ES2260670T3 - Almacenamiento a baja temperatura de muestras en suspension en camaras de muestras suspendidas. - Google Patents

Almacenamiento a baja temperatura de muestras en suspension en camaras de muestras suspendidas.

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ES2260670T3 ES03778302T ES03778302T ES2260670T3 ES 2260670 T3 ES2260670 T3 ES 2260670T3 ES 03778302 T ES03778302 T ES 03778302T ES 03778302 T ES03778302 T ES 03778302T ES 2260670 T3 ES2260670 T3 ES 2260670T3
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Abstract

Dispositivo de almacenamiento criogénico (100) que comprende al menos una unidad de memoria de datos (200) y al menos una unidad de alojamiento de muestras (300) con al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) para el alojamiento de una muestra en suspensión, en el que la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) está unida con la unidad de memoria de datos (200) y posee una forma longitudinalmente alargada, hueca, que se extiende desde respectivamente un extremo de entrada (320) durante una longitud predeterminada hasta un extremo de salida (330), caracterizado porque la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) está fijada de modo flexible y móvil en suspensión a la al menos una unidad de memoria de datos (200).

Description

Almacenamiento a baja temperatura de muestras en suspensión en cámaras de muestras suspendidas.
La invención se refiere a dispositivos para el almacenamiento a baja temperatura (especialmente almacenamiento criogénico, crioconservación) de muestras en suspensión, especialmente un dispositivo de almacenamiento criogénico para células, grupos de células o constituyentes celulares biológicos suspendidos, con las características del preámbulo de la reivindicación 1 y procedimiento para el almacenamiento a baja temperatura.
El almacenamiento criogénico de muestras biológicas posee numerosas aplicaciones que están dirigidas a una acumulación permanente de muestras con conservación de su estado de vitalidad. Los dispositivos usados para el almacenamiento criogénico están adaptados a las muestras respectivas y los requisitos en el manejo de muestras. Pueden acumularse, por ejemplo en la medicina de trasplantes, órganos o partes de órganos a bajas temperaturas. En la medicina de transfusión se acumulan donaciones de sangre en estado ultracongelado en bancos de sangre.
En las aplicaciones habituales del almacenamiento criogénico se trata frecuentemente de disponer el mayor volumen de muestras posibles en el espacio más reducido posible. Por ejemplo, las donaciones de sangre se guardan en bolsas de sangre o tubos flexibles de sangre que pueden envasarse herméticamente en el banco de sangre. Las bolsas de sangre están provistas de una marca (por ejemplo código de barras) para hacer posible una extracción específica y correcta del banco de sangre. Este almacenamiento criogénico habitual se limita a la aplicación con grandes muestras (intervalo de ml a 1). Sin embargo, en la biología celular y en la biotecnología molecular existe el objetivo de almacenar y, dado el caso preparar, muestras biológicas más pequeñas (células individuales, grupos celulares o constituyentes celulares) en estado ultracongelado.
Así, por ejemplo en la patente EP 804073 se describe la preparación criogénica de células por separado. Las células se fijan sobre un sustrato en estado ultracongelado, se acumulan y, dado el caso, se preparan. Esta técnica posee la desventaja de que la acumulación de las células fijadas sobre sustratos puede ser relativamente costosa de espacio, de manera que se dificulta la construcción de un banco de células criogénicas. Además, para evitar contaminaciones de las células criogénicas fijadas, los sustratos cargados con las muestras deben proveerse con una capa protectora. Mediante esto se dificulta el manejo de las muestras almacenadas de este tipo.
En la patente DE 19921236 se describe la deposición de muestras en suspensión con forma de gota sobre sustratos estructurados para la crioconservación, con las que se facilita la capacidad de manipulación de las muestras congeladas. Como soportes de muestras, los sustratos poseen alojamientos de muestras en forma de huecos cuyo tamaño está adaptado al volumen de gota. Los sustratos estructurados pueden equiparse con alojamientos de muestras dispuestos en forma de matriz, como se conocen de placas de micro o nanotitulación. Estos sustratos criogénicos poseen desventajas en lo referente a la carga de muestras y la extracción de muestras. Para la carga de muestras deben llenarse todos los alojamientos de muestras con un dispositivo dispensador. Esto puede ser muy costoso de tiempo con el uso de dispensadores individuales. Cuando se utiliza una pluralidad de dispensadores que trabajan en paralelo, entonces su disposición geométrica debe adaptarse al sustrato criogénico. Para la extracción de muestras, la gota almacenada en un alojamiento de muestras debe estar completamente descongelada, incluso si sólo se necesita una parte de la gota.
En la patente US 4262494 se describe un dispositivo de almacenamiento criogénico con varias cámaras de muestras con forma de capilar que están dispuestas en un contenedor de refrigeración transportable. Las cámaras de muestras están dispuestas distanciadas entre sí separadas por una pared del contenedor de refrigeración. Este dispositivo de almacenamiento criogénico está especialmente optimizado para el transporte de muestras criogénicas. Posee desventajas en lo referente a la carga de las cámaras de muestras fijamente formadas y la acumulación a largo plazo en condiciones criogénicas.
De la patente WO 02/46719 se conoce un dispositivo de almacenamiento criogénico con al menos una cámara de muestra con forma de goma flexible o cojín que está fijada a una memoria de datos. La fijación se realiza directamente o con un bastidor de sujeción sobre un encapsulado de la memoria de datos. En esta técnica puede ser desventajoso que para cargar la cámara de muestra se necesite, dado el caso, un equipo auxiliar. Además, el tamaño y con ello la capacidad de alojamiento de la cámara de muestra está limitado por el dimensionado de la memoria de datos. Las cámaras de muestras con forma de capilar para el almacenamiento criogénico también se describen en la patente WO 99/20104. Las cámaras de muestras están incluidas en un cuerpo de refrigeración, resultando las mismas desventajas que en la técnica según la patente WO 02/46719.
El objetivo de la invención es proporcionar un dispositivo de almacenamiento criogénico mejorado con el que se superen las desventajas de dispositivos de almacenamiento criogénico habituales y que haga posible especialmente una carga simplificada con una pluralidad de células, grupos celulares o constituyentes celulares suspendidos en un plazo de tiempos cortos y una extracción selectiva, parcial, de constituyes de muestras. El dispositivo de almacenamiento criogénico también debe hacer especialmente posible el registro y la lectura de datos que pertenecen a las muestras respectivamente almacenadas. El objetivo de la invención también es indicar un procedimiento mejorado para el almacenamiento criogénico.
Estos objetivos también se alcanzan mediante un dispositivo y un procedimiento con las características según las reivindicaciones 1 ó 17. De las reivindicaciones dependientes resultan formas de realización y aplicaciones ventajosas de la invención.
La idea básica de la invención es perfeccionar para tal efecto un dispositivo de almacenamiento criogénico genérico con al menos una unidad de memoria de datos y al menos una cámara de muestra alargada longitudinalmente, que al menos una cámara de muestra esté colocada de manera suspendida de modo flexible y móvil en la al menos una unidad de memoria de datos. Mediante estas medidas se consigue una serie de ventajas que repercuten positivamente en la carga de muestras, la vigilancia del estado criogénico almacenado y la extracción de muestras. Así, las cámaras de muestras usadas según la invención pueden llenarse o vaciarse rápidamente. Las cámaras de muestras pueden miniaturizarse y adaptarse de manera flexible a las condiciones de utilización. Los extremos de entrada de una pluralidad de cámaras de muestras usadas simultáneamente pueden adaptarse sin problemas a cualquier disposición de tanques de muestras de los que deben extraerse muestras. Las cámaras de muestras hacen posible una hermetización de las muestras frente al entorno. Se excluye una contaminación de la fase gaseosa o líquida circundante (por ejemplo de un medio de refrigeración). De una cámara de muestra prevista según la invención pueden extraerse muestras mediante descongelación de toda la cámara de muestra o muestras parciales mediante separación mecánica sin que se descongele toda la cámara de muestra. La separación mecánica puede realizarse incluso bajo acción de un calentamiento local sin que se produzca una pérdida de la muestra prevista en la cámara de muestra restante.
En la unidad de memoria de datos está dispuesta preferiblemente una pluralidad de cámaras de muestras alargadas longitudinalmente, especialmente una pluralidad de gomas flexibles o capilares, que en estado cargado pueden sumergirse en forma suspendida en un medio de refrigeración gaseoso o líquido. Las cámaras de muestras alargadas longitudinalmente pueden estar formadas con una longitud que se elige libremente según las condiciones concretas (especialmente cantidad de muestra, tamaño del recipiente criogénico, etc.). A diferencia de las técnicas habituales pueden conservarse cantidades de muestra más grandes.
Según una forma de realización preferida de la invención, la cámara de muestra posee una dimensión de la sección transversal, especialmente de los extremos de entrada y salida, que es esencialmente más pequeña que la longitud de la cámara de muestra, de manera que resulta la forma de un cilindro hueco, cono hueco, tubo, goma flexible, una aguja hueca o un capilar. Esta forma de realización puede poseer ventajas en lo referente a la carga de la cámara de muestra. El transporte de líquido en la cámara de muestra puede realizarse bajo la acción de fuerzas capilares o de una sobrepresión o presión negativa externa.
La al menos una cámara de muestra está compuesta preferiblemente en sí por un material flexible, maleable. Esto hace posible al principio una carga en un estado que ahorra espacio. Las cámaras de muestras pueden cargarse, por ejemplo en el propio laboratorio o una consulta médica, en estado enrollado en el caso de mayor longitud. La maleabilidad del material hace posible además el posicionamiento suspendido flexible y móvil según la invención en la al menos una unidad de memoria de datos mediante una fijación directa de la cámara de muestra a la unidad de memoria de datos. Esto posee la ventaja de una construcción compacta. Alternativamente puede preverse una unidad de fijación con la que se fije la al menos una cámara de muestra flexible y móvil suspendida en la unidad de memoria de datos. Mediante esto puede simplificarse la separación mecánica de cámaras de muestras por separado del dispositivo de almacenamiento criogénico, especialmente en estado refrigerado. La unidad de fijación comprende, por ejemplo, tiras o bandas flexibles dispuestas por separado o como haces en uno de cuyos extremos se fija respectivamente una cámara de muestra y cuyo otro extremo a la unidad
de memoria de datos.
Según otra forma de realización preferida de la invención, la unidad de memoria de datos comprende al menos una memoria de datos (por ejemplo, un chip de memoria) con una carcasa, con la que se une la al menos una cámara de muestra, dado el caso por la unidad de fijación. La carcasa hace posible de manera ventajosa el uso de diferentes memorias de datos, de modo que mejora la flexibilidad en la aplicación del dispositivo de almacenamiento criogénico.
Según otra forma de realización ventajosa de la invención, la unidad de memoria de datos puede presentar una pluralidad de memorias de datos que están fijadas a lo largo de la longitud de la al menos una cámara de muestra. Puede formarse una cadena de memorias de datos suspendida en las cámaras de muestras. Pueden resultar ventajas, especialmente para una extracción de muestras por secciones respectivamente junto con una memoria de datos.
Según la invención, la sección transversal de la al menos una cámara de muestra puede variar a lo largo de su longitud de manera que se forme al menos una cámara parcial con un área de la sección transversal que sea mayor a las dimensiones de la sección transversal de los orificios de entrada y salida. La(s) cámara(s) parcial(es) forma(n) bolsas que alojan de manera ventajosa una cantidad de muestra ampliada y simplifican una extracción de muestra por secciones.
Cuando las cámaras de muestras están fabricadas de un material flexible, pueden estar unidas entre sí por sus paredes exteriores de manera que se forme un bloque de cámaras de muestras integral, flexible. Con esto puede aumentarse la densidad de almacenamiento en la crioconservación.
Además, puede aumentarse la funcionalidad del dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención cuando están previstas una unidad de marcado, que comprende una capa de marcado sobre la unidad de memoria de datos y/o elementos de marcado en la unidad de alojamiento de muestras, y/o al menos un sensor, especialmente un sensor de temperatura, y/o superficies de refrigeración en la cámara de muestra.
También es un objeto de la invención un procedimiento para el almacenamiento criogénico de muestras en suspensión, en el que éstas se alojan bajo la acción de fuerzas capilares o de presión externas en al menos una cámara de muestra alargada longitudinalmente y en éstas se transfieren a un estado crioconservado. El almacenamiento criogénico según la invención se realiza en general a una temperatura inferior a la temperatura ambiente a la que es posible una acumulación de muestras permanente que conserva la vitalidad. La temperatura elegida y la duración de la acumulación se eligen en función de la aplicación. La invención puede realizarse de manera especialmente ventajosa a acumulaciones a baja temperatura a temperaturas inferiores a menos 100°C y especialmente a la temperatura del nitrógeno líquido.
Otras ventajas y particularidades de la invención son evidentes de la siguiente descripción de los dibujos adjuntos. Muestran:
las figuras 1 a 4: diferentes formas de realización de dispositivos de almacenamiento criogénico según la invención,
la figura 5: vistas esquemáticas de secciones transversales de diferentes formas de realización de cámaras de muestras usadas según la invención,
las figuras 6 a 8: otras formas de realización de dispositivos de almacenamiento criogénico según la invención,
las figuras 9 a 11: ilustraciones para el manejo de dispositivos de almacenamiento criogénico según la invención, y
la figura 12: vistas parciales a escala ampliada de los extremos de entrada o salida de cámaras de muestras.
La figura 1 muestra una primera forma de realización de un dispositivo 100 de almacenamiento criogénico según la invención en vista lateral esquemática. El dispositivo 100 de almacenamiento criogénico comprende una unidad 200 de memoria de datos y una unidad 300 de alojamiento de muestras. La unidad 200 de memoria de datos contiene al menos una memoria 210 de datos que está dispuesta en una carcasa 310. La memoria 210 de datos posee un interfaz para el alojamiento al menos temporal de una conexión 250 de enchufe con líneas 251 de conexión eléctricas por las que puede unirse la memoria 210 de datos con una unidad de control (no representada).
Como memoria 210 de datos está previsto un chip de memoria conocido en sí en el que están almacenados eléctrica, magnética u ópticamente cualquier dato en función de la aplicación. Se usa, por ejemplo, una denominada memoria rápida.
Con la unidad 200 de memoria de datos está unida la unidad 300 de alojamiento de muestras. La unidad 300 de alojamiento de muestras comprende una pluralidad de cámaras 301, 302, 303, ... de muestras, con forma de gomas flexibles que, en el modo de realización representada, están directamente fijadas por separado de manera suspendida a la carcasa de la memoria 210 de datos. En la figura 1 se muestran a modo de ejemplo 17 cámaras de muestras. Se destaca que la invención también puede realizarse con una cámara de muestra por separado, tubular, u otro número (por ejemplo hasta 100 o más). Además, las cámaras de muestras pueden fijarse con una unidad de fijación a la unidad 200 de memoria de datos (véase la figura 7).
Las cámaras de muestras (por ejemplo, 301) están compuestas respectivamente por una goma flexible o un capilar flexible con un diámetro interno que es esencialmente más pequeño que la longitud de la cámara de muestra. El diámetro interno está por ejemplo dentro del intervalo de 5 \mum a 4 mm. La longitud de las cámaras de muestras se elige por ejemplo entre el intervalo de 0,5 cm a 10 dm. El cociente del diámetro de la sección transversal y la longitud de una cámara de muestra es preferiblemente inferior a 1/10. Las cámaras de muestras pueden estar fabricadas en cualquier material inerte adecuado, por ejemplo plástico, goma de silicona, vidrio o material semiconductor. El material de pared de las cámaras de muestras puede formarse, dependiendo de los requisitos deseados para el almacenamiento criogénico, impermeable a líquidos o permeable. Puede usarse especialmente un material permeable a iones, como se conoce de tubos de diálisis. En el material de pared de las cámaras de muestras o sobre su superficie pueden estar previstos adicionalmente sensores (por ejemplo sensores de temperatura). Las cámaras de muestras pueden estar constituidas con un diámetro constante a lo largo de su longitud que corresponde al diámetro de los extremos de entrada y salida (u orificios de entrada y salida) de la cámara de muestra. En el caso de formas de realización modificadas de la invención, a lo largo de la longitud de las cámaras de muestras está prevista una variación del diámetro interno (véase la figura 6). También puede estar prevista una variación de la longitud de las cámaras de muestras que pertenecen a un dispositivo de almacenamiento criogénico, véase la figura 2. Los extremos libres de las cámaras 301, 302, ... de muestras de la unidad 300 de alojamiento de muestras según la figura 1 forman los extremos 320 de entrada por los que se realiza preferiblemente una carga de las cámaras de muestras. Las cámaras de muestras se fijan con los extremos opuestos, que forman extremos de salida o extremos de compensación de presión en función de la aplicación, a la unidad 200 de memoria de datos, a la carcasa 310 o a un distribuidor de presión. Los extremos de compensación de presión pueden presurizarse por separado o conjuntamente con una presión negativa para aceptar muestras en suspensión en las cámaras de muestras de la manera explicada más
adelante.
Una ventaja especial de la invención resulta cuando las cámaras de muestras usadas están compuestas por un material flexible. Las cámaras de muestras están dimensionadas de manera que los extremos 320 de entrada pueden ajustarse en cualquier disposición para extraer a temperatura ambiente muestras en suspensión de envases, tanques o similares. Esto es posible tanto en cámaras de muestras de materiales macroscópicamente elásticos, como por ejemplo plásticos, polímeros o metales, como de materiales con una dureza más elevada, como por ejemplo vidrio, semiconductores, especialmente silicio, carbono o cerámica.
El uso de un dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención, por ejemplo según la figura 1, se realiza en correspondencia con las siguientes etapas (véase también la figura 11). Al principio se realiza una carga de la unidad 300 de alojamiento de muestras. Las muestras en suspensión se alojan en las cámaras de muestras mediante ejercicio de una presión negativa o bajo la acción de fuerzas capilares de depósitos, por ejemplo los pocillos de una placa de titulación. Los datos para la caracterización de las muestras en suspensión alojadas se graban en la unidad 200 de memoria de datos. Estos datos comprenden, por ejemplo en el caso de aplicaciones médicas, datos de identificación para determinar el donante y los tipos de células suspendidas, otras características del donante, como por ejemplo el grupo sanguíneo, dado el caso datos bibliográficos relevantes para los tipos de células suspendidas y, dado el caso también, de datos de medición y/o archivos de imagen ya existentes. Los archivos de imagen comprenden, por ejemplo representaciones de microscopía óptica o electrónica de células suspendidas que sirven para la caracterización de células específicas del donante y posterior comparación. Los datos almacenados se retiran y/o completan durante el almacenamiento criogénico. Finalmente, se realiza la etapa de conservación. El dispositivo de almacenamiento criogénico se transfiere al menos con la unidad 300 de alojamiento de muestras, pero preferiblemente tanto con la unidad 300 de alojamiento de muestras como con la unidad 200 de memoria de datos, a un entorno con temperatura reducida. Este entorno se añade por ejemplo en un recipiente criogénico con nitrógeno líquido o con nitrógeno gaseoso a T = -120°C. A continuación se explican otras particularidades del almacenamiento criogénico.
En la forma de realización ilustrada en la figura 2 del dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención, la unidad 300 de alojamiento de muestras se forma mediante una serie de cámaras 301, 302, ... de muestras tubulares cuyas longitudes son distintas. Por ejemplo, se prevé el gradiente de longitudes mostrado. Con este diseño resultan ventajas en la carga de recipientes de suspensiones en los que, a continuación de una etapa de centrifugación precedente, se añade un gradiente de tipos de células o especialmente de tamaños de células. Con los gradientes de longitudes de las cámaras de muestras se alojan en las cámaras de muestras por separado diferentes tipos de células. El gradiente de longitudes proporciona automáticamente una clasificación por tamaño.
La figura 2 también muestra otras particularidades de la carcasa 310 que forma una pieza de prolongación de la unidad 300 de alojamiento de muestras. La carcasa 310 sirve por un lado para el alojamiento del chip 210 de memoria y por otro lado para proporcionar un volumen de trabajo por el que puede ejercerse una presión negativa sobre los extremos 330 de compensación de presión de las cámaras de muestras. Para esto está previsto en la carcasa 310, por ejemplo un tubo 311 de empalme, para la formación de la presión de operación. Según la invención, no se prevé obligatoriamente que la carcasa 310 y el chip 210 de memoria formen componentes separados. Alternativamente también es posible que las cámaras de muestras y, dado el caso las unidades para la transmisión de presión o similares, estén previstas o fijadas directamente a la carcasa facilitada, condicionada por la fabricación, o al encapsulado del chip 210 de memoria.
La unidad 200 de memoria de datos de un dispositivo 100 de almacenamiento criogénico según la invención también puede comprender según la figura 3 varios chips de memoria o memorias 210, 220, 230, 240, ... de datos. Las memorias de datos están dispuestas a lo largo de la longitud de las cámaras 301, 302, ... de muestras. Se prevé, por ejemplo una fijación de las cámaras de muestras (por ejemplo pegado, fundido o similar) de las cámaras de muestras al material de encapsulado de las memorias de datos. La ventaja de este diseño consiste en que pueden extraerse partes de las muestras criogénicas almacenadas conjuntamente con cantidades parciales de los datos almacenados. Esto se realiza por ejemplo con un dispositivo 400 de separación esquemáticamente ilustrado con el que pueden separarse las cámaras de muestras tubulares correspondientes a una determinada longitud con una memoria de datos correspondiente (por ejemplo, 240). El dispositivo de separación se basa preferiblemente en un proceso de separación mecánico (por ejemplo corte, troquelado o similar) que, dado el caso, está combinado con un tratamiento térmico (por ejemplo calentamiento local).
La figura 3 también ilustra la posibilidad de una combinación de pares de cámaras de muestras. En el intervalo de la memoria 210 de datos están unidas entre sí respectivamente 2 cámaras de muestras contiguas, de manera que se forman de dos en dos cámaras 303 de muestras por separado. Para la carga se presuriza respectivamente un extremo libre (extremo 330 de salida) de la cámara 303 de muestra con una presión negativa, mientras que el otro extremo (extremo 320 de entrada) se eleva en un tanque con la suspensión de muestra.
Las cámaras de muestras de la unidad 300 de alojamiento de muestras pueden estar formadas según la invención como bloque 340 de cámaras de muestras integral (véase la figura 4) que está unido con la unidad 200 de memoria de datos. En comparación con la conducción separada o libre de las cámaras de muestras representadas en la figura 1, el bloque 340 de cámaras de muestras posee con las cámaras de muestras unidas a sus paredes externas la ventaja de una alta estabilidad tanto a temperatura ambiente como en estado ultracongelado. Las cámaras de muestras pueden estar dispuestas de una manera plana como en la disposición en serie de conexiones de líneas respecto a un cable plano. Alternativamente puede usarse un bloque de cámaras de muestras con varias series de cámaras de muestras dispuestas unas encima de las otras. Alternativamente también es posible unir entre sí en al menos una primera zona parcial de la unidad 300 de alojamiento de muestras las cámaras de muestras como bloque integral y prever en al menos una segunda zona una disposición separada, por ejemplo para la alineación flexible de los extremos de entrada.
Una cámara de muestra usada según la invención posee en general una sección transversal tubular. Esto significa que la dimensión longitudinal de la cámara es esencialmente mayor que la dimensión media de la sección transversal de la cámara de muestra y especialmente de los orificios de entrada y salida. En este sentido, la forma interna de la cámara de muestra no se limita a una determinada geometría. Según la figura 5, la cámara 301 de muestra puede poseer por ejemplo una sección transversal circular (a) o una oval (b). En el caso de que la cámara de muestra esté formada por dos tiras de láminas pegadas entre sí puede resultar la forma de la sección transversal según las imágenes parciales (c) o (d). También pueden disponerse más cámaras de muestras unas al lado de las otras como en serie o en volumen (e, f). La imagen parcial (e) corresponde por ejemplo a la forma de realización de la invención ilustrada en la figura 4. Según otra forma de realización de la invención (figura 5g), la unidad de alojamiento de muestras está equipada con elementos 360 de refrigeración. Los elementos 360 de refrigeración están moldeados por ejemplo como combaduras o salientes sobre la parte externa de las cámaras de muestras. Este diseño posee la ventaja especial de que el proceso de enfriamiento se acelera con la transferencia al estado de baja temperatura.
Según la invención, la sección transversal de la al menos una cámara 301 de muestra tubular puede ser variable a lo largo de su longitud, como se representa a modo de ejemplo en la figura 6. El diseño con una sección transversal variable posee ventajas en lo referente a la capacidad de manipulación y funcionalidad de las cámaras de muestras. Según la figura 6 se forman segmentos de cámaras con dimensiones de la sección transversal más pequeñas y segmentos de cámaras con dimensiones de la sección transversal más grandes. Los segmentos de cámaras con las dimensiones de la sección transversal más grandes también se denominan cámaras 350 parciales. En la figura 6 se representa a modo de título una cámara 301 de muestra por separado con una pluralidad de cámaras 350 parciales que, dimensionada en forma de meandro, está fijada a la unidad 200 de memoria de datos. La carga de la cámara 301 de muestra se realiza aplicándose por el extremo 321 de salida una presión negativa (flecha A), bajo cuya acción se arrastra por el extremo 322 de entrada una muestra en suspensión (dibujada con puntos) en la cámara 301 de muestra (flecha B). La ventaja de este modo de realización con sección transversal variable de la al menos una cámara de muestra consiste en el manejo simplificado del dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención en estado de baja temperatura. Las partes por separado de la muestra en suspensión crioconservada pueden eliminarse sin interferencia de la muestra restante separando mecánicamente las cámaras 340 parciales con un dispositivo de separación adecuado de la unidad 300 de alojamiento de muestra. En este sentido, los segmentos de cámara entre las cámaras 340 parciales forman ventajosamente puntos de rotura controlada para la extracción de muestras parciales. Se prevé al menos una cámara 350 parcial.
Un dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención puede estar equipado según la figura 7 con una unidad 550 de fijación que sirve para la colocación de manera suspendida, flexible, de la unidad 300 de alojamiento de muestras a la unidad 200 de memoria de datos. El proporcionar una unidad de fijación separada posee ventajas en lo referente a la extracción de muestra, especialmente en estado refrigerado. Las muestras parciales en forma de cámaras 301 de muestras por separado pueden extraerse sin más mediante corte de la parte correspondiente de la unidad 550 de fijación, sin que se influya en la cámara de muestra respectiva.
La unidad 550 de fijación está compuesta por una pluralidad de tiras 551 o bandas en las que por un lado se coloca respectivamente una cámara 301 de muestra y por el otro lado están fijadas a la unidad 200 de memoria de datos. Las tiras 551 están compuestas por ejemplo por una banda de plástico, al menos una fibra sintética, un alambre metálico o una banda metálica. De manera ventajosa, la conexión sólida prevista según la invención entre la unidad 300 de alojamiento de muestras y la unidad 200 de memoria de datos se alarga mediante la unidad de fijación. La fijación de las tiras 551 puede realizarse en forma de haces (imagen parcial izquierda) o por separado (imagen parcial derecha) en la unidad 200 de memoria de datos, por ejemplo en la carcasa de un chip.
Según otra forma de realización del dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención, la unidad de memoria de datos y/o la unidad de alojamiento de muestras pueden estar equipadas con una unidad de marcado. La unidad de marcado comprende por ejemplo una capa de marcado y/o elementos de marcado que llevan preferiblemente una información que puede detectarse ópticamente o legible. El proporcionar la unidad de marcado ilustrada esquemáticamente en la figura 8 posee la ventaja de que el manejo del dispositivo de almacenamiento criogénico se simplifica especialmente en el marco de operación de un banco criogénico. Sobre la base de las informaciones adquiridas en la unidad de marcado es posible una identificación rápida y segura de un determinado dispositivo de almacenamiento criogénico a partir de una pluralidad de dispositivos con la misma construcción. Esto es ventajoso en todas las ejecuciones en las que se desea un manejo o manipulación rápida del dispositivo de almacenamiento criogénico, como por ejemplo en la extracción de un medio criogénico.
La figura 8 muestra como partes de la unidad 600 de marcado una capa 610 de marcado sobre la unidad 200 de memoria de datos y elementos 620 de marcado que se colocan en la unidad 300 de alojamiento de muestras. Se prevé al menos un elemento de marcado que se coloca en al menos una cámara de muestra tubular. Preferiblemente se realiza la disposición ilustrada en la que un elemento 620 de marcado se coloca respectivamente en una pluralidad de cámaras de muestras (mostrado parcialmente). Las marcas colocadas sobre la capa 610 de marcado y los elementos 620 de marcado se forman por ejemplo mediante un código de barras que identifica claramente el dispositivo 100 de almacenamiento criogénico y, dado el caso, contiene otras informaciones sobre su fabricación (por ejemplo primera congelación o similares). El marcado contiene en todas las partes de la unidad 600 de marcado al menos una información parcial idéntica (por ejemplo identificación) y, dado el caso, informaciones adicionales, como por ejemplo la posición de un elemento 620 de marcado a lo largo de la longitud de las cámaras 301 de muestras.
La capa 610 de marcado está compuesta por ejemplo por una sobreimpresión sobre una carcasa de la unidad 200 de memoria de datos. Los elementos 620 de marcado son por ejemplo tiras de plástico que están fijadas a la al menos una cámara de muestra. Las cámaras de muestras pueden moldearse sobre la superficie de las tiras de plástico o pegarse o también integrarse en los cuerpos de las tiras de plástico. El marcado se coloca respectivamente sobre la superficie todavía libre de los elementos 620 de marcado.
Cuando se prevé una pluralidad de elementos 620 de marcado puede realizarse ventajosamente una extracción de muestras parciales con mantenimiento de la información de marcado asignada. Con el dispositivo 400 de separación puede realizarse una separación de cámaras de muestras junto con uno o varios elementos 620 de marcado.
Los elementos 620 de marcado pueden preverse según la invención como partes de la unidad 500 de estabilización (véase anteriormente). La información de marcado puede colocarse sobre partes de la unidad 500 de estabilización.
En la figura 9 se ilustra la carga de un dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención con una cámara 301 de muestra dimensionada por separado, con forma de meandro. Se prevé un tanque 700 de muestra con un único compartimento, por ejemplo en forma de un vaso de precipitados, vaso de centrifugado o similar. Como consecuencia de las etapas de preparación precedentes, la muestra en suspensión con uno o varios tipos de células, grupos celulares y/o constituyentes celulares está presente en el tanque 700 de muestra. La cámara 301 de muestra está sumergida con su orificio 320 de entrada en el tanque 700 de muestra. En el extremo 330 opuesto está prevista una unidad 800 de aspiración que se forma por ejemplo mediante una pipeta de líquidos, unidad de pistones o unidad 810 de inyección. Mediante el accionamiento de la unidad 800 de aspiración puede aspirarse de manera ventajosa sin burbujas la muestra en suspensión del tanque 700 de muestra en la cámara 301 de muestra.
En el extremo inferior de la cámara 301 de muestra dimensionada en forma de meandro está representado un vástago 540 de estabilización que sirve como unidad de estabilización. Especialmente en la inmersión de la unidad 200 de alojamiento de muestras en un medio de refrigeración se mantienen unidos los extremos del bucle de la cámara 301 de muestra. Se evita un impedimento o superposición molesta con otras cámaras de muestras o partes de cámaras de muestras de, dado el caso, otros dispositivos de almacenamiento criogénico presentes en el medio de refrigeración.
En la figura 10 se ilustra la extracción de una muestra parcial de la unidad 200 de alojamiento de muestras. La extracción de una muestra parcial se realiza preferiblemente en estado ultracongelado, de manera que la muestra restante permanece en estado crioconservado. Con un dispositivo de separación se separa un trozo longitudinal de la cámara 301 de muestra. Debido a que se conoce de antemano la densidad de suspensión de la muestra en suspensión, la averiguación del trozo longitudinal puede elegirse dependiendo del número de partículas suspendidas deseadas que deben estar contenidas en la muestra parcial extraída. Dado el caso se extraen varios trayectos de la cámara 301 de muestra entre la unidad 200 de memoria de datos y el elemento 540 de estabilización.
En la figura 11 se ilustra la carga secuencial de cámaras de muestras de un dispositivo 100 de almacenamiento criogénico ilustrado esquemáticamente a partir de una pluralidad de compartimentos 810, 820, .... Cada cámara de muestra, cuya posición en el dispositivo 100 de almacenamiento criogénico se identifica, dado el caso, con un número, se une con la pipeta 810 de líquidos para aspirar respectivamente una muestra de líquido.
La extracción de muestras del dispositivo de almacenamiento criogénico según la invención se realiza en función de la aplicación correspondientemente a uno de los siguientes principios. Al principio es posible descongelar todo el dispositivo de almacenamiento criogénico y extraer el contenido de la al menos una cámara de muestra. Esto se realiza, por ejemplo mediante el establecimiento de una presión negativa en uno de los extremos de la al menos una cámara de muestra. Alternativamente es posible extraer muestras o muestras parciales en estado ultracongelado separando (por ejemplo cortando) mecánicamente las cámaras de muestras por separado o partes de cámaras de muestras con un dispositivo de separación del dispositivo de almacenamiento criogénico restante.
En la figura 12 se ilustran diferentes posibilidades para cerrar los extremos de entrada y/o salida de las cámaras 301 de muestras de los dispositivos de almacenamiento criogénico según la invención. Una ventaja especial de las cámaras de muestras tubulares usadas según la invención consiste en que las dimensiones de la sección transversal de los orificios de entrada o salida son mucho más pequeñas que las dimensiones longitudinales de las cámaras de muestras. Con esto se minimiza el intervalo plano en el que puede ponerse en contacto la muestra que va a conservarse con el entorno (especialmente con microorganismos) y por tanto el riesgo de contaminación. Debido a que se excluye en gran medida una contaminación en estado de baja temperatura mediante transporte de materia, el cierre de los extremos sirve especialmente para una delimitación de la muestra después de la carga de la unidad de alojamiento de muestras o después de la descongelación. Según las imágenes parciales (a) y (b) se usa un tapón 325 o una tapa 326 para cerrar la cámara 301 de muestra, que forman un sello. La unidad de cierre está compuesta en esta invención por ejemplo por cera u otro material de plástico. Alternativamente también puede resultar según las imágenes parciales (c) y (d) un cierre a partir del manejo de la cámara 301 de muestra en la extracción de muestras parciales. Por ejemplo, en las cámaras de muestras con forma de goma flexible puede formarse un punto 327 de apriete en el que las paredes internas de la cámara 301 de muestra situadas enfrente se pegan entre sí de manera adherente después de un apriete y corte de una muestra parcial. También puede preverse una unidad de apriete por separado. En el caso de que la muestra en suspensión se mantenga bajo la acción de fuerzas capilares en la cámara 301 de muestra, entonces la propia muestra forma un cierre 328 líquido, que no obstante está expuesto a la contaminación por el entorno.
Las características de la invención dadas a conocer en la descripción precedente, las reivindicaciones y los dibujos pueden ser de importancia tanto por separado como en cualquier combinación para la puesta en práctica de la invención en sus diferentes configuraciones.

Claims (17)

1. Dispositivo de almacenamiento criogénico (100) que comprende al menos una unidad de memoria de datos (200) y al menos una unidad de alojamiento de muestras (300) con al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) para el alojamiento de una muestra en suspensión, en el que la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) está unida con la unidad de memoria de datos (200) y posee una forma longitudinalmente alargada, hueca, que se extiende desde respectivamente un extremo de entrada (320) durante una longitud predeterminada hasta un extremo de salida (330),
caracterizado porque
la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) está fijada de modo flexible y móvil en suspensión a la al menos una unidad de memoria de datos (200).
2. Dispositivo de almacenamiento criogénico según la reivindicación 1, en el que la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) posee la forma de un cilindro hueco, de cono hueco, de tubo, de goma flexible o de una aguja hueca.
3. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) está constituida por un material flexible, maleable.
4. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) está equipada con al menos un sensor, especialmente un sensor de temperatura, y/o de superficies de refrigeración.
5. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la unidad de memoria de datos (200) comprende al menos una memoria de datos (210) con una carcasa (310), con la que está unida la unidad de alojamiento de muestras (300).
6. Dispositivo de almacenamiento criogénico según la reivindicación 5, en el que la unidad de memoria de datos (200) comprende una pluralidad de memorias de datos (210, 220, 230, 240) que están fijadas a lo largo de la longitud de al menos una cámara de muestra (301, 302, ...).
7. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la dimensión de la sección transversal de al menos una cámara de muestra (301) varía a lo largo de su longitud, de modo que se forma al menos una cámara parcial (350) con una dimensión de la sección transversal que es mayor que las dimensiones de la sección transversal de los orificios de entrada y salida (320,
330).
8. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la unidad de alojamiento de muestras (300) comprende varias cámaras de muestras (301, 302, ...) que están unidas entre sí en sus paredes externas, de manera que se forma un bloque de cámaras de muestras (340) integral, flexible.
9. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que se prevé una unidad de marcado (600) que comprende una capa de marcado (610) sobre la unidad de memoria de datos (200) y/o elementos de marcado (620) que se colocan en la unidad de alojamiento de muestras (300).
10. Dispositivo de almacenamiento criogénico según una de las reivindicaciones precedentes, en el que se prevé una unidad de fijación (550) con la que la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) se fija a la unidad de memoria de datos (200).
11. Dispositivo de almacenamiento criogénico según la reivindicación 12, en el que la unidad de fijación (550) comprende unas tiras dispuestas por separado o como haces en uno de cuyos extremos se fija respectivamente una cámara de muestra y cuyo otro extremo a la unidad de memoria de datos (200).
12. Procedimiento para el almacenamiento de al menos una muestra en suspensión en un estado de baja temperatura que comprende las etapas:
-
Alojar la al menos una muestra en suspensión en al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) de un dispositivo de almacenamiento criogénico (100) según una de las reivindicaciones precedentes, y
-
Transferir la muestra en suspensión a un estado de baja temperatura mediante posicionamiento de al menos una parte del dispositivo de almacenamiento criogénico en un medio criogénico.
13. Procedimiento según la reivindicación 12, en el que el alojamiento de al menos una muestra en suspensión en la al menos una cámara de muestra se realiza mediante inmersión de al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) con respectivamente un extremo de entrada (320) en un tanque de muestra (700) y transferencia de la muestra en suspensión bajo la acción de una presión negativa o de fuerzas capilares ejercidas en el extremo de salida (330) correspondiente.
14. Procedimiento según la reivindicación 12 ó 13, en el que en la unidad de memoria de datos (200) se almacenan datos que comprenden la identificación de al menos una muestra en suspensión, datos de medición que se obtuvieron en la muestra en suspensión, datos de referencia de muestras de referencia y/o datos de desarrollo respecto a las propiedades de la muestra en suspensión en el transcurso del almacenamiento en estado de baja temperatura.
15. Procedimiento según una de las reivindicaciones 12 a 14, en el que de la al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) en estado de baja temperatura se retira al menos una muestra parcial mediante separación mecánica.
16. Procedimiento según la reivindicación 15, en el que en la separación mecánica se realiza un calentamiento local de la cámara de muestra respectiva en el entorno de la muestra parcial que va a separarse o una separación en la unidad de fijación (500).
17. Procedimiento según una de las reivindicaciones 12 a 15, en el que los extremos de entrada y/o salida (320, 330) de al menos una cámara de muestra (301, 302, ...) se cierran mediante apriete, taponado, sellado o por una parte de la muestra en suspensión.
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