ES2275729T3 - Compuestos utiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. - Google Patents

Compuestos utiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Download PDF

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Caroline Mary GlaxoSmithKline COOK
Colin David GlaxoSmithKline ELDRED
Paul Martin GlaxoSmithKline GORE
Lee Andrew GlaxoSmithKline HARRISON
Simon Teanby GlaxoSmithKline HODGSON
Duncan Bruce GlaxoSmithKline JUDD
Suzanne Elaine GlaxoSmithKline KEELING
Xiao Qing GlaxoSmithKline LEWELL
Graeme Michael c/o GlaxoSmithKline ROBERTSON
Stephen GlaxoSmithKline SWANSON
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): que es 4-({[({[(2S)-4-(3, 4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)benzamida y sales y solvatos del mismo.

Description

Compuestos útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias.
Esta invención se refiere a un nuevo compuesto químico, a procedimientos para su preparación, a formulaciones farmacéuticas que lo contienen y a su uso en terapia.
La inflamación es una respuesta primaria al daño tisular o invasión microbiana y se caracteriza por la adhesión de leucocitos al endotelio, diapédesis y activación en el tejido. La activación de leucocitos puede dar como resultado la generación de especies de oxígeno tóxicas (tales como el anión superóxido), y la liberación de productos de gránulos (tales como peroxidasas y proteasas). Los leucocitos de la circulación incluyen neutrófilos, eosinófilos, basófilos, monocitos y linfocitos. Las diferentes formas de inflamación implican diferentes tipos de leucocitos que se infiltran, siendo regulado el perfil particular por el perfil de la molécula de adhesión, citocinas y expresión del factor quimiotáctico en el tejido.
La función principal de los leucocitos es defender al huésped de los organismos invasores, tales como bacterias y parásitos. Una vez que un tejido es dañado o infectado, se producen una serie de acontecimientos que producen el reclutamiento local de leucocitos de la circulación al tejido afectado. El reclutamiento de leucocitos está controlado para permitir la destrucción ordenada y fagocitosis de las células extrañas o muertas, seguido de la reparación del tejido y resolución del infiltrado inflamatorio. Sin embargo, en los estados inflamatorios crónicos, a menudo el reclutamiento no es adecuado, la resolución no es controlada de forma adecuada y la reacción inflamatoria produce la destrucción de tejido. Hay cada vez más pruebas de que la inflamación bronquial que es característica del asma, representa una forma especializada de la inmunidad mediada por células, en la que los productos de las citocinas, tales como la IL-4 e IL-5 liberadas por los linfocitos Th2 T, orquestan la acumulación y activación de granulocitos, en particular eosinófilos, y en menor medida basófilos. Mediante la liberación de proteínas básicas citotóxicas, mediadores proinflamatorios y radicales del oxígeno, los eosinófilos generan daños en la mucosa e inician mecanismos que subyacen en la hiperreactividad bronquial. Por lo tanto, es probable que el bloqueo del reclutamiento y activación de las células Th2 y eosinófilos, tenga propiedades antiinflamatorias en el asma. Además, los eosinófilos se han implicado en otros tipos de enfermedades tales como la rinitis, eccema, síndrome del intestino irritable e infecciones parasitarias.
Las quimiocinas son una gran familia de proteínas pequeñas que están implicadas en el tráfico y reclutamiento de leucocitos (para una revisión véase Luster, New Eng. J. Med., 338, 436-445 (1998)). Son liberadas por una amplia variedad de células y actúan para atraer y activar diferentes tipos de células, incluyendo eosinófilos, basófilos, neutrófilos, macrófagos, linfocitos T y B. Hay dos familias principales de quimiocinas, las quimiocinas CXC-(\alpha) y CC-(\beta), clasificadas según la separación de dos restos de cisteína conservados cerca del extremo amino de las proteínas quimiocinas. Las quimiocinas se unen a receptores de la superficie celular específicos que pertenecen a la familia de proteínas acopladas a la proteína G caracterizadas por siete dominios transmembrana (para una revisión véase Luster, 1998). La activación de los receptores de quimiocinas da como resultado, entre otras respuestas, un aumento del calcio intracelular, cambios en la forma de la célula, aumento de la expresión de moléculas de adhesión celular, desgranulación y estimulación de la migración celular (quimiotaxis).
Hasta la fecha se han identificado 9 miembros de los receptores de quimiocinas CC (CCR-1 a 9). Para la invención actual tiene una importancia particular el receptor de quimiocinas CC 3 (CCR-3), que se expresa predominantemente en eosinófilos, y también en basófilos, células cebadas, y células Th2 (Luster, 1998). Las quimiocinas que actúan en el CCR-3, tales como RANTES, MCP-3 y MCP-4, se sabe que reclutan y activan eosinófilos. Tienen un interés particular la eotaxina y eotaxina-2, que se unen específicamente a CCR-3. La localización y función de los CCR-3 de quimiocinas indican que tienen una función principal en el desarrollo de enfermedades alérgicas tales como el asma. Por lo tanto el CCR-3 se expresa específicamente en todas los tipos de células principales implicadas en las respuestas alérgicas inflamatorias. Las quimiocinas que actúan en el CCR-3 son generadas como respuesta a estímulos inflamatorios y actúan para reclutar estos tipos de células en sitios de inflamación, donde producen su activación (por ejemplo, Griffiths y col., J. Exp. Med., 179, 881-887 (1994), Lloyd y col., J. Exp. Med., 191, 265-273 (2000)). Además, los anticuerpos monoclonales anti-CCR-3 inhiben completamente la interacción de la eotaxina con eosinófilos (Heath, H. y col., (1997) J. Clin. Invest. 99 (2), 178-184), mientras que un anticuerpo para la quimiocina específica de CCR-3, la eotaxina, reduce tanto la hiperreactividad bronquial como la eosinofilia pulmonar en un modelo de asma en animales (Gonzalo y col., J. Exp. Med., 188, 157-167 (1998)). Por lo tanto, diferentes pruebas indican que es muy probable que los antagonistas en el receptor CCR-3 tengan uso terapéutico para tratar una variedad de afecciones inflamatorias.
Se han publicado una serie de solicitudes de patente relacionadas con los antagonistas de CCR-3 antes de la fecha de presentación de esta solicitud. Por ejemplo, los documentos EP 0903349, FR 2785902, WO 00/29377, WO 00/31032 y WO 00/31033 (todos en nombre de F. Hoffmann-La-Roche AG) describen compuestos basados en pirrolidina, piperidina y piperazina, que son todos distintos de los compuestos de la presente invención.
Los documentos WO 99/55324, WO 00/04003, WO 00/27800, WO 00/27835, WO 00/27843, WO 00/41685 y WO 00/53172 (todos en nombre de SmithKline Beecham Corporation) describen una variedad de compuestos como antagonistas de CCR-3 que no están relacionados con los compuestos de la presente invención.
El documento WO 00/34278 (Toray Industries Inc.) describe compuestos derivados de triazolo condensados como inhibidores de quimiocinas. Los documentos WO 00/35449, WO 00/35451, WO 00/35452, WO 00/35453, WO 00/35454, WO 00/35876 y WO 00/35877 (Du Pont Pharmaceuticals Company) describen compuestos de piperidina heterocíclicos y de N-ureidoalquilo como antagonistas de CCR-3.
Los documentos WO 00/51607 y WO 00/51608 (Merck & Co. Inc.) describen una serie de pirrolidinas moduladoras de la actividad del receptor de quimiocinas.
El documento WO 00/53600 (Banyu Pharmaceutical Co. Ltd.) describe derivados de piperidina como inhibidores en el receptor CCR-3.
El documento WO 01/14333 (AstraZeneca UK Ltd.) describe compuestos de piperidina sustituidos como moduladores de la actividad del receptor de quimiocinas.
El documento EP 0760362 (Nisshin Flour Milling Co. Ltd.) describe derivados de morfolinoalquilurea que se describe que son útiles en el tratamiento de enfermedades del tracto digestivo.
El documento JP 04208267A (Mitsui Seiyaku Kogyo KK) también describe derivados de morfolinoalquilurea que se describe que son útiles como antieméticos, para activar la peristalsis y mejorar la función gastrointestinal.
El documento EP 243959A (Dainippon Pharm KK) describe derivados de N-morfolinilalquilbenzamida O-sustituidos útiles como agentes potenciadores de la motilidad gastrointestinal.
El documento JO 1117-882A (Dainippon Pharm KK) describe derivados de morfolinilalquilenilcarboxamida heterocíclicos útiles como antieméticos.
El documento WO 00/71518 (Sepracor Inc) describe derivados de morfolinoalquilamida útiles en el tratamiento del dolor, adicción a drogas y tinitus.
Los documentos WO 97/48695 y WO 97/48397 (Klinge Pharma Gmbh) describe compuestos ácido-amida de piridil-alcano, -alqueno y/o -alquino útiles como agentes citostáticos, inmunomoduladores o inmunosupresores.
Kato y col., (1992) Chem. Pharm. Bull. 40(3), 652-660, Kato y col., (1991) J. Med. Chem. 34(2), 616-624 y Kato y col., (1990) J. Med. Chem. 33(5), 1406-1413 describen una serie de morfolinbenzamidas que se describe que son agentes gastrocinéticos selectivos y potentes.
Ahora los autores de la invención han descubierto un nuevo compuesto antagonista de CCR-3 que bloquea la migración/quimiotaxis de eosinófilos, afectando en consecuencia a las propiedades antiinflamatorias. Por lo tanto, este compuesto tiene un potencial beneficio terapéutico, especialmente al proporcionar protección frente al daño tisular inducido por eosinófilos, basófilos y células Th2 en enfermedades en las que están implicados dichos tipos de células, en particular enfermedades alérgicas, incluyendo pero sin limitar, asma bronquial, rinitis alérgica y dermatitis atópica.
Además de una función principal en los trastornos inflamatorios, las quimiocinas y sus receptores también tienen una función en la enfermedad infecciosa. Los citomegalovirus de mamífero, virus del herpes y virus de la viruela expresan homólogos del receptor de quimiocinas, que pueden ser activados por quimiocinas CC humanas tales como RANTES y MCP-3 (para una revisión, véase Wells and Schwartz, Curr. Opin. Biotech., 8, 741-748, 1997). Además, los receptores de quimiocinas humanos, tales como CXCR-4, CCR-5 y CCR-3, pueden actuar como co-receptores para la infección de células de mamíferos por microbios tales como los virus de inmunodeficiencia humana (VIH). El CCR-3 sirve como co-receptor para algunas cepas clínicas del VIH-1 y facilita la entrada vírica (por ejemplo Choe, H. y col, Cell, 1996, 85, 1135-1148). Un ligando clave para el CCR-3, la eotaxina, bloquea el proceso de entrada del VIH. Por lo tanto, los antagonistas de los receptores de quimiocinas, incluidos los antagonistas de CCR-3, pueden ser útiles para bloquear la infección por el VIH de células que expresan el CCR-3 o para prevenir la manipulación de las respuestas celulares inmunitarias por virus tales como los citomegalovirus.
Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I):
1
en la que:
R^{1} representa 4-amidobencilo;
R^{2} representa hidrógeno;
R^{3} representa hidrógeno;
X representa metileno;
R^{4} y R^{5} de forma independiente representan hidrógeno;
Z representa CH_{2};
R^{6} representa 3,4-diclorofenilo;
a y b representan ambos 1;
y sales y solvatos del mismo.
Las referencias a "arilo" incluyen referencias a anillos aromáticos carbocíclicos monocíclicos (por ejemplo, fenilo) y anillos aromáticos carbocíclicos bicíclicos (por ejemplo, naftilo) y las referencias a "heteroarilo" incluyen referencias a anillos aromáticos heterocíclicos mono- y bicíclicos que contienen 1-3 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Las referencias a "heteroarilo" también se pueden extender para que incluyan referencias a anillos aromáticos heterocíclicos mono- y bicíclicos que contienen 4 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos de anillos aromáticos heterocíclicos monocíclicos incluyen, por ejemplo, piridinilo, pirimidinilo, tiofenilo, furanilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo. Los ejemplos adicionales de anillos aromáticos heterocíclicos monocíclicos incluyen pirazinilo, tetrazolilo o imidazolilo. Los ejemplos de anillos aromáticos heterocíclicos bicíclicos incluyen, por ejemplo, quinolinilo o indolilo. Los ejemplos adicionales de anillos aromáticos heterocíclicos bicíclicos incluyen bencimidazolilo. Todavía más ejemplos de anillos aromáticos heterocíclicos bicíclicos incluyen dihidrobenzofuranilo y pirrolopiridinilo. Los anillos aromáticos carbocíclicos y heterocíclicos pueden estar opcionalmente sustituidos, por ejemplo, con uno o más grupos alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, halógeno, alcoxi C_{1-6}, ciano, hidroxi, nitro, amino, W, -N(CH_{3})_{2}, -NHCO-alquilo(C_{1-6}), -OCF_{3}, -CF_{3}, -COO-alquilo(C_{1-6}), -OCHF_{2}, -SCF_{3}, -CONR^{19}R^{20}, -SO_{2}NR^{19}R^{20} (en los que R^{19} y R^{20} de forma independiente representan hidrógeno, alquilo C_{1-6} o cicloalquilo C_{3-8}), -NHSO_{2}CH_{3}, -SO_{2}CH_{3} o -SCH_{3}. Un sustituyente adicional de anillos aromáticos carbocíclicos y heterocíclicos puede ser -COOH. Otros sustituyentes adicionales de anillos aromáticos carbocíclicos y heterocíclicos pueden ser -CH_{2}N(CH_{3})_{2} o uno o más grupos -SH, en los que se puede observar que dicho grupo puede tautomerizarse para formar un grupo =S.
Las referencias a alquilo incluyen referencias a isómeros alifáticos tanto de cadena lineal como de cadena ramificada de los alquilos correspondientes. Se observará que las referencias a alquileno y alcoxi se interpretarán de forma similar.
Las referencias a cicloalquilo C_{3-8} incluyen referencias a todos los isómeros alicíclicos (incluidos ramificados) de los correspondientes alquilo.
Las sales adecuadas de los compuestos de fórmula (I) incluyen sales fisiológicamente aceptables y sales que pueden no ser fisiológicamente aceptables pero pueden ser útiles para preparar compuestos de fórmula (I) y sales de los mismos fisiológicamente aceptables. Si es adecuado, las sales de adición de ácidos pueden derivar de ácidos inorgánicos u orgánicos, por ejemplo, clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, fosfatos, acetatos, benzoatos, citratos, succinatos, lactatos, tartratos, fumaratos, maleatos, 1-hidroxi-2-naftoatos, palmoatos, metansulfonatos, formiatos o trifluoroacetatos. Los ejemplos de solvatos incluyen los hidratos.
El compuesto de fórmula (I) y las sales y solvatos del mismo, se pueden preparar por la metodología descrita a continuación en el presente documento, que constituye un aspecto adicional de esta invención.
Un procedimiento de acuerdo con la invención para preparar un compuesto de fórmula (I) comprende:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
2
en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, X, a y b son como se han definido antes, o un derivado protegido del mismo, con un compuesto de fórmula
L^{1}-Z-R^{6},
en la que Z y R^{6} son como se han definido antes y L^{1} representa un grupo saliente adecuado; o
(b) formar un compuesto de fórmula (I) en la que R^{2} representa hidrógeno, que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (III)
3
en la que R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, Z, X, a y b son como se han definido antes, o un derivado protegido del mismo, con un compuesto de fórmula
R^{1}-N=C=O,
en la que R^{1} es como se ha definido antes; o
(c) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV)
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en la que R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, Z, X, a y b son como se han definido antes, o un derivado protegido del mismo, y L^{2} representa un grupo saliente adecuado, o un derivado protegido del mismo, con un compuesto de fórmula (V)
5
en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido antes, o un derivado protegido del mismo; o
(d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (VI)
6
en la que R^{1} y R^{2} son como se han definido antes, y L^{3} representa un grupo saliente adecuado, o un derivado protegido del mismo, con un compuesto de fórmula (III). o un derivado protegido del mismo; o
(e) desproteger un compuesto de fórmula (I) que está protegido, o
(f) formar un compuesto de fórmula (I) en la que Z representa CR^{10}R^{7}(CH_{2})_{n}, en el que R^{10} representa hidrógeno, que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II) o un derivado protegido del mismo con un compuesto de fórmula R^{7}CO(CH_{2})_{n}R^{6}, seguido de reducción de la imina resultante.
El procedimiento (a) se puede llevar a cabo en presencia de un disolvente inerte, por ejemplo, N,N-dimetilformamida opcionalmente en presencia de una base tal como N,N-diisopropiletilamina a una temperatura adecuada, por ejemplo, temperatura ambiente. Los ejemplos de grupos salientes adecuados (L^{1}) incluyen halógeno, por ejemplo cloro.
El procedimiento (b) se puede llevar a cabo en presencia de un disolvente inerte, p. ej diclorometano, a una temperatura adecuada por ejemplo a temperatura ambiente.
Los procedimientos (c) y (d) se pueden llevar a cabo típicamente en presencia de una base adecuada, por ejemplo piridina, a una temperatura adecuada, por ejemplo 110ºC, en los que los grupos salientes L^{2} y L^{3} pueden representar 4-nitrofenoxi. Como alternativa, cuando L^{2} y L^{3} representan 4-nitrofenoxi, las condiciones adecuadas pueden implicar el uso de N,N-diisopropiletilamina como una base adecuada, y diclorometano o N,N-dimetilformamida como un disolvente adecuado. Como alternativa, cuando L^{2} y L^{3} son 4-tiofenoxi unidos a la resina de Merrifield, los procedimientos (c) y (d) se pueden llevar a cabo con un aditivo adecuado, por ejemplo N-metilpirrolidinona en un horno de microondas, por ejemplo, a una potencia de 600 W durante 5 min. Otros grupos salientes adecuados incluyen imidazolilo. Cuando L^{2} o L^{3} representan imidazolilo, las condiciones adecuadas comprenden el uso de 1,1’-carbonildiimidazol en disolventes adecuados tales como diclorometano y N,N-dimetilformamida a una temperatura adecuada, por ejemplo, entre 0ºC y 22ºC.
En el procedimiento (e), los ejemplos de grupos protectores y los medios para su eliminación se pueden encontrar en T. W. Greene and P.G.M. Wuts "Protective Groups in Organic Synthesis" (J. Wiley and Sons, 3^{rd} Ed. 1999). Los grupos protectores de amina adecuados incluyen sulfonilo (por ejemplo tosilo), acilo (por ejemplo benciloxicarbonilo o t-butoxicarbonilo) y arilalquilo (p. ej bencilo), que se pueden eliminar por hidrólisis o hidrogenolisis según sea adecuado. Otros grupos protectores de amina adecuados incluyen trifluoroacetilo (-COCF_{3}) que se puede eliminar por hidrólisis catalizada por base o un grupo bencilo unido a resina en fase sólida, tal como un grupo 2,6-dimetoxibencilo unido a la resina de Merrifield (conector Ellman) o un grupo 2,6-dimetoxi-4-[2-(poliestirilmetoxi)etoxi]bencilo, que se puede eliminar por hidrólisis catalizada por ácido, por ejemplo con ácido trifluoroacético.
El procedimiento (f) se puede llevar a cabo en presencia de un ácido adecuado, por ejemplo ácido acético, y un agente reductor adecuado, por ejemplo triacetoxiborohidruro sódico en un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano a una temperatura adecuada, por ejemplo a temperatura ambiente.
Los compuestos de fórmula (II) en forma del isómero R, en la que R^{2} y R^{3} representan ambos hidrógeno, X representa metileno y a y b representan 1, y R^{4} y R^{5} representan ambos hidrógeno, se pueden preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
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en la que R^{1} es como se ha definido antes y P^{1} es un grupo protector adecuado, por ejemplo bencilo.
Los compuestos de fórmula (VIII) se pueden preparar como se describe en el documento EP 0995746.
La etapa (i) típicamente comprende el uso de un disolvente inerte, por ejemplo diclorometano, a una temperatura adecuada, por ejemplo a temperatura ambiente. La etapa (ii) típicamente comprende una reacción de desprotección sencilla, por ejemplo puede comprender el uso de paladio sobre carbono activado al 10% en presencia de formiato amónico y un disolvente adecuado, por ejemplo etanol.
Los compuestos de fórmula (II)^{a} en forma del isómero S, en la que R^{1} es como se ha definido antes, se pueden preparar por un procedimiento análogo.
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Los compuestos de fórmula (IV) se pueden preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
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en la que R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, X, a, b y Z son como se han definido antes, y L^{2} representa un grupo saliente adecuado como se ha definido antes, por ejemplo 4-nitrofenoxi o 4-tiofenoxi unido a la resina de Merrifield, y L^{4} representa un grupo saliente más lábil que L^{2} por ejemplo cloro o 4-nitrofenoxi. Cuando L^{2} representa 4-nitrofenoxi y L^{4} representa cloro, la etapa (i) se puede llevar a cabo en un disolvente adecuado, tal como diclorometano, en presencia de una base tal como trietilamina a una temperatura adecuada tal como temperatura ambiente, tal como temperatura ambiente. Cuando L^{2} representa 4-tiofenoxi unido a la resina de Merrifield y L^{4} representa 4-nitrofenoxi, la etapa (i) se puede llevar a cabo en un disolvente adecuado tal como N,N-dimetilformamida a una temperatura adecuada, tal como temperatura ambiente. Como alternativa L^{2} y L^{4} pueden representar imidazol, y la etapa (i) se puede llevar a cabo con 1,1'-carbonildiimidazol, en un disolvente adecuado, por ejemplo una mezcla de diclorometano y N,N'-dimetilformamida a una temperatura adecuada, p. ej, entre 0°C y 22°C.
Los compuestos de fórmula (III) se pueden usar en forma protegida, en los que, por ejemplo el grupo amina está protegido cuando R^{3} representa hidrógeno. Los grupos protectores adecuados están entre los descritos antes.
Los compuestos de fórmula (III) se pueden preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
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en el que R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, X, a, b y Z son como se han definido antes y L^{1} representa un grupo saliente adecuado por ejemplo cloro, y P^{2} representa un grupo protector adecuado por ejemplo uno mencionado antes, tal como -COCF_{3}. La etapa (i) comprende el uso de un disolvente adecuado por ejemplo N,N-dimetilformamida en presencia de reactivos adecuados, por ejemplo yoduro sódico y carbonato potásico a una temperatura adecuada por ejemplo temperatura ambiente. La etapa (ii) comprende desprotección en condiciones convencionales adecuadas para los grupos protectores. Cuando P^{2} representa -COCF_{3}, la desprotección se puede lograr mediante el uso de agua y metanol en presencia de carbonato potásico a temperatura ambiente. Los compuestos de fórmula (III) en la que Z representa CR^{10}R^{7}(CH_{2})_{n} (en el que R^{10} representa hidrógeno), también se pueden preparar por aminación reductora de los compuestos de fórmula (XI) de una forma análoga a la descrita en el procedimiento (h) anterior.
Los compuestos de fórmula (III) en la que R^{3} representa hidrógeno, X representa metileno, a y b representan 1 y R^{4} y R^{5} están ambos unidos al anillo de morfolina en la posición 5, se pueden preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
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en el que R^{6} y Z son como se han definido antes, y L^{1} representa un grupo saliente adecuado, por ejemplo cloro. La etapa (i) comprende calentar en ausencia de un disolvente a entre 50 y 60ºC. La etapa (ii) comprende calentar con 2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona a 80°C en atmósfera de nitrógeno, seguido de agitación con ácido sulfúrico concentrado a 150ºC.
Los compuestos de fórmula (III) en la que R^{3} representa H, se pueden preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
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en el que R^{4}, R^{5}, R^{6}, X, a, b y Z son como se han definido antes y L^{1} representa un grupo saliente adecuado por ejemplo cloro. La etapa (i) comprende calentar un compuesto de fórmula (XIV; resina de Merrifield) con carbonato sódico en un disolvente adecuado, por ejemplo dimetilsulfóxido a una temperatura adecuada por ejemplo 150°C. La etapa (ii) comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XV) con un compuesto de fórmula (XVI) en presencia de un disolvente adecuado por ejemplo tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada por ejemplo temperatura ambiente. La etapa (iii) comprende el uso de un disolvente adecuado por ejemplo N,N-dimetilformamida y una base adecuada, por ejemplo N,N-diisopropiletilamina a una temperatura adecuada por ejemplo 70°C, seguido de desprotección en condiciones convencionales adecuadas para el grupo protector de la resina de Merrifield, por ejemplo hidrólisis catalizada por ácido.
Los compuestos de fórmula (VII) se pueden preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
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en el que R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, Y^{1}, Z, X, a y b son como se han definido antes, L^{2} representa un grupo saliente adecuado, por ejemplo 4-nitrofenoxi y P^{3} representa un grupo protector adecuado, por ejemplo, alquilo C_{1-6}, preferiblemente t-butilo.
La etapa (i) comprende típicamente el uso de una base adecuada, por ejemplo N,N-diisopropiletilamina y un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano, a una temperatura adecuada, por ejemplo temperatura ambiente.
La etapa (ii) comprende típicamente el uso de un reactivo ácido adecuado, por ejemplo cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano a una temperatura adecuada, por ejemplo temperatura ambiente.
Los compuestos de fórmulas (V), (VI), (VIII), (X), (XI), (XII), (XIV), (XVI) y (XVIII) son conocidos o se pueden preparar de acuerdo con procedimientos conocidos.
Los compuestos de fórmula L^{1}-Z-R^{6}, R^{1}N=C=O, R^{7}CO(CH_{2})_{n}R^{6}, alquil(C_{1-6})-NHR^{18}, y J^{2}-H también son conocidos o se pueden preparar de acuerdo con procedimientos conocidos.
Los compuestos de fórmula (II) se pueden preparar de acuerdo con procedimientos análogos a los descritos antes para los compuestos de fórmula (I), usando la química de grupos protectores convencional. Por ejemplo, usando la protección adecuada para el NH de la morfolina, tal como protección con t-butoxicarbonilo.
La actividad biológica de los compuestos de la invención se puede ensayar in vitro e in vivo de acuerdo con los siguientes ensayos:
(a) Ensayo de unión a CCR-3
Se usó un SPA (ensayo de centelleo de proximidad) de unión competitiva a CCR-3 para evaluar la afinidad de los nuevos compuestos al CCR-3. Se mezclaron membranas preparadas a partir de células K562 que expresan establemente CCR-3 (2,5 \mug/pocillo) con perlas de SPA con aglutinina de germen de trigo 0,25 mg/pocillo (Amersham) y se incubaron en tampón de unión (HEPES 50 mM, CaCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 5 mM, BSA al 0,5%) a 4ºC durante 1,5 h. Después de la incubación, se añadieron [^{125}I]-eotaxina 20 pM (Amersham) y concentraciones crecientes del compuesto (1 pM a 30 \muM) y se incubaron en una placa de 96 pocillos durante 2 h a 22ºC, y después se hizo el recuento en un contador de placa Microbeta. El volumen de ensayo total era 100 \mul. Los datos de unión competitiva se analizaron ajustando los datos con una ecuación logística de 4 parámetros. Los datos se presentan como los valores medios de pCI_{50} (logaritmo negativo de la concentración de compuesto que inhibe la unión de la [^{125}I]eotaxina en un 50%) de al menos dos experimentos.
(b) Ensayo de quimiotaxis de eosinófilos
Se evaluó el efecto de inhibición de los compuestos en la quimiotaxis de eosinófilos. Se purificaron eosinófilos de sangre periférica humana por reducción de células CD16 convencional usando una columna de separación celular Miltenyi y un imán magnético Super Macs como se ha descrito previamente (Motegi y Kita, 1998; J. Immunology. 161:4340-4346). Las células se volvieron a suspender en RPMI 1640/solución de FCS al 10% y se incubaron con calceína-AM (Molecular Probes) a 37°C durante 30 min. Después de la incubación, los eosinófilos se centrifugaron a 400 g durante 5 min y se volvieron a suspender en RPMI/FCS con 2,2 millones/ml. Después las células se incubaron en presencia de concentraciones crecientes de compuesto (1 pM a 30 \muM) a 37ºC durante 30 min. Para las respuestas de control, se incubaron células solo con RPMI/FCS. Se añadió la eotaxina agonista (para la curva de respuesta a la concentración o para las curvas de inhibición funcional y concentración CE_{80}) en la cámara inferior de una placa de quimiotaxis de 96 pocillos (filtro de 5 \mum: Receptor Technologies). Se añadieron eosinófilos (50 \mul de células a 2 millones/ml) en la cámara superior de la placa de filtro y se incubaron a 37ºC durante 45 min. Se separaron las células que quedaban en la parte superior del filtro de quimiotaxis y se cuantificó el número de eosinófilos que había migrado, mediante lectura de la placa en un lector de placa fluorescente. Se analizaron las curvas de inhibición para el efecto de los compuestos en la quimiotaxis de eosinófilos mediante ajuste de los datos con una ecuación logística de 4 parámetros. Los valores funcionales de pK_{i} (fpK_{i}) se generaron usando la siguiente ecuación (Lazareno y Birdsall, 1995. Br. J. Pharmacol 109: 1110-1119).
fpKi = \frac{CI_{50}}{1 + \left[\frac{[Agonista]}{CE_{50}}\right]}
(c) Modelo de ovalbúmina en cobayas Inhibición de la infiltración de eosinófilos e hiperreactividad en las cobayas
En un procedimiento basado en el descrito por Danahay y col., 1997, se administró mepiramina (300 mg.kg^{-1}, ip) a cobayas sensibilizadas con ovalbúmina para proteger frente al broncoespasmo anafiláctico. Los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO al 10% y PEG200 al 90%, y se dieron por vía oral 30 minutos antes de la estimulación con ovalbúmina (10 minutos respirando de un aerosol generado a partir de solución de ovalbúmina al 0,5%). Se midió la hiperreactividad de las vías aéreas al U46619 mimético al tromboxano, 24 horas después de la estimulación con ovalbúmina en animales sin controlar usando un pletismógrafo de cuerpo entero (Buxco Ltd., EE.UU.). Después se sacrificaron las cobayas y se lavaron los pulmones. Después se obtuvieron los recuentos de leucocitos totales y diferenciales del fluido del lavado bronquioalveolar y se determinó el porcentaje de reducción de la acumulación de eosinófilos (Sanjar y col., 1992). Los datos se presentaron como el efecto inhibidor de la dosis especificada expresada como un porcentaje de la respuesta del control con vehículo.
Los ejemplos de estados patológicos en los que los compuestos de la invención tienen efectos antiinflamatorios potencialmente beneficiosos incluyen enfermedades del tracto respiratorio tales como la bronquitis (incluida la bronquitis crónica), asma (incluidas las reacciones asmáticas inducidas por alergenos), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y rinitis. Otra enfermedad del tracto respiratorio en la que los compuestos de la invención tienen efectos potencialmente beneficiosos es la sinusitis. Otros estados patológicos importantes incluyen enfermedades del tracto gastrointestinal tales como enfermedades inflamatorias intestinales incluidas enfermedades inflamatorias del intestino (por ejemplo, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa) y enfermedades inflamatorias intestinales secundarias de la exposición a la radiación o a la exposición a alergenos. Además, los compuestos de la invención se pueden usar para tratar la nefritis, enfermedades de la piel tales como la psoriasis, eczema, dermatitis alérgica y reacciones de hipersensibilidad y enfermedades del sistema nervioso central que tienen un componente inflamatorio, por ejemplo la enfermedad de Alzheimer, meningitis, esclerosis múltiple y demencia por SIDA. Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de la poliposis nasal, conjuntivitis o pruritos. Además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en el tratamiento de enfermedades víricas tales como el VIH.
Ejemplos adicionales de estados patológicos en los que los compuestos de la invención tienen efectos potencialmente beneficiosos incluyen trastornos cardiovasculares tales como aterosclerosis, enfermedad vascular periférica y síndrome hipereosinofílico idiopático. Otras enfermedades en las que los compuestos de la presente invención pueden ser beneficiosos son otras enfermedades hipereosinofílicas tales como el síndrome de Churg-strauss. Además, se encuentra frecuentemente eosinofilia en enfermedades de parásitos, en especial infecciones helmínticas, y por lo tanto los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para tratar la inflamación que surge de estados patológicos hipereosinofílicos tales como el quiste hidatídico (Echinococcus sp.), infecciones por tenia (Taenia sp.), infecciones por trematodos en la sangre (esquistosomiasis), y nematodos (gusanos redondos) tales como: anquilostoma (Ancylostoma sp.), Ascaris, estrongiloides, triquinela, y en particular filariosis linfática incluidos Onchocerca, Brugia, Wucheria (elefantiasis).
Los compuestos de la invención pueden ser útiles como agentes inmunosupresores y así se han usado en el tratamiento de enfermedades autoinmunes tales como el rechazo de aloinjerto de tejido después de trasplante, artritis reumatoide y diabetes.
Los compuestos de la invención también pueden ser útiles para inhibir la metástasis.
Las enfermedades de interés principal incluyen el asma, EPOC y enfermedades inflamatorias del tracto respiratorio superior que implican rinitis estacional y perenne. Las enfermedades preferidas de interés principal incluyen el asma y enfermedades inflamatorias del tracto respiratorio superior que implican rinitis estacional y perenne. Otras enfermedades también de interés principal incluyen enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal tales como enfermedad inflamatoria del intestino.
Los expertos en la materia observarán que la referencia en el presente documento al tratamiento, se extiende a la profilaxis así como al tratamiento de las afecciones establecidas.
Como se ha mencionado antes, los compuestos de fórmula (I) son útiles como productos farmacéuticos, en particular como agentes antiinflamatorios.
Así, como un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del mismo fisiológicamente aceptable para usar como producto farmacéutico, en particular en el tratamiento de pacientes con afecciones inflamatorias, por ejemplo asma o rinitis.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del mismo fisiológicamente aceptable, para fabricar un medicamento para el tratamiento de pacientes con afecciones inflamatorias, por ejemplo asma o rinitis.
En un aspecto adicional o alternativo, se proporciona un procedimiento de tratamiento de un sujeto humano o animal con una afección inflamatoria, por ejemplo asma o rinitis, procedimiento que comprende administrar a dicho sujeto humano o animal, una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del mismo fisiológicamente aceptable.
Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden formular para administrar de cualquier forma conveniente, y por lo tanto la invención también incluye en su alcance composiciones farmacéuticas para usar en la terapia antiinflamatoria, que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del mismo fisiológicamente aceptable junto con, si se desea, uno o más diluyentes o vehículos fisiológicamente aceptables.
También se proporciona un procedimiento para preparar dicha formulación farmacéutica, que comprende mezclar los ingredientes. Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden formular, por ejemplo, para administración oral, inhalada, intranasal, bucal, parenteral o rectal, preferiblemente para administración oral.
Los comprimidos y cápsulas para la administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, por ejemplo jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón, celulosa o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, azúcar, almidón de maíz, fosfato cálcico o sorbitol; lubricantes, por ejemplo, estearato magnésico, ácido esteárico, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes, por ejemplo, almidón de patata, croscarmelosa sódica o almidón-glicolato sódico; o agentes humectantes tales como laurilsulfato sódico. Los comprimidos se pueden revestir de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas orales pueden estar en forma, por ejemplo, de suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos o oleosos, o se pueden presentar en forma de un producto seco para reconstituir con agua u otro vehículo adecuado antes de usar. Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo, jarabe de sorbitol, metilcelulosa, glucosa/jarabe de azúcar, gelatina, hidroximetilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio o grasas hidrogenadas comestibles; agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos, propilenglicol o alcohol etílico; o conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico. Las preparaciones también pueden contener sales tamponantes, aromas, colorantes y/o agentes edulcorantes (por ejemplo manitol), según convenga.
Para administración bucal la composición puede estar en forma de comprimidos o pastillas formuladas de forma convencional. Los compuestos también se pueden formular como supositorios que contienen, por ejemplo, bases para supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Los compuestos de acuerdo con la invención también se pueden formular para administración parenteral por inyección de embolada o infusión continua, y se pueden presentar en forma de dosis unitaria, por ejemplo como ampollas, viales, infusiones de pequeño volumen o jeringuillas precargadas, o en envases de multidosis con un conservante añadido. Las composiciones pueden tener formas tales como soluciones, suspensiones o emulsiones en vehículos acuosos o no acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como antioxidantes, tampones, agentes antimicrobianos y/o agentes de ajuste de la tonicidad. Como alternativa, el principio activo puede estar en forma de polvo para reconstituir con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril sin pirógenos, antes de usar. La presentación de sólido seco se puede preparar cargando un polvo estéril de forma aséptica en envases estériles individuales, o cargando una solución estéril de forma aséptica en cada envase y liofilizando.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención también se pueden usar combinadas con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, agentes antiinflamatorios (tales como corticosteroides (por ejemplo propionato de fluticasona, dipropionato de beclometasona, fluroato de mometasona, acetónido de triamcinolona o budesonida) o AINE (por ejemplo, cromoglicato sódico, nedocromil de sodio, inhibidores de la PDE-4, antagonistas de leucotrienos, inhibidores de iNOS, inhibidores de triptasa y elastasa, antagonistas de la integrina beta-2 y agonistas de la adenosina 2a) o agentes beta adrenérgicos (tales como salmeterol, salbutamol, formoterol, fenoterol o terbutalina y sales de los mismos), antihistamínicos (por ejemplo, metapirileno o loratadina) o agentes antiinfecciosos (por ejemplo antibióticos, antivirales).
Se observará que cuando los compuestos de la presente invención se administran combinados con otros agentes terapéuticos administrados normalmente por vía inhalada o intranasal, la composición farmacéutica resultante se puede administrar por vía inhalada o intranasal.
Los compuestos de la invención se pueden administrar de forma conveniente en cantidades, por ejemplo, de 0,001 a 500 mg/kg de peso corporal, preferiblemente 0,01 a 500 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal, 1 a 4 veces al día. La dosis exacta dependerá, por supuesto, de la edad y afección del paciente y de la vía de administración particular elegida.
Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que pueden ser más eficaces, mostrar mayor selectividad, tener menos efectos secundarios, tener una duración de la acción más prolongada, tener mayor biodisponibilidad cuando se administran por vía oral, tener una síntesis más fácil y económica, o tener otras propiedades más deseables que los compuestos similares conocidos.
La invención se puede ilustrar con referencia a los siguientes Ejemplos y Ejemplos de referencia.
Ejemplos y ejemplos de referencia Detalles experimentales generales Columna, condiciones y eluyente de la HPLC preparativa automática convencional
La cromatografía líquida de alta resolución preparativa automática (HPLC autoprep.) se llevó a cabo usando una columna Supelco+ de 5 \mum (100 mm x 22 mm de diámetro interno) eluida con una mezcla de disolventes que consistía en (i) ácido trifluoroacético al 0,1% en agua y (ii) ácido trifluoroacético al 0,1% en acetonitrilo, y el eluyente se expresa como el porcentaje de (ii) en la mezcla de disolventes, con un caudal de 4 ml por minuto.
Columna, condiciones y eluyente de HPLC preparativa automática dirigida por masass
La cromatografía líquida de alta resolución preparativa automática dirigida por masass se llevó a cabo usando una columna LCA-BZ+ 5 \mum (5 cm x 10 mm de diámetro interno), usando una elución con gradiente usando dos sistemas de disolvente, (A) ácido fórmico al 0,1% en agua, y (B) acetonitrilo al 95% y ácido fórmico al 0,5% en agua, con un caudal de 8 mlmin^{-1}. La espectrometría de masas se llevó a cabo usando un espectrómetro de masas VG Platform, con un detector de matriz de diodos HP1100 y un separador de flujo preciso.
Sistema de CL/EM
Se usaron tres sistemas alternativos de cromatografía líquida-espectrometría de masas (CL/EM):
Sistema A
Este sistema usaba una columna ABZ+PLUS de 3 \mum (3,3 cm x 4,6 mm de diámetro interno), eluyendo con los disolventes: A - ácido fórmico al 0,1% en v/v + acetato amónico en agua al 0,077% en p/v; y B - acetonitrilo:agua + ácido fórmico al 0,05% en v/v 95:5, con un caudal de 3 ml por minuto. Se usó el siguiente protocolo de gradiente: 100% de A durante 0,7 min; mezclas de A+B, perfil del gradiente 0 - 100% de B en 3,5 min; mantenimiento al 100% de B durante 1,1 min; vuelta a 100% de A en 0,2 min.
Sistema B
Este sistema usaba una columna ABZ+PLUS de 3 \mum (3,3 cm x 4,6 mm de diámetro interno), eluyendo con los disolventes: A - ácido fórmico al 0,1% en v/v + acetato amónico en agua al 0,077% en p/v; y B - acetonitrilo:agua + ácido fórmico al 0,05% en v/v 95:5, con un caudal de 1 ml por minuto. Se usó el siguiente protocolo de gradiente: 100% de A durante 1,0 min; mezclas de A+B, perfil del gradiente 0 - 100% de B en 9,0 min; mantenimiento al 100% de B durante 3,0 min; vuelta a 100% de A en 2,0 min.
Sistema C
Este sistema usaba una columna ABZ+PLUS de 3 \mum (3,3 cm x 4,6 mm de diámetro interno), eluyendo con los disolventes: A - ácido fórmico al 0,1% en v/v + acetato amónico al 0,077% en p/v en agua; y B - acetonitrilo:agua + ácido fórmico al 0,05% en v/v 95:5, con un caudal de 1 ml por minuto. Se usó el siguiente protocolo de gradiente: 100% de A durante 2,0 min; mezclas de A+B, perfil del gradiente 0 - 100% de B en 20 min; mantenimiento al 100% de B durante 5,0 min, vuelta a 100% de A en 2,0 min; mantenimiento al 100% de A durante 1,0 min. Todos los sistemas de CL/EM usaban un espectrómetro de micromasas, con modo de ionización por electropulverización, con cambio a ion positivo y negativo, intervalo de masa 80-1000 u.m.a.
Espectros de masas por termopulverización
Los espectros de masas por termopulverización se determinaron en un espectrómetro de masas con motor HP 5989A, termopulverización +va, temperatura de la fuente 250ºC, temperaturas de las sondas 120ºC (eje), 190ºC (extremo), intervalo de detección de masas 100-850 u.m.a. Los compuestos se inyectaron en 10 \mul de una mezcla de disolventes que comprendía 65% de metanol y 35% de acetato amónico acuoso 0,05 M, con un caudal de 0,7 ml/min.
Condiciones de la columna de HPLC preparativa automática de fase normal
La cromatografía líquida de alta resolución preparativa automática de fase normal (HPLC autoprep. de fase normal) se llevó a cabo usando una columna de sílice de 5 \mum Nucleosil (100 mm x 20 mm de diámetro interno), eluida con un gradiente de 2 etapas de acetato de etilo:heptano (i) 0% a 25% de acetato de etilo en 7 min, seguido de (ii) 25% a 100% de acetato de etilo en 5,5 min; con un caudal de 30 ml/min.
Procedimiento de HPLC analítica en fase normal
La cromatografía líquida de alta resolución analítica automática de fase normal (HPLC analítica de fase normal) se llevó a cabo usando una columna de sílice de 3 \mum Nucleosil (150 mm x 4,6 mm de diámetro interno), eluida con un gradiente de 2 etapas de acetato de etilo:heptano (i) 0% a 40% de acetato de etilo en 7 min, seguido de (ii) 40% a 100% de acetato de etilo en 2,5 min; con un caudal de 2 ml/min.
Sistema de HPLC analítica quiral convencional
Este sistema usaba una columna Chiralpak AD de 10 \mum, de 250 x 4,6 mm, eluyendo con mezclas de etanol absoluto:heptano, con un caudal de 1 ml por minuto, con detección UV a 215 nm.
Sistema de HPLC preparativa quiral convencional
Este sistema usaba una columna Chiralpak AD (2 cm x 25 cm), eluyendo con mezclas de etanol absoluto:heptano, (15 ml/min en 25 min, con detección UV a 215 nm).
Extracción en fase sólida (intercambio iónico)
"SCX" se refiere a cartuchos de extracción en fase sólida de ácido sulfónico Isolute Flash SCX-2.
Separación de fase orgánica/acuosa con fritas hidrófobas
La "frita hidrófoba" se refiere a un tubo con filtro de polipropileno Whatman equipado con una frita de PTFE, tamaño de poros 5,0 \mum.
Todas las temperaturas se dan en ºC.
Productos intermedios
Producto intermedio 1
2,2,2-Trifluoro-N-(morfolin-2-ilmetil)acetamida
A una solución agitada de la morfolin-2-ilmetilamina (3,1 g) en metanol (70 ml) en atmósfera de nitrógeno se añadió una solución en éter de \alpha,\alpha,\alpha-trifluoroacetato de etilo (5 ml en 20 ml de éter) que se había lavado con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera y secado. La mezcla se agitó durante 30 min a 22ºC antes de separar todos los productos volátiles a vacío. El residuo se disolvió en metanol (10 ml) y los productos volátiles se separaron otra vez a vacío para dar el compuesto del título en forma de una espuma crujiente (4,9 g).
Espectro de masas de termopulverización m/z 213 [MH^{+}].
Producto intermedio 2
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil)-2,2,2-trifluoroacetamida
A una solución agitada del Producto intermedio 1 (3,3 g) en N,N-dimetilformamida (50 ml) en atmósfera de nitrógeno, se añadió carbonato potásico (2,46 g) y yoduro potásico (2,12 g). Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 3,4-diclorobencilo (2 ml) en N,N-dimetilformamida (10 ml) a la mezcla. La mezcla se agitó a 22ºC durante 18 h antes de separar los productos volátiles a vacío. El residuo se repartió entre diclorometano (100 ml) y solución acuosa saturada de carbonato sódico (50 ml). La fase orgánica se lavó posteriormente con solución acuosa saturada de carbonato sódico adicional (2 x 50 ml) y agua (50 ml) antes de secarla sobre sulfato magnésico, filtrar y evaporar el disolvente a vacío para dar un aceite amarillo pálido. El aceite se purificó por cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g de sílice eluyendo con acetato de etilo al 25% en ciclohexano, para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (2,97 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,63 min. Espectro de masas m/z 371 [MH^{+}].
Producto intermedio 3
[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metilamina
A una solución agitada del Producto intermedio 2 (2,97 g) en metanol (15 ml) y agua (5 ml) se añadió carbonato potásico (5,53 g). La mezcla se agitó a 22ºC durante 18 h antes de separar el metanol a vacío. Se añadió agua (25 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (5 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (10 ml), antes de secar sobre sulfato sódico, filtrar y evaporar el disolvente a vacío para dar un aceite amarillo pálido. El aceite se purificó por cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g de sílice eluyendo con diclorometano/etanol/solución de amoniaco 0,880 75:8:1. Las fracciones requeridas se combinaron y el disolvente se evaporó a vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (1,85 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,77 min. Espectro de masas m/z 275 [MH^{+}].
Producto intermedio 3
[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metilamina (síntesis alternativa)
Una mezcla de 2-[(3,4-diclorobencil)amino]etanol (Chem. Abs. No. 40172-06-3, 0,980 g) y 2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona (1,10 g) se calentó a 80ºC en atmósfera de nitrógeno durante 3 h. La masa sólida resultante se trató con ácido sulfúrico concentrado (1,5 ml) y después se agitó a 150ºC durante 24 h. La mezcla se trató con agua (100 ml) y después se lavó con acetato de etilo (2 x 100 ml). La fase acuosa oscura se hizo básica a pH aproximadamente 12, usando hidróxido sódico acuoso 5 M, después se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite marrón (1,02 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,6 min.
Producto intermedio 3A
Sal de la [4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilamina con ácido paratoluensulfónico 1:1
Una solución de 2-[(3,4-diclorobencil)amino]etanol (2,25 g) y 2-cloroacrilonitrilo (1,0 ml) en tetrahidrofurano (3 ml) se calentó a 40°C durante 66 h. El disolvente se evaporó a vacío para dar una goma. El residuo se volvió a disolver en tetrahidrofurano (20 ml) y se enfrió a 0-5ºC. Se añadió terc-butóxido potásico (1,2 g) en porciones a esta solución en 10 min y la mezcla se agitó a 0-5ºC durante 45 min más. La mezcla se diluyó con agua (20 ml) y acetato de etilo (20 ml), se separaron las fases y la fase orgánica se lavó con solución acuosa de cloruro sódico al 20% en peso/peso. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y el disolvente se evaporó a vacío para dar una goma (2,75 g). Una parte de esta goma (0,22 g) en tetrahidrofurano (1 ml) se trató gota a gota con una solución de complejo de borano-tetrahidrofurano 1 M (2,44 ml) a 15-25ºC. La mezcla se agitó a 15-25ºC durante 16 h, y se añadió metanol (3 ml) gota a gota. La mezcla se agitó durante 5 h adicionales y el disolvente se evaporó a vacío. El residuo se volvió a disolver en acetato de etilo (4 ml) y se añadió monohidrato de ácido p-toluensulfónico (0,123 g). La mezcla se calentó a 50ºC durante 20 min, y la suspensión se enfrió a 15-25ºC y se agitó durante 15 min. La mezcla se filtró, se lavó con acetato de etilo y se secó para dar el compuesto del título (0,123 g) en forma de un sólido blanco.
CL/EM (Sistema A) Tr 1,75 min. Espectro de masas m/z 275/277 [MH^{+}]
Producto intermedio 4
2-{[(trifluoroacetil)amino]metil}morfolin-4-carboxilato de bencilo
A una solución agitada del Producto intermedio 1 (6,37 g) en metanol (250 ml) en atmósfera de nitrógeno se añadió cloroformiato de bencilo (4,7 ml) y trietilamina (6,3 ml). La mezcla se agitó a 22°C durante 1 h antes de separar los productos volátiles a vacío. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g de sílice eluyendo con acetato de etilo al 33% en ciclohexano, para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (4,4 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 3,22 min. Espectro de masas m/z 347 [MH^{+}].
Producto intermedio 5
2-(aminometil)morfolin-4-carboxilato de bencilo
A una solución agitada del Producto intermedio 4 (4,4 g) en metanol/agua 1:1 (300 ml) se añadió carbonato potásico (17,5 g). La mezcla se agitó a 22°C durante 36 h antes de separar los productos volátiles a vacío. El residuo se disolvió en agua y la solución se extrajo con diclorometano (x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato magnésico y se filtraron antes de evaporar el disolvente a vacío. El residuo se disolvió en metanol y se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX), lavando inicialmente el cartucho con metanol antes de eluir con solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol para dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (2,27 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,07 min. Espectro de masas m/z 251 [MH^{+}].
Producto intermedio 6
2-[({[(4-clorofenil)amino]carbonil}amino)-metil]morfolin-4-carboxilato de bencilo
A una solución agitada del Producto intermedio 5 (2,0 g) en diclorometano (100 ml) se añadió isocianato de 4-clorofenilo (1,35 g). La mezcla se agitó a 22°C durante 18 h antes de añadir solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (10 ml). Se continuó agitando durante 30 min más antes de separar el disolvente a vacío. El residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 33%/ciclohexano; la purificación adicional por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice, eluyendo con diclorometano/etanol/solución de amoniaco 0,880 500:8:1 dio el compuesto del título en forma de un sólido de color ante (3,6 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 3,41 min. Espectro de masas m/z 404 [MH^{+}].
Producto intermedio 7
N-(Morfolin-2-ilmetil)-N'-fenilurea
Una suspensión de paladio sobre carbón al 10% (1,5 g) y Producto intermedio 6 (3,2 g) en acetato de etilo (250 ml) se agitó vigorosamente con hidrógeno a 1 atmósfera y 22°C durante 20 h. El catalizador se filtró y los productos volátiles se separaron a vacío. El procedimiento se repitió con una porción adicional de catalizador (1 g) durante 24 h más antes de filtrar y evaporar el disolvente a vacío. La purificación del residuo por cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g de sílice, eluyendo con diclorometano/etanol/solución de amoniaco 0,880 100:8:1, dio el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (1,6 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,39 min. Espectro de masas m/z 236 [MH^{+}].
Producto intermedio 8
2-[({[(4-clorofenil)amino]amino)metil]morfolin-4-carboxilato de terc-butilo
A una solución agitada del 2-(aminometil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (preparado como se describe en el documento EP 0468231, 2,4 g) en diclorometano (100 ml) se añadió isocianato de 4-clorofenilo (1,87 g). La mezcla se agitó a 22°C durante 16 h antes de añadir solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. Se continuó agitando durante 30 min adicionales antes de separar el disolvente a vacío para dar el compuesto del título en forma de una espuma blanca (3,98 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 3,19 min. Espectro de masas m/z 370 [MH^{+}].
Producto intermedio 9
N-(4-Clorofenil)-N'-(morfolin-2-ilmetil)urea
El Producto intermedio 8 (1,9 g) se agitó en cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (40 ml) a 22°C durante 30 min. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX), eluyendo con metanol seguido de solución de NH_{3} 0,880 al 10% en metanol, para dar el compuesto del título en forma de una espuma de color crema (1,15 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,03 min. Espectro de masas m/z 270 [MH^{+}].
Producto intermedio 10
[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato de 4-nitrofenilo
Se añadió trietilamina (0,09 ml) a una solución del Producto intermedio 3 (0,150 g, 0,54 5 mmol) en diclorometano (3 ml) con agitación a 20°C en atmósfera de nitrógeno. La solución se enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota una solución de cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,121 g) en diclorometano (1 ml). La mezcla resultante se agitó durante 4 h a 0ºC. La solución se dejó calentar a 20ºC, se lavó con salmuera (4 ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo al 35% en ciclohexano, dio el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (0,119 g).
CL/EM (sistema A) Tr 3,01 min. Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}].
Producto intermedio 11
1-[(2S)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metanamina
El Producto intermedio 3 (mezcla racémica, 8 g) se separó en sus enantiómeros individuales por HPLC quiral preparativa. La separación se llevó a cabo usando una columna Chiralpak AD 20 \mum de 2'' x 22 cm, sistema Merck self pack DAC, eluyendo con heptano : etanol absoluto : dietilamina 95:5:0,1 (v/v) (caudal: 55 ml/min en 40 min, detección UV 225 nm); preparación de la carga de muestra: 400 mg de muestra en 20 ml de etanol absoluto : eluyente del sistema 3:2 (v/v). El compuesto del título (2,49 g) se obtuvo como sigue: tiempo de retención en HPLC preparativa 23,0 min.
Producto intermedio 11A
Sal de la 1-[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metanamina con ácido D-tartárico 1:1
Se añadió hidrazina al 35% en agua (1,8 ml) a una suspensión del Producto intermedio 42 (5 g) en alcoholes metilados industriales (75 ml), y la mezcla se calentó a reflujo. Se añadió cloroformo (75 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 65 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0-4ºC y se dejó reposar durante 15 min. El subproducto de ftalahidrazida se separó por filtración a vacío y se lavó con cloroformo (50 ml). El filtrado se lavó con agua (50 ml, 25 ml) se secó (MgSO_{4}) y el disolvente se evaporó a vacío para dar un aceite. Éste se disolvió en metanol (20 ml), el cual se evaporó a vacío para dar un aceite. El aceite se disolvió en metanol (100 ml) y se añadió ácido D-tartárico. La mezcla se calentó y se mantuvo a reflujo durante 30 min. La solución se enfrió a 45-50ºC, y después se sembró. La suspensión se mantuvo a esta temperatura durante 30 min, y después se enfrió a 0-4ºC y se dejó reposar durante 30 min. El producto se aisló por filtración para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (2,59 g).
\newpage
Se disolvió una muestra de la sal de D-tartrato (500 mg) en agua (1,4 ml). Se añadió metanol (23 ml) para dar una suspensión que se calentó a reflujo para dar una solución. La mezcla se agitó a reflujo durante 30 min, y después se enfrió lentamente sembrando a 55ºC. La suspensión resultante se enfrió a 0-4ºC y se dejó reposar 30 min. El producto se aisló por filtración para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,355 g).
ee: 91,6% de ee
CL/EM (Sistema A) Tr 1,75 min. Espectro de masas m/z 275/277 [MH^{+}]
HPLC quiral analítica (columna Chiralpak AD, 4,6 x 250 mm, eluyente MeOH: EtOH: Butilamina 50:50:0,1, caudal 0,5 ml/min, detección UV 220 nm), Tr 8,9 min.
Producto intermedio 11A (procedimiento alternativo)
Sal de la 1-[(2S)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metanamina con el ácido D-tartárico 1:1
El Producto intermedio 3 (0,613 g) se disolvió en metanol (12,3 ml). Se añadió ácido D-tartárico (0,335 g) y la suspensión se calentó a reflujo durante 50 min. La mezcla se dejó enfriar a 0-5ºC y el precipitado se aisló por filtración para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,4 g).
ee: 76% de ee
HPLC quiral analítica (columna Chiralpak AD, 4,6 x 250 mm, eluyente MeOH: EtOH: Butilamina 50:50:0,1, caudal 0,5 ml/min, detección UV 220 nm), Tr 8,9 min.
Producto intermedio 12
1-[(2R)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metanamina
El Producto intermedio 12 se preparó de forma análoga al Producto intermedio 11 dando el compuesto del título (2,24 g) como sigue: HPLC preparativa, tiempo de retención 27,8 min.
Producto intermedio 12A
Sal de la 1-[(2R)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metanamina con ácido L-tartárico 1:1
El Producto intermedio 3 (0,500 g) se disolvió en metanol (5 ml). Se añadió ácido L-tartárico (0,273 g) y la mezcla se calentó a aproximadamente 65°C para dar una suspensión lechosa, y se mantuvo a esta temperatura durante 1 h. Se añadió más metanol (5 ml) y la mezcla se dejó enfriar lentamente a 15-25ºC, y después se enfrió más a 0-4ºC. La mezcla se agitó durante 30 min a esta temperatura y el producto se aisló por filtración para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,38 g).
ee: 78%
CL/EM (Sistema A) Tr 1,75 min. Espectro de masas m/z 275/277 [MH^{+}]
HPLC quiral analítica (columna Chiralpak AD, 4,6 x 250 mm, eluyente MeOH: EtOH: Butilamina 50:50:0,1, caudal 0,5 ml/min, detección UV 220 nm), Tr 10,5 min.
Producto intermedio 13
[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato de 4-nitrofenilo
El Producto intermedio 13 se preparó de una forma análoga al Producto intermedio 10 a partir del Producto intermedio 11 (0,225 g) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,182 g) para dar el compuesto del título (0,2 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 3,1 min. Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}].
Producto intermedio 14
[(2R)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato de 4-nitrofenilo
El Producto intermedio 14 se preparó de una forma análoga al Producto intermedio 10 a partir del Producto intermedio 12 (0,21 g) y cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,17 g) para dar el compuesto del título (0,23 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 3,09 min. Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}].
\newpage
Producto intermedio 15
4-{[({[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
El Producto intermedio 15 se preparó de una forma análoga al Ejemplo 43, usando tetrahidrofurano como disolvente, sin base, para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,157 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,92 min. Espectro de masas m/z 501 [MH^{+}].
Producto intermedio 16
Clorhidrato de N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-piperidin-4-ilurea
El Producto intermedio 15 (0,157 g) se agitó en dioxano (4 ml) que contenía cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano (0,78 ml) durante 16 h, a 23°C en atmósfera de nitrógeno. El disolvente se separó a vacío, formando el azeótropo con diclorometano (20 ml), se trituró en éter y se secó a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (0,12 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,02 min. Espectro de masas m/z 401 [MH^{+}].
Producto intermedio 17
4-({[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil)amino)carbonil]amino}metil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo
El Producto intermedio 17 se hizo de forma análoga a la del Ejemplo 57.
CL-EM (Sistema A) Tr 2,72 min. Espectro de masas m/z 515 [MH^{+}].
Producto intermedio 18
Diclorhidrato de N-{[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil)-N'-(piperidin-4-ilmetil)urea
El Producto intermedio 17 (0,390 g) se agitó en cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano (4 ml) durante 2 h, a 23°C en atmósfera de nitrógeno. El disolvente se separó a vacío, se formó el azeótropo con diclorometano (20 ml), y se secó a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (0,33 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,84 min. Espectro de masas m/z 415 [MH^{+}].
Producto intermedio 19
[(2S)-4-(3-clorobencil)morfolin-2-il]metilamina
El Producto intermedio 19 se hizo de una forma análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa, tiempo de retención 26,1 min.
Producto intermedio 20
[(2S)-4-(2,3-diclorobencil)morfolin-2-il]metilamina
El Producto intermedio 20 se hizo de una forma análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa, tiempo de retención 25,3 min.
Producto intermedio 21
[(2S)-4-(3,4-difluorobencil)morfolin-2-il]metilamina
El Producto intermedio 21 se hizo de una forma análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa, tiempo de retención 28,3 min.
\newpage
Producto intermedio 22
prop-2-inilcarbamato de 4-nitrofenilo
Se añadieron propargilamina (0,017 ml) y trietilamina (0,38 ml) en diclorometano (2 ml) gota a gota a cloroformiato de p-nitrofenilo (0,55 g) en diclorometano (3 ml) a 0°C. La solución se agitó durante 1 h a esta temperatura y después a 23ºC durante 5 h. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (cartucho de gel de sílice de 10 g, Varian Bond Elut), eluyendo con acetato de etilo al 20-60% en ciclohexano. para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,419 g).
CL/EM (sistema A) Tr 2,67 min. Espectro de masas m/z 220 [MH^{+}].
Producto intermedio 23
{(2S)-4-[(5-clorotien-2-il)metil]morfolin-2-il}metilamina
El Producto intermedio 23 se hizo de una forma análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa quiral, tiempo de retención 25,2 min.
Producto intermedio 24
[(2R,5R)-4-(3,4-diclorobencil)-5-metilmorfolin-2-il]metilamina (mezcla con isómero trans, cis: trans 60:40)
El Producto intermedio 24 se hizo de una forma análoga a la del Producto intermedio 31 a partir del (2R)-2-aminopropan-1-ol.
CL-EM (Sistema A): Tr 1,9 min. Espectro de masas m/z 289 [MH^{+}].
Producto intermedio 25
4-{[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}butanoato de terc-butilo
Se añadió clorhidrato del éster terc-butílico del ácido 4-aminobutírico (0,235 g) a una solución agitada del Producto intermedio 13 (0,440 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,42 ml) en diclorometano seco (20 ml) en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a 22°C durante 18 h. La mezcla se trató con solución acuosa saturada de carbonato potásico (20 ml) y se agitó durante 5 min. Las capas se separaron y la capa orgánica se aplicó a un cartucho de gel de sílice (10 g, Varian Bond Elut). La elución con diclorometano, éter, acetato de etilo, y acetona dio el producto en bruto (0,357 g). La purificación adicional por cromatografía en gel de sílice (10 g, cartucho Varian Bond Elut), eluyendo con diclorometano (1 volumen de columna), éter (4 volúmenes de columna) y acetato de etilo (8 volúmenes de columna) dio el compuesto del título en forma de una goma (0,345 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,66 min. Espectro de masas m/z 460 [MH^{+}].
Producto intermedio 26
Clorhidrato del ácido 4-{[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}butanoico
El Producto intermedio 25 (0,345 g) se disolvió en cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (5 ml), y la mezcla se dejó reposar a 22ºC durante 19,5 h. El disolvente se evaporó a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,330 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,16 min. Espectro de masas m/z 404 [MH^{+}].
Producto intermedio 27
2-[3-(pirrolidin-1-ilsulfonil)propil]-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
Una solución de cloruro de 3-(1,3-dioxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)propano-1-sulfonilo (0,288 g) en tetrahidrofurano seco (5 ml) se trató con N,N-diisopropiletilamina (0,350 ml) y pirrolidina (0,10 ml) a 22°C en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a 22°C durante 1 h. Después de reposar toda la noche a temperatura ambiente, la mezcla se repartió entre solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (10 ml) y acetato de etilo (2 x 10 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron a vacío para dar un sólido blanco (0,145 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,81 min. Espectro de masas m/z 323 [MH^{+}].
\newpage
Producto intermedio 28
3-(Pirrolidin-1-ilsulfonil)propilamina
Una solución del Producto intermedio 27 (0,139 g) en isopropanol (7,6 ml) y agua (1,3 ml) se trató con borohidruro sódico (0,081 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 19 h. Se añadió con cuidado ácido acético glacial (0-45 ml) y la mezcla se calentó a 80ºC durante 2 h. Los disolventes se evaporaron a vacío para dar un sólido blanco, que se disolvió en metanol y se aplicó a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (10 g, Isolute SCX). La elución con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol y evaporación de la fracción de amoniaco/metanol dio el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,027 g).
TLC SiO_{2} (diclorometano:etanol:amoniaco 0,880 89:10:1) Rf 0,2.
Producto intermedio 29
Clorhidrato del [(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato de 4-nitrofenilo
Una mezcla de trietilamina (0,101 ml) y el Producto intermedio 11 (2,0 g) en diclorometano (20 ml) se añadió gota a gota a una solución de cloroformiato de 4-nitrofenilo (1,62 g) en diclorometano (10 ml) con agitación a 0°C en atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó durante 3 h a 0°C, se dejó calentar a 20ºC y reposar durante 18 h. Los componentes volátiles se evaporaron a vacío, y el residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice (cartucho de 90 g), eluyendo inicialmente con metanol al 10% en diclorometano y posteriormente con metanol al 20% en diclorometano para dar el compuesto del título en forma de un sólido marrón claro (2,5 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,89 min. Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}]
Producto intermedio 30
Clorhidrato de 1-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)metanamina
Al Producto intermedio 37 (0,47 g) se añadió cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (5 ml). La mezcla se agitó a 22°C durante 3 h, y el disolvente se separó a vacío. El residuo se disolvió otra vez en cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (5 ml), y se dejó reposar a 22°C durante 18 h. La evaporación del disolvente a vacío dio el compuesto del título en forma de un sólido de color crema (0,319 g).
Espectro de masas por termopulverización m/z = 114 [MH^{+}].
Producto intermedio 31
1-[4-(3,4-Diclorobencil)-5-metilmorfolin-2-il]metanamina (relación cis/trans 2:1)
Una mezcla del Producto intermedio 43 (0,470 g) y 2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona (0,410 g) se calentó a 80°C en atmósfera de nitrógeno durante 5 h. La mezcla se trató con ácido sulfúrico concentrado (0,6 ml) y después se agitó a 150°C durante 42 h. La mezcla se trató con agua (50 ml) y después se lavó con acetato de etilo (2 x 50 ml). La fase acuosa oscura se hizo básica a pH aproximadamente 11, usando hidróxido sódico acuoso 5 M y después se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite marrón (0,42 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,74 min.
Producto intermedio 32
{(2S)-4-[1-(3,4-diclorofenil)etil]morfolin-2-il}metilcarbamato de terc-butilo
Se trató el (2R)-morfolin-2-ilmetilcarbamato de terc-butilo (2,00 g) en N,N-dimetilformamida (16 ml) con N,N-diisopropiletilamina (1,6 ml) seguido de 4-(1-bromoetil)-1,2-diclorobenceno (2,58 g). Después de agitar durante 5 días a temperatura ambiente, se añadieron porciones adicionales de 4-(1-bromoetil)-1,2-diclorobenceno (2,58 g) y N,N-diisopropiletilamina (1,6 ml) y se continuó agitando durante 24 h a temperatura ambiente. La solución se trató con diclorometano (70 ml) y solución acuosa saturada de hidrógeno-carbonato sódico (30 ml) y la mezcla se agitó vigorosamente. Se separó la fase orgánica y se aplicó equitativamente en cartuchos de intercambio iónico de ácido sulfónico (5x10 g Isolute SCX, pretratados con metanol). Cada uno de los cartuchos se eluyó con metanol (1 volumen de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (1 volumen de columna); la evaporación a vacío de las fracciones básicas combinadas dio el compuesto del título en forma de una goma incolora transparente (3,22 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,74 min. Espectro de masas m/z 389 [MH^{+}].
\newpage
Producto intermedio 33
Diclorhidrato de 1-{(2S)-4-[1-(3,4-diclorofenil)etil]morfolin-2-il}metanamina
El Producto intermedio 32 se trató con cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (15 ml) y la solución se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La solución se trató con metanol (20 ml) y se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (1,53 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,86 min y 1,91 min. Espectro de masas m/z 289 [MH^{+}].
Productos intermedios 34 y 35
{(2S)-4-[1-(3,4-diclorofenil)etil]morfolin-2-il}metilcarbamato de 4-nitrofenilo (isómeros I y II, respectivamente)
El Producto intermedio 33 (0,724 g) en diclorometano (5 ml) se trató con trietilamina (1,14 ml), formando una suspensión que se añadió en porciones en 5 min a una solución de cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,444 g) en diclorometano anhidro (5 ml) a 0ºC, en atmósfera de nitrógeno. La solución con agitación se dejó calentar a temperatura ambiente en 2 h, después se filtró; el filtrado se purificó directamente por cromatografía en gel de sílice (Biotage, columna de 90 g), eluyendo con acetato de etilo al 35 - 40%, en ciclohexano y las fracciones adecuadas se evaporaron a vacío para dar el compuesto del título (isómero I) en forma de una película amarilla opaca (0,202 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,90 min. Espectro de masas m/z 454 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, Tr 18,03 min (eluyente EtOH al 25%/heptano).
Se combinaron las otras fracciones adecuadas y se concentraron a vacío para dar el compuesto del título (isómero II) (0,196 g) en forma de una película amarilla opaca.
CL/EM (Sistema A) Tr 2,88 min. Espectro de masas m/z 454 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, Tr 15,38 min (eluyente EtOH al 25%/heptano).
Producto intermedio 36
1H-tetrazol-5-ilmetilcarbamato de terc-butilo
A una solución agitada de la 1-(1H-tetrazol-5-il)metanamina (6,0 g) en agua (120 ml) a 22°C se añadió hidróxido sódico (4,8 g), seguido de la adición gota a gota de una solución de dicarbonato de di-terc-butilo (13,48 g) en metanol (20 ml). Se añadió más metanol (40 ml) a la mezcla y se continuó agitando durante 4 h; la mezcla después se dejó reposar durante 60 h a 4ºC. El metanol se evaporó a vacío y el residuo acuoso se acidificó a pH aproximadamente 6 con ácido clorhídrico acuoso 2 M. La mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (x3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se evaporó a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,50 g).
Espectro de masas de termopulverización m/z 200 [MH^{+}], 217 [MNH_{4}^{+}].
Producto intermedio 37
(2-metil-2H-tetrazol-5-il)metilcarbamato de terc-butilo
A una solución agitada del Producto intermedio 36 (1,0 g) en diclorometano (35 ml) y metanol (10 ml) a 22°C en atmósfera de nitrógeno se añadió gota a gota trimetilsilildiazometano al 10% en hexano (12,0 ml). La mezcla se agitó durante 2 h a 22ºC antes de añadir gota a gota ácido acético (2 ml) y los disolventes se evaporaron a vacío. El residuo bruto se purificó por cromatografía en columna de resolución rápida Biotage (cartucho de 90 g), eluyendo con ciclohexano en éter al 10%. Las fracciones para el primer isómero que eluye se combinaron y los disolventes se evaporaron a vacío para dar el compuesto del título en forma de cristales amarillo pálido (0,487 g).
Espectro de masas por termopulverización m/z = 214 [MH^{+}].
TLC (SiO_{2}), (ciclohexano al 10%/éter), Tr = 0,35, visualizado con KMnO_{4}.
Producto intermedio 38
3-(etiltio)propilcarbamato de terc-butilo
Una solución de 3-bromopropilcarbamato de terc-butilo (0,30 g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) se trató con etantiol (0,104 ml) y carbonato potásico (0,29 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla se repartió entre agua (20 ml) y diclorometano (30 ml), y las capas orgánicas se evaporaron a vacío para dar el compuesto del título (0,236 g).
TLC SiO_{2} (ciclohexano: acetato de etilo 4:1) R_{f} 0,5.
Producto intermedio 39
3-(etilsulfonil)propilcarbamato de terc-butilo
Se añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (0,373 g) a una solución agitada del Producto intermedio 38 (0,236 g) en diclorometano seco (6 ml) a 22°C en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a 22°C durante 18 h. La mezcla se trató con solución acuosa saturada de carbonato sódico (10 ml), se agitó durante 3 min, y las capas orgánicas separadas se evaporaron a vacío para dar el compuesto del título (0,275 g).
RMN (CDCl_{3}) 5,15 \delta (1H, t ancho, NH), 3,25 \delta (2H, q, CH_{2}), 3,00 \delta (4H, t+q, 2xCH_{2}), 2,03 \delta (2H, m, CH_{2}), 1,50-1,30 \delta (12H, s+t, 4xCH_{3})
Producto intermedio 40
Clorhidrato de 3-(etilsulfonil)propan-1-amina
El Producto intermedio 39 (0,275 g) se disolvió en cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (3 ml), y la solución se dejó reposar a 22°C durante 2 h. El disolvente se evaporó a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (186 mg).
RMN (D4 MeOH) 3,25 \delta (2H, t, CH_{2}), 3,15 \delta (4H, t+q, 2xCH_{2}), 2,18 \delta (2H, m, CH_{2}), 1,38 \delta (3H, t, CH_{3}).
Producto intermedio 41
[4-(3,4-Diclorobencil)-1,4-oxazepan-2-il]metilamina
Se lavó 5 veces una resina de formil-poliestireno (1,6 g, carga = 2,95 mmol/g) con tetrahidrofurano en un recipiente para péptidos de vidrio sinterizado. Se añadió una solución de 1-(1,4-oxazepan-2-il)metanamina (0,619 g) en tetrahidrofurano (20 ml) y la mezcla se agitó a 22°C durante 18 h. La mezcla se filtró y la resina se lavó con tetrahidrofurano (4 x 20 ml) y metanol (3 x 10 ml) y se secó. Se suspendió una porción de la resina seca (1,2 g) en N,N-dimetilformamida (20 ml), N,N-diisopropiletilamina (2,04 ml) y cloruro de 3,4-diclorobencilo. La mezcla se agitó suavemente a 70°C durante 22 h. Después de enfriar, la mezcla se filtró y la resina se lavó con THF (5 x 10 ml) y diclorometano (5 x 10 ml) y se secó al aire en el vidrio sinterizado. La resina se puso en un recipiente para péptidos de vidrio sinterizado y se suspendió en tetrahidrofurano (9 ml); se añadió ácido clorhídrico concentrado (3 ml), y el recipiente se agitó durante 2 h. La resina se filtró y se lavó con tetrahidrofurano (2 x 10 ml). Los filtrados combinados se concentraron a vacío para dar un aceite transparente, que se aplicó en un cartucho de intercambio iónico (10 g, Isolute SCX, preacondicionado con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y evaporación de las fracciones básicas a vacío dio un residuo. Se repitió la purificación de intercambio iónico (como antes) para dar el compuesto del título en forma de una goma incolora
(0,256 g).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,46 \delta (1H, d, CH Aromático), 7,38 \delta (1H, d, CH Aromático), 7,19 \delta (1H, dd, CH Aromático), 3,94 \delta (1H, m, CH), 3,80 \delta (1H, m, CH), 3,59 \delta (2H, s, CH_{2}), 3,57 \delta (1H, m, CH), 2,82-2,53 \delta (5H, m, 5xCH), 2,38 \delta (1H, dd, CH), 1,98-1,78 \delta (2H, m, 2xCH), 1,49 \delta (2H+H_{2}O, s ancho, NH_{2}).
Producto intermedio 42
2-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
A una solución de la (N-(2,3-epoxipropil)-ftalimida) de 2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona (2 g) en tetrahidrofurano (4 ml) se añadió 2-[(3,4-diclorobencil)amino]etanol (2,16 g) con agitación, en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se calentó a 66ºC durante 22 h, y después se enfrió a 0ºC. Se añadió una porción adicional de tetrahidrofurano (10 ml), seguido de trifenilfosfina (2,88 g). Después se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (2,2 g) en 10 min. La mezcla se agitó a 0°C durante 30 min adicionales y a temperatura ambiente durante 14 h. A la solución bruta se añadió acetato de etilo (100 ml), y después ácido clorhídrico acuoso 2 M (250 ml). El precipitado blanco resultante se aisló por filtración, y se secó a vacío para dar el compuesto del título en forma de su sal de clorhidrato cristalina blanca (2,01 g). Ésta se repartió entre solución acuosa de bicarbonato sódico al 8% (200 ml) y acetato de etilo (50 ml). Se separó la fase orgánica, se secó sobre sulfato magnésico y el disolvente se evaporó a vacío para dar un sólido. Se añadió diclorometano (20 ml) al residuo y el disolvente se evaporó otra vez a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,1 g).
CL/EM Tr 2,91 min. Espectro de masas m/z 405 [MH^{+}].
Producto intermedio 43
2-[(3,4-Diclorobencil)amino]propan-1-ol
Se añadió cloruro de 3,4-diclorobencilo (0,988 g) a 2-amino-1-propanol (4,10 g) y la mezcla se agitó a 50°C en atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla se repartió entre solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (100 ml) y acetato de etilo (100 ml) y se separaron las fases. La capa orgánica se lavó con agua (4x100 ml) y salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y después se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco
(0,935 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,13 min.
Ejemplos y ejemplos de referencias
Ejemplo de referencia 1
N-Bencil-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
A una solución agitada del Producto intermedio 3 (0,025 g) en diclorometano (1 ml) se añadió isocianato de bencilo (16,8 \mul). La mezcla se agitó a 22°C durante 18 h antes de añadir tris-(2-aminoetil)amina-poliestireno (Argonaut Technologies, 0,04 g con 3,85 mmol/g). Se continuó agitando durante 72 h adicionales antes de verter la mezcla en un cartucho de extracción en fase sólida de 1 g (ácido sulfónico Isolute SCX). El cartucho se lavó con metanol antes de eluir con solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se evaporó a vacío para dar un sólido amarillo pálido. El sólido se purificó eluyendo por un cartucho de extracción en fase sólida de 1 g de sílice (Varian Bondelut) eluyendo secuencialmente con diclorometano, éter, acetato de etilo, acetona, acetonitrilo y metanol, para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,031 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,22 min. Espectro de masas m/z 408 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 2
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(4-metoxibencil)urea
El Ejemplo de referencia 2 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(isocianatometil)-4-metoxibenceno (19,5 \mul) para dar el compuesto del título (0,0257 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,23 min. Espectro de masas m/z 438 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 3
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(4-metilbencil)urea
El Ejemplo de referencia 3 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(isocianatometil)-4-metilbenceno (19,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0318 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,33 min. Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 4
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(3-metilbencil)urea
El Ejemplo de referencia 4 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(isocianatometil)-3-metilbenceno (19,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0382 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,32 min. Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 5
N-(3-Cianofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 5 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 3-isocianatobenzonitrilo (0,0196 g) para dar el compuesto del título (0,0257 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,29 min. Espectro de masas m/z 419 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 6
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(2-metilbencil)urea
El Ejemplo de referencia 6 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(isocianatometil)-2-metilbenceno (0,0201 g) para dar el compuesto del título (0,0269 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,31 min. Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 7
N-Ciclohexil-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 7 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) e isocianatociclohexano (17,4 \mul) para dar el compuesto del título (0,0298 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,26 min. Espectro de masas m/z 400 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 8
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(2-feniletil)urea
El Ejemplo de referencia 8 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedios (0,025 g) y (2-isocianatoetil)benceno (18,9 \mul) para dar el compuesto del título (0,0312 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,29 min. Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 9
N-({4-[2-(2,3-Dihidro-1H-indol-1-il)-2-oxoetil]morfolin-2-il}metil)-N'-fenilurea
A una solución agitada del Producto intermedio 7 (0,01 g) en N,N-dimetilformamida (0,5 ml) se añadió 1-(2-cloroacetil)-indolina (0,0092 g). La mezcla se agitó a 22°C durante 17 h antes de añadir tris-(2-aminoetil)amina-poliestireno (Argonaut Technologies, 0,01 g con 4,46 mmol/g) y poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut Technologies, 0,033 g con 1,39 mmol/g). Se continuó agitando durante 30 min adicionales antes de purificar la mezcla por extracción en fase sólida (1 g, columna de ácido sulfónico Isolute SCX), eluyendo con metanol seguido de solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. Se evaporó la fracción básica para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,012 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,69 min, Espectro de masas m/z 394 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 10
N-Alil-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil)urea
El Ejemplo de referencia 10 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 3-isocianatoprop-1-eno (12,0 \mul) para dar el compuesto del título (0,027 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,93 min. Espectro de masas m/z 358 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 11
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(3-fluorofenil)urea
El Ejemplo de referencia 11 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-fluoro-3-isocianatobenceno (15,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,019 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,35 min. Espectro de masas m/z 412 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 12
N-(3-Bromofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 12 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-bromo-3-isocianatobenceno (17,0 \mul) para dar el compuesto del título (0,03 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,50 min. Espectro de masas m/z 472 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 13
N-(3-Clorofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil)urea
El Ejemplo de referencia 13 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-cloro-3-isocianatobenceno (16,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0247 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,46 min. Espectro de masas m/z 428 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 14
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)-morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 14 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-cloro-4-isocianatobenceno (17,4 \mul) para dar el compuesto del título (0,0275 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,45 min. Espectro de masas m/z 428 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 15
3-{[({[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}benzoato de metilo
El Ejemplo de referencia 15 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 3-isocianatobenzoato de metilo (0,0241 g) para dar el compuesto del título (0,037 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,32 min. Espectro de masas m/z 452 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 16
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[4-(difluorometoxi)fenil]urea
El Ejemplo de referencia 16 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(difluorometoxi)-4-isocianatobenceno (19,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0252 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,41 min. Espectro de masas m/z 460 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 17
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(4-fluorofenil)urea
El Ejemplo de referencia 17 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-fluoro-4-isocianatobenceno (15,5 \mul) para dar el compuesto del título (0,0311 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,30 min. Espectro de masas m/z 421 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 18
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[3-(metiltio)fenil]urea
El Ejemplo de referencia 18 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-isocianato-3-(metiltio)benceno (18,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0352 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,41 min. Espectro de masas m/z 440 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 19
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(1-naftilmetil)morfolin-2-il]metil}urea
A una solución agitada del Producto intermedio 9 (0,01 g) en N,N-dimetilformamida (1 ml) se añadió 1-(clorometil)naftaleno (6,1 \mul). La mezcla se agitó a 22°C durante 24 h antes de añadir tris-(2-aminoetil)amina-poliestireno (Argonaut Technologies, 0,01 g con 4,46 mmol/g) y poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut Technologies, 0,033 g con 1,39 mmol/g). Se continuó agitando durante 2 h adicionales antes de purificar la mezcla por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico, Isolute SCX), eluyendo con metanol seguido de solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se evaporó a vacío para dar el compuesto del título (0,003 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,82 min, Espectro de masas m/z 410 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 20
N-(4-Bromofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 20 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-bromo-4-isocianatobenceno (0,027 g) para dar el compuesto del título (0,033 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,49 min. Espectro de masas m/z 472 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 21
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(3-yodobencil)morfolin-2-il]metil)urea
El Ejemplo de referencia 21 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 1-(bromometil)-3-yodobenceno (0,0121 g) para dar el compuesto del título (0,0087 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,83 min. Espectro de masas m/z 486 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 22
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[3-(trifluorometil)fenil]urea
El Ejemplo de referencia 22 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-isocianato-3-(trifluorometil)benceno (18,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0112 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,56 min. Espectro de masas m/z 462 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 23
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(2-naftilmetil)morfolin-2-il]metil)urea
El Ejemplo de referencia 23 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 2-(bromometil)naftaleno (0,009 g) para dar el compuesto del título (0,0052 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,81 min. Espectro de masas m/z 410 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 24
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(2,6-dicloropiridin-4-il)urea
El Ejemplo de referencia 24 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 2,6-dicloro-4-isocianatopiridina (0,0258 g) para dar el compuesto del título (0,0165 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,46 min. Espectro de masas m/z 463 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 25
N-(4-Cianofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)-morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 25 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 4-isocianatobenzonitrilo (0,0196 g) para dar el compuesto del título (0,0325 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,29 min. Espectro de masas m/z 419 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 26
N-{[4-(3-Clorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(4-clorofenil)urea
El Ejemplo de referencia 26 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 1-(bromometil)-3-clorobenceno (5,4 \mul) para dar el compuesto del título (0,0023 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,72 min. Espectro de masas m/z 394 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 27
N-[(4-But-3-enilmorfolin-2-il)metil1-N'-(4-clorofenil)urea
El Ejemplo de referencia 27 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 4-bromobut-1-eno (4,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0027 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,34 min. Espectro de masas m/z 324 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 28
N-(4-Clorofenil)-N'-({4-[2-(feniltio)etil]morfolin-2-il)metil)urea
El Ejemplo de referencia 28 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y [(2-bromoetil)tio]benceno (0,0089 g) para dar el compuesto del título (0,0023 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,77 min. Espectro de masas m/z 406 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 29
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(2-metoxietil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 29 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 1-bromo-2-metoxietano (3,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0041 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,22 min. Espectro de masas m/z 328 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 30
N-{[4-(1,1'-Bifenil-4-ilmetil)morfolin-2-il]metil}-N'-(4-clorofenil)urea
El Ejemplo de referencia 30 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 4-(clorometil)-1,1'-bifenilo (0,0083 g) para dar el compuesto del título (0,0052 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,95 min. Espectro de masas m/z 436 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 31
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(1-naftil)urea
El Ejemplo de referencia 31 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-isocianatonaftaleno (19,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0304 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,43 min. Espectro de masas m/z 444 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 32
N-(1,1'-Bifenil-4-il)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)-morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 32 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 4-isocianato de 1,1'-bifenilo (0,0266 g) para dar el compuesto del título (0,0314
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,65 min. Espectro de masas m/z 470 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 33
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-(4-fenoxifenil)urea
El Ejemplo de referencia 33 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-isocianato-4-fenoxibenceno (24,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0171
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,62 min. Espectro de masas m/z 486 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia 34
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-{4-[(trifluorometil)tio]fenil}urea
El Ejemplo de referencia 34 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-isocianato-4-[(trifluorometil)tio]benceno (21,9 \mul) para dar el compuesto del título (0,0122 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,70 min. Espectro de masas m/z 494 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 35
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[4-(trifluorometoxi)fenil]urea
El Ejemplo de referencia 35 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-isocianato-4-(trifluorometoxi)benceno (20,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0371 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,5 7min. Espectro de masas m/z 478 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 36
N-([4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[4-(dimetilamino)fenil]urea
El Ejemplo de referencia 36 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 4-isocianato-N,N-dimetilanilina (0,0221 g) para dar el compuesto del título (0,031 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,68 min. Espectro de masas m/z 437 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 37
N-(4-Clorofenil)-N'-({4-[(5-clorotien-2-il)metil]-morfolin-2-il}metil)urea
El Ejemplo de referencia 37 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 2-cloro-5-(clorometil)tiofeno (0,0068 g) para dar el compuesto del título (0,0098 g). CL-EM (Sistema A): Tr 2,84 min. Espectro de masas m/z 400 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 38
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(4-vinilbencil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 38 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 1-(clorometil)-4-vinilbenceno (0,0062 g) para dar el compuesto del título (0,0071
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,72 min. Espectro de masas m/z 386 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 39
Benzoato de 2-{2-[({[(4-clorofenil)amino]carbonil}amino)metil]morfolin-4-il}etilo
El Ejemplo de referencia 39 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y benzoato de 2-bromoetilo (6,5 \mul) para dar el compuesto del título (0,007 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,69 min. Espectro de masas m/z 418 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 40
N-(4-Clorofenil)-N'-({4-[2-(4-fluorofenoxi)etil]-morfolin-2-il}metil)urea
El Ejemplo de referencia 40 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 1-(2-bromoetoxi)-4-fluorobenceno (0,0089 g) para dar el compuesto del título (0,007 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,69 min. Espectro de masas m/z 408 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia 41
N-(4-Clorofenil)-N'-({4-[4-(4-clorofenil)-4-oxobutil]morfolin-2-il}metil)urea
El Ejemplo de referencia 41 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 4-cloro-1-(4-clorofenil)butan-1-ona (0,0089 g) para dar el compuesto del título (0,0043 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,83 min. Espectro de masas m/z 450 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 42
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobenzoil)-morfolin-2-il]metil}urea
A una solución agitada del Producto intermedio 9 (0,05 g) se añadió una solución de cloruro de 3,4-diclorobenzoílo (42,7 mg) en N,N-dimetilformamida (7 ml). La mezcla se agitó a 22°C durante 15 h antes de evaporar el disolvente a vacío. El residuo se purificó eluyendo a través de un cartucho de extracción en fase sólida de 1 g de sílice (Varian Bondelut), eluyendo secuencialmente con diclorometano, éter, acetato de etilo, acetona, acetonitrilo y metanol, para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,080 g). CL/EM (Sistema A) Tr 3,10 min. Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 43
N'-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N-(4-fluorofenil)-N-metilurea
Se añadió 4-fluoro-N-metilanilina (0,007 ml) a una solución del Producto intermedio 10 (0,025 g) en piridina anhidra (1 ml). La mezcla se calentó a 110°C en un vial de vidrio de pared gruesa (Reactivial) durante 20 h. La mezcla se evaporó para separar la piridina, y se repartió entre acetato de etilo (10 ml) y solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (10 ml). La capa orgánica se lavó con bicarbonato sódico adicional (10 ml x 5), salmuera (10 ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (tubo Trikonex flash 2002, 2 g), eluyendo con acetato de etilo al 70% en ciclohexano para dar el compuesto del título en forma de una goma amarillo pálido 0,014 g.
CL-EM (sistema A) Tr 2,52 min. Espectro de masas m/z 426 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 44
(2-[({[(4-clorofenil)amino]carbonil}amino)-metil]morfolin-4-il}(fenil)acetato de etilo
El Ejemplo de referencia 44 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y bromo(fenil)acetato de etilo (0,029 g) para dar el compuesto del título (0,0372 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 3,43 min. Espectro de masas m/z 432 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 45
2-{2-[({[(4-clorofenil)amino]carbonil)-amino)metil]morfolin-4-il}-2-fenilacetamida
El Ejemplo de referencia 45 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y 2-bromo-2-fenilacetamida (0,028 g) para dar el compuesto del título (0,0296 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,75 min. Espectro de masas m/z 401 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 46
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(cianometil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 46 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del Producto intermedio 9 (0,01 g) y bromoacetonitrilo (2,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0039 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,79 min. Espectro de masas m/z 309 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 47
N-(4-Clorobencil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)-morfolin-2-il]metil}urea
Una suspensión de carbonato de 4-{[(resina de poliestireno)metil]tio}fenilo y 4-nitrofenilo (preparado como se describe en Tetrahedron Lett. (1998), 39 (22), 3631-3634, 1,5 g con 0,99 mmol/g) en N,N-dimetilformamida (15 ml) se agitó con el Producto intermedio 3 (0,80 g) a 22°C durante 1 h. La resina se filtró, se lavó con N,N-dimetilformamida (x2), diclorometano (x3) y N,N-dimetilformamida. La resina se agitó otra vez con N,N-dimetilformamida (15 ml) y Producto intermedio 3 (0,80 g) a 22°C durante 1 h antes de filtrar, lavar con N,N-dimetilformamida (x2), diclorometano (x3) y éter (x2) y secar a vacío para dar el producto intermedio la resina de [4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato de 4-{[(resina de poliestireno)metil]tio}fenilo en forma de perlas naranjas. A una muestra de esta resina (50 mg) en un tubo de ensayo se añadió 4-clorobencilamina (9,6 \mul) y 1 gota de 1-metil-2-pirrolidinona, y la mezcla se puso en un horno de microondas y se calentó a potencia máxima (600 W) durante 5 min. Se añadió diclorometano (2 ml) y resina de formilpoliestireno, y la mezcla se agitó a 22ºC durante 18 h. La suspensión se vertió en una columna de extracción en fase sólida de 1 g (ácido sulfónico Isolute SCX), que después se lavó con metanol antes de eluir con solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se evaporó a vacío para dar un sólido de color crema que después se purificó por elución por un cartucho de extracción en fase sólida de 1 g de sílice (Varian Bondelut) eluyendo secuencialmente con diclorometano, éter, acetato de etilo, acetona, acetonitrilo y metanol, para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (4,7 mg).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,70 min. Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 48
N-(3-Clorobencil)-N’-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 48 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 47 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(3-clorofenil)metanamina (9,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0092 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,73 min. Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 49
N-(2-Clorobencil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)-morfolin-2-il]metil}urea
El Ejemplo de referencia 49 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 47 usando una mezcla del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 1-(2-clorofenil)metanamina (9,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,008 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,74 min. Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 50
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea (isómero 1)
Separación quiral de la mezcla racémica del Ejemplo de referencia 14:
El Ejemplo de referencia 14 (mezcla racémica, 0,040 g) se separó en sus enantiómeros individuales de configuración desconocida con un sistema de HPLC preparativa quiral. La separación se llevó a cabo usando una columna Chiralpak AD (2 cm x 25 cm), eluyendo con etanol al 60% en heptano (15 ml/min en 25 min. Detección UV \lambda = 215 nm) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,012 g). HPLC preparativa, tiempo de retención 7,5 min.
Ejemplo de referencia 51
N-(4-Clorofenil)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea (isómero 2)
El Ejemplo de referencia 51 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 50 dando el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,012 g). HPLC preparativa, tiempo de retención 11 min.
Ejemplo de referencia 52
Formiato de N-[3-({[({[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)fenil]acetamida
El Ejemplo de referencia 52 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 10 (0,04 g) y 3-acetamidobencilamina (0,022 g), y se purificó por HPLC preparativa automática dirigida por masas para dar el compuesto del título (0,008 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,47 min. Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia 53
4-({[({[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino)metil)benzamida
El Ejemplo de referencia 53 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 47 a partir del Producto intermedio 3 (0,025 g) y 4-aminometilbenzamida (0,016 g) para dar el compuesto del título (0,0083 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,16 min. Espectro de masas m/z 451, 453 [MH^{+}].
Ejemplo 1 4-({[({[(2S)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)-carbonil]amino)metil)benzamida
El Ejemplo 1 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 13 (0,079 g) y 4-aminometilbenzamida (0,032 g) usando N,N-dimetilformamida como disolvente para dar el compuesto del título (0,0837 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,27 min. Espectro de masas m/z 451, 453 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al 15%/n-heptano: Tr 41,8 min.
Ejemplo de referencia 55
4-({[({[(2R)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil]amino)carbonil]amino}metil)benzamida
El Ejemplo de referencia 55 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 14 (0,109 g) y 4-aminometilbenzamida (0,045 g) usando N,N-dimetilformamida como disolvente para dar el compuesto del título (0,0828 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,27 min. Espectro de masas m/z 451, 453 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al 15%/n-heptano: Tr 36,7 min.
Ejemplo de referencia 56
N-{[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-prop-2-inilurea
El Ejemplo de referencia 56 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 10 (0,040 g) y propargilamina (0,006 g) usando diclorometano y trietilamina a una temperatura de 22°C para dar el compuesto del título (0,028 g).
CL-EM (sistema A) Tr 2,22 min. Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al 15%/n-heptano: Tr 12,25 min y 14,1 min.
Ejemplo de referencia 57
N-{[(2S)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-prop-2-inilurea
El Ejemplo de referencia 57 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 13 (0,1 g) y propargilamina (0,014 g) usando diclorometano y trietilamina a una temperatura de 22°C para dar el compuesto del título (0,064 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,40 min. Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al 15%/n-heptano: Tr 14,14 min.
Ejemplo de referencia 58
N-{[(2R)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-prop-2-inilurea
El Ejemplo de referencia 58 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 14 (0,12 g) y propargilamina (0,014 g) usando diclorometano y trietilamina a una temperatura de 22°C para dar el compuesto del título (0,057 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,37 min. Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al 15%/n-heptano: Tr 12,26 min.
Ejemplos de referencia 59-122
15
16
17
18
19
20
21
22
23
Ejemplo de referencia 123
Ácido 4-({[({[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)benzoico compuesto con N,N,N-trietilamina (1:1)
Se añadió hidróxido sódico (0,09 g) a una solución agitada del Ejemplo de referencia 105 (0,522 g) en una mezcla de agua (5 ml) y metanol (5 ml) a 20°C, y se continuó agitando a 20°C durante 18 h. El pH de la mezcla se ajustó a aproximadamente 6 por adición de hidróxido sódico acuoso 2 M y la mezcla se aplicó en dos porciones iguales a cartuchos de intercambio iónico (10 g, Isolute SCX preacondicionados con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido de trietilamina al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y evaporación de las primeras fracciones básicas a vacío dio el compuesto del título en forma de un sólido marrón (0,468 g).
CL-EM (Sistema A) R, 2,60 min. Espectro de masas m/z 452 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 124
Clorhidrato de 4-({[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)benzamida
Se añadió cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (2,0 ml) a una solución agitada del Ejemplo 1 (0,100 g) en metanol (10 ml), y se continuó agitando a 22°C durante 1 h. Los disolventes se evaporaron con una corriente de nitrógeno y el residuo se volvió a disolver en metanol (4 ml). Se añadió tolueno (4 ml) y los disolventes se evaporaron otra vez con una corriente de nitrógeno. El residuo se volvió a disolver en metanol (4 ml), se añadió tolueno (4 ml) y los disolventes se evaporaron otra vez con una corriente de nitrógeno. El residuo blanco se trituró en éter y el disolvente se evaporó con una corriente de nitrógeno antes de secar a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,117 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,25 min. Espectro de masas m/z 451 [MH^{+}].
RMN ^{1}H (D6 DMSO): 11,45 \delta (1H, s ancho, NH^{+}), 7,97-7,92 \delta (2H, d+s ancho, CH+NH Aromático) 7,82 \delta (2H, 1/2AA'BB', 2xCH Aromático), 7,75 \delta (1H, d, CH Aromático), 7,59 \delta (1H, dd, CH Aromático), 7,32 \delta (1H, s ancho, NH), 7,28 \delta (2H, 1/2AA'BB', 2xCH Aromático), 6,62, 6,28 \delta (2H, 2xs ancho v., CONH_{2}), 4,35 \delta (2H, AB, CH_{2}), 4,25 \delta (2H, s, CH_{2}), 3,95 \delta (1H, dd, CH), 3,88-3,79 \delta (2H, m, 2xCH), 3,28 \delta (1H, d ancho, CH), 3,25-3,18 \delta (2H, m ancho, 2xCH), 3,09 \delta (1H, dd, CH), 3,00 \delta (1H, m ancho, CH), 2,78 \delta (1H, m, CH).
Ejemplo de referencia 125
N-{[(2S)-4-(2,3-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-prop-2-inilurea
Una solución del Producto intermedio 22 (0,024 g) en diclorometano (1 ml) se agitó con el Producto intermedio 20 (0,033 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,022 ml) durante 3 h a 23°C. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX) eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se concentró a vacío y el residuo se disolvió en diclorometano (5 ml), y la solución se agitó con resina de poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut technologies, 0,256 g, 1,43 mmol/g) durante 16 h. La solución se drenó de la resina y la resina se lavó con diclorometano (8 ml); el filtrado y los lavados combinados se concentraron a vacío para dar el compuesto del título en forma de una goma amarillo pálido (0,02 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,17 min. Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 126
N-({(2S)-4-[(5-clorotien-2-il)metil]morfolin-2-il}metil)-N'-prop-2-inilurea
El Ejemplo de referencia 126 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 125 a partir Producto intermedio 23 (0,030 g). La purificación adicional usando un cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian Bond Elut), eluyendo con metanol al 0-5% en acetato de etilo , dio el compuesto del título en forma de una goma transparente (0,025 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,95 min. Espectro de masas m/z 328 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 127
N-{[(2S)-4-(3-clorobencil)morfolin-2-il]metil)-N'-prop-2-inilurea
El Ejemplo de referencia 127 se preparó de una forma análoga al Ejemplo de referencia 125 a partir del Producto intermedio 19 (0,029 g). La purificación adicional usando un cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian Bond Elut), eluyendo con metanol al 0-5% en acetato de etilo, dio el compuesto del título en forma de una goma transparente (0,021 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,93 min. Espectro de masas m/z 322 [MH^{+}].
Ejemplos de referencia 128-130
24
Ejemplo de referencia 131
4-({[({[4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)-N-metilbenzamida
El Ejemplo de referencia 123 (0,050 g), 1-hidroxibenzotriazol (0,066 g) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,116 g) se agitaron en N,N-dimetilformamida (4,2 ml) y se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,132 ml) a la mezcla. Se continuó agitando a 20ºC hasta que se obtuvo una solución transparente. Se añadió metilamina 2,0 M en tetrahidrofurano (0,379 ml) en una porción a la mezcla (1,0 ml) y la mezcla se agitó a 20ºC en atmósfera de nitrógeno durante 17 h. La mezcla se aplicó en dos porciones iguales a cartuchos de intercambio iónico (2x 2 g, Isolute SCX preacondicionados con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y evaporación de las fracciones básicas a vacío dio el producto en bruto. La purificación por cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de gel de sílice (8 g), eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 0,880 100:8:1, dio el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,0124 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,22 min. Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente etanol al 15% en n-heptano Tr 24,0 min y 27,7 min.
Ejemplos de referencia 132-135
25
Ejemplo de referencia 136
N-{[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[(2-metil-2H-tetrazol-5-il)metil]urea
Se añadió el Producto intermedio 30 (0,041 g) a una solución agitada del Producto intermedio 29 (0,110 g) en N,N-dimetilformamida (2 ml) a 22°C, y se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,052 ml). Después de agitar durante 20 h, la mezcla se aplicó en dos porciones iguales a cartuchos de intercambio iónico (10 g, Isolute SCX preacondicionado con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y evaporación de las primeras fracciones básicas a vacío dio el producto en bruto. La purificación por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice (cartucho de 8 g), eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 0,880 100:8:1, dio el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,0828 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,19 min. Espectro de masas m/z 414 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente etanol/ácido trifluoroacético al 0,1% al 30% en n-heptano Tr 10,1 min.
Ejemplos de referencia 137-144
26
27
Ejemplo de referencia 145
N-{[(2S)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[3-(etilsulfonil)propil]urea
Se añadieron el Producto intermedio 40 (0,0225 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,021 ml) a una solución del Producto intermedio 10 (0,044 g) en diclorometano (3 ml), y la mezcla se agitó a 22°C durante 19 h. Se añadió resina depuradora de formil-poliestireno (2,95 mmol/g, 0,02 g) y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se filtró, la resina se lavó con diclorometano, y el filtrado se aplicó directamente a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX). La elución con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol dio el producto en bruto (0,04 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut, cartucho de 1 g), eluyendo con diclorometano, éter, acetato de etilo, y acetona, dio el compuesto del título (0,029 mg).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,22 min. Espectro de masas m/z 452 [MH^{+}].
Ejemplos de referencia 146-159
28
29
30
Ejemplo de referencia 160
N-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[1-(metilsulfonil)piperidin-4-il]urea
Se añadió cloruro de metansulfonilo (0,009 ml) a una solución del Producto intermedio 16 (0,04 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,048 ml) en diclorometano (3 ml). La solución se agitó durante 5 h a 23°C. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX) eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol, para dar el compuesto del título en forma de una goma amarillo pálido (0,034 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,5 min. Espectro de masas m/z 479 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 161
N-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-{1-[(3,5-dimetilisoxazol-4-il)sulfonil]piperidin-4-il}urea
El Ejemplo de referencia 161 se hizo de una forma análoga a la del Ejemplo de referencia 160.
CL-EM (Sistema A) Tr 2,86 min. Espectro de masas m/z 561 [MH+].
Ejemplo de referencia 162
N-(1-benzoilpiperidin-4-il)-N'-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
Se añadió cloruro de benzoílo (0,014 ml) a una solución del Producto intermedio 16 (0,04 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,048 ml) en diclorometano (3 ml). La solución se agitó durante 5 h a 23°C. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX) eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se concentró a vacío y el residuo se purificó más usando un cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian Bond Elut), eluyendo secuencialmente con diclorometano, acetato de etilo, acetona, acetonitrilo, y metanol, para dar el compuesto del título en forma de una goma transparente (0,024 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,63 min. Espectro de masas m/z 506 [MH^{+}].
Ejemplos de referencia 163-168
31 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 169
N-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}tiomorfolin-4-carboxamida
Se añadieron 1,4-tioxano (0,02 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,04 ml) a una solución del Producto intermedio 10 (0,08 g) en diclorometano (2 ml). La mezcla se agitó a 23°C durante 16 h, y el disolvente se evaporó a vacío. El residuo se disolvió en diclorometano (3 ml), y la solución se agitó con resina de poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut Technologies, 0,14 g, 1,45 mmol/g) durante 2 h. La solución se drenó de la resina, y la resina se lavó con diclorometano (6 ml) y metanol (3 ml); el filtrado y los lavados combinados se concentraron a vacío. El residuo se purificó más por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX), eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol, para dar el compuesto del título en forma de una goma amarillo pálido (0,065 g).
CL-EM (sistema A) Tr 2,55 min. Espectro de masas m/z 404 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplos de referencia 170-174
\vskip1.000000\baselineskip
33 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 175
1,1-dióxido de N-{[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}tiomorfolin-4-carboxamida
Se añadió Oxone (0,135 g) al Ejemplo de referencia 169 (0,06 g) en metanol:agua (10:1, 4 ml) a 23°C en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó durante 18 h. El metanol se separó a vacío, la capa acuosa se diluyó con solución de sulfito sódico (al 5%, 5 ml) y el producto se extrajo con diclorometano (8 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (5 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,055 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,34 min. Espectro de masas m/z 436 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplos de referencia 176-181
\vskip1.000000\baselineskip
35 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 182
N-{[1-(Ciclopropilcarbonil)piperidin-4-il]metil}-N'-{[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}urea
Se añadió cloruro de ciclopropanocarbonilo (0,014 ml) a una solución del Producto intermedio 18 (0,54 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,063 ml) en diclorometano (2 ml). La solución se agitó durante 3 h a 23°C. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX) eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se concentró a vacío y el residuo se purificó más usando un cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian Bond Elut), eluyendo con metanol al 0-1% en acetato de etilo, para dar el compuesto del título en forma de una goma transparente (0,023 g).
CL/EM (sistema A) Tr 2,35 min. Espectro de masas m/z 483 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia 183
N-{[(2S)-4-(3,4-Diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-{[1-(metilsulfonil)piperidin-4-il]metil}urea
Se añadió cloruro de metansulfonilo (0,013 ml) a una solución del Producto intermedio 18 (0,054 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,063 ml) en diclorometano (2 ml). La solución se agitó durante 16 h a 23°C. El disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX) eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol, para dar el compuesto del título en forma de una goma transparente (0,035 g).
CL/EM (sistema A) Tr 2,34 min. Espectro de masas m/z 493 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 184
4-({[({[4-(3,4-Diclorobencil)-1,4-oxazepan-2-il]metil)amino)carbonil]amino}metil)benzamida
A una solución de 1,1'-carbonildiimidazol (0,041 g) en diclorometano (2 ml) a 0°C se añadió gota a gota una solución del Producto intermedio 41 (0,079 g) en diclorometano (2 ml). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a 22°C durante 1 h, se volvió a enfriar a aproximadamente 0°C y se añadió gota a gota una solución de 4-aminometilbenzamida (0,041 g) en una mezcla de diclorometano y N,N-dimetilformamida 1:1 (4 ml). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a 22°C durante 1 h, y se aplicó en dos porciones iguales a cartuchos de intercambio iónico (2 g, Isolute SCX preacondicionado con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y evaporación de las fracciones básicas a vacío dio el producto en bruto. La purificación por cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de gel de sílice (8 g), eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 0,880 150:8:1, dio el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,0186 g).
CL-EM (sistema A) Tr 2,22 min. Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}]
Ejemplo de referencia 185
4-[({[({(2S)-4-[1-(3,4-Diclorofenil)etil]morfolin-2-il}metil)amino]carbonil)amino)metil]benzamida, isómero II
El Producto intermedio 35 (0,045 g) en diclorometano (1 ml) se trató con N,N-diisopropiletilamina (0,021 ml) en un vial de 5 ml (Pierce Reacti-Vial™) seguido de 4-aminometilbenzamida (0,017 g). La mezcla se selló en atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La solución se aplicó después a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) que se había tratado previamente con metanol. El cartucho se eluyó con metanol (7 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (3 volúmenes de columna) y las fracciones básicas se combinaron y concentraron a vacío para dar una goma amarilla. La purificación adicional por cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut, cartucho de 1 g), eluyendo con metanol al 10% en acetato de etilo, dio el compuesto del título en forma de una goma amarilla (0,036 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,25 min. Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}]
Ejemplo de referencia 186
4-[({[({(2S)-4-[1-(3,4-Diclorofenil)etil]morfolin-2-il}metil)amino]carbonil}amino)metil]benzamida, isómero I
El Producto intermedio 34 (0,045 g) en diclorometano (1 ml) se trató con N,N-diisopropiletilamina (0,021 ml) en un vial de 5 ml (Pierce Reacti-Vial™) seguido de 4-aminometilbenzamida (0,017 g). La mezcla se selló en atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La solución se aplicó después a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) que se había tratado previamente con metanol. El cartucho se eluyó con metanol (7 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (3 volúmenes de columna) y las fracciones básicas se combinaron y concentraron a vacío para dar una goma amarilla. La purificación adicional por cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut, cartucho de 1 g), eluyendo con metanol al 10% en acetato de etilo, dio el compuesto del título en forma de una goma amarilla (0,036 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,27 min.
Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 187
4-{[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}-N-metilbutanamida
Se añadió N,N'-carbonildiimidazol (0,0132 g) a una solución agitada del Producto intermedio 26 (0,030 g) en N,N-dimetilformamida (2 ml), y la mezcla se agitó a 22°C en atmósfera de nitrógeno durante 40 min. Se añadió metilamina (solución 2,0 M en tetrahidrofurano, 0,102 ml) se continuó agitando a 22°C durante 17 h. La mezcla se aplicó directamente a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) y se eluyó con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol para dar una goma (0,042 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut, cartucho de 1 g), eluyendo con cloroformo, éter, acetato de etilo, acetona, y metanol, dio una goma (0,025 g), que se purificó más por HPLC preparativa dirigida por masas para dar el compuesto del título en forma de una goma incolora (7,2 mg).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,11 min. Espectro de masas m/z 417 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia 188
3-{[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}-N-metilpropan-1-sulfonamida
El Ejemplo de referencia 188 se preparó de una forma análoga a la del Ejemplo de referencia 189.
CL-EM (Sistema A): Tr 2,20 min. Espectro de masas m/z 453 [MH+].
Ejemplo de referencia 189
N-{[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}-N'-[3-(pirrolidin-1-ilsulfonil)propil]urea
Se añadió una solución del Producto intermedio 28 (0,027 g) en N,N-dimetilformamida (1 ml) y diclorometano (2 ml) que contenía N,N-diisopropiletilamina (0,041 ml) a una solución agitada del Producto intermedio 13 (0,051 g) en diclorometano seco (2 ml) a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 21 h. La mezcla se aplicó directamente a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) y se eluyó con metanol (6 volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (3 volúmenes de columna); la evaporación de las fracciones de metanol/amoniaco dio el producto en bruto (0,063 g). La purificación por cromatografía en gel de sílice (cartucho de 2 g Varian Bond Elut), eluyendo con cloroformo, éter, acetato de etilo, acetona, y metanol, dio el compuesto del título en forma de una goma (0,036 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,41 min. Espectro de masas m/z 493 [MH^{+}].
Datos biológicos
Los compuestos de los Ejemplos y Ejemplos de referencia se ensayaron en ensayos de unión a CCR-3 y/o de quimiotaxis de eosinófilos (ensayos (a) y (b)) y se obtuvieron los siguientes resultados:
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(Tabla pasa a página siguiente)
37
Los compuestos de los Ejemplos de referencia 1, 6-7, 9-12, 15, 17, 20, 24, 27-33, 35-36, 39-43, 45-46, 49-51, 53, 55-56, 58-135, 137-148 y 150-189 también se ensayaron en el ensayo de unión a CCR-3 (ensayo (a)) y alcanzaron un valor de pCI50 mayor que 5,0.
El Ejemplo de referencia 14 cuando se ensayó en el modelo in vivo de cobayas sensibilizadas con ovalbúmina (ensayo (c); 0,2 - 20 mg/kg) mostró inhibición de la eosinofilia pulmonar y la hiperreactividad bronquial. A lo largo de la memoria descriptiva y las siguientes reivindicaciones, salvo que el contexto requiera otra cosa, la palabra "comprender" y las variaciones tales como "comprende" y "que comprende" se entenderá que implican la inclusión de un número entero o etapa o grupo de números enteros establecidos, pero no la exclusión de cualquier otro número entero o etapa o grupo de números enteros.

Claims (11)

1. Un compuesto de fórmula (I):
38
que es 4-({[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)benzamida y sales y solvatos del mismo.
2. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, mezclado con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.
3. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, para usar como producto farmacéutico.
4. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o profilaxis de una enfermedad inflamatoria.
5. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o profilaxis de la bronquitis, asma, EPOC, o rinitis.
6. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o profilaxis del asma.
7. Un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o profilaxis de la conjuntivitis, prurito, o poliposis nasal.
8. Uso de un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de la bronquitis, asma, EPOC o rinitis.
9. Uso de un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis del asma.
10. Uso de un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de la conjuntivitis, prurito o poliposis nasal.
11. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
39
que es [(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato de 4-nitrofenilo, con un compuesto de fórmula (III)
40
que es 4-aminometilbenzamida.
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