ES2275729T3 - Compuestos utiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I): que es 4-({[({[(2S)-4-(3, 4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)benzamida y sales y solvatos del mismo.
Description
Compuestos útiles en el tratamiento de
enfermedades inflamatorias.
Esta invención se refiere a un nuevo compuesto
químico, a procedimientos para su preparación, a formulaciones
farmacéuticas que lo contienen y a su uso en terapia.
La inflamación es una respuesta primaria al daño
tisular o invasión microbiana y se caracteriza por la adhesión de
leucocitos al endotelio, diapédesis y activación en el tejido. La
activación de leucocitos puede dar como resultado la generación de
especies de oxígeno tóxicas (tales como el anión superóxido), y la
liberación de productos de gránulos (tales como peroxidasas y
proteasas). Los leucocitos de la circulación incluyen neutrófilos,
eosinófilos, basófilos, monocitos y linfocitos. Las diferentes
formas de inflamación implican diferentes tipos de leucocitos que
se infiltran, siendo regulado el perfil particular por el perfil de
la molécula de adhesión, citocinas y expresión del factor
quimiotáctico en el tejido.
La función principal de los leucocitos es
defender al huésped de los organismos invasores, tales como
bacterias y parásitos. Una vez que un tejido es dañado o infectado,
se producen una serie de acontecimientos que producen el
reclutamiento local de leucocitos de la circulación al tejido
afectado. El reclutamiento de leucocitos está controlado para
permitir la destrucción ordenada y fagocitosis de las células
extrañas o muertas, seguido de la reparación del tejido y
resolución del infiltrado inflamatorio. Sin embargo, en los estados
inflamatorios crónicos, a menudo el reclutamiento no es adecuado,
la resolución no es controlada de forma adecuada y la reacción
inflamatoria produce la destrucción de tejido. Hay cada vez más
pruebas de que la inflamación bronquial que es característica del
asma, representa una forma especializada de la inmunidad mediada por
células, en la que los productos de las citocinas, tales como la
IL-4 e IL-5 liberadas por los
linfocitos Th2 T, orquestan la acumulación y activación de
granulocitos, en particular eosinófilos, y en menor medida
basófilos. Mediante la liberación de proteínas básicas citotóxicas,
mediadores proinflamatorios y radicales del oxígeno, los eosinófilos
generan daños en la mucosa e inician mecanismos que subyacen en la
hiperreactividad bronquial. Por lo tanto, es probable que el
bloqueo del reclutamiento y activación de las células Th2 y
eosinófilos, tenga propiedades antiinflamatorias en el asma.
Además, los eosinófilos se han implicado en otros tipos de
enfermedades tales como la rinitis, eccema, síndrome del intestino
irritable e infecciones parasitarias.
Las quimiocinas son una gran familia de
proteínas pequeñas que están implicadas en el tráfico y
reclutamiento de leucocitos (para una revisión véase Luster, New
Eng. J. Med., 338, 436-445 (1998)). Son
liberadas por una amplia variedad de células y actúan para atraer y
activar diferentes tipos de células, incluyendo eosinófilos,
basófilos, neutrófilos, macrófagos, linfocitos T y B. Hay dos
familias principales de quimiocinas, las quimiocinas CXC-(\alpha)
y CC-(\beta), clasificadas según la separación de dos restos de
cisteína conservados cerca del extremo amino de las proteínas
quimiocinas. Las quimiocinas se unen a receptores de la superficie
celular específicos que pertenecen a la familia de proteínas
acopladas a la proteína G caracterizadas por siete dominios
transmembrana (para una revisión véase Luster, 1998). La activación
de los receptores de quimiocinas da como resultado, entre otras
respuestas, un aumento del calcio intracelular, cambios en la forma
de la célula, aumento de la expresión de moléculas de adhesión
celular, desgranulación y estimulación de la migración celular
(quimiotaxis).
Hasta la fecha se han identificado 9 miembros de
los receptores de quimiocinas CC (CCR-1 a 9). Para
la invención actual tiene una importancia particular el receptor de
quimiocinas CC 3 (CCR-3), que se expresa
predominantemente en eosinófilos, y también en basófilos, células
cebadas, y células Th2 (Luster, 1998). Las quimiocinas que actúan
en el CCR-3, tales como RANTES,
MCP-3 y MCP-4, se sabe que reclutan
y activan eosinófilos. Tienen un interés particular la eotaxina y
eotaxina-2, que se unen específicamente a
CCR-3. La localización y función de los
CCR-3 de quimiocinas indican que tienen una función
principal en el desarrollo de enfermedades alérgicas tales como el
asma. Por lo tanto el CCR-3 se expresa
específicamente en todas los tipos de células principales
implicadas en las respuestas alérgicas inflamatorias. Las
quimiocinas que actúan en el CCR-3 son generadas
como respuesta a estímulos inflamatorios y actúan para reclutar
estos tipos de células en sitios de inflamación, donde producen su
activación (por ejemplo, Griffiths y col., J. Exp. Med.,
179, 881-887 (1994), Lloyd y col., J.
Exp. Med., 191, 265-273 (2000)). Además,
los anticuerpos monoclonales
anti-CCR-3 inhiben completamente la
interacción de la eotaxina con eosinófilos (Heath, H. y col., (1997)
J. Clin. Invest. 99 (2), 178-184),
mientras que un anticuerpo para la quimiocina específica de
CCR-3, la eotaxina, reduce tanto la hiperreactividad
bronquial como la eosinofilia pulmonar en un modelo de asma en
animales (Gonzalo y col., J. Exp. Med., 188,
157-167 (1998)). Por lo tanto, diferentes pruebas
indican que es muy probable que los antagonistas en el receptor
CCR-3 tengan uso terapéutico para tratar una
variedad de afecciones inflamatorias.
Se han publicado una serie de solicitudes de
patente relacionadas con los antagonistas de CCR-3
antes de la fecha de presentación de esta solicitud. Por ejemplo,
los documentos EP 0903349, FR 2785902, WO 00/29377, WO 00/31032 y
WO 00/31033 (todos en nombre de F.
Hoffmann-La-Roche AG) describen
compuestos basados en pirrolidina, piperidina y piperazina, que son
todos distintos de los compuestos de la presente invención.
Los documentos WO 99/55324, WO 00/04003, WO
00/27800, WO 00/27835, WO 00/27843, WO 00/41685 y WO 00/53172
(todos en nombre de SmithKline Beecham Corporation) describen una
variedad de compuestos como antagonistas de CCR-3
que no están relacionados con los compuestos de la presente
invención.
El documento WO 00/34278 (Toray Industries Inc.)
describe compuestos derivados de triazolo condensados como
inhibidores de quimiocinas. Los documentos WO 00/35449, WO 00/35451,
WO 00/35452, WO 00/35453, WO 00/35454, WO 00/35876 y WO 00/35877
(Du Pont Pharmaceuticals Company) describen compuestos de piperidina
heterocíclicos y de N-ureidoalquilo como
antagonistas de CCR-3.
Los documentos WO 00/51607 y WO 00/51608 (Merck
& Co. Inc.) describen una serie de pirrolidinas moduladoras de
la actividad del receptor de quimiocinas.
El documento WO 00/53600 (Banyu Pharmaceutical
Co. Ltd.) describe derivados de piperidina como inhibidores en el
receptor CCR-3.
El documento WO 01/14333 (AstraZeneca UK Ltd.)
describe compuestos de piperidina sustituidos como moduladores de
la actividad del receptor de quimiocinas.
El documento EP 0760362 (Nisshin Flour Milling
Co. Ltd.) describe derivados de morfolinoalquilurea que se describe
que son útiles en el tratamiento de enfermedades del tracto
digestivo.
El documento JP 04208267A (Mitsui Seiyaku Kogyo
KK) también describe derivados de morfolinoalquilurea que se
describe que son útiles como antieméticos, para activar la
peristalsis y mejorar la función gastrointestinal.
El documento EP 243959A (Dainippon Pharm KK)
describe derivados de N-morfolinilalquilbenzamida
O-sustituidos útiles como agentes potenciadores de
la motilidad gastrointestinal.
El documento JO 1117-882A
(Dainippon Pharm KK) describe derivados de
morfolinilalquilenilcarboxamida heterocíclicos útiles como
antieméticos.
El documento WO 00/71518 (Sepracor Inc) describe
derivados de morfolinoalquilamida útiles en el tratamiento del
dolor, adicción a drogas y tinitus.
Los documentos WO 97/48695 y WO 97/48397 (Klinge
Pharma Gmbh) describe compuestos ácido-amida de
piridil-alcano, -alqueno y/o -alquino útiles como
agentes citostáticos, inmunomoduladores o inmunosupresores.
Kato y col., (1992) Chem. Pharm. Bull.
40(3), 652-660, Kato y col., (1991)
J. Med. Chem. 34(2), 616-624 y
Kato y col., (1990) J. Med. Chem. 33(5),
1406-1413 describen una serie de morfolinbenzamidas
que se describe que son agentes gastrocinéticos selectivos y
potentes.
Ahora los autores de la invención han
descubierto un nuevo compuesto antagonista de CCR-3
que bloquea la migración/quimiotaxis de eosinófilos, afectando en
consecuencia a las propiedades antiinflamatorias. Por lo tanto, este
compuesto tiene un potencial beneficio terapéutico, especialmente
al proporcionar protección frente al daño tisular inducido por
eosinófilos, basófilos y células Th2 en enfermedades en las que
están implicados dichos tipos de células, en particular
enfermedades alérgicas, incluyendo pero sin limitar, asma bronquial,
rinitis alérgica y dermatitis atópica.
Además de una función principal en los
trastornos inflamatorios, las quimiocinas y sus receptores también
tienen una función en la enfermedad infecciosa. Los citomegalovirus
de mamífero, virus del herpes y virus de la viruela expresan
homólogos del receptor de quimiocinas, que pueden ser activados por
quimiocinas CC humanas tales como RANTES y MCP-3
(para una revisión, véase Wells and Schwartz, Curr. Opin.
Biotech., 8, 741-748, 1997). Además, los
receptores de quimiocinas humanos, tales como
CXCR-4, CCR-5 y
CCR-3, pueden actuar como
co-receptores para la infección de células de
mamíferos por microbios tales como los virus de inmunodeficiencia
humana (VIH). El CCR-3 sirve como
co-receptor para algunas cepas clínicas del
VIH-1 y facilita la entrada vírica (por ejemplo
Choe, H. y col, Cell, 1996, 85, 1135-1148).
Un ligando clave para el CCR-3, la eotaxina,
bloquea el proceso de entrada del VIH. Por lo tanto, los
antagonistas de los receptores de quimiocinas, incluidos los
antagonistas de CCR-3, pueden ser útiles para
bloquear la infección por el VIH de células que expresan el
CCR-3 o para prevenir la manipulación de las
respuestas celulares inmunitarias por virus tales como los
citomegalovirus.
Por lo tanto, de acuerdo con un aspecto de la
invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I):
en la
que:
R^{1} representa
4-amidobencilo;
R^{2} representa hidrógeno;
R^{3} representa hidrógeno;
X representa metileno;
R^{4} y R^{5} de forma independiente
representan hidrógeno;
Z representa CH_{2};
R^{6} representa
3,4-diclorofenilo;
a y b representan ambos 1;
y sales y solvatos del
mismo.
Las referencias a "arilo" incluyen
referencias a anillos aromáticos carbocíclicos monocíclicos (por
ejemplo, fenilo) y anillos aromáticos carbocíclicos bicíclicos (por
ejemplo, naftilo) y las referencias a "heteroarilo" incluyen
referencias a anillos aromáticos heterocíclicos mono- y bicíclicos
que contienen 1-3 heteroátomos seleccionados de
nitrógeno, oxígeno y azufre. Las referencias a "heteroarilo"
también se pueden extender para que incluyan referencias a anillos
aromáticos heterocíclicos mono- y bicíclicos que contienen 4
heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los
ejemplos de anillos aromáticos heterocíclicos monocíclicos
incluyen, por ejemplo, piridinilo, pirimidinilo, tiofenilo,
furanilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo,
tiazolilo, tiadiazolilo. Los ejemplos adicionales de anillos
aromáticos heterocíclicos monocíclicos incluyen pirazinilo,
tetrazolilo o imidazolilo. Los ejemplos de anillos aromáticos
heterocíclicos bicíclicos incluyen, por ejemplo, quinolinilo o
indolilo. Los ejemplos adicionales de anillos aromáticos
heterocíclicos bicíclicos incluyen bencimidazolilo. Todavía más
ejemplos de anillos aromáticos heterocíclicos bicíclicos incluyen
dihidrobenzofuranilo y pirrolopiridinilo. Los anillos aromáticos
carbocíclicos y heterocíclicos pueden estar opcionalmente
sustituidos, por ejemplo, con uno o más grupos alquilo
C_{1-6}, alquenilo C_{2-6},
halógeno, alcoxi C_{1-6}, ciano, hidroxi, nitro,
amino, W, -N(CH_{3})_{2},
-NHCO-alquilo(C_{1-6}),
-OCF_{3}, -CF_{3},
-COO-alquilo(C_{1-6}),
-OCHF_{2}, -SCF_{3}, -CONR^{19}R^{20},
-SO_{2}NR^{19}R^{20} (en los que R^{19} y R^{20} de forma
independiente representan hidrógeno, alquilo
C_{1-6} o cicloalquilo C_{3-8}),
-NHSO_{2}CH_{3}, -SO_{2}CH_{3} o -SCH_{3}. Un
sustituyente adicional de anillos aromáticos carbocíclicos y
heterocíclicos puede ser -COOH. Otros sustituyentes adicionales de
anillos aromáticos carbocíclicos y heterocíclicos pueden ser
-CH_{2}N(CH_{3})_{2} o uno o más grupos -SH, en
los que se puede observar que dicho grupo puede tautomerizarse para
formar un grupo =S.
Las referencias a alquilo incluyen referencias a
isómeros alifáticos tanto de cadena lineal como de cadena
ramificada de los alquilos correspondientes. Se observará que las
referencias a alquileno y alcoxi se interpretarán de forma
similar.
Las referencias a cicloalquilo
C_{3-8} incluyen referencias a todos los isómeros
alicíclicos (incluidos ramificados) de los correspondientes
alquilo.
Las sales adecuadas de los compuestos de fórmula
(I) incluyen sales fisiológicamente aceptables y sales que pueden
no ser fisiológicamente aceptables pero pueden ser útiles para
preparar compuestos de fórmula (I) y sales de los mismos
fisiológicamente aceptables. Si es adecuado, las sales de adición de
ácidos pueden derivar de ácidos inorgánicos u orgánicos, por
ejemplo, clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, fosfatos, acetatos,
benzoatos, citratos, succinatos, lactatos, tartratos, fumaratos,
maleatos,
1-hidroxi-2-naftoatos,
palmoatos, metansulfonatos, formiatos o trifluoroacetatos. Los
ejemplos de solvatos incluyen los hidratos.
El compuesto de fórmula (I) y las sales y
solvatos del mismo, se pueden preparar por la metodología descrita
a continuación en el presente documento, que constituye un aspecto
adicional de esta invención.
Un procedimiento de acuerdo con la invención
para preparar un compuesto de fórmula (I) comprende:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula
(II)
en la que R^{1}, R^{2},
R^{3}, R^{4}, R^{5}, X, a y b son como se han definido antes,
o un derivado protegido del mismo, con un compuesto de
fórmula
L^{1}-Z-R^{6},
en la que Z y R^{6} son como se
han definido antes y L^{1} representa un grupo saliente adecuado;
o
(b) formar un compuesto de fórmula (I) en la que
R^{2} representa hidrógeno, que comprende hacer reaccionar un
compuesto de fórmula (III)
en la que R^{3}, R^{4},
R^{5}, R^{6}, Z, X, a y b son como se han definido antes, o un
derivado protegido del mismo, con un compuesto de
fórmula
R^{1}-N=C=O,
en la que R^{1} es como se ha
definido antes;
o
(c) hacer reaccionar un compuesto de fórmula
(IV)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{3}, R^{4},
R^{5}, R^{6}, Z, X, a y b son como se han definido antes, o un
derivado protegido del mismo, y L^{2} representa un grupo
saliente adecuado, o un derivado protegido del mismo, con un
compuesto de fórmula
(V)
en la que R^{1} y R^{2} son
como se han definido antes, o un derivado protegido del mismo;
o
(d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula
(VI)
en la que R^{1} y R^{2} son
como se han definido antes, y L^{3} representa un grupo saliente
adecuado, o un derivado protegido del mismo, con un compuesto de
fórmula (III). o un derivado protegido del mismo;
o
(e) desproteger un compuesto de fórmula (I) que
está protegido, o
(f) formar un compuesto de fórmula (I) en la que
Z representa CR^{10}R^{7}(CH_{2})_{n}, en el
que R^{10} representa hidrógeno, que comprende hacer reaccionar
un compuesto de fórmula (II) o un derivado protegido del mismo con
un compuesto de fórmula
R^{7}CO(CH_{2})_{n}R^{6}, seguido de reducción
de la imina resultante.
El procedimiento (a) se puede llevar a cabo en
presencia de un disolvente inerte, por ejemplo,
N,N-dimetilformamida opcionalmente en presencia de
una base tal como N,N-diisopropiletilamina a una
temperatura adecuada, por ejemplo, temperatura ambiente. Los
ejemplos de grupos salientes adecuados (L^{1}) incluyen halógeno,
por ejemplo cloro.
El procedimiento (b) se puede llevar a cabo en
presencia de un disolvente inerte, p. ej diclorometano, a una
temperatura adecuada por ejemplo a temperatura ambiente.
Los procedimientos (c) y (d) se pueden llevar a
cabo típicamente en presencia de una base adecuada, por ejemplo
piridina, a una temperatura adecuada, por ejemplo 110ºC, en los que
los grupos salientes L^{2} y L^{3} pueden representar
4-nitrofenoxi. Como alternativa, cuando L^{2} y
L^{3} representan 4-nitrofenoxi, las condiciones
adecuadas pueden implicar el uso de
N,N-diisopropiletilamina como una base adecuada, y
diclorometano o N,N-dimetilformamida como un
disolvente adecuado. Como alternativa, cuando L^{2} y L^{3} son
4-tiofenoxi unidos a la resina de Merrifield, los
procedimientos (c) y (d) se pueden llevar a cabo con un aditivo
adecuado, por ejemplo N-metilpirrolidinona en un
horno de microondas, por ejemplo, a una potencia de 600 W durante 5
min. Otros grupos salientes adecuados incluyen imidazolilo. Cuando
L^{2} o L^{3} representan imidazolilo, las condiciones
adecuadas comprenden el uso de 1,1’-carbonildiimidazol en
disolventes adecuados tales como diclorometano y
N,N-dimetilformamida a una temperatura adecuada, por
ejemplo, entre 0ºC y 22ºC.
En el procedimiento (e), los ejemplos de grupos
protectores y los medios para su eliminación se pueden encontrar en
T. W. Greene and P.G.M. Wuts "Protective Groups in Organic
Synthesis" (J. Wiley and Sons, 3^{rd} Ed. 1999). Los grupos
protectores de amina adecuados incluyen sulfonilo (por ejemplo
tosilo), acilo (por ejemplo benciloxicarbonilo o
t-butoxicarbonilo) y arilalquilo (p. ej bencilo),
que se pueden eliminar por hidrólisis o hidrogenolisis según sea
adecuado. Otros grupos protectores de amina adecuados incluyen
trifluoroacetilo (-COCF_{3}) que se puede eliminar por hidrólisis
catalizada por base o un grupo bencilo unido a resina en fase
sólida, tal como un grupo 2,6-dimetoxibencilo unido
a la resina de Merrifield (conector Ellman) o un grupo
2,6-dimetoxi-4-[2-(poliestirilmetoxi)etoxi]bencilo,
que se puede eliminar por hidrólisis catalizada por ácido, por
ejemplo con ácido trifluoroacético.
El procedimiento (f) se puede llevar a cabo en
presencia de un ácido adecuado, por ejemplo ácido acético, y un
agente reductor adecuado, por ejemplo triacetoxiborohidruro sódico
en un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano a una
temperatura adecuada, por ejemplo a temperatura ambiente.
Los compuestos de fórmula (II) en forma del
isómero R, en la que R^{2} y R^{3} representan ambos hidrógeno,
X representa metileno y a y b representan 1, y R^{4} y R^{5}
representan ambos hidrógeno, se pueden preparar de acuerdo con el
siguiente procedimiento:
en la que R^{1} es como se ha
definido antes y P^{1} es un grupo protector adecuado, por ejemplo
bencilo.
Los compuestos de fórmula (VIII) se pueden
preparar como se describe en el documento EP 0995746.
La etapa (i) típicamente comprende el uso de un
disolvente inerte, por ejemplo diclorometano, a una temperatura
adecuada, por ejemplo a temperatura ambiente. La etapa (ii)
típicamente comprende una reacción de desprotección sencilla, por
ejemplo puede comprender el uso de paladio sobre carbono activado al
10% en presencia de formiato amónico y un disolvente adecuado, por
ejemplo etanol.
Los compuestos de fórmula (II)^{a} en
forma del isómero S, en la que R^{1} es como se ha definido antes,
se pueden preparar por un procedimiento análogo.
\newpage
Los compuestos de fórmula (IV) se pueden
preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
en la que R^{3}, R^{4},
R^{5}, R^{6}, X, a, b y Z son como se han definido antes, y
L^{2} representa un grupo saliente adecuado como se ha definido
antes, por ejemplo 4-nitrofenoxi o
4-tiofenoxi unido a la resina de Merrifield, y
L^{4} representa un grupo saliente más lábil que L^{2} por
ejemplo cloro o 4-nitrofenoxi. Cuando L^{2}
representa 4-nitrofenoxi y L^{4} representa cloro,
la etapa (i) se puede llevar a cabo en un disolvente adecuado, tal
como diclorometano, en presencia de una base tal como trietilamina a
una temperatura adecuada tal como temperatura ambiente, tal como
temperatura ambiente. Cuando L^{2} representa
4-tiofenoxi unido a la resina de Merrifield y
L^{4} representa 4-nitrofenoxi, la etapa (i) se
puede llevar a cabo en un disolvente adecuado tal como
N,N-dimetilformamida a una temperatura adecuada, tal
como temperatura ambiente. Como alternativa L^{2} y L^{4}
pueden representar imidazol, y la etapa (i) se puede llevar a cabo
con 1,1'-carbonildiimidazol, en un disolvente
adecuado, por ejemplo una mezcla de diclorometano y
N,N'-dimetilformamida a una temperatura adecuada,
p. ej, entre 0°C y
22°C.
Los compuestos de fórmula (III) se pueden usar
en forma protegida, en los que, por ejemplo el grupo amina está
protegido cuando R^{3} representa hidrógeno. Los grupos
protectores adecuados están entre los descritos antes.
Los compuestos de fórmula (III) se pueden
preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
\vskip1.000000\baselineskip
en el que R^{3}, R^{4},
R^{5}, R^{6}, X, a, b y Z son como se han definido antes y
L^{1} representa un grupo saliente adecuado por ejemplo cloro, y
P^{2} representa un grupo protector adecuado por ejemplo uno
mencionado antes, tal como -COCF_{3}. La etapa (i) comprende el
uso de un disolvente adecuado por ejemplo
N,N-dimetilformamida en presencia de reactivos
adecuados, por ejemplo yoduro sódico y carbonato potásico a una
temperatura adecuada por ejemplo temperatura ambiente. La etapa (ii)
comprende desprotección en condiciones convencionales adecuadas
para los grupos protectores. Cuando P^{2} representa -COCF_{3},
la desprotección se puede lograr mediante el uso de agua y metanol
en presencia de carbonato potásico a temperatura ambiente. Los
compuestos de fórmula (III) en la que Z representa
CR^{10}R^{7}(CH_{2})_{n} (en el que R^{10}
representa hidrógeno), también se pueden preparar por aminación
reductora de los compuestos de fórmula (XI) de una forma análoga a
la descrita en el procedimiento (h)
anterior.
Los compuestos de fórmula (III) en la que
R^{3} representa hidrógeno, X representa metileno, a y b
representan 1 y R^{4} y R^{5} están ambos unidos al anillo de
morfolina en la posición 5, se pueden preparar de acuerdo con el
siguiente procedimiento:
en el que R^{6} y Z son como se
han definido antes, y L^{1} representa un grupo saliente adecuado,
por ejemplo cloro. La etapa (i) comprende calentar en ausencia de
un disolvente a entre 50 y 60ºC. La etapa (ii) comprende calentar
con
2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
a 80°C en atmósfera de nitrógeno, seguido de agitación con ácido
sulfúrico concentrado a
150ºC.
Los compuestos de fórmula (III) en la que
R^{3} representa H, se pueden preparar de acuerdo con el siguiente
procedimiento:
en el que R^{4}, R^{5},
R^{6}, X, a, b y Z son como se han definido antes y L^{1}
representa un grupo saliente adecuado por ejemplo cloro. La etapa
(i) comprende calentar un compuesto de fórmula (XIV; resina de
Merrifield) con carbonato sódico en un disolvente adecuado, por
ejemplo dimetilsulfóxido a una temperatura adecuada por ejemplo
150°C. La etapa (ii) comprende hacer reaccionar un compuesto de
fórmula (XV) con un compuesto de fórmula (XVI) en presencia de un
disolvente adecuado por ejemplo tetrahidrofurano, a una temperatura
adecuada por ejemplo temperatura ambiente. La etapa (iii) comprende
el uso de un disolvente adecuado por ejemplo
N,N-dimetilformamida y una base adecuada, por
ejemplo N,N-diisopropiletilamina a una temperatura
adecuada por ejemplo 70°C, seguido de desprotección en condiciones
convencionales adecuadas para el grupo protector de la resina de
Merrifield, por ejemplo hidrólisis catalizada por
ácido.
Los compuestos de fórmula (VII) se pueden
preparar de acuerdo con el siguiente procedimiento:
en el que R^{2}, R^{3},
R^{4}, R^{5}, R^{6}, Y^{1}, Z, X, a y b son como se han
definido antes, L^{2} representa un grupo saliente adecuado, por
ejemplo 4-nitrofenoxi y P^{3} representa un grupo
protector adecuado, por ejemplo, alquilo C_{1-6},
preferiblemente
t-butilo.
La etapa (i) comprende típicamente el uso de una
base adecuada, por ejemplo N,N-diisopropiletilamina
y un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano, a una
temperatura adecuada, por ejemplo temperatura ambiente.
La etapa (ii) comprende típicamente el uso de un
reactivo ácido adecuado, por ejemplo cloruro de hidrógeno 4 M en
dioxano a una temperatura adecuada, por ejemplo temperatura
ambiente.
Los compuestos de fórmulas (V), (VI), (VIII),
(X), (XI), (XII), (XIV), (XVI) y (XVIII) son conocidos o se pueden
preparar de acuerdo con procedimientos conocidos.
Los compuestos de fórmula
L^{1}-Z-R^{6}, R^{1}N=C=O,
R^{7}CO(CH_{2})_{n}R^{6},
alquil(C_{1-6})-NHR^{18},
y J^{2}-H también son conocidos o se pueden
preparar de acuerdo con procedimientos conocidos.
Los compuestos de fórmula (II) se pueden
preparar de acuerdo con procedimientos análogos a los descritos
antes para los compuestos de fórmula (I), usando la química de
grupos protectores convencional. Por ejemplo, usando la protección
adecuada para el NH de la morfolina, tal como protección con
t-butoxicarbonilo.
La actividad biológica de los compuestos de la
invención se puede ensayar in vitro e in vivo de
acuerdo con los siguientes ensayos:
Se usó un SPA (ensayo de centelleo de
proximidad) de unión competitiva a CCR-3 para
evaluar la afinidad de los nuevos compuestos al
CCR-3. Se mezclaron membranas preparadas a partir de
células K562 que expresan establemente CCR-3 (2,5
\mug/pocillo) con perlas de SPA con aglutinina de germen de trigo
0,25 mg/pocillo (Amersham) y se incubaron en tampón de unión (HEPES
50 mM, CaCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 5 mM, BSA al 0,5%) a 4ºC durante
1,5 h. Después de la incubación, se añadieron
[^{125}I]-eotaxina 20 pM (Amersham) y
concentraciones crecientes del compuesto (1 pM a 30 \muM) y se
incubaron en una placa de 96 pocillos durante 2 h a 22ºC, y después
se hizo el recuento en un contador de placa Microbeta. El volumen de
ensayo total era 100 \mul. Los datos de unión competitiva se
analizaron ajustando los datos con una ecuación logística de 4
parámetros. Los datos se presentan como los valores medios de
pCI_{50} (logaritmo negativo de la concentración de compuesto que
inhibe la unión de la [^{125}I]eotaxina en un 50%) de al
menos dos experimentos.
Se evaluó el efecto de inhibición de los
compuestos en la quimiotaxis de eosinófilos. Se purificaron
eosinófilos de sangre periférica humana por reducción de células
CD16 convencional usando una columna de separación celular Miltenyi
y un imán magnético Super Macs como se ha descrito previamente
(Motegi y Kita, 1998; J. Immunology.
161:4340-4346). Las células se volvieron a suspender
en RPMI 1640/solución de FCS al 10% y se incubaron con
calceína-AM (Molecular Probes) a 37°C durante 30
min. Después de la incubación, los eosinófilos se centrifugaron a
400 g durante 5 min y se volvieron a suspender en RPMI/FCS con 2,2
millones/ml. Después las células se incubaron en presencia de
concentraciones crecientes de compuesto (1 pM a 30 \muM) a 37ºC
durante 30 min. Para las respuestas de control, se incubaron
células solo con RPMI/FCS. Se añadió la eotaxina agonista (para la
curva de respuesta a la concentración o para las curvas de
inhibición funcional y concentración CE_{80}) en la cámara
inferior de una placa de quimiotaxis de 96 pocillos (filtro de 5
\mum: Receptor Technologies). Se añadieron eosinófilos (50 \mul
de células a 2 millones/ml) en la cámara superior de la placa de
filtro y se incubaron a 37ºC durante 45 min. Se separaron las
células que quedaban en la parte superior del filtro de quimiotaxis
y se cuantificó el número de eosinófilos que había migrado, mediante
lectura de la placa en un lector de placa fluorescente. Se
analizaron las curvas de inhibición para el efecto de los compuestos
en la quimiotaxis de eosinófilos mediante ajuste de los datos con
una ecuación logística de 4 parámetros. Los valores funcionales de
pK_{i} (fpK_{i}) se generaron usando la siguiente ecuación
(Lazareno y Birdsall, 1995. Br. J. Pharmacol 109:
1110-1119).
fpKi =
\frac{CI_{50}}{1 +
\left[\frac{[Agonista]}{CE_{50}}\right]}
En un procedimiento basado en el descrito por
Danahay y col., 1997, se administró mepiramina (300 mg.kg^{-1},
ip) a cobayas sensibilizadas con ovalbúmina para proteger frente al
broncoespasmo anafiláctico. Los compuestos de ensayo se disolvieron
en DMSO al 10% y PEG200 al 90%, y se dieron por vía oral 30 minutos
antes de la estimulación con ovalbúmina (10 minutos respirando de
un aerosol generado a partir de solución de ovalbúmina al 0,5%). Se
midió la hiperreactividad de las vías aéreas al U46619 mimético al
tromboxano, 24 horas después de la estimulación con ovalbúmina en
animales sin controlar usando un pletismógrafo de cuerpo entero
(Buxco Ltd., EE.UU.). Después se sacrificaron las cobayas y se
lavaron los pulmones. Después se obtuvieron los recuentos de
leucocitos totales y diferenciales del fluido del lavado
bronquioalveolar y se determinó el porcentaje de reducción de la
acumulación de eosinófilos (Sanjar y col., 1992). Los datos se
presentaron como el efecto inhibidor de la dosis especificada
expresada como un porcentaje de la respuesta del control con
vehículo.
Los ejemplos de estados patológicos en los que
los compuestos de la invención tienen efectos antiinflamatorios
potencialmente beneficiosos incluyen enfermedades del tracto
respiratorio tales como la bronquitis (incluida la bronquitis
crónica), asma (incluidas las reacciones asmáticas inducidas por
alergenos), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y
rinitis. Otra enfermedad del tracto respiratorio en la que los
compuestos de la invención tienen efectos potencialmente
beneficiosos es la sinusitis. Otros estados patológicos importantes
incluyen enfermedades del tracto gastrointestinal tales como
enfermedades inflamatorias intestinales incluidas enfermedades
inflamatorias del intestino (por ejemplo, enfermedad de Crohn o
colitis ulcerosa) y enfermedades inflamatorias intestinales
secundarias de la exposición a la radiación o a la exposición a
alergenos. Además, los compuestos de la invención se pueden usar
para tratar la nefritis, enfermedades de la piel tales como la
psoriasis, eczema, dermatitis alérgica y reacciones de
hipersensibilidad y enfermedades del sistema nervioso central que
tienen un componente inflamatorio, por ejemplo la enfermedad de
Alzheimer, meningitis, esclerosis múltiple y demencia por SIDA. Los
compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el
tratamiento de la poliposis nasal, conjuntivitis o pruritos.
Además, los compuestos de la presente invención se pueden usar en
el tratamiento de enfermedades víricas tales como el VIH.
Ejemplos adicionales de estados patológicos en
los que los compuestos de la invención tienen efectos potencialmente
beneficiosos incluyen trastornos cardiovasculares tales como
aterosclerosis, enfermedad vascular periférica y síndrome
hipereosinofílico idiopático. Otras enfermedades en las que los
compuestos de la presente invención pueden ser beneficiosos son
otras enfermedades hipereosinofílicas tales como el síndrome de
Churg-strauss. Además, se encuentra frecuentemente
eosinofilia en enfermedades de parásitos, en especial infecciones
helmínticas, y por lo tanto los compuestos de la presente invención
pueden ser útiles para tratar la inflamación que surge de estados
patológicos hipereosinofílicos tales como el quiste hidatídico
(Echinococcus sp.), infecciones por tenia (Taenia
sp.), infecciones por trematodos en la sangre
(esquistosomiasis), y nematodos (gusanos redondos) tales como:
anquilostoma (Ancylostoma sp.), Ascaris, estrongiloides,
triquinela, y en particular filariosis linfática incluidos
Onchocerca, Brugia, Wucheria
(elefantiasis).
Los compuestos de la invención pueden ser útiles
como agentes inmunosupresores y así se han usado en el tratamiento
de enfermedades autoinmunes tales como el rechazo de aloinjerto de
tejido después de trasplante, artritis reumatoide y diabetes.
Los compuestos de la invención también pueden
ser útiles para inhibir la metástasis.
Las enfermedades de interés principal incluyen
el asma, EPOC y enfermedades inflamatorias del tracto respiratorio
superior que implican rinitis estacional y perenne. Las enfermedades
preferidas de interés principal incluyen el asma y enfermedades
inflamatorias del tracto respiratorio superior que implican rinitis
estacional y perenne. Otras enfermedades también de interés
principal incluyen enfermedades inflamatorias del tracto
gastrointestinal tales como enfermedad inflamatoria del
intestino.
Los expertos en la materia observarán que la
referencia en el presente documento al tratamiento, se extiende a
la profilaxis así como al tratamiento de las afecciones
establecidas.
Como se ha mencionado antes, los compuestos de
fórmula (I) son útiles como productos farmacéuticos, en particular
como agentes antiinflamatorios.
Así, como un aspecto adicional de la invención,
se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato del
mismo fisiológicamente aceptable para usar como producto
farmacéutico, en particular en el tratamiento de pacientes con
afecciones inflamatorias, por ejemplo asma o rinitis.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal o
solvato del mismo fisiológicamente aceptable, para fabricar un
medicamento para el tratamiento de pacientes con afecciones
inflamatorias, por ejemplo asma o rinitis.
En un aspecto adicional o alternativo, se
proporciona un procedimiento de tratamiento de un sujeto humano o
animal con una afección inflamatoria, por ejemplo asma o rinitis,
procedimiento que comprende administrar a dicho sujeto humano o
animal, una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal
o solvato del mismo fisiológicamente aceptable.
Los compuestos de acuerdo con la invención se
pueden formular para administrar de cualquier forma conveniente, y
por lo tanto la invención también incluye en su alcance
composiciones farmacéuticas para usar en la terapia
antiinflamatoria, que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una
sal o solvato del mismo fisiológicamente aceptable junto con, si se
desea, uno o más diluyentes o vehículos fisiológicamente
aceptables.
También se proporciona un procedimiento para
preparar dicha formulación farmacéutica, que comprende mezclar los
ingredientes. Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden
formular, por ejemplo, para administración oral, inhalada,
intranasal, bucal, parenteral o rectal, preferiblemente para
administración oral.
Los comprimidos y cápsulas para la
administración oral pueden contener excipientes convencionales tales
como agentes aglutinantes, por ejemplo jarabe, goma arábiga,
gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón, celulosa o
polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, celulosa
microcristalina, azúcar, almidón de maíz, fosfato cálcico o
sorbitol; lubricantes, por ejemplo, estearato magnésico, ácido
esteárico, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes, por
ejemplo, almidón de patata, croscarmelosa sódica o
almidón-glicolato sódico; o agentes humectantes
tales como laurilsulfato sódico. Los comprimidos se pueden revestir
de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica. Las
preparaciones líquidas orales pueden estar en forma, por ejemplo, de
suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos o
oleosos, o se pueden presentar en forma de un producto seco para
reconstituir con agua u otro vehículo adecuado antes de usar. Dichas
preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales
tales como agentes de suspensión, por ejemplo, jarabe de sorbitol,
metilcelulosa, glucosa/jarabe de azúcar, gelatina,
hidroximetilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de
aluminio o grasas hidrogenadas comestibles; agentes emulsionantes,
por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga;
vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por
ejemplo aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, ésteres
oleosos, propilenglicol o alcohol etílico; o conservantes, por
ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o
ácido sórbico. Las preparaciones también pueden contener sales
tamponantes, aromas, colorantes y/o agentes edulcorantes (por
ejemplo manitol), según convenga.
Para administración bucal la composición puede
estar en forma de comprimidos o pastillas formuladas de forma
convencional. Los compuestos también se pueden formular como
supositorios que contienen, por ejemplo, bases para supositorio
convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Los compuestos de acuerdo con la invención
también se pueden formular para administración parenteral por
inyección de embolada o infusión continua, y se pueden presentar en
forma de dosis unitaria, por ejemplo como ampollas, viales,
infusiones de pequeño volumen o jeringuillas precargadas, o en
envases de multidosis con un conservante añadido. Las composiciones
pueden tener formas tales como soluciones, suspensiones o emulsiones
en vehículos acuosos o no acuosos, y pueden contener agentes de
formulación tales como antioxidantes, tampones, agentes
antimicrobianos y/o agentes de ajuste de la tonicidad. Como
alternativa, el principio activo puede estar en forma de polvo para
reconstituir con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril sin
pirógenos, antes de usar. La presentación de sólido seco se puede
preparar cargando un polvo estéril de forma aséptica en envases
estériles individuales, o cargando una solución estéril de forma
aséptica en cada envase y liofilizando.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con
la invención también se pueden usar combinadas con otros agentes
terapéuticos, por ejemplo, agentes antiinflamatorios (tales como
corticosteroides (por ejemplo propionato de fluticasona,
dipropionato de beclometasona, fluroato de mometasona, acetónido de
triamcinolona o budesonida) o AINE (por ejemplo, cromoglicato
sódico, nedocromil de sodio, inhibidores de la
PDE-4, antagonistas de leucotrienos, inhibidores de
iNOS, inhibidores de triptasa y elastasa, antagonistas de la
integrina beta-2 y agonistas de la adenosina 2a) o
agentes beta adrenérgicos (tales como salmeterol, salbutamol,
formoterol, fenoterol o terbutalina y sales de los mismos),
antihistamínicos (por ejemplo, metapirileno o loratadina) o agentes
antiinfecciosos (por ejemplo antibióticos, antivirales).
Se observará que cuando los compuestos de la
presente invención se administran combinados con otros agentes
terapéuticos administrados normalmente por vía inhalada o
intranasal, la composición farmacéutica resultante se puede
administrar por vía inhalada o intranasal.
Los compuestos de la invención se pueden
administrar de forma conveniente en cantidades, por ejemplo, de
0,001 a 500 mg/kg de peso corporal, preferiblemente 0,01 a 500
mg/kg de peso corporal, más preferiblemente 0,01 a 100 mg/kg de
peso corporal, 1 a 4 veces al día. La dosis exacta dependerá, por
supuesto, de la edad y afección del paciente y de la vía de
administración particular elegida.
Los compuestos de la invención tienen la ventaja
de que pueden ser más eficaces, mostrar mayor selectividad, tener
menos efectos secundarios, tener una duración de la acción más
prolongada, tener mayor biodisponibilidad cuando se administran por
vía oral, tener una síntesis más fácil y económica, o tener otras
propiedades más deseables que los compuestos similares
conocidos.
La invención se puede ilustrar con referencia a
los siguientes Ejemplos y Ejemplos de referencia.
La cromatografía líquida de alta resolución
preparativa automática (HPLC autoprep.) se llevó a cabo usando una
columna Supelco+ de 5 \mum (100 mm x 22 mm de diámetro interno)
eluida con una mezcla de disolventes que consistía en (i) ácido
trifluoroacético al 0,1% en agua y (ii) ácido trifluoroacético al
0,1% en acetonitrilo, y el eluyente se expresa como el porcentaje
de (ii) en la mezcla de disolventes, con un caudal de 4 ml por
minuto.
La cromatografía líquida de alta resolución
preparativa automática dirigida por masass se llevó a cabo usando
una columna LCA-BZ+ 5 \mum (5 cm x 10 mm de
diámetro interno), usando una elución con gradiente usando dos
sistemas de disolvente, (A) ácido fórmico al 0,1% en agua, y (B)
acetonitrilo al 95% y ácido fórmico al 0,5% en agua, con un caudal
de 8 mlmin^{-1}. La espectrometría de masas se llevó a cabo usando
un espectrómetro de masas VG Platform, con un detector de matriz de
diodos HP1100 y un separador de flujo preciso.
Se usaron tres sistemas alternativos de
cromatografía líquida-espectrometría de masas
(CL/EM):
Sistema
A
Este sistema usaba una columna ABZ+PLUS de 3
\mum (3,3 cm x 4,6 mm de diámetro interno), eluyendo con los
disolventes: A - ácido fórmico al 0,1% en v/v + acetato amónico en
agua al 0,077% en p/v; y B - acetonitrilo:agua + ácido fórmico al
0,05% en v/v 95:5, con un caudal de 3 ml por minuto. Se usó el
siguiente protocolo de gradiente: 100% de A durante 0,7 min;
mezclas de A+B, perfil del gradiente 0 - 100% de B en 3,5 min;
mantenimiento al 100% de B durante 1,1 min; vuelta a 100% de A en
0,2 min.
Sistema
B
Este sistema usaba una columna ABZ+PLUS de 3
\mum (3,3 cm x 4,6 mm de diámetro interno), eluyendo con los
disolventes: A - ácido fórmico al 0,1% en v/v + acetato amónico en
agua al 0,077% en p/v; y B - acetonitrilo:agua + ácido fórmico al
0,05% en v/v 95:5, con un caudal de 1 ml por minuto. Se usó el
siguiente protocolo de gradiente: 100% de A durante 1,0 min;
mezclas de A+B, perfil del gradiente 0 - 100% de B en 9,0 min;
mantenimiento al 100% de B durante 3,0 min; vuelta a 100% de A en
2,0 min.
Sistema
C
Este sistema usaba una columna ABZ+PLUS de 3
\mum (3,3 cm x 4,6 mm de diámetro interno), eluyendo con los
disolventes: A - ácido fórmico al 0,1% en v/v + acetato amónico al
0,077% en p/v en agua; y B - acetonitrilo:agua + ácido fórmico al
0,05% en v/v 95:5, con un caudal de 1 ml por minuto. Se usó el
siguiente protocolo de gradiente: 100% de A durante 2,0 min;
mezclas de A+B, perfil del gradiente 0 - 100% de B en 20 min;
mantenimiento al 100% de B durante 5,0 min, vuelta a 100% de A en
2,0 min; mantenimiento al 100% de A durante 1,0 min. Todos los
sistemas de CL/EM usaban un espectrómetro de micromasas, con modo de
ionización por electropulverización, con cambio a ion positivo y
negativo, intervalo de masa 80-1000 u.m.a.
Los espectros de masas por termopulverización se
determinaron en un espectrómetro de masas con motor HP 5989A,
termopulverización +va, temperatura de la fuente 250ºC, temperaturas
de las sondas 120ºC (eje), 190ºC (extremo), intervalo de detección
de masas 100-850 u.m.a. Los compuestos se inyectaron
en 10 \mul de una mezcla de disolventes que comprendía 65% de
metanol y 35% de acetato amónico acuoso 0,05 M, con un caudal de
0,7 ml/min.
La cromatografía líquida de alta resolución
preparativa automática de fase normal (HPLC autoprep. de fase
normal) se llevó a cabo usando una columna de sílice de 5 \mum
Nucleosil (100 mm x 20 mm de diámetro interno), eluida con un
gradiente de 2 etapas de acetato de etilo:heptano (i) 0% a 25% de
acetato de etilo en 7 min, seguido de (ii) 25% a 100% de acetato de
etilo en 5,5 min; con un caudal de 30 ml/min.
La cromatografía líquida de alta resolución
analítica automática de fase normal (HPLC analítica de fase normal)
se llevó a cabo usando una columna de sílice de 3 \mum Nucleosil
(150 mm x 4,6 mm de diámetro interno), eluida con un gradiente de
2 etapas de acetato de etilo:heptano (i) 0% a 40% de acetato de
etilo en 7 min, seguido de (ii) 40% a 100% de acetato de etilo en
2,5 min; con un caudal de 2 ml/min.
Este sistema usaba una columna Chiralpak AD de
10 \mum, de 250 x 4,6 mm, eluyendo con mezclas de etanol
absoluto:heptano, con un caudal de 1 ml por minuto, con detección UV
a 215 nm.
Este sistema usaba una columna Chiralpak AD (2
cm x 25 cm), eluyendo con mezclas de etanol absoluto:heptano, (15
ml/min en 25 min, con detección UV a 215 nm).
"SCX" se refiere a cartuchos de extracción
en fase sólida de ácido sulfónico Isolute Flash
SCX-2.
La "frita hidrófoba" se refiere a un tubo
con filtro de polipropileno Whatman equipado con una frita de PTFE,
tamaño de poros 5,0 \mum.
Todas las temperaturas se dan en ºC.
Producto intermedio
1
A una solución agitada de la
morfolin-2-ilmetilamina (3,1 g) en
metanol (70 ml) en atmósfera de nitrógeno se añadió una solución en
éter de \alpha,\alpha,\alpha-trifluoroacetato
de etilo (5 ml en 20 ml de éter) que se había lavado con solución
acuosa saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera y secado. La
mezcla se agitó durante 30 min a 22ºC antes de separar todos los
productos volátiles a vacío. El residuo se disolvió en metanol (10
ml) y los productos volátiles se separaron otra vez a vacío para dar
el compuesto del título en forma de una espuma crujiente (4,9
g).
Espectro de masas de termopulverización
m/z 213 [MH^{+}].
Producto intermedio
2
A una solución agitada del Producto intermedio 1
(3,3 g) en N,N-dimetilformamida (50 ml) en atmósfera
de nitrógeno, se añadió carbonato potásico (2,46 g) y yoduro
potásico (2,12 g). Se añadió gota a gota una solución de cloruro de
3,4-diclorobencilo (2 ml) en
N,N-dimetilformamida (10 ml) a la mezcla. La mezcla
se agitó a 22ºC durante 18 h antes de separar los productos
volátiles a vacío. El residuo se repartió entre diclorometano (100
ml) y solución acuosa saturada de carbonato sódico (50 ml). La fase
orgánica se lavó posteriormente con solución acuosa saturada de
carbonato sódico adicional (2 x 50 ml) y agua (50 ml) antes de
secarla sobre sulfato magnésico, filtrar y evaporar el disolvente a
vacío para dar un aceite amarillo pálido. El aceite se purificó por
cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g
de sílice eluyendo con acetato de etilo al 25% en ciclohexano, para
dar el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (2,97
g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,63 min. Espectro de masas
m/z 371 [MH^{+}].
Producto intermedio
3
A una solución agitada del Producto intermedio 2
(2,97 g) en metanol (15 ml) y agua (5 ml) se añadió carbonato
potásico (5,53 g). La mezcla se agitó a 22ºC durante 18 h antes de
separar el metanol a vacío. Se añadió agua (25 ml) y la mezcla se
extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Las fases orgánicas
combinadas se lavaron con agua (5 ml) y solución acuosa saturada de
cloruro sódico (10 ml), antes de secar sobre sulfato sódico,
filtrar y evaporar el disolvente a vacío para dar un aceite amarillo
pálido. El aceite se purificó por cromatografía de resolución
rápida Biotage en un cartucho de 90 g de sílice eluyendo con
diclorometano/etanol/solución de amoniaco 0,880 75:8:1. Las
fracciones requeridas se combinaron y el disolvente se evaporó a
vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite
incoloro (1,85 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,77 min. Espectro de masas
m/z 275 [MH^{+}].
Producto intermedio
3
Una mezcla de
2-[(3,4-diclorobencil)amino]etanol
(Chem. Abs. No. 40172-06-3, 0,980 g)
y
2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
(1,10 g) se calentó a 80ºC en atmósfera de nitrógeno durante 3 h.
La masa sólida resultante se trató con ácido sulfúrico concentrado
(1,5 ml) y después se agitó a 150ºC durante 24 h. La mezcla se trató
con agua (100 ml) y después se lavó con acetato de etilo (2 x 100
ml). La fase acuosa oscura se hizo básica a pH aproximadamente 12,
usando hidróxido sódico acuoso 5 M, después se extrajo con acetato
de etilo (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se
lavaron con agua y salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de un
aceite marrón (1,02 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,6
min.
Producto intermedio 3A
Una solución de
2-[(3,4-diclorobencil)amino]etanol
(2,25 g) y 2-cloroacrilonitrilo (1,0 ml) en
tetrahidrofurano (3 ml) se calentó a 40°C durante 66 h. El
disolvente se evaporó a vacío para dar una goma. El residuo se
volvió a disolver en tetrahidrofurano (20 ml) y se enfrió a
0-5ºC. Se añadió terc-butóxido potásico (1,2
g) en porciones a esta solución en 10 min y la mezcla se agitó a
0-5ºC durante 45 min más. La mezcla se diluyó con
agua (20 ml) y acetato de etilo (20 ml), se separaron las fases y
la fase orgánica se lavó con solución acuosa de cloruro sódico al
20% en peso/peso. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y el
disolvente se evaporó a vacío para dar una goma (2,75 g). Una parte
de esta goma (0,22 g) en tetrahidrofurano (1 ml) se trató gota a
gota con una solución de complejo de
borano-tetrahidrofurano 1 M (2,44 ml) a
15-25ºC. La mezcla se agitó a
15-25ºC durante 16 h, y se añadió metanol (3 ml)
gota a gota. La mezcla se agitó durante 5 h adicionales y el
disolvente se evaporó a vacío. El residuo se volvió a disolver en
acetato de etilo (4 ml) y se añadió monohidrato de ácido
p-toluensulfónico (0,123 g). La mezcla se calentó a
50ºC durante 20 min, y la suspensión se enfrió a
15-25ºC y se agitó durante 15 min. La mezcla se
filtró, se lavó con acetato de etilo y se secó para dar el
compuesto del título (0,123 g) en forma de un sólido blanco.
CL/EM (Sistema A) Tr 1,75 min. Espectro de masas
m/z 275/277 [MH^{+}]
Producto intermedio
4
A una solución agitada del Producto intermedio 1
(6,37 g) en metanol (250 ml) en atmósfera de nitrógeno se añadió
cloroformiato de bencilo (4,7 ml) y trietilamina (6,3 ml). La mezcla
se agitó a 22°C durante 1 h antes de separar los productos
volátiles a vacío. El residuo se purificó por cromatografía de
resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g de sílice eluyendo
con acetato de etilo al 33% en ciclohexano, para dar el compuesto
del título en forma de un sólido blanco (4,4 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 3,22 min. Espectro de masas
m/z 347 [MH^{+}].
Producto intermedio
5
A una solución agitada del Producto intermedio 4
(4,4 g) en metanol/agua 1:1 (300 ml) se añadió carbonato potásico
(17,5 g). La mezcla se agitó a 22°C durante 36 h antes de separar
los productos volátiles a vacío. El residuo se disolvió en agua y
la solución se extrajo con diclorometano (x 3). Los extractos
orgánicos combinados se lavaron con solución acuosa saturada de
cloruro sódico, se secaron sobre sulfato magnésico y se filtraron
antes de evaporar el disolvente a vacío. El residuo se disolvió en
metanol y se purificó por extracción en fase sólida (columna de
ácido sulfónico Isolute SCX), lavando inicialmente el cartucho con
metanol antes de eluir con solución de amoniaco 0,880 al 10% en
metanol para dar el compuesto del título en forma de un aceite
incoloro (2,27 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,07 min. Espectro de masas
m/z 251 [MH^{+}].
Producto intermedio
6
A una solución agitada del Producto intermedio 5
(2,0 g) en diclorometano (100 ml) se añadió isocianato de
4-clorofenilo (1,35 g). La mezcla se agitó a 22°C
durante 18 h antes de añadir solución de amoniaco 0,880 al 10% en
metanol (10 ml). Se continuó agitando durante 30 min más antes de
separar el disolvente a vacío. El residuo se purificó por
cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice,
eluyendo con acetato de etilo al 33%/ciclohexano; la purificación
adicional por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de
sílice, eluyendo con diclorometano/etanol/solución de amoniaco 0,880
500:8:1 dio el compuesto del título en forma de un sólido de color
ante (3,6 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 3,41 min. Espectro de masas
m/z 404 [MH^{+}].
Producto intermedio
7
Una suspensión de paladio sobre carbón al 10%
(1,5 g) y Producto intermedio 6 (3,2 g) en acetato de etilo (250
ml) se agitó vigorosamente con hidrógeno a 1 atmósfera y 22°C
durante 20 h. El catalizador se filtró y los productos volátiles se
separaron a vacío. El procedimiento se repitió con una porción
adicional de catalizador (1 g) durante 24 h más antes de filtrar y
evaporar el disolvente a vacío. La purificación del residuo por
cromatografía de resolución rápida Biotage en un cartucho de 90 g de
sílice, eluyendo con diclorometano/etanol/solución de amoniaco
0,880 100:8:1, dio el compuesto del título en forma de un aceite
incoloro (1,6 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,39 min. Espectro de masas
m/z 236 [MH^{+}].
Producto intermedio
8
A una solución agitada del
2-(aminometil)morfolina-4-carboxilato
de terc-butilo (preparado como se describe en el documento
EP 0468231, 2,4 g) en diclorometano (100 ml) se añadió isocianato de
4-clorofenilo (1,87 g). La mezcla se agitó a 22°C
durante 16 h antes de añadir solución de amoniaco 0,880 al 10% en
metanol. Se continuó agitando durante 30 min adicionales antes de
separar el disolvente a vacío para dar el compuesto del título en
forma de una espuma blanca (3,98 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 3,19 min. Espectro de masas
m/z 370 [MH^{+}].
Producto intermedio
9
El Producto intermedio 8 (1,9 g) se agitó en
cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (40 ml) a
22°C durante 30 min. El disolvente se separó a vacío y el residuo
se purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido
sulfónico Isolute SCX), eluyendo con metanol seguido de solución de
NH_{3} 0,880 al 10% en metanol, para dar el compuesto del título
en forma de una espuma de color crema (1,15 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,03 min. Espectro de masas
m/z 270 [MH^{+}].
Producto intermedio
10
Se añadió trietilamina (0,09 ml) a una solución
del Producto intermedio 3 (0,150 g, 0,54 5 mmol) en diclorometano
(3 ml) con agitación a 20°C en atmósfera de nitrógeno. La solución
se enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota una solución de
cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,121 g) en
diclorometano (1 ml). La mezcla resultante se agitó durante 4 h a
0ºC. La solución se dejó calentar a 20ºC, se lavó con salmuera (4
ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a vacío. La purificación
por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de sílice,
eluyendo con acetato de etilo al 35% en ciclohexano, dio el
compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (0,119
g).
CL/EM (sistema A) Tr 3,01 min. Espectro de masas
m/z 441 [MH^{+}].
Producto intermedio
11
El Producto intermedio 3 (mezcla racémica, 8 g)
se separó en sus enantiómeros individuales por HPLC quiral
preparativa. La separación se llevó a cabo usando una columna
Chiralpak AD 20 \mum de 2'' x 22 cm, sistema Merck self pack DAC,
eluyendo con heptano : etanol absoluto : dietilamina 95:5:0,1 (v/v)
(caudal: 55 ml/min en 40 min, detección UV 225 nm); preparación de
la carga de muestra: 400 mg de muestra en 20 ml de etanol absoluto
: eluyente del sistema 3:2 (v/v). El compuesto del título (2,49 g)
se obtuvo como sigue: tiempo de retención en HPLC preparativa 23,0
min.
Producto intermedio 11A
Se añadió hidrazina al 35% en agua (1,8 ml) a
una suspensión del Producto intermedio 42 (5 g) en alcoholes
metilados industriales (75 ml), y la mezcla se calentó a reflujo. Se
añadió cloroformo (75 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante
65 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0-4ºC y se
dejó reposar durante 15 min. El subproducto de ftalahidrazida se
separó por filtración a vacío y se lavó con cloroformo (50 ml). El
filtrado se lavó con agua (50 ml, 25 ml) se secó (MgSO_{4}) y el
disolvente se evaporó a vacío para dar un aceite. Éste se disolvió
en metanol (20 ml), el cual se evaporó a vacío para dar un aceite.
El aceite se disolvió en metanol (100 ml) y se añadió ácido
D-tartárico. La mezcla se calentó y se mantuvo a
reflujo durante 30 min. La solución se enfrió a
45-50ºC, y después se sembró. La suspensión se
mantuvo a esta temperatura durante 30 min, y después se enfrió a
0-4ºC y se dejó reposar durante 30 min. El producto
se aisló por filtración para dar el compuesto del título en forma
de un sólido blanco (2,59 g).
\newpage
Se disolvió una muestra de la sal de
D-tartrato (500 mg) en agua (1,4 ml). Se añadió
metanol (23 ml) para dar una suspensión que se calentó a reflujo
para dar una solución. La mezcla se agitó a reflujo durante 30 min,
y después se enfrió lentamente sembrando a 55ºC. La suspensión
resultante se enfrió a 0-4ºC y se dejó reposar 30
min. El producto se aisló por filtración para dar el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (0,355 g).
ee: 91,6% de ee
CL/EM (Sistema A) Tr 1,75 min. Espectro de masas
m/z 275/277 [MH^{+}]
HPLC quiral analítica (columna Chiralpak AD, 4,6
x 250 mm, eluyente MeOH: EtOH: Butilamina 50:50:0,1, caudal 0,5
ml/min, detección UV 220 nm), Tr 8,9 min.
Producto intermedio 11A (procedimiento
alternativo)
El Producto intermedio 3 (0,613 g) se disolvió
en metanol (12,3 ml). Se añadió ácido D-tartárico
(0,335 g) y la suspensión se calentó a reflujo durante 50 min. La
mezcla se dejó enfriar a 0-5ºC y el precipitado se
aisló por filtración para dar el compuesto del título en forma de un
sólido blanco (0,4 g).
ee: 76% de ee
HPLC quiral analítica (columna Chiralpak AD, 4,6
x 250 mm, eluyente MeOH: EtOH: Butilamina 50:50:0,1, caudal 0,5
ml/min, detección UV 220 nm), Tr 8,9 min.
Producto intermedio
12
El Producto intermedio 12 se preparó de forma
análoga al Producto intermedio 11 dando el compuesto del título
(2,24 g) como sigue: HPLC preparativa, tiempo de retención 27,8
min.
Producto intermedio 12A
El Producto intermedio 3 (0,500 g) se disolvió
en metanol (5 ml). Se añadió ácido L-tartárico
(0,273 g) y la mezcla se calentó a aproximadamente 65°C para dar
una suspensión lechosa, y se mantuvo a esta temperatura durante 1
h. Se añadió más metanol (5 ml) y la mezcla se dejó enfriar
lentamente a 15-25ºC, y después se enfrió más a
0-4ºC. La mezcla se agitó durante 30 min a esta
temperatura y el producto se aisló por filtración para dar el
compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,38 g).
ee: 78%
CL/EM (Sistema A) Tr 1,75 min. Espectro de masas
m/z 275/277 [MH^{+}]
HPLC quiral analítica (columna Chiralpak AD, 4,6
x 250 mm, eluyente MeOH: EtOH: Butilamina 50:50:0,1, caudal 0,5
ml/min, detección UV 220 nm), Tr 10,5 min.
Producto intermedio
13
El Producto intermedio 13 se preparó de una
forma análoga al Producto intermedio 10 a partir del Producto
intermedio 11 (0,225 g) y cloroformiato de
4-nitrofenilo (0,182 g) para dar el compuesto del
título (0,2 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 3,1 min.
Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}].
Producto intermedio
14
El Producto intermedio 14 se preparó de una
forma análoga al Producto intermedio 10 a partir del Producto
intermedio 12 (0,21 g) y cloroformiato de
4-nitrofenilo (0,17 g) para dar el compuesto del
título (0,23 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 3,09 min.
Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}].
\newpage
Producto intermedio
15
El Producto intermedio 15 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo 43, usando tetrahidrofurano como
disolvente, sin base, para dar el compuesto del título en forma de
un sólido blanco (0,157 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,92 min. Espectro de masas
m/z 501 [MH^{+}].
Producto intermedio
16
El Producto intermedio 15 (0,157 g) se agitó en
dioxano (4 ml) que contenía cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano
(0,78 ml) durante 16 h, a 23°C en atmósfera de nitrógeno. El
disolvente se separó a vacío, formando el azeótropo con
diclorometano (20 ml), se trituró en éter y se secó a vacío para dar
el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (0,12
g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,02 min. Espectro de masas
m/z 401 [MH^{+}].
Producto intermedio
17
El Producto intermedio 17 se hizo de forma
análoga a la del Ejemplo 57.
CL-EM (Sistema A) Tr 2,72 min.
Espectro de masas m/z 515 [MH^{+}].
Producto intermedio
18
El Producto intermedio 17 (0,390 g) se agitó en
cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano (4 ml) durante 2 h, a 23°C
en atmósfera de nitrógeno. El disolvente se separó a vacío, se formó
el azeótropo con diclorometano (20 ml), y se secó a vacío para dar
el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (0,33
g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,84 min. Espectro de masas
m/z 415 [MH^{+}].
Producto intermedio
19
El Producto intermedio 19 se hizo de una forma
análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa, tiempo de retención 26,1
min.
Producto intermedio
20
El Producto intermedio 20 se hizo de una forma
análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa, tiempo de retención 25,3
min.
Producto intermedio
21
El Producto intermedio 21 se hizo de una forma
análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa, tiempo de retención 28,3
min.
\newpage
Producto intermedio
22
Se añadieron propargilamina (0,017 ml) y
trietilamina (0,38 ml) en diclorometano (2 ml) gota a gota a
cloroformiato de p-nitrofenilo (0,55 g) en
diclorometano (3 ml) a 0°C. La solución se agitó durante 1 h a esta
temperatura y después a 23ºC durante 5 h. El disolvente se separó a
vacío y el residuo se purificó por extracción en fase sólida
(cartucho de gel de sílice de 10 g, Varian Bond Elut), eluyendo con
acetato de etilo al 20-60% en ciclohexano. para dar
el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,419 g).
CL/EM (sistema A) Tr 2,67 min. Espectro de masas
m/z 220 [MH^{+}].
Producto intermedio
23
El Producto intermedio 23 se hizo de una forma
análoga a la del Producto intermedio 11.
HPLC preparativa quiral, tiempo de retención
25,2 min.
Producto intermedio
24
El Producto intermedio 24 se hizo de una forma
análoga a la del Producto intermedio 31 a partir del
(2R)-2-aminopropan-1-ol.
CL-EM (Sistema A): Tr 1,9 min.
Espectro de masas m/z 289 [MH^{+}].
Producto intermedio
25
Se añadió clorhidrato del éster
terc-butílico del ácido 4-aminobutírico
(0,235 g) a una solución agitada del Producto intermedio 13 (0,440
g) y N,N-diisopropiletilamina (0,42 ml) en
diclorometano seco (20 ml) en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla
se agitó a 22°C durante 18 h. La mezcla se trató con solución acuosa
saturada de carbonato potásico (20 ml) y se agitó durante 5 min.
Las capas se separaron y la capa orgánica se aplicó a un cartucho
de gel de sílice (10 g, Varian Bond Elut). La elución con
diclorometano, éter, acetato de etilo, y acetona dio el producto en
bruto (0,357 g). La purificación adicional por cromatografía en gel
de sílice (10 g, cartucho Varian Bond Elut), eluyendo con
diclorometano (1 volumen de columna), éter (4 volúmenes de columna)
y acetato de etilo (8 volúmenes de columna) dio el compuesto del
título en forma de una goma (0,345 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,66 min.
Espectro de masas m/z 460 [MH^{+}].
Producto intermedio
26
El Producto intermedio 25 (0,345 g) se disolvió
en cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (5 ml), y la mezcla se dejó
reposar a 22ºC durante 19,5 h. El disolvente se evaporó a vacío para
dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,330
g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,16 min.
Espectro de masas m/z 404 [MH^{+}].
Producto intermedio
27
Una solución de cloruro de
3-(1,3-dioxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)propano-1-sulfonilo
(0,288 g) en tetrahidrofurano seco (5 ml) se trató con
N,N-diisopropiletilamina (0,350 ml) y pirrolidina
(0,10 ml) a 22°C en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a
22°C durante 1 h. Después de reposar toda la noche a temperatura
ambiente, la mezcla se repartió entre solución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (10 ml) y acetato de etilo (2 x 10 ml). Las
capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO_{4}) y
se evaporaron a vacío para dar un sólido blanco (0,145 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,81 min.
Espectro de masas m/z 323 [MH^{+}].
\newpage
Producto intermedio
28
Una solución del Producto intermedio 27 (0,139
g) en isopropanol (7,6 ml) y agua (1,3 ml) se trató con borohidruro
sódico (0,081 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en
atmósfera de nitrógeno durante 19 h. Se añadió con cuidado ácido
acético glacial (0-45 ml) y la mezcla se calentó a
80ºC durante 2 h. Los disolventes se evaporaron a vacío para dar un
sólido blanco, que se disolvió en metanol y se aplicó a un cartucho
de intercambio iónico de ácido sulfónico (10 g, Isolute SCX). La
elución con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol y
evaporación de la fracción de amoniaco/metanol dio el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (0,027 g).
TLC SiO_{2} (diclorometano:etanol:amoniaco
0,880 89:10:1) Rf 0,2.
Producto intermedio
29
Una mezcla de trietilamina (0,101 ml) y el
Producto intermedio 11 (2,0 g) en diclorometano (20 ml) se añadió
gota a gota a una solución de cloroformiato de
4-nitrofenilo (1,62 g) en diclorometano (10 ml) con
agitación a 0°C en atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó
durante 3 h a 0°C, se dejó calentar a 20ºC y reposar durante 18 h.
Los componentes volátiles se evaporaron a vacío, y el residuo se
purificó por cromatografía de resolución rápida Biotage en gel de
sílice (cartucho de 90 g), eluyendo inicialmente con metanol al 10%
en diclorometano y posteriormente con metanol al 20% en
diclorometano para dar el compuesto del título en forma de un
sólido marrón claro (2,5 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,89 min.
Espectro de masas m/z 441 [MH^{+}]
Producto intermedio
30
Al Producto intermedio 37 (0,47 g) se añadió
cloruro de hidrógeno 4,0 M en 1,4-dioxano (5 ml). La
mezcla se agitó a 22°C durante 3 h, y el disolvente se separó a
vacío. El residuo se disolvió otra vez en cloruro de hidrógeno 4,0
M en 1,4-dioxano (5 ml), y se dejó reposar a 22°C
durante 18 h. La evaporación del disolvente a vacío dio el
compuesto del título en forma de un sólido de color crema (0,319
g).
Espectro de masas por termopulverización m/z
= 114 [MH^{+}].
Producto intermedio
31
Una mezcla del Producto intermedio 43 (0,470 g)
y
2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
(0,410 g) se calentó a 80°C en atmósfera de nitrógeno durante 5 h.
La mezcla se trató con ácido sulfúrico concentrado (0,6 ml) y
después se agitó a 150°C durante 42 h. La mezcla se trató con agua
(50 ml) y después se lavó con acetato de etilo (2 x 50 ml). La fase
acuosa oscura se hizo básica a pH aproximadamente 11, usando
hidróxido sódico acuoso 5 M y después se extrajo con acetato de
etilo (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron
con agua y salmuera, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron
a vacío para dar el compuesto del título en forma de un aceite
marrón (0,42 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,74
min.
Producto intermedio
32
Se trató el
(2R)-morfolin-2-ilmetilcarbamato
de terc-butilo (2,00 g) en
N,N-dimetilformamida (16 ml) con
N,N-diisopropiletilamina (1,6 ml) seguido de
4-(1-bromoetil)-1,2-diclorobenceno
(2,58 g). Después de agitar durante 5 días a temperatura ambiente,
se añadieron porciones adicionales de
4-(1-bromoetil)-1,2-diclorobenceno
(2,58 g) y N,N-diisopropiletilamina (1,6 ml) y se
continuó agitando durante 24 h a temperatura ambiente. La solución
se trató con diclorometano (70 ml) y solución acuosa saturada de
hidrógeno-carbonato sódico (30 ml) y la mezcla se
agitó vigorosamente. Se separó la fase orgánica y se aplicó
equitativamente en cartuchos de intercambio iónico de ácido
sulfónico (5x10 g Isolute SCX, pretratados con metanol). Cada uno
de los cartuchos se eluyó con metanol (1 volumen de columna)
seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (1 volumen de columna);
la evaporación a vacío de las fracciones básicas combinadas dio el
compuesto del título en forma de una goma incolora transparente
(3,22 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,74 min.
Espectro de masas m/z 389 [MH^{+}].
\newpage
Producto intermedio
33
El Producto intermedio 32 se trató con cloruro
de hidrógeno 4 M en dioxano (15 ml) y la solución se agitó durante
2 h a temperatura ambiente. La solución se trató con metanol (20 ml)
y se concentró a vacío para dar el compuesto del título en forma de
un sólido blanquecino (1,53 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,86 min y 1,91 min.
Espectro de masas m/z 289 [MH^{+}].
Productos intermedios 34 y
35
El Producto intermedio 33 (0,724 g) en
diclorometano (5 ml) se trató con trietilamina (1,14 ml), formando
una suspensión que se añadió en porciones en 5 min a una solución de
cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,444 g) en
diclorometano anhidro (5 ml) a 0ºC, en atmósfera de nitrógeno. La
solución con agitación se dejó calentar a temperatura ambiente en 2
h, después se filtró; el filtrado se purificó directamente por
cromatografía en gel de sílice (Biotage, columna de 90 g), eluyendo
con acetato de etilo al 35 - 40%, en ciclohexano y las fracciones
adecuadas se evaporaron a vacío para dar el compuesto del título
(isómero I) en forma de una película amarilla opaca (0,202 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,90 min. Espectro de masas
m/z 454 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, Tr 18,03 min (eluyente
EtOH al 25%/heptano).
Se combinaron las otras fracciones adecuadas y
se concentraron a vacío para dar el compuesto del título (isómero
II) (0,196 g) en forma de una película amarilla opaca.
CL/EM (Sistema A) Tr 2,88 min. Espectro de masas
m/z 454 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, Tr 15,38 min (eluyente
EtOH al 25%/heptano).
Producto intermedio
36
A una solución agitada de la
1-(1H-tetrazol-5-il)metanamina
(6,0 g) en agua (120 ml) a 22°C se añadió hidróxido sódico (4,8
g), seguido de la adición gota a gota de una solución de dicarbonato
de di-terc-butilo (13,48 g) en metanol (20 ml). Se añadió
más metanol (40 ml) a la mezcla y se continuó agitando durante 4 h;
la mezcla después se dejó reposar durante 60 h a 4ºC. El metanol se
evaporó a vacío y el residuo acuoso se acidificó a pH
aproximadamente 6 con ácido clorhídrico acuoso 2 M. La mezcla acuosa
se extrajo con acetato de etilo (x3) y los extractos orgánicos
combinados se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro
sódico, se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se evaporó a vacío
para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,50
g).
Espectro de masas de termopulverización
m/z 200 [MH^{+}], 217 [MNH_{4}^{+}].
Producto intermedio
37
A una solución agitada del Producto intermedio
36 (1,0 g) en diclorometano (35 ml) y metanol (10 ml) a 22°C en
atmósfera de nitrógeno se añadió gota a gota
trimetilsilildiazometano al 10% en hexano (12,0 ml). La mezcla se
agitó durante 2 h a 22ºC antes de añadir gota a gota ácido acético
(2 ml) y los disolventes se evaporaron a vacío. El residuo bruto se
purificó por cromatografía en columna de resolución rápida Biotage
(cartucho de 90 g), eluyendo con ciclohexano en éter al 10%. Las
fracciones para el primer isómero que eluye se combinaron y los
disolventes se evaporaron a vacío para dar el compuesto del título
en forma de cristales amarillo pálido (0,487 g).
Espectro de masas por termopulverización
m/z = 214 [MH^{+}].
TLC (SiO_{2}), (ciclohexano al 10%/éter), Tr
= 0,35, visualizado con KMnO_{4}.
Producto intermedio
38
Una solución de
3-bromopropilcarbamato de terc-butilo (0,30
g) en N,N-dimetilformamida (5 ml) se trató con
etantiol (0,104 ml) y carbonato potásico (0,29 g), y la mezcla se
agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla se repartió
entre agua (20 ml) y diclorometano (30 ml), y las capas orgánicas se
evaporaron a vacío para dar el compuesto del título (0,236 g).
TLC SiO_{2} (ciclohexano: acetato de etilo
4:1) R_{f} 0,5.
Producto intermedio
39
Se añadió ácido
3-cloroperoxibenzoico (0,373 g) a una solución
agitada del Producto intermedio 38 (0,236 g) en diclorometano seco
(6 ml) a 22°C en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó a 22°C
durante 18 h. La mezcla se trató con solución acuosa saturada de
carbonato sódico (10 ml), se agitó durante 3 min, y las capas
orgánicas separadas se evaporaron a vacío para dar el compuesto del
título (0,275 g).
RMN (CDCl_{3}) 5,15 \delta (1H, t
ancho, NH), 3,25 \delta (2H, q, CH_{2}), 3,00 \delta
(4H, t+q, 2xCH_{2}), 2,03 \delta (2H, m,
CH_{2}), 1,50-1,30 \delta (12H, s+t,
4xCH_{3})
Producto intermedio
40
El Producto intermedio 39 (0,275 g) se disolvió
en cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (3 ml), y la solución se
dejó reposar a 22°C durante 2 h. El disolvente se evaporó a vacío
para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (186
mg).
RMN (D4 MeOH) 3,25 \delta (2H, t,
CH_{2}), 3,15 \delta (4H, t+q, 2xCH_{2}), 2,18 \delta
(2H, m, CH_{2}), 1,38 \delta (3H, t,
CH_{3}).
Producto intermedio
41
Se lavó 5 veces una resina de
formil-poliestireno (1,6 g, carga = 2,95 mmol/g) con
tetrahidrofurano en un recipiente para péptidos de vidrio
sinterizado. Se añadió una solución de
1-(1,4-oxazepan-2-il)metanamina
(0,619 g) en tetrahidrofurano (20 ml) y la mezcla se agitó a 22°C
durante 18 h. La mezcla se filtró y la resina se lavó con
tetrahidrofurano (4 x 20 ml) y metanol (3 x 10 ml) y se secó. Se
suspendió una porción de la resina seca (1,2 g) en
N,N-dimetilformamida (20 ml),
N,N-diisopropiletilamina (2,04 ml) y cloruro de
3,4-diclorobencilo. La mezcla se agitó suavemente a
70°C durante 22 h. Después de enfriar, la mezcla se filtró y la
resina se lavó con THF (5 x 10 ml) y diclorometano (5 x 10 ml) y se
secó al aire en el vidrio sinterizado. La resina se puso en un
recipiente para péptidos de vidrio sinterizado y se suspendió en
tetrahidrofurano (9 ml); se añadió ácido clorhídrico concentrado (3
ml), y el recipiente se agitó durante 2 h. La resina se filtró y se
lavó con tetrahidrofurano (2 x 10 ml). Los filtrados combinados se
concentraron a vacío para dar un aceite transparente, que se aplicó
en un cartucho de intercambio iónico (10 g, Isolute SCX,
preacondicionado con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes
de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes
de columna) y evaporación de las fracciones básicas a vacío dio un
residuo. Se repitió la purificación de intercambio iónico (como
antes) para dar el compuesto del título en forma de una goma
incolora
(0,256 g).
(0,256 g).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): 7,46 \delta
(1H, d, CH Aromático), 7,38 \delta (1H, d, CH
Aromático), 7,19 \delta (1H, dd, CH Aromático), 3,94
\delta (1H, m, CH), 3,80 \delta (1H, m, CH), 3,59
\delta (2H, s, CH_{2}), 3,57 \delta (1H, m,
CH), 2,82-2,53 \delta (5H, m, 5xCH), 2,38
\delta (1H, dd, CH), 1,98-1,78 \delta
(2H, m, 2xCH), 1,49 \delta (2H+H_{2}O, s ancho,
NH_{2}).
Producto intermedio
42
A una solución de la
(N-(2,3-epoxipropil)-ftalimida) de
2-(oxiran-2-ilmetil)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona
(2 g) en tetrahidrofurano (4 ml) se añadió
2-[(3,4-diclorobencil)amino]etanol
(2,16 g) con agitación, en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se
calentó a 66ºC durante 22 h, y después se enfrió a 0ºC. Se añadió
una porción adicional de tetrahidrofurano (10 ml), seguido de
trifenilfosfina (2,88 g). Después se añadió azodicarboxilato de
diisopropilo (2,2 g) en 10 min. La mezcla se agitó a 0°C durante 30
min adicionales y a temperatura ambiente durante 14 h. A la
solución bruta se añadió acetato de etilo (100 ml), y después ácido
clorhídrico acuoso 2 M (250 ml). El precipitado blanco resultante
se aisló por filtración, y se secó a vacío para dar el compuesto del
título en forma de su sal de clorhidrato cristalina blanca (2,01
g). Ésta se repartió entre solución acuosa de bicarbonato sódico al
8% (200 ml) y acetato de etilo (50 ml). Se separó la fase orgánica,
se secó sobre sulfato magnésico y el disolvente se evaporó a vacío
para dar un sólido. Se añadió diclorometano (20 ml) al residuo y el
disolvente se evaporó otra vez a vacío para dar el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (1,1 g).
CL/EM Tr 2,91 min. Espectro de masas m/z 405
[MH^{+}].
Producto intermedio
43
Se añadió cloruro de
3,4-diclorobencilo (0,988 g) a
2-amino-1-propanol
(4,10 g) y la mezcla se agitó a 50°C en atmósfera de nitrógeno
durante 2 h. La mezcla se repartió entre solución acuosa saturada de
bicarbonato sódico (100 ml) y acetato de etilo (100 ml) y se
separaron las fases. La capa orgánica se lavó con agua (4x100 ml) y
salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y después se concentró a vacío
para dar el compuesto del título en forma de un sólido
blanco
(0,935 g).
(0,935 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,13
min.
Ejemplo de referencia
1
A una solución agitada del Producto intermedio 3
(0,025 g) en diclorometano (1 ml) se añadió isocianato de bencilo
(16,8 \mul). La mezcla se agitó a 22°C durante 18 h antes de
añadir
tris-(2-aminoetil)amina-poliestireno
(Argonaut Technologies, 0,04 g con 3,85 mmol/g). Se continuó
agitando durante 72 h adicionales antes de verter la mezcla en un
cartucho de extracción en fase sólida de 1 g (ácido sulfónico
Isolute SCX). El cartucho se lavó con metanol antes de eluir con
solución de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción básica se
evaporó a vacío para dar un sólido amarillo pálido. El sólido se
purificó eluyendo por un cartucho de extracción en fase sólida de 1
g de sílice (Varian Bondelut) eluyendo secuencialmente con
diclorometano, éter, acetato de etilo, acetona, acetonitrilo y
metanol, para dar el compuesto del título en forma de un sólido
blanco (0,031 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,22 min. Espectro de masas
m/z 408 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
2
El Ejemplo de referencia 2 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(isocianatometil)-4-metoxibenceno
(19,5 \mul) para dar el compuesto del título (0,0257 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,23 min.
Espectro de masas m/z 438 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
3
El Ejemplo de referencia 3 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(isocianatometil)-4-metilbenceno
(19,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0318 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,33 min.
Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
4
El Ejemplo de referencia 4 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(isocianatometil)-3-metilbenceno
(19,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0382 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,32 min.
Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
5
El Ejemplo de referencia 5 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
3-isocianatobenzonitrilo (0,0196 g) para dar el
compuesto del título (0,0257 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,29 min.
Espectro de masas m/z 419 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
6
El Ejemplo de referencia 6 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(isocianatometil)-2-metilbenceno
(0,0201 g) para dar el compuesto del título (0,0269 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,31 min.
Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
7
El Ejemplo de referencia 7 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) e isocianatociclohexano (17,4
\mul) para dar el compuesto del título (0,0298 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,26 min.
Espectro de masas m/z 400 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
8
El Ejemplo de referencia 8 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedios (0,025 g) y
(2-isocianatoetil)benceno (18,9 \mul) para
dar el compuesto del título (0,0312 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,29 min.
Espectro de masas m/z 422 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
9
A una solución agitada del Producto intermedio 7
(0,01 g) en N,N-dimetilformamida (0,5 ml) se añadió
1-(2-cloroacetil)-indolina (0,0092
g). La mezcla se agitó a 22°C durante 17 h antes de añadir
tris-(2-aminoetil)amina-poliestireno
(Argonaut Technologies, 0,01 g con 4,46 mmol/g) y
poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut
Technologies, 0,033 g con 1,39 mmol/g). Se continuó agitando
durante 30 min adicionales antes de purificar la mezcla por
extracción en fase sólida (1 g, columna de ácido sulfónico Isolute
SCX), eluyendo con metanol seguido de solución de amoniaco 0,880 al
10% en metanol. Se evaporó la fracción básica para dar el compuesto
del título en forma de un sólido blanco (0,012 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,69 min, Espectro de masas
m/z 394 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
10
El Ejemplo de referencia 10 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
3-isocianatoprop-1-eno
(12,0 \mul) para dar el compuesto del título (0,027 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,93 min.
Espectro de masas m/z 358 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
11
El Ejemplo de referencia 11 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-fluoro-3-isocianatobenceno
(15,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,019 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,35 min.
Espectro de masas m/z 412 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
12
El Ejemplo de referencia 12 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-bromo-3-isocianatobenceno
(17,0 \mul) para dar el compuesto del título (0,03 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,50 min.
Espectro de masas m/z 472 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
13
El Ejemplo de referencia 13 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-cloro-3-isocianatobenceno
(16,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0247 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,46 min.
Espectro de masas m/z 428 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
14
El Ejemplo de referencia 14 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-cloro-4-isocianatobenceno
(17,4 \mul) para dar el compuesto del título (0,0275 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,45 min.
Espectro de masas m/z 428 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
15
El Ejemplo de referencia 15 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
3-isocianatobenzoato de metilo (0,0241 g) para dar
el compuesto del título (0,037 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,32 min.
Espectro de masas m/z 452 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
16
El Ejemplo de referencia 16 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(difluorometoxi)-4-isocianatobenceno
(19,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0252 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,41 min.
Espectro de masas m/z 460 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
17
El Ejemplo de referencia 17 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-fluoro-4-isocianatobenceno
(15,5 \mul) para dar el compuesto del título (0,0311 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,30 min.
Espectro de masas m/z 421 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
18
El Ejemplo de referencia 18 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-isocianato-3-(metiltio)benceno
(18,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0352 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,41 min.
Espectro de masas m/z 440 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
19
A una solución agitada del Producto intermedio 9
(0,01 g) en N,N-dimetilformamida (1 ml) se añadió
1-(clorometil)naftaleno (6,1 \mul). La mezcla se agitó a
22°C durante 24 h antes de añadir
tris-(2-aminoetil)amina-poliestireno
(Argonaut Technologies, 0,01 g con 4,46 mmol/g) y
poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut
Technologies, 0,033 g con 1,39 mmol/g). Se continuó agitando
durante 2 h adicionales antes de purificar la mezcla por extracción
en fase sólida (columna de ácido sulfónico, Isolute SCX), eluyendo
con metanol seguido de solución de amoniaco 0,880 al 10% en
metanol. La fracción básica se evaporó a vacío para dar el compuesto
del título (0,003 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,82 min, Espectro de masas
m/z 410 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
20
El Ejemplo de referencia 20 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-bromo-4-isocianatobenceno
(0,027 g) para dar el compuesto del título (0,033 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,49 min.
Espectro de masas m/z 472 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
21
El Ejemplo de referencia 21 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
1-(bromometil)-3-yodobenceno (0,0121
g) para dar el compuesto del título (0,0087 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,83 min.
Espectro de masas m/z 486 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
22
El Ejemplo de referencia 22 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-isocianato-3-(trifluorometil)benceno
(18,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0112 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,56 min.
Espectro de masas m/z 462 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
23
El Ejemplo de referencia 23 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y 2-(bromometil)naftaleno
(0,009 g) para dar el compuesto del título (0,0052 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,81 min.
Espectro de masas m/z 410 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
24
El Ejemplo de referencia 24 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
2,6-dicloro-4-isocianatopiridina
(0,0258 g) para dar el compuesto del título (0,0165 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,46 min.
Espectro de masas m/z 463 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
25
El Ejemplo de referencia 25 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
4-isocianatobenzonitrilo (0,0196 g) para dar el
compuesto del título (0,0325 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,29 min.
Espectro de masas m/z 419 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
26
El Ejemplo de referencia 26 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
1-(bromometil)-3-clorobenceno (5,4
\mul) para dar el compuesto del título (0,0023 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,72 min.
Espectro de masas m/z 394 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
27
El Ejemplo de referencia 27 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
4-bromobut-1-eno
(4,1 \mul) para dar el compuesto del título (0,0027 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,34 min.
Espectro de masas m/z 324 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
28
El Ejemplo de referencia 28 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
[(2-bromoetil)tio]benceno (0,0089 g)
para dar el compuesto del título (0,0023 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,77 min.
Espectro de masas m/z 406 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
29
El Ejemplo de referencia 29 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
1-bromo-2-metoxietano
(3,8 \mul) para dar el compuesto del título (0,0041 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,22 min.
Espectro de masas m/z 328 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
30
El Ejemplo de referencia 30 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
4-(clorometil)-1,1'-bifenilo (0,0083
g) para dar el compuesto del título (0,0052 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,95 min.
Espectro de masas m/z 436 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
31
El Ejemplo de referencia 31 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-isocianatonaftaleno (19,6 \mul) para dar el
compuesto del título (0,0304 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,43 min.
Espectro de masas m/z 444 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
32
El Ejemplo de referencia 32 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y 4-isocianato de
1,1'-bifenilo (0,0266 g) para dar el compuesto del
título (0,0314
g).
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,65 min.
Espectro de masas m/z 470 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
33
El Ejemplo de referencia 33 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-isocianato-4-fenoxibenceno
(24,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0171
g).
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,62 min.
Espectro de masas m/z 486 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia
34
El Ejemplo de referencia 34 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-isocianato-4-[(trifluorometil)tio]benceno
(21,9 \mul) para dar el compuesto del título (0,0122 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,70 min.
Espectro de masas m/z 494 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
35
El Ejemplo de referencia 35 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-isocianato-4-(trifluorometoxi)benceno
(20,6 \mul) para dar el compuesto del título (0,0371 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,5 7min.
Espectro de masas m/z 478 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
36
El Ejemplo de referencia 36 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 1 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
4-isocianato-N,N-dimetilanilina
(0,0221 g) para dar el compuesto del título (0,031 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 1,68 min.
Espectro de masas m/z 437 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
37
El Ejemplo de referencia 37 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
2-cloro-5-(clorometil)tiofeno
(0,0068 g) para dar el compuesto del título (0,0098 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,84 min. Espectro de masas
m/z 400 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
38
El Ejemplo de referencia 38 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
1-(clorometil)-4-vinilbenceno
(0,0062 g) para dar el compuesto del título (0,0071
g).
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,72 min.
Espectro de masas m/z 386 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
39
El Ejemplo de referencia 39 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y benzoato de
2-bromoetilo (6,5 \mul) para dar el compuesto del
título (0,007 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,69 min.
Espectro de masas m/z 418 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
40
El Ejemplo de referencia 40 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
1-(2-bromoetoxi)-4-fluorobenceno
(0,0089 g) para dar el compuesto del título (0,007 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,69 min.
Espectro de masas m/z 408 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia
41
El Ejemplo de referencia 41 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
4-cloro-1-(4-clorofenil)butan-1-ona
(0,0089 g) para dar el compuesto del título (0,0043 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,83 min.
Espectro de masas m/z 450 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
42
A una solución agitada del Producto intermedio 9
(0,05 g) se añadió una solución de cloruro de
3,4-diclorobenzoílo (42,7 mg) en
N,N-dimetilformamida (7 ml). La mezcla se agitó a
22°C durante 15 h antes de evaporar el disolvente a vacío. El
residuo se purificó eluyendo a través de un cartucho de extracción
en fase sólida de 1 g de sílice (Varian Bondelut), eluyendo
secuencialmente con diclorometano, éter, acetato de etilo, acetona,
acetonitrilo y metanol, para dar el compuesto del título en forma
de un sólido blanco (0,080 g). CL/EM (Sistema A) Tr 3,10 min.
Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
43
Se añadió
4-fluoro-N-metilanilina
(0,007 ml) a una solución del Producto intermedio 10 (0,025 g) en
piridina anhidra (1 ml). La mezcla se calentó a 110°C en un vial de
vidrio de pared gruesa (Reactivial) durante 20 h. La mezcla se
evaporó para separar la piridina, y se repartió entre acetato de
etilo (10 ml) y solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (10
ml). La capa orgánica se lavó con bicarbonato sódico adicional (10
ml x 5), salmuera (10 ml), se secó (MgSO_{4}), y se concentró a
vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice
(tubo Trikonex flash 2002, 2 g), eluyendo con acetato de etilo al
70% en ciclohexano para dar el compuesto del título en forma de una
goma amarillo pálido 0,014 g.
CL-EM (sistema A) Tr 2,52 min.
Espectro de masas m/z 426 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
44
El Ejemplo de referencia 44 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y bromo(fenil)acetato
de etilo (0,029 g) para dar el compuesto del título (0,0372
g).
CL-EM (Sistema A): Tr 3,43 min.
Espectro de masas m/z 432 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
45
El Ejemplo de referencia 45 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y
2-bromo-2-fenilacetamida
(0,028 g) para dar el compuesto del título (0,0296 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,75 min.
Espectro de masas m/z 401 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
46
El Ejemplo de referencia 46 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 19 usando una mezcla del
Producto intermedio 9 (0,01 g) y bromoacetonitrilo (2,8 \mul) para
dar el compuesto del título (0,0039 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,79 min.
Espectro de masas m/z 309 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
47
Una suspensión de carbonato de 4-{[(resina de
poliestireno)metil]tio}fenilo y
4-nitrofenilo (preparado como se describe en
Tetrahedron Lett. (1998), 39 (22), 3631-3634,
1,5 g con 0,99 mmol/g) en N,N-dimetilformamida (15
ml) se agitó con el Producto intermedio 3 (0,80 g) a 22°C durante 1
h. La resina se filtró, se lavó con
N,N-dimetilformamida (x2), diclorometano (x3) y
N,N-dimetilformamida. La resina se agitó otra vez
con N,N-dimetilformamida (15 ml) y Producto
intermedio 3 (0,80 g) a 22°C durante 1 h antes de filtrar, lavar con
N,N-dimetilformamida (x2), diclorometano (x3) y
éter (x2) y secar a vacío para dar el producto intermedio la resina
de
[4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato
de 4-{[(resina de poliestireno)metil]tio}fenilo en
forma de perlas naranjas. A una muestra de esta resina (50 mg) en
un tubo de ensayo se añadió 4-clorobencilamina (9,6
\mul) y 1 gota de
1-metil-2-pirrolidinona,
y la mezcla se puso en un horno de microondas y se calentó a
potencia máxima (600 W) durante 5 min. Se añadió diclorometano (2
ml) y resina de formilpoliestireno, y la mezcla se agitó a 22ºC
durante 18 h. La suspensión se vertió en una columna de extracción
en fase sólida de 1 g (ácido sulfónico Isolute SCX), que después se
lavó con metanol antes de eluir con solución de amoniaco 0,880 al
10% en metanol. La fracción básica se evaporó a vacío para dar un
sólido de color crema que después se purificó por elución por un
cartucho de extracción en fase sólida de 1 g de sílice (Varian
Bondelut) eluyendo secuencialmente con diclorometano, éter, acetato
de etilo, acetona, acetonitrilo y metanol, para dar el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (4,7 mg).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,70 min. Espectro de masas
m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
48
El Ejemplo de referencia 48 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 47 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(3-clorofenil)metanamina (9,6 \mul) para
dar el compuesto del título (0,0092 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,73 min.
Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
49
El Ejemplo de referencia 49 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 47 usando una mezcla del
Producto intermedio 3 (0,025 g) y
1-(2-clorofenil)metanamina (9,6 \mul) para
dar el compuesto del título (0,008 g).
CL-EM (Sistema A): Tr 2,74 min.
Espectro de masas m/z 442 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
50
Separación quiral de la mezcla racémica del
Ejemplo de referencia 14:
El Ejemplo de referencia 14 (mezcla racémica,
0,040 g) se separó en sus enantiómeros individuales de configuración
desconocida con un sistema de HPLC preparativa quiral. La
separación se llevó a cabo usando una columna Chiralpak AD (2 cm x
25 cm), eluyendo con etanol al 60% en heptano (15 ml/min en 25 min.
Detección UV \lambda = 215 nm) para dar el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (0,012 g). HPLC preparativa,
tiempo de retención 7,5 min.
Ejemplo de referencia
51
El Ejemplo de referencia 51 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 50 dando el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (0,012 g). HPLC preparativa,
tiempo de retención 11 min.
Ejemplo de referencia
52
El Ejemplo de referencia 52 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto
intermedio 10 (0,04 g) y 3-acetamidobencilamina
(0,022 g), y se purificó por HPLC preparativa automática dirigida
por masas para dar el compuesto del título (0,008 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,47 min.
Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia
53
El Ejemplo de referencia 53 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 47 a partir del Producto
intermedio 3 (0,025 g) y 4-aminometilbenzamida
(0,016 g) para dar el compuesto del título (0,0083 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,16 min.
Espectro de masas m/z 451, 453 [MH^{+}].
El Ejemplo 1 se preparó de una forma análoga al
Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto intermedio 13 (0,079
g) y 4-aminometilbenzamida (0,032 g) usando
N,N-dimetilformamida como disolvente para dar el
compuesto del título (0,0837 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,27 min.
Espectro de masas m/z 451, 453 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al
15%/n-heptano: Tr 41,8 min.
Ejemplo de referencia
55
El Ejemplo de referencia 55 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto
intermedio 14 (0,109 g) y 4-aminometilbenzamida
(0,045 g) usando N,N-dimetilformamida como
disolvente para dar el compuesto del título (0,0828 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,27 min.
Espectro de masas m/z 451, 453 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al
15%/n-heptano: Tr 36,7 min.
Ejemplo de referencia
56
El Ejemplo de referencia 56 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto
intermedio 10 (0,040 g) y propargilamina (0,006 g) usando
diclorometano y trietilamina a una temperatura de 22°C para dar el
compuesto del título (0,028 g).
CL-EM (sistema A) Tr 2,22 min.
Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al
15%/n-heptano: Tr 12,25 min y 14,1 min.
Ejemplo de referencia
57
El Ejemplo de referencia 57 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto
intermedio 13 (0,1 g) y propargilamina (0,014 g) usando
diclorometano y trietilamina a una temperatura de 22°C para dar el
compuesto del título (0,064 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,40 min.
Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al
15%/n-heptano: Tr 14,14 min.
Ejemplo de referencia
58
El Ejemplo de referencia 58 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 43 a partir del Producto
intermedio 14 (0,12 g) y propargilamina (0,014 g) usando
diclorometano y trietilamina a una temperatura de 22°C para dar el
compuesto del título (0,057 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,37 min.
Espectro de masas m/z 356 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente EtOH al
15%/n-heptano: Tr 12,26 min.
Ejemplos de referencia
59-122
Ejemplo de referencia
123
Se añadió hidróxido sódico (0,09 g) a una
solución agitada del Ejemplo de referencia 105 (0,522 g) en una
mezcla de agua (5 ml) y metanol (5 ml) a 20°C, y se continuó
agitando a 20°C durante 18 h. El pH de la mezcla se ajustó a
aproximadamente 6 por adición de hidróxido sódico acuoso 2 M y la
mezcla se aplicó en dos porciones iguales a cartuchos de
intercambio iónico (10 g, Isolute SCX preacondicionados con
metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido
de trietilamina al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y
evaporación de las primeras fracciones básicas a vacío dio el
compuesto del título en forma de un sólido marrón (0,468 g).
CL-EM (Sistema A) R, 2,60 min.
Espectro de masas m/z 452 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
124
Se añadió cloruro de hidrógeno 4,0 M en
1,4-dioxano (2,0 ml) a una solución agitada del
Ejemplo 1 (0,100 g) en metanol (10 ml), y se continuó agitando a
22°C durante 1 h. Los disolventes se evaporaron con una corriente
de nitrógeno y el residuo se volvió a disolver en metanol (4 ml). Se
añadió tolueno (4 ml) y los disolventes se evaporaron otra vez con
una corriente de nitrógeno. El residuo se volvió a disolver en
metanol (4 ml), se añadió tolueno (4 ml) y los disolventes se
evaporaron otra vez con una corriente de nitrógeno. El residuo
blanco se trituró en éter y el disolvente se evaporó con una
corriente de nitrógeno antes de secar a vacío para dar el compuesto
del título en forma de un sólido blanco (0,117 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,25 min.
Espectro de masas m/z 451 [MH^{+}].
RMN ^{1}H (D6 DMSO): 11,45 \delta
(1H, s ancho, NH^{+}), 7,97-7,92 \delta
(2H, d+s ancho, CH+NH Aromático) 7,82 \delta (2H,
1/2AA'BB', 2xCH Aromático), 7,75 \delta (1H, d, CH
Aromático), 7,59 \delta (1H, dd, CH Aromático), 7,32
\delta (1H, s ancho, NH), 7,28 \delta (2H,
1/2AA'BB', 2xCH Aromático), 6,62, 6,28 \delta (2H, 2xs
ancho v., CONH_{2}), 4,35 \delta (2H, AB, CH_{2}), 4,25
\delta (2H, s, CH_{2}), 3,95 \delta (1H, dd,
CH), 3,88-3,79 \delta (2H, m, 2xCH), 3,28
\delta (1H, d ancho, CH), 3,25-3,18
\delta (2H, m ancho, 2xCH), 3,09 \delta (1H, dd,
CH), 3,00 \delta (1H, m ancho, CH), 2,78 \delta
(1H, m, CH).
Ejemplo de referencia
125
Una solución del Producto intermedio 22 (0,024
g) en diclorometano (1 ml) se agitó con el Producto intermedio 20
(0,033 g) y N,N-diisopropiletilamina (0,022 ml)
durante 3 h a 23°C. El disolvente se separó a vacío y el residuo se
purificó por extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico
Isolute SCX) eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10%
en metanol. La fracción básica se concentró a vacío y el residuo se
disolvió en diclorometano (5 ml), y la solución se agitó con resina
de poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut
technologies, 0,256 g, 1,43 mmol/g) durante 16 h. La solución se
drenó de la resina y la resina se lavó con diclorometano (8 ml); el
filtrado y los lavados combinados se concentraron a vacío para dar
el compuesto del título en forma de una goma amarillo pálido (0,02
g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,17 min. Espectro de masas
m/z 356 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
126
El Ejemplo de referencia 126 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 125 a partir Producto
intermedio 23 (0,030 g). La purificación adicional usando un
cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian
Bond Elut), eluyendo con metanol al 0-5% en acetato
de etilo , dio el compuesto del título en forma de una goma
transparente (0,025 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,95 min. Espectro de masas
m/z 328 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
127
El Ejemplo de referencia 127 se preparó de una
forma análoga al Ejemplo de referencia 125 a partir del Producto
intermedio 19 (0,029 g). La purificación adicional usando un
cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian
Bond Elut), eluyendo con metanol al 0-5% en acetato
de etilo, dio el compuesto del título en forma de una goma
transparente (0,021 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 1,93 min. Espectro de masas
m/z 322 [MH^{+}].
Ejemplos de referencia
128-130
Ejemplo de referencia
131
El Ejemplo de referencia 123 (0,050 g),
1-hidroxibenzotriazol (0,066 g) y clorhidrato de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(0,116 g) se agitaron en N,N-dimetilformamida (4,2
ml) y se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,132 ml)
a la mezcla. Se continuó agitando a 20ºC hasta que se obtuvo una
solución transparente. Se añadió metilamina 2,0 M en
tetrahidrofurano (0,379 ml) en una porción a la mezcla (1,0 ml) y la
mezcla se agitó a 20ºC en atmósfera de nitrógeno durante 17 h. La
mezcla se aplicó en dos porciones iguales a cartuchos de intercambio
iónico (2x 2 g, Isolute SCX preacondicionados con metanol). La
elución con metanol (3 volúmenes de columna) seguido de amoniaco
0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes de columna) y evaporación de
las fracciones básicas a vacío dio el producto en bruto. La
purificación por cromatografía de resolución rápida Biotage en un
cartucho de gel de sílice (8 g), eluyendo con
diclorometano/etanol/amoniaco 0,880 100:8:1, dio el compuesto del
título en forma de un sólido blanco (0,0124 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,22 min.
Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente etanol al 15%
en n-heptano Tr 24,0 min y 27,7 min.
Ejemplos de referencia
132-135
Ejemplo de referencia
136
Se añadió el Producto intermedio 30 (0,041 g) a
una solución agitada del Producto intermedio 29 (0,110 g) en
N,N-dimetilformamida (2 ml) a 22°C, y se añadió
N,N-diisopropiletilamina (0,052 ml). Después de
agitar durante 20 h, la mezcla se aplicó en dos porciones iguales a
cartuchos de intercambio iónico (10 g, Isolute SCX preacondicionado
con metanol). La elución con metanol (3 volúmenes de columna)
seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (2 volúmenes de
columna) y evaporación de las primeras fracciones básicas a vacío
dio el producto en bruto. La purificación por cromatografía de
resolución rápida Biotage en gel de sílice (cartucho de 8 g),
eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 0,880 100:8:1, dio el
compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,0828 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,19 min.
Espectro de masas m/z 414 [MH^{+}].
HPLC quiral analítica, eluyente etanol/ácido
trifluoroacético al 0,1% al 30% en n-heptano Tr 10,1
min.
Ejemplos de referencia
137-144
Ejemplo de referencia
145
Se añadieron el Producto intermedio 40 (0,0225
g) y N,N-diisopropiletilamina (0,021 ml) a una
solución del Producto intermedio 10 (0,044 g) en diclorometano (3
ml), y la mezcla se agitó a 22°C durante 19 h. Se añadió resina
depuradora de formil-poliestireno (2,95 mmol/g, 0,02
g) y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se filtró, la resina
se lavó con diclorometano, y el filtrado se aplicó directamente a un
cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute
SCX). La elución con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en
metanol dio el producto en bruto (0,04 g). La purificación por
cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut, cartucho de 1 g),
eluyendo con diclorometano, éter, acetato de etilo, y acetona, dio
el compuesto del título (0,029 mg).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,22 min.
Espectro de masas m/z 452 [MH^{+}].
Ejemplos de referencia
146-159
Ejemplo de referencia
160
Se añadió cloruro de metansulfonilo (0,009 ml) a
una solución del Producto intermedio 16 (0,04 g) y
N,N-diisopropiletilamina (0,048 ml) en
diclorometano (3 ml). La solución se agitó durante 5 h a 23°C. El
disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por
extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX)
eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol,
para dar el compuesto del título en forma de una goma amarillo
pálido (0,034 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,5 min. Espectro de masas
m/z 479 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
161
El Ejemplo de referencia 161 se hizo de una
forma análoga a la del Ejemplo de referencia 160.
CL-EM (Sistema A) Tr 2,86 min.
Espectro de masas m/z 561 [MH+].
Ejemplo de referencia
162
Se añadió cloruro de benzoílo (0,014 ml) a una
solución del Producto intermedio 16 (0,04 g) y
N,N-diisopropiletilamina (0,048 ml) en
diclorometano (3 ml). La solución se agitó durante 5 h a 23°C. El
disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por
extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX)
eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol.
La fracción básica se concentró a vacío y el residuo se purificó
más usando un cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice
(1 g, Varian Bond Elut), eluyendo secuencialmente con
diclorometano, acetato de etilo, acetona, acetonitrilo, y metanol,
para dar el compuesto del título en forma de una goma transparente
(0,024 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,63 min. Espectro de masas
m/z 506 [MH^{+}].
Ejemplos de referencia
163-168
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
169
Se añadieron 1,4-tioxano (0,02
g) y N,N-diisopropiletilamina (0,04 ml) a una
solución del Producto intermedio 10 (0,08 g) en diclorometano (2
ml). La mezcla se agitó a 23°C durante 16 h, y el disolvente se
evaporó a vacío. El residuo se disolvió en diclorometano (3 ml), y
la solución se agitó con resina de
poliestireno-isocianato de metilo (Argonaut
Technologies, 0,14 g, 1,45 mmol/g) durante 2 h. La solución se drenó
de la resina, y la resina se lavó con diclorometano (6 ml) y
metanol (3 ml); el filtrado y los lavados combinados se concentraron
a vacío. El residuo se purificó más por extracción en fase sólida
(columna de ácido sulfónico Isolute SCX), eluyendo con metanol
seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol, para dar el compuesto
del título en forma de una goma amarillo pálido (0,065 g).
CL-EM (sistema A) Tr 2,55 min.
Espectro de masas m/z 404 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplos de referencia
170-174
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
175
Se añadió Oxone (0,135 g) al Ejemplo de
referencia 169 (0,06 g) en metanol:agua (10:1, 4 ml) a 23°C en
atmósfera de nitrógeno, y la mezcla se agitó durante 18 h. El
metanol se separó a vacío, la capa acuosa se diluyó con solución de
sulfito sódico (al 5%, 5 ml) y el producto se extrajo con
diclorometano (8 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (5 ml),
se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar el compuesto
del título en forma de un sólido blanco (0,055 g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,34 min. Espectro de masas
m/z 436 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplos de referencia
176-181
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
182
Se añadió cloruro de ciclopropanocarbonilo
(0,014 ml) a una solución del Producto intermedio 18 (0,54 g) y
N,N-diisopropiletilamina (0,063 ml) en diclorometano
(2 ml). La solución se agitó durante 3 h a 23°C. El disolvente se
separó a vacío y el residuo se purificó por extracción en fase
sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX) eluyendo con
metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol. La fracción
básica se concentró a vacío y el residuo se purificó más usando un
cartucho de extracción en fase sólida de gel de sílice (1 g, Varian
Bond Elut), eluyendo con metanol al 0-1% en acetato
de etilo, para dar el compuesto del título en forma de una goma
transparente (0,023 g).
CL/EM (sistema A) Tr 2,35 min. Espectro de masas
m/z 483 [MH^{+}].
\newpage
Ejemplo de referencia
183
Se añadió cloruro de metansulfonilo (0,013 ml) a
una solución del Producto intermedio 18 (0,054 g) y
N,N-diisopropiletilamina (0,063 ml) en
diclorometano (2 ml). La solución se agitó durante 16 h a 23°C. El
disolvente se separó a vacío y el residuo se purificó por
extracción en fase sólida (columna de ácido sulfónico Isolute SCX)
eluyendo con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol,
para dar el compuesto del título en forma de una goma transparente
(0,035 g).
CL/EM (sistema A) Tr 2,34 min. Espectro de masas
m/z 493 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
184
A una solución de
1,1'-carbonildiimidazol (0,041 g) en diclorometano
(2 ml) a 0°C se añadió gota a gota una solución del Producto
intermedio 41 (0,079 g) en diclorometano (2 ml). La mezcla se agitó
a 0°C durante 1 h y a 22°C durante 1 h, se volvió a enfriar a
aproximadamente 0°C y se añadió gota a gota una solución de
4-aminometilbenzamida (0,041 g) en una mezcla de
diclorometano y N,N-dimetilformamida 1:1 (4 ml). La
mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a 22°C durante 1 h, y se aplicó
en dos porciones iguales a cartuchos de intercambio iónico (2 g,
Isolute SCX preacondicionado con metanol). La elución con metanol (3
volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol
(2 volúmenes de columna) y evaporación de las fracciones básicas a
vacío dio el producto en bruto. La purificación por cromatografía
de resolución rápida Biotage en un cartucho de gel de sílice (8 g),
eluyendo con diclorometano/etanol/amoniaco 0,880 150:8:1, dio el
compuesto del título en forma de un sólido blanco (0,0186 g).
CL-EM (sistema A) Tr 2,22 min.
Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}]
Ejemplo de referencia
185
El Producto intermedio 35 (0,045 g) en
diclorometano (1 ml) se trató con
N,N-diisopropiletilamina (0,021 ml) en un vial de 5
ml (Pierce Reacti-Vial™) seguido de
4-aminometilbenzamida (0,017 g). La mezcla se selló
en atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante
18 h. La solución se aplicó después a un cartucho de intercambio
iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) que se había tratado
previamente con metanol. El cartucho se eluyó con metanol (7
volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol
(3 volúmenes de columna) y las fracciones básicas se combinaron y
concentraron a vacío para dar una goma amarilla. La purificación
adicional por cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut,
cartucho de 1 g), eluyendo con metanol al 10% en acetato de etilo,
dio el compuesto del título en forma de una goma amarilla (0,036
g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,25 min. Espectro de masas
m/z 465 [MH^{+}]
Ejemplo de referencia
186
El Producto intermedio 34 (0,045 g) en
diclorometano (1 ml) se trató con
N,N-diisopropiletilamina (0,021 ml) en un vial de 5
ml (Pierce Reacti-Vial™) seguido de
4-aminometilbenzamida (0,017 g). La mezcla se selló
en atmósfera de nitrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante
18 h. La solución se aplicó después a un cartucho de intercambio
iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) que se había tratado
previamente con metanol. El cartucho se eluyó con metanol (7
volúmenes de columna) seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol
(3 volúmenes de columna) y las fracciones básicas se combinaron y
concentraron a vacío para dar una goma amarilla. La purificación
adicional por cromatografía en gel de sílice (Varian Bond Elut,
cartucho de 1 g), eluyendo con metanol al 10% en acetato de etilo,
dio el compuesto del título en forma de una goma amarilla (0,036
g).
CL/EM (Sistema A) Tr 2,27 min.
Espectro de masas m/z 465 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
187
Se añadió
N,N'-carbonildiimidazol (0,0132 g) a una solución
agitada del Producto intermedio 26 (0,030 g) en
N,N-dimetilformamida (2 ml), y la mezcla se agitó a
22°C en atmósfera de nitrógeno durante 40 min. Se añadió metilamina
(solución 2,0 M en tetrahidrofurano, 0,102 ml) se continuó agitando
a 22°C durante 17 h. La mezcla se aplicó directamente a un cartucho
de intercambio iónico de ácido sulfónico (2 g, Isolute SCX) y se
eluyó con metanol seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol para
dar una goma (0,042 g). La purificación por cromatografía en gel de
sílice (Varian Bond Elut, cartucho de 1 g), eluyendo con cloroformo,
éter, acetato de etilo, acetona, y metanol, dio una goma (0,025 g),
que se purificó más por HPLC preparativa dirigida por masas para dar
el compuesto del título en forma de una goma incolora (7,2 mg).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,11 min.
Espectro de masas m/z 417 [MH^{+}].
Ejemplo de referencia
188
El Ejemplo de referencia 188 se preparó de una
forma análoga a la del Ejemplo de referencia 189.
CL-EM (Sistema A): Tr 2,20 min.
Espectro de masas m/z 453 [MH+].
Ejemplo de referencia
189
Se añadió una solución del Producto intermedio
28 (0,027 g) en N,N-dimetilformamida (1 ml) y
diclorometano (2 ml) que contenía
N,N-diisopropiletilamina (0,041 ml) a una solución
agitada del Producto intermedio 13 (0,051 g) en diclorometano seco
(2 ml) a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla
se agitó a temperatura ambiente durante 21 h. La mezcla se aplicó
directamente a un cartucho de intercambio iónico de ácido sulfónico
(2 g, Isolute SCX) y se eluyó con metanol (6 volúmenes de columna)
seguido de amoniaco 0,880 al 10% en metanol (3 volúmenes de
columna); la evaporación de las fracciones de metanol/amoniaco dio
el producto en bruto (0,063 g). La purificación por cromatografía en
gel de sílice (cartucho de 2 g Varian Bond Elut), eluyendo con
cloroformo, éter, acetato de etilo, acetona, y metanol, dio el
compuesto del título en forma de una goma (0,036 g).
CL-EM (Sistema A) Tr 2,41 min.
Espectro de masas m/z 493 [MH^{+}].
Los compuestos de los Ejemplos y Ejemplos de
referencia se ensayaron en ensayos de unión a CCR-3
y/o de quimiotaxis de eosinófilos (ensayos (a) y (b)) y se
obtuvieron los siguientes resultados:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Los compuestos de los Ejemplos de referencia 1,
6-7, 9-12, 15, 17, 20, 24,
27-33, 35-36, 39-43,
45-46, 49-51, 53,
55-56, 58-135,
137-148 y 150-189 también se
ensayaron en el ensayo de unión a CCR-3 (ensayo (a))
y alcanzaron un valor de pCI50 mayor que 5,0.
El Ejemplo de referencia 14 cuando se ensayó en
el modelo in vivo de cobayas sensibilizadas con ovalbúmina (ensayo
(c); 0,2 - 20 mg/kg) mostró inhibición de la eosinofilia pulmonar y
la hiperreactividad bronquial. A lo largo de la memoria descriptiva
y las siguientes reivindicaciones, salvo que el contexto requiera
otra cosa, la palabra "comprender" y las variaciones tales
como "comprende" y "que comprende" se entenderá que
implican la inclusión de un número entero o etapa o grupo de números
enteros establecidos, pero no la exclusión de cualquier otro número
entero o etapa o grupo de números enteros.
Claims (11)
1. Un compuesto de fórmula (I):
que es
4-({[({[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metil}amino)carbonil]amino}metil)benzamida
y sales y solvatos del
mismo.
2. Una composición farmacéutica que
comprende un compuesto de fórmula (I) como se define en la
reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo farmacéuticamente
aceptable, mezclado con uno o más diluyentes o vehículos
farmacéuticamente aceptables.
3. Un compuesto de fórmula (I) como se
define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, para usar como producto
farmacéutico.
4. Un compuesto de fórmula (I) como se
define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o
profilaxis de una enfermedad inflamatoria.
5. Un compuesto de fórmula (I) como se
define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o
profilaxis de la bronquitis, asma, EPOC, o rinitis.
6. Un compuesto de fórmula (I) como se
define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o
profilaxis del asma.
7. Un compuesto de fórmula (I) como se
define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, para usar en el tratamiento o
profilaxis de la conjuntivitis, prurito, o poliposis nasal.
8. Uso de un compuesto de fórmula (I)
como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del
mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento o profilaxis de la bronquitis,
asma, EPOC o rinitis.
9. Uso de un compuesto de fórmula (I)
como se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del
mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento o profilaxis del asma.
10. Uso de un compuesto de fórmula (I) como
se define en la reivindicación 1, o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento
para el tratamiento o profilaxis de la conjuntivitis, prurito o
poliposis nasal.
11. Un procedimiento para preparar un
compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, que
comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
que es
[(2S)-4-(3,4-diclorobencil)morfolin-2-il]metilcarbamato
de 4-nitrofenilo, con un compuesto de fórmula
(III)
que es
4-aminometilbenzamida.
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