ES2287713T3 - Uso de la dapsona como neuroprotector en el infarto cerebral. - Google Patents

Abstract

La presente invención, tiene por objeto demostrar el uso de la dapsona como el primer tratamiento eficaz contra las consecuencias incapacitantes asociadas con el infarto cerebral en estos pacientes. La dapsona fue evaluada como neuroprotector, en el modelo de infrato cerebral producido por la oclusión de la arteria cerebral media en el las ratas y en pacientes que sufrieron un infarto cerebral agudo por trombo-embolismo- En ambos estudios la dapsona demostró una reducción de entre 70 y 90% de las consecuencias adversas que se presentan como consecuencia del infarto.

Description

Uso de la dapsona como neuroprotector en el infarto cerebral.

Para el tratamiento farmacológico del infarto cerebral, se han utilizado históricamente algunos medicamentos, con muy poca eficacia clínica, entre ellos podemos mencionar a la citicolina. En un estudio reciente, publicado en el año 2002 (Dávalos A, Castillo J, Alvarez- Sabin J, Secades JJ, Mercadal J, Lopez S, Cobo E, Warach S, Sherman D, Clark WM, Lozano R., Oral citicoline in acute ischemic stroke: an individual patient data pooling análisis of clinical trials. Stroke 33 (12):2850-2857, 2002), se encontró que este fármaco producía una mejoría del 25% en promedio, tres meses después de su administración a pacientes con infarto cerebral, en tanto que los pacientes que recibieron placebo mejoraron un 20% en promedio. Como se puede deducir de estos resultados, este tratamiento farmacológico es incapaz de reducir el daño cerebral asociado con el infarto cerebral en más de un 20-30% en promedio.

Por otra parte, la investigación y el desarrollo de nuevos medicamentos para prevenir las consecuencias de infarto cerebral ha producido resultados decepcionantes. En el año 2001, por ejemplo, la Food and Drug Administration de los Estados Unidos aprobó el uso de 5 fármacos contra las enfermedades cardiacas, y ningún fármaco contra el infarto cerebral. Esto conlleva a que en la actualidad no exista un tratamiento medicamentoso de elección para este grave padecimiento.

La presente invención tiene por objeto demostrar el uso de la dapsona como el primer tratamiento eficaz contra las consecuencias incapacitantes asociadas con el infarto cerebral en estos pacientes.

La dapsona es un fármaco actualmente empleado en el tratamiento quimio-terapéutico de la lepra y en las profilaxis contra la neumonía por pneumocytis carinii. Dado que la lepra es un padecimiento cada vez menos frecuente, el uso terapéutico de dapsona se ha limitado en fechas recientes.

El infarto cerebral agudo es la tercera causa de muerte y la principal causa de incapacidad en la población mundial. En vista de las graves consecuencias que el infarto cerebral acarrea a la sociedad en términos de gasto por rehabilitación y cuidados médicos, se decidió buscar un nuevo agente terapéutico más eficaz que los actuales, sintetizando la dapsona en un compuesto novedoso.

Descripción

La presente invención tiene por objeto desarrollar un producto de uso terapéutico para el tratamiento de infarto cerebral agudo. Este padecimiento esta ampliamente distribuido en la población mundial, con una incidencia de 500,000 hasta 750,000 personas afectadas anualmente, tan solo en los Estados Unidos, por lo que se decidió buscar otras alternativas terapéuticas más eficaces que las actuales.

En la búsqueda de un nuevo agente terapéutico más eficaz que los actuales para el tratamiento farmacológico del infarto cerebral se sintetizó la dapsona en un compuesto con la fórmula siguiente:

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El fármaco dapsona ha dejado de producirse en el país desde los años ochentas en forma de medicamento y no se produce tampoco la materia prima.

Por tales motivos, en el presente trabajo se demuestra, mediante un modelo experimental, y mediante un estudio clínico controlado en pacientes con infarto cerebral agudo que la dapsona es eficaz para prevenir las consecuencias adversas del padecimiento cuando se administra dentro de las primeras doce horas después del evento isquémico.

Las pruebas farmacológicas se realizaron usando el modelo experimental de infarto cerebral agudo por obstrucción permanente de la arteria cerebral media en ratas, mediante la introducción de un hilo de sutura a través de la arteria carótida interna de los animales (Ejemplo 1). El fármaco también se administró a pacientes con infarto cerebral agudo, que acudieron al servicio de Urgencias Médicas de Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía "Manuel Velasco Suárez" de la Ciudad de México (Ejemplo 2).

Los resultados de los experimentos con ratas demuestran que la dapsona (I) a una dosis de 9.325 mg/kg tuvo una eficacia del 93%, mientras que a una dosis de 12.5 mg/kg, fue eficaz en un del 91% para reducir el volumen de la lesión cerebral producido por el infarto en el modelo experimental de infarto provocado en las ratas.

Los resultados de eficacia en los pacientes demostraron que la dapsona a una dosis de 200 mg fue capaz de mejorar los síntomas neurológicos de los pacientes en un 67% en promedio.

La dosis efectiva para la dapsona es de 0.013 m. moles/kg.

No se presentaron efectos adversos a las dosis empleadas.

En particular, se emplean las siguientes técnicas:

Síntesis de Dapsona

La dapsona puede ser sintetizada de diversas formas, pero se ofrece la siguiente vía de síntesis como ejemplo. Esta síntesis se realizó en dos pasos:

1. Se colocaron 60 g de acetanilida en un matraz Erlenmeyer y se calentaron lentamente a la flama hasta la fusión total del sólido. El líquido viscoso resultante se enfrió en un vaso de hielo, procurando que el material solidificado quedara en el fondo del matraz. Se agregaron 165 mi de ácido clorosulfónico en una sola porción, sin remover del baño de hielo. Posteriormente se removió el matraz del hielo, agitándose cuidadosamente y se dejó que la reacción se llevara a cabo durante 10 minutos, al término de los cuales se calentó nuevamente la mezcla de reacción hasta la solubilización total de la acetanilida remanente, dejándose reaccionar nuevamente por 10 minutos más. Se dejó enfriar el producto y se vertió cuidadosamente en un recipiente con hielo y agua, filtrándose el precipitado y lavándose con agua fría. Se colectó el precipitado, se disolvió en cloroformo y se extrajo tres veces con agua, colectándose la fase clorofórmica, la que se colocó en un baño de hielo, precipitando el cloruro de tionilo purificado (P. fusión reportado del intermediario: 149ºC).

2. Se colocaron 123.6 mi de nitrobenceno anhidro en un vaso para reactor, se agregaron 89.2 g de cloruro de aluminio y se calentaron lentamente; a la mezcla caliente se agregaron 41.3 g de cloruro de tionilo, calentándose la mezcla de reacción a una temperatura de 140-145ºC y se adicionaron lentamente 13 g de acetanilida, manteniéndose la temperatura de reacción durante dos horas. Al término de este período se vertió el curdo de la reacción en 104 mi de agua acidificada con ácido clorhídrico, con lo que se precipitaron unos cristales de color oscuro, los que se recristalizaron con ácido acético diluido. Estos cristales se pusieron a reflujo con ácido clorhídrico 5N durante 30 minutos, neutralizándose posteriormente la mezcla de reacción, con lo que se precipitaron unos cristales blancos (DDS cruda), que se recristalizaron nuevamente con etanol.

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Caracterización química del compuesto sintetizado

Para determinar la autenticidad de los compuestos sintetizados, se obtuvo el punto de fusión de éstos, resultando de 151-153ºC para el intermediario de reacción cloruro de tionilo, de 172-175ºC para DDS.

Los puntos de fusión reportados para estos compuestos son de 149ºC, 175-176ºC para el intermediario y la DDS, respectivamente.

Modo preferente de llevar a cabo la invención Ejemplo 1 Evaluación de efecto neuroprotector de la dapsona en el modelo de infarto cerebral agudo inducido por la oclusión de la arteria cerebral media de la rata

La dapsona fue evaluada como neuroprotector en el modelo de infarto cerebral producido por la oclusión de la arteria cerebral medía. El fármaco fue suspendido en un vehículo viable.

Se utilizaron 3 grupos de 5 animales tratados con: Solución salina isotónica (SSI, grupo control), Dapsona (12.5 mg/kg), y Dapsona (9.375 mg/kg) respectivamente por vía intraperitoneal, 30 minutos después de la oclusión de la arteria cerebral media, como se describe enseguida.

Se produjo la isquemia selectiva cerebral permanente en los animales mediante la introducción de un hilo de sutura intraluminal a través de la arteria carótida. A todos los animales se les produjo anestesia continua durante el procedimiento quirúrgico con Halotano al 1.5%, por medio de una mascarilla facial. Se colocó a los animales en decúbito dorsal, se fijó y se rasuró la región cervical anterior para practicar una incisión en la línea media que va del manubrio de esternón hacia la región del músculo esternohiodeo y se siguió hacia su borde lateral, identificando en este sitio el borde media) del esternocleidomastoideo y la aponeurosis cervical superficial en su hoja profunda, misma que se incidió para exponer la carótida común por debajo y por dentro del vientre caudal de digástrico. Se efectuó una disección cortante de la carótida común hasta el asa del hipogloso. Se identificó la bifurcación carotídea, la carótida externa y sus ramas occipital y tiroidea, estas dos últimas se ligaron con monofilamento de 8-0, así como con electrocoagulación para su corte posterior. Se disecó la carótida interna en una longitud de aproximadamente 5 mm y en ese momento se identificó la arteria pterigopalatina. En ella se colocó un microchip o en su defecto se ligó con monofilamento 6-0. Una vez retirado el flujo por éstas afluentes arteriales se procedió a introducir nylon monofilamento de 3-0 en dirección hacia la arteria carótida interna, a través de muñón de la arteria carótida externa, por una longitud de 17 mm a partir de la bifurcación. Se procedió a cerrar la herida y se dejo recuperar al animal con agua y alimento a libre demanda. En todos los casos se corroboró la isquemia por observación macroscópica y por la posición de hilo.

Evaluación del efecto neuroprotector de la dapsona en ratas

Durante las 96 h siguientes al procedimiento de isquemia, se evaluó neurológicamente a los animales empleando una escala funcional, cada 24 h. Esta escala establece un puntaje de 0 a 5, de acuerdo con la gravedad de los signos que presenta el animal: 0 = sin alteración neurológica; 1 = dificultad para extender totalmente la extremidad anterior; 2 = marcha circular a la derecha; 3 = caída a la derecha; 4 = el animal no camina espontáneamente y tiene un nivel de conciencia deprimido; 5 = muerte.

Determinación del volumen tisular de daño

Al término de las 96 h de observación, los animales se sacrificaron con una sobredosis de pentobarbital sódico por vía intraperitoneal y se les extrajo el cerebro por craniectomía.

Una vez extraído, el cerebro se fijó en alcohol anhidro durante dos semanas. Se continuó con el proceso histológico habitual y se realizaron cortes de 10 um, almacenando un corte cada 200 um. Estos últimos fueron teñidos con la técnica de Hematoxilina-eosina. Todos los cortes fueron revisados por un patólogo, quien se encontraba ciego al grupo de tratamiento, para determinar macro y microscópicamente las zonas de isquemia.

Se determinó el área de cada corte histológico usando un sistema digital de análisis y un amplificador fotográfico. En todos los casos se realizó una amplificación de 1:10. A cada corte se le realizaron 3 determinaciones: A) Area total, incluyendo los ventrículos B) Area ventricular C) Área de isquemia, de acuerdo con la revisión del patólogo. Para determinar el volumen de lesión, se utilizó la siguiente fórmula:

V = \frac{P \ (0 . 2 \ mm)}{10}

Donde P es la suma de las áreas (en mm^{2}), 0.2 mm es la longitud fija entre cada corte y la división entre 10 es debida a la amplificación de cada corte para la medición de volumen.

Aplicando la fórmula se obtuvieron tres diferentes volúmenes: Total, Ventricular y de isquemia. Se restó el volumen ventricular al volumen total, para obtener el volumen de parénquima cerebral. Este último se usó como referencia para obtener el porcentaje de lesión, usando el volumen de isquemia.

Ejemplo 2 Evaluación del efecto neuroprotector de la dapsona en pacientes con infarto cerebral agudo

En este estudio se evaluó el efecto neuroprotector de la dapsona en pacientes que, habiendo sufrido un infarto cerebral agudo por trombo-embolismo, fueron ingresados al Departamento de Urgencias Médicas del Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía "Manuel Velasco Suárez". La dapsona se administró en una dosis única de 200 mg en suspensión, por la vía oral. La suspensión se mantiene estable en refrigeración a 4ºC hasta por un mes.

La dapsona fue administrada de manera ciega a 15 pacientes, mientras que a otros 15 pacientes se les administró una suspensión de anti-ácido, como medicamento placebo. Los pacientes fueron asignados al azar a uno u otro tratamiento, usando números al azar, generados por una calculadora de bolsillo. Ambos medicamentos fueron administrados durante las primeras doce horas después de infarto cerebral. Como resultado de estos procedimientos, el estudio clínico fue aleatorizado, doble ciego y controlado con el uso de placebo.

La evaluación de los signos y síntomas clínicos fue realizada en ciego por un neurólogo experto, con la escala NIH, que cuantifica la intensidad de los trastornos provocados por el infarto cerebral. Dicha escala fue aplicada al momento de ingreso del paciente al estudio (día cero) y a los 2,6 y 30 días después del infarto cerebral. Se considera un infarto como moderadamente grave o grave cuando la escala NIH arroja un valor mayor de siete.

Análisis estadístico

Se utilizaron dosis de dapsona en el rango de 1 a 12.5 mg/kg, por la vía oral en el caso de pacientes o por la vía intraperitoneal en el caso de las ratas.

Para la evaluación de la escala neurológica y del porcentaje de volumen de lesión en las ratas, se determinó la significancia estadística con la prueba de Kruskal-Wallis, seguida de la prueba U de Mann-Whitney.

Los resultados de la escala NIH en los dos grupos de pacientes fueron analizados estadísticamente con una prueba de análisis de varianza de una vía (ANOVA), usando como covariables la Escala NIH al día de ingreso (día cero), así como el género, la edad, la presión arterial y otras variables clínicas importantes para el desenlace de paciente.

Se tomaron valores de p < 0.01 y 0.05 para determinar el limite de significancia estadística.

Los resultados de la evaluación neurológica en las ratas se muestran en la figura 1, en la que se aprecia el puntaje de la prueba neurológica en función de los tiempos después del la producción de infarto en las ratas. Los resultados se expresan como el promedio de 4 experimentos independientes. D = Dapsona (9.375 y 12.5 se refiere a las dosis en mg/kg, ip), *p < 0.05 (Prueba de Kruskal-Wallis seguido por prueba de Mann-Withney).

Los datos de la prueba neurológica en las ratas muestran que los animales tratados con la dapsona a las dos dosis empleadas se recuperan de la lesión isquémica, de manera significativa, comparando con el grupo control.

Los resultados de volumen de lesión se presentan en la figura 2, que muestra el porcentaje de lesión isquémica, 96 horas después de la producción de infarto en las ratas.

Los resultados se expresan como el promedio +/- el error estándar de 4 experimentos independientes. D = Dapsona (9.375 y 12.5 se refiere a las dosis en mg/kg, ip), *p < 0.05 (Prueba de Kruskal-Wallis seguido por prueba de Mann-Withney).

Los datos obtenidos demuestran que la dapsona protegió en un 93% a la dosis de 9.375 mg/kg y un 90% a la dosis de 12.5 mg/kg, respectivamente, en comparación con el grupo control.

Los resultados en los pacientes con infarto cerebral trombo-embolico agudo se muestran en la Figura 3, en la que se señala el puntaje de la escala neurológica NIH en función de los tiempos (en días) después de la administración de la dapsona o el placebo. Los resultados se expresan como el promedio de 15 pacientes por grupo +/- el error
estándar.

D = Dapsona, *p < 0.05, **p < 0. 01 (Prueba de Análisis de varianza, con covariables).

Los resultados con los pacientes tratados con 200 mg de dapsona por la vía oral demuestran una mejoría clínica significativa. Esta mejoría fue de 67% en promedio.

La evaluación del efecto neuroprotector de la dapsona de la presente invención puede resumirse de la siguiente manera: Se observó una reducción significativa en la gravedad de los síntomas neurológicos en las ratas de 50%, comparada con el grupo control. También se observaron reducciones de 93% y el 90% en el volumen de lesión en estos mismos animales.

En relación con el estudio en pacientes, la mejoría clínica fue del 67% en promedio.

Estos resultados indican que la dapsona es más eficaz que los fármacos actualmente existentes en el mercado para el tratamiento de infarto cerebral agudo. Esto, con una dosis preferida de dapsona en el rango de 1 a 12.5 mg/kg, administrada durante las primeras 12 h del infarto cerebral agudo, aunque la dapsona puede ser administrada también en dosis repetidas.

Claims (4)

1. El uso de la dapsona para preparar un medicamento para el tratamiento del infarto cerebral.

2. El uso de la dapsona, de conformidad con la reivindicación, 1, en donde el medicamento es de administración oral.

3. El uso de la dapsona, de conformidad con la reivindicación, 2, en donde el medicamento de administración oral es una suspensión.

4. El uso de la dapsona, de conformidad con la reivindicación 3, en donde la suspensión contiene 200 mg. de dapsona.