ES2283608T3 - Secuencias peptidicas de union a la proteina prionica. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto proteico compuesto por la fórmula B-[G3-B]x, en la que cada B se selecciona independientemente entre un grupo compuesto por la SEC ID Nº 1 a 24, G3 representa tres restos de glicina, y x es un número entero de 1 a 20, siendo capaz dicho compuesto de unirse a PrP.
Description
Secuencias peptídicas de unión a la proteína
priónica.
La presente invención se refiere a compuestos
proteicos que se unen a la proteína priónica y usos profilácticos y
terapéuticos de estos compuestos para inhibir la conversión de la
proteína priónica normal (PrP^{c}) en la isoforma asociada al
trastorno resistente a proteasa, PrP^{sc}.
Los trastornos por priones son una familia de
trastornos neurodegenerativos fatales que pertenecen al grupo de las
encefalopatías espongiformes subagudas transmisibles (TSE). En la
actualidad, la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob
(CJD), el kuru, el síndrome de insomnio familiar fatal y la
enfermedad de
Gertmann-Straussler-Scheinker son
las formas que afectan a los seres humanos. Entre estos, CJD es la
más dominante, que afecta a aproximadamente una persona entre una
población de un millón por año en el mundo (Johnson and Gibbs,
(1998) N. Engl. J. Med. 339: 1994-2004). Los
trastornos por priones de animales incluyen la encefalopatía
espongiforme bovina (BSE) en vacas, el escrapie en ovejas y cabras,
y el trastorno debilitante crónico del ciervo mulo y el alce. BSE,
que se identificó por primera vez en 1986 en el Reino Unido, llegó a
ser una epidemia principal en Europa en la década de 1990. En abril
de 2001 se habían identificado 181.500 cabezas de ganado infectadas
con BSE en Europa, predominantemente en Gran Bretaña (Organización
Mundial de la Salud, 2001, Diario Oficial de las Comunidades
Europeas, Informe Especial Nº 14/2001 C324/1 del tribunal de
Auditores 2001). Fuera de Europa se ha informado de ganado infectado
con BSE en Canadá, las Islas Malvinas, Omán, y más recientemente,
Japón. Se cree que ha surgido un nuevo trastorno por priones,
variante de CJD, como una infección a través de especies por el
consumo de ganado infectado por BSE por seres humanos. Se ha
diagnosticado más de un centenar de casos de variante de CJD en
seres humanos desde junio de 2001 (Organización Mundial de la Salud,
2001, vide supra). Actualmente no hay tratamiento eficaz o
profilaxis para los trastornos por priones.
Una característica común a todas las
enfermedades TSE es la acumulación de una isoforma aberrante de la
proteína priónica normal (indicada PrP o PrP^{c}). La proteína
priónica celular (PrP^{c}) es una sialoglicoproteína codificada
por un gen que en seres humanos está localizado en el cromosoma 20
(Oesch, B. et al., Cell 40:735-746, (1985);
Basler, K. et al., 46:417-428 (1986); Liao,
Y. J. et al., Science 233:364:367 (1986); Meyer, R.K. et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:2310-2314
(1986); Sparkes, R. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
83:7358-7362 (1986); Bendheim, P.E. et al.
Infect. Dis. 158: 1198-1208 (1988); Turk, E. et
al., Eur. J. Biochem. 176: 21-30 (1988)). El gen
de PrP se expresa en tejidos neurales y no neurales, estando la
concentración más elevado de ARNm en las neuronas (Chesebro, B.
et al., Nature 315:331-333 (1985);
Kretzschmar, H. A. et al., Am. J. Pathol.
122:1-5 (1986); Brown, H. R. et al., Acta
Neuropathol. 80:1-6 (1990); Cashman, N. R. et
al., Cell 61: 185-192 (1990); Bendheim, P. E.
Neurology, 42: 149-156 (1992)).
El producto de traducción del gen de PrP consta
de 253 aminoácidos en seres humanos (Kretzschmar, H.A. et
al., DNA 5: 315-324 (1986); Pucket, C. et
al., Am. J. Hum. 49: 320-329 (1991)), 254 en
hámster y ratones o 256 aminoácidos en ovejas y experimenta varias
modificaciones post-traduccionales. En hámster, se
escinde un péptido señal de 22 aminoácidos en el extremo
N-terminal, se retiran 23 aminoácidos del extremo
C-terminal al añadir un anclaje de glicosil
fosfatidilinositol (GPI), y se unen oligosacáridos unidos a
asparagina a los restos 181 y 197 en un bucle formado por un enlace
disulfuro (Turk, E. et al., Eur. J. Biochem.
176:21-30 (1988); Hope, J. et al., EMBO J.
5:2591-2597 (1986); Stahl, N. et al., Cell
51: 229-240 (1987); Stahl, N. et al.,
Biochemistry 29: 5405-5412 (1990); Safar, J. et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 6377 (1990)).
En encefalopatías relacionadas con priones,
PrP^{c} se convierte en una forma alterada denominada PrP^{sc},
que se puede distinguir de PrP^{c} porque PrP^{sc} (i) se
agrega; (ii) es resistente a la proteinasa K porque solamente se
retiran 67 aminoácidos N-terminales por digestión
con proteinasa K en condiciones en las que PrP^{c} se degrada
completamente; y (iii) tiene una alteración en la conformación
proteica de \alpha-hélice para PrP^{c} en una
forma alterada (Oesch B. et al., Cell
40:735-746 (1985); Bolton, D. C. et al.,
Science 218: 1309-1311 (1982); McKinley, M.P. et
al., Cell 35:57-62 (1982), Bolton, D. C. et
al., Biochemistry 23: 5898-5905 (1984);
Prusiner, S.B. et al., Cell 38: 127-134
(1984); Bolton, D. C. et al., Arch. Biochem. Biophys. 258:
1515-22 (1987)).
Varias líneas de evidencia sugieren que
PrP^{sc} puede ser un componente clave del agente transmisible
responsable de las encefalopatías relacionadas con priones
(Prusiner, S. B. Science 252:1515-22 (1991)) y se ha
establecido que su núcleo resistente a proteasa es la proteína
estructural principal de las fibrillas tipo amiloide que se acumulan
intracerebralmente en algunas de estas afecciones (Brendeheim, P.E.
et al., Nature 310: 418-421 (1984); DeArmond,
S. J. et al., Cell 41:221-235 (1985);
Kitamoto, T. et al., Ann. Neurol. 20:204-208
(1986); Robert, G. W. et al., N. Engl. Med.
315:1231-1233 (1986); Ghetti, B. et al.,
Neurology 39:1453-1461 (1989); Tagliavini, F. et
al., EMBO J. 10:513-519 (1991); Kitamoto, T.
et al., Neurology 41:306-310 (1991)).
En resumen, la configuración anormal de la
proteína priónica (PrP^{sc}) se considera infecciosa y resistente
a proteolisis (Prusiner, S.B. (1991) Science 252:
1515-1522; Prusiner, S.B. (1998) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 95: 13363-13383). La proteína PrP
normal (PrP^{c}) se expresa en la mayoría de los tejidos del
cuerpo, mostrando los tejidos nerviosos los niveles de expresión más
elevados de PrP^{c} (Bendheim et al., (1992), Neurology 42,
149-156, Horiuchi et al., (1995), J. Gen.
Virol. 76: 2583-2587). A diferencia de PrP^{sc}
la forma normal de PrP es sensible a proteasa y no es infecciosa. Se
cree, sin embargo, que PrP^{sc} se obtiene de la isoforma celular
normal (Prusiner, S.B. (1991) Science
252:1515-1522). La conversión in vitro
de PrP^{c} a PrP^{sc} catalizada por PrP^{sc} libre de células
(como se presentó inicialmente en 1994 por Kocisko, D.A., Corne,
J.H., Priola, S.A., Chesebro, B., Raynond, C.J., Lansbury, P.T. y
Caughey, B. (1994) Nature 370: 471-474)
proporciona apoyo a esta teoría.
Una diana principal para la intervención
terapéutica potencial en trastornos neurodegenerativos, en
particular, trastornos por priones, es la conversión de PrP^{c} en
PrP^{sc}. Se ha examinado una diversidad de inhibidores de la
formación de PrP^{sc}, incluyendo antraciclinas, rojo Congo,
glucosaminoglicanos polisulfatados, y heparinas, para posible
utilidad terapéutica en el tratamiento o prevención de trastornos
por priones (Ehlers, B. and Diringer, H. (1984) J. Gen. Virol.
65:1325-1330; Caughey, B. and Race, R.E.
(1992) J. Neurochem. 59:768-771; Caspi, S.,
Sasson, S.B., Taraboulos, A. and Gabizon, R. (1998) J. Biol. Chem.
273:3483-3489; Kimberlin, R.H. and Walker,
C.A. (1986) Antimicrob. Agents Chemother.
30:409-413; Caughey, B. and Raymond, G.J.
(1993) J. Virol. 67:643-650). Los péptidos
inhibidores con homología a PrP se han sugerido como agentes
terapéuticos potenciales para el tratamiento de trastornos por
priones (Chesebro, B. et al, Solicitud de Patente de Estados
Unidos Nº 2001/0041790; Kapumiotou, A. et al, Solicitud de
Patente de Estados Unidos Nº 2001/0007015; Cashman et al,
Cashman, N. et al, documento WO 00/78344; Collinge, J. et
al, documento WO 01/07479; Soto-Jara, C. et
al, Patente de Estados Unidos 5 948 763). Más recientemente, el
grupo de Prusiner exploró un panel de fármacos conocidos porque
penetran la barrera hematoencefálica para determinar si podrían
inhibir la formación de PrP^{sc} (Korth, C., May, B.C.H., Cohen,
F.E. and Prusiner, S.B. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA
98:9836-9841). Descubrieron dos tipos de
fármacos, derivados de acridina y fenotiazina, que son inhibidores
bastante potentes de la formación de PrP^{sc} en células de
neuroblastoma.
Un enfoque a la prevención de trastornos por
priones sería una vacuna contra PrP. Se ha demostrado que las
vacunas para muchas infecciones bacterianas y virales son bastante
eficaces, proporcionando inmunidad contra una diversidad de
trastornos en seres humanos y animales domésticos. La mala
inmunogenicidad de PrP, sin embargo, ha impedido el desarrollo de
una vacuna eficaz contra trastornos por priones. Sin embargo, el uso
potencial de anticuerpos para la profilaxis de trastornos por
priones está en investigación activa en muchos laboratorios. Varios
grupos han informado de efectos positivos para la aplicación de
anticuerpos anti-PrP. Recientes desarrollos incluyen
la demostración tanto de la prevención como del retardo en la
formación de priones resistentes a proteasa en células cultivadas
(Enari, M. and Weissmann, C. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA
98:9295-9299) y en algunos casos una
inversión en la formación de PrP^{sc} en células infectadas por
priones (Pertz, D. et al. (2001) Nature 412:
739-743).
Aunque se ha emprendido una diversidad de
aproximaciones hacia el objetivo de prevención y/o terapia para
trastornos por priones, no hay tratamientos profilácticos o
terapéuticos existentes demostrados como eficaces para estos
trastornos en seres humanos o animales.
Varios de los compuestos mencionados
anteriormente han demostrado retardar la aparición de los síntomas
clínicos y aumentar los tiempos de supervivencia para animales
infectados experimentalmente con escrapi, pero ninguno ha demostrado
ser una terapia eficaz para trastornos por priones, además, algunas
de estas moléculas tienen un riesgo de efectos tóxicos potenciales
tan elevado que no serían elecciones apropiadas para agentes
terapéuticos con los que tratar a seres humanos o animales. Los
efectos secundarios tóxicos pueden ser toxicidad común que es por
ejemplo crítico para acridina y fenotiazina. Además, para los
péptidos y proteínas conocidos en la técnica anterior las
respuestas alérgicas como resultado de la administración de los
fármacos a menudo son un problema grave.
En base al trabajo conseguido hasta la fecha con
modelos de cultivo celular, el uso de anticuerpos para tratar un
trastorno por priones tiene potencial, pero aún está en las fases
tempranas de desarrollo. Hay inconvenientes para este enfoque
terapéutico, siendo uno la corta vida media de los anticuerpos y
otra la dificultad de conseguir que los anticuerpos a través de la
barrera hematoencefálica alcancen las áreas diana en el cerebro.
Yehiely F. et al., "Identification of
Candidate Binding to Prion Protein" Neurobiology of Disease,
1997, páginas 339-355, describen la identificación
de proteínas que se unen a PrP usando una proteína de fusión que
contiene PrP y fosfatasa alcalina para experimentos de
exploración.
La Patente de Estados Unidos Nº 6.365.359
describe proteínas y farmacóforos funcionalmente equivalentes y
métodos para crear y/o detectar inhibidores de la formación de
priones.
Por tanto, el problema técnico subyacente en la
invención es proporcionar compuestos que puedan penetrar en la
barrera hematoencefálica y sean capaces de unirse a PrP con elevada
afinidad y que por lo tanto puedan usarse como un potente inhibidor
para la formación de PrP^{sc} en el cerebro. Además, un problema
adicional a resolver es proporcionar compuestos con los efectos
secundarios tóxicos reducidos. Esto incluye especialmente la
reducción de la respuesta alérgica después de la administración a un
paciente o animal. Un objeto adicional de la invención es
proporcionar compuestos que sean más resistentes contra la
inactivación enzimática.
El problema técnico anterior se resuelve por las
realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones.
[La invención se refiere particularmente a un
compuesto proteico compuesto por la fórmula
b-[G_{3}-B]_{x}, en la que cada B se
selecciona independientemente entre el grupo compuesto por la SEC ID
Nº 1 a 24, G_{3} representa tres restos de glicina y x es un
número entero de 1 a 20, siendo dicho compuesto capaz de unirse a
PrP.]
La expresión "compuesto proteico" indica un
compuesto que comprende al menos una primera parte estructural que
es un polímero o un oligómero de L-aminoácidos y/o
D-aminoácidos que están unidos por enlaces
peptídicos y una o más segundas partes opcionales que no comprenden
uno o más aminoácidos tales como oligómeros o polímeros de
aminoácidos y que están unidas a la primera o primeras partes por
enlaces covalentes o no covalentes. Los aminoácidos que forman la
primera parte incluyen los veinte aminoácidos de origen natural,
aminoácidos modificados o aminoácidos raros pero de origen natural.
Los aminoácidos pueden modificarse, por ejemplo, por glicosilación.
Las modificaciones habitualmente se localizan en los extremos de la
primera parte de compuesto proteico. Las modificaciones preferidas
son un grupo amida en el extremo C-terminal y/o un
resto formilo o piroglutamilo en el extremo
N-terminal. Los compuestos proteicos modificados de
este modo pueden ser más estables contra el ataque proteolítico de
las carboxipeptidasas y aminopeptidasas, respectivamente.
La expresión "capaz de unirse a PrP"
implica que la unión del compuesto respectivo se puede medir en el
siguiente ensayo. Se inmoviliza albúmina de suero bovino (BSA), la
proteína de unión a maltosa (MBP) y una proteína de fusión de BMP y
una PrP humana en una placa de microtitulación. El compuesto a
ensayar se indica como unión a PrP si la unión a la proteína de
fusión excede significativamente la unión tanto a BSA como a MBP. La
unión no específica se suprime bloqueando con 5 mg/ml de BSA,
NaN_{3} al 0,02%, NaHCO_{3} 0,1 M, pH 8,6 y lavando con
TBS/Tween-20 al 0,5% v/v tres veces (TBS:
Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM). Si el
compuesto es un péptido, entonces el ensayo se realiza con
5x10^{11} fagos que presentan el péptido en lugar del péptido por
sí mismo. La expresión "capaz de unirse a PrP" significa que la
constante de disociación para la unión a PrP es (habitualmente)
menor de 1 \muM, preferiblemente menor de 300 nM, más
preferiblemente menor de 100 nM.
Las expresiones "derivados biológicos
activos" y "derivado funcionalmente activo o parte del
mismo" comprenden cualquier derivado de un péptido seleccionado
entre el grupo compuesto por la SEC ID Nº 1 a 24 que también es
capaz de unirse a PrP y, por lo tanto de estabilizar PrP contra el
cambio conformacional a PrP^{sc} y alterar la formación
concomitante de placas amiloides.
Las tres primeras secuencias SEC ID Nº 19 a 24
son motivos de secuencia de unión a PrP comunes que comprenden de 5
a 6 aminoácidos que confieren la capacidad de unirse a PrP a
compuestos proteicos y por tanto evitan la transición PrP/PrP^{SC}
y la formación concomitante de placas amiloides.
Las secuencias de SEC ID Nº 1 y 12 son una
selección preferida para la secuencia de la SEC ID Nº 19, las
secuencias SEC ID Nº 2 y 4 son una selección particularmente
preferida para la secuencia SEC ID Nº 20, y de forma similar la
secuencia SEC ID Nº 9 y 15 para la secuencia SEC ID Nº 21. Las
secuencias SEC ID Nº 22 a 24 abarcan las secuencias de acuerdo con
la SEC ID Nº 10 y 11.
X indica un aminoácido con enlace de hidrógeno
seleccionado entre el grupo compuesto por C, W, N, Q, S, T, Y, K, R,
H, D, E.
Z es un aminoácido aromático seleccionado entre
el grupo compuesto por F, W y Z.
Las secuencias SEC ID Nº 1 a 24 muestran una
inmunogenicidad particularmente mala.
Los compuestos proteicos que comprenden estas
secuencias se unen muy fuertemente a PrP estabilizando de este modo
PrP frente al cambio conformacional a PrP^{sc} e interrumpiendo la
formación concomitante de placas amiloides y evitando, deteniendo o
invirtiendo el desarrollo de trastornos neurodegenerativos, en
particular el desarrollo de enfermedades TSE.
Además, los compuestos proteicos especificados
pueden cruzar fácilmente la barrera en hematoencefálica. Este un
pre-requisito para el uso de los péptidos como
agentes terapéuticos porque la formación amiloide a evitar tiene
lugar en el sistema nervioso central.
Una realización adicional de la presente
invención se refiere a compuestos proteicos en los que al menos uno
de los restos aminoacídicos es un resto
D-aminoácido. La incorporación de
D-aminoácidos conduce a una resistencia mejorada
frente a la escisión proteolítica sin afectar a la afinidad de unión
por la proteína PrP. El resto D-aminoácido puede
localizarse en cualquier posición del compuesto proteico. Una
realización particularmente preferida de la presente invención son
compuestos proteicos que comprenden 3 restos
D-aminoácidos, más preferiblemente 5 restos
D-aminoácidos, más preferiblemente 7 restos
D-aminoácidos.
El compuesto proteico que se ha definido
anteriormente compuesto por la fórmula
B-[G_{3}-B]_{x}, en la que cada B se
selecciona independientemente entre un grupo compuesto por la SEC ID
Nº 1 a 24, G_{3} representa tres restos de glicina (que forman una
bisagra G_{3}), y x es un número entero de 1 a 20, B puede
seleccionarse independientemente, tiene la siguiente estructura si
por ejemplo x = 20:
B^{0}[G_{3}-B^{1}]-[G_{3}-B^{2}]-[G_{3}B^{3}]-[G_{3}-B^{4}]-[...]-[G_{3}-B^{20}],
en la que todos los B^{0},
B^{1}, B^{2} ... a B^{20} pueden tener el mismo significado o
un significado diferente. Se ha descubierto que estos compuestos
proteicos pueden penetrar la barrera hematoencefálica a un grado
suficiente. La disponibilidad de los fármacos puede potenciarse
adicionalmente usando partículas coloidales sólidas llamadas
nanopartículas (NP) y micropartículas (MP) que tienen un diámetro de
3 a 500 nm (NP) o más de 0,5 \mum (MP) como agente potenciador de
la penetración. Las NP y MP se preparan a partir de ácido de
polilactida poliglicolida (PGLA), polialquilcianoacrilato (PACA) o
quitosana y fluidos gástricos e intestinales retirados. Los
tensioactivos, transferrina de hierro o toxinas biológicas que
cruzan la barrera hematoencefálica pueden usarse adicionalmente para
facilitar el suministro de NP cargadas de fármaco al cerebro. Para
un ejemplo véase Schroeder et al., Life Sci. 66,
495-502
(2000).
La resistencia de los compuestos proteicos hacia
la escisión proteolítica se mejora adicionalmente incluso en
ausencia de ninguna modificación o ningún resto aminoacídico
modificado o restos D-aminoácidos.
Por otro lado, la afinidad del compuesto
proteico por PrP y el efecto inhibidor de la formación de PrP^{sc}
y la formación concomitante de placas amiloides se conserva o
incluso mejora a causa de la flexibilidad del grupo
B-[G_{3}-B]_{x}.
Preferiblemente todos los B^{0}, B^{1},
B^{2}, ... a B^{20} tienen el mismo significado. A causa del
hecho de que en este caso la secuencia de la primera parte
estructural del compuesto proteico es altamente redundante, la
inmunogenicidad del compuesto proteico puede reducirse
adicionalmente.
Los compuestos proteicos de acuerdo con la
presente invención pueden modificarse como los péptidos conocidos en
la técnica que puede ser, por ejemplo, en los extremos por un grupo
amida y/o formilo o piroglutamilo (vida supra).
De acuerdo con la invención, el compuesto
proteico puede ser un compuesto peptidomimético como un derivado
biológicamente activo de un péptido seleccionado entre el grupo
compuesto por la SEC ID Nº 1 a 24 que también es capaz de unirse a
PrP y, estabilizar de este modo PrP contra el cambio conformacional
a PrP^{sc} e interrumpir la formación concomitante de placas
amiloides. Los compuestos peptidomiméticos se definen como
estructuras que sirven como sustitutos apropiados para péptidos en
interacciones con otras macromoléculas. El descubrimiento de
compuestos peptidomiméticos es factible explorando bibliotecas de
compuestos puros. Como alternativa, el modelado por ordenador se usa
para diseñar análogos de la molécula original. Este enfoque
producirá varios sustitutos peptídicos con bioestabilidad mejorada y
la misma función biológica o una función biológica mejorada.
Los compuestos proteicos de la presente
invención pueden producirse expresando un ácido nucleico que
comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de
aminoácidos primaria de un compuesto de acuerdo con la presente
invención o un derivado funcionalmente activo o parte del mismo. Los
derivados funcionalmente activos o partes del compuesto proteico son
derivados y partes de los compuestos proteicos de acuerdo con la
presente invención que son capaces de unirse a PrP. Una realización
adicional de la presente invención es un ácido nucleico como se ha
definido anteriormente. Debe entenderse que los compuestos de
acuerdo con la presente invención también pueden producirse por
síntesis química.
El compuesto proteico de la presente invención
puede usarse adicionalmente para tratar a un mamífero que necesita
tratamiento profiláctico o terapéutico farmacéutico de un trastorno
neurodegenerativo, especialmente de una enfermedad TSE. Esto implica
el uso de un compuesto proteico de acuerdo con la presente invención
para la fabricación de un medicamento para el tratamiento
profiláctico o terapéutico de un trastorno neurodegenerativo,
especialmente de una enfermedad TSE. En términos más generales, la
invención se refiere a un método para suprimir o invertir la
transición de PrP a PrP^{sc} poniendo en contacto PrP o PrP^{sc}
con un compuesto proteico de acuerdo con la presente invención.
Como un uso del compuesto proteico de la
presente invención para prevenir o tratar un trastorno
neurodegenerativo o un trastorno asociado con depósitos amiloides o
de tipo amiloide, dicho compuesto proteico de acuerdo con la
presente invención se administra en una cantidad eficaz a un sujeto
que lo necesita, donde el sujeto puede ser humano o animal, en
particular un mamífero. Asimismo, un método para detectar dichos
trastornos también incluye administrar una cantidad suficiente del
compuesto proteico como sonda para visualizar su unión a depósitos
de fibrillas por técnicas de formación de imágenes bien conocidas.
Como los compuestos proteicos de acuerdo con la presente invención
penetran fácilmente la barrera hematoencefálica, el método de
diagnóstico puede realizarse no sólo in vitro (por ejemplo,
por sondeado de cortes del sistema nervioso central con el compuesto
marcado e investigación microscópica del resultado) sino también
in vivo (por ejemplo, por administración oral del compuesto
proteico marcado y la formación de imágenes de la distribución de
los compuestos en el sistema nervioso central).
Como se usa en este documento, la expresión
"tratamiento profiláctico" de una afección, tal como una
enfermedad TSE u otros trastornos de amiloidosis, en un sujeto
implica administrar un péptido, polipéptido o compuesto
peptidomimético de acuerdo con la presente invención antes de la
aparición clínica del trastorno. "Tratamiento terapéutico"
implica la administración de un péptido, polipéptido o compuesto
peptidomimético de acuerdo con la presente invención después de la
aparición clínica del trastorno. Por ejemplo, la administración
exitosa del péptido de la presente invención, después del desarrollo
de un trastorno comprende "tratamiento terapéutico" del
trastorno. La invención es útil en el tratamiento de seres humanos
así como para usos veterinarios en animales.
Los compuestos proteicos de acuerdo con la
presente invención pueden administrarse por cualquier medio que
consiga su propósito pretendido. Por ejemplo, la administración
puede ser por varias vías parenterales diferentes incluyendo, aunque
sin limitación, subcutánea, intravenosa, intradérmica,
intramuscular, intraperitoneal, intracerebral, intranasal, oral,
transdérmica, o por vía bucal. La administración parenteral puede
ser inyección en embolada o por perfusión gradual en el tiempo.
Un régimen típico para prevenir, suprimir, o
tratar una afección asociada con depósitos amiloides o de tipo
amiloide, comprende (1) la administración de una cantidad eficaz en
una o dos dosis de una elevada concentración de compuestos proteicos
de acuerdo con la presente invención en el intervalo de 0,5 a 10 mg
del compuesto respectivo por kg de peso corporal, más
preferiblemente de 0,5 a 5 mg, o (2) la administración de una
cantidad eficaz del compuesto respectivo administrado en múltiples
dosis de concentraciones inferiores en el intervalo de
10-1000 \mug por kg de peso corporal, más
preferiblemente 50-500 \mug en un periodo de
tiempo de hasta e incluyendo varios meses a varios años.
Debe entenderse que la dosificación administrada
dependerá de la edad, sexo, salud, y peso del destinatario, tipo de
tratamiento concurrente, si lo hay, frecuencia del tratamiento y la
naturaleza del efecto deseado. La dosis total necesaria para cada
tratamiento puede administrarse por múltiples dosis o en una única
dosis. Por "cantidad de eficaz" se entiende una concentración
de un compuesto proteico de acuerdo con la presente invención que es
capaz de ralentizar o inhibir la formación de depósitos amiloides o
de tipo amiloide, o de disolver los depósitos de fibrillas
preformados. Dichas concentraciones pueden determinarse de forma
rutinaria por los especialistas en la técnica. Los especialistas en
la técnica también apreciarán que la dosificación puede depender de
la estabilidad del compuesto proteico administrado. Un compuesto
proteico menos estable puede requerir la administración en múltiples
dosis.
Las preparaciones para la administración
parenteral incluyen soluciones acuosas o no acuosas estériles,
suspensiones, y emulsiones, que pueden contener agentes auxiliares o
excipientes que son conocidos en la técnica. Las composiciones
farmacéuticas tales como comprimidos y cápsulas también pueden
prepararse de acuerdo con métodos rutinarios.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden
los péptidos de la invención incluyen todas las composiciones en las
que los compuestos proteicos de acuerdo con la presente invención
están contenidos en una cantidad eficaz para conseguir su propósito
pretendido. Además, las composiciones farmacéuticas pueden contener
vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados que comprenden
excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los
compuestos activos en preparaciones que pueden usarse
farmacéuticamente. Los vehículos farmacéuticamente aceptables
adecuados son bien conocidos en la técnica y se describen por
ejemplo en Gennaro, Alfonso, Ed. Remington's Pharmaceutical
Sciences, 18ª Edición 1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa., un
texto de referencia convencional en este campo. Los vehículos
farmacéuticamente aceptables pueden seleccionarse de forma rutinaria
de acuerdo con el modo de administración y la solubilidad y
estabilidad de los péptidos. Por ejemplo, las formulaciones para la
administración intravenosa pueden incluir soluciones acuosas
estériles que pueden también contener tampones, diluyentes y otros
aditivos adecuados.
Las formulaciones adecuadas para administración
parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en
forma soluble en agua, por ejemplo, sales solubles en agua. Además,
puede administrarse la suspensión del compuesto activo en forma de
suspensiones para inyección oleosas apropiadas. Los disolventes o
vehículos lipófilos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo,
aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos por ejemplo
oleato de etilo o triglicéridos. Las suspensiones para inyección
acuosas que pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de
la suspensión incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica,
sorbitol, y/o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede
contener estabilizantes.
Los trastornos neurodegenerativos o trastornos
asociados con el plegamiento anormal de las proteínas en depósitos
amiloides o de tipo amiloide a tratar o prevenir por la
administración de la composición farmacéutica de la invención
incluyen el trastorno de Alzheimer, FAF, síndrome de Down, otras
enfermedades TSE de tipo trastorno de amiloidosis, trastornos
neurodegenerativos humanos asociados con priones tales como el Kuru,
trastorno de Creutzfeldt-Jakob (CJD); síndrome de
Gerstmann-Straussler-Scheinker
(GSS), así como trastornos animales por priones, tales como el
escrapie, la encefalopatía espongiforme, encefalopatía transmisible
del visón y trastorno de debilitamiento crónico del ciervo mulo y el
alce.
Más allá de los tratamientos profilácticos y
terapéuticos, los compuestos respectivos de la presente invención
también pueden administrarse para detectar y diagnosticar la
presencia o ausencia de depósitos amiloides o de tipo amiloide in
vivo. Un péptido diseñado capaz de unirse a determinantes
estructurales en un depósito amiloide o de tipo amiloide
correspondiente, marcado no radiactivamente o con un radioisótopo,
como se conoce bien en la técnica, puede administrarse a un sujeto
para diagnosticar la aparición o presencia de un trastorno o
trastorno asociado con el plegamiento anormal de las proteínas en
depósitos de fibrillas amiloides o de tipo amiloide. La unión de
dicho péptido marcado después de la administración a los depósitos
amiloides o de tipo amiloide puede detectarse por técnicas de
formación de imágenes in vivo conocidas en la técnica.
Las Figuras muestran:
La Figura 1 y 2 ilustran los resultados de un
ensayo de unión de péptidos presentados en fagos de acuerdo con la
invención y PrP fusionado a la proteína de unión a maltosa
(MBP);
Ordenada: DO_{405nm}
Abscisa:
La leyenda se interpreta del siguiente
modo:
- primera barra de un triplete de barras:
- proteína de fusión de la proteína de unión a maltosa y PrP
- segunda barra de un triplete de barras:
- proteína de unión a maltosa
- tercera barra de un triplete de barras:
- albúmina de suero bovino
Los péptidos se abrevian del siguiente modo:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El fago de tipo silvestre que tiene la secuencia
heptapéptida fágica normal en el extremo N-terminal
de su proteína de recubrimiento minoritaria se abrevia como
"control".
En la Figura 1 y la Figura 2 se ensayaron los
derivados del bacteriófago M13 que llevan el péptido para su unión a
las proteínas indicadas, que se habían inmovilizado en pocillos
individuales de una placa de microtitulación. La cantidad de fago
restante unido después del lavado extensivo se determino por un
ensayo de ELISA usando un anticuerpo monoclonal acoplado a
peroxidasa de rábano rusticano que reconoce la proteína de
recubrimiento principal del fago M13 (ABTS como sustrato para dar un
producto verde, cuya absorbancia se lee a 405 nanómetros). Los
experimentos se realizaron como se describe en el Ejemplo 2.
Habiendo descrito ahora en líneas generales la
invención, la misma se entenderá más fácilmente a través de la
referencia a los siguientes ejemplos que se proporcionan a modo de
ilustración y no pretenden limitar la presente invención.
La biblioteca PhD7 se adquirió de New England
Biolabs (California, USA). Esta biblioteca tiene una diversidad de
\sim2,8x10^{9} heptapéptidos aleatorios, fusionados al extremo
N-terminal de la proteína de recubrimiento
minoritaria pIII del bacteriófago filamentoso M13. Para el
experimento de presentación en fagos se recubrieron dos placas Petri
de poliestireno de 94 x 16 mm (Greiner, Alemania), la primera con
3,5 ml de MBP-6xHis a 100 \mug/ml en
Na-HCO_{3} 0,1 M pH 8,6 (MBP: proteína de unión a
maltosa) y la otra con la misma cantidad y concentración de
rhMBP-PrP-6xHis (rh: recombinante
humano). El recubrimiento se realizó durante una noche (>16 h) a
4ºC con agitación suave en un recipiente humidificado. Después del
recubrimiento, se bloquearon las placas Petri con 5 mg/ml de BSA
(Sigma A-3059) y NaHCO_{3} 0,1 M pH 8,6 durante 1
hora a 4ºC y se lavaron seis veces con TBST
(Tris-HCl 50 mM pH 7,5, NaCl 150 nM, Tween 20 al
0,1% v/v). Se añadieron 2x10^{11} pfu (unidades formadoras de
placas) de la biblioteca PhD7, diluidos en 2 ml de TBST a la placa
Petri recubierta con MBP-6xHis. Después de 1 hora de
incubación a temperatura ambiente con agitación suave, se pipeteó
cuidadosamente el sobrenadante que contenía el fago sin unir en la
placa Petri recubierta con
rhMBP-PrP-6xHis y se incubó durante
1 hora a temperatura ambiente con agitación suave. Se añadió
MBP-6xHis libre a una concentración final de 100
\mug/ml para bloquear los fagos restantes con afinidad por
MBP-6xHis. La placa Petri después de lavó diez veces
con TBST y los clones fágicos unidos se eluyeron con 2 ml de Glicina
0,2 M pH 2,2, 1 mg/ml de BSA durante 10 minutos y se neutralizaron
con 300 \mul de Tris-HCl 1 M, pH 9,1. Los fagos
eluidos se propagaron en la cepa de E. coli F^{+} ER2537 y
se titularon de acuerdo con las instrucciones recomendadas por el
fabricante. Se usaron 2x10^{11} pfu del fago amplificado para la
segunda de las cinco rondas de selección realizadas. Las siguientes
rondas de selección se realizaron del mismo modo con las siguientes
excepciones (1) el tiempo de incubación del fago en la placa Petri
recubierta con RhMBP-Prp-6xHis se
redujo a 30 minutos (2) la concentración de Tween-20
en el TBS se aumento al 0,5% v/v.
El segundo experimento de presentación en fagos
se realizó con las siguientes modificaciones: (1) se usaron placas
Petri de poliestireno de 60x15 mm (Greiner, Alemania); los volúmenes
de las soluciones usadas se ajustaron en consecuencia (2) la
concentración de BSA en la solución de bloqueo se aumentó a 10 mg/ml
(3) se realizó una elución de dos etapas; el fago se eluyó
específicamente primero con un 1 ml de
rhMBP-PrP-6xHis a 100 \mug/ml
durante 1 hora a temperatura ambiente, después no específicamente
como se ha descrito anteriormente (4) se realizaron 3 rondas de
selección. El ADN de los clones fágicos de la 3ª, 4ª y 5ª rondas del
primer experimento de selección y la 2ª y 3ª rondas del segundo
experimento de presentación de fagos se aisló de acuerdo con las
instrucciones recomendadas por el fabricante y se secuenció por
MWG-Biotech (Alemania).
Se prepararon placas de microtitulación de 96
pocillos de fondo plano (Greiner) para ELISA (ensayo
inmunoabsorbente ligado a enzimas) pre-recubriendo
con 100 \mug/ml de rHMBP-PrP-6xHis
o 100 \mug/ml de MBP-6xHis en NaHCO_{3} 0,1 M
pH 8,6 durante una noche a 4ºC en una cámara humidificada con
balanceo suave. Después de tres lavados con
TBS/Tween-20 al 0,5%, se bloquearon posteriormente
los pocillos de las placas durante 2 horas con el tampón de bloqueo
que contenía 5 mg/ml de BSA (Sigma A-3059),
NaN_{3} al 0,02% en NaHCO_{3} 0,1 M pH 8,6. Después de lavar
seis veces con TBS/Tween-20 al 0,5% se incubaron las
placas con 10^{12} pfu de cada uno de los clones fágicos aislados
obtenidos de las rondas previas de presentación de fagos. Después de
1 hora de incubación a temperatura ambiente, posteriormente se
retiró el fago no unido por seis lavados con
TBS/Tween-20 al 0,5%. Después se incubaron las
placas con anticuerpo monoclonal anti-M13 conjungado
con peroxidasa de rábano rusticano (Pharmacia Nº
27-9411-01) 1:5000 en tampón de
bloqueo. Después de la incubación durante 1 hora a temperatura
ambiente, las placas se lavaron seis veces con
TBS/Tween-20 al 0,5% y se detectó el complejo de
fago unido-anticuerpo añadiendo solución de ABTS
(Sigma A-1888) [citrato sódico 0,05 M pH, 4,0, 0,22
mg/ml de ácido
2',2'-azino-bis-(3'etilbencitiazlina-6-sulfónico)
y H_{2}O_{2} al 0,05%] y se incubaron a temperatura ambiente
durante 30 minutos. Después se cuantificó la absorbancia 405 nm por
el lector de microplacas automático ELx800 (BIO-TEK
INSTRUMENT, INC.). Los resultados para dichos ensayos se muestran en
la Figura 1.
<110> MSP- Molecular Services &
Products S.A.
\hskip1cmCentre for Research and Technology Hellas / Institute of Agrobiotechnology
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Nuevos Heptapéptidos de unión a
PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> M4639
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Pro Leu Thr Pro Leu Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Thr Phe Thr His Pro Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Asn Asn Tyr Thr His Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{His Leu Pro Pro Asn Ser Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Gln Pro Pro Pro Asn Pro}
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Phe Ala Leu Asn Glu Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Trp Asn Ser Pro Asn Leu Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Pro Thr Ile Ile Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Thr Thr Arg Thr Leu Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Leu Trp Gln Ile Pro Lys}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Leu Trp Val Ile Pro Gln}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Thr Leu Trp Gln Leu Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Cys Cys Tyr Pro Val Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
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<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Thr Gln Trp Pro Thr Ile Pro}
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<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
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\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Ala Thr His Arg Ser His}
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Glu Pro Leu Gln Leu Lys Met}
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<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala His Pro Gln Leu Ala Thr}
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<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{His Ala Ile Tyr Pro Arg His}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (2)..(3)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> X es un aminoácido con enlace de
hidrógeno seleccionado entre C, W, N, Q, S, T, Y, K, R, H, D, E
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Xaa Xaa Leu Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(2)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> X es un aminoácido con enlace de
hidrógeno seleccionado entre C, W, N, Q, S, T, Y, K, R, H, D, E
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (3)..(3)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> X es un aminoácido aromático
seleccionado entre F, W, Y
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Xaa Xaa Thr His Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (3)..(3)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> X es un aminoácido con enlace de
hidrógeno seleccionado entre C, W, N, Q, S, T, Y, K, R, H, D, E
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> MISC_FEATURE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (5)..(5)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> X es un aminoácido aromático
seleccionado entre F, W, Y
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<400> 21
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\sa{Ala Thr Xaa Arg Xaa}
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<222> (4)..(4)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cualquier aminoácido (G, A, V, L, I,
P, F, Y, W, S, T, N, Q, C, M, D, E, H, K, R)
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<400> 22
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\sa{Lys Leu Trp Xaa}
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
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<211> 6
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<222> (4)..(4)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cualquier aminoácido (G, A, V, L, I,
P, F, Y, W, S, T, N, Q, C, M, D, E, H, K, R)
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<400> 23
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\sa{Lys Leu Trp Xaa Ile Pro}
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<210> 24
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<211> 7
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial: obtenida
explorando una biblioteca para la actividad de unión a PrP
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<222> (4)..(4)
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<223> cualquier aminoácido (G, A, V, L, I,
P, F, Y, W, S, T, N, Q, C, M, D, E, H, K, R)
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<222> (7)..(7)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> aminoácido polar/hidrófilo (N, Q, S,
T, K, R, H, D, E, C, Y)
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<400> 24
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\sa{Lys Leu Trp Xaa Ile Pro Xaa}
Claims (8)
1. Un compuesto proteico compuesto por
la fórmula B-[G_{3}-B]_{x}, en la que
cada B se selecciona independientemente entre un grupo compuesto por
la SEC ID Nº 1 a 24, G_{3} representa tres restos de glicina, y x
es un número entero de 1 a 20, siendo capaz dicho compuesto de
unirse a PrP.
2. El compuesto de acuerdo con la
reivindicación 1, que comprende al menos un resto
D-aminoácido.
3. Un ácido nucleico compuesto por una
secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos
primaria de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1.
4. Una composición farmacéutica que
contiene un compuesto definido en una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, y opcionalmente un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
5. Uso de un compuesto de acuerdo con
una de las reivindicaciones 1 ó 2 para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de un
trastorno neurodegenerativo.
6. Uso de acuerdo con la reivindicación
5, en el que el trastorno neurodegenerativo es un enfermedad
TSE.
7. Uso de un compuesto de acuerdo con la
reivindicación 1 ó 2 como una sonda para el diagnóstico ex
vivo de una trastorno neurodegenerativo.
8. Uso de acuerdo con la reivindicación
7, en el que el trastorno neurodegenerativo es una enfermedad
TSE.
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