ES2288550T3 - Compuestos autoinductores y sus utilizaciones. - Google Patents
Compuestos autoinductores y sus utilizaciones. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2288550T3 ES2288550T3 ES02727000T ES02727000T ES2288550T3 ES 2288550 T3 ES2288550 T3 ES 2288550T3 ES 02727000 T ES02727000 T ES 02727000T ES 02727000 T ES02727000 T ES 02727000T ES 2288550 T3 ES2288550 T3 ES 2288550T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- animal
- lactone
- thiolactone
- acyl
- homoserine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/116—Heterocyclic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Birds (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Mechanical Coupling Of Light Guides (AREA)
- Paper (AREA)
- Supplying Of Containers To The Packaging Station (AREA)
- Vehicle Body Suspensions (AREA)
Abstract
Aditivo de alimento para animal que comprende uno o más compuestos autoinductores, en el que el compuesto autoinductor es una acil homoserina lactona, una acil homocisteína lactona, una acil tiolactona o un péptido señal.
Description
Compuestos autoinductores y sus
utilizaciones.
La presente invención se refiere a compuestos
autoinductores, también conocidos como moléculas sensibles al
quórum, y a sus usos, en particular como aditivos para alimentación
animal para mejorar el rendimiento del animal.
Se ha observado que las bacterias en cultivos
tanto individuales como mixtos tienen posibilidades de obtener una
ventaja significativa de la capacidad de coordinar su dinámica de
población (Shapiro, 1988). "Sensible a quórum", tal como se
conoce este mecanismo, es la capacidad de las bacterias para unir la
expresión génica con la densidad de población. Las señales
producidas por el organismo se expresan en su medio y tras la
señalización de quórum crítico, a continuación se activa un
regulador de respuesta. Esto permite que las células individuales
interaccionen con otras de su misma o diferente especie. De esta
manera, las bacterias pueden coordinar su producción de sustancias
químicas de defensa, diferenciación, reproducción y migración.
Hasta el momento, las aplicaciones más
estudiadas de los compuestos de señal sensibles a quórum han sido
en la preparación de diagnósticos y la estimulación in vitro
de compuestos antibióticos en otros casos disponibles de forma
transitoria. Ahora se cree que muchas especies bacterianas utilizan
este proceso de transducción de señal mediante un rango pequeño de
moléculas sencillas que funcionan como autoinductores de virulencia
y otras características. La primera molécula que se identificó fue
N-(3-oxohexanoil) homoserina lactona (OHHL) como el
inductor de bioluminiscencia en Vibrio fisheri en 1981
(Eberhard et al., 1981).
En especies Vibrio, la producción de OHHL
depende de la transcripción de genes lux dependientes de la
densidad activada por una proteína LuxR. El producto Lex1 se une con
LuxR y OHHL para activarse. Esto es pues el proceso de modelo
general para la coordinación de varias expresiones de fenotipo.
Posteriormente se observó que la OHHL era parte de un grupo de
compuestos, las acil homoserina lactosas (AHLs), muchas de ellas
(tanto naturales como sintéticas) con capacidad de señalización.
Entre otras moléculas que son conocidas por ser señales sensibles a
quórum o autoinductores se incluyen varios péptidos, tales como el
"péptido de señalización de competencia" en Bacillus
subtilis y Streptococcus pneumoniae.
De las AHLs,
N-(3-hidroxibutanoil) homoserina lactona;
N-hexanoil homoserina lactona;
N-butanoil homoserina lactona;
N-(3-oxooctanoil) homoserina lactona;
N-octanoil homoserina lactona;
N-(3-oxodecanoil) homoserina lactona;
N-octanoil homoserina lactona;
7,8-cis-N-(hidroxitetradecanoil)
homoserina lactona y otros análogos también han demostrado que son
activas. Otras señales sensibles a quórum son conocidas por ser
utilizadas por ciertos organismos incluyendo el éster metílico del
ácido 3-hidroxipalmítico.
Las AHLs parecen utilizarse sólo en las
bacterias Gram negativa, mientras que las bacterias Gram positiva
parecen utilizarse moléculas de tiolactona para la señalización de
péptidos y otros fragmentos de oligopéptidos para la señalización
celular.
La manipulación de la microbiología del rumen y
tripa se ha realizado hasta ahora mediante la utilización de
antibióticos, incluyendo antimicrobianos, tales como virginiamicina.
En el pasado, se han utilizado muchos tipos diferentes de
compuestos naturales y artificiales, incluyendo sulfonamidas,
tetraciclinas y penicilina. Su función principal ha sido modificar
las poblaciones microbianas del rumen de una manera tal que se
reducen las bacterias indeseables y se favorecen las bacterias
beneficiosas.
Sin embargo, existe una preocupación creciente
sobre las consecuencias a largo plazo de la utilización de estos
compuestos en concentraciones subterapéuticas con temores de que la
resistencia a estos fármacos puede ahora extenderse.
El complejo trabajo realizado en el retículo del
rumen para convertir celulosa, hemicelulosa y ligninas en energía
disponible, mientras a la vez se proporciona al animal huésped una
fuente continua de proteína, se consigue mediante una comunidad de
especies bacterianas. Esta comunidad es intensamente competitiva.
Los sistemas del rumen productores bajos en metano que son buenos
productores de propionatos son mejoras en el suministro de energía
al animal. La optimización del rumen para este fin ha sido el eterno
objetivo de fármacos y la intervención nutricional. Por lo tanto,
el principal objetivo es maximizar la producción de proteína
microbiana y la degradación de compuestos de tipo celulosa/lignina,
a la vez que se minimiza los aspectos negativos del crecimiento
microbiano no deseado. Los organismos que consumen o degradan
proteína e incrementan la producción de metano (que consume
energía) no son recíprocos en su relación con el huésped o privan al
animal de almidón disponible y, por tanto, se consideran
perjudiciales para la fermentación óptima del rumen.
La dificultad en la utilización de aditivos de
alimento u otros tratamientos bioactivos es la especificidad, ya
que muchas sustancias tienen múltiples efectos en la comunidad
microbiana. La reducción de la proteólisis y la actividad de
desaminación son parcialmente responsables del aumento de
rendimiento del animal. El control de la población microbiana
también puede influir positivamente en la producción de ácidos
grasos volátiles y reducir la producción de metano. La manipulación
combinada de estos parámetros da lugar a un mejor rendimiento del
animal, algunas veces por márgenes muy sustanciales.
WO97/27851 (Universidad
Johns-Hopkins) describe que el crecimiento de
Mycobacteria se puede inhibir a través de la administración
de homoserina o una homoserina lactona.
La solicitud sugiere que estos compuestos se
utilizan en el diagnóstico y el tratamiento de una infección por
M. tuberculosis en humanos.
La Patente de Estados Unidos No. 5.591.872
(Universidad de Iowa) describe que la
N-(3-oxododecanoil) homoserina lactona es un
autoinductor que regula la expresión génica en Pseudomonas
aeruginosa y dice que los análogos o inhibidores de este
autoinductor se pueden utilizar en el tratamiento o prevención de
una infección por este microorganismo.
WO01/74801 (Universidad de Nottingham) describe
una familia de N-acil homoserina lactonas y su
utilización como inmunosupresores.
De manera amplia, la presente invención se
refiere a la síntesis y utilización de moléculas sensibles a quórum
o autoinductores en dietas animales, particularmente en alimentos
para rumiantes y animales monogástricos. Los cambios legislativos
recientes han hecho que la utilización de la mayoría de antibióticos
sea ilegal en muchos países occidentales y se han buscado nuevas
soluciones para mejorar la fermentación utilizando más
antimicrobianos naturales. Sin embargo, muchos de estos productos
naturales tienen registros de eficacia poco fiables y tienen
posibilidades de ser examinados por las autoridades reguladoras. Por
lo tanto, es deseable un enfoque completamente nuevo a la
optimización de la fermentación. La utilización de compuestos
autoinductores o señales sensibles al quórum en el alimento para
animales tal y como se describe en la presente invención,
proporciona una nueva manera de controlar la dinámica de la flora
del rumen utilizando los propios compuestos que la población
microbiana natural produce.
En la presente invención, los términos
"molécula sensible al quórum" y "compuesto autoinductor"
se utilizan de manera indistinta. Algunos ejemplos de estos
compuestos se indican a continuación.
En un primer aspecto, la presente invención
proporciona un aditivo de alimento para animal que comprende uno o
más compuestos autoinductores. Opcionalmente, el compuesto
autoinductor está mezclado con un portador inerte para darle
volumen antes de mezclarse con los ingredientes del alimento del
animal, se proporciona como una solución para la administración en
forma de brebaje o para pulverizarse sobre el alimento del animal,
o se formula en forma de comprimido, de nuevo con un portador
inerte. Algunos ejemplos de portadores inertes incluyen talco,
sílice y agua.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona un alimento para animal que comprende un componente de
alimento para animal y uno o más compuestos autoinductores. Algunos
ejemplos de componentes de alimento para animal incluyen una o una
combinación de proteínas, azúcares, grasas y fibra. Habitualmente,
los componentes de alimento para animal provienen de cereales u otro
material vegetal.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona un procedimiento no terapéutico de mejora del
rendimiento animal que comprende la administración de un compuesto
autoinductor al animal.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona la utilización de un compuesto autoinductor para la
administración a un animal con el objetivo de mejorar el rendimiento
del animal.
Algunos ejemplos de compuesto o compuestos
autoinductores incluyen acil homoserina lactosas, acil homocisteína
lactonas, acil tiolactonas, péptidos señal y furanosas y quinolinas
señal, tales como
2-heptil-3-hidroxi-4-quinolina.
Preferiblemente, las acil lactosas son acil lactosas
C_{1-20}.
Algunos ejemplos de acil homoserina lactonas
preferidas incluyen compuestos, tales como
N-oxobutanoil homoserina lactona,
N-oxopentanoil homoserina lactona,
N-oxohexanoil homoserina lactona,
N-oxoheptanoil homoserina lactona,
N-oxooctanoil homoserina lactona,
N-oxononanoil homoserina lactona,
N-oxodecanoil homoserina lactona,
N-butanoil homoserina lactona,
N-pentanoil homoserina lactona,
N-hexanoil homoserina lactona,
N-heptanoil homoserina lactona,
N-octanoil homoserina lactona,
N-nonanoil homoserina lactona,
N-decanoil homoserina lactona, y
7,8-cis-N-(3-hidroxitetradecanoil)
homoserina lactona. Las N-oxoacil homoserina
lactonas son preferiblemente N-(3-oxoacil)
homoserina lactonas. La síntesis de más ejemplos de acil homoserina
lactosas se describe en WO01/74801.
Algunos ejemplos de acil homocisteína lactonas
preferidas incluyen compuestos, tales como
N-oxobutanoil homocisteína lactona,
N-oxopentanoil homocisteína lactona,
N-oxohexanoil homocisteína lactona,
N-oxoheptanoil homocisteína lactona,
N-oxooctanoil homocisteína lactona,
N-oxononanoil homocisteína lactona,
N-oxodecanoil homocisteína lactona,
N-butanoil homocisteína lactona,
N-pentanoil homocisteína lactona,
N-hexanoil homocisteína lactona,
N-heptanoil homocisteína lactona,
N-octanoil homocisteína lactona,
N-nonanoil homocisteína lactona, y
N-decanoil homocisteína lactona.
Algunos ejemplos de acil tiolactonas preferidas
incluyen compuestos, tales como N-oxobutanoil
tiolactona, N-oxopentanoil tiolactona,
N-oxohexanoil tiolactona,
N-oxoheptanoil tiolactona,
N-oxooctanoil tiolactona,
N-oxononanoil tiolactona,
N-oxodecanoil tiolactona, N-butanoil
tiolactona, N-pentanoil tiolactona,
N-hexanoil tiolactona, N-heptanoil
tiolactona, N-octanoil tiolactona,
N-nonanoil tiolactona, y N-decanoil
tiolactona.
En otras realizaciones, los compuestos
autoinductores están representados por una de las fórmulas:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las que X e Y se seleccionan
independientemente entre O, S o NH y Z es una cadena de acilo
C_{1} a C_{20} sustituida o no sustituida. La cadena de acilo
puede ser ramificada o no ramificada, insaturada, parcialmente
saturada o saturada. Algunos ejemplos de sustituyentes de cadena de
acilo incluyen sustituyentes ceto, hidroxilo, alquenilo o fenilo.
El compuesto autoinductor puede estar parcial o completamente
halogenado.
En realizaciones en las que el compuesto
autoinductor es quiral, puede estar presente como un enantiómero
único o cualquier mezcla de isómeros ópticos.
Además del compuesto autoinductor, el aditivo de
alimento para animal o el alimento para animal puede contener otros
ingredientes, tales como antibióticos, tales como Tilsina,
tetraciclina, gentamicina,
batracina-metileno-disalicilato y
valnemulina o coccidiostatos, tales como salinomicina.
En la presente invención, el término "mejorar
el rendimiento del animal" incluye mejorar la velocidad de
crecimiento del animal, mejorar el peso del animal a una determinada
edad, mejorar la proporción de conversión de alimento, mejorar el
rendimiento o la calidad de un producto producido por o derivado del
animal (por ejemplo, carne (por ejemplo, de ganado, aves de corral
o pescado), leche de ganado lactante o huevos de aves de corral),
todos ellos definidos en relación con animales de control que no se
tratan con el compuesto autoinductor. Estas comparaciones pueden
ser realizadas fácilmente por un experto en la materia, por ejemplo,
la proporción de conversión del alimento se puede calcular en base
al alimento consumido/peso total de los animales en una
muestra.
Sin pretender estar unido por ninguna teoría
específica, los solicitantes creen que la inclusión de compuestos
autoinductores en la dieta del animal tiene un efecto beneficioso en
las poblaciones de bacterias en el tracto digestivo de los
animales. Este efecto puede estar en la regulación de la expresión
génica en bacterias de las tripas de los animales in vivo,
en la inducción a la producción de tensoactivo por la flora de la
tripa, ya que los tensoactivos puede ayudar en la emulsificación del
contenido en grasas o lípidos del alimento haciéndolo más
fácilmente disponible para el animal, en la inducción de virulencia
en las bacterias específicas del fluido del rumen o en la
producción de antibióticos mediante bacterias de la tripa
monogástrica.
Los compuestos autoinductores se pueden
administrar a animales, tales como pájaros, ganado, animales
marinos o animales domésticos o de compañía. Entre los ejemplos de
estos animales se incluyen aves de corral, vacas, cerdos, ovejas,
conejos, caballos, perros y gatos, y peces, por ejemplo, en granjas
acuáticas.
Preferiblemente, el autoinductor se administra
directa o indirectamente a un animal en una dosis equivalente de 1
a 100.000 nanomoles por tonelada de alimento, más preferiblemente de
100 a 10.000 nanomoles por tonelada de alimento, y aún más
preferiblemente aproximadamente 1.000 nanomoles por tonelada de
alimento.
El compuesto autoinductor se puede proporcionar
al animal mediante un amplio grupo de rutas. Como aditivo de
alimento para animal se puede formular como un polvo seco (por
ejemplo, para mezclar con alimentos de animales), un líquido (por
ejemplo para pulverizar sobre alimentos de animales o agua de bebida
para animales), o se puede formular para la aplicación directa en
alimentos de animales. Alternativamente, el compuesto autoinductor
se puede suministrar premezclado con un alimento para animal o se
puede administrar directamente al animal como un suplemento.
Adicional o alternativamente, una composición que comprende el
compuesto autoinductor puede estar en forma de una cápsula o
comprimido, formulada como un brebaje o puede estar en forma de un
bolo para la ingestión por un animal. En estas realizaciones, el
compuesto autoinductor se puede formular mezclándolo con un
portador inerte, por ejemplo, un disolvente, tal como agua o un
portador sólido, tal como talco de sílice, para hacer la
dosificación más sencilla en el campo.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona un procedimiento de fabricación de un alimento para
animal, comprendiendo el procedimiento la mezcla de uno o más
componentes del alimento para animal con uno o más compuestos
autoinductores. El procedimiento puede comprender etapas adicionales
en el procesado del alimento, por ejemplo, la granulación.
En algunas realizaciones, los compuestos
autoinductores pueden fabricarse mediante técnicas de química
sintética. Alternativamente, los compuestos pueden derivar de
extractos o concentrados de material vegetal, algas, micótico o
bacteriano. Como alternativa adicional, los compuestos
autoinductores pueden derivar de organismos modificados
genéticamente que sobreexpresan los compuestos autoinductores, de
manera natural o porque han sido transformados. Entre los ejemplos
de organismos transformados se incluyen bacterias o células
vegetales transformadas con ácido nucleico que codifica compuestos
autoinductores, tales como el gen o grupo de genes de acil
homoserina, homocisteína o tiolactona lactona cintaza o con ácido
nucleico que codifica un péptido señal. A continuación, las células
huésped transformadas pueden inducirse a expresar el compuesto
autoinductor que opcionalmente se puede entonces purificar del
cultivo celular y formular tal y como se ha descrito anteriormente.
Alternativamente, un alimento para animal o aditivo de alimento para
animal se puede fabricar directamente a partir de las bacterias o
las células vegetales, por ejemplo, fabricando un alimento para
animal a partir de una planta que ha sido diseñada genéticamente
para sobreexpresar uno o más de los compuestos autoinductores.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona un procedimiento de preparación de compuestos de acil
homoserina lactona, comprendiendo el procedimiento el reflujo de
amino butirolactona con un compuesto de acetato para producir la
acil homoserina lactona. En este procedimiento, preferiblemente el
disolvente utilizado es tolueno, xileno o etilbenceno, y más
preferiblemente el disolvente es tolueno. Las condiciones de
reacción preferidas son el reflujo de la mezcla de reacción a
presión atmosférica.
Preferiblemente, el compuesto de acetato es
butanoato de etilo, pentanoato de etilo, hexanoato de etilo,
heptanoato de etilo, octanoato de etilo, nonanoato de etilo,
decanoato de etilo, 3-oxobutanoato de etilo,
3-oxopentanoato de etilo,
3-oxohexanoato de etilo,
3-oxoheptanoato de etilo,
3-oxooctanoato de etilo,
3-oxononanoato de etilo o
3-oxodecanoato de etilo.
El procedimiento puede comprender la etapa
adicional de purificación de la acil homoserina lactona producida
en la reacción. En una realización, esto se puede conseguir mediante
la evaporación del producto, redisolución en metanol al 5% en
diclorometano y purificación mediante cromatografía en columna.
A modo de ejemplo y no limitativo, a
continuación se describirán las realizaciones de la presente
invención con más detalle.
Ejemplo
1
Los compuestos autoinductores, tales como acil
homoserina lactonas, pueden tener efectos significativos en los
cultivos de bacterias. Por ejemplo, se pueden utilizar para inducir
la expresión de antibióticos y enzimas extracelulares. La hexanoil
homoserina lactona (OHHL) es la molécula señal para la producción de
antibióticos en Chromobacterium violaceum; butanoil
homoserina lactona desencadena varios fenotipos en la Pseudomonas
aeruginosa que incluyen la producción de varias enzimas y
lectinas. Se sabe que la OHHL tiene diferentes efectos en
diferentes especies. Por ejemplo, en Erwinia stewartii induce
la producción de exopolisacáridos, mientras que en la especie
Vibro provoca bioluminiscencia. De este modo, en un cultivo
mixto complejo que comprende muchas especies incluyendo
ruminobacter sp.., prevotella sp., ruminococcus sp., es
difícil predecir los fenotipos específicos que se inducirán
mediante la introducción de sólo un compuesto autoinductor. Sin
embargo, el efecto global en la fermentación del cultivo mixto en el
rumen se puede medir en términos de la eficacia de digestión del
pienso. En el siguiente ejemplo, un modelo in vitro de la
eficacia del rumen de animal revela el efecto neto en la digestión
del pienso utilizando fluido de rumen reciente. Se examinan una
muestra de control tratada con agua y cuatro muestras de prueba
tratadas con concentraciones nanomolares de OHHL.
El fluido de rumen se recogió de una vaca
fistulada sana alimentada con hierba e inmediatamente se dispensó
en botellas de 75 ml. Estas botellas se mantuvieron a 37ºC. En cada
uno de estos cultivos se suspendió aproximadamente 1 gramo de silos
de hierba pesada y secada anteriormente en sobres fabricados de
gasas de nylon. En este punto se introdujo AHL [OHHL] señal en
concentraciones que proporcionaron concentraciones finales en el
fluido del rumen de 0, 200, 500 y 1000 nanomoles. A continuación,
éstos se incubaron durante 10 horas. A continuación, se extrajeron
las muestras de pienso y se volvieron a secar y a pesar. Cada
tratamiento se realizó por triplicado.
Los resultados de los experimentos mostraron que
aumentando la cantidad de OHHL presente se aumentaba el porcentaje
medio de pérdida de peso para cada tratamiento, indicando que la
presencia de compuestos autoinductores conduce a una mejor eficacia
en la digestión del alimento del animal.
Cuando se añade al alimento, el nivel de
inclusión debería incrementarse desde los niveles superiores para
permitir pérdidas durante los procesos de extrusión de alimento. Por
esta razón, una tasa de inclusión habitual de
5-5000 nanomoles es normalmente suficiente.
\newpage
Ejemplo
2
Muy pocos de los compuestos AHL están
disponibles comercialmente y los protocolos de síntesis en la
literatura implican muchas etapas y bajos rendimientos. De este
modo, era importante que se perfeccionara una ruta sintética barata
que pudiera servir como ruta modelo para todos los compuestos AHL.
Se preparó OHHL que es puro por RMN tal y como se indica a
continuación.
A una mezcla agitada de
\alpha-amino-\gamma-butirolactona
(1,0 eq.) en tolueno (\sim 5 ml/por mmol) se añadió gota a gota
trietilamina (1,0 eq.). A continuación, la mezcla se agitó durante
10 minutos. Se añadió gota a gota acetato de etilbutirilo (1,0 eq.)
y la mezcla se puso a reflujo durante 2 horas. La mezcla se dejó
enfriar y, a continuación, se filtró y se evaporó. La cromatografía
en columna con metanol al 5% en diclorometano produce el compuesto
con un rendimiento global superior al 30%.
El análisis por RMN confirmó la presencia de
OHHL:
Cabezal 5 mm H^{1}; AQ 1,9923444 s; TE
300,00 K 1D RMN parámetros de dibujo: cx 40,0 cm; F1P 10,5 ppm; F2P
- 0,500 ppm; 110,03576 Hz/cm
Valores \delta de RMN para OHHL:
7,609 ppm; 4,525 ppm; 4,412 ppm; 4,20 ppm; 3,402
ppm; 2,677 ppm; 2,45 ppm; 2,16 ppm; 1,56 ppm; 0,844 ppm.
Se sabe que los AHLs están presente en el rumen
(Erickson et al., 2000). La cromatografía en capa fina de
fase inversa del fluido del rumen reveló la presencia de señales
"múltiples".
Por lo tanto, está claro que muchas de las
especies bacterianas ya poseen una ventaja competitiva de los
mecanismos sensibles al quórum.
Tal y como se ha descrito, los compuestos de
señales sintéticos se pueden introducir en el rumen en pequeñas
dosis a través del alimento del animal para mejorar la eficacia del
rumen y, por lo tanto, mejorar el rendimiento del animal. Se sabe
que las señales de lactona múltiples regulan la determinantes de
virulencia en especies, tales como Pseudomonas sp.. Las
quinolonas, tales como
2-heptil-3-hidroxi-4-quinolina
también son moléculas señales activas y también se pueden utilizar
para mejorar la nutrición y salud del animal.
Las combinaciones de los compuestos AHL se
pueden utilizar para manipular adicionalmente los sucesos en el
rumen, pero las formulaciones exactas en el alimento dependerán
necesariamente de la especie y del alimento en cuestión. Se pueden
utilizar la escucha de señales cuando se analizan las señales del
rumen optimizado de una vaca que a continuación se reproducen
artificialmente y se introducen en otra opción. De forma similar,
en monogástricos, las señales sensibles al quórum se pueden utilizar
para estimular la producción de antibióticos por la flora de la
tripa. Adicionalmente, utilizando esta tecnología también se pueden
inducir otros productos bacterianos beneficiosos, tales como
enzimas y tensoactivos.
Se pueden utilizar análogos inactivos de
moléculas señal para interferir competitivamente con el proceso de
señalización ("atasco de señal"). En este escenario, se puede
impedir la transcripción de, por ejemplo, genes de virulencia de
bacterias de la tripa perjudiciales, y se puede mitigar el daño
patogénico. La mejora posterior en la salud del animal contribuirá
de este modo al rendimiento general del animal. Puede ser posible
recoger moléculas señal de los cultivos en la fermentación in
vitro y se pueden preparar mediante manipulación genética
péptidos señal (habitualmente las señales sensibles a quórum para
bacterias Gram positiva), por ejemplo, para permitir la
sobreexpresión de péptidos, tales como los oligopéptidos utilizados
por Enterococcus faecilis.
Ejemplo
3
Este experimento examinó el efecto de
N-(3-oxohexanoil)-L-homoserina
lactona (OHHL) (CAS #: 143537626, fórmula molecular:
C_{10}H_{15}NO_{4}, peso molecular: 213) en la tasa de
crecimiento y mortalidad de pollos parrilleros.
Se preparó una solución madre de 1 mM de OHHL
(0,213 g/l) tal y como se indica a continuación. Se calentó
aproximadamente un 50% del volumen requerido de agua destilada hasta
aproximadamente 30-40ºC y se utilizó para disolver
la cantidad requerida de polvo de OHHL. La solución se llevó a
volumen utilizando agua destilada almacenada a temperatura
ambiente. La solución de OHHL (0,213 g/l) se aplicó a alimento
desmenuzado tratado a una razón de 3 kg por tonelada. El alimento
de control se trató con agua destilada a razón de 3 kg por tonelada.
La solución de OHHL se almacenó durante menos de dos días antes de
aplicarla al alimento.
El antibiótico BMD®110 se utilizó como control
positivo en este estudio. El principio activo es disalicilato
metileno de bacitracina. El producto contiene 110 g de actividad de
bacitracina por kg y está aprobada para la prevención de enteritis
necrótica en pollos parrilleros cuando se administra en una dosis de
55 ppm en el alimento (500 g de BMD®110/tonelada de alimento).
Se utilizó una premezcla al 6% de Coxistac® como
ionóforo en todas las dietas de estudio como ayuda en la prevención
de la coxidiosis. El producto contenía 60 g de salinomicina por kg y
se administró en una dosis de 60 ppm en el alimento (1 kg de
premezcla al 6% de Coxistac® por tonelada de alimento).
El experimentó duró 35 días considerando el día
de colocación de los pollos parrilleros como día cero. Se asignaron
para tratamiento un total de 1200 pollos parrilleros machos (Cobb x
Cobb). Las aves se vacunaron para la enfermedad de Marek en el
criadero. Se asignaron a los grupos de tratamiento veinticuatro
corrales, cada uno con 45 pies cuadrados de espacio del piso. Cada
corral tenía un piso concreto y una barrera concreta de 12 pulgadas
de alto en la parte frontal y posterior. Los corrales adyacentes se
separaron mediante una barrera de plástico sólida de 12 pulgadas a
nivel de ave. Se colocó una valla de alambre soldado con aberturas
cuadradas de 1 pulgada en la parte superior de las barreras. Cada
corral se identificó permanentemente por un número y contenía 50
aves en el día cero. Cada corral contenía cuatro bebedores de tipo
tetina que proporcionaban agua de beber limpia ad libitum.
El alimento seco se proporcionó ad libitum en comederos de
tipo tubo (uno por corral) de 20 kg de capacidad.
El establo se calentó mediante cinco
calentadores de gas natural que estaban espaciados por igual y
estaban colocados para calentar el aire entrante en la pared norte
del edificio. El aire se agotaba mediante ventiladores colocados en
la pared sur del edificio. El programa de iluminación, temperatura
del establo y otras prácticas de infraestructura eran las
habituales de los productores de pollos parrilleros comerciales en
Norteamérica. Las aves que estaban moribundas y eran incapaces de
alcanzar la comida o el agua se seleccionaron y sacrificaron
mediante gas dióxido de carbono.
El peso corporal, el número de corrales y la
fecha de la muerte se registraron para cada ave que se había
seleccionado o hallado muerto. Las tablas de mortalidad se
entregaron al patólogo para determinar la causa aparente de la
muerte.
Se utilizó un diseño al azar de bloques
completos para estudiar los efectos principales e interactivos de
OHHL (0 y 0,639 g/tonelada) y el antibiótico alimenticio (0 y 55 ppm
de BMD®110) en una disposición factorial de 2x2. Los tratamientos
alimenticios fueron los siguientes.
Había cuatro corrales por bloque y seis bloques
replicados para un total de 24 corrales.
El programa de alimentación se utilizó en el
estudio utilizando un tipo de alimentación de entrada en los días 0
a 20 y un tipo de alimentación de crecimiento en los días 21 a 35.
La formulación de la dieta era representativa de las dietas
comerciales en Norteamérica.
Se fabricó, se granuló y se desmenuzó una dieta
de entrada que utilizaba una mezcla básica de dieta de entrada que
contenía 0 o bien 55 ppm de BMD. El alimento de entrada envasado se
trató con agua destilada (0 g de OHHL por L) o bien solución de
OHHL (0,213 g de OHHL por L) utilizando un mezclador de doble brazo
horizontal de 100 kg de capacidad. El agua destilada o la solución
de OHHL (0,213 g por L) se aplicó al alimento desmenuzado a razón
de 3 kg por tonelada de alimento. Las dietas de crecimiento se
fabricaron tal y como se ha descritos para las de entrada.
Muestreo del alimento y ensayo: se tomaron un
mínimo de 10 muestras representativas de cada lote de alimento de
entrada y de crecimiento basal desmenuzado. Las 10 muestras se
compusieron y se dividieron en dos muestras para el ensayo de
nutrientes y la muestra de retención, respectivamente. Se tomó una
muestra compuesta representativa de cada alimento de control y de
cada alimento tratado con OHHL. Las muestras por duplicado
(analítica y de retención) se guardaron congeladas a -20ºC para el
ensayo retrospectivo de OHHL. Se analizó la materia seca, la
proteína cruda, el calcio, fósforo y manganeso de una muestra de
cada alimento basal desmenuzado.
Los datos recogidos consistían en:
1. Peso corporal en los días 0, 21 y 35.
2. Cantidades de cada alimento (entrada y de
crecimiento) consumido.
3. Peso corporal y fecha de la muerte para aves
que se seleccionaron o murieron.
4. La proporción de conversión de los alimentos
se calculó sobre una base de corral como alimento consumido/[peso
total de aves vivas + peso total de aves muertas y seleccionadas +
peso total de aves sacrificadas].
5. El peso corporal medio por corral se calculó
como el peso total de aves vivas en el momento del pesado/número de
aves vivas en el momento del pesado.
6. La ingesta diaria de alimento por ave se
calculó sobre una base de corral para los periodos de entrada y de
crecimiento como el alimento total consumido dividido por el número
de días con aves vivas en el periodo especificado.
7. La causa aparente de la muerte se registró
para todas las aves que murieron o se seleccionaron.
8. Se observaron las aves en un grupo base como
mínimo una vez diaria y se registraron las observaciones.
9. Causa de la muerte.
El corral fue la unidad experimental para el
análisis estadístico. Los datos de mortalidad se transformaron
utilizando una transformación de arcseno (Steel y Torrie, 1980)
antes del análisis de la varianza. Todos los datos se analizaron
mediante el análisis de la varianza utilizando el siguiente
modelo:
Las medias se compararon utilizando un test de
variaciones múltiples adecuado (Steel y Torrie, Principles and
procedures of statistics, a biometrical approach. McGraw Hill Book
Co., NY., 1980).
La administración alimenticia de OHHL mejoró
significativamente (P=0,024) el peso corporal de los pollos
parrilleros en el día 21 (Tabla 1). No hubo un efecto significativo
del BMD alimenticio en el peso corporal.
La administración de OHHL mejoró la eficacia del
alimento de parrilleros en el día 21 (P = 0,012) y para el período
global de los días 0-35 (P = 0,055). El BMD
alimenticio también mejoró la eficacia del alimento para el periodo
de los días 21-35 (P < 0,001) y el periodo global
de crecimiento (P = 0,014).
Hubo un efecto de interacción OHHL x BMD
significativo para la eficacia del alimento durante el periodo de
entrada. Sin embargo, esto es atribuible a una baja eficacia del
alimento que recibió sólo BMD en el periodo de entrada (eficacia
del alimento = 1,422). La respuesta de la eficacia del alimento a
OHHL en combinación con BMD era ligeramente superior a la de la
respuesta a OHHL solo.
En el presente estudio se utilizaron
desperdicios viejos en un intento por crear una estimulación
sustancial de las enfermedades. Sin embargo, la mortalidad global
fue muy baja en comparación con las normas comerciales del 4 al 5%.
En ausencia de BMD, la OHHL redujo la mortalidad desde un 2,0% a un
1,7%. En presencia de BMD, OHHL redujo la mortalidad desde un 3,3%
hasta un 2,7% (Tabla 2).
Estos cambios numéricos en la mortalidad no son
estadísticamente significativos pero proporcionan una evidencia
preliminar de que la administración continua de OHHL no tenía un
efecto adverso en la supervivencia del ave.
Los pesos corporales finales y los datos de
eficacia del alimento también sugieren un excelente rendimiento de
crecimiento y una morbidad del grupo mínima.
A todos los cuerpos muertos se les realizó una
necropsia y no se hallaron evidencias de efectos inusuales o
adversos de los fármacos en el estudio.
La administración continua de OHHL a pollos
parrilleros mejoró el Día 21 el peso corporal (P = 0,024) y la
eficacia global del alimento (P = 0,055).
La mortalidad de los parrilleros tratados con
OHHL fue numéricamente inferior que los controles no tratados con
OHHL ambos en presencia y ausencia de BMD alimenticio.
No hubo evidencia de ningún efecto adverso de la
OHHL en la salud de las aves.
Ejemplo
4
Este experimento examinó el efecto de
N-(3-oxohexanoil)-L-homoserina
lactona (OHHL) (CAS # 143537626, fórmula molecular:
C_{10}H_{15}NO_{4}, peso molecular: 213) en la desaparición
in vivo de materia seca en el rumen de oveja.
Se preparó una solución madre de OHHL (0,639
g/l). Se calentó aproximadamente un 50% del volumen requerido de
agua destilada hasta aproximadamente 30-40ºC y se
utilizó para disolver la cantidad requerida de polvo de OHHL. El
matraz volumétrico se llevó a volumen utilizando agua destilada
almacenada a temperatura ambiente. La solución de OHHL se aplicó a
una ración granulada de las ovejas a una razón de 3 kg por tonelada
de alimento. El alimento de control se trató con 3 kg de agua
destilada por tonelada.
Se utilizaron un mezclador por cargas y un
dispositivo de pulverización adecuado para asegurar la aplicación
uniforme de líquido en el alimento. El alimento de control se
fabricó primero para evitar la contaminación cruzada con OHHL. Se
anticipó que la ración de las ovejas comprendería aproximadamente un
tercio del total de la ingesta de materia seca de los animales de
estudio en base a una ingesta de materia seca estimada del 2% en
peso corporal.
Los intentos iniciales para administrar OHHL
mediante la aplicación de una solución acuosa a la parte externa
del alimento granulado se modificaron a medida que las ovejas
disminuyeron la ingesta de alimento tratado después de varios días.
En cambio, la OHHL se administró como un brebaje oral dos veces
diarias comenzando en la tarde del Día 11 de cada periodo.
Los animales se acorralaron individualmente para
minimizar el daño potencial para la canulación y permitir la
alimentación individual. Se proporcionó agua fresca ad
libitum.
Se proporcionó una cantidad limitada de ración
granulada a razón de aproximadamente 0,5 kg/día (0,25 kg por la
mañana y 0,25 kg por la tarde). El acceso al heno se restringió
según era necesario para ayudar a asegurar que la ración de las
ovejas se había consumido.
En los Días 12 y 13, la ración granulada (0,25
kg/animal) se administró a animales aproximadamente 1 hora antes de
la introducción de bolsas en el rumen y de nuevo tras la extracción
de la bolsa de 8 horas de cada animal.
Se secó una muestra nueva de silos de maíz hasta
peso constante y se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. Se
tomó una submuestra representativa para la determinación de la
materia seca. La muestra de molió para que pasara por una malla de
1 mm, se mezcló y se muestreó para el ensayo de materia seca. La
muestra restante se almacenó para una determinación in situ
de la desaparición de materia seca del rumen de la oveja
canulada.
En este estudio se utilizaron bolsas de muestreo
para el rumen Ankom. Cada bolsa era aproximadamente de 5 cm x 10
cm, adecuada para una muestra de un gramo. El tamaño de poro era de
52 +/- micras. Se pesaron silos de maíz secos y molidos (1,00 +/-
0,01 gramos) en bolsas y se sellaron. Se preparó un grupo de cuatro
bolsas por animal por día y se unieron a una cuerda para facilitar
la colocación y extracción del rumen. Una quinta bolsa servía como
blanco para cada grupo de cuatro bolsas. El blanco no se colocaba en
el rumen pero se lavaba, se procesaba y se secaba.
Se colocó quirúrgicamente una cánula en el rumen
en cada una de las cinco ovejas (aproximadamente de 3 años de
vida). Tras la recuperación de la cirugía, se seleccionaron cuatro
de estos animales para utilizar en el estudio. El quinto animal
sirvió como reserva para utilizar en el caso de complicaciones
post-quirúrgicas en un animal de estudio.
La desaparición de materia seca se midió
mediante la extracción de bolsas del rumen a las 4, 8, 12 y 24
horas y se lavaron con agua corriente del grifo fría junto con una
correspondiente bolsa de blanco. A continuación, las bolsas se
secaron hasta peso constante. La medición de la desaparición de
materia seca se completó para cada animal comenzando en la mañana
del Día 12 y Día 13 de cada periodo.
Se utilizó un Diseño de Cuadrado Latino para
estudiar los efectos de los dos tratamientos:
A: Control: 0 gramos de OHHL por tonelada de
ración
B: Tratado con el equivalente de 1,917 gramos de
OHHL por tonelada de ración
Cada periodo fue de 14 días de duración. Se
pusieron en bloques un total de cuatro animales de estudio en base
al peso corporal (2 bloques). A los animales del bloque se les
asignó al azar la Secuencia 1 ó 2.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos se analizaron mediante un análisis de
regresión múltiple que incluía los efectos del tratamiento, animal,
periodo, día de estudio y hora.
\vskip1.000000\baselineskip
En el Periodo 1, antes de la medición de la
desaparición in situ de materia seca, se extrajo una oveja
tratada con OHHL del estudio debido a su escaso apetito y se
sustituyó por un animal de reserva. El animal sustituido se
sacrificó, se le hizo la necropsia y se observó que tenía un absceso
hepático desarrollado antes del experimento.
\vskip1.000000\baselineskip
Hubo un efecto significativamente elevado
(P<0,0001) del tiempo de incubación en el rumen sobre la
desaparición de materia seca, tal y como ya se esperaba. Después de
4 y 24 horas de incubación, aproximadamente un 50% y un 75% de la
materia seca había desaparecido de las bolsas Ankom (Tabla 1). La
desaparición de materia seca se midió en dos días consecutivos en
cada periodo, pero no hubo un efecto significativo (P = 0,97) del
día sobre esta variable.
Los promedios de los tratamientos se resumen en
las Tablas 3 y 4. La OHHL mejoró (P = 0,105, Tabla 2) la
desaparición de materia seca promedio en 1,77 unidades porcentuales.
La magnitud de la respuesta variaba considerablemente con los
tiempos de incubación, pero esto es en gran parte un reflejo de la
variación inherente de dichas medidas.
\vskip1.000000\baselineskip
El experimento muestra que la administración de
OHHL mejoró (P = 0,105) la desaparición de materia seca del silo de
maíz en el rumen de oveja.
Las referencias mencionadas en la presente
invención están todas incorporadas expresamente por referencia.
1.- Shapiro, Bacteria as multicellular
organisms, Scientific American 246: 82-89,
1988.
2.- Eberhard et al., Structural
identification of autoinducer of photobacterium fisheri luciferase,
Biochemistry, 20: 2444-2449,
1981.
3.- Reprod. Nutr. Dev., 40:
189-202, 2000.
4.- Erickson et al., Reprod.
Nutr. Dev., 189-202, 2000.
5.- WO01/74801 (Universidad de Nottingham).
Claims (27)
1. Aditivo de alimento para animal que comprende
uno o más compuestos autoinductores, en el que el compuesto
autoinductor es una acil homoserina lactona, una acil homocisteína
lactona, una acil tiolactona o un péptido señal.
2. Aditivo de alimento para animal según la
reivindicación 1, en el que el compuesto autoinductor está mezclado
con un portador inerte.
3. Alimento para animal que comprende un
componente de alimento para animal y uno o más compuestos
autoinductores, en el que el compuesto autoinductor es una acil
homoserina lactosa, una acil homocisteína lactona, una acil
tiolactona o un péptido señal.
4. Alimento para animal según la reivindicación
3, en el que el componente de alimento para animal comprende una o
más proteínas, azúcares, grasas o fibras.
5. Alimento para animal según la reivindicación
3 o la reivindicación 4, en el que los componentes del alimento
para animal derivan de cereales u otro material vegetal.
6. Alimento para animal o aditivo de alimento
para animal según la reivindicación 6, en los que el compuesto
autoinductor es N-oxobutanoil homoserina lactona,
N-oxopentanoil homoserina lactona,
N-oxohexanoil homoserina lactona,
N-oxoheptanoil homoserina lactona,
N-oxooctanoil homoserina lactona,
N-oxononanoil homoserina lactona,
N-oxodecanoil homoserina lactona,
N-butanoil homoserina lactona,
N-pentanoil homoserina lactona,
N-hexanoil homoserina lactona,
N-heptanoil homoserina lactona,
N-octanoil homoserina lactona,
N-nonanoil homoserina lactona,
N-decanoil homoserina lactona,
N-oxobutanoil homocisteína lactona,
N-oxopentanoil homocisteína lactona,
N-oxohexanoil homocisteína lactona,
N-oxoheptanoil homocisteína lactona,
N-oxooctanoil homocisteína lactona,
N-oxononanoil homocisteína lactona,
N-oxodecanoil homocisteína lactona,
N-butanoil homocisteína lactona,
N-pentanoil homocisteína lactona,
N-hexanoil homocisteína lactona,
N-heptanoil homocisteína lactona,
N-octanoil homocisteína lactona,
N-nonanoil homocisteína lactona,
N-decanoil homocisteína lactona,
7,8-cis-N-(3-hidroxitetradecanoil)
homoserina lactona, N-oxobutanoil tiolactona,
N-oxopentanoil tiolactona,
N-oxohexanoil tiolactona,
N-oxoheptanoil tiolactona,
N-oxooctanoil tiolactona,
N-oxononanoil tiolactona,
N-oxodecanoil tiolactona, N-butanoil
tiolactona, N-pentanoil tiolactona,
N-hexanoil tiolactona, N-heptanoil
tiolactona, N-octanoil tiolactona,
N-nonanoil tiolactona, o N-decanoil
tiolactona.
7. Alimento para animal o aditivo de alimento
para animal según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en
los que el compuesto inductor está representado por una de las
fórmulas:
en las que X e Y se seleccionan
independientemente entre O, S o NH y Z es una cadena de acilo
C_{1} a C_{20} sustituida o no
sustituida.
8. Procedimiento no terapéutico de mejora del
rendimiento de un animal que comprende la administración de un
alimento para animal o aditivo de alimento para animal, según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, al animal.
9. Utilización de un alimento para animal o
aditivo de alimento para animal según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, para la administración a un animal con el
objetivo de mejorar el rendimiento de un animal.
10. Procedimiento o utilización según la
reivindicación 8 o la reivindicación 9, en los que la mejora del
rendimiento de un animal comprende la mejora de la tasa de
crecimiento del animal, la mejora del peso del animal a una edad
determinada, la mejora de la proporción de conversión del alimento,
la mejora del rendimiento o la calidad de un producto producido por
o derivado del animal.
11. Procedimiento o utilización según la
reivindicación 10, en los que el producto producido o derivado del
animal es huevos, leche o carne.
12. Procedimiento o utilización según cualquiera
de las reivindicaciones 8 a 11, en los que el alimento para el
animal o el aditivo del alimento se administra a aves, ganado,
animales domésticos o de compañía o animales marinos.
13. Procedimiento o utilización según la
reivindicación 12, en los que los animales son aves de corral,
vacas, cerdos, ovejas, conejos, caballos, perros, gatos o
peces.
14. Procedimiento o utilización según cualquiera
de las reivindicaciones 8 a 13, en los que el autoinductor se
administra al animal en una dosis equivalente de 1 a 100.000
nanomoles por tonelada de alimento.
15. Procedimiento o utilización según la
reivindicación 14 en los que el autoinductor se administra al animal
en una dosis equivalente de 100 a 10.000 nanomoles por tonelada de
alimento.
16. Procedimiento o utilización según cualquiera
de las reivindicaciones 8 a 15, en los que el compuesto
autoinductor se formula como polvo, un líquido, una cápsula o
comprimido, un brebaje o un bolo.
17. Procedimiento o utilización según cualquiera
de las reivindicaciones 8 a 16, en los que el compuesto
autoinductor se obtiene de material vegetal, algas, micótico o
bacteriano.
18. Procedimiento o utilización según cualquiera
de las reivindicaciones 8 a 17, en los que el compuesto
autoinductor se obtiene mediante la transformación de un
microorganismo o una célula vegetal, de manera que se sobreexpresa
el compuesto autoinductor.
19. Procedimiento o utilización según la
reivindicación 18, en los que el compuesto autoinductor se produce
en una planta transformada que alimenta al animal o se utiliza en la
fabricación del alimento para animal o el aditivo del alimento para
animal.
20. Procedimiento de fabricación de un alimento
para animal según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7,
comprendiendo el procedimiento la mezcla de uno o más componentes de
alimento para animal con uno o más compuestos autoinductores, donde
el compuesto autoinductor es una acil homoserina lactosa, una acil
homocisteína lactona, una acil tiolactona o un péptido señal.
21. Procedimiento según la reivindicación 19 o
la reivindicación 20, que comprende además la granulación del
alimento para animal.
22. Procedimiento de producción de un compuesto
acil homoserina lactona, comprendiendo el procedimiento el reflujo
de una amino butirolactona con un compuesto acetato para producir la
acil homoserina lactona.
23. Procedimiento según la reivindicación 22, en
el que el disolvente es tolueno, xileno o etilbenceno.
24. Procedimiento según la reivindicación 22 o
la reivindicación 23, en el que la reacción se lleva a cabo
mediante el reflujo de la mezcla de reacción a presión
atmosférica.
25. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 22 a 24, en el que el compuesto acetato es
butanoato de etilo, pentanoato de etilo, hexanoato de etilo,
heptanoato de etilo, octanoato de etilo, nonanoato de etilo,
decanoato de etilo, 3-oxobutanoato de etilo,
3-oxopentanoato de etilo,
3-oxohexanoato de etilo,
3-oxoheptanoato de etilo,
3-oxooctanoato de etilo,
3-oxononanoato de etilo o
3-oxodecanoato de etilo.
26. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 24 a 25, que comprende además la etapa adicional
de purificación de la acil homoserina lactona.
27. Procedimiento según la reivindicación 26, en
el que la acil homoserina lactona se purifica mediante la
evaporación del producto, redisolución en metanol al 5% en
diclorometano y purificación mediante cromatografía en columna.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0100387 | 2001-01-08 | ||
| GB0100387A GB0100387D0 (en) | 2001-01-08 | 2001-01-08 | The application of quorum sensing signals to improve ruminant performance |
| GB0109477A GB0109477D0 (en) | 2001-04-18 | 2001-04-18 | The application of quorum sensing signals to improve animal performance |
| GB0109477 | 2001-04-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2288550T3 true ES2288550T3 (es) | 2008-01-16 |
Family
ID=26245534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02727000T Expired - Lifetime ES2288550T3 (es) | 2001-01-08 | 2002-01-08 | Compuestos autoinductores y sus utilizaciones. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7651699B2 (es) |
| EP (1) | EP1361801B1 (es) |
| JP (2) | JP4499355B2 (es) |
| AT (1) | ATE363839T1 (es) |
| AU (1) | AU2002219348B2 (es) |
| CA (1) | CA2434117C (es) |
| DE (1) | DE60220503T2 (es) |
| DK (1) | DK1361801T3 (es) |
| ES (1) | ES2288550T3 (es) |
| WO (1) | WO2002052949A1 (es) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE523209C2 (sv) | 2002-05-14 | 2004-04-06 | Akzo Nobel Nv | Förfarande för att reducera metanbildningen från matspjälkningsaktiviteter hos djur |
| JP4773951B2 (ja) | 2003-03-03 | 2011-09-14 | エーザイ インコーポレーテッド | チオラクトン |
| GB2418427A (en) | 2004-09-02 | 2006-03-29 | Univ Cambridge Tech | Ligands for G-protein coupled receptors |
| US7662967B2 (en) | 2007-08-02 | 2010-02-16 | Cambridge Enterprise Limited | Anti-inflammatory compounds and compositions |
| GB2452696B (en) * | 2007-08-02 | 2009-09-23 | Cambridge Entpr Ltd | 3-(2',2'-dimethylpropanoylamino)-tetrahydropyridin-2-one and its use in pharmaceutical compositions |
| US20120097606A1 (en) * | 2009-06-22 | 2012-04-26 | Sumitomo Heavy Industries, Ltd. | Method for treating wastewater containing ammonia nitrogen |
| US8624063B2 (en) | 2009-06-30 | 2014-01-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Non-lactone carbocyclic and heterocyclic antagonists and agonists of bacterial quorum sensing |
| US8952192B2 (en) | 2011-03-24 | 2015-02-10 | University Of Maryland, College Park | Phosphorylated and branched dihydroxy-pentane-dione (DPD) analogs as quorum sensing inhibitors in bacteria |
| WO2015179840A1 (en) | 2014-05-23 | 2015-11-26 | Phibro Animal Health Corporation | Combination, composition, and method of administering the combination or composition to animals |
| CN104206920A (zh) * | 2014-09-25 | 2014-12-17 | 冀照明 | 一种中草药羊饲料添加剂 |
| US10526278B2 (en) | 2017-10-19 | 2020-01-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Inhibitors of quorum sensing receptor LasR |
| CN113930462A (zh) * | 2021-10-19 | 2022-01-14 | 江南大学 | 高丝氨酸内酯信号分子促进碳链延长微生物合成己酸的方法 |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH529136A (de) | 1966-09-29 | 1972-10-15 | Ciba Geigy Ag | Verfahren zur Herstellung von heterocyclischen Carbonsäuren |
| US4591872A (en) * | 1982-09-27 | 1986-05-27 | Power Science, Inc. | X-Y distinguishable multi-trace coding for multiparameter recording of a single stylus recorder |
| US4994379A (en) * | 1983-03-09 | 1991-02-19 | Cetus Corporation | Modified signal peptides |
| DE3312425A1 (de) | 1983-04-07 | 1984-10-11 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Stoffmischungen mit wachstumsfoerdernder und leistungssteigernder wirkung sowie futtermittel und traenkfluessigkeiten, die geringe mengen dieser stoffmischungen enthalten |
| US4815016A (en) * | 1986-07-24 | 1989-03-21 | Unisys Corp. | High speed logical circuit simulator |
| NO882653D0 (no) * | 1988-06-15 | 1988-06-15 | Apothekernes Lab | Doseringsform. |
| US5162337A (en) | 1990-10-05 | 1992-11-10 | Merck & Co., Inc. | Animal growth promotion |
| GB9108307D0 (en) * | 1991-04-18 | 1991-06-05 | Univ Nottingham | Autoinducer |
| WO1995001175A1 (en) * | 1993-07-02 | 1995-01-12 | The University Of Nottingham | Immunosuppressant and antiallergic compounds, e.g. n-(3-oxohexanoyl) homoserine lactone |
| US5591872A (en) * | 1993-08-09 | 1997-01-07 | The University Of Iowa Research Foundation | Autoinducer molecule |
| US6936447B1 (en) * | 2000-04-03 | 2005-08-30 | University Of Iowa Research Foundation | Autoinducer molecule |
| US5698246A (en) * | 1996-01-29 | 1997-12-16 | Cargill, Incorporated | Foodstuff for and method of feeding crustaceans and fish |
| AU1840497A (en) | 1996-02-01 | 1997-08-22 | Johns Hopkins University, The | L-homoserine and l-homoserine lactone as bacteriostatic agents for m. tuberculosis and m. bovis |
| JP3865461B2 (ja) | 1997-06-16 | 2007-01-10 | 株式会社日立製作所 | Ｉｃカード読み書き装置 |
| DE69836218T2 (de) | 1997-06-18 | 2007-09-06 | Montana State University - Bozeman | Homoserinlactone zum regulieren von biofilmen und methoden zur anwendung |
| JP3834763B2 (ja) * | 1997-09-03 | 2006-10-18 | 岡部産業株式会社 | 混合飼料 |
| JPH11269142A (ja) | 1998-03-18 | 1999-10-05 | Toa Yakuhin Kogyo Kk | アゼチジン誘導体、それを有効成分とするビフィズス菌分裂促進組成物およびその製造方法 |
| US6395282B1 (en) * | 1998-04-16 | 2002-05-28 | University Of Rochester | Immunogenic conjugates of Gram-negative bacterial autoinducer molecules |
| US6337347B1 (en) * | 1998-06-18 | 2002-01-08 | The Research & Development Institute, Inc. | Autoinducer compounds |
| US6723321B2 (en) * | 1998-07-31 | 2004-04-20 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Autoinducer synthase modulating compounds and uses thereof |
| JP2000069985A (ja) | 1998-09-01 | 2000-03-07 | Basic Industries Bureau Miti | 細菌培養による化合物の製造方法及び植物生育促進剤 |
| GB0007588D0 (en) * | 2000-03-30 | 2000-05-17 | Univ Nottingham | N-Acyl homoserine lactones |
| AU2001268078A1 (en) * | 2000-06-23 | 2002-01-08 | Acuabiotec Llc | Bioactive food complex, method for making bioactive food complex product and method for controlling disease |
| US20030078231A1 (en) * | 2001-06-22 | 2003-04-24 | Wilburn Michael D. | Orthomolecular sulpho-adenosylmethionine derivatives with antioxidant properties |
-
2002
- 2002-01-08 WO PCT/GB2002/000072 patent/WO2002052949A1/en active IP Right Grant
- 2002-01-08 EP EP02727000A patent/EP1361801B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-01-08 AU AU2002219348A patent/AU2002219348B2/en not_active Ceased
- 2002-01-08 DE DE60220503T patent/DE60220503T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-01-08 DK DK02727000T patent/DK1361801T3/da active
- 2002-01-08 ES ES02727000T patent/ES2288550T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-01-08 JP JP2002553913A patent/JP4499355B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-01-08 CA CA2434117A patent/CA2434117C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-01-08 US US10/250,842 patent/US7651699B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-01-08 AT AT02727000T patent/ATE363839T1/de not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-12-19 JP JP2007327905A patent/JP2008079623A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2008079623A (ja) | 2008-04-10 |
| WO2002052949A1 (en) | 2002-07-11 |
| ATE363839T1 (de) | 2007-06-15 |
| US7651699B2 (en) | 2010-01-26 |
| AU2002219348B2 (en) | 2006-11-16 |
| JP4499355B2 (ja) | 2010-07-07 |
| DE60220503T2 (de) | 2008-01-31 |
| EP1361801B1 (en) | 2007-06-06 |
| JP2004525617A (ja) | 2004-08-26 |
| CA2434117A1 (en) | 2002-07-11 |
| DK1361801T3 (da) | 2007-10-08 |
| EP1361801A1 (en) | 2003-11-19 |
| US20040115245A1 (en) | 2004-06-17 |
| DE60220503D1 (de) | 2007-07-19 |
| CA2434117C (en) | 2011-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2008079623A (ja) | 自己誘導因子化合物およびその使用 | |
| RU2345552C2 (ru) | Композиция корма для животных | |
| SU997646A1 (ru) | Кормова добавка | |
| ES2233706T3 (es) | Utilizacion de alcaloides de benzofenantridina como aditivos para pienso. | |
| AU2002219348A1 (en) | Autoinducer compounds and their uses | |
| US11864567B2 (en) | Methods and formulations for reducing bovine emissions | |
| CN107410187A (zh) | 一种黄牛的饲养方法 | |
| JP2004525617A5 (es) | ||
| CS253570B2 (en) | Fodder ingredient | |
| RU2676318C1 (ru) | Способ применения кормовой добавки для бычков | |
| CN106343180B (zh) | 一种用于提高黑山羊体重的饲料及其制备方法 | |
| RU2340204C1 (ru) | Способ кормления цыплят-бройлеров | |
| CN109562158A (zh) | 在动物中促进生长和提高饲料转化率的方法 | |
| CA1254437A (en) | Growth stimulant for animals | |
| KR20020059730A (ko) | 가축 생산성 개선을 위한 아릴옥시 프로판올아민 | |
| CN107518192A (zh) | 一种生态猪饲料及其使用方法 | |
| Kan et al. | Feed additives: do they add to animal welfare? An evaluation | |
| Flores-Tejeida et al. | A review of hot and sweet pepper added in animal nutrition: alternative against the use of antibiotics | |
| SU1521432A1 (ru) | Способ выращивани молодн ка сельскохоз йственных животных | |
| CN108992448A (zh) | 一种观赏鱼用含盐除菌片剂及其制备方法 | |
| JPS59227250A (ja) | 有用動物の飼育及び肥育における非特異性作用物質の組合せの投与法 | |
| CN103947841A (zh) | 一种具有减少环境污染效果的饲料添加剂及其制法与应用 |