ES2268718T3 - Procedimiento para la preparacion de una composicion que contiene factor viii. - Google Patents
Procedimiento para la preparacion de una composicion que contiene factor viii. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2268718T3 ES2268718T3 ES97109314T ES97109314T ES2268718T3 ES 2268718 T3 ES2268718 T3 ES 2268718T3 ES 97109314 T ES97109314 T ES 97109314T ES 97109314 T ES97109314 T ES 97109314T ES 2268718 T3 ES2268718 T3 ES 2268718T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- fviii
- solution
- factor viii
- preparation
- procedure
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title claims abstract description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 32
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 136
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims description 135
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 20
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 13
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 9
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 8
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 8
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 2
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 claims description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 claims 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 33
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 27
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 7
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 5
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 5
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000003686 blood clotting factor concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028516 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase U Human genes 0.000 description 1
- 208000026552 Severe hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 229920001469 poly(aryloxy)thionylphosphazene Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
LA INVENCION TRATA DE UN PROCEDIMIENTO PARA LA FABRICACION DE UNA COMPOSICION QUE CONTIENE UN FACTOR VIII ALTAMENTE PURIFICADO, CON DOBLE INACTIVACION VIRICA PROVENIENTE DE PLASMA SANGUINEO HUMANO.
Description
Procedimiento para la preparación de una
composición que contiene factor VIII.
La invención se refiere a un procedimiento para
la preparación de una composición que contiene Factor VIII (Factor
VIII de coagulación sanguínea, abreviado FVIII), con una
purificación especialmente alta y doblemente inactivado para virus,
a partir del plasma sanguíneo humano.
En el estado de la técnica se describen
procedimientos para la preparación de productos de FVIII altamente
purificados e inactivados para virus, aislados del plasma sanguíneo
humano. Por ejemplo, el documento EP 0 367 840 describe la
preparación de un producto de FVIII que utiliza intercambiadores de
iones para la purificación de FVIII. Para la inactivación de virus,
la solución de FVIII se trata con disolventes /detergentes orgánicos
biocompatibles. El documento DE 42 04 694 describe intercambiadores
de aniones con diferentes características que son apropiados para
la purificación de FVIII.
El documento EP 0 337 144 describe materiales de
separación para el fraccionamiento de biopolímeros, que se pueden
utilizar en la cromatografía de afinidad o de intercambio iónico. El
documento EP 0 567 448 describe la combinación de las medidas de
una purificación cromatográfica, un tratamiento tensioactivo del
FVIII en solución acuosa, y un tratamiento térmico de la
preparación de FVIII en estado sólido. El tratamiento térmico se
lleva a cabo con vapor caliente en presencia de metanol o etanol,
bajo el establecimiento de determinadas relaciones cuantitativas.
El documento WO 93/15105 describe la preparación de FVIII a partir
de crioprecipitados, con el empleo de intercambiadores de aniones.
El documento EP 0 399 321 describe la preparación de un concentrado
de FVIII por precipitación del FVIII con polietilenglicol (PEG) y
tratamiento térmico, en presencia de sacarosa (1,2 hasta 0,6 g/m de
concentrado de FVIII). El documento FBE 0 383 645 describe la
preparación de un concentrado de FVIII por separación del FVIII del
Factor de von Willebrand. El documento EP 0 412 466 describe la
preparación de FVIII con alta actividad específica, que,
adicionalmente, se pasteuriza. La Patente de EE.UU. 5.099.002
describe el calentamiento de concentrados de coagulación
liofilizados para reducir la capacidad de infección de virus, en
caso que estén presentes. El documento WO 94/17 834 describe la
inactivación de virus mediante el tratamiento de la fuente con
fosfatos alquílicos, de manera simultánea o consecutiva, y a una
temperatura de 55ºC hasta 67ºC durante un período de tiempo de 5
hasta 30 horas. El documento EP 018 561 describe la preparación de
factores de coagulación por calentamiento a 60-70ºC,
en presencia de glicina y un sacárido en solución. El documento EP
0 094 611 describe una composición enriquecida en FVIII para la
preparación de un medicamento que se calienta a 60ºC hasta 125ºC en
estado liofilizado, con una actividad específica mayor que 300
unidades de FVIII por gramo de proteína.
En la publicación "Hemophilia World
1995; Vol. 2; Nº 3" se recopilan en un suplemento de este volumen
los concentrados de FVIII y FIX disponibles en ese momento en los
EE.UU., bajo el título "Clotting Factor Concentrates, USA
1995". De esta publicación proceden los datos de la Tabla 1 sobre
los procedimientos de inactivación de virus con los que se tratan
estos productos, complementados con productos y fabricantes
europeos.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\vskip1.000000\baselineskip
Los concentrados de FVIII mencionados en la
Tabla 1 han sido desarrollados en los diez últimos años (Kasper CK,
Lusher JM y The Transfusion Practices Commitee of the American
Association of Blood Banks. "Recent evolution of clotting factor
concentrates for haemophilia A and B". Transfusion 1993,
33: 422-4334). El objetivo más importante en el
desarrollo de estos productos ha sido el de mejorar su seguridad en
relación con la transmisión de virus. Este objetivo se ha logrado
por la mejoría del análisis de los donantes y el uso de nuevas
técnicas para la inactivación de virus y purificación del
FVIII.
A finales de la década de los años 70 y
principios de la de los 80, se desarrollaron dos de los más
importantes procedimientos para inactivación de virus en
concentrados de FVIII. Uno de los procedimientos comprende un
tratamiento térmico del FVIII en solución, en presencia de
estabilizadores. El otro procedimiento describe el uso de fosfatos
alquílicos. En 1979 se describió en el documento EP 0 018 561 el
calentamiento del FVIII en solución, en presencia de azúcares
(40-60%) y aminoácidos (1-2,5
mol/l). El calentamiento de proteínas en soluciones, en presencia
de azúcares, se amplió por la adición de sales que contienen iones
de Ca (documento EP 0 106 269). El método de inactivación de virus
en soluciones de proteínas se complementó por medio de variantes de
las citadas publicaciones, tales como el documento EP 0 035 204, en
el que el intervalo de temperaturas se amplió desde 60ºC hasta
75ºC, y la concentración del azúcar se utilizó desde 30% hasta la
saturación. El calentamiento de fracciones proteicas que contienen
FVIII en estado liofilizado se describe en el documento EP 0 171
506. El intervalo de temperatura comprende desde 60ºC hasta 125ºC.
El tratamiento con vapor de fracciones de plasma que contienen
FVIII se ha mencionado ya anteriormente.
En el documento EO 0 131 740 se describe el
tratamiento de fracciones de plasma que contienen FVIII con una
combinación de un fosfato alquílico y un detergente. Este
procedimiento ha demostrado ser especialmente eficaz en la
inactivación de virus encapsulados (Horowitz MS et al.,
Lancet 1988, 2:186-189; Horowitz B.,
Curr. Stud. Hematol. Blood Transfus. 1989, 56:
83-96; Horowitz B., Transfusion 1985,
25:516-522). En principio, este procedimiento de
inactivación de virus (procedimiento de
disolvente-detergente (SD)), sin embargo, no es
capaz de inactivar virus sin una envoltura viral lipídica.
Dado que en la fabricación de medicamentos a
partir de plasma humano no cabe excluir el riesgo de transmisión de
patógenos infecciosos por el análisis de los plasmas de donantes,
este riesgo se debe reducir, adicionalmente, mediante el uso de
procedimientos de inactivación de virus. Las medidas para inactivar
virus con envoltura son especialmente recomendables después de que
en 1992-1993 se informara de aprox. 100 casos de
infección de hepatitis A en relación con un concentrado de FVIII
tratado con SD (Lancet (1992), 340: 123; Lancet
(1993), 341: 179; Ann. Intern. Med. (1994);
MMWR (1996), Vol. 45, Nr. 2: 29-32). Estos
casos de hepatitis A tuvieron como consecuencia un plan escalonado
de las autoridades alemanas (Pharm. Ind. 1993;
4:71-72).
Además del riesgo de transmisión de patógenos
infecciosos a través de productos de FVIII, la aparición de
inhibidores de FVIII (anticuerpos contra FVIII) constituye un
problema fundamental en la terapia de sustitución de la hemofilia
A. Los anticuerpos aparecen en 3-52% de los
pacientes con hemofilia A grave, lo que explicable mediante una
serie de variables (De Blasi R. et al., Thrombosis
Haemostasis 1994, 71:544-7; Ehrenforth S. et
al., Lancet 1992; 339:594-8; Scharrer I.
et al., Blood Coag. Fibrinol. 1993,
4:753-8; McMillan CW. et al., Blood
1988, 71:344-8). Dichas variables se refieren a la
edad de los pacientes, la frecuencia de tratamiento, y al tipo de
preparado de FVIII (Addiego JE. et al., Thromb.
Haemost. 1993, 67:19-27; Burnouf T. et
al., Vox. Sang. 1991, 60: 8-15; Peerlink
K. et al., Thromb. Haemost. 1993,
69:115-8; Rodendaal FR. et al., Blood
1993, 81: 2180-6; Sultan Y., Thromb.
Haemostat. 1992, 67: 600-2; Peerlink K.
et al., Blood 1993, 81; 3332-5;
Guérois C. et al., Thrombos Haemostas 1995, 73 (2):
215-8).
Las diferencias de inmunorrespuesta de los
pacientes o de su predisposición genética podrían influir sobre la
incidencia de los inhibidores (Roberts HR., Blood Coag and
Fibrinol 1991, 2(1): 21-23; Hoyer J.
Brit. J. of Haematology 1995, 90:
498-501).
Adicionalmente, se ha demostrado que diferentes
mutaciones del gen de FVIII están correlacionadas con la aparición
de anticuerpos (Schwaab R. et al., Thrombosis and
Haemostasis 1995, 74 (8); 1402-1406).
Las variables que influyen sobre la incidencia
de inhibidores de FVIII son:
- 1.
- El paciente: defecto genético, reacciones inmunológicas características, estado inmunológico.
- 2.
- El tratamiento: producto de FVIII, número de exposiciones.
- 3.
- La evaluación: supervisión y sensibilidad de los métodos de supervisión.
Aun cuando hasta la fecha no es posible atribuir
claramente a una única causa la aparición de anticuerpos contra
FVIII con propiedades inhibitorias, los resultados de algunos
estudios ponen de manifiesto la importancia que se asigna a los
preparados de FVIII en la inducción de inhibidores de FVIII
(Vermylen I. et al., Acta Clinica Belgica (1991); 46:
20).
Desde mayo de 1990 hasta septiembre de 1991, se
trataron pacientes con hemofilia A ya sometidos a frecuentes
tratamientos (PTPs = previously multitransfused hemophiliacs =
hemofílicos sometidos anteriormente a múltiples transfusiones), con
un nuevo concentrado de FVIII. Este producto había sido purificado
por cromatografía sobre vidrio y pasteurizado. De 47 pacientes
tratados exclusivamente con este producto, 4 desarrollaron un título
elevado de inhibidores (40, 90, 100 y 200 Unidades Bethesda (BU)).
Otro paciente (20 BU) fue tratado, básicamente, también con este
producto de FVIII. El uso de este producto se interrumpió a causa de
estos hallazgos.
La preparación de un concentrado de FVIII
altamente purificado a partir de grandes combinaciones de plasma,
con una actividad específica de 100 requiere que se satisfagan
numerosos requisitos en el procedimiento de producción de un
concentrado de FVIII de esta clase.
El efecto de las medidas de inactivación de
virus sobre la estructura de las proteínas es una cuestión
importante, especialmente con respecto al problema de los
inhibidores. La principal función biológica del FVIII, su actividad,
debería tener en el concentrado de FVIII, utilizado para el
tratamiento de los pacientes hemofílicos, una relación
prácticamente idéntica a la proteína FVIII, el
FVIII-Ag, que en el medio, el plasma, del cual se
aísla.
El concentrado de FVIII, obtenido tras la
purificación a partir del plasma, debería contener, además del
FVIII, básicamente sólo el factor de von Willebrand (vWF), su
proteína portadora natural. Dado que el objetivo de la purificación
del FVIII desde el plasma es separarlo de las restantes proteínas
plasmáticas, se debe evitar el uso de proteínas plasmáticas como
estabilizadores, ya que éstas anularían los esfuerzos realizados
para la purificación. En consecuencia, el paciente hemofílico debe
recibir únicamente la proteína que necesita. El FVIII purificado
desde el plasma está compuesto por una mezcla de polipéptidos con
pesos moleculares entre 80 y 210 kDa, que representan una serie de
subunidades de diversos heterodímeros (Kaufmann, R., Transfusion
Medicine Reviews 1992, 4: 235-
246).
246).
Por consiguiente, la presente invención tiene
como misión la puesta a punto de un nuevo procedimiento para
purificar e inactivar los virus de los materiales de partida que
contienen Factor VIII, esencialmente sin utilizar
estabilizadores.
Esta tarea se resuelve por el procedimiento
caracterizado en las reivindicaciones. De manera especial, se pone
a punto un procedimiento para la preparación de una composición que
contiene Factor VIII, que comprende los pasos de:
- (a)
- tratamiento con fosfato de tri(n-butilo)/detergente de una solución que contiene Factor VIII, y
- (b)
- tratamiento térmico de un material liofilizado que contiene Factor VIII, que tiene una humedad residual dentro del intervalo de 0,3 hasta 1,8% en peso, a aproximadamente 100ºC durante 15 hasta 120 min,
en donde la solución que contiene
Factor VIII se congela de forma ultra-rápida en
nitrógeno líquido antes de la
liofilización.
El procedimiento según la invención para la
preparación de un concentrado de FVIII altamente purificado y sin
acción inmunogénica a partir de plasma humano, se lleva a cabo
utilizando dos diferentes procedimientos de inactivación de virus.
Esta doble inactivación viral comprende, como se ha mencionado
anteriormente, el tratamiento de la solución de FVIII con fosfato
de tri-(n-butilo) ("TNBP")/derivado de
polioxietileno del éster de sorbitano (Tween®) (SD = disolvente
detergente), preferentemente 0,2-0,5% en peso de
TNBP/0,5-3% en peso de Tween®, y un tratamiento
térmico del producto final liofilizado de FVIII en el envase final a
100ºC durante 30 minutos, con un contenido en humedad residual de
0,3% hasta 1,8% en peso. Adicionalmente, en la preparación se
utilizan, preferentemente, pasos para el empobrecimiento en
virus.
El concentrado de FVIII preparado a partir de
plasma humano, según la invención, se designará en lo sucesivo como
"FVIII SDH" (SDH = disolvente/detergente/calor [en sus siglas
en inglés/alemán]). El FVIII SDH se prepara, preferentemente, a
partir de un crioprecipitado como material de partida, obtenido
según métodos conocidos de un combinado de plasma. En el
crioprecipitado se encuentran presentes prácticamente todas las
proteínas plasmáticas, algunas en forma enriquecida con respecto al
plasma, en especial el FVIII y fibrinógeno.
El procedimiento según la invención del FVIII
SDH comprende, en una forma de realización preferida, los siguientes
pasos de preparación:
- (1)
- La separación del fibrinógeno y, eventualmente, la separación de otros factores de coagulación del complejo PPSB se lleva a cabo, por ejemplo, por una precipitación con etanol y/o por adsorción sobre Al(OH)_{3}.
- (2)
- La inactivación de virus de la fracción bruta de FVIII se realiza, preferentemente, con TNBP/Tween® 80.
- (3)
- La cromatografía de columna específica con intercambiadores de iones da lugar a la separación de TNBP y Tween® 80, así como a la separación de las restantes proteínas plasmáticas.
- (4)
- El eluato se somete, preferentemente, a dia-y/o ultrafiltración, ajustándose los electrolitos a las concentraciones deseadas.
- (5)
- Tras la filtración estéril, se lleva a cabo el envasado final en viales de vidrio, que se sumergen en nitrógeno líquido (aproximadamente -195ºC), con lo cual la solución de FVIII experimenta una congelación ultra-rápida.
- (6)
- La liofilización de la solución de FVIII congelada tiene lugar a alto vacío y se lleva a cabo hasta una humedad residual del producto final dentro de un intervalo de 0,3 hasta 1,8%.
- (7)
- El preparado liofilizado se calienta a 100ºC en un autoclave durante 30 min.
El producto de FVIII preparado según la
invención carece de acción inmunogénica y está enriquecido, con
respecto al plasma de partida, por ejemplo, en alrededor de
10^{4} veces, especialmente por la aplicación de la purificación
cromatográfica.
Los pasos de empobrecimiento en virus del
procesamiento y purificación de FVIII a partir de plasma humano,
utilizando el procedimiento según la invención para la preparación
de un concentrado de FVIII sin acción inmunogénica, se muestran en
la Tabla 2. Para algunos virus con y sin envoltura destacados, los
índices de inactivación para cada paso de procesamiento de la
preparación de concentrado de FVIII se expresan en log 10.
El concentrado de FVIII preparado de acuerdo con
el procedimiento según la invención a partir de plasma humano
contiene el FVIII, por ejemplo, en una cantidad enriquecida 10.000
veces con respecto al plasma. La concentración detectable por 1.000
UI de FVIII SDH (UI = Unidades Internacionales) de las proteínas
individuales se compara con la concentración de proteínas presente
en un litro de plasma (Tabla 3).
| Proteína | Concentración en plasma | FVIII SDH | Método |
| (mg/l) | (mg/1000 UI) | ||
| FVIII | 0,1 - 0,2 | 0,1 - 0,2 | 1 |
| Proteínas totales | 65.000 | 10 | 2 |
| vWF | 18 | 6 | 1 |
| Fibrinógeno | 3.000 | 3,5 | 3 |
| Fibronectina | 30 | 0,3 | 3 |
| Albúmina | 44.000 | 0,03 | 3 |
| IgG | 12.000 | 0,5 | 3 |
| IgM | 1.400 | 0,2 | 3 |
| IgA | 2.100 | <0,01 | 3 |
| 1 = ELISA (ensayo de inmunosorción ligado a enzimas) | |||
| 2 = Bradford (autor del método) (Bradford MM: Analytical Biochemistry 1976, 72:248-254) | |||
| 3 = RID (Inmunodifusión radial) |
De esta exposición de los datos de concentración
de las proteínas detectables en FVIII SDH se deduce que, por
ejemplo, 96% de las cantidades de proteínas detectables en el
producto está compuesto por FVIII, vWF y fibrinógeno no coagulable.
El fibrinógeno está presente como fibrinógeno no coagulable, es
decir, la determinación de fibrinógeno según Clauss ofrece un
resultado negativo (Clauss A., Acta Haemat 1957,
17:237-246).
Los métodos utilizados para la preparación de
los concentrados de FVIII y para la inactivación o eliminación de
los virus presentes en el plasma sanguíneo influyen, probablemente,
sobre la estructura y actividad biológica de las proteínas. Un
requisito fundamental de la capacidad de utilización de los
productos de FVIII es que, antes de su administración y tras la
adición del disolvente - normalmente, se trata de agua apropiada
para aplicaciones clínicas (agua para inyección) - éste se disuelva
sin formar residuos. Las proteínas desnaturalizadas son básicamente
insolubles en agua. La estructura y actividad biológica del producto
de FVIII preparado según la invención están conservadas cuando se
le prepara de acuerdo con el procedimiento según la invención ya
que, solamente bajo estas condiciones, el concentrado de FVIII se
disuelve con agua para inyección, sin producir residuos tras su
calentamiento durante hasta 2 horas a 100ºC.
El requisito decisivo para que el FVIII SDH
según la invención se pueda calentar durante 30 min a 100ºC, sin
que sufra desnaturalización, pero disolviéndose en agua sin formar
residuos, y para no tener que agregar al tampón de liofilización un
estabilizador en forma de proteínas o azúcares, es la congelación
ultra-rápida de la solución de FVIII en nitrógeno
líquido, a una temperatura de -195ºC, antes de la liofilización.
Sorprendentemente, la estructura y la actividad biológicas del
concentrado de FVIII, FVIII SDH, preparado por el procedimiento
según la invención, no resultan alteradas, y no se produce
desnaturalización de las proteínas por el calentamiento.
Para comprobar el efecto del procedimiento de
preparación según la invención sobre la estructura de las proteínas,
se ha llevado a cabo una serie de ensayos físicos y biológicos
(Kotitschke R. et al., Hämostaseologie 1994,
14:100-3; Arrighi S. et al., Thromb
Haemost 1995, 74 (3); 868-73). Se ha analizado
especialmente el efecto del tratamiento térmico sobre las proteínas
bajo las condiciones del procedimiento de preparación según la
invención, ya que, tal y como se sabe, el FVIII es extremadamente
inestable al almacenamiento y sensible al tratamiento térmico.
El tratamiento térmico del FVIII en solución
exige habitualmente la estabilización del FVIII mediante la adición
de determinados estabilizadores. Además, se conoce la posibilidad de
aplicar un tratamiento térmico del FVIII en estado liofilizado, sin
una pérdida de actividad digna de mención, sólo para productos de
FVIII cuya actividad específica tras su preparación a partir de
plasma es muy baja (por ejemplo, <20), o a los que se deben
agregar estabilizadores en forma de proteínas o azúcares (véase la
Tabla 1).
El producto FVIII SDH según la invención se
puede calentar, sorprendentemente, sin que se produzca una pérdida
de actividad digna de mención, a 100ºC durante un período de hasta 2
horas, cuando el contenido en humedad residual es menor que 1,8%, y
la solución que contiene el Factor VIII se ha congelado de forma
ultra-rápida en nitrógeno líquido, antes de la
liofilización. Sobre la base de los datos que aparecen a
continuación, es evidente que el producto de FVIII calentado y no
calentado ofrece resultados idénticos en cuanto a la comprobación
de su estructura y actividad (Fig. 2 y Tabla 4).
\vskip1.000000\baselineskip
| Tratamiento | FVIIIC (x 10) | FVIIIAg (x 10) | FVIIIC / FVIIIAg (/10) |
| Crio | 0,98 | 1,66 | 5,9 |
| Al(OH)_{3} | 0,79 | 1,38 | 5,7 |
| TNBP/Tween® | 0,59 | 1,01 | 5,8 |
| Eluato-S | 3,18 | 4,68 | 6,8 |
| ZP (UF/DF) | 5,79 | 8,55 | 6,8 |
| GT | 5,57 | 6,95 | 8 |
| SDH | 5,25 | 6,8 | 7,7 |
| Tratamiento | FVIIIC (x 10) | FVIIIAg (x 10) | FVIIIC / FVIIIAg (/10) |
| Crio | 1,29 | 1,3 | 9,9 |
| Al(OH)_{3} | 0,99 | 1,01 | 9,8 |
| TNBP/Tween® | 0,67 | 0,7 | 9,6 |
| Eluato-S | 4,46 | 5 | 8,9 |
| ZP (UF/DF) | 6,31 | 6,45 | 9,7 |
| GT | 6,25 | 5,9 | 10,5 |
| SDH | 5,55 | 5,7 | 9,7 |
| Crio | 0,98 | 0,98 | 10 |
| Al(OH)_{3} | 0,81 | 0,73 | 11 |
| TNBP/Tween® | 0,61 | 0,67 | 9,1 |
| Eluato-S | 3,8 | 4,34 | 8,8 |
| ZP (UF/DF) | 6,2 | 6,38 | 9,7 |
| GT | 5,78 | 5,7 | 10,1 |
| SDH | 5,52 | 5,3 | 10,4 |
Las Figuras muestran:
Fig. 1 muestra esquemáticamente la preparación
de FVIII SDH en una forma de realización preferida.
Fig. 2 muestra la relación de FVIIIC/FVIIIAg en
diversos pasos de la preparación de FVIII de tres lotes de FVIII
SDH. El lote a se diferencia claramente de los lotes b y c por la
relación reducida del producto de partida de la preparación de
FVIII del crioprecipitado. Para poder representar en este gráfico
las columnas en dimensiones prácticamente comparables para los
distintos parámetros, éstos se han multiplicado por 10 o dividido
por 10. En esta representación, la relación se debe dividir por 10
para que resulte apreciable que ésta es aproximadamente = 1,0 para
los lotes b y c en cada paso de preparación. El crioprecipitado del
lote a muestra una relación de aproximadamente 0,6, es decir, una
evidencia de la pérdida de actividad de FVIII en la preparación y
el almacenamiento de este lote de crioprecipitado. El procesamiento
hasta alcanzar el concentrado de FVIII altamente purificado lleva
la relación hasta 0,8, pero no la devuelve a 1,0. En este estudio
resulta decisiva, sin embargo, la comparación de la relación de las
muestras calentada y no calentada. Ésta es prácticamente igual para
ambos productos y confirma, de este modo, la pérdida de actividad
relativamente escasa causada por el tratamiento térmico.
El efecto del procedimiento de preparación según
la invención sobre la estructura de proteínas se ha comprobado
sobre la base de la distribución del peso molecular y por
electroforesis sobre gel de poliacrilamida-SDS
(PAGE). Además, se han analizado los productos no calentado (FVIII
SD) y calentado (FVIII SDH) con respecto a la aparición de
neo-antígenos (R. Kotitschke et al.,
Hämostaseologie 1994; 14:100-3; S. Arighi
et al., Thromb Haemost 1995; 73(3):
868-73). Estos análisis muestran idénticos
resultados para FVIII SD y FVIII SDH, con lo que se ha demostrado
que la estructura proteica de las proteínas en el concentrado de
FVIII preparado según la invención no se altera.
Fig. 3 muestra la observación de uso para FVIII
SDH. La observación de uso en siete centros de tratamiento de
hemofilia A se inició en 1993. Participaron en esta observación de
uso 51 pacientes, con un período máximo de observación de 27 meses.
En Hungría, con anterioridad a 1993, prácticamente todos los
pacientes con hemofilia A se trataban con crioprecipitado y/o sólo
con un concentrado de FVIII. Por lo tanto, fue posible analizar la
incidencia del inhibidor en un grupo de pacientes relativamente
homogéneo después del tratamiento con FVIII SDH, y comparar la
incidencia del inhibidor de este grupo (Grupo I) con un Grupo II de
pacientes con hemofilia A pretratados en centros terapéuticos
alemanes con diferentes concentrados de FVIII. En ninguno de los 51
pacientes apareció inhibidor. Los pacientes se investigaron durante
un período de tiempo de 4 hasta 26 meses, y un número predominante
de ellos, durante 12 meses. El número máximo de días de tratamiento
acumulados ascendió a 349. Un día de tratamiento comprende la
cantidad de FVIII utilizada para el tratamiento de un episodio de
sangrado.
La "respuesta", "recuperación in
vivo" y la vida media se determinaron con el ensayo de 1
etapa de FVIII y un sustrato cromógeno (en 16 pacientes); véase la
Tabla 5. Estos datos se corresponden con los publicados
anteriormente por otros autores para concentrados de FVIII pd (pd =
derivados del plasma, en inglés).
| Ensayo de 1 etapa | Sustrato cromógeno | |
| Recuperación in vivo (%) | 71 \pm 15 | 77 \pm 17 |
| Respuesta (%) | 1,6 \pm 0,4 | 1,7 \pm 0,4 |
| Vida media | 13,0 \pm 2,8 | 12,7 \pm 3,2 |
El procedimiento según la invención se explicará
de forma más detallada mediante los siguientes ejemplos.
Plasma de donante: Se agregaron nueve partes de
sangre venosa de donante a una parte de una solución estabilizadora
de citrato sódico al 3,8%. Inmediatamente después de su extracción,
la sangre se centrifugó y se reinfundieron al donante los
eritrocitos separados en solución salina fisiológica
(plasmaféresis). El plasma se congeló a más tardar 18 horas
después.
El plasma congelado se descongeló a una
temperatura de +2ºC hasta +4ºC. Se combinaron los plasmas de
múltiples donantes. El crioprecipitado se obtuvo por centrifugación
de manera en sí conocida.
1 kg de crioprecipitado, obtenido de
aproximadamente 100 l de plasma, se suspendió en 3 kg de una mezcla
de agua/etanol (10 g de etanol en 1 l de H_{2}O) que contuvo 900
UI de heparina.
El valor de pH de la suspensión se ajustó a 7,0
mediante agitación con ácido acético 0,1 M. La mezcla se calentó a
temperatura ambiente y se agitó durante 30 min. A la solución
obtenida de esta forma se agregaron 108 g de una suspensión al 2%
de Al(OH)_{3} por kg de crioprecipitado usado, y se
agitó a temperatura ambiente durante 15 min. El valor de pH se
ajustó a 6,55 mediante la adición de ácido acético 0,1 M, y la
temperatura se redujo a 15ºC. Se precipitado se separó por
centrifugación y se desechó.
El sobrenadante se trató para la inactivación de
virus con una mezcla de fosfato de tri-(n-butilo)
(TNBP) (0,3% en peso) y Tween® 80 (1% en peso). Por kg de solución
de FVIII se utilizaron 10,52 g de Tween® 80 y 3,16 ml de TNBP.
Tween® 80 se disolvió con 4 ml de H_{2}O destilada. El valor de pH
de la solución de FVIII se ajustó a 7,1 con NaOH 1 M, y la solución
se precalentó a 25ºC. La mezcla de TNBP y Tween® 80 se agregó, bajo
agitación, durante un espacio de tiempo de 15 min. La solución de
FVIII mezclada con TNBP/Tween® 80 se agitó durante 13 horas a
aproximadamente 25ºC. A continuación, la solución de FVIII se
cromatografió sobre un gel de intercambio aniónico. Antes de la
aplicación de la solución de proteína, la columna se equilibró con
un tampón a pH 6,95 de NaCl (0,12 M), citrato de Na (0,01 M),
glicina (0,12 M) y CaCl_{2} (0,001 M). La extinción del eluato de
columna se midió a 280 nm. La solución de FVIII esterilizada se
aplicó sobre el gel equilibrado y se lavó posteriormente con el
tampón de equilibrado, hasta que se alcanzó la señal UV de la línea
base. Para la separación de las proteínas acompañantes, la columna
se lavó con un tampón de mayor potencia iónica de NaCl (0,16 M),
citrato de Na (0,01 M), glicina (0,12 M) y CaCl_{2} (0,001 M) a pH
6,95.
La elución del FVIII se llevó a cabo con el
siguiente tampón de elución: NaCl 0,25 M, citrato de Na 0,01 M,
glicina 0,12 M, CaCl_{2} 0,001 M, a pH 6,95. El eluato de la
cromatografía que contiene FVIII se concentró mediante
ultrafiltración a aproximadamente la mitad del volumen de eluato
utilizado, y se diluyó con un tampón de citrato de Na 0,01 M,
glicina 0,12 M y CaCl_{2} 0,001, hasta una actividad de FVIII de
la solución de aproximadamente 110 UI de FVIII por ml. La solución
de FVIII se filtró bajo condiciones estériles y se acondicionó a
razón de 10 ml en su envase final (viales de vidrio de 20 ml). Los
viales con la solución de FVIII se sumergieron en nitrógeno líquido
a -195ºC y, a continuación, se secaron en una instalación
de liofilización hasta una humedad residual del producto de FVIII
de aproximadamente 0,5%.
Los viales con el producto liofilizado se
introdujeron en un autoclave y se calentaron durante 30 min a 100ºC.
La medición de la temperatura se llevó a efecto con el dispositivo
"Datatrace Micropack" de la compañía Hero Instruments
Electronic Vertriebs GmbH, Alemania. Inmediatamente después de la
extracción de los viales del autoclave, se les enfrió en una sala
de refrigeración (aproximadamente + 4ºC). La actividad de FVIII de
la muestra calentada fue del 95% de la muestra no calentada.
Se preparó y disolvió 1 kg de crioprecipitado de
la misma forma que en el Ejemplo 1. El procesamiento del
crioprecipitado hasta su ultrafiltración se llevó a cabo de la misma
forma descrita en el Ejemplo 1. La dilución de la solución de
eluato de la columna de FVIII concentrada se efectuó con un tampón
de citrato de Na 0,001 M, glicina 0,12 M y CaCl_{2} 0,01 M, hasta
alcanzar una actividad de FVIII de 50 UI de FVIII por ml. La
solución de FVIII se filtró bajo condiciones estériles y se
acondicionó a razón de 10 ml en su envase final (viales de 20 ml).
La congelación de estos viales, así como su liofilización y
tratamiento térmico se llevaron a cabo de la forma descrita en el
Ejemplo 1.
Claims (8)
1. Procedimiento para preparar una composición
no inmunogénica que contiene un Factor VIII, que comprende los
pasos de:
- (a)
- tratamiento con fosfato de tri-(n-butilo)/detergente de una solución que contiene Factor VIII, y
- (b)
- tratamiento térmico de un material que contiene FVIII liofilizado, que tiene una humedad residual dentro del intervalo de 0,3 hasta 1,8% en peso, a aproximadamente 100ºC durante 15-120 min
en donde la solución que contiene
Factor VIII se somete a congelación ultra-rápida en
nitrógeno líquido antes de la
liofilización.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el detergente es un derivado de polioxietileno de un éster
de sorbitano.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
en el que, antes del paso (a), se separan de la solución que
contiene FVIII el fibrinógeno y, eventualmente, otros factores de
coagulación del complejo PPSB por precipitación con etanol y/o una
adsorción sobre Al(OH)_{3}.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que, después del paso (a), se separan
de la solución que contiene FVIII el fosfato de
tri-(n-butilo) y el detergente por cromatografía de
intercambio de iones.
5. Procedimiento según la reivindicación 4, en
el que la solución que contiene FVIII, como eluato de la
cromatografía de intercambio de iones, se somete a dia- y/o
ultrafiltración.
6. Procedimiento según la reivindicación 5, en
el que la solución que contiene FVIII se filtra bajo condiciones
estériles tras la dia- y/o ultrafiltración.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que el tratamiento térmico se lleva a
cabo en un autoclave.
8. Composición no inmunogénica que contiene
FVIII, obtenible por un procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19623293A DE19623293C2 (de) | 1996-06-11 | 1996-06-11 | Nicht-immunogene Faktor VIII-enthaltende Zusammensetzung und ein Verfahren zu ihrer Herstellung |
| DE19623293 | 1996-06-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2268718T3 true ES2268718T3 (es) | 2007-03-16 |
Family
ID=7796648
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES97109314T Expired - Lifetime ES2268718T3 (es) | 1996-06-11 | 1997-06-09 | Procedimiento para la preparacion de una composicion que contiene factor viii. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0812858B1 (es) |
| AT (1) | ATE340806T1 (es) |
| CZ (1) | CZ177497A3 (es) |
| DE (2) | DE19623293C2 (es) |
| ES (1) | ES2268718T3 (es) |
| HU (1) | HUP9700987A3 (es) |
| PL (1) | PL187886B1 (es) |
| PT (1) | PT812858E (es) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2787465A1 (fr) | 1998-12-21 | 2000-06-23 | Transgene Sa | Procede d'inactivation des virus enveloppes dans une preparation virale de virus non enveloppes |
| ES2167180B1 (es) * | 1999-10-27 | 2003-08-16 | Lucea Jose Antonio Aznar | Preparacion de concentrados terapeuticos de factor viii antigenico y aplicacion correspondiente. |
| WO2023020914A1 (en) | 2021-08-18 | 2023-02-23 | Biotest Ag | Dry heat treatment of plasma-derived factor viii |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4456590B2 (en) * | 1981-11-02 | 1989-05-30 | Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate | |
| ATE52922T1 (de) * | 1985-08-05 | 1990-06-15 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von praeparationen auf basis von blutgerinnungsfaktoren. |
| ES2057191T5 (es) * | 1989-01-13 | 2003-05-01 | Mitsubishi Pharma Corp | Metodo de produccion para una composicion que contiene proteinas. |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| WO1994017834A1 (de) * | 1993-02-09 | 1994-08-18 | Octapharma Ag | Verfahren zur inaktivierung von viren, die nicht mit lipidhüllen versehen sind |
-
1996
- 1996-06-11 DE DE19623293A patent/DE19623293C2/de not_active Revoked
-
1997
- 1997-06-03 HU HU9700987A patent/HUP9700987A3/hu unknown
- 1997-06-09 PT PT97109314T patent/PT812858E/pt unknown
- 1997-06-09 AT AT97109314T patent/ATE340806T1/de active
- 1997-06-09 EP EP97109314A patent/EP0812858B1/de not_active Revoked
- 1997-06-09 DE DE59712735T patent/DE59712735D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-09 ES ES97109314T patent/ES2268718T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-09 CZ CZ971774A patent/CZ177497A3/cs unknown
- 1997-06-09 PL PL32045097A patent/PL187886B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ177497A3 (en) | 1997-12-17 |
| HUP9700987A2 (hu) | 1998-03-02 |
| PT812858E (pt) | 2006-12-29 |
| DE59712735D1 (de) | 2006-11-09 |
| HU9700987D0 (en) | 1997-07-28 |
| HUP9700987A3 (en) | 1998-06-29 |
| EP0812858B1 (de) | 2006-09-27 |
| PL320450A1 (en) | 1997-12-22 |
| EP0812858A1 (de) | 1997-12-17 |
| ATE340806T1 (de) | 2006-10-15 |
| DE19623293A1 (de) | 1997-12-18 |
| DE19623293C2 (de) | 1998-10-22 |
| PL187886B1 (pl) | 2004-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2201714C (en) | Method for isolation of highly pure von willebrand factor | |
| ES2586698T3 (es) | Proceso para la producción de fibrinógeno | |
| AU622133B2 (en) | Plasma and recombinant protein formulations in high ionic strength media | |
| EP0378208B1 (en) | Production method for protein-containing composition | |
| US5639730A (en) | Method of producing a virus-safe biological preparation | |
| DK156698B (da) | Fremgangsmaade til pasteurisering af et materiale indeholdende et termisk foelsomt, terapeutisk aktivtprotein valgt blandt alfa-l-antitrypsin, antithrombin-iii, praekallikrein, antihaemofil faktor (faktorviii) og fibronectin | |
| WO1992013495A1 (en) | Fibrinogen based adhesive | |
| US4379085A (en) | Heat stabilization of plasma proteins | |
| ES2483151T3 (es) | Procedimiento de preparación de un concentrado de von Willebrand (fvw) mediante cromatografía y concentrado de fvw susceptible de ser así obtenido | |
| PL210616B1 (pl) | Sposób rozdzielania i oczyszczania fibrynogenu i plazminogenu | |
| AU2019208251A1 (en) | Plasma-supplemented formulation | |
| ES2400014T3 (es) | Métodos para preparar factor X, factor X activado, factor X inactivado y factor Xa inactivado | |
| ES2268718T3 (es) | Procedimiento para la preparacion de una composicion que contiene factor viii. | |
| Bertolini | The purification of plasma proteins for therapeutic use | |
| Chabbat et al. | Properties of a new fibrin glue stable in liquid state | |
| US20200093896A1 (en) | Liquid Human Fibrinogen Composition | |
| ES2206459T3 (es) | Purificacion del factor ix. | |
| Palmer et al. | Development of a heat-treated factor VIII/von Willebrand factor concentrate prepared from heparinized plasma | |
| RU2814332C1 (ru) | Способ криоконсервации промежуточного продукта фактора viii свертывания крови | |
| Ratnoff | A. The Physiology of Blood Coagulation | |
| US9956272B2 (en) | Methods for preparing factor X, activated factor X, inactivated factor X and inactivated factor Xa, and pharmaceutical compositions comprising same | |
| Sibinga | Factor VIII in Regional Blood Banking Practice | |
| JPH09286798A (ja) | 活性蛋白質組成物の製造方法 |