ES2282607T3 - Procedimiento de radiofluoracion. - Google Patents

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ES2282607T3 ES03710021T ES03710021T ES2282607T3 ES 2282607 T3 ES2282607 T3 ES 2282607T3 ES 03710021 T ES03710021 T ES 03710021T ES 03710021 T ES03710021 T ES 03710021T ES 2282607 T3 ES2282607 T3 ES 2282607T3
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Hege c/o Amersham Health AS KARLSEN
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Abstract

Un procedimiento para la radiofluoración que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I) o (Ia): con un compuesto de fórmula (II): 18F-(Ligante) -SH (II) en el que: X es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo, y yodo, y es de manera preferible cloro Y es un grupo hidrocarbilo C1-10 que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos; y el Ligante de la fórmula (II) es un grupo hidrocarbilo C1-30 que incluye de manera opcional 1 a 10 heteroátomos; dando un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) de manera respectiva: en las que el grupo Ligante es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (II), Y es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (Ia).

Description

Procedimiento de radiofluoración.
La presente invención se refiere a los procedimientos y reactivos para la fluoración con [^{18}F], de manera particular, de péptidos. Los compuestos marcados con ^{18}F resultantes son útiles como radiofármacos, de manera específica para uso en la Tomografía de Emisión de Positrones (PET).
Está ganando importancia en la medicina nuclear la aplicación de los péptidos bioactivos radiomarcados para el diagnóstico por imagen. Las moléculas biológicamente activas que interactúan de manera selectiva con tipos específicos de células son útiles para la dosificación de la radiactividad a los tejidos diana. Por ejemplo, los péptidos radiomarcados tienen un potencial significativo para la dosificación de los radionucleidos en los tumores, infartos, y tejidos infectados para el diagnóstico por imagen y la radioterapia. ^{18}F, con su periodo de semidesintegración de 110 minutos, es el nucleido que emite positrones de elección para muchos estudios de imagen de receptores. Por tanto, los péptidos bioactivos marcados con ^{18}F, tienen gran potencial clínico debido a su utilidad en la PET para detectar y caracterizar de manera cuantitativa una amplia variedad de enfermedades.
El Documento WO 99/11590 describe los procedimientos para la fluoración con [^{18}F] de los péptidos y las proteínas que contienen tiol.
La Patente de los Estados Unidos Nº 5.144.043 describe los procedimientos para el marcado de proteínas con tecnecio usando agentes de acoplamiento bifuncionales que comprenden un resto de maleimida.
Una dificultad con los péptidos marcados con ^{18}F es que se tarda tiempo en preparar los agentes de marcado con ^{18}F. Se consigue únicamente el marcado eficiente de los péptidos y las proteínas con ^{18}F usando grupos prostéticos adecuados. Se han propuesto en la bibliografía varios de estos grupos prostéticos, entre los que se incluyen N-succinidimil-4-[^{18}F] fluorobenzoato, m-maleimido-N-(p-[^{18}F]fluorobencil)-benzamida, N-(p-[^{18}F]fluorofenil)maleimida, y bromuro de 4-[^{18}F]fluorofenacilo. Casi todas las metodologías usadas normalmente hoy en día para el marcado de los péptidos y proteínas con ^{18}F utilizan ésteres activos del sintón marcado con flúor. Puesto que los péptidos y proteínas pueden contener una multitud de grupos funcionales capaces de la reacción con ésteres activos, estos procedimientos corrientes no son específicos del emplazamiento. Por ejemplo, un péptido que contiene 3 residuos de lisina tiene tres funciones amina igualmente reactivas hacia el sintón marcado. Por tanto, existe todavía una necesidad de grupos prostéticos marcados con ^{18}F y de las metodologías que permitan la introducción quimioselectiva rápida de ^{18}F, de manera particular en los péptidos, en condiciones suaves para proporcionar productos marcados con ^{18}F con un rendimiento y pureza radioquímicos elevados. De manera adicional, existe una necesidad de que dichas metodologías se puedan llevar a la automatización para facilitar la preparación de radiofármacos en el marco clínico.
De acuerdo con esto, la presente invención proporciona un procedimiento para la radiofluoración que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I) o (Ia):
1
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con un compuesto de fórmula (II):
(II)^{18}F-(Ligante) -SH
en el que:
X es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo y yodo, y es de manera preferible cloro;
Y es un grupo hidrocarbilo C_{1-10} que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos; y
el Ligante en la fórmula (II) es un grupo hidrocarbilo C_{1-30} que incluye de manera opcional 1 a 10 heteroátomos;
dando un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) de manera respectiva:
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en las que el grupo Ligante es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (II), Y es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (Ia), y el péptido es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (I) o (Ia) de manera respectiva.
La presente invención proporciona una solución más quimioselectiva al radiomarcado en la que se preselecciona el emplazamiento exacto de introducción de la marca durante la síntesis del péptido precursor. La función tiol del sintón que reacciona en un emplazamiento predeterminado en el péptido proporciona únicamente un producto posible. Esta metodología es por tanto quimioselectiva y se considera su aplicación genérica para un amplio intervalo de péptidos y biomoléculas.
En un aspecto preferido, la presente invención proporciona un procedimiento para la radiofluoración que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I):
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con un compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI):
(IV)^{18}F-(CH_{2}CH_{2}O)-(CH_{2})_{m}-SH
(V)^{18}F-(CH_{2})_{p}-SH 
\hskip2,1cm
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en las que
X es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo, y yodo, y es de manera preferible cloro;
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10;
p es un entero de 1 a 20;
q es un entero de 0 a 4;
r es un entero de 1 a 10;
dando un compuesto de fórmula (VII), (VIII), o (IX) de manera respectiva:
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en las que m, n, p, q, y r son tal como se han definido para el compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI).
Se puede llevar a cabo esta reacción en un solvente adecuado, por ejemplo, en un tampón acuoso en el intervalo de pH comprendido entre 5 y 11, y a una temperatura no extrema comprendida entre 5 y 60ºC, de manera preferible a temperatura ambiente.
En un aspecto preferido adicional, la presente invención proporciona un procedimiento para la radiofluoración que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (Ia):
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con un compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI):
(IV)^{18}F-(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-(CH_{2})_{m}-SH
(V)^{18}F-(CH_{2})_{p}-SH 
\hskip2,3cm
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en la que:
Y es un grupo hidrocarbilo C_{1-10} que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos;
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10;
p es un entero de 1 a 20;
q es un entero de 0 a 4;
r es un entero de 1 a 10;
dando un compuesto de fórmula (X), (XI), o (XII) de manera respectiva:
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\vskip1.000000\baselineskip
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en las que m, n, p, q, y r son tal como se han definido para el compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI), Y y el péptido son tal como se han definido para el compuesto de fórmula (Ia).
Se puede llevar a cabo esta reacción en un solvente adecuado, por ejemplo, en un tampón acuoso en el intervalo de pH comprendido entre 5 y 11, y a una temperatura no extrema comprendida entre 5 y 60ºC, de manera preferible a temperatura ambiente.
En las fórmulas (I) y (Ia), los péptidos adecuados para el marcado pueden incluir análogos de la somatostatina, tales como octreótido, bombesina, péptido intestinal vasoactivo, análogos de péptidos quimiotácticos, hormona estimulante de los \alpha-melanocitos, neurotensina, el péptido Arg-Gly-Asp y sus análogos, el péptido que conecta la proinsulina humana, endotelina, angiotensina y formil-norleucil-leucil-fenilalanil-norleucil-tirosil-lisina. Los péptidos preferidos para el marcado son el péptido Arg-Gly-Asp y sus análogos, tales como los que se describen en los Documentos WO 01/77415 y WO 03/006491. En un aspecto particular, el péptido de la fórmula (I) o (Ia) es de fórmula (A):
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en la que X^{7} es -NH_{2} o
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16 
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en la que a es un entero comprendido entre 1 y 10, de manera preferible a es 1.
Como se apreciará por aquellas personas expertas en la técnica, se pueden usar también los procedimientos de la invención para la radiofluoración de otras biomoléculas tales como proteínas, hormonas, oligonucleótidos, y fragmentos de anticuerpos, así como pequeñas moléculas para proporcionar una variedad de trazadores PET.
En la fórmula (Ia), Y es un grupo hidrocarbilo C_{1-10} que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos tales como oxígeno o nitrógeno, de manera adecuada Y es un grupo alquilo C_{1-10} que incluye de manera opcional un grupo cicloalquilo C_{4-7}, por ejemplo, Y puede ser metilciclohexilo.
En la fórmula (II), el Ligante es un grupo hidrocarbilo C_{1-30} que incluye de manera opcional 1 a 10 heteroátomos tales como oxígeno o nitrógeno, y se pueden escoger para proporcionar una buena farmacocinética in vivo, tal como características favorables de excreción. Los grupos Ligantes adecuados incluyen cadenas de alquilo, alquenilo, y alquinilo, anillos aromáticos, poliaromáticos, y heteroaromáticos, y polímeros que comprenden etilénglicol, aminoácidos, o subunidades de carbohidrato.
En los compuestos de fórmulas (IV) y (VII), n es normalmente 2 a 6, de manera adecuada 3, y m es normalmente 1 a 4, de manera adecuada 2.
En los compuestos de fórmulas (V) y (VIII), p es normalmente 1 a 6, de manera adecuada 3.
En los compuestos de fórmulas (VI) y (IX), el grupo ^{18}F(CH_{2})_{q}- está unido de manera adecuada en la posición para en relación con el grupo amida, q es normalmente 0 a 4, de manera adecuada 1, y r es normalmente de 1 a 4, de manera adecuada 2.
Como un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI) tal como se ha definido anteriormente. Estos compuestos tienen utilidad general como grupos prostéticos para la radiofluoración. Los derivados con el grupo tiol protegido de los compuestos de fórmulas (IV), (V), y (VI) tienen también utilidad como precursores sintéticos de dichos grupos prostéticos, y se prefieren de manera particular aquellos en los que el tiol está protegido mediante un grupo tritilo. Son bien conocidos por las personas expertas en la técnica otros grupos protectores de tiol en los precursores de fórmula (IV), (V), o (VI) y se describen, por ejemplo, en Protecting groups in Organic Synthesis, Teodora W. Greene y Peter G. M. Wuts, publicado por John Wiley & Sons Inc.
Como un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), o (XII) tal como se ha definido anteriormente. Estos compuestos tienen utilidad como trazadores PET. De estos compuestos, se prefieren aquellos en los que el péptido es el péptido Arg-Gly-Asp o sus análogos, tales como los péptidos descritos en los Documentos WO 01/77145 y WO 03/006491. Los péptidos particularmente preferidos en este aspecto de la invención son aquellos de fórmula (A) tal como se ha definido anteriormente para los compuestos de fórmula (I) y (Ia).
Se pueden preparar los compuestos de fórmula (I) mediante procedimientos estándar de síntesis de péptidos, por ejemplo, síntesis de péptidos en fase sólida, por ejemplo, tal como se describe en Atherton, E. y Sheppard, R. C.; "Solid Phase Synthesis"; IRL Press: Oxford, 1989. Se puede conseguir la incorporación del grupo "X-CH_{2}C(O)-" en un compuesto de fórmula (I) mediante reacción del extremo N terminal del péptido con el reactivo de fórmula
(XIII):
(XIII)X-CH_{2}C(O)Z
bajo condiciones estándar para la formación del enlace peptídico; en el que X es tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (I), y Z es -OH o un grupo activador adecuado tal como, cloro, bromo, fluoro, -OC(O)CH_{2}-X
en el que X es tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (I), o cuando Z es -OH, se puede activar el ácido usando agentes in situ tales como el hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HABU) o el N-óxido de hexafluorofosfato de N-dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridin-1-ilmetilen-N-metilaminio
(HATU).
Se pueden preparar los compuestos de fórmula (Ia) mediante procedimientos estándar de síntesis de péptidos, por ejemplo, síntesis de péptidos en fase sólida, por ejemplo, tal como se describe en Atherton, E. y Sheppard, R. C.; "Solid Phase Synthesis"; IRL Press: Oxford, 1989. Se puede conseguir la incorporación del grupo "maleimida-Y-" en un compuesto de fórmula (Ia) mediante reacción del extremo N terminal del péptido con el reactivo de fórmula (XIV):
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bajo condiciones estándar para la formación del enlace peptídico; en el que Y es tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (Ia), y Z es -OH o un grupo activador adecuado tal como, cloro, bromo, fluoro, o ésteres activos tales como éster de pentafluorofenol o éster de N-hidroxisuccinimida, o cuando Z es -OH entonces se puede activar el ácido mediante el uso de agentes activadores in situ tales como HBTU o HATU tal como se ha descrito anteriormente para el compuesto de fórmula (XIII).
Se pueden preparar los compuestos de fórmula (II) a partir del correspondiente compuesto de fórmula (IIa):
(IIa)L-(Ligante) -SR
en la que L es un grupo saliente tal como p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato, y el Ligante es tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (II) y R es hidrógeno o un grupo protector de tiol; mediante la reacción con [^{18}F]-fluoruro acuoso producido por ciclotrón, preactivado de manera adecuada mediante evaporación a partir de una de una base (por ejemplo, a partir de tetrabutilamonio o K_{2}CO_{3}/Kryptofix-222), en un solvente adecuado tal como acetonitrilo, N,N-dimetilformamida, o dimetil sulfóxido, normalmente a temperatura elevada, por ejemplo de 60 a 120ºC, seguido por la eliminación de cualquier grupo protector de tiol usando los procedimientos estándar.
Se pueden preparar los compuestos de fórmula (IV) a partir del correspondiente compuesto de fórmula (IVa):
(IVa)L-(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-(CH_{2})_{m}-SR
en la que L es un grupo saliente tal como p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato, y n y m son tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (IV) y R es hidrógeno o un grupo protector de tiol; mediante la reacción con [^{18}F]-fluoruro acuoso producido por ciclotrón, preactivado de manera adecuada mediante evaporación a partir de una base (por ejemplo, a partir de tetrabutilamonio o K_{2}CO_{3}/Kryptofix-222), en un solvente adecuado tal como acetonitrilo, N,N-dimetilformamida, o dimetil sulfóxido, normalmente a temperatura elevada, por ejemplo, de 60 a 120ºC, seguido por la eliminación de cualquier grupo protector de tiol usando los procedimientos estándar.
Se pueden preparar los compuestos de fórmula (V) a partir del correspondiente compuesto de fórmula (Va):
(Va)L-(CH_{2})p-SR
en la que L es un grupo saliente tal como p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato, y p es tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (V) y R es hidrógeno o un grupo protector de tiol; mediante la reacción con [^{18}F]-fluoruro acuoso producido por ciclotrón, preactivado de manera adecuada mediante evaporación a partir de una base (por ejemplo, a partir de tetrabutilamonio o k_{2}CO_{3}/Kryptofix-222), en un solvente adecuado tal como acetonitrilo, N,N-dimetilformamida, o dimetil sulfóxido, normalmente a temperatura elevada, por ejemplo, de 60 a 120ºC, seguido por la eliminación de cualquier grupo protector de tiol usando los procedimientos estándar.
Se pueden preparar los compuestos de fórmula (VI) a partir del correspondiente compuesto de fórmula (VIa):
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en la que L' es un grupo saliente tal como yodo, p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato, y cuando q es 0, L' puede ser nitro o una sal de yodonio o amonio, y q y r son tal como se han definido para el compuesto de fórmula (VI), y R es hidrógeno o un grupo protector de tiol;
mediante la reacción con [^{18}F]-fluoruro acuoso producido por ciclotrón, preactivado de manera adecuada mediante evaporación a partir de una base (por ejemplo, a partir de tetrabutilamonio o k_{2}CO_{3}/Kryptofix-222), en un solvente adecuado tal como acetonitrilo, N,N-dimetilformamida, o dimetil sulfóxido, normalmente a temperatura elevada, por ejemplo, de 60 a 120ºC, seguido por la eliminación de cualquier grupo protector de tiol usando los procedimientos estándar.
En las fórmulas (IIa), (IVa), (Va) y (VIa), los grupos protectores de tiol adecuados incluyen (Fenil)_{3}C-(tritilo) y otros que se pueden encontrar descritos en Protecting Groups in Organic Synthesis, Teodora W. Greene y Peter G. M. Wuts, publicado por John Wiley & Sons Inc. Se puede efectuar la eliminación de dichos grupos protectores de tiol mediante procedimientos estándar, tal como los que se describen en Greene. Por ejemplo, cuando R es tritilo, se puede formar el tiol libre mediante tratamiento con ácido diluido, por ejemplo, ácido trifluoroacético en un solvente clorado, tal como diclorometano.
En un aspecto preferido, se pueden enlazar los compuestos de fórmulas (IIa), (IVa); (Va), y (VIa) a un soporte sólido, tal como perlas de polímero o recubrimientos poliméricos, por ejemplo, una resina de tritilo o clorotritilo. En este aspecto, se pueden separar los reactivos y subproductos en exceso de la reacción de radiofluoración del producto enlazado con el polímero mediante lavado. Usando los procedimientos de desprotección que se han descrito anteriormente, se realiza la separación del compuesto de fórmula (II), (IV), (V), o (VI) del soporte sólido. Esta solución puede ser particularmente adecuada para la producción automatizada de los compuestos de fórmulas (II), (IV), (V), y (VI). De manera alternativa, se pueden eliminar mediante filtración los subproductos de la desprotección del tiol, cuando son insolubles en la mezcla de reacción.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un kit para la preparación de un trazador radiofluorado que comprende un grupo prostético de fórmula (IIa), (IVa), (Va), o (VIa) y un péptido activado de fórmula (I) o (Ia).
En el uso del kit, se podría convertir el compuesto de fórmula (IIa), (IVa), (Va), o (VIa) en el correspondiente compuesto de fórmula (II), (IV), (V), o (VI) usando los procedimientos descritos anteriormente. De manera preferible, se puede separar el compuesto de fórmula (II), (IV), (V), (VI) o un precursor con el grupo tiol protegido de cualquiera de los mismos, de los reactivos residuales mediante el paso de la mezcla de reacción a través de un cartucho de extracción en fase sólida (SPE). El cartucho de SPE puede comprender una almohadilla de grafito o una fase estacionaria C_{18}. Se puede eliminar cualquier grupo protector de tiol, por ejemplo, mediante la adición de un ácido tal como ácido trifluoroacético. Cuando el grupo tiol está protegido en el compuesto de fórmula (II), (IV), (V), o (VI) con un grupo hidrófobo, tal como un grupo tritilo, se puede efectuar de manera conveniente la desprotección sobre el cartucho de SPE, por tanto el grupo hidrófobo protector de tiol (tal como tritilo) permanece enlazado sobre la fase estacionaria mientras se eluye el grupo prostético marcado de fórmula (II), (IV), (V), o (VI) con una pureza y rendimiento elevados. A continuación podría añadirse el compuesto de fórmula (II), (IV), (V), o (VI) al compuesto de fórmula (I) o (Ia) que puede estar disuelto de manera adecuada en el tampón acuoso (pH 7-11). Tras la reacción a una temperatura no extrema durante 1 a 60 minutos, se puede purificar el péptido marcado, por ejemplo, mediante SPE y recogerse.
La invención se ilustra por medio de los siguientes ejemplos.
Ejemplos Producción de ^{18}F
Se produjo Flúor-^{18} mediante un ciclotrón usando la reacción ^{18}O (p,n)^{18} F. Se irradió [^{18}O]H_{2}O enriquecida (95% ^{18}O) mediante protones (19 MeV) con un haz de corriente integrada de 5-10 \muAh.
Síntesis del péptido ClCH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH
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Se ensambló la secuencia de aminoácidos usando síntesis automática completa (ABI 433A), resina Lys-sasrin (0,10 mmol) y cartuchos de aminoácidos 10 mmol. Tras la síntesis del péptido, el péptido en la resina se colocó en un equipo burbujeador manual, y se lavó con N,N dimetilformamida (DMF) y se añadió disuelto en DMF anhídrido cloroacético recientemente fabricado (0,5 mmol) (ácido cloroacético (94,5 mg, 1,0 mmol) y diciclohexil-carbodiimida (DCCI) (102,6 mg, 0,5 mmol) en diclorometano (DCM) durante 10 minutos. Se retiró por filtración diciclohexilurea (DCU) y la solución se evaporó bajo presión reducida dando como resultado el anhídrido). Tras una hora, el ensayo de Kaiser fue negativo (amarillo, resina roja (debida al anhídrido)), se eliminó el solvente, y la resina se lavó con DMF 8 veces y a continuación se añadieron DCM y dietil éter (DEE), y se secó con atmósfera de N_{2}. Se añadió triisopropilsilano (TIS) y una gota de agua a la resina antes de añadir ácido trifluoroacético (TFA). La resina se retiró por filtración tras 50 minutos y la solución se evaporó bajo presión reducida y se lavó con DEE 3 veces. El producto bruto se purificó mediante cromatografía preparativa en fase inversa dando como resultado 64,3 mg del producto puro (columna Vydac 218TP1022; solventes A= agua/ TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 00-30% de B durante 40 min; caudal 10 ml/minuto; detección a 254 nm). (HPLC Analítico: columna Phenomenex Luna 00B-4251-E0; solventes: A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/ TFA al 0,1%; gradiente 00-30% de B durante 10 min; caudal 2,0 ml/minuto; tiempo de retención 5,1 minutos detectado a 214 y 254 nm). Se llevó a cabo caracterización adicional usando espectrometría de masas, dando un valor de m/z de 612,8 [MH^{+}].
Ejemplo 1
Preparación de 4-fluorometil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida, desprotección y conjugación específica del emplazamiento a un péptido modificado con cloroacetilo 1. a) S-Tritil cisteamina 
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\vskip1.000000\baselineskip
A una solución agitada de cisteamina (Fluka, 3,85 g, 50,0 mmol) en ácido trifluoroacético (TFA) (50 ml) se añadió trifenilmetanol (13,0 g, 50,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y se concentró. Se añadió éter (250 ml) al residuo. El material precipitado se retiró por filtración y se lavó con éter. La sal de TFA se repartió entre solución acuosa de KOH 1 M (150 ml) y éter (150 ml). Las fases se separaron, y se secó la fase éter (MgSO_{4}). La solución se filtró y se concentró, y el producto se cristalizó en éter/n-hexano, dando 9,20 g (58%) de sólido blanco.
1. b) 4-Hidroximetil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida 
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A una solución de S-tritil cisteamina (1,60 g, 5,00 mmol) y éster pentafluorofenílico del ácido 4-hidroximetilbenzoico (MilliGen, 1,51 g, 5,00 mmol) en diclorometano (40 ml) se añadió N-metilmorfolina (0,55 ml, 5,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 36 h. El material precipitado se retiró por filtración, se lavó con diclorometano y se secó dando 1,30 g (57%) de un sólido blanco. El análisis mediante RMN estuvo de acuerdo con la estructura.
1. c) 4-[2-(tritilsulfanil)etilcarbamoil]bencilo éster del ácido metanosulfónico 
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A una solución de 4-hidroximetil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida (226 mg, 0,500 mmol) en THF seco (85 \mul) se añadieron N-metilpirrolidinona (NMP) (61 \mul, 0,55 mmol) y cloruro de mesilo (85 \mul, 1,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas, se filtró a través de sílice y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía en columna (sílice,1% metanol en cloroformo) dando 213 mg de un aceite que solidificó lentamente. El análisis mediante RMN estuvo de acuerdo con la estructura.
1. d) 4-Fluorometil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida 
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23 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió una solución de Kryptofix (Fluka, 15 mg, 40 \mumol) en acetonitrilo seco (200 \mul) a fluoruro de potasio sólido (2,3 mg, 80 \mumol). La mezcla se agitó durante 5 min. La solución de Kryptofix/KF se añadió a una solución de éster 4-[2-(tritilsulfanil) etilcarbamoil]bencílico del ácido metanosulfónico (21 mg, 40 \mumol) en acetonitrilo (400 \mul). La mezcla se calentó a 65ºC durante 10 min. Se analizó una alícuota mediante HPLC (columna Phenomenex Luna de 3 \mum C18(2) 50 x 4,60 mm; solventes: A = agua/TFA al 0,1% y B = acetonitrilo/TFA al 0,1%; gradiente 40-80% de B durante 10 min; caudal 2,0 ml/min, detección UV a 214 y 254 nm), mostrando la conversión completa del material de partida (t_{R} 5,6 min) en un producto nuevo (t_{R} 6,3 min). La purificación mediante HPLC preparativa en fase inversa (columna: Phenomenex Luna C18 (2) de 5 mm 250 x 21,2 mm, solventes: A = agua/TFA al 0,1% y B = acetonitrilo/TFA al 0,1%; gradiente 40-80% de B durante 60 min; caudal 10,0 ml/min, detección UV a 214 nm) dio 4,5 mg de un sólido blanco. La estructura se confirmó mediante espectroscopía de RMN.
1. e) 4-Fluorometil-N-(2-mercaptoetil)benzamida 
\vskip1.000000\baselineskip
24 
\vskip1.000000\baselineskip
A 1,4 mg (3,0 \mumol) de 4-fluorometil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida se añadieron 50 \mul de una mezcla TFA/
TIS/H_{2}O (95:2,5:2,5). El matraz se agitó suavemente durante 5 minutos y a continuación se concentró a vacío. El análisis mediante LC-MS (columna Phenomenex Luna 3 \mum C18 (2) 50 x 2,00 mm; solventes: A = agua/HCOOH al 0,1% y B =acetonitrilo/HCOOH al 0,1%; gradiente 5-60% de B durante 10 min; caudal 0,3 ml/min, detección UV a 214 y 254 nm, ESI-MS) dio un pico (t_{R} 6,8 min) con m/z a 214 correspondiente a MH^{+}.
1. f) Conjugación específica del emplazamiento al péptido modificado con cloroacetilo 
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25 
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El residuo de lo anterior se capturó en 100 \mul de una solución de tampón hidrógeno carbonato de sodio 0,1 M/carbonato de disodio a pH 9,1. A esta mezcla se añadió una solución del péptido cloroacetil-KGFGK-OH (3,7 mg, 6,0 \mumol) en 150 \mul de tampón. La mezcla se calentó a 45ºC durante 20 min. El análisis mediante LC-MS (columna Phenomenex Luna 3 \mum C18 (2) 50 x 2,00 mm; solventes: A = agua/HCOOH al 0,1% y B = acetonitrilo/HCOOH al 0,1%; gradiente 5-60% de B durante 10 min; caudal 0,3 ml/min, detección UV a 214 y 254 nm, ESI-MS) demostró la conversión completa del fluorocompuesto en un producto nuevo (t_{R} 4,3 min) dando m/z a 789,4 correspondiendo al MH^{+} del conjugado. El producto conjugado se purificó mediante HPLC en fase inversa (columna: Phenomenex Luna C18 (2) 5 mm 250 x 21,2 mm, solventes: A = agua/TFA al 0,1% y B = acetonitrilo/TFA al 0,1%; gradiente 5-60% de B durante 60 min; caudal 10,0 ml/min, detección UV a 214 nm) dando 2 mg de sólido
blanco.
\newpage
Ejemplo 2
Preparación de (3-fluoro-propilsulfanil)trifenilmetano, desprotección y conjugación específica del emplazamiento a un péptido modificado con cloroacetilo 2. a) Síntesis de 3-tritilsulfanil-propan-1-ol
26
Se disolvieron cloruro de tritilo (27,9 mg, 0,1 mmol) y trietil amina (49 \mul, 0,5 mmol) en DCM (2 ml) antes de añadir 3-mercapto-1-propanol (9 \mul, 0,1 mmol). El DCM se evaporó bajo presión reducida tras 6 horas y el producto bruto se purificó mediante cromatografía preparativa en fase inversa (columna Vydac 218TP1022; solventes A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 30-70% de B durante 40 min; caudal 10 ml/minuto; detección a 254 nm). Se obtuvo un rendimiento de 6 mg de material purificado (HPLC analítica: columna Phenomenex Luna C18,00B-4251-E0: solventes: A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 30-70% de B durante 10 min; caudal 1,0 ml/minuto; tiempo de retención 7,73 minutos detectado a 214 y 254 nm). La estructura se verificó mediante RMN.
2. b) Síntesis del éster 3-tritilsulfanil-propílico del ácido metanosulfónico
27
Se añadió cloruro de mesilo (6 \mul, 0,075 mmol) a una solución de 3-tritilsulfanil-propan-1-ol (5 mg, 0,015 mmol) y trietil amina (32 \mul, 0,23 mmol) en THF (1 ml). Después de 30 minutos el THF se evaporó bajo presión reducida y el producto bruto se disolvió en DCM, se lavó con una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio en agua, una solución saturada de cloruro de sodio y se secó con MgSO_{4}. Se obtuvo un rendimiento de 10 mg tras evaporación bajo presión reducida (HPLC analítica: columna Luna C18,00B-4251-E0: solventes: A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 40-80% de B durante 10 min; caudal 1,0 ml/minuto; tiempo de retención 7,12 minutos detectado a 214 y 254 nm). La estructura se verificó mediante RMN.
2. c) Síntesis de (3-fluoro-propilsulfanil)trifenilmetano
28
Se disolvieron KF (1,4 mg, 0,024 mmol) y Kryptofix 222 (9,0 mg, 0,024 mmol) en acetonitrilo (0,2 ml) (con calefacción). Se añadió éster 3-tritilsulfanil-propílico del ácido metanosulfónico (5 mg, 0,012 mmol) en acetonitrilo (0,2 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 80 grados durante 90 minutos. El producto bruto se purificó mediante cromatografía preparativa en fase inversa (columna Vydac 218TP1022; solventes A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 40-90% de B durante 40 min; caudal 10 ml/minuto; detección a 254 nm). Se obtuvo un rendimiento de 2 mg de material purificado (HPLC analítica: columna Phenomenex Luna C18,00B-4251-E0: solventes: A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 40-80% de B durante 10 min; caudal 1,0 ml/minuto; tiempo de retención 8,2 minutos detectado a 214 y 254 nm).
La estructura se verificó mediante RMN.
2. d) Conjugación de 3-fluoro-propano-1-tiol con Cl-Ac-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH 
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29 
\vskip1.000000\baselineskip
El grupo tritilo del (3-fluoro-propilsulfanil) trifenilmetano (1,0 mg, 0,003 mmol) se escindió con TFA (25 \mul) en presencia de TIS (5 \mul) y agua (5 \mul) (5 minutos). La solución de TFA se enfrió sobre hielo durante la adición de amoniaco (25%) hasta alcanzar pH 9. Se añadió una solución de CICH_{2}CO-KGFGK-OH (3,6 mg, 0,006 mmol) en 50 ml de agua y el pH se ajustó a 9 con amoniaco. La mezcla de reacción se calentó hasta 60 grados durante 30 minutos. La mezcla de reacción se inactivó con agua + TFA al 0,1% y se purificó mediante cromatografía preparativa en fase inversa (columna Phenomenex, C18,00G-4253-N0; solventes A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 00-30% de B durante 30 min; caudal 5 ml/minuto; detección a 254 nm). Se obtuvo un rendimiento de 0,4 mg de material purificado (HPLC analítica: columna Luna 00B-4251-E0: solventes: A= agua/TFA al 0,1% y B= CH_{3}CN/TFA al 0,1%; gradiente 00-30% de B durante 10 min; caudal 1,0 ml/minuto; tiempo de retención 6,88 minutos detectado a 214 y 254 nm). Se llevó a cabo caracterización adicional usando espectrometría de masas, dando un valor m/z de 670,35, [M-H^{+}].
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Ejemplo 3
Preparación del sulfuro de (2-{2-[2-(2-Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etil)-tritilo, desprotección y conjugación específica del emplazamiento a un péptido modificado con cloroacetilo 3. a) éster 2-{2-[2-(2-hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico del ácido tolueno-4-sulfónico 
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30 
\vskip1.000000\baselineskip
A una suspensión agitada de cloruro de p-toluensulfonilo (9,82 g, 51,5 mmol) en 2-{2-[2-(2-hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etanol, (20 g, 103 mmol) a 0ºC se añadió trietilamina (13 ml, 93 mmol) gota a gota. La suspensión se agitó a 0ºC durante 1 hora y a continuación a temperatura ambiente durante 16 horas más. La mezcla resultante se disolvió en diclorometano (350 ml). La solución transparente e incolora obtenida se extrajo con ácido clorhídrico 1 M (2 x 100 ml) y una vez con agua (200 ml). La fase orgánica se secó (MgSO_{4}), se filtró y se evaporó dando como resultado un aceite incoloro. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo. Se eluyó en primer lugar el ditosilato de tetraetilenglicol, seguido por el éster 2-{2-[2-(2-hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico del ácido tolueno-4-sulfónico, en forma de un aceite incoloro; 8,89 g (49%).
3. b) 2-[2-[2-(2-mercapto-etoxi)-etoxi]etoxi]-etanol 
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31 
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Una solución de tiourea (0,94 g, 12,35 mmol) y éster 2-{2-[2-(2-hidroxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico del ácido tolueno-4-sulfónico (4,09 g, 11,75 mmol) en alcohol absoluto (32 ml) se calentó a reflujo en atmósfera de argón durante 24 h. La mezcla se enfrió y se añadió una solución de NaOH (1,23 g, 30,75 mmol) en 15 ml de etanol/agua (9:1, v/v). Se continuó el reflujo durante otras 2,5 h bajo argón. A continuación la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, y se acidificó hasta pH 2 mediante ácido clorhídrico concentrado, y después se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo/ etanol absoluto (10:1) dando el producto en forma de un aceite incoloro. Rendimiento 1, 55 g (66%).
3. c) 2-{2-[2-(2-Tritilsulfanil-etoxi)-etoxi]1-etoxi}-etanol
32
A 2-{2-[2-(2-mercapto-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etanol (310 mg, 1,47 mmol) y cloruro de tritilo (452 mg, 1,62 mmol, 1,1 eq.) en un matraz de fondo redondo se añadió simultáneamente trietilamina (2,1 ml, 10 eq.) y THF (25 ml) bajo argón. El color rojo inicial desapareció tras agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se siguió mediante TLC, acetato de etilo/etanol (1:1) y se completó en 6 horas. A continuación, se añadió metanol (6 ml) para consumir el exceso de cloruro de tritilo, y la mezcla se agitó durante 5 minutos antes de la evaporación de los solventes. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando un 100% de acetato de etilo dando como resultado el producto (550 mg, 83%) en forma de aceite incoloro.
3. d) éster 2-{2-[2-(2-tritilsulfanil-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etílico del ácido metanosulfónico
33
A una solución agitada en THF (12 ml) de 2-{2-[2-(2-tritilsulfanil-etoxi)-etoxi]etoxi}-etanol (227 mg, 0,50 mmol) y trietilamina (139 \mul, 1,0 mmol) se añadió cloruro de metil sulfonilo (47 \mul, 0,60 mmol, 1,2 eq.). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la mezcla se filtró para eliminar la sal clorhidrato de trietilamina precipitada, y se evaporaron los solventes. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida dando el producto (238 mg, 90%) en forma de un aceite incoloro.
3. e) Síntesis del sulfuro de (2-{2-[2-(2-fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-etil)-tritilo
34
A solución agitada del éster 2-{2-[2-(2-tritilsulfanil-etoxi)-etoxi]- etoxi}-etílico del ácido metanosulfónico (71,67 mg, 0,14 mmol) y fluoruro de tetrabutilamonio (1,1 M en THF, 127 \mul, 0,14 mmol) se calentó a 90ºC durante 30 minutos. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se evaporó hasta sequedad. La purificación del producto se realizó mediante cromatografía ultrarrápida usando acetato de etilo/hexano (1:1) dando el producto (71%) en forma de un aceite incoloro.
3. f) Desprotección del grupo tritilo y conjugación específica del emplazamiento al péptido modificado con cloroacetilo
35
Se llevó a cabo la desprotección del grupo tritilo y la conjugación específica del emplazamiento al péptido funcionalizado con cloroacetilo tal como se ha descrito en el ejemplo 1, e) y f) más arriba.
Procedimiento HPLC para los ejemplos 4 a 6
Columna Beckman SystemGold®: Luna (Phenomenex), C18, 3 \mum, 50 x 4,6 mm d. i.; caudal 1 ml/min; solvente
A: agua (TFA al 0,1%), solvente B: acetonitrilo (TFA al 0,1%).
sistema gradiente 1: 1 min 40% de B, 15 min 40 \rightarrow 80% B, 5 min 80% B
sistema gradiente 2: 1 min 0% de B, 10 min 0 \rightarrow 30% B, 5 min 30% B, 5 min 30 \rightarrow 80% B
Ejemplo 4
Preparación del 4-[^{18}F]-fluorometil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]-benzamida, desprotección y conjugación específica del emplazamiento a un péptido modificado con cloroacetilo 4. a) Preparación de 3-[^{18}F]fluorometil-N-(2-mercaptotritil-etil)-benzamida
36
La preparación se llevó a cabo mediante procedimientos análogos a los que se describen en el ejemplo 5 a). El precursor de mesilato preparado como se describe en el Ejemplo 1 c) se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos dando el producto deseado con un rendimiento radioquímico del 22% (HPLC).
4. b) Enlace quimioselectivo con el péptido Cl-CH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH
37
La desprotección y enlace del ^{18}F-sintón del Ejemplo 4a) con el péptido precursor Cl-CH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH se llevó a cabo mediante los procedimientos descritos en el ejemplo 5. El análisis HPLC mostró la formación del producto deseado con una pureza radioquímica del 80%.
Ejemplo 5
Preparación de (3-[^{18}F]-fluoro-propilsulfanil)trifenilmetano, desprotección y conjugación específica del emplazamiento a un péptido modificado con cloroacetilo 5. a) Preparación del ^{18}F sintón: 3-[^{18}F]-fluoro-1-mercaptotritil-propano 
\vskip1.000000\baselineskip
38 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió agua que contenía flúor-18 (10 mCi, 1 ml) a un vial Wheaton (2 ml) cargado con Kryptofix® 222 (10 mg), carbonato de potasio (1 mg disuelto en 50 \mul de agua), y acetonitrilo (0,8 ml). El solvente se eliminó calentando a 110ºC durante una hora bajo corriente de nitrógeno. Se añadió acetonitrilo anhidro (0,5 ml) y se evaporó de nuevo como anteriormente. Esta etapa se repitió dos veces. El vial se enfrió hasta temperatura ambiente, seguido de inyección de una solución de mesilato preparado como se describe en Ejemplo 2 b) (1 mg) en DMSO anhidro (0,2 ml). La mezcla de reacción se agitó a 80ºC durante 5 min y se analizó mediante HPLC (gradiente 1, rendimiento radioquímico del 90%).
La mezcla de reacción se diluyó con DMSO/agua (1:1 v/v, 0,15 ml) y se cargó en un cartucho SepPak-Plus (^{t}C18, Waters) que se había condicionado (10 ml de acetonitrilo, 20 ml de agua). El cartucho se lavó con agua (10 ml) y el producto se eluyó mediante acetonitrilo. La pureza radioquímica fue del 99%.
5. b) Enlace quimioselectivo de a) y Cl-CH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH 
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39 
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución del producto procedente de 5 a) en acetonitrilo (0,5 ml, 1,1 mCi) se evaporó hasta sequedad mediante una corriente de nitrógeno y se calentó a 100ºC. Se añadió una mezcla de TFA (0,05 ml), triisopropilsilano (0,01 ml), y agua (0,01 ml), seguida por calefacción durante 10 min a 80ºC. Tras enfriar el vial a 0ºC, se añadieron amoniaco (27% en agua, 0,1 ml) y Cl-CH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH (1 mg) en agua (0,05 ml). La mezcla se agitó durante 30 min a 80ºC. El análisis mediante HPLC (gradiente 2) reveló la formación del producto deseado con una pureza radioquímica del 93%.
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Ejemplo 6
Preparación del sulfuro de (2-{2-[2-(2-[^{18}F]-fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi]-etil)-tritilo, desprotección y conjugación específica del emplazamiento a un péptido modificado con cloroacetilo 6. a) Preparación del ^{18}F sintón: 2-{2-[2-(2-[^{18}F]Fluoro-etoxi)-etoxi]-etoxi}-mercaptotritil-etano 
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40 
\vskip1.000000\baselineskip
Esta preparación se llevó a cabo de manera similar a la que se describe en el Ejemplo 5 a). Tras hacer reaccionar el precursor de mesilato preparado como se describe en el Ejemplo 3 d) durante 15 min en DMSO a 80ºC se obtuvo un rendimiento radioquímico del producto del 76% (HPLC). La extracción mediante Sep-Pak proporcionó el producto deseado con una pureza radioquímica del 97%.
6. b) Unión quimioselectiva con el péptido Cl-CH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH 
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41 
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La reacción de desprotección y unión del ^{18}F-sintón del Ejemplo 6 a) con el péptido precursor Cl-CH_{2}CO-Lys-Gly-Phe-Gly-Lys-OH se llevó a cabo mediante los procedimientos descritos en el ejemplo 5. El análisis HPLC reveló la formación del producto deseado con una pureza radioquímica del 41%.
\newpage
Ejemplo 7
Síntesis de [Cys^{2-6}]ciclo[CH_{2}CO-Lys(4-{3-[2-(4-fluorometil-benzoilamino)-etilsulfanil]-2,5-dioxo-pirrolidin-1-ilme- til}-ciclohexano-1-carbonil)-Cys^{2}-Arg-Gly-Asp-Cys^{6}-Phe-Cys]-NH_{2} 
\vskip1.000000\baselineskip
42 
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7. a) Síntesis de [Cys^{2-6}]ciclo[CH_{2}CO-Lys-Cys^{2}-Arg-Gly-Asp-Cys^{6}-Phe-Cys]- NH_{2} 
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43 
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Se preparó el compuesto del título tal como se describe en el Documento WO 03/006491.
7. b) Síntesis de [Cys^{2-6}]ciclo[CH_{2}CO-Lys(4-[N-maleimidometil]-ciclohexano-1-carbonil)-Cys^{2}-Arq-Gly-Asp- Cys^{6}-Phe-Cys]-NH_{2} 
\vskip1.000000\baselineskip
44 
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A 5 mg del péptido procedente del 4 a) anterior en 1 ml de DMF se añadieron 3 mg de 4-[N-maleimidometil]-ciclohexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo (Pierce) y 0,05 ml de NMM. Se dejó agitando la reacción a temperatura ambiente durante 2 horas y a continuación se diluyó con 5 ml de agua y se cargó a una columna semipreparativa Luna C18. Se recogió la fracción de producto y se criodesecó, dando 1 mg del producto deseado. La estructura se confirmó mediante MALDI-MS: M+H^{+} esperado 1189, encontrado 1190.
7. c) Conjugación específica del emplazamiento al péptido modificado con maleimida
45
A 0,16 mg (0,34 \mumol) de 4-fluorometil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida (procedente del ejemplo 1 d anterior) se añadió 50 \mul de una mezcla TFA/TIS/H_{2}O (95:2,5:2,5). El matraz se agitó suavemente durante 5 minutos y a continuación se concentró a vacío. El residuo se capturó en 50 ml de agua. A esta mezcla se añadió una solución de 0,4 mg (0,34 \mumol) de péptido modificado con maleimida en 50 \mul de agua y se ajustó el pH a 6,5 con hidróxido sódico 0,001 M. Tras 50 minutos, el análisis mediante LC-MS (columna Phenomenex Luna 3 mm C18 (2) 50 x 2,00 mm; solventes: A = agua/HCOOH al 0,1% y B = acetonitrilo/HCOOH al 0,1%; gradiente 0-50% de B durante 10 min; caudal 0,3 ml/min, detección UV a 214 y 254 nm, ESI-MS) demostró la conversión casi completa del péptido modificado con maleimida en un producto nuevo (t_{R} 7,6 min) con un m/z de 1400,7 correspondiente al M+H^{+} del conjugado.
Ejemplo 8
Síntesis de [Cys^{2-6}]ciclo[CH_{2}CO-Lys(4-{3-[2-(4-[^{18}F]-fluorometil-benzoilamino)-etilsulfanil]-2,5-dioxo-pirrolidin-1-ilmetil}-ciclohexano-1-carbonil)-Cys^{2}-Arg-Gly-Asp-Cys^{6}-Phe-Cys]-NH_{2}
Se preparó el compuesto del título a partir del péptido modificado del Ejemplo 7b por reacción con la 4-[^{18}F]-fluorometil-N-[2-(tritilsulfanil)etil]benzamida (Ejemplo 4) mediante procedimientos análogos a los que se describen en el Ejemplo 7c.

Claims (11)

1. Un procedimiento para la radiofluoración que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I) o (Ia):
46 
\vskip1.000000\baselineskip
47 
\vskip1.000000\baselineskip
con un compuesto de fórmula (II):
(II)^{18}F-(Ligante) -SH
en el que:
X es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo, y yodo, y es de manera preferible cloro
Y es un grupo hidrocarbilo C_{1}-_{10} que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos; y
el Ligante de la fórmula (II) es un grupo hidrocarbilo C_{1-30} que incluye de manera opcional 1 a 10 heteroátomos;
dando un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) de manera respectiva:
48 
\vskip1.000000\baselineskip
49 
\vskip1.000000\baselineskip
en las que el grupo Ligante es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (II), Y es tal como se ha definido en el compuesto de fórmula (Ia).
2. Un procedimiento para la radiofluoración de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
50
con un compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI):
(IV)^{18}F-(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-(CH_{2})_{m}-SH
(V)^{18}F-(CH_{2})_{p}-SH 
\hskip2,3cm
51
en el que:
X es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo, y yodo, y es de manera preferible cloro
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10;
p es un entero de 1 a 20;
q es un entero de 0 a 4;
r es un entero de 1 a 10;
dando un compuesto de fórmula (VII), (VIII), o (IX) de manera respectiva:
52 
\vskip1.000000\baselineskip
53 
\vskip1.000000\baselineskip
54
en las que m, n, p, q, y r son tal como se han definido para el compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI).
3. Un procedimiento para la radiofluoración de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (Ia):
55
con un compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI):
(IV)^{18}F-(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-(CH_{2})_{m}-SH
(V)^{18}F-(CH_{2})_{p}-SH 
\hskip2,3cm
56
en la que:
Y es un grupo hidrocarbilo C_{1-10} que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos;
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10;
p es un entero de 1 a 20;
q es un entero de 0 a 4;
r es un entero de 1 a 10;
dando un compuesto de fórmula (X), (XI), o (XII) de manera respectiva:
57
58
59
en las que m, n, p, q, y r son tal como se han definido para el compuesto de fórmula (IV), (V), o (VI), e Y es tal como se ha definido para el compuesto de fórmula (Ia).
\newpage
4. Un compuesto de fórmula (IV):
(IV)^{18}F-(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-(CH_{2})_{m}-SH
o un precursor con el grupo tiol protegido del mismo, en el que:
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10.
5. Un compuesto de fórmula (V):
(V)^{18}F-(CH_{2})_{p}-SH
o un precursor con el grupo tiol protegido del mismo, en el que p es un entero de 1 a 20.
6. Un compuesto de fórmula (VI):
60
o un precursor con el grupo tiol protegido del mismo, en el que:
q es un entero de 0 a 4; y
r es un entero de 1 a 10.
7. Un compuesto de fórmula (VII), (VIII) o (IX):
61
62
63
en las que:
n es un entero de 1 a 20; y
m es un entero de 1 a 10.
p es un entero de 1 a 20.
q es un entero de 0 a 4; y
r es un entero de 1 a 10.
\newpage
8. Un compuesto de fórmula (X), (XI), o (XII):
64 
\vskip1.000000\baselineskip
65 
\vskip1.000000\baselineskip
66
en las que:
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10;
p es un entero de 1 a 20;
q es un entero de 0 a 4;
r es un entero de 1 a 10; y
Y es un grupo hidrocarbilo C_{1-10} que incluye de manera opcional 1 a 6 heteroátomos.
9. Un compuesto de fórmula (XII) de acuerdo con la reivindicación 8 que es:
\vskip1.000000\baselineskip
67
10. Un kit de radiofluoración que comprende:
(i)
un compuesto de fórmula (IIa)
(IIa)L-(Ligante) -SR
en el que L es un grupo saliente tal como p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato, el Ligante es un grupo hidrocarbilo C_{1-30} que incluye de manera opcional 1 a 10 heteroátomos; R es hidrógeno o un grupo protector de tiol; y
(ii)
un péptido activado de fórmula (I) o (Ia) tal como se ha definido en la reivindicación 1.
11. Un kit de radiofluoración de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende:
(i)
un compuesto de fórmula (IVa), (Va), o (VIa):
(IVa)L-(CH_{2}CH_{2}O)_{n}-(CH_{2})_{m}-SR
(Va)L-(CH_{2})_{p}-SR 
\hskip2,3cm
68
n es un entero de 1 a 20;
m es un entero de 1 a 10;
p es un entero de 1 a 20;
q es un entero de 0 a 4;
r es un entero de 1 a 10;
L es un grupo saliente tal como p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato;
L' es un grupo saliente tal como yodo, p-toluenosulfonato, trifluorometanosulfonato, o metanosulfonato y cuando q es 0, L' puede ser nitro o una sal de yodonio o amonio,
R es hidrógeno o un grupo protector de tiol; y
(ii)
un péptido activado de fórmula (I) o (Ia) tal como se ha definido en la reivindicación 1.
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