etapa 2
- \ding{51}
- 80% de la dispersión de polialquilenglicol de tipo ELFACOS OW 100 al 1% que contiene el 1% de SEPIGEL.
La formulación obtenida en la etapa 2 se añade a
la dispersión de tensioactivos y de polímero con agitación
mecánica.
Se obtiene una crema blanca, de tacto untuoso,
estable a temperatura ambiente y que no muestra ninguna tendencia a
decantación o a la precipitación.
Como aparece en la figura 8, la observación con
microscopia óptica de luz polarizada permite demostrar la presencia
de las vesículas multilamelares en el interior de las gotas de
aceite.
\vskip1.000000\baselineskip
En este ejemplo, se utiliza la invención para
preparar microesferas de un polímero biodegradable el
poli-DL-láctido (Pla) de masa 43000
g/mol distribuido por la compañía PHUSYS.
Se prepara una fase concentrada de vesículas
multilamelares mediante la mezcla a temperatura ambiente de los
siguientes constituyentes:
- \ding{51}
- 40% de lecitina de soja
- \ding{51}
- 10% de oleato de sorbitano
- \ding{51}
- 50% de agua.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta fase concentrada se dispersa rápidamente en
una solución al 10% (en masa) de polímero en diclorometano. Esta
dispersión se realiza durante aproximadamente 1 minuto, para evitar
una degradación de las vesículas. La proporción entre la masa del
polímero en solución y la masa de las vesículas dispersadas es de
2.
Después esta dispersión orgánica se emulsiona al
3% en una solución acuosa que contiene el 1% en masa de alcohol
polivinílico de masa 30.000-70.000 distribuido por
la compañía SIGMA. Con ayuda de una barra magnética, se agita la
solución mientras se procede a la adición. Esta agitación se
prolonga durante de 2 a 3 horas sin tapar el frasco para evaporar el
disolvente orgánico.
Una vez finalizada la evaporación, pueden
observarse con microscopia óptica los objetos esféricos que no se
han destruido mediante la adición de detergentes como Triton X100
(SIGMA) o mediante la adición de una solución que contiene el 10%
de sal de desoxicolato (constituyente principal de las sales
biliares). Estos detergentes se conocen por disolver las
estructuras a base de lecitina. La resistencia a estos detergentes
de los objetos obtenidos en este ejemplo indica que la composición
externa de estas vesículas no es de fosfolípidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los negativos de microscopia electrónica de
transmisión muestran en el interior de las microesferas de polímero
la presencia de una masa oscura cuya composición no puede
determinarse, mientras que las microesferas vacías del mismo
polímero (preparadas a partir de una emulsión que no contiene las
vesículas multilamelares) muestran un núcleo que es transparente
mediante esta misma técnica de observación.
\vskip1.000000\baselineskip
Puede incorporarse en la fase lamelar inicial,
antes de la etapa de dispersión en la solución orgánica, un
colorante hidrófilo (azul de metileno). A continuación se procede a
la preparación de las microesferas de polímero Pla de acuerdo con
el mismo modo operatorio que anteriormente. Se obtienen a
continuación microesferas de polímero, que incorporan vesículas
multilamelares, que encapsulan el colorante.
La medición del rendimiento de encapsulación se
realiza dosificando mediante espectrofotometría de luz
UV/visi-
ble el colorante en el sobrenadante, después de la separación de las microesferas mediante centrifugado. Se descubre un rendimiento de encapsulación del 85% lo que demuestra que no se han degradado las vesículas durante la etapa de formación de las microesferas de polímero.
ble el colorante en el sobrenadante, después de la separación de las microesferas mediante centrifugado. Se descubre un rendimiento de encapsulación del 85% lo que demuestra que no se han degradado las vesículas durante la etapa de formación de las microesferas de polímero.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención puede utilizarse para encapsular un
antígeno para vectorizarlo y amplificar de este modo la respuesta
inmune. En este documento se demuestra que la utilización de una
dispersión compleja formada a partir de vesículas multilamelares
que encapsulan al antígeno permite amplificar considerablemente la
respuesta inmune.
El modelo seleccionado es albúmina de suero
humano (HSA) inyectada por vía subcutánea a ratones. La respuesta
inmune se mide mediante un ensayo ELISA que dosifica los anticuerpos
anti-HSA totales en el suero de los ratones.
\global\parskip0.890000\baselineskip
Las vesículas multilamelares se preparan a
partir de:
- \ding{51} Oleato potásico
- 5%
- \ding{51} Colesterol
- 5%
- \ding{51} Sulfato de colesterol
- 2,5%
- \ding{51} Alcohol laurílico etoxilado con óxido de etileno (laureth 4)
- 2%
- \ding{51} PBS 1x
- 20%
- \ding{51} HSA en solución a 20 mg/ml en PBS 1x
- 20%
- \ding{51} Fosfatidilcolina al 90% (PC90 Natterman)
- 45,5%
Los cinco primeros constituyentes se mezclan y
después se incuban durante 1 hora a 90ºC hasta la completa
desaparición de los cristales de colesterol y de sulfato de
colesterol. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se
incorpora lentamente la solución de HSA y después la
fosfatidilcolina. La mezcla se incuba durante 2 horas a 37ºC y
después se cizalla de forma manual durante 5 minutos.
La pasta concentrada obtenida se separa en dos
lotes antes de la dispersión. Se titula a 4 mg/g en HSA.
Un lote se dispersa al 5% mediante la adición de
tampón PBS acuoso. La concentración final de HSA es de 20 \mug por
100 \mul (el 0,02% en masa).
El otro lote se dispersa en un aceite mineral, a
razón de 200 mg de pasta por 0,8 ml de aceite. La dispersión se
obtiene añadiendo lentamente a temperatura ambiente el aceite
mineral en la pasta, con agitación manual.
Esta dispersión oleosa se emulsiona como se ha
descrito en el ejemplo 1, mediante la adición de la dispersión
oleosa en una solución acuosa de polialquilenglicol de tipo ELFACOS
OW 100 (AKZO NOBEL) al 1%, a razón de 0,25 ml de aceite por 0,75 ml
de solución acuosa. La mezcla se homogeneiza mediante agitación
vigorosa manual. El título final de HSA es de 20 \mug por 100
\mul de dispersión.
Las preparaciones se inyectan por vía subcutánea
a dos grupos de 4 ratones hembra BALB/c de una inyección a t = 0,
después una inyección a t = 10 días. Un grupo de control no recibe
inyecciones, un grupo recibe la dispersión acuosa y el otro grupo
recibe la dispersión compleja. Los ratones se sacrifican a t = 23
días, la sangre se extrae en tubos heparinizados y el suero se
aísla mediante centrifugado.
La dosificación de las inmunoglobulinas totales
se realiza mediante ensayo ELISA en estos sueros de acuerdo con un
protocolo convencional, utilizando inmunoglobulinas de conejo
anti-inmunoglobulinas de ratón, marcadas con
peroxidasa. Las inmunoglobulinas fijadas se revelan mediante la
adición del sustrato de la enzima que proporciona un producto
coloreado que absorbe a 490 nm. Para cada suero la reacción se
realiza en una serie de 12 diluciones de 1/25 a 1/(25 x
2^{11}).
La medición se realiza mediante la grabación de
la densidad óptica (DO), en función de la dilución del suero, a 490
nm. El umbral de resultados positivos se define como el valor medio
de la DO obtenido en la primera dilución (1/25) con los sueros de
los cuatro ratones de control no inyectados, con un aumento de t
veces la desviación típica de este valor medio, donde t es el valor
definido en el método de Student (Farmacopea Europea, métodos
estadísticos).
Los resultados se expresan en título medio
definido como el factor de dilución del suero para el que la DO
media de los cuatro ratones del grupo es superior al umbral de
resultado positivo. Se obtienen los siguientes títulos:
| Título medio de IgG totales | |
| HSA en PBS | 0 |
| Dispersión acuosa | 2870 |
| Dispersión compleja | 17900 |
Se constata por lo tanto una respuesta
importante a la dispersión acuosa, pero muy claramente superior
mediante la inyección de la formulación en dispersión compleja de
acuerdo con la invención.
Claims (24)
1. Medio complejo constituido por un primer
medio en forma de gotas que contiene una dispersión de una fase
liótropa formada por bicapas de tensioactivos, estando dichas gotas
en emulsión dentro de un segundo medio llamado fase continua no
miscible con el primer medio.
2. Medio complejo de acuerdo con la
reivindicación 1, caracterizado porque el tamaño de las gotas
del primer medio está comprendido entre 1 y 100 \mum,
preferiblemente entre 1 y 50 \mum.
3. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque dicha emulsión
contiene entre el 1 y el 90% en masa del medio dispersado en el
medio continuo.
4. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dichas gotas
contienen entre el 1 y el 90% en masa de fase liótropa formada por
bicapas de tensioactivos.
5. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicho primer
medio es un medio hidrófobo y dicha fase continua un medio
acuoso.
6. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicha fase de
dispersión de fase liótropa está en forma de una dispersión de
vesículas multilamelares, llamadas vesículas con estructura de
cebolla, de forma prácticamente esférica, constituidas por una
sucesión regular de bicapas concéntricas desde el centro a la
periferia de dichas vesículas.
7. Medio complejo de acuerdo con la
reivindicación 6, caracterizado porque dichas vesículas
multilamelares con estructura de cebolla, presentan dimensiones
comprendidas entre 0,1 y 20 \mum, preferiblemente entre 0,1 y 10
\mum.
8. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque está constituido
por una dispersión de vesículas multilamelares llamadas vesículas
con estructura de cebolla, de forma prácticamente esférica,
constituidas por una sucesión regular de bicapas concéntricas desde
el centro a la periferia de dichas vesículas, dentro de gotas de un
medio hidrófobo, estando dichas gotas en emulsión dentro de un medio
acuoso.
9. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la fase continua
contiene al menos un agente tensioactivo que permite la emulsión de
dichas gotas.
10. Medio complejo de acuerdo con la
reivindicación 9, caracterizado porque al menos uno de los
tensioactivos que permite la emulsión o que entra en la composición
de las bicapas es un tensioactivo que presenta una masa molar
superior a 1.000 Da, preferiblemente un tensioactivo de tipo
polímero.
11. Medio complejo de acuerdo con la
reivindicación 10, caracterizado porque dicho tensioactivo de
tipo polímero se selecciona entre poloxámeros, copolímeros de
polialquilenglicol y de alquilglicol, poliglicéridos, éteres de
alcoholes grasos y de polímeros de glicerol, ésteres de ácidos
grasos y de polietilenglicol, éteres de alcoholes grasos y de
polietilenglicol.
12. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque dicho primer
medio es un medio hidrófobo que contiene una sustancia que puede
solidificarse, espesarse, polimerizarse o precipitar o una solución
de dicha sustancia en un disolvente no miscible con agua que puede
evaporarse.
13. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque contiene al
menos un principio activo.
14. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque contiene al
menos un principio activo químico o biológico incorporado dentro de
dicha fase liótropa formada por bicapas lipídicas utilizada para la
preparación de dicha dispersión.
15. Medio complejo de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque al menos un
antígeno se incorpora dentro de dicha fase liótropa.
16. Procedimiento para la preparación de un
medio de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 15,
caracterizado porque comprende:
- la preparación de una fase liótropa formada
por bicapas de tensioactivos,
- la dispersión de esta fase en un primer
medio,
- la emulsión de la dispersión obtenida de este
modo en un segundo medio no miscible con el primer medio, por medio
de un tensioactivo, preferiblemente un tensioactivo de tipo
polímero, pudiendo uno o varios principios activos incorporarse en
la fase liótropa y/o en el primer medio y/o en el segundo medio.
17. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 16, caracterizado porque dicha fase liótropa
se dispersa en forma de vesículas multilamelares, llamadas vesículas
con estructura de cebolla, de forma prácticamente esférica,
constituidas por una sucesión regular de bicapas concéntricas desde
el centro a la periferia de dichas vesículas.
18. Procedimiento para preparar microesferas de
polímero que incorporan un principio activo, caracterizado
porque comprende:
- la preparación de una fase liótropa que
contiene dicho principio activo,
- la dispersión de esta fase en un medio
hidrófobo en el que se encuentra disuelto un monómero o un polímero
que puede reticularse o en un medio constituido por un disolvente
hidrófobo en el que se disuelve un polímero,
- la realización de una emulsión en forma de
gotas de dicha dispersión en un medio no miscible con el medio
hidrófobo anterior,
- la transformación de dichas gotas en granos
sólidos, respectivamente mediante polimerización del monómero o
reticulación del polímero o precipitación del polímero.
19. Microesferas de polímero que pueden
obtenerse mediante el procedimiento de acuerdo con la reivindicación
18.
20. Procedimiento para controlar la liberación
de un principio activo y/o protegerlo de una degradación,
caracterizado porque consiste en incorporar dicho principio
activo en una fase liótropa formada por bicapas de tensioactivos, en
dispersar dicha fase en un primer medio y en emulsionar dicho primer
medio en un segundo medio no miscible con dicho primer medio.
21. Utilización de un medio complejo de acuerdo
con una de las reivindicaciones 1 a 14 para realizar un medio que
presenta un diferencial de pH.
22. Utilización de un medio complejo de acuerdo
con una de las reivindicaciones 1 a 14 como base para una
composición tópica de uso cosmético o dermatológico.
23. Utilización de un medio complejo de acuerdo
con la reivindicación 15 para la preparación de una composición para
aumentar la respuesta inmune frente a dicho antígeno.
24. Utilización de acuerdo con la reivindicación
23, caracterizada porque dichas bicapas tienen forma de
vesículas multilamelares llamadas vesículas con estructura de
cebolla, de forma prácticamente esférica, constituidas por una
sucesión regular de bicapas concéntricas desde el centro a la
periferia de dichas vesículas.
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