ES2197169T3 - Derivados de somatostatina y sus productos radiomarcados. - Google Patents

Abstract

ESTA INVENCION SE REFIERE A REACTIVOS TERAPEUTICOS Y A PEPTIDOS, REACTIVOS DE RADIODIAGNOSTICO Y PEPTIDOS Y A METODOS PARA LA PRODUCCION DE AGENTES DE RADIODIAGNOSTICO MARCADOS. ESPECIFICAMENTE, LA INVENCION SE REFIERE A DERIVADOS DE PEPTIDOS LINEALES Y A ANALOGOS DE LA SOMATOSTATINA, Y A ASPECTOS DE TALES PEPTIDOS RADIOMARCADOS CON UN RADIOISOTOPO, ASI COMO A METODOS Y KITS PARA LA PRODUCCION, RADIOMARCADO Y UTILIZACION DE TALES PEPTIDOS EN PROCESOS DE RADIODIAGNOSTICO Y RADIOTERAPEUTICOS. LA INVENCION SE REFIERE ESPECIFICAMENTE A DERIVADOS DE PEPTIDOS LINEALES Y ANALOGOS DE LA SOMATOSTATINA RADIOMARCADOS CON TECNETIO ORMACION DE IMAGENES ESCINTIGRAFICAS. LA INVENCION TAMBIEN SE REFIERE ESPECIFICAMENTE A DERIVADOS DE PEPTIDOS LINEALES Y A ANALOGOS DE LA SOMATOSTATINA RADIOMARCADOS CON RADIOISOTOPOS CITOTOXICOS TALES COMO EL RENIO ({SUP,188}RE) A UTILIZAR COMO AGENTES RADIOTERAPEUTICOS. TAMBIEN SE PRESENTAN METODOS Y KITS PARA LA PRODUCCION, RADIOMARCADO Y UTILIZACION DE TALES PEPTIDOS PARAEL DIAGNOSTICO Y TERAPIA DEL CUERPO DE MAMIFEROS.

Description

Derivados de somatostatina y sus productos radiomarcados.

Antecedentes de la invención 1. Campo de la invención

La presente invención se refiere a agentes y péptidos terapéuticos, a agentes y péptidos radioterapéuticos, a agentes y péptidos radiodiagnósticos, y a procedimientos para producir dichos agentes radiodiagnósticos y radioterapéuticos marcados. Específicamente, la invención se refiere a derivados y análogos peptídicos de somatostatina lineales, y a realizaciones de dichos péptidos marcados con radioisótopos que emiten radiación gamma, tales como tecnecio 99m (Tc-99m), así como a procedimientos y estuches (kits) para preparar, radiomarcar y utilizar dichos péptidos para la formación de imágenes médicas de sitios en un cuerpo de mamífero. La invención se refiere asimismo a derivados y análogos peptídicos de somatostatina marcados con radioisótopos citotóxicos, tales como renio-186 (^{186}Re) y renio-188 (^{188}Re), y a procedimientos y estuches para preparar, radiomarcar y utilizar dichos péptidos terapéuticamente en un cuerpo de mamífero.

2.Descripción de la técnica anterior

La somatostatina es un tetradecapéptido que es producida endógenamente por el hipotálamo y el páncreas en seres humanos y otros mamíferos. El péptido presenta la fórmula:

Fórmula I

1

(Se pueden encontrar abreviaturas de una sola letra para aminoácidos en la publicación Biochemistry, de G. Zubay (2ª ed.), 1988, (MacMillan Publishing: Nueva York), pág. 33). Este péptido ejerce una amplia diversidad de efectos biológicos in vivo. Es conocido que actúa fisiológicamente sobre el sistema nervioso central, el hipotálamo, el páncreas y el tracto gastrointestinal.

La somatostatina inhibe la liberación de insulina y de glucagón procedentes del páncreas, inhibe la liberación de la hormona del crecimiento procedente del hipotálamo y reduce las secreciones gástricas. Por lo tanto, la somatostatina presenta aplicaciones clínicas y terapéuticas para el alivio de cierto número de dolencias y enfermedades, tanto en seres humanos como en otros animales. La somatostatina nativa presenta una utilidad limitada, sin embargo, debido al corto tiempo de semidescomposición in vivo, en que es degradada rápidamente por peptidasas. Por esta razón, se han desarrollado en la técnica anterior análogos de somatostatina que presentan una estabilidad mejorada in vivo.

Freidinger, en la patente de los EE.UU. Nº 4.235.886 da a conocer análogos de somatostatina hexapeptídicos cíclicos que son útiles en el tratamiento de cierto número de enfermedades en seres humanos.

Coy y Murphy, en la patente de los EE.UU. Nº 4.485.101 dan a conocer análogos de somatostatina dodecapeptídicos sintéticos.

Freidinger, en la patente de los EE.UU. Nº 4.611.054 da a conocer análogos de somatostatina hexapeptídicos cíclicos que son útiles en el tratamiento de enfermedades en seres humanos.

Nutt, en la patente de los EE.UU. Nº 4.612.366 da a conocer análogos de somatostatina hexapeptídicos cíclicos que son útiles en el tratamiento de cierto número de enfermedades en seres humanos.

Coy et al., en la patente de los EE.UU. Nº 4.853.371 dan a conocer análogos de somatostatina octapeptídicos sintéticos.

Coy y Murphy, en la patente de los EE.UU. Nº 4.871.717 dan a conocer análogos de somatostatina heptapeptídicos sintéticos.

Coy et al., en la patente de los EE.UU. Nº 4.904.642 dan a conocer análogos de somatostatina octapeptídicos sintéticos.

Taylor et al., en la patente de los EE.UU. Nº 5.073.541 dan a conocer un procedimiento para el tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas.

Brady, en el documento EP-A-0.113.029 da a conocer análogos de somatostatina hexapetídicos dicíclicos que son útiles en el tratamiento de cierto número de enfermedades en seres humanos.

Bauer et al., en el documento EP-A-0.187.622 dan a conocer derivados de somatostatina que son útiles en el tratamiento de cierto número de enfermedades en seres humanos.

Eck y Moreau, en el documento EP-A-0.389.180 dan a conocer análogos de somatostatina octapeptídicos terapéuticos.

Coy y Murphy, en el documento EP-A-0.395.417 dan a conocer análogos de somatostatina lineales.

Coy y Murphy, en el documento WO-A-91/09.056 dan a conocer análogos de somatostatina para usos terapéuticos.

Schally et al., en el documento EP-A-0.450.480 dan a conocer péptidos cíclicos para uso terapéutico.

Bodgen y Moreau, en el documento WO-A-92/13.554 dan a conocer composiciones y procedimientos para el tratamiento de enfermedades cutáneas proliferativas.

La somatostatina ejerce sus efectos uniéndose a receptores específicos expresados en la superficie celular de células que constituyen el sistema nervioso central, el hipotálamo, el páncreas y el tracto gastrointestinal. Se ha encontrado que dichos sitios de unión de somatostatina de alta afinidad están abundantemente expresados en la superficie celular de la mayoría de los tumores con actividad endocrina que surgen a partir de dichos tejidos. La expresión de sitios de unión de alta afinidad para somatostatina constituye un marcador para dichas células tumorales, y la unión específica con somatostatina se puede explotar para localizar e identificar células tumorales in vivo.

Son conocidos en la técnica anterior procedimientos para radiomarcar análogos de somatostatina que han sido modificados con el fin de que contengan un aminoácido tirosina (Tyr o Y).

Albert et al., en el documento GB-A-2.225.579 dan a conocer la radio-formación de imágenes médicas utilizando derivados de somatostatina, tales como octreótido marcado con ^{123}I.

Bakker et al., 1990, en la publicación J. Nucl. Med. 31: 1501-1509 describen la yodación radiactiva de un análogo de somatostatina y su utilidad en la detección de tumores in vivo.

Bakker et al., 1991, en la publicación J. Nucl. Med. 32: 1184-1189 enseñan la utilidad de somatostatina radiomarcada para la radio-formación de imágenes médicas in vivo.

Bomanji et al., 1992, en la publicación J. Nucl. Med. 33: 1121-1124 describen la utilización de octreótido yodado (Tyr-3) para la formación de imágenes médicas de tumores carcinoides metastásicos.

Alternativamente, se han dado a conocer en la técnica anterior procedimientos para radiomarcar somatostatina modificando covalentemente el péptido para que contenga un grupo quelante de radionucleidos.

Albert et al., en el documento GB-A-2.225.579 dan a conocer la formación de imágenes médicas utilizando derivados de somatostatina, tales como octreótido con ^{111}In por medio de un grupo quelante unido al terminal amino.

Albert et al., en el documento WO 91/01.144 dan a conocer la formación de imágenes médicas utilizando péptidos relacionados con factores de crecimiento, hormonas, interferones y citoquinas y constituidos por un péptido de reconocimiento específico covalentemente unido a un grupo quelante de radionucleidos.

Albert et al., en el documento EP-A-0.515.313 dan a conocer péptidos de somatostatina que presentan quelantes unidos al terminal amino.

Faglia et al., 1991, en la publicación J. Clin. Endocrinol. Metab. 73: 850-856 describen la detección de receptores de somatostatina en pacientes.

Kwekkeboom et al., 1991, en la publicación J. Nucl. Med. 32: 981 extracto Nº 305, se refiere a la radiomarcación de análogos de somatostatina con ^{111}In.

Albert et al., 1991, en el extracto LM10, 12th American Peptide Symposium: 1991, describen los usos de análogos de somatostatina derivatizados con ácido dietilen-triaminopentaacético, marcados con ^{111}In.

Krenning et al., 1992, en la publicación J. Nucl. Med. 33: 652-658 describen una centelleografía clínica utilizando (^{111}In)(DTPA)octreótido.

Dichos procedimientos se pueden adaptar fácilmente para hacer posible la detección de células tumorales in vivo mediante la formación de imágenes médicas, basándose en la expresión de sitios de unión de alta afinidad para somatostatina en células tumorales. Se pueden detectar fácilmente radionucleidos que emiten radiación gamma mediante centelleografía después de una inyección a un ser humano o a un animal. Es conocida una diversidad de radionucleidos que son útiles para la formación de imágenes médicas, que incluyen ^{67}Ga, ^{68}Ga, ^{99m}Tc (Tc-99m), ^{111}In, ^{123}I o ^{125}I. La sensibilidad del procedimiento de formación de imágenes médicas utilizando péptidos radiactivamente marcados es muy superior a otros procedimientos conocidos en la técnica, ya que la unión específica del péptido radiactivo concentra la señal radiactiva sobre las células de interés, por ejemplo, células tumorales. Esto es particularmente importante para tumores gastrointestinales con actividad endocrina, que son usualmente pequeños, crecen lentamente y son difíciles de detectar mediante procedimientos convencionales. La marcación con tecnecio-99m (Tc-99m) es ventajosa debido a que las propiedades nucleares y radiactivas de dicho isótopo lo convierten en un agente ideal formador de imágenes centelleográficas. El Tc-99m presenta una energía de fotónica simple de 140 keV y un periodo de semidesintegración radiactiva de aproximadamente 6 horas, y está fácilmente disponible a partir de un generador de ^{99}Mo-^{99m}Tc. Otros radionucleidos presentan periodos de semidesintegración eficaces que son mucho más prolongados (por ejemplo, ^{111}In, que presenta un periodo de semidesintegración de 60 a 70 h) o que son tóxicos (por ejemplo,^{125}I). Aunque el Tc-99m es un reactivo de radiomarcación ideal, no se ha utilizado ampliamente en la técnica anterior a la presente invención. (véase, por ejemplo, el artículo de Lamberts, en la publicación J. Nucl. Med. 32: 1189-1191 (1991)).

La somatostatina, y los análogos de somatostatina radiomarcados se pueden utilizar asimismo terapéuticamente. Para dichas aplicaciones, son ventajosos los radioisótopos citotóxicos, tales como escandio-47, cobre-67, galio-72, itrio-90, yodo-125, yodo-131, samario-153, gadolinio-159, disprosio-165, holmio-166, iterbio-175, lutecio-177, renio-186, renio-188, ástato-211 y bismuto-212. Los isótopos de renio, ^{186}Re y ^{188}Re son particularmente ventajosos.

La utilización de agentes quelantes para la radiomarcación de proteínas es conocida en la técnica anterior, y se dan a conocer procedimientos para la marcación de péptidos con Tc-99m en las patentes de los EE.UU. N^{os} 5.654.272, 5.225.180, 5.443.815, 6.017.510, 5.965.107, 5.849.260, 5.508.020, 5.979.064, 5.405.597, 5.552.525, 5.645.815, 5.561. 220, 6.017.509, 5,620.675, 5,843.403, 6.248.304, 5.783.170, 5.866.097, 5.830.856 y 5.997.844 y en las solicitudes internacionales según el Tratado del Convenio de Patentes (PCT) WO-A-92/13.572, WO-A-93/10.747, WO-A-93/17.719, WO-A-93/21.962, WO-A-93/23.085, WO-A-94/00.489, WO-A-94/07.918, WO-A-94/19.024, WO-A-94/28.942 y WO-A-95/00.553.

Frizberg, en la patente de los EE.UU. Nº 4.444.690 describe una serie de agentes quelantes de tecnecio basados en propanoato de 2,3-bis(mercaptoacetamido).

Gansow et al., en la patente de los EE.UU. Nº 4.472.509 enseñan procedimientos para la preparación y purificación de anticuerpos monoclonales conjugados con quelatos de Tc-99m.

Reno y Bottino, en el documento EP-A-0.237.150 dan a conocer la radiomarcación de anticuerpos con Tc-99m.

Pak et al., en el documento WO 88/07.382 dan a conocer un procedimiento para marcar anticuerpos con Tc-99m.

Cox, en el documento WO-A-92/21.383 da a conocer derivados de somatostatina radiomarcados que contienen dos restos de cisteína.

Rhodes, 1974, en la publicación Sem. Nucl. Med. 4: 281-293 enseña la marcación de albúmina de suero humano con tecnecio-99m.

Khaw et al., 1982, en la publicación J. Nucl. Med. 23: 1011-1019 dan a conocer procedimientos para marcar macromoléculas biológicamente activas con Tc-99m.

Byrne y Tolman, supra, dan a conocer un agente quelante basado en tiolactona bifuncional para acoplar Tc-99m a moléculas biológicas.

Cox et al., 1991, extracto, 7th International Symposium on Radiopharmacology, pág. 16, dan a conocer la utilización de análogos de somatostatina marcados con Tc-99m, ^{131}I y ^{111}In en la radiolocalización de tumores endocrinos in vivo mediante una centelleografía.

Se dan a conocer procedimientos para marcar directamente somatostatina, derivados de somatostatina, análogos de somatostatina o péptidos que se unen al receptor de somatostatina y que contienen por lo menos 2 restos de cisteína que forman un disulfuro o en los que el disulfuro está reducido a la forma de sulfhidrilo, en la solicitud de patente de los EE.UU. también en tramitación con número de serie 07/807.062, ahora patente de los EE.UU. Nº 5.225.180, publicada el 6 de julio de 1993.

Permanece la necesidad de análogos de somatostatina sintéticos (para hacer practicable la preparación rutinaria y para facilitar la aceptación legislativa) que presenten una estabilidad in vivo aumentada, para ser utilizados terapéuticamente, como agentes centelleográficos cuando son radiomarcados con Tc-99m o con otros radioisótopos detectables para su utilización en la formación de imágenes médicas de tumores in vivo, y como agentes radioterapéuticos cuando son radiomarcados con un radioisótopo citotóxico, tal como renio-188. Se proporcionan pequeños análogos de somatostatina sintéticos mediante la presente invención, que satisfacen específicamente dicha necesidad.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona análogos de somatostatina que son péptidos lineales para aplicaciones terapéuticas, incluyendo aplicaciones radioterapéuticas, y aplicaciones diagnósticas, incluyendo aplicaciones radiodiagnósticas, en particular aplicaciones de formación de imágenes médicas centelleográficas. A diferencia de la somatostatina nativa y de los análogos de somatostatina conocidos en la técnica anterior, los péptidos lineales de la invención no están restringidos dentro de una estructura cíclica. La invención proporciona asimismo reactivos peptídicos lineales constituidos por los análogos de somatostatina peptídicos lineales de la invención, en que dichos péptidos están covalentemente unidos a un resto ligante de radiomarcadores. La invención proporciona dichos péptidos lineales, reactivos peptídicos lineales y reactivos peptídicos lineales radiomarcados que son agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas, agentes radiodiagnósticos y agentes radioterapéuticos. Los agentes formadores de imágenes centelleográficas de la invención comprenden reactivos peptídicos lineales radiomarcados con un radioisótopo, con preferencia tecnecio-99m. Los agentes radioterapéuticos de la invención comprenden reactivos peptídicos lineales radiomarcados con un radioisótopo citotóxico, con preferencia renio-186 o renio-188. Se proporcionan asimismo procedimientos para la preparación y utilización de dichos péptidos lineales, reactivos peptídicos lineales y formas de realización radiomarcadas de los mismos.

La presente invención proporciona asimismo agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas constituidos por un péptido lineal que es un análogo de somatostatina y que está marcado con yodo-123, yodo-125 o yodo-131. De manera similar, la invención proporciona realizaciones alternativas de los análogos peptídicos de somatostatina lineales radiomarcados con yodo-125, yodo-131 o ástato-211 para su utilización como agentes terapéuticos.

Los análogos de somatostatina proporcionados por la invención son péptidos ligantes de receptores de somatostatina que presentan la siguiente fórmula:

Fórmula II X^{1}-A^{1}A^{2}-B^{1}B^{2}B^{3}B^{4}-C^{1}C^{2}-X^{2} en la que X^{1} y X^{2} son cada uno independientemente restos hidrófilos;

A^{1}, A^{2} y C^{1} son cada uno independientemente un D- o L-aminoácido lipófilo, o cisteína S-alquilada, penicilamina, homocisteína u homohomocisteína;

B^{1} es D- o L-Phe, o D- o L-Tyr, o D- o L-Nal, o Ain;

B^{2} es D- o L-Trp;

B^{3} es D- o L-Lys, o Hly, Achxa, Amf, Aec, Apc, Aes o Aps;

B^{4} es D- o L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal o Aib;

C^{2} es D- o L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal o Aib;

con la condición de que el reactivo peptídico ligante de receptores de somatostatina no sea GGGF_{D}-Cpa.YW_{D}KTFTamida covalentemente unida a un resto ligante de radiomarcadores que es capaz de formar un complejo eléctricamente neutro con un radioisótopo, o no presente ninguna de las siguientes estructuras:

K[BAT]D.Nal.C_{ME}YW_{D}KVC_{Me}T.amida; o

[DTPA]K[BAT]D-Nal.C_{ME}YW_{D}KVC_{Me}T.amida,

siendo dicha materia parte de la descripción del documento WO-A-9.321.962, publicado el 11-11-1993.

En una realización preferida, X^{1} es un resto hidrófilo que comprende un aminoácido, o un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos no superior a 10 restos, o un monosacárido, o un oligosacárido que comprende 10 o menos unidades de sacárido, o una poli(N-carboxialquil)amina, o un polioxianión. En otra realización preferida, X^{2} es un resto hidrófilo que comprende una poli(N-carboxialquil)-amina o un polioxianión, o un amonoácido, o un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos no superior a 10 restos (incluyendo péptidos en los que el grupo carboxilo del aminoácido del terminal carboxilo está reducido a alcohol) o un monosacárido o un oligosacárido que comprende 10 o menos unidades de sacárido. En otra realización preferida, B^{1} es fenilalanina o tirosina, B^{2} es triptófano, con la mayor preferencia D-triptófano, B^{3} es lisina y B^{4} es treonina o valina.

La invención proporciona asimismo reactivos peptídicos lineales que comprenden un péptido lineal de Fórmula II covalentemente unido a un resto ligante de radiomarcadores, en la que X_{2} es -COOR^{9}, CH_{2}OH, CH_{2}COOR^{9} o CON(R^{9})_{2} en los que cada R^{9} es H, alilo inferior lineal o cíclico o sustituido con un resto hidrófilo y en la que el resto ligante de radiomarcadores no está covalentemente unido a los restos B_{1}, B_{2}, B_{3} o B_{4}.

La presente invención proporciona péptidos que son análogos peptídicos de somatostatina lineales tales como los que se describen en la presente memoria que presentan una estabilidad in vivo aumentada en comparación con la somatostatina nativa, y que son terapéuticamente útiles en el alivio de enfermedades u otras dolencias en seres humanos o en otros animales.

La invención proporciona asimismo agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas que comprenden los reactivos peptídicos lineales de la invención en los que el resto ligante de radiomarcadores está establemente complejado con un radioisótopo. En una de dichas realizaciones se proporciona un agente formador de imágenes médicas centelleográficas en la que los reactivos análogos peptídicos de somatostatina lineales de la invención están radiomarcados con tecnecio-99m. En otras realizaciones de los agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas de la invención, el radioisótopo es indio-111 o galio-68. En todavía otras realizaciones, los agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas de la invención son péptidos lineales que están radiomarcados con yodo-123 o con yodo-125.

La invención proporciona asimismo agentes radioterapéuticos que son reactivos peptídicos lineales de la invención radiomarcados con un radioisótopo citotóxico que se selecciona entre el grupo que consiste en escandio-47, cobre-67, galio-72, itrio-90, yodo-125, yodo-131, samario-153, gadolinio-159, disprosio-165, holmio-166, iterbio-175, lutecio-177, renio-186, renio-188, ástato-211 y bismuto-212. En realizaciones preferidas, el radioisótopo es renio-186 o renio-188. En realizaciones preferidas adicionales, los péptidos cíclicos de la invención están radiomarcados con yodo-125, yodo-131 o ástato-211.

En otra realización, la invención proporciona agentes terapéuticos que comprenden los reactivos peptídicos análogos de somatostatina lineales de la invención complejados con un metal no radiactivo, tal como renio. Se proporcionan asimismo mediante la invención, y se encuentran dentro de su alcance, realizaciones en combinación, en las que dicho complejo está asimismo radiomarcado, ya sea directamente o por medio de un resto ligante de radiomarcadores.

La invención proporciona asimismo composiciones farmacéuticas que comprenden los péptidos ligantes de receptores de somatostatina de la invención en un excipiente farmacéuticamente aceptable.

La invención comprende asimismo la utilización de los presentes compuestos/reactivos para la preparación de un medicamento para el alivio de enfermedades relacionadas con somatostatina en animales, con preferencia en seres humanos, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de los análogos de somatostatina de la invención al animal. En realizaciones preferidas, la cantidad del análogo de somatostatina que se administra es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal/día.

Constituye una ventaja de los análogos de somatostatina proporcionados por la presente invención que los péptidos mantengan una alta afinidad por receptores de somatostatina, aun cuando éstos son péptidos lineales. Como las realizaciones preferidas carecen de un enlace de disulfuro intramolecular, la característica ventajosa de los análogos peptídicos de somatostatina lineales de la presente invención consiste en que su estabilidad no depende de la formación o de la persistencia de enlaces de disulfuro intramoleculares. Dicha característica es a su vez ventajosa debido a que la alta afinidad de los péptidos de la presente invención por receptores de somatostatina no es por tanto una función de la integridad de los enlaces de reticulación intramoleculares lábiles, tales como los enlaces de disulfuro. Adicionalmente, los reactivos peptídicos de la invención mantienen su alta afinidad por receptores de somatostatina después de haber sido sometidos a una radiomarcación por medio de restos ligantes de radiomarcadores covalentemente unidos. En contraste con ello, por ejemplo la conjugación de Tc-99m con un resto ligante de Tc-99m covalentemente unido a somatostatina nativa, o a un análogo de somatostatina que presenta un enlace de disulfuro, puede dar como resultado una reducción del disulfuro acompañada por una pérdida de actividad biológica. Dicha pérdida de actividad biológica puede tener lugar asimismo in vivo utilizando somatostatina nativa, o cualquier análogo de somatostatina que presente un enlace de disulfuro. La presente invención no está sometida a pérdidas similares de actividad biológica in vivo debido a que los análogos de somatostatina de la invención son activos en forma de péptidos lineales.

Un primer aspecto de los reactivos proporcionados por la invención para la preparación de agentes radiomarcados de la invención se refiere a reactivos, cada uno constituido por un péptido que es un análogo de somatostatina que está covalentemente unido a un resto ligante de radiomarcadores que presenta la fórmula: C(pgp)^{S}-(aa)-C(pgp)^{S} en la que (pgp)^{S} es H o un grupo protector de tiol y (aa) es cualquier \alpha- o \beta-aminoácido. En una realización preferida, el aminoácido es glicina. En otra realización preferida, el agente es un agente formador de imágenes médicas centelleográficas. En todavía otra realización preferida, el agente es un agente radioterapéutico.

En una segunda realización, la invención proporciona reactivos peptídicos susceptibles de ser radiomarcados para su utilización como agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas o como agentes radioterapéuticos, comprendiendo cada uno un análogo de somatostatina que está unido covalentemente a un resto ligante de radiomarcadores, de fórmula: A-CZ(B)-(C(R'R''))_{n}-X en la que A es H, HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC o R'''': B es H, SH o -NHR''', -N(R''')-aminoácido o péptido) o R''''; X es SH o -NHR'''. -N(R''')-(aminoácido o péptido) o R''''; Z es H o R''''; R', R'', R''' y R'''' son independientemente H o alquilo inferior de cadena lineal o ramificada o cíclico; n es 0, 1 ó 2; y: (1) cuando B es -NHR''' o -N(R''')-(aminoácido o péptido), X es SH y n es 1 ó 2; (2) cuando X es -NHR''' o -N(R''')-(aminoácido o péptido), B es SH y n es 1 ó 2; (3) cuando B es H o R'''', A es HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC, X es SH y n es 0 ó 1: (4) cuando A es H o R'''', entonces cuando B es SH, X es -NHR''' o -N(R''')-(aminoácido o péptido) y cuando X es SH, B es -NHR''' o -N(R''')-(aminoácido o péptido); (5) cuando X es H o R'''', A es HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC y B es SH; (6) cuando Z es metilo, X es metilo, A es HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC y B es SH y n es 0; y (7) cuando Z es SH y X es SH, n no es 0; y en la que el resto de tiol se encuentra en forma reducida.

Las realizaciones preferidas del resto ligante de radiomarcadores presentan una fórmula química que es: R^{1}-CO-(aminoácido) ^{1}-(aminoácido) ^{2}-Z en la que (aminoácido)^{1} y (aminoácido)^{2} son cada uno independientemente cualquier \alpha- o \beta-aminoácido primario que no comprende un grupo tiol, Z es un resto que contiene tiol que es cisteína, homocisteína, isocisteína, penicilamina, 2-mercaptoetilamina o 3-mercaptopropilamina, y R^{1} es alquilo inferior (C_{1}-C_{4}), un aminoácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos. Cuando Z es cisteína, homocisteína, isocisteína o penicilamina, el grupo carbonilo de dicho resto está covalentemente unido a un grupo hidroxilo, un grupo NR^{3}R^{4}, en el que cada uno de los R^{3} y R^{4} son independientemente H o alquilo inferior (C_{1}-C_{4}), un aminoácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos; o Y-(aminoácido) ^{2}-(aminoácido) ^{1}-NHR^{2} en la que Y es un resto que contiene tiol que es cisteína, homocisteína, isocisteína, penicilamina, 2-mercaptoacetato o 3-mercaptopropionato, (aminoácido)^{1} y (aminoácido)^{2} son cada uno independientemente cualquier \alpha- o \beta-aminoácido primario que no comprende un grupo tiol, y R^{2} es H o alquilo inferior (C_{1}-C_{4}), un aminoácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos. Cuando Y es cisteína, homocisteína, isocisteína o penicilamina, el grupo aminoácido de dicho resto está covalentemente unido a -H, un aminoácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácido; o

2

en las que n, m y p son cada uno números enteros que son independientemente 0 ó 1; cada R' es independientemente H, alquilo inferior, hidroxialquilo C_{2}-C_{4}, o alcoxialquilo C_{2}-C_{4}, y cada R es independientemente H o R'', en que R'' alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprende un grupo tiol, y un R o R' es L, en que L es una funcionalidad covalentemente unida al péptido ligante de receptores de somatostatina.

En realizaciones particulares de este aspecto de la invención, el resto ligante de radiomarcadores presenta una fórmula que es:

-(aminoácido)^{1}-(aminoácido)^{2}-{A-CZ(B)-{C(R^{1}R^{2})_{n}-X},

-{A-CZ(B)-{C(R^{1}R^{2})}_{n}-X}-(aminoácido)^{1}-(aminoácido)^{2},

-(un \alpha,\omega- o \beta,\omega-diaminoácido primario)-(aminoácido)^{1}-{A-CZ(B)-{C(R^{1}R^{2})}_{n}-X, o

-{A-CZ(B)-{C(R^{1}R^{2})}_{n}-X}-(aminoácido)^{1}-(un \alpha,\omega- o \beta,\omega-diaminoácido primario)

en las que (aminoácido)^{1} y (aminoácido)^{2} son cada uno independientemente cualquier \alpha- o \beta-aminoácido de origen natural, modificado, sustituido o alterado que no contiene un grupo tiol; A es H, HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC o R^{4}; B es H, SH o -NHR^{3}, -N(R^{3})-(aminoácido o péptido) o R^{4}; Z es H o R^{4}; X es SH o -NHR^{3}, -N(R^{3})-(aminoácido o péptido) o R^{4}; R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} son independientemente H o un alquilo inferior de cadena lineal o ramificada o cíclico; n es un número entero que es ya sea 0, 1 ó 2; (péptido) es un péptido de 2 a aproximadamente 10 aminoácidos; y: (1) cuando B es -NHR^{3} o -N(R^{3})-(aminoácido o péptido), X es SH y n es 1 ó 2; (2) cuando X es -NHR^{3} o -N(R^{3})-(aminoácido o péptido), B es SH y n es 1 ó 2; (3) cuando B es H o R^{4}, A es HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC, X es SH y n es 0 ó 1; (4) cuando A es H o R^{4}, entonces cuando B es SH, X es -NHR^{3} o -N(R^{3})-(aminoácido o péptido) y cuando X es SH, B es -NHR^{3} o N(R^{3})-(aminoácido o péptido); (5) cuando X es H o R^{4}, A es HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC y B es SH; (6) cuando Z es metilo, X es metilo, A es HOOC, H_{2}NOC, (aminoácido o péptido)-NHOC, (aminoácido o péptido)-OOC y B es SH y n es 0; y (7) cuando Z es SH y X es SH, n no es 0; y en las que el grupo tiol se encuentra en forma reducida.

Realizaciones preferidas adicionales incluyen restos ligantes de radiomarcadores que presentan la fórmula:

-Gly-Gly-Cys-, -Cys-Gly-Gly-, Gly-Gly-Cys-, -(\varepsilon-Lys)-Gly-Cys-, (\delta-Orn)-Gly-Cys-, -(\gamma-Dab)-Gly-Cys-, y -(\beta-Dap)-Gly-Cys-. (En estas fórmulas, se entenderá que \varepsilon-Lys representa un resto de lisina en el que el grupo \varepsilon-amino, en lugar del grupo \alpha-amino típico, está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace petídico: \delta-Orn representa un resto de ornitina en el que el grupo \delta-amino, en lugar del grupo \alpha-amino típico, está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico; \gamma-Dab representa un resto de ácido 2,4-diaminobutírico en el que el grupo \gamma-amino está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico; y \beta-Dab representa un resto de ácido 1,3-diaminopropiónico en el que el grupo \beta-amino está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico).

En otra realización, la invención proporciona reactivos peptídicos susceptibles de ser radiomarcados con un radioisótopo, para radioterapia o para la formación de imágenes médicas de sitios en el interior de un cuerpo de mamífero, comprendiendo cada uno un análogo de somatostatina que está covalentemente unido a un resto ligante de radiomarcadores de fórmula:

3

para los fines de la presente invención, los restos ligantes de radiomarcadores que presentan esta estructura se denominarán restos basados en ácido picolínico (Pic)

o

4

en la que X es H o un grupo protector; (aminoácido) es cualquier aminoácido y el resto ligante de radiomarcadores está covalentemente unido al péptido. Para los fines de la presente invención, los restos ligantes de radiomarcadores que presentan esta estructura se denominarán restos basados en picolilamina (Pica). En una realización preferida, el aminoácido es glicina y X es un grupo protector acetamidometilo.

Todavía otra realización de la invención proporciona reactivos peptídicos susceptibles de ser radiomarcados con un radioisótopo, para la formación de imágenes médicas de sitios en el interior de un cuerpo de mamífero o para su utilización como agentes radioterapéuticos, comprendiendo cada uno un análogo de somatostatina que está unido covalentemente a un resto ligante de radiomarcadores que es un resto ligante de radiomarcadores bisaminotiol. El resto ligante de radiomarcadores bisaminotiol en esta realización de la invención presenta la fórmula:

5

en la que cada R puede ser independientemente H, CH_{3} o C_{2}H_{5}; cada (pgp)^{S} puede ser independientemente un grupo protector de tiol o H; m, n y p son independientemente 2 ó 3; A es un alquilo inferior lineal o cíclico, arilo, heterociclilo, combinaciones o derivados sustituidos de los mismos; y X es péptido; o

6

en la que cada R es independientemente H, CH_{3} o C_{2}H_{5}; m, n y p son independientemente 2 ó 3; A es un alquilo inferior lineal o cíclico, arilo, heterociclilo, combinaciones o derivados sustituidos de los mismos; V es H o CO-péptido; R' es H o péptido; siempre que cuando V es H, R' sea péptido y cuando R' es H, V sea péptido. Para los fines de la presente invención, los restos ligantes de radiomarcadores que presentan estas estructuras se denominarán restos ``BAT''.

La presente invención proporciona procedimientos para la preparación de reactivos peptídicos de la invención mediante una síntesis química in vitro. En una realización preferida, los péptidos se sintetizan mediante una síntesis de péptidos en fase sólida.

La presente invención proporciona reactivos para la preparación de un agente ligante de receptores de somatostatina radiomarcado que comprende los péptidos ligante de receptores de somatostatina de la invención covalentemente unidos a un resto ligante de radiomarcadores. En una realización preferida, el reactivo está radiactivamente marcado con Tc-99m. En otra realización preferida, los reactivos están radiactivamente marcados con ^{186}Re o ^{188}Re.

La invención proporciona asimismo complejos de los reactivos peptídicos lineales de la invención con un radioisótopo, así como procedimientos para la radiomarcación de los reactivos peptídicos de la invención. Por ejemplo, en una realización, los agentes formadores de imágenes centelleográficas proporcionados por la invención comprenden complejos marcados con Tc-99m formados haciendo reaccionar los reactivos peptídicos de la invención con Tc-99m en presencia de un agente reductor. Los agentes reductores preferidos incluyen, pero sin limitarse a ellos, ion ditionito, ion estannoso y ion ferroso. Dichos complejos con Tc-99m de la invención se forman asimismo marcando los reactivos peptídicos de la invención con Tc-99m mediante intercambio de ligandos de un complejo con Tc-99m previamente reducido, tal como se proporciona en la presente memoria.

La invención proporciona asimismo estuches para la preparación de péptidos análogos de somatostatina lineales radiomarcados a partir de los reactivos peptídicos de la invención. Los estuches para la radiomarcación de los reactivos peptídicos de la invención están constituidos por un vial herméticamente cerrado que contiene una cantidad predeterminada de un reactivo peptídico de la invención y una cantidad suficiente de agente reductor para radiomarcar el péptido. En una realización preferida, el análogo de somatostatina radiomarcado es un agente formador de imágenes médicas centelleográficas. Se prefiere asimismo radiomarcar los reactivos peptídicos de la invención con Tc-99m. Se proporcionan asimismo estuches para la preparación de agentes radioterapéuticos, en los que los radioisótopos preferidos son Renio-186 y renio-188.

Los reactivos peptídicos radiomarcados de la invención se puede utilizar para fines diagnósticos y terapéuticos, utilizando agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas que son reactivos peptídicos marcados con

\hbox{Tc-99m}

para la formación de imágenes médicas de sitios en el interior de un cuerpo de mamífero, obteniendo imágenes centelleográficas gamma in vivo. Dichos procedimientos comprenden administrar una cantidad diagnóstica eficaz de reactivos peptídicos marcados con Tc-99m de la invención y detectar la radiación gamma emitida por el marcador

\hbox{Tc-99m}

localizada en el sitio en el interior del cuerpo de mamífero.

Los compuestos de la invención se pueden utilizar asimismo en procedimientos para aliviar enfermedades relacionadas con somatostatina en animales, con preferencia en seres humanos, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de los reactivos peptídicos ligante de somatostatina radiomarcados de la invención al animal. En realizaciones preferidas, el reactivo está radiactivamente marcado con ^{186}Re o ^{188}Re.

Los péptidos y reactivos peptídicos de la invención pueden comprender asimismo un resto conector polivalente. Los restos conectores polivalentes de la invención comprenden por lo menos dos grupos funcionales conectores idénticos capaces de unirse covalentemente a péptidos análogos de somatostatina o a restos ligantes de Tc-99m. Los grupos funcionales conectores preferidos son aminas primarias o secundarias, grupos hidroxilo, grupos de ácido carboxílico o grupos reactivos con tiol. En realizaciones preferidas, los restos conectores polivalentes están constituidos por bis-succinimidilmetiléter (BSME), ácido 4-(2,2-dimetilacetil)benzoico (DMBA), N-[2-(N',N'-bis(2-succinimidoetil)aminoetil)] -N^{6},N^{9}-bis(2-metil-2-mercapto-propil)-6,9-diazanonanamida (BAT-BS, tris(succinimidil-etil)amina (TSEA), bis-succinimidohexano (BSH), 4-(O-CH_{2}CO-Gly-Gly-Cys.amida)-2-metilpropiofenona (ETAC), tris-(acetamidoetil)amina, éter bis-acetamidometílico, éter bis-acetamidoetílico, \alpha,\varepsilon-bis-acetil-lisina, lisina y 1,8-bis-acetamido-3,6-dioxaoctano, o un derivado de los mismos.

Realizaciones preferidas específicas de la presente invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción más detallada de ciertas realizaciones preferidas y de las reivindicaciones.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona reactivos peptídicos lineales para la preparación de agentes radiomarcados para usos radiodiagnósticos y radioterapéuticos. La presente invención proporciona péptidos lineales que son análogos de somatostatina y que no están restringidos en una estructura cíclica. Dichos análogos de somatostatina poseen por lo tanto una estabilidad in vivo aumentada en comparación con somatostatina nativa. Dichos péptidos lineales son por sí mismos agentes terapéuticos para aliviar enfermedades y otras dolencias en animales, incluyendo seres humanos.

Se proporcionan asimismo mediante la invención péptidos lineales que se pueden radioyodar o radioastatizar y que son por lo tanto útiles en aplicaciones radioterapéuticas y radiodiagnósticas.

Otra realización de estos péptidos lineales que es proporcionada por la presente invención consiste en reactivos peptídicos lineales en los que los péptidos lineales de la invención están covalentemente unidos a un resto ligante de radiomarcadores. Dichos reactivos peptídicos lineales son susceptibles de ser radiomarcados para proporcionar agentes radiodiagnósticos o radioterapéuticos. Un ejemplo de una aplicación radiodiagnóstica utilizando los agentes radiomarcados de la invención es la formación de imágenes médicas centelleográficas, en la que se puede determinar la localización y la extensión de tumores que llevan receptores de somatostatina.

Los reactivos peptídicos lineales de la invención se pueden radiomarcar asimismo ventajosamente con radioisótopos citotóxicos, tales como renio-186 o renio-188 para usos radioterapéuticos. Los reactivos peptídicos lineales de la invención son asimismo útiles en la preparación de complejos con metales no radiactivos, siendo dichos complejos terapéuticamente útiles.

Los compuestos de la invención se pueden utilizar en un procedimiento para aliviar enfermedades u otras dolencias en animales, con preferencia en seres humanos. Dichas enfermedades y dolencia incluyen, pero sin limitarse a ellas, diabetes y retinopatía relacionada con diabetes, cirrosis hepática e infección de hepatitis, úlceras sangrantes y otras hemorragias gastrointestinales, pancreatitis, trastornos del sistema nervioso central, trastornos endocrinos, enfermedad de Alzheimer, acromegalia y otras enfermedades y trastornos relacionados con la producción de niveles inapropiados de hormona del crecimiento in vivo, y cáncer, particularmente los cánceres cuyo crecimiento depende o está influenciado por la producción de hormona del crecimiento. Las dosificaciones de los análogos de somatostatina proporcionados por la invención pueden ser las mismas que las dosificaciones de somatostatina nativa utilizadas rutinariamente para el tratamiento de las enfermedades anteriormente mencionadas u otras, o se pueden administrar menores cantidades de los compuestos de la invención debido a su tiempo de semidescomposición más prolongado in vivo.

En realizaciones de la invención que son útiles como agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas, la marcación con Tc-99m es una ventaja de la presente invención debido a que las propiedades nucleares y radiactivas del dicho isótopo lo convierten en un agente ideal formador de imágenes médicas centelleográficas. Dicho isótopo presenta una energía fotónica simple de 140 keV y un periodo de semidesintegración radiactiva de aproximadamente 6 horas, y está fácilmente disponible a partir de un generador de ^{99}Mo-^{99m}Tc. Se pueden utilizar asimismo otros radionucleidos en la práctica de la invención, tal como se da a conocer en la presente memoria.

Las realizaciones radioterapéuticas de la invención, por otra parte, se marcan ventajosamente con radioisótopos citotóxicos que incluyen, pero sin limitarse a ellos, escandio-47, cobre-67, galio-72, itrio-90, yodo-125, yodo-131, samario-153, gadolinio-159, disprosio-165, holmio-166, iterbio-175, lutecio-177, renio-186, renio-188, ástato-211 y bismuto-212, con la mayor preferencia ^{186}Re o ^{188}Re. Dichas realizaciones son útiles en el tratamiento de enfermedades u otras dolencias relacionadas con somatostatina en animales, con preferencia en seres humanos, que incluyen, pero sin estar limitadas a ellas, cáncer y otras enfermedades caracterizadas por el crecimiento de tumores malignos o benignos capaces de unirse a somatostatina o a análogos de somatostatina por medio de la expresión de receptores de somatostatina sobre la superficie de las células que constituyen dichos tumores.

En los restos ligantes de radiomarcadores y en los péptidos lineales covalentemente unidos a dichos restos que contienen un tiol covalentemente unido a grupos protectores de tiol ((pgp)^{S}) proporcionados por la invención, los grupos protectores de tiol pueden ser iguales o diferentes y pueden ser, pero sin limitarse a ellos:

-CH_{2}-arilo, (arilo es fenilo o fenilo sustituido con alquilo o alquiloxi);

-CH-(arilo)_{2}, (arilo es fenilo o fenilo sustituido con alquilo o alquiloxi);

-C-(arilo)_{3}, (arilo es fenilo o fenilo sustituido con alquilo o alquiloxi);

-CH_{2}-(4-metoxifenilo);

-CH-(4-piridil)(fenilo)_{2};

-C(CH_{3})_{3};

-9-fenilfluorenilo;

-CH_{2}NHCOR, (R es alquilo o arilo no sustituido o sustituido);

-CH_{2}-NHCOOR, (R es alquilo o arilo no sustituido o sustituido);

-CONHR, ((R es alquilo o arilo no sustituido o sustituido);

-CH_{2}-S-CH_{2}-fenilo.

Los grupos protectores preferidos presentan la fórmula -CH_{2}-NHCOR en la que R es un alquilo inferior que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, fenilo o fenilo sustituido con alquilo inferior, hidroxilo, alcoxi inferior, carboxi o alcoxicarbonilo inferior. El grupo protector más preferido es un grupo acetamidometilo.

Cada realización de la invención que contiene un péptido lineal ligante de receptores de somatostatina está constituida por una secuencia de aminoácidos. El término aminoácido tal como se utiliza en la presente invención se entiende que incluye todos los _{L}- y _{D}-aminoácidos, de origen natural y de otro origen. Los reactivos que comprenden péptidos ligante de receptores de somatostatina proporcionados por la invención incluyen, pero sin limitarse a ellos, los siguientes ejemplos ilustrativos de las realizaciones de péptidos de la invención:

C_{Acm}GC_{Acm}GGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida

(DTPA).F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

maGGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida

Ac.C_{Acm}GC_{Acm}F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida

(DTPA).D-Nal.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

AKCGGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida

(DTPA).D-Nal.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

(DTPA).Aca.F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

(DTPA).(\varepsilon-K)GCF_{D}FYW_{D}KTFT.amida

Ac.CGCF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida

(DTPA).(D-Nal.CYW_{D}KVCT)_{2}

Ac.F_{D}FYW_{D}YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

Ac.F_{D}FYW_{D}KTFTGGG(\varepsilon-K)GC.amida

K(BAT).D-Nal.C_{Me}YW_{D}KVC_{Me}T.amida

Ac.F_{D}FYW_{D}KTFGGG(\varepsilon-K)KC.amida

Pic.GC_{Acm}GGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida

(DTPA).D-Nal.CYW_{D}KVCT.amida

(2-cetogulonil)D-NalFYW_{D}KVCT.amida

(DTPA).K(BAT).D-Nal.C_{Me}YW_{D}KVC_{Me}T.amida

(DTPA).F_{D}FYW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

(AF_{D}CFW_{D}KTC_{Me}T(CH_{2}OH)

(DTPA).F_{D}GYW_{D}KTCT(CH_{2}OH)

(DTPA).Nal.SYW_{D}KVT.K(BAT).amida

(DTPA).Nal.SYW_{D}KVCT.amida

DDD.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

Ac.DDD.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

Hca.G.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

(Trc._{imida})_{2}K.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon- K)GCRR._{amida}

Trc(Trc._{imida})K.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCRR._{amida}

(Trc.imida)Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCR.amida

K_{D}KKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKDKD.amida

K_{D}KKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCDD.amida

(Trc)_{2}K.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

Hca.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

(2-cetogulonil)F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

KKKK. Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCDDDD.amida

Ac.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

Ac.KKKKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

(2-cetogulonil)F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

DDDD.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKKKK.amida

(DTPA)Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida

(DTPA)Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFTC_{Acm}GC_{Acm}.amida

Ac.KKKKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

KDKD.NalD.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKDKD.amida.

Tal como se utilizan en la presente memoria, los siguientes aminoácidos y análogos de aminoácidos se entiende que están representados por las siguientes abreviaturas: Ac es un grupo acetilo; ma es un grupo de ácido mercaptoacético; Aca es ácido 6-aminocaproico; Hcy es homocisteína; Hhc es homohomocisteína, que es (3-mercaptopropil)glicina; Pen es penicilamina; Mob es el grupo protector de sulfhidrilo 4-metoxibencilo; Acm es el grupo protector de sulfhidrilo acetamidometilo; Aib es ácido aminoisobutírico; Nal es 2-naftilalanina; Ain es ácido 2-aminoindan-2-carboxílico; Hly es homolisina; Achxa es 4-aminociclohexilamina; Amf es 4-aminometilfenilalanina; Aec es S-(2-aminoetil)cisteína; Apc es S-(3-aminopropil)cisteína; Aes es O-(2-aminoetil)serina; Aps es O-(3-aminopropil)serina; Abu es ácido 2-aminobutírico; Nva es norvalina; Aca es ácido 6-aminocaproico; F_{D} es _{D}-fenilalanina; W_{D} es

\hbox{ _{D} -triptófano}

; Y_{D} es _{D}-tirosina; Cpa es _{L}-(4-clorofenil)alanina; Thp es ácido 4-aminotetrahidrotiopiran-4-carboxílico; _{D}-Nal es _{D}-2-naftilalanina; Dpg es dipropilglicina; Abu es ácido \alpha-aminobutírico; Trc es ácido tricarboalquílico; Hca es hexacarboxi-ciclohexano; y Nle es norleucina. Todos los aminoácidos de origen natural se abrevian utilizando abreviaturas estándares (que se pueden encontrar en la publicación Biochemistry de G. Zubay (2ª ed.), 1988 (MacMillen Publishing: Nueva York) pág. 33.

Para los fines de la presente invención, los aminoácidos de origen natural son caracterizados como lipófilos (alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina, prolina, triptófano y valina, así como derivados S-alquilados de cisteína), hidrófilos (asparagina, glutamina, treonina, y serina), ácidos (ácido glutámico y aspártico), y básicos (arginina, histidina y lisina). (T(_{CH2OH}) representa un resto de treoninol, en el que el grupo carboxilo del aminoácido está reducido a alcohol primario, que se incorpora en el péptido utilizando el procedimiento de Neugebauer et al. (1990, Peptides: Proceedings of the 11th American Peptide Symposium, págs. 1020-21). Se entiende que \varepsilon-K representa un enlace covalente por medio del grupo \varepsilon-amino en la cadena lateral de un resto de lisina. \delta-Orn representa un resto de ornitina en el que el grupo \delta-amino, en lugar del grupo \alpha-amino típico, está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico. \gamma-Dab representa un resto de ácido 2,4-diaminobutírico en el que el grupo \gamma-amino está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico. \beta-Dap representa un resto de ácido 1,3-diaminopropiónico en la que el grupo \beta-amino está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico. Pic es picolinoílo (piridin-2-carbonilo); Pica es picolilamina (2-(aminometil)piridina); (BAT representa ácido N^{6},N^{9}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-6,9-diazanonanoico; K.(BAT) y Lys.(BAT) representan el aminoácido lisina, acilado en el grupo \varepsilon-amino en la cadena lateral del aminoácido a (BAT); (BAM) es (N^{1},N^{4}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-1,4,10-triazadecano; E.(BAM) y Glu.(BAM) representan el aminoácido ácido glutámico que presenta un enlace \gamma-amídico entre el grupo ácido carboxílico de la cadena lateral de ácido glutámico y un grupo amino primario derivado de (BAM); (BAT-BM) es N-(2-(N',N'-bis(2-maleimidoetil)aminoetil)-N^{9}- (t-butoxicarbonil)-N^{6},N^{9}-bis(2-metil-2-trifenilmetiltio- propil)-6,9-diazanonanamida; (BAT-BS) es N-(2-(N',N'-bis(2-succinimidoetil)aminoetil) -N^{6}N^{9}-bis(2-mercapto-2-metil-propil)-6,9-diazanonanamida; (BMME) es bis-maleimidometil-éter; (BSME) es bis-succinimidometiléter; y (DTPA) es ácido dietilentriaminopentaacético.

Para los fines de la presente invención, el término ``poli(N-carboxialquil)amina'' se entiende que describe una serie de compuestos ejemplificados por ácido nitrilotriacético, ácido iminodiacético, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA).

Para los fines de la presente invención, el término ``polioxianión'' se entiende que comprende sulfatos, fosfatos, sulfonatos, fosfonatos y otros compuestos similares.

Los péptidos análogos de somatostatina lineales de la presente invención se pueden sintetizar químicamente in vitro. Los péptidos de la presente invención se pueden preparar en general ventajosamente en un sintetizador de péptidos. Se pueden sintetizar los péptidos de la presente invención en los que el resto ligante de radiomarcadores se une covalentemente al péptido durante la síntesis química in vitro, utilizando técnicas bien conocidas para las personas expertas en la materia. Dichos péptidos covalentemente unidos al resto ligante de radiomarcadores durante la síntesis son ventajosos debido a que se pueden determinar sitios específicos de enlace covalente.

Los restos ligantes de radiomarcadores de la invención se pueden introducir en los péptidos análogos de somatostatina lineales diana durante la síntesis del péptido. Para realizaciones que comprenden ácido picolínico ((Pic-); p.ej., Pic-Gly-Cys(grupo protector)), el resto ligante de radiomarcadores se puede sintetizar en forma del último resto (es decir, el terminal amino) en la síntesis. Además, el resto ligante de radiomarcadores que contiene ácido picolínico se puede unir covalentemente al grupo \varepsilon-amino de lisina para proporcionar, por ejemplo, \alphaN(Fmoc)-Lys-\varepsilonN(Pic-Gly-Cys(grupo protector)), que se puede incorporar en cualquier posición apropiada en la cadena peptídica. Dicha secuencia es particularmente ventajosa, ya que proporciona un modo fácil de incorporación en el péptido análogo de somatostatina diana.

De manera similar, el resto ligante de radiomarcadores que contiene picolilamina (Pica) (-Cys(grupo protector)-Gly-Pica) se puede preparar durante la síntesis del péptido incluyendo la secuencia (-Cys(grupo protector)-Gly-) en el terminal carboxilo de la cadena peptídica. Después de la escisión del péptido a partir de la resina, el terminal carboxilo del péptido se activa y se acopla a picolilamina. Esta vía de síntesis requiere que las funcionalidades de la cadena lateral reactivas permanezcan enmascaradas (protegidas) y que no reaccionen durante la conjugación de la picolilamina.

La presente invención proporciona asimismo pequeños péptidos sintéticos lineales que son análogos de somatostatina e incorporan agentes quelantes basados en bisamina-bistiol (BAT) que se pueden marcar con Tc-99m.

La presente invención proporciona la incorporación de dichos agentes quelantes en virtualmente cualquier posición en el péptido, por medio de una unión covalente a cualquier grupo funcional apropiado del péptido, excepto que los restos quelantes de la invención no están covalentemente unidos a grupos funcionales que comprenden las cadenas laterales de aminoácidos de los aminoácidos B^{1}, B^{2}, B^{3} o B^{4}.

En la formación de un complejo de tecnecio radiactivo con los reactivos de la presente invención, el complejo de tecnecio, con preferencia una sal de pertecnetato Tc-99m, se hace reaccionar con el reactivo en presencia de un agente reductor. Los agentes reductores preferidos son iones ditionito, estannoso y ferroso; el agente reductor más preferido es cloruro estannoso. Se proporcionan convenientemente medios para la preparación de dichos complejos en forma de un estuche que comprende un vial herméticamente cerrado que contiene una cantidad predeterminada de un reactivo de la invención que se ha de marcar y una cantidad suficiente de un agente reductor para marcar el reactivo con Tc-99m. Alternativamente, el complejo se puede formar haciendo reaccionar el reactivo de la presente invención con un complejo lábil preformado de tecnecio y otro compuesto conocido como ligando de transferencia. Dicho procedimiento es conocido como intercambio de ligandos y es bien conocido para las personas expertas en la materia. El complejo lábil se puede formar utilizando ligandos de transferencia tales como tartrato, citrato, gluconato o manitol, por ejemplo. Entre las sales de pertecnetato Tc-99m que son útiles en la presente invención se incluyen las sales de metales alcalinos, tales como sal de sodio, sales de amonio o sales de alquilamonio inferior.

En una realización preferida de la invención, se proporciona un estuche para la preparación de péptidos marcados con tecnecio. Una cantidad apropiada del reactivo peptídico se introduce en un vial que contiene un agente reductor, tal como cloruro estannoso, en una cantidad suficiente para marcar el péptido con Tc-99m. Se puede incluir asimismo una cantidad apropiada de un ligando de transferencia como el que se ha descrito (tal como tartrato, citrato, gluconato o manitol, por ejemplo). El estuche puede contener asimismo materiales auxiliares farmacéuticos convencionales tales como, por ejemplo, sales farmacéuticamente aceptables para ajustar la presión osmótica, soluciones tampones, agentes de conservación y otros similares. Los componentes del estuche pueden encontrarse en forma líquida, congelada o seca. En una realización preferida, los componentes del estuche se proporcionan en forma liofilizada.

Los reactivos formadores de imágenes médicas marcados con tecnecio-99m de acuerdo con la presente invención se pueden preparar mediante la adición de una cantidad apropiada de Tc-99m o de complejo de Tc-99m en los viales y una reacción en las condiciones que se describen en el siguiente Ejemplo 2.

Se proporcionan agentes formadores de imágenes médicas centelleográficas radiactivamente marcados proporcionados por la presente invención que presentan una cantidad adecuada de radiactividad. En la formación de complejos reactivos de Tc-99m, se prefiere generalmente formar complejos radiactivos en soluciones que contienen radiactividad en concentraciones de aproximadamente 0,01 milicurios (mCi) a 100 mCi por ml.

Los reactivos formadores de imágenes médicas proporcionados por la presente invención se pueden utilizar para visualizar órganos tales como el riñón, para diagnosticar trastornos en dichos órganos, y tumores, en particular tumores gastrointestinales, mielomas, carcinoma de pulmón de células pequeñas y otros APUDomas, tumores endocrinos tales como carcinomas tiroideos medulares y tumores pituitarios, tumores cerebrales tales como meningiomas y astrocitomas, y se pueden formar imágenes médicas asimismo de tumores de la próstata, mama, colon y ovarios. De acuerdo con la presente invención, los reactivos peptídicos marcados con Tc-99m se administran en una única dosis unitaria inyectable. Los reactivos peptídicos marcados con Tc-99m proporcionados por la invención se pueden administrar por vía intravenosa en cualquier medio convencional para una inyección intravenosa, tal como un medio salino acuoso, o en un medio de plasma sanguíneo. Generalmente, la dosis unitaria que se ha de administrar presenta una radiactividad de aproximadamente 0,01 mCi a aproximadamente 100 mCi, con preferencia de 1 mCi a 20 mCi. El volumen de la solución que se ha de inyectar en una dosificación unitaria es de aproximadamente 0,01 ml a aproximadamente 10 ml. Después de una administración intravenosa puede tener lugar una formación de imágenes médicas in vivo en cuestión de unos pocos minutos. Sin embargo, puede tener lugar una formación de imágenes médicas, si se desea, en el plazo de horas o incluso más prolongado, después de que el péptido radiomarcado se ha inyectado a un paciente. En la mayoría de los casos, una cantidad suficiente de la dosis administrada se acumulará en la zona de la que se han de formar imágenes médicas en el plazo de aproximadamente 0,1 horas para permitir la toma de fotos de centelleo. Se puede utilizar cualquier procedimiento convencional de formación de imágenes médicas centelleográficas para fines diagnósticos de acuerdo con la presente invención.

Los péptidos lineales ligantes de receptores de somatostatina y los complejos de metales no radiactivos de los reactivos peptídicos lineales de la invención se pueden utilizar clínicamente para activar la regresión de ciertos tipos de tumores, particularmente los que expresan receptores de somatostatina. Los péptidos análogos de somatostatina lineales de la invención se pueden utilizar asimismo para reducir la hipersecreción hormonal que acompaña con frecuencia a ciertos cánceres, tales como los APUDomas. Los péptidos de la invención utilizados como agentes terapéuticos se pueden administrar mediante cualquier vía apropiada, incluyendo la vía intravenosa, intramuscular o por boca, y en cualquier excipiente farmacéuticamente aceptable, en dosis que varían de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 49 mg/kg de peso corporal/día.

La presente invención proporciona asimismo péptidos radiomarcados con un radioisótopo citotóxico, tal como renio-186 o renio-188, que se pueden utilizar para la radioterapia de ciertos tumores, tal como se ha descrito anteriormente. Para este fin, se puede administrar una cantidad de isótopo radiactivo de aproximadamente 10 mCi a aproximadamente 200 mCi por cualquier vía clínica adecuada, con preferencia mediante una inyección intravenosa.

Los procedimientos para preparar y marcar dichos compuestos se ilustran más completamente en los siguientes ejemplos. Estos Ejemplos ilustran ciertos aspectos del procedimiento anteriormente descrito y los resultados ventajosos, y se muestran a título de ilustración y no de limitación.

Ejemplo 1 Síntesis de péptidos en fase sólida

Se llevó a cabo una síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS) a una escala de 0,25 milimoles (mmol) utilizando un sintetizador de péptidos de Applied Biosystems Modelo 431A y utilizando una protección del terminal amino con 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), acoplando con diciclohexilcarbodiimida/hidroxibenzo-triazol o hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronio/hidroxibenzotriazol (HBTU/HOBT), y utilizando resina p-hidroximetilfenoxi-metilpoliestireno (HMP) para los ácidos del terminal carboxilo o resina amídica Rink para las amidas del terminal carboxilo.

En su caso, se sintetizaron los siguientes derivados de aminoácidos. Se preparó homocisteína mediante hidrólisis alcalina de _{L}-homocisteína-lactona. Se pueden introducir restos de treoninol, en los que el grupo carboxilo del aminoácido está reducido a alcohol primario, en los péptidos de la invención en su caso utilizando el procedimiento de Neugebauer et al. (1990, Peptides: Proceedings of the 11th American Peptide Symposium, págs. 1020-21). Se prepararon Fmoc.Hcy(Trt) y Fmoc.Pen(Trt) a partir de los aminoácidos apropiados mediante tritilación con trifenilmetanol en TFA, seguido de una derivatización con Fmoc, tal como se describe por Atherton et al. (1989, Solid Phase Peptide Synthesis, IRL Press: Oxford). Se preparó Fmoc.homohomo-cisteína(Trt) reduciendo éster \alpha-metílico del ácido N,N-bis-Boc-glutámico con borano-THF, seguido de una mesilación y una reacción con tritil-mercaptida, seguido de la eliminación de los grupos Boc con BF_{3}OEt en ácido acético, y a continuación una derivatización con Fmoc como se ha descrito anteriormente. Se preparó PhCH_{2}CHBrCOOH tratando fenilalanina (en una solución de agua y TFA/ saturada con NaBr) con nitrito de sodio, seguido de una destilación para recuperar el producto puro.

En su caso, se introdujeron grupos 2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo y 2-bromo-3-fenilpropionilo utilizando ya sea el apropiado ácido 2-hálico como el último resto acoplado durante la SPPS, o tratando el péptido con un aminoácido exento de terminal N unido a la resina ya sea con ácido 2-hálico/diisopropilcarbodiimida/N-hidroxi-succinimida/NMP o con anhídrido de ácido 2-hálico/-diisopropiletilamina/NMP.

En su caso, se ciclizaron péptidos 2-haloacilados purificados por HPLC agitando una solución de 0,1 a 1,0 mg/ml en una solución tampón de fosfato o bicarbonato o en hidróxido de amonio diluido (pH 8,0), que contenía opcionalmente EDTA de 0,5 a 1,0 mM, o acetonitrilo o THF durante 1 a 48 h seguido opcionalmente de una acidificación con ácido acético, una liofilización y una purificación por HLPC.

En su caso, se conjugó (BAM) (N^{1},N^{4}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-1,4,10-triazadecano) con el péptido activando en primer lugar el carboxilato del péptido con una mezcla de diisopropilcarbodiimida/ N-hidroxisuccinimida o HBTU/-HOBt en DMF, NMP o cloruro de metileno, seguido del acoplamiento en presencia de diisopropiletilamina. Después del acoplamiento, los conjugados se desprotegieron tal como se ha descrito anteriormente.

En su caso, se incorporó (BAT) (ácido N^{6},N^{9}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-6,9-diazanonanoico) en un péptido en forma de (N\alpha(Fmoc)-N\varepsilon(N-Boc)-S,S'-bistritil-BAT)lisina (preparada a partir de N\alpha(Fmoc)-lisina y N\varepsilon(N-Boc-S,S'-bistritil-BAT durante la síntesis del péptido y a continuación se desprotegió después de una escisión del péptido completado a partir de la resina sintética.

En su caso, se prepararon aductos de BSME haciendo reaccionar péptidos que contenían un único tiol (5 a 50 mg/ml en DMF tamponado a pH 7 con N-metilmorfolina o N-etilmorfolina, o con una solución tampón de fosfato de sodio 50 mM, pH 7-8, que contenía opcionalmente EDTA 0,5 mM o DMF o THF o acetonitrilo) con 0,5 equivalentes molares de BMME (bis-maleimidometiléter) disueltos previamente en acetonitrilo a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 a 18 horas. La solución se concentró y el producto se purificó por HPLC.

En su caso, se prepararon aductos de TSEA haciendo reaccionar un péptido que contenía un único tiol (en concentraciones de 10 a 100 mg/ml de péptido en DMF tamponado a pH 7 con N-metilmorfolina o con N-etilmorfolina, o 5 a 50 mg/ml de péptido en fosfato de sodio 50 mM, pH 7-8, que contenía opcionalmente EDTA 0,5 mM o DMF o THF o acetonitrilo) con 0,33 equivalentes molares de TMEA (tris(2-maleimidoetil)amina disueltos previamente en acetonitrilo o DMF, con o sin 1 equivalente molar de trietanolamina, a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 a 18 horas. Dichas mezclas de reacción que contenían aductos se concentraron y los aductos se purificaron a continuación utilizando una HPLC.

En su caso, se prepararon aductos de BAT-BS (N-(2-(N',N'-bis(2-succinimidoetil)aminoetil))-N^{6},N^{9}-bis (2-metil-2-mercaptopropil)-6,9-diazanonanamida) haciendo reaccionar un péptido que contenía un único tiol (en concentraciones de 2 a 50 mg/ml de péptido en DMF tamponado a pH 7 con N-metilmorfolina o N-etilmorfolina, o en fosfato de sodio 50 mM (pH 7-8), que contenía opcionalmente EDTA 0,5 mM o DMF o THF o acetonitrilo) con 0,5 equivalentes molares de BAT-BM (N-(2-(N',N'-bis(2-maleimidoetil)aminoetil))-N^{9} -(t-butoxicarbonil) -N^{6},N^{9}-bis(2-metil-2-trifenilmetiltio-propil)-6,9-diazanonanamida) disueltos previamente en acetonitrilo o THF, a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 a 18 h. La solución se evaporó a continuación a sequedad y los conjugados de (BAT-BS)-péptido se desprotegieron mediante tratamiento con 10 ml de TFA y 0,2 ml de trietilsilano durante 1 h. La solución se concentró, los aductos producidos se precipitaron con éter, y a continuación se purificaron por HPLC.

En su caso, se puede introducir el resto (DTPA) utilizando el procedimiento de Bakker et al. (1991, Life Sci. 49: 1583-1591, que se incorpora en la presente memoria como referencia).

Los productos unidos a la resina se escindieron rutinariamente utilizando una solución de ácido trifluoroacético o de ácido trifluoroacético y cloruro de metileno, que contenía opcionalmente agua, tioanisol, etanoditiol y trietilsilano, preparada en relaciones de 100 : 5 : 5 : 2,5 : 2 durante 0,5 a 3 h a temperatura ambiente. Los péptidos brutos se purificaron mediante una cromatografía preparativa líquida de alta presión (HPLC) utilizando una columna Waters Delta Pak C18 y una elución en gradiente utilizando ácido trifluoroacético (TFA) al 0,1% en agua modificada con acetonitrilo. El acetonitrilo se evaporó de las fracciones diluidas que se liofilizaron a continuación. La identidad de cada producto se confirmó mediante una espectroscopia de masas de bombardeo atómico rápido (FABMS) o mediante una espetroscopia de masas por electropulverización (ESMS).

En la siguiente Tabla I se muestran análogos de somatostatina sintetizados tal como se proporciona en la presente memoria, así como los productos de dicha síntesis identificados por FABMS.

Ejemplo 2 Un procedimiento general para la radiomarcación

Se disolvieron 0,1 mg de un péptido preparado como en el Ejemplo 1 en 0,1 ml de agua o etanol/agua 50/50 o una solución salina tamponada con fosfato o una solución tampón de fosfato de potasio 50 mM (pH = 5, 6 ó 7,4). Se preparó gluceptato de Tc-99m reconstituyendo un vial de Glucoscan (E.I. DuPont de Nemours, Inc.) con 1,0 ml de pertecnetato TC-99m de sodio que contenía hasta 200 mCi y se dejó en reposo durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron a continuación 25 \mul de gluceptato de Tc-99m al péptido y se dejó que la reacción se desarrollara a temperatura ambiente o a una temperatura de 100ºC durante 15 a 30 min y a continuación se filtró a través de un filtro de 0,2 \mum.

La pureza del péptido marcado con Tc-99m se determinó por HPLC utilizando las siguientes condiciones: una columna analítica Waters Delta Pak RP-18, 5 \mu, 4,6 mm x 220 mm, se cargó con cada péptido radiomarcado, y los péptidos se eluyeron con un caudal de disolvente igual a 1 ml/min. Se realizó una elución en gradiente comenzando con 100% de disolvente A (0,1% de CF_{3}COOH/H_{2}O) y finalizando con 100% de disolvente B_{90} (0,1 de CF_{3}COOH/90% de CH_{3}CN/H_{2}O) durante el transcurso de 10 a 20 min.

Los componentes radiactivos se detectaron utilizando un detector radiométrico en línea conectado a un registrador de integración. El gluceptato de Tc-99m y el pertecnetato Tc-99m de sodio se eluyeron en un periodo de tiempo comprendido entre 1 y 4 minutos en estas condiciones, mientras que los péptidos marcados con Tc-99m se eluyeron después de un periodo de tiempo mucho más prolongado, tal como se ilustra en la siguiente Tabla I.

TABLA I

\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|llll|}\hline 
 Péptido   \+  MH ^{+}    \+  RCY (%)   \+  R;
(min)  \\  \+ \+ \+ \\ 
C _{Acm} GC _{Acm} GGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1749  \+
97 ^{6}   \+  15,7 ^{2}  \\ 
(DTPA).F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1837  \+ 97 ^{7}   \+  15,5 ^{2}  \\ 
ma.GGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1417  \+ 98 ^{6}   \+
12,2 ^{3}  \\ 
Ac.C _{Acm} GC _{Acm} F _{D} .Cpa.YW _{D} YW _{D} KTFT.amida  \+
1619  \+  75 ^{6}   \+  17,1, 17,5 ^{2}  \\ 
(DTPA).D-Nal.Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2143  \+ N.D.  \+ N.D. \\  AKCGGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida 
\+ 1612  \+ 98 ^{7}   \+ 15-16 ^{2}  \\ 
(DTPA).D-Nal.Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1887  \+ 97 ^{7}   \+  16,2 ^{2}  \\ 
(DTPA).Aca.F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1950  \+  97 ^{3}   \+  11,5 ^{3}  \\ 
(DTPA).( \varepsilon -K)GCF _{D} .FYW _{D} KTFT.amida
 \+ 1802  \+ 97 ^{3}   \+  11,5 ^{3}  \\ 
Ac.CGCF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1477  \+ 98 ^{8}   \+
18,1 ^{2}  \\ 
(DTPA).(D-Nal.CYW _{D} KVCT) _{2}   \+ 2554 
\+ 97 ^{8}   \+ 11,8-12,4 ^{3}  \\ 
Ac.F _{D} .FYW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1469  \+ 96 ^{3}   \+ 12,1,  12,6 ^{3}  \\ 
Ac.F _{D} .FYW _{D} KTFTGGG( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1640  \+ 98 ^{3}   \+ 11,9  12,4 ^{3}  \\ 
KDKD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKDKD.amida
 \+ 2484  \+  99 ^{6}    \+ 14,8 \\ 
Ac.KKKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2450  \+  98 ^{6}   \+  14,2 \\ 
Ac.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 1810  \+ 96 ^{6}   \+  16,8 \\ 
KKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCDDDD.amida
 \+ 2485  \+  98 ^{6}   \+  14,6 \\ 
(2-cetogulonil)F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 1944  \+  99 ^{6}   \+ 16,0 \\ 
Hca.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2097  \+ 98 ^{6}   \+  15,8
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

TABLA I (continuación)

\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|llll|}\hline 
 Péptido   \+  MH ^{+}    \+  RCY (%)   \+  R;
(min)  \\  \+ \+ \+ \\ 
(Trc) _{2} K.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2212  \+  98 ^{6}   \+ 15,7 \\ 
K _{D} KKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCDD.amida
 \+ 2253  \+  99 ^{6}   \+ 14,7 \\ 
K _{D} KKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKDKD.amida
 \+ 2485  \+  79 ^{6}   \+ 14,1 \\ 
(Trc.imida)Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCR.amida
 \+ 1808  \+  99 ^{6}   \+ 17,3 \\ 
Trc(Trc. _{imida} )K.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -
K)GCRR. _{amida}   \+  2250  \+ 99 ^{6}   \+ 16,2 \\ 
(Trc. _{imida} ) _{2} K.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -
K)GCRR. _{amida}   \+  2232  \+ 99 ^{6}   \+ 16,6 \\ 
DDD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 1998  \+ 99 ^{5}   \+  15,6 ^{3}  \\ 
Ac.DDD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2040  \+  100 ^{5}   \+  16,0 ^{3}  \\ 
DDDD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K).GCKKKK. _{amida} 
 \+ 2484  \+  98 ^{6}   \+ 15,1 \\ 
(DTPA).Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K).GCKK.amida
 \+ 2192  \+  95 ^{6}   \+  15,8 ^{3}  \\ 
(DTPA).Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFTC _{Acm} GC _{Acm} .amida  \+ 2003 
\+ 93 ^{7}    \+ 16,4 ^{3}  \\ 
Ac.KKKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K).GC.amida
 \+ 2192  \+  94 ^{2}   \+  14,9 ^{3}  \\ 
Hca.G.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2136  \+ 93 ^{5}    \+ 16,0 ^{3}  \\ 
(DTPA).F _{D} FYW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1801  \+ 97 ^{5}   \+  11,3 ^{3}  \\ 
(DTPA).K.(BAT).D-Nal.C _{Me} YW _{D} KVC _{Me} T.amida
 \+ 1949  \+ 96 ^{8}   \+  12,3 ^{3}  \\ 
(2-cetogulonil)-D-NalFYW _{D} KVCT.amida
 \+ 1318  \+ 98 ^{3}   \+ 12,4, 13,0 ^{3}  \\ 
(DTPA).D-Nal.CYW _{D} KVCT.amida  \+ 1473  \+
97 ^{8}   \+ 11,0 ^{3}  \\ 
Pic.GC _{Acm} GGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1681  \+
98 ^{8}   \+ 13,8-16,8 ^{1}  \\ 
Ac.F _{D} FYW _{D} KTFGGG( \varepsilon -K)KC.amida
 \+ 1710  \+ 98 ^{8}   \+  15,9 ^{2}  \\ 
K.(BAT).D-Nal.C _{Me} YW _{D} KVC _{Me} T.amida  \+
1573  \+ 97 ^{8}   \+  12,5 ^{3}  \\ 
(DTPA).F _{D} GYW _{D} KTCT(CH _{2} OH)  \+ N.D.  \+ 96 ^{3} 
 \+ 10,6 ^{1}  \\  (DTPA).Nal.SYW _{D} KVTK.(BAT).amida  \+ 1801  \+
96 ^{3}   \+ 12,0 ^{3}  \\  (DTPA).Nal.SYW _{D} KVCT.amida  \+ 1457 
\+ 95 ^{8}   \+ 11,6 ^{3}  \\ 
 _{(2-cetogulonil)} .F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.( \varepsilon -K).GC.amida
 \+  1636  \+  99 ^{2}   \+ 15,8
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

* Se utilizaron las siguientes condiciones de marcación con los péptidos apropiados:

1.

El péptido se disolvió en una solución tampón de fosfato de potasio 50 mM (pH 7,4) y se marcó a temperatura ambiente.

2.

El péptido se disolvió en agua y se marcó a temperatura ambiente.

3.

El péptido se disolvió en agua y se marcó a una temperatura de 100ºC.

4.

El péptido se disolvió en 50% de etanol/agua y se marcó a una temperatura de 100ºC.

5.

El péptido se disolvió en 10% de hidroxipropilciclodextrina y se marcó a temperatura ambiente.

6.

El péptido se disolvió en 50% de etanol/agua y se marcó a temperatura ambiente.

7.

El péptido se disolvió en agua ajustada a pH 9 y se marcó a una temperatura de 100ºC.

8.

El péptido se disolvió en agua ajustada a pH 6,5 y se marcó a una temperatura de 100ºC.

** Procedimientos de HPLC

general: disolvente A = 0,1% de CF_{3}COOH/H_{2}O

disolvente B_{90} = 0,1% de CF_{3}COOH/90% CH_{3}CN/H_{2}O

caudal de disolvente = 1 ml/min

\begin{tabular}{@{}ll} Columnas: \+ a.
columna Vydac = columna analítica Vydac 218TP54 
RP-18,\\ \+ 5  \mu m  \times  220 mm  \times  4,6 mm
con columna de  guarda\\ \+ b. columna Waters = Waters
Delta-Pak C18,\\ \+ 5  \mu m, 39 x 150 mm
\end{tabular}

\begin{tabular}{@{}ll} Procedimiento 1:
columna Vydac  \+ 100% A a 100%\\   \+B _{90}  en 10 min\\
Procedimiento 2: columna Waters \+ 100% A a 100%\\  \+B _{90}  en 20
min\\ Procedimiento 3: columna Waters \+ 100% A a 100%\\  \+B _{90} 
en 10 min. \end{tabular}

Las abreviaturas de una única letra para aminoácidos se pueden encontrar en la publicación Biochemistry (2ª ed.), de G. Zubay, 1988 (MacMillen Publishing: Nueva York) pág. 33: Ac = acetilo; Acm = acetamidometilo; ma = ácido mercaptoacético; ; Aca = ácido 6-aminocaproico; Hly = homolisina; Apc = _{L}-(S-(3-aminopropil)cisteína; F_{D} = _{D}-fenilalanina; W_{D} = _{D}-triptófano; Y_{D} = _{D}-tirosina; Cpa = _{L}-(4-clorofenil)alanina; _{D}-Nal = _{D}-2-naftilalanina; Nle = norleucina; Hcy = homocisteína; Hhc = homohomocisteína; Pen = penicilamina; Aib = ácido aminoisobutírico; Nal = 2-naftilalanina; D-Nal = D-2-naftilalanina; Ain = ácido 2-aminoindano-2-carboxílico; Achxa = 4-amino-ciclohexil-alanina; Amf = 4-aminometil-fenilalanina; Aec = S-(2-aminoetil)cisteína; Apc = S-(3-aminopropil)cisteína; Aes = O-(2-aminoetil)serina; Aps = O-(3-aminopropil)serina; Abu = Ácido 2-aminobutírico; Trc = ácido tricarboalílico; Hca = hexacarboxiciclohexano; Nva = norvalina; T(_{CH2OH}) = treoninol (en el que el resto de ácido carboxílico ha sido reducido a alcohol primario); \varepsilon-K = un resto de lisina en un péptido en el que el enlace peptídico implica el grupo \varepsilon-amino en la cadena lateral de lisina en lugar del grupo \alpha-amino; \delta-Orn = un resto de ornitina en el que el grupo \delta-amino, en lugar del grupo \alpha-amino típico, está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico; \gamma-Dab = un resto de ácido 2,4-diaminobutírico en el que el grupo \gamma-amino está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico; \beta-Dap = un resto de ácido 1,3-diaminopropiónico en el que el grupo \beta-amino está covalentemente unido al grupo carboxilo del aminoácido contiguo para formar un enlace peptídico; Pic = picolinoílo (piridin-2-carbonilo); Pica = picolilamina (2-(aminometil)-piridina; BAT = ácido N^{6},N^{9}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-6,9-diazanonanoico; ácido BAT (protegido) = ácido N^{9}-(t-butoxicarbonil)-N^{6},N^{9}- bis(2-metil-2-trifenilmetiltio-propil)-6,9-diazanonanoico; BAM = (N^{1},N^{4}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-1,4,10-triazadecano; BAM (protegido) = N^{1}(t-butoxicarbonil)-N^{1},N^{4}-bis (2-metil-2-trifenilmetiltio-propil)-1,4,10-triazadecano; (BAT-BM) = N-(2-(N',N'-bis(2-maleimidoetil)aminoetil)-N^{9}- (t-butoxicarbonil)-N^{6},N^{9}-bis (2-metil-2-trifenilmetiltiopropil)-6,9-diazanonanamida, (BAT-BS) = N-[2-(N',N'-bis(2-succinimidoetil)aminoetil)] -N^{6},N^{9}-bis(2-mercapto-2-metilpropil)-6,9-diazanonanamida; (BMME) = bis-maleimidometiléter; (BSME) = bis-succinimidilmetiléter; (DTPA) = ácido dietilentriaminopentaacético. RCY (%) = rendimiento radioquímico determinado por HPLC).

Se prepararon complejos de renio no radiactivo disolviendo conjuntamente cada uno de los reactivos peptídicos de la invención con aproximadamente un equivalente molar de oxotetra-bromorrenato de tetrabutilamonio (+5), preparado tal como se describe por Cotton et al. (1996, Inorg. Chem. 5: 9-16) en dimetilformamida o acetonitrilo/agua y se agitaron durante 0,5 a 5 días. Los complejos de renio se aislaron mediante una HPLC de fase inversa tal como se ha descrito anteriormente para péptidos marcados con Tc-99m y se caracterizaron por FABMS o ESMS.

Se prepararon complejos de renio radiactivo, utilizando por ejemplo Re-186 o Re-188 a partir de las sales de perrenato apropiadas utilizando el mismo protocolo que para la marcación con Tc-99m, o añadiendo un agente reductor a una solución del péptido y el perrenato, u opcionalmente utilizando un agente de transferencia de ligandos tal como citrato e incubando la mezcla de reacción a una temperatura comprendida entre la temperatura ambiente y 100ºC durante entre 5 y 60 min.

Ejemplo 3 Inhibición de la unión de (^{125}I-Tyr^{11})somatostatina-14 a membranas de células de tumor pancreático de rata, AR42J

Se demostró la capacidad de diversos análogos de somatostatina de la invención para unirse a receptores de somatostatina in vitro, ensayando la capacidad de dichos análogos para inhibir la unión de un análogo de somatostatina radiomarcado a membranas celulares que contenían receptores de somatostatina. La línea celular de tumor pancreático de rata, AR42J, que expresa el receptor de somatostatina, se cultivó en medios esenciales mínimos de Dulbecco (DMEM) complementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) y glutamina 8 mM en una atmósfera con el 5% de CO_{2} humidificada, a una temperatura de 37ºC en matraces T. Las células recogidas se homogeneizaron en una solución tampón Tris-HCl 50 mM fría (pH 7,4) y el material homogeneizado se centrifugó a continuación a 39.000 g durante 10 min a una temperatura de 4ºC. Los sedimentos de centrifugación se lavaron una vez con solución tampón y a continuación se volvieron a suspender en una solución enfriada con hielo de Tris-HCl 10 mM (pH 7,4). Partes alícuotas iguales de esta preparación de membranas celulares se incubaron con (^{125}I-Tyr^{11})somatostatina-14 (a una concentración final de 0,5 nM y 750.000 cpm/ml, a una actividad específica de 2.000 Ci/mmol, Amersham, Arlington Heights, IL) y el péptido a una concentración final de 10^{-11} M a 10^{-6}M en una solución de HEPES 50 mM (pH 7,4) que contenía 1% de albúmina de suero bovino (BSA), MgCl_{2} 5 mM, Trasylol (200.000 Unidades Internacionales), bacitracina (0,02 mg/ml) y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (0,02 mg/ml) durante 25 min a una temperatura de 30ºC. Utilizando un colector de filtración, esta mezcla se filtró a través de un filtro GC/F lavado con polietilenimina (Whatman, Maidstone, Inglaterra), y el residuo que permaneció sobre el filtro se lavó tres veces con 5 ml de solución tampón HEPES fría. El filtro y una muestra de los líquidos de lavado del filtro se contaron a continuación en un contador de rayos gamma. Para determinar la unión no específica, el ensayo se realizó en presencia de somatostatina-14 no marcada, a 200 nM. Los datos de análisis que incluyeron representaciones gráficas de Hill de los datos proporcionaron constantes de inhibición (véase Bylund & Yamamura, ``Methods of receptor binding'', en Methods in Neurotransmitter Receptor Analysis, Yamamura et al., compiladores, Raven Press: Nueva York, 1990).

Estos resultados se presentan en la siguiente tabla. Los datos muestran que los péptidos de la presente invención presentan una alta afinidad de unión para receptores de somatostatina.

TABLA II

\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|ll|}\hline 
 Péptido   \+  K; (nM)  \\  \+ \\ 
C _{Acm} GC _{Acm} GGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+  <0,01
\\ 
(DTPA)F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 0,24 \\  maGGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 0,25 \\ 
Ac.C _{Acm} GC _{Acm} F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 0,73 \\ 
(DTPA)Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 1,3 \\  AKCGGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1,4 \\ 
(DTPA)Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2,0 \\ 
(DTPA)Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KT.Nal.T( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2,0 \\ 
(DTPA).Aca. _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2,6 \\ 
KDKD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKDKD.amida
 \+ 2,6 \\ 
(2-cetogulonil)F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2,7 \\ 
(DTPA).( \varepsilon -K)GCF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida
 \+ 3,3 \\  Ac.CGCF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 4,4 \\ 
K _{D} KKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKDKD.amida
 \+ 4,9 \\ 
Ac.KKKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 6,5 \\ 
KKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCDDDD.amida
 \+ 6,9 \\  (DTPA)(Nal _{D} .CYW _{D} KVCT) _{2}   \+ 7,2 \\ 
Ac.KKKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 7,7 \\ 
Ac.F _{D} .FYW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 7,9 \\ 
Ac.F _{D} .FYW _{D} KTFTGGG( \varepsilon -K)GC.ammida
 \+ 8,2 \\ 
K(BAT).Nal _{D} .C _{Me} YW _{D} KVC _{Me} T.amida  \+ 9,9
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

TABLA II (continuación)

\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|lll|}\hline 
 Péptidos complejados con (Re=O)   \+  MH ^{+}    \+ 
 K; (nM)  \\  \+ \+ \\ 
Ac.D _{D} F _{D} .Cpa.YWDKTC( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2074  \+ 0,20 \\ 
(DTPA)Nal _{D} .YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2343  \+ 0,33 \\ 
C _{Acm} GC _{Acm} GGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1807  \+
0,43 \\ 
D _{D} DF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2147  \+ 0,50 \\ 
Ac.KKKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2649  \+ 0,63 \\ 
(DTPA)Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2393  \+ 0,67 \\  AKCGGGF _{D} FYW _{D} KTFT.amida  \+ 1812  \+
0,76 \\ 
KKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCDDDD.amida
 \+ 2683  \+ 0,83 \\  maGGGF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1618 
\+ 0,97 \\ 
Ac.D _{D} DF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2188  \+ 1,4 \\ 
DDD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2197  \+ 1,4 \\ 
KDKD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKDKD.amida
 \+ 2083  \+ 1,4 \\ 
Ac.F _{D} F _{Y} W _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1688  \+ 1,5 \\ 
K _{D} KK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCDDD.amida
 \+ 2440  \+ 1,5 \\ 
K _{D} KK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCDD.amida
 \+ 2453  \+ 1,6 \\ 
Ac.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2008  \+ 1,9 \\  AKCGGGF _{D} FYW _{D} KTFT.amida  \+ 1812  \+
2,9 \\ 
(DTPA)Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFTC _{Acm} GC _{Acm} .amida  \+
2061  \+ 3,1 \\ 
(2-cetogulonil)F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1837  \+ 3,7 \\ 
K _{D} KKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKDKD.amida
 \+ 2684  \+  3,8 \\  Ac.CGCF _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT.amida  \+ 1677 
\+ 4,1
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

TABLA II (continuación)

\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|lll|}\hline 
 Péptidos complejados con (Re=O)   \+  MH ^{+}    \+ 
 K; (nM)  \\  \+ \+ \\ 
Ac.KKKKK.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2394  \+ 4,4 \\ 
(Trc. _{imida} ) _{2} K.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -
K)GCRR. _{amida}    \+ 2432  \+ 4,9 \\ 
(2-cetogulonil)F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2143  \+  5,2 \\ 
Ac.DDD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2239  \+ 6,0 \\ 
Ac.F _{D} FYW _{D} KTFTGGG( \varepsilon -K)KC.amida
 \+ 1911  \+ 6,1 \\ 
(DTPA).F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2036  \+ 7,9 \\ 
Hca.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKK.amida
 \+ 2298  \+ 8,0 \\ 
K _{D} KKK.F _{D} .Cpa.YW _{D} KTF.Nal.( \varepsilon -K)GCDDDD.amida
 \+ 2730  \+  8,1 \\ 
Ac.F _{D} FYW _{D} KTFTGGG( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 1840  \+ 8,1 \\ 
(DTPA).Aca.F _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2149  \+ 8,2 \\ 
DDDD.Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GCKKKK.amida
 \+ 2674  \+ 9,8 \\ 
(DTPA).Nal _{D} .Cpa.YW _{D} KTFT( \varepsilon -K)GC.amida
 \+ 2085  \+ 11
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip

Claims (21)

1. Un reactivo peptídico ligante de receptores de somatostatina que presenta la fórmula: X^{1}-A^{1}A^{2}-B^{1}B^{2}B^{3}B^{4}-C^{1}C^{2}-X^{2} en la que

X^{1} y X^{2} son cada uno independientemente restos hidrófilos;

A^{1}, A^{2} y C^{1} son cada uno independientemente un D- o L-aminoácido lipófilo, o cisteína S-alquilada, penicilamina, homocisteína u homohomocisteína;

B^{1} es D- o L-Phe, o D- o L-Tyr, o D- o L-Nal, o Ain;

B^{2} es D- o L-Trp;

B^{3} es D- o L-Lys, o Hly, Achxa, Amf, Aec, Apc, Aes o Aps;

B^{4} es D- o L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal o Aib;

C^{2} es D- o L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal o Aib;

con la condición de que el reactivo peptídico ligante de receptores de somatostatina no sea

\break

GGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFTamida covalentemente unida a un resto ligante de radiomarcadores que es capaz de formar un complejo eléctricamente neutro con un radioisótopo, o no presente ninguna de las siguientes estructuras:

K[BAT]D.Nal.C_{ME}YW_{D}KVC_{Me}T.amida; o

[DTPA]K[BAT]D-Nal.C_{ME}YW_{D}KVC_{Me}T.amida

2. El reactivo según la reivindicación 1, en el que X^{1} comprende un aminoácido, un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos no superior a 10 restos, un monosacárido, un oligosacárido que comprende 10 o menos unidades de sacárido, una poli(N-carboxilalquil)amina, o un polioxianión, y X^{2} comprende una poli(N-carboxilalquil)amina, un polioxianión, un aminoácodo, un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos no superior a 10 restos (incluyendo péptidos en los que el grupo carboxilo del aminoácido del terminal carboxilo está reducido a alcohol), un monosacárido y un oligosacárido que comprende 10 o menos unidades de sacárido.

3. El reactivo según las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende adicionalmente un resto conector polivalente que se une covalentemente a una multiplicidad de los péptidos ligantes de receptores de somatostatina para formar un agente ligante de receptores de somatostatina polivalente multimérico, en el que el peso molecular del agente ligante de receptores de somatostatina polivalente multimérico es inferior a aproximadamente 20.000 daltons;

opcionalmente en el que el resto conector polivalente comprende bis-succinimidilmetiléter, ácido 4-(2,2-dimetilacetil)benzoico, N-2-(N',N'-bis(2-succinimidoetil)-aminoetil)) -N^{6},N^{9}-bis(2-metil-2-mercaptopropil)-6,9-diaza-nonanamida, tris(succinimidiletil)amina, tris(2-cloro-acetamidoetil)amina, 1,2-bis-(2-(cloroacetamido)etoxi)- etano,

\break

tris(acetamidoetil)amina, éter bis-acetamido-metílico, éter bis-acetamidoetílico, \alpha,\varepsilon-bis-acetil-lisina, lisina y 1,8-bis-acetamido-3,6-dioxaoctano, o un derivado de los mismos.

4. Un reactivo peptídico ligante de receptores de somatostatina que presenta la fórmula: X^{1}-A^{1}A^{2}-B^{1}B^{2}B^{3}B^{4}-C^{1}C^{2}-X^{2} en la que

X^{1} es un resto hidrófilo;

A^{1}, A^{2} y C^{1} son cada uno independientemente un D- o L-aminoácido lipófilo, o cisteína S-alquilada, penicilamina, homocisteína u homohomocisteína;

B^{1} es D- o L-Phe, o D- o L-Tyr, o D- o L-Nal, o Ain;

B^{2} es D- o L-Trp;

B^{3} es D- o L-Lys, o Hly, Achxa, Amf, Aec, Apc, Aes o Aps;

B^{4} es D- o L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal o Aib;

C^{2} es D- o L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal o Aib;

X^{2} es -COOR^{9}, -CH_{2}OH, CH_{2}COOR^{9}, o -ON(R^{9})_{2}, en los que cada R^{9} es H, alquilo inferior lineal o cíclico o sustituido con un resto hidrófilo;

y en el que el péptido ligante de receptores de somatostatina está unido covalentemente a un resto ligante de radiomarcadores, en el que el resto ligante de radiomarcadores no está unido covalentemente a los restos B^{1}, B^{2}, B^{3} o B^{4} del péptido; con la condición de que el reactivo peptídico ligante de receptores de somatostatina no sea GGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFTamida covalentemente unida a un resto ligante de radiomarcadores que es capaz de formar un complejo eléctricamente neutro con un radioisótopo, o no sea ninguna de las siguientes estructuras:

K[BAT]D.Nal.C_{ME}YW_{D}KVC_{Me}T.amida; o

[DTPA]K[BAT]D-Nal.C_{ME}YW_{D}KVC_{Me}T.amida.

5. El reactivo según la reivindicación 4, en el que X^{1} comprende un aminoácido, un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos no superior a 10 restos, un monosacárido, un oligosacárido que comprende 10 o menos unidades de sacárido, una poli(N-carboxilalquil)amina o un polioxianión, y X^{2} comprende una poli(N-carboxilalquil)-amina, un polioxianión, un aminoácido, un péptido que presenta una secuencia de aminoácidos no superior a 10 restos, un monosacárido o un oligosacárido que comprende 10 o menos unidades de sacárido.

6. El reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que B^{1} es fenilalanina o tirosina, B^{2} es D-triptófano, B^{3} es lisina y B^{4} es treonina o valina.

7. El reactivo según una cualquiera de la reivindicaciones 4 a 6, en el que el resto ligante de radiomarcadores presenta una fórmula seleccionada entre el grupo que consiste en:

i)

C(pgp)^{S}-(aa)-C(pgp)^{S}

en la que (pgp)^{S} es H o un grupo protector de tiol y (aa) es cualquier \alpha- o \beta-aminoácido.

ii)

un resto complejante de tecnecio-99m que comprende un único resto de tiol, que presenta la fórmula: A-CZ(B)-[C(R'R'')]_{n}-X

en la que

A es H, HOOC, H_{2}NOC, (péptido)-NHOC, (péptido)-OOC o R'''';

B es H, SH, -NHR'''', -N(R''')-péptido) o R'''';

X es H, SH, -NHR'''', -N(R''')-péptido o R'''';

Z es H o R'''';

R', R'', R''' y R'''' son independientemente H o un alquilo inferior de cadena lineal o ramificada o cíclica; n es 0,1 ó 2

y

cuando B es -NHR''' o -N(R''')-(péptido), X es SH y n es 1 ó 2;

cuando X es -NHR''' o -N(R''')-péptido, B es SH y n es 1 ó 2;

cuando B es H o R'''', A es HOOC, H_{2}NOC, (péptido)-NHOC, (péptido)-OOC, X es SH y n es 0 ó 1;

cuando A es H o R'''', entonces cuando B es SH, X es -NHR''' o -N(R''')-(péptido) y cuando X es SH, B es -NHR''' o -N(R''')-(péptido);

cuando X es H o R'''', A es HOOC, H_{2}NOC, (péptido)-NHOC, (péptido)-OOC y B es SH;

cuando Z es metilo, X es metilo, A es HOOC, H_{2}NOC, (péptido)-NHOC, (péptido)-OOC, B es SH y n es 0;

y en el que el resto de tiol se encuentra en forma reducida;

\newpage

iii)

7

en la que X = H o un grupo protector;

(aminoácido) = cualquier aminoácido;

iv)

8

en la que X = H o un grupo protector;

(aminoácido) = cualquier aminoácido;

v)

9

en la que cada

R^{5} es independientemente H, CH_{3} o C_{2}H_{5};

cada (pgp)^{S} es independientemente un grupo protector de tiol o H;

m, n y p son independientemente 2 ó 3;

A = alquilo lineal, alquilo inferior cíclico, arilo, heterociclilo, OR, una combinación de los mismos; y

\newpage

vi)

10

en la que cada R^{5} es independientemente H, CH_{3} o C_{2}H_{5};

m, n y p son independientemente 2 ó 3;

A = alquilo lineal, alquilo inferior cíclico, arilo heterociclilo o una combinación de los mismos;

V = H o -CO-péptido;

R^{6} = H o péptido;

y

en la que cuando V = H, R^{6} = péptido y cuando R^{6} = H, V = -CO-péptido.

8. El reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, que comprende adicionalmente un resto conector polivalente covalentemente unido a una multiplicidad de los péptidos ligantes de receptores de somatostatina y asimismo covalentemente unido a una multiplicidad de restos ligantes de radiomarcadores para constituir un reactivo para la preparación de un reactivo ligante de receptores de somatostatina polivalente multimérico, en el que el peso molecular del reactivo ligante de receptores de somatostatina polivalente multimérico es inferior a 20.000 daltons; en el que opcionalmente el resto conector polivalente es bis-succinimidilmetiléter, ácido 4-(2,2-dimetilacetil)benzoico, N-2-(N',N'-bis(2-succinimidoetil)-aminoetil)) -N^{6},N^{9}-bis(2-metil-2-mercaptopropil)-6,9-diaza-nonanamida, tris(succinimidiletil)amina, tris(2-cloro-acetamidoetil)amina, 1,2-bis-(2-(cloroacetamido)etoxi)-etano, tris(acetamidoetil)amina, éter bis-acetamido-metílico, éter bis-acetamidoetílico, \alpha,\varepsilon-bis}-acetil-lisina, lisina y 1,8-bis-acetamido-3,6-dioxaoctano, o un derivado de los mismos.

9. Un reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el que la cisteína del resto ligante de radiomarcadores que presenta la fórmula

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{

C(pgp) ^{S} -(aa)-C(pgp) ^{S} \cr}

presenta un grupo protector de fórmula

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{

-CH _{2} -NH-CO-R\cr}

en la que R es un alquilo inferior que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, 2-, 3-, 4-piridilo, fenilo o fenilo sustituido con alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi, o alcoxicarbonilo inferior.

10. El reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el que el resto ligante de radiomarcadores C(pgp)^{S}(aa)-C(pgp)^{S} presenta la fórmula:

11

11. Un reactivo que presenta una fórmula seleccionada entre el grupo que consiste en:

C_{Acm}GC_{Acm}GGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida;

(DTPA).F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida

maGGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida;

Ac.C_{Acm}GC_{Acm}F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida;

(DTPA).D-Nal.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

AKCGGGF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida;

(DTPA).D-Nal.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida;

(DTPA).Aca.F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida;

(DTPA).(\varepsilon-K)GCF_{D}FYW_{D}KTFT.amida;

Ac.CGCF_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT.amida;

(DTPA).(D-Nal.CYW_{D}KVCT)_{2};

Ac.F_{D}FYW_{D}YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida;

Ac.F_{D}FYW_{D}KTFTGGG(\varepsilon-K)GC.amida;

Ac.F_{D}FYW_{D}KTFGGG(\varepsilon-K)KC.amida;

(DTPA).D-Nal.CYW_{D}KVCT.amida;

(2-cetogulonil)D-NalFYW_{D}KVCT.amida;

(DTPA).F_{D}FYW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida;

(DTPA).F_{D}GYW_{D}KTCT(CH_{2}OH);

(DTPA).Nal.SYW_{D}KVT.K(BAT).amida;

(DTPA).Nal.SYW_{D}KVCT.amida;

DDD.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

Ac.DDD.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

Hca.G.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

(Trc._{imida})_{2}K.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon- K)GCRR._{amida};

Trc(Trc._{imida})K.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCRR._{amida};

(Trc.imida)Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCR.amida;

K_{D}KKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKDKD.amida;

K_{D}KKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCDD.amida;

(Trc)_{2}K.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

Hca.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

(2-cetogulonil)F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

KKKK. Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCDDDD.amida;

Ac.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

Ac.KKKKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

(2-cetogulonil)F_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida;

DDDD.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKKKK.amida;

(DTPA)Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKK.amida;

(DTPA)Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFTC_{Acm}GC_{Acm}.amida;

Ac.KKKKK.Nal_{D}.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GC.amida; y

KDKD.NalD.Cpa.YW_{D}KTFT(\varepsilon-K)GCKDKD.amida.

12. El reactivo según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11, radiomarcado con un radioisótopo seleccionado entre el grupo que consiste en tecnecio-99m, indio-111, galio-67, galio-68, yodo-123, escandio-47, cobre-67, galio-72, itrio-90, yodo-125, yodo, 131, samario-153, gadolinio-159, disprosio-165, holmio-166, iterbio-175, lutecio-177, renio-186, renio-188, bismuto-212 y ástato-211.

13. Un reactivo peptídico ligante de receptores de somatostatina según se define en la reivindicación 1, radiomarcado con yodo-123, yodo-125, yodo-131 o ástato-211.

14. Una composición que comprende el reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11 y un ion estannoso.

15. Un procedimiento para la marcación de un reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11, que comprende hacer reaccionar el reactivo con tecnecio-99m en presencia de un agente reductor, en el que opcionalmente el agente reductor se selecciona entre el grupo que consiste en ion ditionito, ion estannoso o ion ferroso.

16. Un procedimiento para la preparación del reactivo según cualquiera de as reivindicaciones 1 a 3 ó 4 a 11, en el que el péptido ligante de receptores de somatostatina se sintetiza químicamente in vitro, en el que opcionalmente el péptido ligante de receptores de somatostatina se sintetiza mediante una síntesis de péptido en fase sólida.

17. El procedimiento según la reivindicación 16, en el que el resto ligante de radiomarcadores se une covalentemente al péptido ligante de receptores de somatostatina durante la síntesis del péptido en fase sólida.

18. Una composición farmacéutica que comprende un reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 en un excipiente farmacéuticamente aceptable.

19. Un estuche para preparar una preparación radiofarmacéutica, comprendiendo dicho estuche un vial herméticamente cerrado que contiene una cantidad predeterminada del reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11 y una cantidad suficiente de un agente reductor para marcar el reactivo con tecnecio-99m, renio-186 o renio-188.

20. Un complejo del reactivo según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11 y un metal no radiactivo, en el que opcionalmente el metal es renio.

21. Utilización del reactivo según las reivindicaciones 1 a 12 para la preparación de un medicamento para aliviar una enfermedad relacionada con somatostatina en un animal, opcionalmente en un ser humano, o para la preparación de un medicamento para formar imágenes médicas de un sitio en el interior de un cuerpo de mamífero.