ES2842751T3 - Instrumento de criopreservación de fibra hueca y procedimiento de criopreservación celular - Google Patents
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Abstract
Un instrumento de criopreservación de fibra hueca (3) que comprende un soporte largo (10) configurado de tal manera que una fibra hueca (30) pueda colocarse sobre el soporte largo, en el que la fibra hueca está configurada de tal manera que pueden incluirse células en el espacio interno de la fibra hueca, y la fibra hueca está formada por una membrana moldeada en forma de paja, teniendo la membrana una pluralidad de orificios que tienen diámetros que no permiten el paso de las células pero permiten el paso de agua, un electrolito y una proteína, en el que el soporte está formado por un material resistente a bajas temperaturas, en el que el soporte tiene una parte inferior (11) sobre el que se puede colocar la fibra hueca, y partes de pared lateral (12, 13) que se elevan desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte, en el que se forman orificios pasantes (H) en la parte inferior del soporte, pasando los orificios pasantes del lado en el que se colocará la fibra hueca al lado opuesto al lado en el que se colocará la fibra hueca, y en el que los orificios pasantes no se forman en lados extremos opuestos de la parte inferior del soporte en la dirección longitudinal del soporte.
Description
DESCRIPCIÓN
Instrumento de criopreservación de fibra hueca y procedimiento de criopreservación celular
[Campo técnico]
[0001] La presente invención se refiere a un instrumento de criopreservación de fibra hueca utilizado para criopreservar una fibra hueca, y a un procedimiento de criopreservación celular para criopreservar una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células, y a preservar las células.
[Antecedentes de la técnica]
[0002] Como procedimiento para preservar una célula, generalmente se lleva a cabo un procedimiento para congelar y preservar una célula, tal como un procedimiento de preservación de baja temperatura o un procedimiento de preservación de temperatura ultrabaja. Como procedimiento de congelación, son bien conocidos tanto un procedimiento de congelación lenta como un procedimiento de congelación por vitrificación. El procedimiento de congelación lenta enfría una célula a una velocidad de enfriamiento lenta durante mucho tiempo e inhibe la formación de cristales de hielo grandes en la célula. De este modo, se supone que el daño (daño por congelación) a la célula debido a la congelación es evitable. Sin embargo, el procedimiento de congelación lenta requiere mucho tiempo hasta que se complete la congelación, y requiere el uso de un congelador caro o similar que tenga una función especial para controlar la velocidad de enfriamiento. Como procedimiento alternativo para superar las desventajas del procedimiento de congelación lenta, en los últimos años se ha utilizado ampliamente un procedimiento de congelación por vitrificación. El procedimiento de congelación por vitrificación es un procedimiento para congelar rápidamente una célula procesada con una solución de vitrificación que utiliza nitrógeno líquido y, de este modo, congelar la célula sin formar cristales de hielo dentro y fuera de la célula. Esto utiliza un fenómeno llamado vitrificación, es decir, un fenómeno en el que, cuando una solución se enfría rápidamente, la solución pasa rápidamente a través del punto de congelación original causando superenfriamiento, y el movimiento de las moléculas de agua se detiene sin formar cristales de hielo. Se supone que este procedimiento es superior al procedimiento de congelación lenta en que no se produce daño a la célula causado por la formación de cristales de hielo, en que el tiempo requerido para el procesamiento es corto y en que no se requiere un equipo especial. Se han desarrollado múltiples procedimientos de congelación de vitrificación específicos para las células. A modo de ejemplo, existe un procedimiento de inmersión de la célula en una solución preservante resistente a la congelación y congelarla rápidamente en nitrógeno líquido o en un congelador ultrabajo.
[0003] En la criopreservación de un óvulo, se realiza criopreservación utilizando un instrumento exclusivo. Por ejemplo, como instrumento exclusivo que se utiliza actualmente en un procedimiento de criopreservación del óvulo, existe el Cryotop (marca registrada). Cryotop es un instrumento exclusivo (Cryotop) en el que una lámina similar a una tira extremadamente delgada se une a la punta de un asa. Generalmente, el procedimiento de criopreservación que utiliza Cryotop se denomina procedimiento Cryotop. En el procedimiento Cryotop, por ejemplo, un fluido de congelación que incluye un crioprotector y un óvulo se colocan sobre la lámina del Cryotop, y la lámina en la que se coloca el óvulo se sumerge en nitrógeno líquido y se vitrifica y congela. Luego, la lámina se aloja y protege en un recipiente similar a una vaina para proteger una porción de lámina, y se mantiene en el nitrógeno líquido o el congelador.
[0004] Los inventores de la presente invención han desarrollado recientemente un procedimiento de criopreservación de fibra hueca que es un procedimiento de criopreservación celular (bibliografía no de patente 1). Este es un procedimiento para introducir una célula tal como un óvulo en una fibra hueca hecha de una membrana de acetato de celulosa y criopreservar la célula en un estado en el que el óvulo se incluye en la fibra hueca. El procedimiento de criopreservación de fibra hueca es un procedimiento altamente confiable capaz de mejorar la viabilidad celular, y su difusión se anticipa ansiosamente.
[Bibliografía no de patente 1]
[0005] H. Matsunari, M. Maehara, K. Nakano, Y. Ike- zawa, Y. Hagiwara, N. Sasayama, A. Shirasu, H. Ohta, M. Takahashi, H. Nagashima. "Hollow Fiber Vitrification: A Novel Method for Vitrifying Multiple Embryos in a Single Device". Journal of Reproduction and Development, Vol. 58 (2012) 599-608
[0006] El documento EP 2140814 A1 divulga un aparato para criopreservar un fragmento de tejido recolectado por vitrificación, que comprende un miembro metálico alargado en forma de placa configurado de tal modo que el fragmento de tejido pueda colocarse en el mismo, en el que la placa tiene muchos orificios que permiten que un medio de enfriamiento penetre en el mismo.
[Problema técnico]
[0007] En la criopreservación de la célula, la célula se criopreserva en nitrógeno líquido. Sin embargo, cuando la célula se pone en nitrógeno líquido tal como está, existe la posibilidad de contaminación bacteriana o similar. La contaminación bacteriana incluye, por ejemplo, un caso en el que, cuando una célula infectada con bacterias se pone en nitrógeno líquido, las bacterias descargadas de la célula contaminan el nitrógeno líquido y se adhieren a otra célula a través del nitrógeno líquido contaminado. Para criopreservar una muestra muy escasa tal como un óvulo, es necesario evitar esta contaminación tanto como sea posible. Por esta razón, el óvulo está alojado en un recipiente similar a una vaina en un estado sellado, y es preferible criopreservar el óvulo en este estado. Esto se debe a que la porción de lámina se aloja en el recipiente similar a una vaina en el procedimiento Cryotop y luego se pone en nitrógeno líquido.
[0008] Sin embargo, dado que una fibra hueca es un material relativamente frágil, cuando la fibra hueca se recoge con pinzas y se aloja en un recipiente para criopreservación tal como está, existe la posibilidad de que el recipiente para criopreservación y la fibra hueca entren en contacto entre sí, y la fibra hueca se rompa. Ya se han comunicado las ventajas del procedimiento de criopreservación de fibra hueca. Sin embargo, la fibra hueca es difícil de manejar, por ejemplo, se rompe fácilmente y un usuario de la misma se limita a un investigador experto.
[0009] Los inventores también idearon una técnica para introducir una fibra hueca en un recipiente para criopreservación, una parte del cual se sumerge en nitrógeno líquido mientras se mantiene la fibra hueca con pinzas para inhibir más eficazmente la contaminación bacteriana o similar, y congelar la fibra hueca. Incluso en esta técnica, dado que la fibra hueca es un material ligero y relativamente frágil, un usuario de la misma se limita a un investigador experto por las mismas razones que anteriormente.
[0010] La ausencia de un instrumento adecuado para criopreservar una fibra hueca de esta manera también dificulta la difusión de un procedimiento de criopreservación de fibra hueca.
[0011] Los inventores se han dado cuenta de que se requiere un instrumento de soporte para la criopreservación de fibra hueca que permita sostener una fibra hueca y manejar fácilmente la fibra hueca.
[0012] La presente invención se concibió en vista de las circunstancias anteriores, y proporciona un instrumento de criopreservación de fibra hueca capaz de criopreservar fácilmente una fibra hueca, y un procedimiento de criopreservación celular capaz de criopreservar fácilmente la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células tales como células germinales.
[Solución al problema]
[0013] La presente invención proporciona un instrumento de criopreservación de fibra hueca y un procedimiento de criopreservación celular como se definen en las reivindicaciones 1 y 4, respectivamente. Las realizaciones preferidas se definen en las reivindicaciones dependientes. En una realización del instrumento de criopreservación de fibra hueca, los orificios pasantes se forman en casi la mitad del soporte en la dirección longitudinal del soporte. El soporte puede estar hecho de una resina o un metal. En una realización, el procedimiento de criopreservación celular incluye un proceso de almacenamiento del soporte sobre el que se coloca la fibra hueca, en un recipiente protector después del proceso de colocación de la fibra hueca sobre el soporte. El procedimiento de criopreservación celular puede incluir un proceso de enfriamiento de la fibra hueca para congelar las células después del proceso de colocación de la fibra hueca sobre el soporte. Las células pueden ser células germinales y/o citoblastos.
[Efectos ventajosos de la invención]
[0014] Según la presente invención, se puede proporcionar un instrumento de criopreservación de fibra hueca y un procedimiento de criopreservación celular capaz de criopreservar fácilmente una fibra hueca.
[Breve descripción de los dibujos]
[0015]
La Fig. 1 es una vista en perspectiva que ilustra una realización de un instrumento de criopreservación de fibra hueca útil para comprender la presente invención.
La Fig. 2 es una vista en perspectiva que ilustra una realización de un instrumento de criopreservación de fibra hueca útil para comprender la presente invención.
La Fig. 3 es una vista en perspectiva que ilustra una realización de un instrumento de criopreservación de fibra hueca útil para comprender la presente invención.
La Fig. 4 es una vista en perspectiva que ilustra una realización del instrumento de criopreservación de fibra hueca según la presente invención.
La Fig. 5 es una vista en perspectiva que ilustra una realización de un instrumento de criopreservación de fibra hueco útil para comprender la presente invención.
La Fig.6 es una vista esquemática que ilustra procesos de una realización de un procedimiento de criopreservación
celular.
La Fig.7 es una vista esquemática que ilustra procesos de una realización de un procedimiento de criopreservación celular.
La Fig.8 es una vista esquemática que ilustra procesos de una realización de un procedimiento de criopreservación celular.
La Fig.9 es una vista esquemática que ilustra procesos de una realización de un procedimiento de criopreservación celular.
La Fig. 10 es una vista esquemática que ilustra procesos de una realización de un procedimiento de criopreservación celular.
La Fig. 11 es una vista esquemática que ilustra procesos de una realización de un procedimiento de criopreservación celular.
[Descripción de las realizaciones]
«Sustrato de cultivo celular»
[0016] Un instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente invención incluye un soporte largo configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca, en el que el soporte está formado por un material resistente a bajas temperaturas. En lo sucesivo, el instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente realización se describirá a modo de ejemplo con referencia a los dibujos.
<Primeras realizaciones>
[0017] Un instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente realización, que es útil para comprender la presente invención, incluye un soporte largo configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca.
[0018] El término fibra hueca se refiere a células que se pueden incluir en un espacio interno de la misma y a una membrana que tiene una pluralidad de orificios que tienen diámetros que no permiten el paso de células diana pero permiten el paso de agua, un electrolito, una proteína, y demás que se moldea en forma de paja. La membrana que forma la fibra hueca incluye polisulfona, polietersulfona, poliacrilonitrilo, poliamida, polietileno, polipropileno, celulosa acetato, celulosa regenerada o similares. Los diámetros de los orificios finos que tiene la membrana son preferiblemente diámetros del orden de nanómetros. Para que la fibra hueca tenga un grado de transparencia que permita la observación de las células germinales anteriores, el grosor de la membrana oscila preferiblemente entre 0,5 |jm 30 |jm, y más preferiblemente entre 1 jim y 10 jim.
[0019] El diámetro interno de la fibra hueca se selecciona a partir de diámetros internos que permiten contener las células diana, preferiblemente que varían de 20 jm 1000 jm, y más preferiblemente de 50 jm a 500 jm.
[0020] La longitud de la fibra hueca puede contener preferiblemente varias células y se selecciona de longitudes adecuadas para formar burbujas descritas, por ejemplo, en el patente n.° JP 5051716. La longitud de la fibra hueca oscila preferiblemente entre 1 mm y 100 mm, y más preferiblemente entre 10 mm y 40 mm. Si la longitud de la fibra hueca está dentro de este intervalo, la fibra hueca puede contener de uno a docenas de ovocitos, óvulos o embriones tempranos. Según el procedimiento descrito en, por ejemplo, la patente No. JP 5051716, una fibra hueca puede contener de docenas a decenas de miles de células germinales primordiales, espermatozoides o células espermáticas, y se pueden formar burbujas alrededor de aberturas opuestas de la fibra hueca con respecto a la pluralidad de células germinales contenidas.
[0021] La Fig. 1 es una vista en perspectiva que ilustra una realización de un instrumento de criopreservación de fibra hueca útil para comprender la presente invención. Un instrumento de criopreservación de fibra hueca 1 incluye un soporte largo 10 configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. Un asa similar a una varilla 20 que sirve como asa se forma en un extremo del soporte 10.
[0022] El soporte 10 se forma en forma de placa rectangular. La longitud del soporte 10 es preferiblemente una longitud que es más larga que la longitud de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen las células, y se establece preferiblemente en un intervalo de 0,5 cm a 5 cm a modo de ejemplo. La anchura del soporte 10 se forma preferiblemente para ser más ancho que la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen las células, y se forma preferiblemente dentro de un intervalo de 0,1 cm a 1 cm.
[0023] Al usar el instrumento de criopreservación de fibra hueca, se supone que, después de que la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen las células, se coloca sobre el soporte 10, se realiza una tarea de enfriamiento de la fibra hueca junto con el soporte 10 (véase la Fig. 7 o similar que se describe a continuación). En este momento, dado que la fibra hueca se recubre típicamente con una solución criopreservadora, cuando la fibra hueca y el soporte se enfrían, la solución criopreservadora y la fibra hueca se integran, y la fibra hueca se fija al soporte 10. Por lo tanto, la flexión del soporte 10 genera flexión de la fibra hueca. Por esta razón, el soporte 10 presenta preferiblemente rigidez
hasta tal punto que el soporte 10 no se deforma fácilmente por una carga ligera ni daña la fibra hueca.
[0024] Además, al usar el instrumento de criopreservación de fibra hueca, se supone que, después de que la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen las células, se coloca sobre el soporte 10, se realiza una tarea de almacenamiento del soporte, en el que se coloca la fibra hueca en un recipiente protector tubular (véase la Fig. 10 o similares que se describirán a continuación). Cuando se realiza esta tarea, por ejemplo, incluso cuando el soporte 10 y el recipiente protector 40 se ponen en contacto entre sí y se aplica una ligera carga al soporte 10, el soporte 10 presenta preferiblemente rigidez hasta tal punto que el soporte 10 no se deforma dañando la fibra hueca.
[0025] El soporte 10 está formado por un material resistente a bajas temperaturas. El material resistente a bajas temperaturas se refiere a un material en el que es difícil generar una fractura a baja temperatura cuando se criopreserva. El material resistente a bajas temperaturas puede ser un material que tiene resistencia a bajas temperaturas hasta tal punto que apenas se fragiliza y daña incluso si se sumerge en una atmósfera de vapor de baja temperatura o ultrabaja temperatura o nitrógeno líquido y, por ejemplo, puede ser una resina o un metal.
[0026] Aquí, atmósfera de vapor de baja temperatura indica una atmósfera de vapor de -20 °C a -269 °C, y atmósfera de vapor de temperatura ultrabaja indica una atmósfera de vapor de -80 °C al punto cero absoluto, e incluye, por ejemplo, una atmósfera de vapor de nitrógeno de baja temperatura o temperatura ultrabaja o el interior de un congelador.
[0027] Además, al utilizar el instrumento de criopreservación de fibra hueca, se supone que se realiza una tarea de calentamiento de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen las células, junto con el soporte 10. En ese momento, se puede preferir el calentamiento instantáneo de las células incluidas en la fibra hueca elevando instantáneamente una temperatura de la fibra hueca según el estado celular.
[0028] El metal incluye, pero sin limitación, por ejemplo, titanio, aluminio, acero inoxidable o similares. La resina puede ser una resina sintética o una resina natural. La resina sintética incluye, pero sin limitación, poli(cloruro de vinilo), poliéster, poliimida, polisulfona, poliestireno, poli(acetato de vinilo), poliestireno, poliuretano, una resina ABS, una resina AS, una resina acrílica, polietileno, polipropileno, policarbonato, una fluororresina tal como politetrafluoroetileno o similares. Entre las resinas sintéticas mencionadas anteriormente, se prefiere policarbonato.
[0029] El grosor del soporte 10 no está particularmente limitado. Cuando el soporte 10 está hecho de una resina o un metal, el grosor del soporte 10 se forma preferiblemente a 0,01 mm o más, más preferiblemente 0,1 mm o más, y más preferiblemente 0,3 mm o más con vistas a conferir rigidez al soporte 10 hasta tal punto que la fibra hueca no se dañe.
[0030] Como se describió anteriormente, al utilizar el instrumento de criopreservación de fibra hueca, se supone que se realiza la tarea de calentar la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen las células, junto con el soporte 10. En ese momento, se puede preferir el calentamiento instantáneo de las células incluidas en la fibra hueca elevando instantáneamente la temperatura de la fibra hueca según el estado celular. Cuando la capacidad calorífica del soporte 10 es alta en la realización de esta tarea, existe la posibilidad de transferir el frío del soporte 10 a la fibra hueca y evitar que la fibra hueca y las células se calienten instantáneamente.
[0031] Por lo tanto, el grosor del soporte 10 no está particularmente limitado. Sin embargo, cuando el soporte 10 está hecho de una resina o un metal, el grosor del soporte 10 se forma preferiblemente a 0,01 mm o más y 1 mm o menos, más preferiblemente 0,1 mm o más y 0,7 mm o menos, y más preferiblemente 0,3 mm o más y 0,5 mm o menos.
[0032] Al comparar las capacidades caloríficas por el mismo volumen, la del metal es típicamente más alta que en la resina. Cuando se comparan la resina y el metal, la resina es más preferida.
[0033] Como instrumento de soporte para criopreservar la fibra hueca, existe la ausencia de un instrumento exclusivo comercialmente disponible. Sin embargo, cuando la fibra hueca se configura para colocarse en el instrumento exclusivo comercialmente disponible para criopreservar las células, dado que no se considera que coloque la fibra hueca, la longitud de la porción de lámina es corta y la fibra hueca no se puede cargar con éxito. Dado que la porción de lámina está hecha para ser muy delgada, existe el problema de que la lámina se doble, por ejemplo, cuando la porción de lámina se pone en un recipiente, y la fibra hueca se rompe fácilmente.
[0034] Por el contrario, según el instrumento de criopreservación de fibra hueca 1 de la presente realización, el soporte 10 tiene una forma adecuada para colocar la fibra hueca, y el soporte 10 no se dobla en gran medida incluso cuando la fibra hueca se coloca sobre el soporte 10 y se utiliza, existe una baja posibilidad de dañar las células incluidas en la fibra hueca, y las células pueden simplemente criopreservarse.
<Segundas realizaciones>
[0035] Un instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente realización, que es útil para comprender la invención, incluye un soporte largo configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. El soporte está formado por un material resistente a bajas temperaturas. El soporte tiene una parte inferior configurada para ser capaz de colocar sobre la misma la fibra hueca y partes de pared lateral que se elevan desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte. No se da una descripción de los elementos en común con el instrumento de criopreservación de fibra hueca de la primera realización.
[0036] La Fig. 2 es una vista en perspectiva que ilustra una realización del instrumento de criopreservación de fibra hueca según la segunda invención. Un instrumento de criopreservación de fibra hueca 2 incluye un soporte largo 10 configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. Un asa similar a una varilla 20 que sirve como asa se forma en un extremo del soporte 10. El soporte 10 tiene una parte inferior 11 y partes de pared lateral 12 y 13 que se elevan desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte.
[0037] Tal como se ilustra en la Fig. 2, las partes de pared lateral 12 y 13 se forman preferentemente en ambos extremos del soporte 10 en una dirección transversal del soporte 10. Cuando la fibra hueca se coloca en la parte inferior 11 del soporte 10, las partes de pared lateral 12 y 13 formadas en ambos extremos de la parte inferior 11 se convierten en guías para la fibra hueca y evitan que la fibra hueca sobresalga del soporte. Después de que la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células, se coloca sobre el soporte 10, cuando el soporte sobre el cual se coloca la fibra hueca se almacena en un recipiente protector tubular, la fibra hueca se puede almacenar más favorablemente en el recipiente protector porque se evita el contacto entre la fibra hueca y el material del recipiente protector.
[0038] Además, el soporte 10 tiene las partes de pared lateral 12 y 13, y de este modo se puede mejorar la rigidez de todo el soporte. Tal como se ilustra en la Fig. 2, las partes de pared lateral 12 y 13 se forman en el soporte 10 y, de este modo, se mejora la rigidez de todo el soporte. Por esta razón, en comparación con el soporte 10 sin las partes de pared lateral, el grosor de la parte inferior 11 sobre la que se puede colocar la fibra hueca se puede establecer para que sea más delgado. El grosor de la parte inferior 11 se adelgaza y, de este modo, las células incluidas en la fibra hueca se pueden enfriar o calentar más rápidamente.
[0039] La Fig. 3(a) es una vista de sección transversal tomada a lo largo de la línea A-A de la Fig. 2. En la presente realización, tal como se ilustra en la Fig. 3(a), se da como ejemplo el soporte en el que la parte inferior y las partes de pared lateral están conectadas para cruzarse en ángulos rectos y la forma de sección transversal es una forma en U. Tal como se ilustra en las Fig. 3(b) y 3(c), como otras formas de los soportes, se puede dar como ejemplo un soporte que tiene una forma de sección transversal ahuecada tal como una forma en C, una forma en V, una forma de una figura compuesta por un lado trapezoidal y una parte inferior superior, o similares. La forma de sección transversal ahuecada incluye una forma en la que la parte de muesca está presente en el centro de la sección transversal del soporte, y una forma en la que la parte de muesca está más cerca de un extremo que del centro de la sección transversal del soporte. En la forma de la sección transversal del soporte, no hay limitación a la proporción de longitud entre la parte inferior y la parte de pared lateral, y al ángulo formado por la parte inferior y las partes de pared lateral. En la forma de la sección transversal del soporte, tampoco hay limitación a las formas (por ejemplo, tanto una línea recta o una línea curva, como si las dos partes de la pared lateral tienen la misma forma) de la parte inferior y las partes de pared lateral.
[0040] Desde el punto de vista de la facilidad de manejo de la fibra hueca, el ángulo (en adelante denominado "ángulo ascendente") formado por la parte inferior y las partes de pared lateral de la sección transversal del soporte es preferiblemente mayor de 0 grados e igual o menor de 90 grados, y más preferiblemente igual o mayor de 20 grados e igual o menor de 90 grados. En el caso del soporte en cuya sección transversal la parte inferior es un punto ilustrado en las Fig. 3(b) y 3(c), el ángulo ascendente es perpendicular al bisector del ángulo formado por las dos partes de pared lateral, y se refiere al ángulo de las partes de pared lateral con respecto a una línea recta que pasa a través de la parte inferior. Cuando las partes de pared lateral son curvas, el ángulo ascendente se refiere al ángulo formado por la línea recta que conecta los extremos de las partes de pared lateral y la mitad de la parte inferior y la parte inferior.
[0041] La forma de corte transversal del soporte es preferiblemente una forma en C, una forma en U o una forma en V. Cuando la forma de corte transversal es la forma en U o la forma en V, el soporte se compone sustancialmente de las partes de pared lateral. Por esta razón, cuando se coloca la fibra hueca, la fibra hueca puede estar en contacto solo con las partes de pared lateral en lugar de la parte inferior del soporte 10.
[0042] Según el instrumento de criopreservación de fibra hueca 2 de la presente realización, el soporte 10 tiene las partes de pared lateral 12 y 13, por tanto, las células pueden enfriarse o calentarse en un estado más favorable además de mejorar la manejabilidad de la fibra hueca.
<Tercera realización
[0043] Un instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente realización incluye un soporte largo configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. El soporte está formado por un material
resistente a bajas temperaturas. El soporte tiene una parte inferior configurada para ser capaz de colocar sobre la misma la fibra hueca y partes de pared lateral que se elevan desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte. En el soporte se forman agujeros pasantes. No se da una descripción de los elementos en común con los instrumentos de criopreservación de fibra hueca de la primera y segunda realizaciones.
[0044] La Fig. 4 es una vista en perspectiva que ilustra una realización del instrumento de criopreservación de fibra hueca según la presente invención. Un instrumento de criopreservación de fibra hueca 3 incluye un soporte largo 10 configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. Un asa similar a una varilla 20 que sirve como asa se forma en un extremo del soporte 10. El soporte 10 tiene una parte inferior 11 y partes de pared lateral 12 y 13 que se elevan desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte. En la parte inferior 11 del soporte 10 se forman orificios pasantes H. Los orificios pasantes H formados en el soporte 10 pasan del lado de fibra hueca en el que se colocará la fibra hueca al lado opuesto al lado de fibra hueca. En la presente realización, los orificios pasantes H se forman en el soporte en la dirección que se orienta hacia la fibra hueca colocada sobre el soporte.
[0045] En el caso del instrumento exclusivo comercialmente disponible para criopreservar células, no se supone que se coloque la fibra hueca, y por tanto existe el problema de que no se considera que efectivamente ponga la fibra hueca en contacto con un gas y enfríe rápidamente las células en la fibra hueca. Sin embargo, como en la presente invención, los orificios pasantes H se forman en la parte inferior 11 del soporte 10. De este modo, dado que la fibra hueca se expone fácilmente al aire frío o al calor desde el exterior, las células incluidas en la fibra hueca se pueden enfriar o calentar más rápidamente.
[0046] Aquí, los orificios pasantes H formados en el soporte se forman para pasar del lado de fibra hueca en el que se colocará la fibra hueca al lado opuesto al lado de fibra hueca. De este modo, dado que el aire frío o el calor del exterior se transfieren fácilmente de forma directa a la fibra hueca, las células incluidas en la fibra hueca se pueden enfriar o calentar más rápidamente.
[0047] Cuando la fibra hueca se coloca en el instrumento de criopreservación de fibra hueca 3 de la presente realización, la dirección longitudinal del soporte 10 y la dirección longitudinal de la fibra hueca se vuelven casi la misma dirección, y la fibra hueca se puede colocar sobre el soporte 10.
[0048] Los orificios pasantes se forman en la dirección del grosor de placa del soporte similar a placa como se ilustra en la Fig. 4, debe entenderse que los orificios pasantes se forman en la dirección que se orienta hacia la fibra hueca que se colocará sobre el soporte.
[0049] En un procedimiento de criopreservación de fibra hueca, desde el punto de vista de incluir de manera confiable las células en la fibra hueca, las células se incluyen preferiblemente en casi la mitad de la fibra hueca en la dirección longitudinal de la fibra hueca. Por ejemplo, una capa de solo un fluido de cultivo de células, una capa de gas, una capa líquida que incluye las células y el fluido de cultivo, una capa de gas y una capa de solo el fluido de cultivo se forman preferiblemente en el espacio interno de la fibra hueca a partir de un lado terminal de la fibra hueca. Por lo tanto, como se ilustra en la Fig. 4, los orificios pasantes H se forman preferiblemente en casi la mitad del soporte 10 en la dirección longitudinal del soporte 10. Los orificios pasantes H se forman en casi la mitad del soporte 10 en la dirección longitudinal del soporte 10, y de este modo el aire frío o el calor del exterior se transfieren fácilmente de forma directa a la fibra hueca. Dado que los orificios pasantes no se forman en lados extremos opuestos del soporte 10 en la dirección longitudinal del soporte 10 como se ilustra en la Figura 4, la rigidez de todo el soporte se potencia. Además, la operatividad cuando se coloca la fibra hueca sobre el soporte también es favorable.
[0050] De acuerdo con la presente invención, la pluralidad de orificios pasantes H se forman en una parte de la parte inferior 11 del soporte 10. Sin embargo, en otras realizaciones que no forman parte de la presente invención, dentro de un intervalo en el que no se obstaculiza la función de colocación de la fibra hueca, se puede formar un orificio pasante H en el soporte, o se puede formar una pluralidad de orificios pasantes H en todo el soporte. Cuando el soporte tiene la parte inferior y las partes de pared lateral, los orificios pasantes H pueden formarse solo en la parte inferior como se muestra en el instrumento de criopreservación de fibra hueca 3 anterior, o por el contrario, pueden formarse solo en las partes de pared lateral. Las formas de los orificios pasantes H no están particularmente limitadas. La forma del soporte 10 en la que se forman los orificios pasantes H puede formarse para ser, por ejemplo, una forma de malla, una forma de red o una forma de escalera.
[0051] Según el instrumento de criopreservación de fibra hueca 3 de la presente realización, los orificios pasantes H se forman en el soporte 10 y, de este modo, las células se pueden enfriar o calentar más favorablemente. <Cuartas realizaciones>
[0052] Un instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente realización incluye un soporte largo configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. El soporte está formado por un material resistente a bajas temperaturas. El soporte tiene una parte inferior configurada para ser capaz de colocar sobre la misma la fibra hueca. En el soporte se forman orificios pasantes que pasan del lado en el que se colocará la fibra
hueca al lado opuesto al lado en el que se colocará la fibra hueca. No se da una descripción de los elementos en común con los instrumentos de criopreservación de fibra hueca de la primera a tercera realizaciones.
[0053] La Fig. 5 es una vista en perspectiva que ilustra una realización de un instrumento de criopreservación de fibra hueca según la cuarta realización. Un instrumento de criopreservación de fibra hueca 4 incluye un soporte largo 10 configurado para ser capaz de colocar sobre el mismo una fibra hueca. Los orificios pasantes H se forman en la parte inferior 11 del soporte 10. Los salientes similares a placa 21 que sirven como asas se forman en los extremos de la parte inferior 11 del soporte 10. Los salientes 21 se pueden agarrar fácilmente con pinzas. Como se ilustra en la Fig. 5, cuando los salientes 21 constituyen una pared lateral que se eleva desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte, los salientes 21 constituirán una parte de pared lateral que se duplica como las asas.
[0054] Según el instrumento de criopreservación de fibra hueca 4 de la presente realización, dado que la longitud del soporte 10 y la longitud del instrumento de criopreservación de fibra hueca son iguales, almacenabilidad de todo el instrumento de criopreservación de fibra hueca es excelente.
«Procedimiento de criopreservación celular»
[0055] Un procedimiento de criopreservación celular de la presente invención tiene un proceso (un proceso A) de colocación de una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células, sobre un soporte del instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente invención, y un proceso (un proceso D) de criopreservación de las células en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte.
<Primeras realizaciones>
[0056] Un procedimiento de criopreservación celular de la presente realización tiene un proceso (un proceso A) de colocación de una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, sobre un soporte de un instrumento de criopreservación de fibra hueca, un proceso (un proceso B) de almacenamiento del soporte sobre el cual se coloca la fibra hueca en un recipiente protector después del proceso A, un proceso (un proceso C) de enfriamiento de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, y congelación de las células, y un proceso (un proceso D) de criopreservación de las células en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte después de los procesos A, B y C.
[0057] En la presente realización, las células incluidas en el espacio interno de la fibra hueca son células germinales y/o citoblastos. Las células germinales son un concepto integral que incluye células germinales primordiales, espermatozoides o células espermáticas, óvulos, ovocitos y embriones tempranos. Aquí, las células espermáticas se refieren a células precursoras en un proceso de conversión en espermatozoides.
[0058] Los ovocitos se refieren a células precursoras en un proceso de conversión en óvulos. Los embriones tempranos se refieren a óvulos fecundados preimplantados. Los citoblastos incluyen células ES, células iPS, citoblastos tisulares o similares.
[0059] Las células se pueden incluir en el espacio interno de la fibra hueca en un estado de masa celular o tejido celular, y pueden ser, por ejemplo, un estado de esferoide, organoide o embrión temprano. El esferoide se refiere a una pluralidad de células agregadas en un estado tridimensional. El organoide se refiere a un cuerpo de tejido celular autoorganizado mediante la integración de células en un espacio controlado a alta densidad.
[0060] Una membrana que forma la fibra hueca incluye polisulfona, polietersulfona, poliacrilonitrilo, poliamida, polietileno, polipropileno, acetato de celulosa, celulosa regenerada o similares. Para contener y criopreservar las células germinales, particularmente, la celulosa acetato es preferible y la celulosa diacetato es más preferible.
[0061] Las Fig. 6 a 8 son diagramas esquemáticos que ilustran los procesos del procedimiento de criopreservación celular de la presente realización.
[0062] Se conoce un procedimiento para obtener la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales. La fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, se puede obtener según un procedimiento descrito, por ejemplo, en la patente No. JP 5051716.
[0063] La fibra hueca 30 puede sumergirse previamente en una solución de criopreservación antes de colocarse sobre el soporte 10. De este modo, cuando las células germinales se introducen en el espacio interno de la fibra hueca, un primer líquido tal como un fluido de cultivo introducido junto con las células germinales o un fluido intracelular de la célula germinal se reemplaza por una solución de criopreservación. La solución de criopreservación es un líquido adecuado para la criopreservación. El procedimiento de criopreservación de las células germinales incluye congelación rápida en una alta concentración de fluido protector de daño por congelación, congelación normal en una baja concentración de fluido protector de daño por congelación, congelación lenta para enfriar las células a una velocidad de enfriamiento lenta durante mucho tiempo, etc. El procedimiento de criopreservación celular de la
presente invención se puede aplicar a cualquier procedimiento de congelación. La congelación rápida en una alta concentración de líquido protector de daños por congelación también se denomina vitrificación. Además, el fluido protector de daños por congelación también se denomina solución de vitrificación. La congelación por vitrificación es un procedimiento de congelación preferido desde el punto de vista de la viabilidad celular. Una solución de vitrificación de tipo de protección intracelular incluye un líquido que contiene dimetilsulfóxido (DMSO), un líquido que contiene etilenglicol, un líquido que contiene propanodiol, etc. La solución de vitrificación de tipo de protección intracelular incluye un líquido que contiene sacarosa, un líquido que contiene trehalosa, una solución de Ficoll-Conrey, un líquido que contiene s-poli-L-lisina (PLL), un líquido que contiene s-poli-D-lisina, un líquido que contiene a-poli-L-lisina, un líquido que contiene a-poli-D-lisina, etc.
[0064] Para reemplazar el primer líquido incluido en el espacio interno de la fibra hueca por la solución de vitrificación, se puede usar como segundo líquido una pluralidad de mezclas obtenidas al mezclar la solución de vitrificación y el primer líquido tal como el fluido de cultivo en una proporción que proporcione un gradiente de concentración moderado. Es decir, se puede utilizar una pluralidad de segundos líquidos en los que se aumenta gradualmente la concentración de la solución de vitrificación. A medida que aumenta el número de clases del segundo líquido que tiene un gradiente de concentración, el primer líquido o el fluido intracelular de la célula germinal incluido en el espacio interno de la fibra hueca se puede reemplazar por la solución de vitrificación en condiciones moderadas. Sin embargo, cuando hay demasiados, la tarea es complicada y, por tanto, se utilizan típicamente de dos a cinco clases de segundos líquidos.
[0065] Cuando se utiliza una pluralidad de clases de segundos líquidos, la fibra hueca se sumerge en el segundo líquido en el que la concentración de la solución de vitrificación es baja. El reemplazo se realiza durante un tiempo predeterminado mientras se agita el segundo líquido según sea necesario. Como se describió anteriormente, los orificios de la fibra hueca no permiten el paso de las células germinales, pero permiten el paso del primer líquido y el segundo líquido. Por lo tanto, el espacio interno de la fibra hueca o el fluido intracelular de la célula germinal se reemplaza del primer líquido al segundo líquido. En esta ocasión, las células germinales se mantienen en un estado en el que se incluyen en el espacio interno de la fibra hueca. Esto se realiza secuencialmente a partir del segundo líquido en el que la concentración de la solución de vitrificación es baja, y de este modo el primer líquido o el fluido intracelular de la célula germinal en el espacio interno de la fibra hueca se puede reemplazar por la solución de vitrificación.
(Proceso A)
[0066] Como se ilustra en la Fig. 6, la fibra hueca 30, en cuyo espacio interno se incluyen las células germinales 31 y que se sumerge en la solución de criopreservación, se coloca sobre el soporte 10 del instrumento de criopreservación de fibra hueca 4 (un proceso A). La fibra hueca 30 se puede manejar visualmente con pinzas. (Procesos B y C)
[0067] Después del proceso A, la fibra hueca 30, en cuyo espacio interno se incluyen las células germinales 31, se enfría (un proceso C). Tal como se ilustra en la Fig. 7, el enfriamiento de la fibra hueca se realiza introduciendo el soporte 10 y la fibra hueca 30 colocada sobre el soporte 10 en un recipiente protector tubular preenfriado 40 (un proceso B). El recipiente protector tubular 40 se coloca en una atmósfera de vapor a temperatura ultrabaja introduciendo previamente una parte del recipiente protector tubular 40 en un recipiente 61 en el que se almacena nitrógeno líquido 60 y enfriando el gas en el recipiente protector tubular 40.
[0068] Las células germinales 31 incluidas en la fibra hueca 30 junto con la solución de vitrificación se congelan por la atmósfera de vapor a temperatura ultrabaja en el recipiente protector tubular 40. Por ejemplo, desde el punto de vista de hacer que no sea posible una captación fácil, como con las células humanas, e inhibir la contaminación bacteriana, la fibra hueca se congela en la atmósfera de vapor a baja temperatura o a temperatura ultrabaja como se muestra en la presente realización. Sin embargo, la fibra hueca se congela preferiblemente por exposición al vapor de nitrógeno líquido.
[0069] Tal como se ilustra en la Fig. 8, el soporte 10 sobre el que se coloca la fibra hueca 30 se almacena completamente en el recipiente protector tubular 40, y luego se une una tapa 40a del recipiente protector. De este modo, la fibra hueca 30 se sella.
(Proceso D)
[0070] El recipiente protector 40 y el soporte 10 están integrados, y la fibra hueca 30 que está en un estado sellado se criopreserva en un congelador, nitrógeno líquido o helio líquido (un proceso D).
[0071] Tal como se describió anteriormente, las células germinales, que se incluyen y criopreservan en el espacio interno de la fibra hueca, se sumergen en un líquido de calentamiento junto con la fibra hueca y, de este modo, se descongelan. Luego, cuando se aplica una presión de descarga desde un extremo de la fibra hueca al espacio
interno, las células germinales se descargan hacia afuera desde el espacio interno de la fibra hueca. Si el cultivo se realiza con las células germinales incluidas en el espacio interno de la fibra hueca, la fibra hueca que incluye las células germinales después de descongelarse puede ponerse en un medio de cultivo deseado.
[0072] Según el procedimiento de criopreservación celular de la presente realización, dado que el soporte 10 sobre el que se coloca la fibra hueca 30 se introduce en el recipiente protector tubular preenfriado 40, y dado que el soporte 10 y la fibra hueca 30 colocados sobre el soporte 10 se enfrían, la contaminación bacteriana o similares se pueden suprimir eficazmente.
[0073] En lo sucesivo, se describirán otras realizaciones según el procedimiento de criopreservación celular. No se da una descripción de los elementos en común con el procedimiento de criopreservación celular de la primera realización.
<Segundas realizaciones>
[0074] Un procedimiento de criopreservación celular de una segunda realización tiene un proceso (un proceso A) de colocación de una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, sobre el soporte del instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente invención, un proceso (un proceso B) de almacenamiento del soporte sobre el cual se coloca la fibra hueca en un recipiente protector tubular después del proceso A, un proceso (un proceso C) de enfriamiento de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales después del proceso B y congelación de las células, y un proceso (un proceso D) de criopreservación de las células en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte después de los procesos A, B y C.
[0075] Por ejemplo, después de que la fibra hueca 30 se coloca sobre el soporte 10, y el soporte 10 sobre el que se coloca la fibra hueca 30 se almacena en el recipiente protector, el soporte 10 y la fibra hueca 30 colocados sobre el soporte 10 pueden meterse en nitrógeno líquido junto con el recipiente protector 40 en el que están alojados, la fibra hueca 30 puede enfriarse y luego las células pueden criopreservarse.
<Terceras realizaciones>
[0076] Un procedimiento de criopreservación celular de una tercera realización tiene un proceso (un proceso A) de colocación de una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, sobre el soporte del instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente invención, un proceso (un proceso C) de enfriamiento de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, para congelar las células después del proceso A, un proceso (un proceso B) de almacenamiento del soporte sobre el cual se coloca la fibra hueca en un recipiente protector tubular después del proceso C, y un proceso (un proceso D) de criopreservación de las células en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte después de los procesos A, B y C.
[0077] Por ejemplo, cuando se da como ejemplo un caso en el que se utiliza el instrumento de criopreservación de fibra hueca 2, la fibra hueca 30 puede colocarse sobre el soporte 10, el soporte 10 sobre el que se coloca la fibra hueca 30 puede meterse directamente en nitrógeno líquido, la fibra hueca puede enfriarse para congelar las células (Fig. 9), la fibra hueca 30 después de la congelación puede almacenarse en el recipiente protector tubular 50 (Fig. 10) y luego las células pueden criopreservarse. Además, el soporte 10 sobre el que se coloca la fibra hueca 30 puede exponerse al vapor de nitrógeno líquido, la fibra hueca puede enfriarse para congelar las células, la fibra hueca 30 después de la congelación puede almacenarse en el recipiente protector tubular 50 y luego las células pueden criopreservarse.
<Cuartas realizaciones>
[0078] Un procedimiento de criopreservación celular de una cuarta realización tiene un proceso (un proceso C) de enfriamiento de una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, para congelar las células, un proceso (un proceso A) de colocación de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, sobre el soporte del instrumento de criopreservación de fibra hueca de la presente invención después del proceso C, un proceso (un proceso B) de almacenamiento del soporte sobre el cual se coloca la fibra hueca en un recipiente protector tubular después de los procesos C y A, y un proceso (un proceso D) de criopreservación de las células en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte después de los procesos A, B y C.
[0079] Por ejemplo, después de que la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células germinales, se enfría previamente para congelar las células germinales, la fibra hueca se puede colocar sobre el soporte y las células se pueden criopreservar en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte.
[0080] Se da como ejemplo un caso en el que los procedimientos de criopreservación celular de la segunda a cuarta realizaciones tienen el proceso B. Sin embargo, en el procedimiento de criopreservación celular de la presente invención, el proceso B no es esencial. Por ejemplo, el proceso C se puede realizar después del proceso A y luego se puede realizar el proceso D. De manera alternativa, el proceso A se puede realizar después del proceso C y luego se
puede realizar el proceso D.
[0081] Los procedimientos de criopreservación celular de la primera a cuarta realizaciones se han descrito con referencia a las Fig. 7 a 11 y se da como ejemplo un caso de uso del instrumento de criopreservación de fibra hueca 4 o el instrumento de criopreservación de fibra hueca 2. Sin embargo, en el procedimiento de criopreservación celular de la presente invención, se utiliza el instrumento de criopreservación de fibra hueca como se define en la reivindicación 1 y, por ejemplo, se puede utilizar el instrumento de criopreservación de fibra hueca 3 de la realización. <Recipientes protectores>
[0082] La forma del recipiente protector no está particularmente limitada e incluye una forma tubular tal como una forma tubular redondeada o una forma tubular rectangular, o una forma tal como una forma de bolsa. En el caso de la forma tubular, como los recipientes protectores 40 y 50 ejemplificados previamente, la forma tubular es una forma de tubo de ensayo, un extremo del cual está abierto y está formado por una abertura, y el otro extremo del cual está cerrado, lo que es preferible desde el punto de vista de la sellabilidad. De manera similar, la forma de bolsa es preferiblemente una forma en la que se forma una abertura en una parte de una bolsa y se cierra una parte distinta de la abertura. Particularmente, cuando las células humanas se criopreservan, la forma del recipiente protector es preferiblemente la forma del tubo de ensayo tal como la forma tubular redondeada o la forma tubular rectangular desde el punto de vista de la sellabilidad. Cuando se encierran múltiples fibras huecas a la vez, la forma del recipiente protector es preferiblemente la forma de bolsa.
[0083] La abertura del recipiente protector puede cerrarse mediante la tapa como se ilustra en la Fig. 8, o cerrarse mediante la inserción y ajuste del instrumento de criopreservación de fibra hueca como se ilustra en la Fig. 10. De manera alternativa, la fibra hueca puede sellarse sellando todo el instrumento de criopreservación de fibra hueca como se ilustra en la Fig. 8, o sellando una parte del instrumento de criopreservación de fibra hueca como se ilustra en la Fig. 10. Además, la fibra hueca puede sellarse sellando una parte del soporte. Desde el punto de vista de la sellabilidad, todo el instrumento de criopreservación de fibra hueca está preferiblemente sellado.
[0084] Para un sellado más fácil en un estado en el que el asa 20, el soporte 10 y toda la fibra hueca 30 están encerrados, el recipiente protector se establece como la forma de tubo de ensayo, cuyo diámetro interno es mayor que un diámetro del borde circunferencial externo del asa 20, y la abertura del recipiente protector 51 que tiene la forma de tubo de ensayo se cierra mediante un procedimiento tal como sellado térmico después de que se almacenan el asa 20, el soporte 10 y la fibra hueca 30. De este modo, todo el instrumento de criopreservación de fibra hueca puede sellarse (Fig. 11).
[0085] Las constituciones en cada una de las realizaciones descritas anteriormente y combinaciones de las mismas son meramente ejemplos, y son posibles adiciones, omisiones, sustituciones y otras modificaciones de las constituciones sin apartarse del alcance de la presente invención como se define en las reivindicaciones.
[Aplicación Industrial]
[0086] Según la presente invención, pueden proporcionarse un instrumento de criopreservación de fibra hueca capaz de criopreservar fácilmente una fibra hueca, y un procedimiento de criopreservación celular capaz de criopreservar fácilmente una fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células tales como células germinales, y utilizarse ampliamente en campos relacionados con la biología, campos relacionados con la ciencia médica y particularmente campos de medicina reproductiva.
[Lista de signos de referencia]
[0087]
1, 2, 3, 4: Instrumento de criopreservación de fibra hueca
10: Soporte
11: Parte inferior
12, 13: Parte de pared lateral
20: Asa
21: Saliente
30: Fibra hueca
31: Células germinales
40, 50, 51: Recipiente protector 40a: Tapa
60: Nitrógeno líquido
61: Recipiente
Claims (9)
1. Un instrumento de criopreservación de fibra hueca (3) que comprende un soporte largo (10) configurado de tal manera que una fibra hueca (30) pueda colocarse sobre el soporte largo, en el que la fibra hueca está configurada de tal manera que pueden incluirse células en el espacio interno de la fibra hueca, y la fibra hueca está formada por una membrana moldeada en forma de paja, teniendo la membrana una pluralidad de orificios que tienen diámetros que no permiten el paso de las células pero permiten el paso de agua, un electrolito y una proteína, en el que el soporte está formado por un material resistente a bajas temperaturas,
en el que el soporte tiene una parte inferior (11) sobre el que se puede colocar la fibra hueca, y partes de pared lateral (12, 13) que se elevan desde la parte inferior en la dirección longitudinal del soporte,
en el que se forman orificios pasantes (H) en la parte inferior del soporte, pasando los orificios pasantes del lado en el que se colocará la fibra hueca al lado opuesto al lado en el que se colocará la fibra hueca, y
en el que los orificios pasantes no se forman en lados extremos opuestos de la parte inferior del soporte en la dirección longitudinal del soporte.
2. El instrumento de criopreservación de fibra hueca según la reivindicación 1, en el que los orificios pasantes se forman en casi la mitad del soporte en la dirección longitudinal del soporte.
3. El instrumento de criopreservación de fibra hueca según la reivindicación 1 o 2, en el que el soporte está hecho de una resina o un metal.
4. Un procedimiento de criopreservación celular que utiliza el instrumento de criopreservación de fibra hueca según la reivindicación 1 y la fibra hueca, y que comprende:
un proceso de colocación de la fibra hueca, en cuyo espacio interno se incluyen células, sobre el soporte del instrumento de criopreservación de fibra hueca; y
un proceso de criopreservación de las células en un estado en el que la fibra hueca se coloca sobre el soporte.
5. El procedimiento de criopreservación celular según la reivindicación 4, en el que el procedimiento de criopreservación celular incluye un proceso de almacenamiento del soporte sobre el que se coloca la fibra hueca en un recipiente protector (40, 50, 51) después del proceso de colocación de la fibra hueca sobre el soporte.
6. El procedimiento de criopreservación celular según la reivindicación 4 o 5, en el que el procedimiento de criopreservación celular incluye un proceso de enfriamiento de la fibra hueca para congelar las células después del proceso de colocación de la fibra hueca sobre el soporte.
7. El procedimiento de criopreservación celular según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el que las células son células germinales y/o citoblastos.
8. El procedimiento de criopreservación celular según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en el que los orificios pasantes se forman en casi la mitad del soporte en la dirección longitudinal del soporte.
9. El procedimiento de criopreservación celular según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en el que el soporte está hecho de una resina o un metal.
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Families Citing this family (4)
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Family Cites Families (7)
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|---|---|---|---|---|
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| WO2010046949A1 (ja) | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Inui Hiroaki | 細胞をガラス化保存する方法および細胞のガラス化保存用容器 |
| JP5525280B2 (ja) * | 2009-02-19 | 2014-06-18 | 裕昭 乾 | 細胞をガラス化保存する方法および細胞のガラス化保存用容器 |
| WO2011070973A1 (ja) * | 2009-12-08 | 2011-06-16 | 学校法人北里研究所 | 動物の胚または卵子のガラス化保存用細管 |
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