ES2289544T3 - Oligonucleotido antisentido para inhibir la actividad inhibidora de melanoma mia. - Google Patents
Oligonucleotido antisentido para inhibir la actividad inhibidora de melanoma mia. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2289544T3 ES2289544T3 ES04763992T ES04763992T ES2289544T3 ES 2289544 T3 ES2289544 T3 ES 2289544T3 ES 04763992 T ES04763992 T ES 04763992T ES 04763992 T ES04763992 T ES 04763992T ES 2289544 T3 ES2289544 T3 ES 2289544T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- mia
- bases
- oligonucleotide
- antisense
- oligonucleotides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/311—Phosphotriesters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/312—Phosphonates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/312—Phosphonates
- C12N2310/3125—Methylphosphonates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3513—Protein; Peptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Un oligonucleótido antisentido seleccionado entre el grupo de - la secuencia 5'' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG- 3'' y modificaciones de ella, - un fragmento que tiene al menos 8 nucleótidos de la secuencia 5'' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG- 3'' y modificaciones de ella.
Description
Oligonucleótido antisentido para inhibir la
Actividad Inhibidora de Melanoma MIA.
La presente invención se refiere a un
oligonucleótido, o modificaciones de él, para la inhibición de la
expresión y/o actividad funcional de la "Actividad Inhibidora de
Melanoma" MIA, a una composición farmacéutica que comprende el
oligonucleótido o sus modificaciones y a su uso para la prevención o
el tratamiento de neoplasmas, infecciones y/o trastornos
inmunosupresores.
El polipéptido "Actividad Inhibidora de
Melanoma" MIA se descubrió en 1989 e inicialmente se describió
como un factor que inhibe el crecimiento de las células tumorales
de melanoma. La proteína de la actividad inhibidora de melanoma
(MIA) se identificó dentro de las actividades inhibidoras del
crecimiento purificada desde el material sobrenadante del cultivo
de células de la línea HTZ-19 de melanoma humano
(Bogdahn y otros, Cancer Res. 49:5358-5363, 1989).
Wellbach y otros demostraron además que MIA inhibe la proliferación
celular por prolongar la fase S y detener las células en el
compartimiento G2 (Cancer Res. 50; 6981-86, 1990).
La acción antiproliferativa de MIA se demostró también en otras
células tumorales y células mononucleares de sangre periférica
(PBMCs), en las que rMIA recombinante humana inhibía la
proliferación de PBMCs inducida por IL-2 o PHA de
manera dependiente de la dosis. Adicionalmente, MIA exhibía también
citotoxicidad LAK autogénica y halogénica (Jachimczak y otros,
Proceeding of AACR, 41:115, 2000).
Blesch y otros identificaron MIA como un
precursor de 131 aminoácidos procesado en una proteína madura de
107 aminoácidos. Esta publicación confirmó que MIA actúa como un
potente inhibidor del crecimiento de células tumorales para células
de melanoma maligno y además extendió esta observación a otros
tumores neuroectodérmicos. Los autores concluyeron que "...MIA
...puede ser atractiva como una sustancia terapéutica antitumoral
del futuro" (Cancer Res. 54; 5695-5701,
1994).
Sin embargo, otros estudios revelaron patrones
de expresión inconsistentes con un supresor de tumores. A
diferencia, Groningen y otros encontraron expresión de mRNA de MIA
en líneas de células sin metástasis y una correlación inversa de la
expresión de mRNA de MIA con pigmentación en lesiones con metástasis
de melanoma, pero se encontró que no había expresión notable en
líneas de células con alta metástasis (Cancer Res. 55;
6237-6243; 1995).
Más recientemente, Bosserhoff y otros han
observado que MIA inhibe específicamente la unión de células de
melanoma a fibronectina y laminina, enmascarando así los sitios de
unión de las integrinas a estos componentes de matriz extracelular
y promoviendo la invasión y metástasis in vivo (Bosserhof y
otros, Hautarzt 49, 762-769, 1998; Stoll y otros,
EMBO J 20, 340-349, 2001). Por tanto, la actividad
inhibidora del crecimiento in vitro puede reflejar la
capacidad de MIA de interferir con la unión de células a placas de
cultivo observada por Blesch y otros (Cancer Res. 54;
5695-5701, 1994).
Otros experimentos realizados en hamster por
Guba y otros (Brit. J. Cancer 83, 1216-1222, 2000)
analizaron el papel in vivo de MIA durante la metástasios de
melanoma. La expresión forzada de MIA en células de melanoma de
hamster A-mel3 transfectadas con MIA aumentó
significativamente su potencial metastático en comparación con
células transfectadas de control. Además, células que superexpresan
MIA presentaban una velocidad más alta tanto de invasión como
extravasación de células tumorales. Bosserhoff y otros confirmaron
estos resultados usando células de melanoma de ratón B16
transfectadas establemente con MIA (Bosserhoff y otros, Melanoma
Res. 11; 417-421, 2001). La capacidad de estas
células de formar metástasis de pulmón en ratones singénicos C57B16
se correlacionó estrictamente con el nivel de secreción de MIA en
ratones.
La correlación clínica de la expresión de MIA
con la progresión de melanoma fue descubierta por Bosserhoff y
otros (Cancer Res. 57; 3149-53, 1997) y confirmada
por otros (Stahlecker y otros, Anticancer Res. 19,
2691-3, 2000). 81% de lo sueros obtenidos de
pacientes con melanomas malignos con metástasis en la etapa III
reveló valores de MIA incrementados e incluso 97% de los sueros de
pacientes en la etapa IV. Los pacientes en la etapa I o II de la
enfermedad tenían niveles de MIA sólo ligeramente aumentados, de 13
y 23%, respectivamente (Bosserhoff y otros, Cancer Res. 57;
3149-53, 1997).
Además, hay evidencia de que MIA puede ser útil
como marcador en otros tipos de tumores malignos, puesto que
también se ha dado cuenta de seropositividad en algunos pacientes
con carcinoma gastrointestinal avanzado con un prognóstico muy
malo. (Wagner y otros, Med. Oncol. 1735-38; 2000).
Recientemente se han medido niveles de MIA en muestras de fluido
cerebroespinal de pacientes con enfermedades espinales (Natsume y
otros, Spine 26(2), 157-60, 2001).
La concentración de MIA en la mielopatía
cervical, estenosis de canal lumbar y hernia de disco lumbar era
significativamente más alta que en el grupo de control. Es
interesante que MIA no se expresa en el sistema nervioso central en
condiciones fisiológicas.
Además, en experimentos de hibridación in
situ, la inmunohistoquímica localiza MIA en el embrión en
desarrollo dentro de la zona de crecimiento del sistema esquelético
y se está expresando, secretando y depositando en torno a los
condrocitos. Adicionalmente, se expresa patológicamente en el
condrosarcomo (Bosserhoff y otros, Dev Dyn 208(4):
516-525, 1997).
Muller-Ladner y otros
encontraron concentraciones aumentadas de MIA en pacientes con
enfermedades reumáticas con destrucción de articulaciones,
osteoartritis, oligoartritis asociada a HLA-27,
artritis psoriática.
Puesto que se encontraron niveles altos de MIA
en condrocitos, se investigó MIA también como marcador potencial
para la artritis reumatoide y lesión de cartílago.
Muller-Ladner y otros encontraron concentraciones
aumentadas de MIA en suero en pacientes con enfermedades reumáticas
con destrucción de articulaciones, osteoartritis, oligoartritis
asociada a HLA-27, artritis psoriática y artritis
reumatoide, en las que se encontró el más significativo aumento de
MIA (Muller-Ladner y otros, Rheumatology 38,
148-154, 1999).
Sin embargo, en el caso de los tumores, se
encontró que MIA se expresa y secreta al suero por todos los
melanomas malignos examinados, pero no en otros tumores de piel,
incluidos cáncer basal de células y cáncer escamoso de células, ni
en melanocitos y queratinocitos normales (Bosserhoff y otros, J.
Pathol 187(4):446-454, 1999). Además, se
encontró expresión de MIA en todos los cánceres de mama en etapa
avanzada y metástasis analizados, lo que sugiere una expresión
mucho más amplia de MIA en neoplasmas epiteliales que la determinada
anteriormente por estudios del suero (Bosserhoff y otros, J.
Pathol. 187(4): 446-454, 1999).
Las moléculas para la inhibición de la expresión
y/o actividad funcional de MIA se han publicado en el documento WO
01/68122. La inhibición se logra usando como mínimo una molécula de
ácido nucleico, péptido, proteína o sustancia de bajo peso
molecular en la que la molécula de ácido nucleico es una molécula
antisentido y/o un ribozima. La solicitud de patente anterior se
refiere a moléculas, incluidos oligonucleótidos, capaces de inhibir
la expresión y/o función de MIA invirtiendo así la inmunosupresión
(WO 01/68122).
Era objetivo de la invención desarrollar
oligonucleótidos antisentido de MIA con mayor eficacia.
La presente invención se refiere a
oligonucleótidos antisentido con la secuencia siguiente: 5' - TTG
CAT AAA CCC AAG GAG - 3', modificaciones suyas, partes del
oligonucleótido antisentido con al menos 8 nucleótidos y/o
modificaciones suyas. Presentan una inhibición sorprendentemente más
eficaz de la expresión y/o función de la invasión tumoral y/o la
inhibición de la metástasis y una estimulación más eficaz de células
inmunes y/o el sistema inmune que los oligonucleótidos antisentido
de la técnica anterior. La presente invención corresponde también a
una composición farmacéutica que comprende como mínimo uno de los
oligonucleótidos antisentido o sus modificaciones y a su uso para
la prevención o el tratamiento de neoplasmas, infecciones y/o
trastornos inmunosupresores.
Aunque hasta el momento se han ensayado varios
de los nucleótidos (véase documento WO 01/68122), el oligonucleótido
con la secuencia 5' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG - 3' presentó
sorprendentemente la inhibición más fuerte de MIA en comparación
con los oligonucleótidos antisentido de la solicitud de patente WO
01/68122 con la ID secuencia n^{os} 1-8.
En una realización de la invención, el
oligonucleótido que tiene la secuencia 5' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG
- 3' o sus modificaciones tiene una estructura de tipo DNA o RNA
capaz de hibridar con una zona de la región de gen que codifica MIA
reduciendo así y/o inhibiendo la expresión de MIA. Las personas
expertas en la técnica entenderán también que fragmentos que tienen
subsecuencias del nucleótido antisentido dada antes con como mínimo
8 nucleótidos o modificaciones de ella actúen de acuerdo con la
invención en tanto que se reduzca o inhiba a producción de MIA.
En lo que sigue, el oligonucleótido con la
secuencia 5' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG - 3' y los oligonucleótidos
antisentido que representan partes de esta secuencia con como mínimo
8 nucleótidos se denominan oligonucleótidos antisentido.
En otra realización de la invención, los
oligonucleótidos antisentido se modifican en uno o más restos de
azúcar, las bases y/o las uniones internucleótidos así como los
restos de fosfato. Por ejemplo, las modificaciones de los
oligonucleótidos comprenden modificaciones tales como uniones
internucleótidos de fosforotioato (S-ODN), uniones
internucleótidos de metilfosfonato, uniones fosforoamidato, uniones
peptídicas, modificaciones
2'-O-alquilo del azúcar, en
particular de metilo, etilo, propilo, butilo, etc., modificaciones
2'-metoxietoxi del azúcar y/o modificaciones de las
bases. Las varias modificaciones se pueden combinar en un
oligonucleótido.
En una realización, la estructura anular del
grupo ribosa de los nucleótidos en el oligonucleótico o
polinucleótido modificado tiene el oxígeno en la estructura anular
con N-H, N-R, S y/o metileno.
En otras realizaciones, las modificaciones del
esqueleto incluyen
2'-O-metilrribonucleósidos
(2'-O-Me). Estos tipos de
sustituciones se describen extensamente en la bibliografía y, en
particular, con respecto a sus propiedades inmunoestimuladoras, por
Zhao y otros, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 1999,
9:24:3453. Zhao y otros describen procedimientos para preparar
modificaciones 2-0-Me en ácidos
nucleicos, que se incorporan a esta memoria por referencia.
En otras realizaciones más, con el fin de
intensificar la resistencia a exonucleasa de oligonucleótidos y
polinucleótidos 2'-sustituidos, preferiblemente, los
extremos 3' y/o 5' de la secuencia de oligorribonucelótidos se unen
a grupos de bloqueo de exonucleasa.
Una lista parcial de grupos de bloqueo incluye
bases invertidas, nucleótidos 2'- o
3'-O-arilo (pereferiblemente, el
arilo es metilo, etilo o propilo), didesoxinucleótidos,
metilfosfatos, grupos alquilo, grupos arilo, cordicepina,
citosinaarabanósido, fosforamidatos, una unión pèptídica, grupo
dinitrofenilo, fluoresceína, colesterol, biotina, análogos de
biotina, avidina, análogos de avidina, estrepavidina, acridina,
rodamina, psolareno, glicerilo, fosfonatos de metilo, butanol,
butilo, hexanol y 3'-O-alquilos.
En una realización preferente, al menos un grupo
de bloqueo es una biotina, un análogo de biotina o análogo de
avidina. Estas moléculas tienen la capacidad de (1) bloquear la
degradación del oligonucleótido o polinucleótido protegido y (2)
proporcionar medios para la unión por alta afinidad de los ácidos
nucleicos modificados al soporte sólido. Entre los derivados de
avidina y biotina que se pueden usar para preparar los reactivos de
esta invención están incluidos estreptavidina, avidina succinilada,
avidina monómera, biocitina (bitin-,
epsilon.-N-lisina), hidrazida de biocitina,
derivados amina o sulfhidrílicos de 2-iminobiotina e
hidrazide del ácido biotinil-epsilon.-aminocaproico.
También se pueden usar como grupos terminales de bloqueo sobre los
polinucleótidos de la presente invención otros derivados más de
biotina, tales como éster de
biotin-N-hidroxisuccinimida, éster
de biotinil-, epsilon.-ácido
aminocaproico-N-hidroxisuccinimida,
6-(biotinamido)hexanoato de sulfosuccinimidilo,
N-hidroxisuccinimidaiminobiotina,
biotinbromoacetilhidrazida, p-diazobenzoilbiocitina
y
3-(N-maleidopropionil)-biocitina.
En una realización preferente, al menos un
bloque terminal del oligonucleótido es una biotina, un análogo de
biotina, avidina o análogo de avidina. Estas moléculas tienen la
capacidad de (1) bloquear la degradación del oligonucleótido o
polinucleótido protegido y (2) proporcionar medios para una unión
por alta afinidad de los ácidos nucleicos modificados al soporte
sólido. Entre los derivados de avidina y biotina que se pueden usar
para preparar los reactivos de esta invención están incluidos
estreptavidina, avidina succinilada, avidina monómera, biocitina
(bitin-, epsilon..N-lisina), hidracida de biocitina,
drivados amina o sulfhidrílcos de 2-iminobiotina e
hidrazide del ácido biotinil-epsilon.-aminocaproico.
También se pueden usar como grupos terminales de bloqueo sobre los
polinucleótidos de la presente invención otros derivados más de
biotina, tales como éster de
biotin-N-hidroxisuccinimida, éster
de biotinil-, epsilon.-ácido
aminocaproico-N-hidroxisuccinimida,
6-(biotinamido)hexanoato de
sulfosuccin-imidilo,
N-hidroxisuccinimidaiminobiotina,
biotinbromoacetilhidrazida,
p-diazo-benzoilbiocitina y
3-(N-meleidopropionil)-biocitina.
En una realización preferente, los
oligonucleótidos antisentido o una de sus modificaciones eficaces es
un oligodesoxinucleótido fosforotioato.
Los expertos en la técnica conocen
procedimientos para sintetizar oligonucleótidos antisentido de la
invención. El principio de un posible procedimiento de síntesis
emplea síntesis en fase sólida usando química de triéster fosfito
haciendo crecer la cadena de nucleótido en la dirección 3'
\rightarrow 5', y se describe seguidamente:
El nucleótido respectivo se acopla al primer
nucleósido que se une por covalencia a la fase sólida comprendiendo
las etapas siguientes:
- (a)
- escisión del grupo protector 5'DMT del nucleótido previo,
- (b)
- adición del nucleótido respectivo para propagación de la cadena,
- (c)
- modificación del grupo fosfito y posterior remate de grupos 5'-hidroxilo que no han reaccionado,
- (d)
- ciclos repetitivos de (a) a (c) para el oligonucleótido de cadena entera,
- (e)
- escisión del oligonucleótido del soporte sólido,
- (f)
- elaboración del producto de síntesis.
Los aril- y alquil-fosfonatos se
pueden preparar, por ejemplo, como se describe en la patente U.S.
nº. 4.469.863; y los alquilfosfotriésteres (en los que el resto
cargado de oxígeno está alquilado como se describe en la patente
U.S. nº. 5.023.243 y la patente europea nº. 092.574) se pueden
preparar por síntesis automatizada en fase sólida usando reactivos
disponibles comercialmente.
Se han descrito procedimientos para hacer otras
modificaciones y sustituciones del esqueleto de DNA (Uhlmann, E. Y
Peyman, A., Chem. Rev. 90:544, 1990; Goodchild, J., Bioconjugate
Chem. 1:165, 1990).
Entre otros procedimientos adicionales para
convertir en resistentes a la nucleasa oligonucleótidos o
polinucleótidos están incluidos, aunque no únicamente, la
modificación por covalencia de bases de purina o pirimidina. Por
ejemplo, las bases se pueden metilar, hidroximetilar o sustituir de
otra manera (por ejemplo, glicosilar) de manera que los
oligonucleótidos o polinucleótidos se conviertan en sustancialmente
resistentes a ácidos y nucleasa.
Otras bases heterocíclicas representativas se
describen en la patente U.S. nº. 3.687.808, expedida a Merigan y
otros. Los términos "purinas" o "pirimidinas" o
"bases" se usan aquí para referirse a purinas, pirimidinas o
bases naturales o sintéticas.
La estructura química de oligonucleótidos y sus
modificaciones se indican en la Figura 2. La cadena del
oligonucleótido ha de entenderse como un detalle fuera de una
cadena de nucleótido más larga.
En la Figura 2a lit. B significa una base
orgánica tal como adenina (A), guanina (G), citosina (C) o timina
(T) (presentadas en la Fig 2b) en
oligodesoxi-ribonucleótidos y las bases adenina (A),
guanina (G), citosina (C), uracilo (U) (presentadas en la Figura
2C) en oligo-ribonucleótidos. Las bases se acoplan a
través del nitrógeno N9 en el caso de las bases A y G o a través
del nitrógeno N1 en el caso de las bases C, T y U a la
desoxirribosa o ribosa, respectivamente. La secuencia de las bases
es el complemento inverso de la secuencia genética diana de
MIA.
Las modificaciones de los
oligodesoxi-ribonucleótidos y
oligo-ribo-nucleótidos de la Fig. 2a
son las siguientes, designándose en ellas oligonucleótidos tanto
los oligodesoxi-ribonucleótidos como los
oligo-ribonucleótidos:
1. Oligonucleótidos en los que todos los R^{1}
son
- 1.1
- R^{1} = O^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- 1.2
- R^{1} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- 1.3
- R^{1} = CH_{3},
- 1.4
- R^{1} = C_{2}H_{5},
- 1.5
- R^{1} = OCH_{3} o
- 1.6
- R^{1} = OC_{2}H_{5}.
2. Oligonucleótidos en los que R^{1} varía en
los fosfatos internucleótidos dentro del oligonucleótido. En la
fórmula siguiente, R^{1} de la Figura 2a se designa R^{1a} o
R^{1b},
en la
que
B= una de las bases A, C, G o T en
oligodesoxi-ribonucleótidos o, consecuentemente, las
bases A, C, G o U en oligo-ribonucleótidos,
p= fosfato internucleótido,
(B-p)_{n} = un tramo de
oligodesoxi-ribonucleótido u
oligo-ribonucleótido en el que
n= 1-12, preferiblemente
2-11,
R^{1a}, R^{1b} se seleccionan entre el grupo
de
- 2.1
- R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- \quad
- R^{1b} = O^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- 2.2
- R^{1a} = CH_{3},
- \quad
- R^{1b} = O^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- 2.3
- R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- \quad
- R^{1b} = CH_{3},
- 2.4
- R^{1a} = CH_{3},
- \quad
- R^{1b} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+}.
3. Oligodesoxi-ribonucleótidos
en los que R^{1} es alternativo en los fosfatos internucleótidos
dentro de un oligonucleótido. En la fórmula siguiente, R^{1} de
la figura 2a se designa R^{1a} o R^{1b}.
en la
que
B= una de las bases A, C, G o T comprendidas en
oligodesoxi-ribonucleótidos o, consecuentemente, las
bases A, C, G o U comprendidas en
oligo-ribonucleótidos dependiendo de la secuencia de
genes ,
p= fosfato internucleótido,
(B-p-B-p)_{n}
= un tramo de oligodesoxi-ribonucleótido u
oligo-ribonucleótido en el que n =
2-8, preferiblemente 3-7,
R^{1a}, R^{1b} se seleccionan entre el grupo
de
- 3.1
- R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- \quad
- R^{1b} = O^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- 3.2
- R^{1a} = CH_{3},
- \quad
- R^{1b} = O^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- 3.3
- R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
- \quad
- R^{1b} = CH_{3}.
4. Oligonucleótidos o modificaciones de ellos,
en los que R^{2} es H o colesterol acoplado covalentemente,
poli-(L)lisina o transferrina.
5. Oligonucleótidos o modificaciones de ellos,
en los que R^{3} es H o colesterol acoplado covalentemente,
poli-(L)lisina o transferrina.
6. Cualquiera de las modificaciones descritas en
1.1-1,6; 2.1-2,4;
3,1-3,3; 4,5 en las que todos los R^{4} se
seleccionan entre el grupo constituido por:
- 6.1
- R^{4} = H,
- 6.2
- R^{4} = F,
- 6.3
- R^{4} = CH_{3},
- 6.4
- R^{4} = C_{2}H_{5},
- 6.5
- R^{4} = OH,
- 6.6
- R^{4} = OCH_{3},
- 6.7
- R^{4} = OC_{2}H_{5}.
Las modificaciones de oligonucleótidos
antisentido son ventajosas puesto que no son destruidas tan
fácilmente por factores endógenos cuando se aplican, como es válido
para secuencias de nucleótidos naturales. Sin embargo, una persona
experta entiende que también se pueden usar de acuerdo con la
invención los oligonucleótidos naturales que tienen una de las
secuencias descritas. En una realización muy preferente, la
modificación es una modificación de fosforotioato.
Entre varios procedimientos de síntesis de
oligodesoxi-nucleótidos conocidos por los expertos
en la técnica, seguidamente se describe más detalladamente un
ejemplo de posible procedimiento.
Se sintetizan
oligodesoxi-nucleótidos en etapas mediante adición
5' de nucleótidos protegidos usando química de triester fosfito. El
nucleótido A se introduce como
5'-dimetoxitritil-desoxiadenosina
(N^{4}-benzoil)-N,N'-diisopropil-2-cianoetil
fosforoamidita); se introduce el nucleótido C por una
5'-dimetoxi-tritildesoxicitidina(N^{4}-benzoil)-N,N'-diisopropil-2-cianoetil
fosforoamidita; el nucleótido G se introduce como
5'-dimetoxitritil-desoxiguanosina(N^{8}-isobutiril)-N,N'-diisopropil-2-cianoetil
fosforoamidita y el nucleótido T se introduce como
5'-dimetoxitritil-desoxitimidina-N,N'-diisoproil-2-cianoetil
fosforoamidita. Los nucleótidos se aplican preferiblemente en una
concentración 0,1 M disueltos en acetonitrilo.
La síntesis se puede realizar, por ejemplo,
sobre partículas de vidrio de poro controlado, de aproximadamente
150 mm de diámetro (diámetro de poro 500 \ring{A}) a los que se
une covalentemente el 3'-nucleósido mediante un
conector de alquilamina de cadena lineal (carga media, 30 \mumol/g
de soporte sólido de síntesis).
El soporte sólido de síntesis se carga en una
columna cilíndrica de síntesis rematada en ambos extremos con
filtros que permiten una corriente adecuada de reactivos pero que
retienen el soporte sólido de síntesis. Los reactivos se
suministran y eliminan desde la columna de síntesis usando una
presión positiva de gas inerte. Los nucleótidos se añaden a la
cadena de oligonucleótido en crecimiento en la dirección 3'
\rightarrow 5'. Cada nucleótido se acopla usando una vuelta del
siguiente ciclo de síntesis:
Se realiza con ácido
3-cloroacético en diclorometano la escisión del
grupo protector 5'DMT (dimetoxitritilo) del nucleótido previo y
seguidamente se lava la columna con acetonitrilo anhidro. Luego se
añade una de las bases en forma de su derivado protegido
dependiendo de la secuencia más tetrazol en acetonitrilo. Después
de la reacción, se separa la mezcla de reacción y el fosfito se
oxida con una mezcla de azufre (S_{8}) en disulfuro de
carbono/piridina/trietilamina. Después de la reacción de oxidación,
se retira la mezcla y se lava la columna con acetonitrilo. Los
grupos 5'-hidroxilo que no han reaccionado se
rematan añadiendo simultáneamente 1-metilimidazol y
anhídrido acético/lutidina/ tetrahidrofurano. Luego se lava la
columna con acetonitrilo y se inicia el ciclo siguiente.
El proceso de elaboración y purificación de los
productos de síntesis se puede realizar como sigue:
Después de añadir el último nucleótido, se
escinden los desoxinucleótidos del soporte sólido por incubación en
solución de amoniaco. Se eliminan los grupos protectores de bases
exocíclicas por más incubación en amoniaco. Luego se evapora el
amoniaco en vacío. Los productos de síntesis de longitud entera que
todavía tienen el grupo protector 5'DMT se separan de los
contaminantes de fallo más corto usando cromatografía de líquidos
de alta resolución en fase inversa (HPLC) en fase estacionaria
C_{18}. Se recogen los eluyentes del pico de producto, se secan
en vacío y el grupo protector 5'-DMT se escinde por
incubación en ácido acético, que luego se evapora en vacío. Los
productos de síntesis se disuelven en agua desionizada y se someten
tres veces a extracción con dietil éter. Luego se secan los
productos en vacío. Se realiza otra cromatografía
HPLC-AX (HPLC-intercambio aniónico)
y los eluyentes del pico de producto se dializan frente a un exceso
de tampón Tris y se dializan una segunda vez frente a agua
desionizada. Los productos finales se liofilizan y almacenan en
seco.
Ha de entenderse que éste es un posible
procedimiento para la síntesis de
fosforotioato-oligodesoxinucleótidos. Es evidente
que los expertos en la técnica idearán mejoras y modificaciones de
la descripción dada y que seguirán incluidas en el ámbito de la
invención.
Los procedimientos para la síntesis de
oligo-ribonucleótidos son conocidos por los expertos
en la técnica. Un posible procedimiento utilizando química de
2'-ACE RNA es descrito por Scaringe, S.A., RNA
Oligonucleotide Síntesis via
5'-Silyl-2'-Orthoester
Chemistry, Methods 23, 206-217, 2001).
Se entiende que éste es un posible procedimiento
para la síntesis de oligo-ribonucleótidos. Es
evidente que los expertos en la técnica idearán mejoras y
modificaciones de la descripción dada.
En una realización, los oligonucleótidos
antisentido o sus modificaciones se pueden usar para la estimulación
del sistema inmune por inhibir la expresión y/o la actividad
funcional de "Actividad Inhibidora de Melanoma" MIA.
En otra realización, los oligonucleótidos
antisentido o sus modificaciones se usan en una combinación con al
menos una de las moléculas, virus, péptidos y/o extractos de células
indicadas en la siguiente lista de (a) a (m):
- (a)
- moléculas seleccionadas entre el grupo constituido por qumioquinas, incluidas linfotactina y/o factores de atracción de células inmunes;
- (b)
- virus y/o partes de virus, incluidos adenovirus, papiloma virus, virus de Epstein-Barr, virus que no son patógenos, incluidos virus de la enfermedad de Newcastle, virus de vacuna de viruela;
- (c)
- moléculas de MCH-autólogas y/o heterólogas;
- (d)
- moléculas implicadas en el procesamiento de antígenos;
- (e)
- moléculas implicadas en la presentación de antígenos;
- (f)
- moléculas implicadas en la mediación de efectos de células inmunes;
- (g)
- moléculas implicadas en la mediación de efectos citotóxicos de células inmunes;
- (h)
- moléculas implicadas en el transporte de antígenos;
- (i)
- moléculas coestimulantes:
- (j)
- péptidos que intensifican el reconocimiento por efectos de células inmunes y/o citotóxicos de células inmunes;
- (k)
- péptidos que contienen uno o más aminoácidos que difieren entre una proteína de la célula diana y otras células dentro de un organismo, incluidos, no limitativamente, antígenos, específicos para células de melanoma y/o melanocitos y/o células de mama y/o células de cáncer de mama; de acuerdo con la invención, la inhibición de las síntesis y/o la función de MIA se logra usando una molécula del grupo I), en la que
- (l)
- moléculas seleccionadas entre el grupo constituido por
- -
- péptidos que contienen una o más mutaciones y/o sustituciones de aminoácidos de la aminoproteína Ras, la proteína p53, la proteína receptora de EGF, péptidos de fusión y/o proteínas de fusión, la proteína de riboblastoma, péptidos que contienen una o más mutaciones y/o sustituciones de aminoácidos causadas por reordenación de genes y/o translocaciones de genes, péptidos que contienen una o más mutaciones y/o sustituciones de aminoácidos de proteínas codificadas por oncogenes y/o protooncogenes, proteínas codificadas por antioncogenes y/o genes supresores de tumores;,
- -
- péptidos derivados de proteínas que difieren en la célula diana en un aminoácido o en aminoácidos de las proteínas expresadas por otras células en el mismo organismo;
- -
- péptidos derivados de antígenos virales y/o codificados por ácidos nucleicos virales;
- -
- péptidos derivados de proteínas superexpresadas en la célula diana en comparación con una célula normal,
- -
- y combinaciones de ellos.
- (m)
- extractos de células tumorales y/o lisados de células tumorales y/o coadyuvantes.
Las moléculas, incluido al menos un
oligonucleótido antisentido, virus, péptidos y/o extractos de
células mencionados en (a) a (m) se pueden aplicar por los
siguientes procedimientos, no estando limitada la aplicación a
estos procedimientos:
- -
- por vacunación a un organismo humano con codificación de DNA y/o RNA para la totalidad o parte de las moléculas indicadas de (a) a (m) y/o polipéptidos contenidos en las moléculas indicadas de (a) a (m);
- -
- por transfección de un organismo humano y/o transfectando las células diana y/o patógenos diana con genes que codifican las moléculas indicadas de (a) a (m);
- -
- parenteralmente por inyección o infusión intravenosa, intraarterial, subcutánea, subcutánea, intraperitoneal o intramuscuñlar y/o localmente por administración oral, epidérmica o transdérmica.
En otra realización, los oligonucleótidos o sus
modificaciones se pueden combinar con un agente inmunoestimulante
seleccionadom entre el grupo de citoquinas, y/o inhibidores de la
expresión y/o función de interleuquina-10 y/o el
factor beta transformante del crecimiento
(TGF-\beta) y/o prostaglandina B2 y/o receptores
de prostaglandina E2 y/o inhibidores de VEGF.
En otra realización, los oligonucleótidos
antisentido o sus modificaciones se pueden combinar con al menos
una de las siguientes moléculas, procedimientos, péptidos y/o
extractos de células:
- -
- moléculas que intensifican la respuesta inmune frente a células enfermas o patógenos;
- -
- procedimientos y/o moléculas que intensifican la inmunogenia de células diana y/o patógenos diana;
- -
- moléculas inmunoestimulantes, comprendidas citoquinas que incluyen interleuquinas, tales como IL-1, IL-2, IL-4, IL-12, IL-18;
- -
- procedimientos para intensificar la expresión de citoquinas en células diana o patógenos por estimular su expresión y/o por transfectar sistemas de expresión en la célula diana o el patógeno diana, capaces de expresar estas citoquinas y/o
- -
- quimioquinas que atraen células inmunes, incluida linfotactina;
- -
- procedimientos para intensificar la expresión de quimioquinas en células diana o patógenos por estimular su expresión y/o por transfectar sistemas de expresión en la célula diana y/o el patógeno diana, capaces de expresar estas quimioquinas;
- -
- péptidos y/o moléculas de DNA y/o RNA y/u otros antígenos que se encuentran en células de tumores y/o patógenos, pero no en células normales;
- -
- procedimientos para intensificar la expresión de péptidos y/o antígenos que se encuentran en células de tumores y/o patógenos, pero no en células normales;
- -
- extractos de células de tumores y/o lisados de células de tumores y/o coadyuvantes.
Estas moléculas, en las que está incluidos al
menos un oligonucleótido antisentido, péptidos y/o extractos de
células se pueden aplicar parenteralmente por inyección o infusión
intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, subcutánea o
intramuscular, y/o localmente, por administración oral, epidérmica,
intradérmica y transdérmica. Los sujetos preferidos para
administración son mamíferos, muy preferentemente los sujetos son
seres humanos.
En otra realización, las secuencias de
codificación de los oligonucleótidos se integran en un sistema de
suministro de DNA que comprende vectores virales y/o no virales
junto con lípidos seleccionados entre el grupo de lípidos
aniónicos, lípidos catiónicos, lípidos no catiónicos y mezclas de
ellos.
Los oligonucleótidos antisentido pueden contener
así secuencias flanqueantes y/o secuencias de vectores y/o
secuencias que intensifican la expresión y/o transfección de las
moléculas de ácido nucleico.
En una realización preferente de la invención,
las secuencias de codificación de los oligonucleótidos antisentido
son parte de uno o más vectores y/o secuencias virales y/o vectores
virales.
En otra realización de la invención, los
oligonucleótidos antisentido o sus modificaciones están acoplados o
mezclados con ácido fólico, hormonas, hormonas esteroides tales como
estrógeno, progesterona, corticoesteroides, corticoides minerales,
péptidos, proteoglicanos, glicolípidos, fosfolípidos y derivados de
ellos.
En otra realización más, los oligonucleótidos o
sus modificaciones se pueden usar para la preparación de un
medicamento.
En una realización más preferida, los
oligonucleótidos antisentido se combinan con uno o más de los
agentes inmunoestimulantes antes mencionados para la preparación de
un medicamento, medicamento que se puede aplicar local o
sistémicamente a un tumor u otro sitio u órgano afectado
patológicamente.
En otra realización, el medicamento se usa para
la prevención o el tratamiento de neoplasmas o trastornos
seleccionados entre el grupo de melanomas, carcinoma
gastrointestinal, cáncer de mama, cáncer de páncreas, carcinoma de
ovario, condrosarcoma, enfermedades espinales, mielopatía cervical,
estenosis de canal lumbar, hernia de disco lumbar, artritis
reumatoide, osteoartritis, oligoartritis asociada a
HLA-27, artritis psoriática y artritis reumatoide,
lesión de cartílago y/o destrucción de articulación.
La cantidad eficaz del oligonucleótido aplicado
varía dependiendo de si la composición farmacéutica se usa en
unidosis o en dosis múltiples y de si en la composición farmacéutica
hay sólo un oligonucleótido antisentido o varios.
Las dosis dadas en esta memoria son para
adultos. Un experto sabe que estas dosificaciones se han de adaptar
si el ser humano es un niño, una persona afectada por otra
enfermedad o por otras circunstancias.
La dosis eficaz depende también del
procedimiento y el medio de administración.
Entre las vías de administración están
incluidas, no limitativamente, la electrocorporación, la epidérmica,
impresión en la piel, intraarterial, intrabucal, intracraneal,
intradérmica, intralesiva, intramuscular, intranasal, intraocular,
intraperitoneal, intraprostática, intrapulmonar, intraespinal,
intratecal, intratraqueal, intratumoral, intravenosa, intravesical,
colocación en cavidades del cuerpo, inhalación nasal, oral,
inhalación pulmonar (por ejemplo, por inhalación o insuflación de
polvos o aerosoles, incluida mediante nebulizador), subcutánea,
subdérmica, tópica (incluido el suministro oftálmico y a membranas
de mucosas, incluido el suministro vaginal y el rectal) y
transdérmica.
En una realización, las dosis para personas de
los oligonucleótidos descritos típicamente varían de aproximadamente
0,05 \mug/kg a aproximadamente 500 mg/kg, preferiblemente de
aproximadamente 1 \mug/kg a aproximadamente 100 mg/kg y, más
preferiblemente, de aproximadamente 100 \mug/kg a aproximadamente
50 mg/kg por administración, que se puede realizar cada hora,
diariamente, semanalmente o mensualmente y en cualquier otra cuantía
de tiempo intermedia dependiendo del modo de aplicación.
En algunas realizaciones, sin embargo, se pueden
usar dosis en un intervalo incluso de 2 a 100 veces más alto o más
bajo que las dosis típicas antes descritas. Por ejemplo, para
administración oral, el límite superior de las dosis dadas antes
puede ser de hasta 1 mg/kg o incluso de hasta 5 mg/kg.
En unas realización, la aplicación de la
solución del oligonucleótido se realiza en infusión continua; en
otra realización, se aplican varias soluciones como bolus o
infusiones de la solución a corto plazo. Las dosis de los
oligonucleótidos administrados por infusión típicamente están en el
intervalo de aproximadamente 0,05 \mug/kg a aproximadamente 100
mg/kg, más preferiblemene de aproximadamente 1 \mug/kg a
aproximadamente 50 mg/kg y, muy preferiblemente, de aproximadamente
100 \mug/kg a aproximadamente 30 mg/kg/ al día. En algunas
realizaciones, la infusión o la inyección de bolus se repite
aproximadamente de 1 a 100 veces o incluso más, preferiblemente de
aproximadamente 3 a 30 veces y, más preferiblemente, de 5 a
aproximadamente 10 veces.
Infusión a corto plazo significa, en el contexto
de esta solicitud, infusiones de aproximadamente 0,1 h a
aproximadamente 4 h, más preferiblemente de aproximadamente 0,5 h a
aproximadamente 3 h y, muy preferiblemente, de aproximadamente 1 h
a aproximadamente 2 h.
Infusión continua significa, en el contexto de
esta solicitud, infusiones de aproximadamente 5 h hasta
aproximadamente 24 h, varios días, semanas o incluso meses.
Las infusiones continuas en realizaciones
especiales se repiten aproximadamente 1 a 100 veces o incluso más;
en otras realizaciones se repiten aproximadamente de 3 a 30 veces y,
en otras realizaciones más, de aproximadamente 5 a aproximadamente
10 veces.
En algunas realizaciones, durante el tiempo en
que no se aplica solución de oligonucleótido, se aplican soluciones
isotónicas tales como solución estándar de infusión, por ejemplo,
solución de cloruro sódico al 0,9%, solución
Ringer-lactato, dextranos, etc.
Hay revisiones detalladas de dosis en terapia
antisentido, por ejemplo, en Flaherty Current Opinión in Oncology
2001, 13:499-505, que se incorpora a esta memoria
por referencia.
Los oligonucleótidos de esta invención se
aplican en forma pura o en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En el contexto de esta invención, vehículo farmacéuticamente
aceptable significa cualquier composición o formulación
farmacéutica adecuada para la administración de
oligonucleótidos.
En algunas realizaciones, las composiciones y
formulaciones para administración oral incluyen polvos o gránulos,
suspensiones o soluciones en agua o en medio no acuoso, cápsulas,
saquitos o comprimidos.
En otras realizaciones, en las composiciones y
formulaciones para aplicación parenteral, los oligonucleótidos
están disueltos en soluciones acuosas estériles que también pueden
contener tampones, diluyentes u otros aditivos adecuados, por
ejemplo, compuestos vehículo, otros vehículos o excipientes
farmacéuticamente aceptables.
En otras realizaciones más, las composiciones y
formulaciones para administración tópica incluyen parches
transdérmicos, ungüentos, lociones, gotas, cremas, geles, esprays,
líquidos y polvos.
En otras realizaciones, las composiciones y
formulaciones farmacéuticas para administración rectal incluyen
ungüentos, cremas, geles, supositorios y líquidos.
En otras realizaciones, las composiciones y
formulaciones farmacéuticas para administración nasal incluyen
ungüentos, cremas, geles, gotas, líquidos para esprays y polvos.
En realizaciones para administración pulmonar,
las composiciones y formulaciones farmacéutica comprenden esprays y
polvos.
Para las composiciones y formulaciones
farmacéuticas mencionadas, se pueden añadir vehículos,
intensificadores de la penetración, bases acuosas, en polvo u
oleosas, espesativos, agentes saboreadores, emulsivos, coadyuvantes
dispersivos, aglutinantes y otros excipientes. Las composiciones y
formulaciones para administración oral están revestidas
entéricamente en una realización.
Además del uso terapéutico de los compuestos
antisentido, los compuestos de la invención son también útiles para
investigación y diagnosis porque estos compuestos hibridrizan con el
ácido nucleico que codifica MIA, permitiendo construir así ensayos
sándwich y otros para explotar este hecho. La hibridación de los
oligonucleótidos antisentido de la invención con un ácido nucleico
que codifica MIA se puede detectar por medios conocidos en la
técnica. Tales medios pueden incluir conjugación de una enzima al
oligonucleótido, radiomarcación del oligonucleótido o cualquier
otro medio de detección adecuado. También se pueden preparar kits
usando tales medios de detección para detectar el nivel de MIA en
una muestra.
La Figura 1 describe la inhibición de la
expresión de MIA por diferentes oligonucleótidos en células de
melanoma HTZ-19. Las barras indican expresión de
MIA residual de un oligonucleótido tratado en comparación con un
medio de control no tratado (Medium) o células tratadas con
Lipofectina (Lipofectin). Los números 1-8
corresponden a oligonucleótidos antisentido del estado de la
técnica de la solicitud de patente WO 01/68122 que tienen las
secuencias ID n^{os}. 1-8 o al oligonucleótido
antisentido de la presente invención con la secuencia 5' - TTG CAT
AAA CCC AAG GAG - 3', denominado "nuevo", La inhibición más
fuerte se alcanzó con el oligonucleótido "nuevo" que era capaz
de inhibir en 84% la expresión de MIA en comparación con los
oligonucleótidos antisentido del estado de la técnica
1 - 8 (que corresponden a las secuencias ID n^{os}. 1-8 de la solicitud de patente WO 01/68122), para los que la inhibición de la expresión de MIA variaba entre 48% y 65%.
1 - 8 (que corresponden a las secuencias ID n^{os}. 1-8 de la solicitud de patente WO 01/68122), para los que la inhibición de la expresión de MIA variaba entre 48% y 65%.
La Figura 2a-c describe la
estructura de oligonucleótidos.
Se comparó la eficacia de la inhibición de MIA
por los oligonucleótidos de esta invención con la de los
oligonucleótidos del estado de la técnica que se describen en el
documento WO 01/68122 con las secuencias ID n^{os}.
1-8. Por tanto, las células de melanoma se
transfectaron con oligonucleótidos y la expresión de MIA en el
material sobrenadante del cultivo de células de las células se
midió por el ensayo inmunosorbente asociado a una enzima.
El día 0 se sembraron 75.000 células en 1 ml de
medio (DMEM/10% de FCS) en una placa de cultivo de tejido de 12
pocillos. Los días 1 y 2 las células se transfectaron con 200 nM de
oligonucleótido antisentido usando Lipoofectin (Gibco BRL,
Eggenstein, Alemania) de acuerdo con el protocolo de los
fabricantes. Cada oligonucleótido antisentido se transfectó por
triplicado. Al final de la segunda transfección el día 2, las
células se cultivaron durante otros tres días en DMEM/10% de FCS
que contenía 5 \muM del correspondiente oligonucleótido
antisentido. Se recogieron los materiales sobrenadantes y se
almacenaron a -20ºC hasta la cuantificación de la proteína de
MIA.
Las concentraciones de MIA en el material
sobrenadante se midieron empleando ELISA de acuerdo con el protocolo
de los fabricantes (Roche, Boehringer Mannheim, Alemania).
La inhibición más fuerte de la expresión de MIA
en el material sobrenadante en comparación con células de control
no tratadas se consiguió con el oligonucleótido antisentido
"nuevo" de la presente invención, que era capaz de inhibir en
84% la expresión de MISA en comparación con el oligonucleótido
antisentido del estado de la técnica descrito en la solicitud de
patente WO 01/68122 que tiene las secuencias ID n^{os}.
1-8, para el que la expresión de MIA variaba entre
48% y 66%.
<110> ANTISENTIDO PHARMA GMBH
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> un oligonucleótido antisentido para
inhibir "Actividad Inhibidora de Melanoma" MIA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 041933wo CS/FM
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> PCT/EP/2004/008986
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
2004-08-11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la Secuencia
Artificial: oligonucleótido de polipéptido de la Actividad
Inhibidora de Melanoma humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipttgcataaac ccaaggag
\hfill
Claims (15)
1. Un oligonucleótido antisentido seleccionado
entre el grupo de
- -
- la secuencia 5' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG- 3' y modificaciones de ella,
- -
- un fragmento que tiene al menos 8 nucleótidos de la secuencia 5' - TTG CAT AAA CCC AAG GAG- 3' y modificaciones de ella.
2. El oligonucleótido antisentido de acuerdo con
la reivindicación 1, en el que la modificación concierne a uno o
más restos de azúcar, las bases y/o las uniones internucleótido y/o
el acoplamiento del oligonucleótido a un intensificador de
captación y/o actividad inhibidora.
3. El oligonucleótido antisentido de acuerdo
con la reivindicación 2, en el que el oligonucleótido antisentido
es un oligodesoxinucleótido fosforotioato.
4. Los oligonucleótidos de acuerdo con las
reividicaciones 1 -3 con la respectiva estructura
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- -
- B = las bases A, C, G o T en oligonucleótidos o consecuentemente las bases A, C, G o U en oligo-ribonucleótidos,
- -
- R^{1} = O^{-}M^{+} (M^{+} = Na^{+} o H^{+}), S^{-}M^{+} (M^{+} = Na^{+} o H^{+}), CH_{3}, C_{2}H_{5}, OCH_{3}, OC_{2}H_{5},
- -
- R^{2} y/o R^{3} son colesterol covalentemente acoplado, poli(L)lisina, transferrina o H,
- -
- R^{4} = H, F, CH_{3}, C_{2}H_{5}, OH, OCH_{3}, OC_{2}H_{5}
y la estructura ha de entenderse
como detalle fuera de una cadena de nucleótido más
larga.
5. Oligonucleótidos antisentido de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 a 4 con la fórmula
en la
que
B= las bases A, C, G o T en
oligodesoxi-ribonucleótidos o, consecuentemente, las
bases A, C, G o U en oligo-ribonucleótidos,
p= fosfato de internucleótido,
(B-p)_{n} = un tramo de
oligodesoxi-tibonucleótido u
oligo-ribonucleótido en el que
n= 1-12, preferiblemente
1-11, y
en el que R^{1}, designado R^{1a} o
R^{1b}, varía en los fosfatos de internucleótido dentro de un
oligonucleótido:
R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en
todos Na^{+} o H^{+}, y R^{1b} = O^{-}M^{+}, siendo
M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
o
R^{1a} = CH_{3} y R^{1b} =
O^{-}M^{+}, siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
o
R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en
todos Na^{+} o H^{+} y R^{1b} = CH_{3},
o
R^{1a} = CH_{3} y R^{1b} = S^{-}M^{+},
siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+}.
6. Oligonucleótidos antisentido de acuerdo con
una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, con la fórmula
en la
que
B= una de las bases A, C, G o T comprendidas en
oligodesoxi-ribonucleótidos o, consecuentemente, las
bases A, C, G o U comprendidas en
oligo-ribonucleótidos dependiendo de la secuencia de
genes,
p= fosfato de internucleótido,
(B-p-B-p)_{n}
= un tramo de oligodesoxi-ribonucleótido u
oligo-ribonucleótido en el que B =
2-8, preferiblemente 3-7,
y en el que R^{1} es alternativo en los
fosfatos de internucleótido dentro de un oligonucleótido:
R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en
todos Na^{+} o H^{+}, y R^{1b} = O^{-}M^{+}, siendo
M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
o
R^{1a} = CH_{3} y R^{1b} = O^{-}M^{+},
siendo M^{+} en todos Na^{+} o H^{+},
o
R^{1a} = S^{-}M^{+}, siendo M^{+} en
todos Na^{+} o H^{+}, y R^{1b} = CH_{3}.
7. Uso de los oligonucleótidos antisentido de
acuerdo con las reivindicaciones 1-6 para la
inhibición in vitro de la expresión y/o actividad funcional
de MIA y/o la reducción de la invasión y/o la metástasis y/o la
estimulación de células inmunes y/o el sistema inmune.
8. Una composición farmacéutica que comprende un
oligonucleótido antisentido de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1-6.
9. La composición farmacéutica de acuerdo con la
reivindicación 8, en la que el oligonucleótido antisentido está
integrado en un sistema de suministro de DNA que comprende vectores
virales y/o no virales junto con ácidos lipídicos o derivados de
ellos seleccionados entre el grupo de lípidos aniónicos, lípidos
catiónicos, lípidos no catiónicos y mezclas de ellos.
10. La composición farmacéutica de acuerdo con
una de las reivindicaciones 8 o 9, que adicionalmente comprende un
agente inmunoestimulante.
11. La composición farmacéutica de acuerdo con
la reivindicación 10, en la que el agente inmunoestimulante
adicional se selecciona entre el grupo de citoquinas, inhibidores de
la expresión y/o la función de interleuquina-10 y/o
el factor beta transformante del crecimiento (TGF-8)
y/o prostaglandina B2 y/o receptores de prostaglandina E2 y/o
inhibidores de VEGF.
12. El uso de la composición farmacéutica de
acuerdo con una de las reivindicaciones 8-11 para la
preparación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento
de neoplasmas, infecciones y/o trastornos inmunosupresores.
13. El uso de la composición farmacéutica de
acuerdo con una de las reivindicaciones 8-11 para la
preparación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento
de trastornos, neoplasmas, infecciones y/o trastornos
inmunosupresores en los que la expresión anormal de MIA juega un
papel.
14. El uso de la composición farmacéutica de
acuerdo con las reivindicaciones 8-11 para la
preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento
de neoplasmas y/o trastornos seleccionados entre el grupo de
melanomas, carcinoma gastrointestinal, cáncer de mama, cáncer de
páncreas, carcinoma de ovario, condrosarcoma, enfermedades
espinales, mielopatía cervical, estenosis de canal lumbar, hernia de
disco lumbar, artritis reumatoide, osteoartritis, oligoartritis
asociada a HLA-27, artritis psoriática y artritis
reumatoide, lesión de cartílago y/o destrucción de
articulación.
15. Una composición de diagnóstico que comprende
un oligonucleótido antisentido de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1-6.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP03018285 | 2003-08-12 | ||
EP03018285 | 2003-08-12 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2289544T3 true ES2289544T3 (es) | 2008-02-01 |
Family
ID=34130073
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES04763992T Active ES2289544T3 (es) | 2003-08-12 | 2004-08-11 | Oligonucleotido antisentido para inhibir la actividad inhibidora de melanoma mia. |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7910563B2 (es) |
EP (1) | EP1660656B1 (es) |
JP (1) | JP4649408B2 (es) |
AT (1) | ATE369422T1 (es) |
DE (1) | DE602004008085T2 (es) |
ES (1) | ES2289544T3 (es) |
WO (1) | WO2005014812A2 (es) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2289544T3 (es) | 2003-08-12 | 2008-02-01 | Antisense Pharma Gmbh | Oligonucleotido antisentido para inhibir la actividad inhibidora de melanoma mia. |
CN100562342C (zh) * | 2006-01-17 | 2009-11-25 | 奥林格斯技术有限公司 | 防治流感病毒感染的寡核苷酸药物 |
CA2802089A1 (en) | 2010-06-11 | 2011-12-15 | Antisense Pharma Gmbh | Method for selective oligonucleotide modification |
ITRM20110134A1 (it) * | 2011-03-22 | 2012-09-23 | Matteo Bordignon | Inibitori di mia (attività inibitoria melanoma) per identificare, prevenire e curare la vitiligine |
EP3103450A1 (en) * | 2015-06-12 | 2016-12-14 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | None-hydrophobic compounds for use in treating metastasis and/or cartilage defect |
CN105250900A (zh) * | 2015-10-21 | 2016-01-20 | 宋军君 | 一种治疗腰椎间盘突出中药 |
US9758786B2 (en) | 2016-02-09 | 2017-09-12 | Autotelic, Llc | Compositions and methods for treating pancreatic cancer |
KR20180103816A (ko) | 2016-02-09 | 2018-09-19 | 오토텔릭 엘엘씨 | 췌장암을 치료하기 위한 조성물과 방법 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0945507A1 (de) * | 1998-03-27 | 1999-09-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Tumorspezifische Expressionskontrollregion und deren Verwendung |
WO1999065928A2 (en) * | 1998-06-19 | 1999-12-23 | Genzyme Corporation | Polynucleotide population isolated from non-metastatic and metastatic breast tumor tissues |
EP1133994A1 (en) * | 2000-03-11 | 2001-09-19 | Biognostik Gesellschaft für biomolekulare Diagnostik mbH | A method for reversing the immunosuppressive effects of the Melanoma Inhibitory Activity "MIA" |
WO2001077384A2 (de) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Epigenomics Ag | DETEKTION VON SNPs UND CYTOSIN-METHYLIERUNGEN |
ES2289544T3 (es) | 2003-08-12 | 2008-02-01 | Antisense Pharma Gmbh | Oligonucleotido antisentido para inhibir la actividad inhibidora de melanoma mia. |
-
2004
- 2004-08-11 ES ES04763992T patent/ES2289544T3/es active Active
- 2004-08-11 AT AT04763992T patent/ATE369422T1/de active
- 2004-08-11 US US10/567,879 patent/US7910563B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-08-11 JP JP2006522977A patent/JP4649408B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-08-11 DE DE602004008085T patent/DE602004008085T2/de active Active
- 2004-08-11 EP EP04763992A patent/EP1660656B1/en not_active Not-in-force
- 2004-08-11 WO PCT/EP2004/008986 patent/WO2005014812A2/en active IP Right Grant
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE602004008085D1 (de) | 2007-09-20 |
DE602004008085T2 (de) | 2008-04-24 |
JP2007501621A (ja) | 2007-02-01 |
EP1660656B1 (en) | 2007-08-08 |
US20070299022A1 (en) | 2007-12-27 |
EP1660656A2 (en) | 2006-05-31 |
WO2005014812A3 (en) | 2005-06-09 |
ATE369422T1 (de) | 2007-08-15 |
JP4649408B2 (ja) | 2011-03-09 |
US7910563B2 (en) | 2011-03-22 |
WO2005014812A2 (en) | 2005-02-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7353301B2 (ja) | 肝臓外送達 | |
AU2020200679B2 (en) | Antisense nucleic acids | |
KR102644053B1 (ko) | 펩티드 올리고뉴클레오티드 콘주게이트 | |
ES2649817T3 (es) | Compuestos oligom¿¿ricos para la modulaci¿®n de la expresi¿®n de HIF-1¿Á | |
ES2765463T3 (es) | Acido nucleico antisentido para usar en el tratamiento de la distrofia muscular de Duchenne | |
ES2323252T3 (es) | Procedimiento de preparacion de un oligonucleotido antisentido. | |
RU2567664C2 (ru) | Антисмысловые нуклеиновые кислоты | |
ES2569558T3 (es) | Composición farmacéutica que comprende oligonucleótidos antisentido anti-ARNmi | |
US20180311176A1 (en) | Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes | |
JP2021046396A (ja) | ホスホルアミダイト化学を使用する骨格修飾モルホリノオリゴヌクレオチド及びキメラの合成 | |
ES2832531T3 (es) | Oligonucleótidos para el tratamiento de enfermedades por expansión de repeticiones | |
US10758558B2 (en) | Hybrid oligonucleotides and uses thereof | |
AU2016324800B2 (en) | Antisense nucleic acid | |
JP2000501414A (ja) | 生体分子の細胞取り込みを高めるリガンド | |
ES2742654T3 (es) | Oligonucleótidos antisentido modificados hidrofóbicamente que comprenden un grupo cetal | |
AU2017312116A1 (en) | Polynucleotide constructs | |
JP2011520983A (ja) | オリゴヌクレオチドの送達のための細胞内遊離可能ジスルフィドリンカーを含有するポリマーシステム | |
US20220090084A1 (en) | Antisense-induced exon exclusion in myostatin | |
ES2289544T3 (es) | Oligonucleotido antisentido para inhibir la actividad inhibidora de melanoma mia. | |
KR20140001224A (ko) | 수식 1 개 사슬 폴리뉴클레오티드 | |
JP2000512630A (ja) | 2’―置換ヌクレオシドおよびオリゴヌクレオチド誘導体 | |
BR112019023650A2 (pt) | Agentes rnai para inibir a expressão de alfa-enac e métodos de uso | |
JP2018525015A (ja) | 脊髄性筋萎縮症におけるエクソン包含のための修飾アンチセンスオリゴマー | |
CA2882268A1 (en) | Polynucleotide-poly(diol) conjugates, process of preparation and uses thereof | |
ES2844398T3 (es) | ARNip modificado y composición farmacéutica que comprende el mismo |