ES2829774T3 - Instrumento de crioconservación de tejido biológico recogido y procedimiento para congelar fragmentos de tejido recogido - Google Patents

Instrumento de crioconservación de tejido biológico recogido y procedimiento para congelar fragmentos de tejido recogido Download PDF

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Abstract

Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) para someter a crioconservación un trozo de tejido vivo recogido en un estado sellado, comprendiendo dicho aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) un soporte de trozos de tejido (1) capaz de sujetar dicho trozo de tejido vivo y una bolsa de alojamiento hecha de resina (11) que es capaz de alojar dicho soporte de trozos de tejido (1) en ella, que se puede termosellar después de alojar dicho soporte de trozos de tejido (1) en la misma, y que es resistente al nitrógeno líquido, donde dicho soporte de trozos de tejido (1) comprende una parte de cuerpo con forma de placa compuesta por una pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) y una pieza superior con forma de placa (3) fijada a una superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) y una lámina de cobertura (4) sujeta por dicha parte de cuerpo con forma de placa; dicho soporte de trozos de tejido (1) tiene una parte para colocar trozos de tejido (5) formada por una parte recortada (32) provista sobre dicha pieza superior con forma de placa (3) y una parte, de dicha superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2), que está dispuesta en dicha parte recortada(32); y dicha lámina de cobertura (4) es capaz de cubrir por completo dicha parte para colocar trozos de tejido (5) y una porción periférica de dicha parte para colocar trozos de tejido(5).

Description

DESCRIPCIÓN
Instrumento de crioconservación de tejido biológico recogido y procedimiento para congelar fragmentos de tejido recogido
CAMPO TÉCNICO
La presente invención se refiere a un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido y a un procedimiento para congelar trozos de tejido recogido que se han de utilizar para la crioconservación de células vivas tales como óvulos de mamífero.
TÉCNICA ANTERIOR
Las células vivas (por ejemplo, espermatozoides, óvulos y células similares) de los mamíferos se someten a crioconservación. La crioconservación de las células vivas permite la conservación de recursos hereditarios de sistemas y clases específicos, y es eficaz para mantener especies animales que se encuentran al borde de la extinción y útil para el tratamiento de la infertilidad humana.
En la publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2003-284546 (documento de patente 1) se describe un procedimiento para congelar el ovario. El procedimiento para congelar el ovario está caracterizado porque un tejido reproductivo que incluye al menos el ovario extraído de una hembra de un mamífero no humano se conserva de 15 a 0 °C y, a partir de ese momento, se congela mediante un procedimiento de vitrificación. Como procedimiento para congelar embriones de mamífero, como se describe en un documento de patente 1 (publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2000-189155), se propone un procedimiento para congelar y almacenar embriones de mamífero en el cual los embriones u óvulos de mamífero se unen a la superficie interna del recipiente de congelación y almacenamiento tal como la pajilla congelada, vial congelado o tubo congelado esterilizados utilizando un líquido de vitrificación en una cantidad mínima y suficiente como para encerrar en el mismo los embriones o los óvulos de mamífero. El recipiente de congelación y almacenamiento se sella y se enfría rápidamente poniendo el recipiente de congelación y almacenamiento en contacto con nitrógeno líquido. En el procedimiento de descongelación, el recipiente de congelación y almacenamiento almacenado en el procedimiento anterior se saca del nitrógeno líquido y se abre un extremo de dicho recipiente. Se inyecta un líquido diluido a una temperatura de 33 a 39 °C directamente en el recipiente para descongelar los embriones o los óvulos de mamífero y diluir el líquido de vitrificación. Este procedimiento elimina la posibilidad de que los embriones o los óvulos de mamífero se infecten con una enfermedad mediante virus o bacterias, y permite almacenarlos con una tasa de supervivencia elevada, y descongelarlos y diluir el líquido de vitrificación.
El solicitante del presente documento propuso la placa de crioconservación de trozos de tejido según se describe en la publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2008-222640 (documento de patente 3). La placa de crioconservación de trozos de tejido es la pieza metálica con forma de placa cuyo ancho es igual o ligeramente mayor que el ancho predeterminado de la porción abierta de corte indicadora de porción, se puede extender con una longitud predeterminada, permite que el trozo de tejido cortado de un tejido vivo usando el instrumento de corte de tejido e indicador de posición sea colocado sobre la misma, y tiene una gran cantidad de orificios.
El solicitante del presente documento propuso el instrumento de crioconservación según se describe en la publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2012-219017 (documento de patente 4). El instrumento de crioconservación del documento de patente 4 se utiliza para congelar una muestra biológica tal como un trozo de tejido, una célula y elementos similares mediante un procedimiento de congelación y vitrificación (procedimiento de congelación y vitrificación rápida y procedimiento de congelación y vitrificación súper rápida). El instrumento de crioconservación tiene la parte para colocar la muestra que incluye la lámina de acero inoxidable y la parte de soporte sujeta a la porción de extremo proximal de la parte para colocar la muestra. El instrumento de crioconservación no tiene un orificio pasante en la región de la parte para colocar la muestra donde se ha de colocar la muestra biológica, pero la lámina de acero inoxidable se usa como la parte para colocar la muestra.
DOCUMENTOS DE LA TÉCNICA ANTERIOR DOCUMENTOS DE PATENTE
Documento de patente 1: Publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2003284546
Documento de patente 2: Publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2000­ 189155
Documento de patente 3: Publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2008­ 222640
Documento de patente 4: Publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2012­ 219017
El documento DE10262157 (B4) se refiere a una placa de muestras para uso en almacenamiento criogénico de muestras biológicas, con pocillos dentro de los cuales se colocan las muestras. La placa cabe dentro de una cubierta, como si fuera el cajón de una caja de cerillas, y se mantiene en su posición mediante elementos cooperantes, p. ej., salientes y rebajes. Se incluye una reivindicación independiente para almacenamiento criogénico de muestras biológicas en la cual las placas se recubren con un fluido refrigerante y se colocan en dicho fluido en la cubierta. El documento US2008050284 (A1) se refiere a un aparato para sujetar una muestra que se va a analizar que incluye un elemento portador plano para recibir una muestra, y un elemento de cobertura. El elemento portador se puede mover respecto del elemento de cobertura entre una posición cerrada en la cual el elemento de cobertura aloja sustancialmente el elemento portador como para proteger el elemento portador y la muestra del entorno exterior, y una posición abierta en la cual el elemento portador se desplaza fuera del elemento de cobertura como para dejar la muestra a la vista. El elemento portador y el elemento de cobertura se aseguran entre sí mediante un mecanismo de bloqueo que incluye al menos una ranura dispuesta sobre una pieza seleccionada de entre el grupo compuesto por el elemento portador y el elemento de cobertura, y una pieza de bloqueo saliente dispuesta sobre la otra pieza del grupo compuesto por el elemento portador y el elemento de cobertura y construida para que se pueda mover en la ranura. El documento US4797261 (A) describe un soporte de criotransferencia para microscopio electrónico capaz de transferir varias muestras de forma simultánea. Un crio-escudo protege las muestras contra el calentamiento o la congelación que pueda producirse durante la transferencia desde el puesto de carga de muestras hasta el microscopio. RESUMEN DE LA INVENCIÓN PROBLEMA QUE SE HA DE RESOLVER CON LA INVENCIÓN
La placa de crioconservación de trozos de tejido y el instrumento de crioconservación descrito en los documentos de patente 3 y 4 respectivamente son eficaces para congelar el trozo de tejido mediante vitrificación. Tanto la placa de crioconservación de trozos de tejido como el instrumento de crioconservación se basan en la premisa de que el trozo de tejido recogido se pone directamente en contacto con el nitrógeno líquido, que es el medio refrigerante, y que el recipiente que aloja el trozo de tejido recogido se pone directamente en contacto con el medio refrigerante (nitrógeno líquido) durante la crioconservación del trozo de tejido. Pero un contacto prolongado del recipiente y el medio refrigerante (nitrógeno líquido) puede ocasionar el deterioro del recipiente y la penetración del medio refrigerante en el mismo. El contacto directo del trozo de tejido recogido con el medio refrigerante es eficaz para congelar el trozo de tejido mediante vitrificación. Pero si es posible, se debería evitar el contacto directo de dicha sustancia con células. En la placa de crioconservación de trozos de tejido y el instrumento de crioconservación descritos en los documentos de patente 3 y 4 respectivamente, el recipiente que aloja el tejido vivo y la parte para colocar trozos de tejido se sellan con el nitrógeno líquido que los une. Una vez que el tejido vivo ha sido sometido a crioconservación, el recipiente se abre en un ambiente a temperatura normal de uso de dicho tejido vivo. Cuando el recipiente se abre bruscamente, debido a una presión interna provocada por el nitrógeno líquido vaporizado dentro del recipiente, existe la posibilidad de que el trozo de tejido vivo colocado en la parte para colocar trozos de tejido se esparza. Por lo tanto, es preciso llevar a cabo la operación de apertura con cuidado.
Un objeto de la presente invención es proporcionar un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido y un procedimiento para congelar trozos de tejido recogidos que permitan llevar a cabo una operación de congelación sin poner el trozo de tejido vivo recogido en contacto con un medio refrigerante y que permitan que el trozo de tejido vivo recogido se congele rápidamente, impidiendo que el trozo de tejido vivo entre en contacto con el medio refrigerante cuando se someta a crioconservación durante un tiempo prolongado, e impidiendo que el trozo de tejido vivo se esparza cuando se lleve a cabo una operación de sacar el trozo de tejido vivo sometido a crioconservación de una bolsa de alojamiento.
MEDIOS PARA RESOLVER LOS PROBLEMAS
Los medios para lograr el objeto descrito anteriormente son como se describen a continuación.
Un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido para someter a crioconservación un trozo de tejido vivo recogido en un estado sellado, comprendiendo dicho instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido un soporte de trozos de tejido capaz de sujetar dicho trozo de tejido vivo y una bolsa de alojamiento hecha de resina capaz de alojar dicho soporte de trozos de tejido en la misma, que se puede termosellar después de alojar dicho soporte de trozos de tejido en la misma, y resistente al nitrógeno líquido, donde dicho soporte de trozos de tejido comprende una parte de cuerpo con forma de placa compuesta por una pieza inferior termoconductora con forma de placa y una pieza superior con forma de placa fijada a una superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa y una lámina de cobertura sujeta por dicha parte de cuerpo con forma de placa; dicho soporte de trozos de tejido tiene una parte para colocar trozos de tejido formada por una parte recortada provista sobre dicha pieza superior con forma de placa y una parte, de dicha superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa, que está dispuesta en dicha parte recortada; y dicha lámina de cobertura es capaz de cubrir por completo dicha parte para colocar trozos de tejido y una porción periférica de dicha parte para colocar trozos de tejido.
Los medios para lograr el objeto descrito anteriormente son como se describen a continuación.
Un procedimiento para congelar trozos de tejido recogido que se ha de llevar a cabo utilizando el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido descrito anteriormente, comprendiendo dicho procedimiento para congelar trozos de tejido recogido una etapa de sumergir trozos de tejido en la que un trozo de tejido recogido se sumerge en una disolución de vitrificación; una etapa de colocar trozos de tejido en la que dicho trozo de tejido sacado de dicha disolución de vitrificación se coloca sobre dicha parte para colocar trozos de tejido de dicho soporte de trozos de tejido; una etapa de cubrir trozos de tejido en la que dicho trozo de tejido colocado sobre dicha parte para colocar trozos de tejido se cubre con dicha lámina de cobertura y dicha lámina de cobertura se pone en contacto estrecho con dicho trozo de tejido; una etapa de alojar y sellar en la que dicho soporte de trozos de tejido que sujeta dicho trozo de tejido se aloja dentro de dicha bolsa de alojamiento sin poner dicho soporte de trozos de tejido en contacto con un medio refrigerante y una porción abierta de dicha bolsa de alojamiento se termosella; y una etapa de congelar en la que dicho trozo de tejido se congela alojando dicho soporte de trozos de tejido dentro de dicha bolsa de alojamiento y dicho instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido sellado se pone en contacto con dicho medio refrigerante.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 es una vista frontal de una realización de un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención.
La figura 2 es una vista frontal de un soporte de trozos de tejido para uso
en el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido representado en la figura 1.
La figura 3 es una vista desde abajo ampliada del soporte de trozos de tejido representado en la figura 2.
La figura 4 es una vista frontal de un estado en el que una lámina de cobertura del soporte de trozos de tejido representado en la figura 2 está desplegada.
La figura 5 es una vista en corte tomada a lo largo de una línea A-A de la figura 2.
La figura 6 es una vista en corte tomada a lo largo de una línea B-B de la figura 4.
La figura 7 es una vista aclaratoria para explicar las piezas que componen el soporte de trozos de tejido representado en la figura 2.
La figura 8 es una vista aclaratoria para explicar una construcción interna del soporte de trozos de tejido representado en la figura 2.
La figura 9 es una vista aclaratoria para explicar el funcionamiento del instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención.
La figura 10 es una vista aclaratoria para explicar el funcionamiento del instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención.
La figura 11 es una vista aclaratoria para explicar el funcionamiento del instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención.
La figura 12 es una vista aclaratoria para explicar el funcionamiento del instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención.
La figura 13 es una vista frontal de un estado desplegado de una lámina de cobertura de un soporte de trozos de tejido para uso en un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de otra realización de la presente invención.
La figura 14 es una vista frontal de incluso otra realización de un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención.
La figura 15 es una vista frontal de un soporte de trozos de tejido para uso en un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de incluso otra realización de la presente invención.
La figura 16 es una vista desde abajo ampliada del soporte de trozos de tejido representado en la figura 15. La figura 17 es una vista en corte tomada a lo largo de una línea C-C de la figura 15.
MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN
El instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención y el procedimiento para congelar trozos de tejido de dicha invención se describen a continuación mediante las realizaciones representadas en los dibujos.
Un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido 10 de la presente invención se utiliza para someter a crioconservación un trozo de tejido vivo recogido en un estado sellado. El instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido 10 está compuesto por un soporte de trozos de tejido 1 capaz de sujetar el trozo de tejido vivo y una bolsa de alojamiento hecha de resina 11 que es capaz de alojar el soporte de trozos de tejido 1 en ella, que se puede termosellar después de alojar el soporte de trozos de tejido en la misma, y que es resistente al nitrógeno líquido. El soporte de trozos de tejido 1 está compuesto por una parte de cuerpo termoconductora con forma de placa y una lámina de cobertura 4 sujeta por la parte de cuerpo con forma de placa. El soporte de trozos de tejido 1 tiene una parte para colocar trozos de tejido 5 provista sobre la parte de cuerpo con forma de placa. La lámina de cobertura 4 es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y una porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido.
El instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido 10 de la presente invención está compuesto por el soporte de trozos de tejido 1 capaz de sujetar el tejido vivo y la bolsa de alojamiento hecha de resina 11 que es capaz de alojar el soporte de trozos de tejido 1 en ella, que se puede termosellar después de alojar el soporte de trozos de tejido, y que es resistente al nitrógeno líquido. El soporte de trozos de tejido 1 está compuesto por la parte de cuerpo con forma de placa que incluye una pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y una pieza superior con forma de placa 3 fijada a una superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la lámina de cobertura 4 sujeta por la parte de cuerpo con forma de placa. La parte para colocar trozos de tejido 5 del soporte de trozos de tejido 1 está formada por una parte recortada 32 provista sobre la pieza superior con forma de placa 3 y una parte, de la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2, que está dispuesta en la parte recortada 32. La lámina de cobertura 4 es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido 5.
Como se muestra en la figura 1, el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido 1 está compuesto por el soporte de trozos de tejido 1 y la bolsa de alojamiento hecha de resina 11 para alojar el soporte de trozos de tejido 1 en la misma.
Como se muestra en las figuras 2 a la 10, el soporte de trozos de tejido 1 está compuesto por la parte de cuerpo con forma de placa y la lámina de cobertura 4 sujeta por la parte de cuerpo con forma de placa.
La parte de cuerpo con forma de placa está compuesta por la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3 fijada a la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2.
Como se muestra en las figuras 2 a la 10 (se muestra mejor en la figura 7), la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 está hecha de una placa metálica aproximadamente rectangular. La pieza inferior termoconductora con forma de placa de esta realización tiene una porción de extremo 21 redondeada en ambas esquinas de la misma y una parte aproximadamente rectangular 20 que se extiende desde la porción de extremo 21 de la misma hasta la otra porción de extremo de la misma. La porción de extremo 21 de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 de esta realización es aproximadamente semicircular. Al tener la porción de extremo de la pieza inferior termoconductora con forma de placa la configuración descrita anteriormente, el soporte de trozos de tejido 1 se puede introducir en la bolsa de alojamiento 11 con facilidad.
Como pieza inferior termoconductora con forma de placa 2, es preferible usar una pieza con forma de placa de metal, una lámina de grafito y elementos similares con una conductividad térmica elevada. Como metales para formar la pieza con forma de placa de metal, se prefieren metales seleccionados entre cobre, aleaciones de cobre, aluminio, aleaciones de aluminio, oro, aleaciones de oro, plata, aleaciones de plata, aleaciones de acero inoxidable, titanio y aleaciones de titanio. El grosor de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 se fija convenientemente entre 0,1 y 3 mm y, en especial, convenientemente entre 0,5 y 2 mm. El ancho de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 se fija convenientemente entre 8 y 25 mm y, en especial, convenientemente entre 10 y 20 mm. La longitud total de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 se fija convenientemente entre 30 y 50 mm y, en especial, convenientemente entre 35 y 45 mm. La longitud de la parte rectangular de la pieza inferior termoconductora con forma de placa se fija convenientemente entre 25 y 35 mm. La longitud de la porción de extremo de la pieza inferior termoconductora con forma de placa redondeada en ambas esquinas de la misma se fija convenientemente entre 5 y 15 mm.
Como se muestra en las figuras 2 a la 10 (en particular, en la figura 7), la pieza superior con forma de placa 3 está dispuesta sobre la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. De manera más específica, la pieza superior con forma de placa 3 se coloca sobre una superficie superior de la parte rectangular 20 de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y se fija a la misma. La configuración de la pieza superior con forma de placa 3 es casi la misma que la de la parte rectangular 21 de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2.
La parte recortada 32 de la pieza superior con forma de placa 3 se extiende desde un lado de extremo hacia el otro lado de extremo de la misma. La pieza superior con forma de placa 3 de esta realización se dispone de forma tal que un extremo de la misma con la parte recortada 32 esté situado cerca de un extremo de la parte aproximadamente rectangular de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. En esta realización, la parte recortada 32 se extiende con una longitud predeterminada desde un extremo (cerca de un extremo de la parte rectangular 20 de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2) de la pieza superior con forma de placa 3 hacia el otro lado de extremo de la misma. Por lo tanto, como se muestra en la figura 7, la pieza superior con forma de placa 3 tiene dos porciones extendidas 31a, 31b que sobresalen de un extremo de una parte de placa plana 30.
La parte recortada 32 está abierta en un extremo, mientras que otros bordes de la parte recortada están rodeados por las dos porciones extendidas 31a, 31b y la parte de placa plana 30. El tamaño de la parte recortada 32 se fija convenientemente entre 30 y 250 mm2, más convenientemente entre 40 y 230 mm2, y más convenientemente aún entre 50 y 200 mm2. El ancho de la parte recortada 32 se fija convenientemente entre 6 y 20 mm y, en especial, convenientemente entre 8 y 17 mm. Si bien la parte recortada 32 es rectangular en esta realización, la configuración de la misma no está restringida a la configuración rectangular. La parte recortada puede ser circular, semicircular, poligonal o semipoligonal. La longitud total de la pieza superior con forma de placa 3 se fija convenientemente entre 15 y 45 mm y, en especial, convenientemente entre 20 y 40 mm. Es preferible fijar el ancho de la pieza superior con forma de placa 3 con dimensiones iguales o levemente inferiores a las de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. De manera más específica, el ancho de la pieza superior con forma de placa 3 se fija convenientemente entre 8 y 25 mm y, en especial, convenientemente entre 10 y 20 mm.
Si bien es preferible utilizar una pieza con forma de placa de metal, una lámina de grafito y elementos similares con una conductividad térmica elevada como pieza superior con forma de placa 3, también se puede utilizar una placa hecha de resina. Como metales para formar la pieza con forma de placa de metal, se prefieren metales seleccionados entre cobre, aleaciones de cobre, aluminio, aleaciones de aluminio, oro, aleaciones de oro, plata, aleaciones de plata, aleaciones de acero inoxidable, titanio y aleaciones de titanio.
La parte para colocar trozos de tejido 5 del soporte de trozos de tejido 1 está formada por la parte recortada 32 provista sobre la pieza superior con forma de placa 3 y una parte, de la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2, que está dispuesta en la parte recortada 32. El tamaño de la parte para colocar trozos de tejido 5 se fija convenientemente entre 30 y 250 mm2, más convenientemente entre 40 y 230 mm2, y más convenientemente aún entre 50 y 200 mm2. Un trozo de tejido con un tamaño de 5 * 5 mm a 10 * 10 mm se coloca sobre la parte para colocar trozos de tejido 5.
Como se muestra en las figuras 2 a la 10 (en particular, en la figura 7), la lámina de cobertura 4 es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido 5. En esta realización, una parte de lado de extremo de la lámina de cobertura 4 está formada como una parte que se puede cubrir 40 capaz de cubrir la parte para colocar trozos de tejido. La otra parte de lado de extremo 42 de la lámina de cobertura está intercalada entre la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3. La lámina de cobertura 4 se puede plegar en un extremo de la pieza superior con forma de placa 3. Al plegar la lámina de cobertura 4, la lámina de cobertura 4 es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido 5. La lámina de cobertura 4 de esta realización se extiende más allá de la parte para colocar trozos de tejido 5 y es capaz de cubrir una parte de una superficie superior de la pieza superior con forma de placa entre un extremo de la pieza superior con forma de placa y la parte para colocar trozos de tejido 5 o casi la totalidad de las superficies superiores de la pieza superior con forma de placa entre un extremo de la pieza superior con forma de placa y la parte para colocar trozos de tejido 5. En el soporte de trozos de tejido 1 de esta realización, como se muestra en la figura 2, cuando la pieza superior con forma de placa 3 está cubierta con la lámina de cobertura 4, la otra porción de extremo 33 de la pieza superior con forma de placa 3 está expuesta al exterior.
Es preferible que la lámina de cobertura 4 sea transparente, flexible, que se adhiera al trozo de tejido, y que tenga cierta solidez. Preferentemente, como material para formar la lámina de cobertura 4, se pueden utilizar materiales que sean flexibles cuando se usan para formar láminas. Entre los ejemplos de materiales para la lámina de cobertura 4 se incluyen poliolefina (por ejemplo, polietileno, polipropileno, copolímero de etileno-propileno, copolímero de acetato de etilenvinilo), policloruro de vinilo blando (por ejemplo, policloruro de vinilo, copolímero de cloruro de vinilo-acetato de vinilo), poliéster (por ejemplo, tereftalato de polietileno, tereftalato de polibutileno), y poliamida. El grosor de la lámina de cobertura 4 se fija convenientemente entre 0,5 y 3 mm y más convenientemente entre 0,7 y 2 mm.
Como se muestra en las figuras 7 y 8, la parte que se puede cubrir 40 de la lámina de cobertura 4 de esta realización se extiende con una longitud predeterminada en un lado de extremo de la misma, mientras que la otra parte de lado de extremo 42 de la lámina de cobertura dispuesta en el otro lado de la lámina de cobertura respecto de la porción que se pliega 41 está intercalada entre la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3. La otra parte de lado de extremo (la parte que se ha de intercalar entre la pieza inferior termoconductora con forma de placa y la pieza superior con forma de placa) 42 tiene una porción abierta 44. Por lo tanto, la otra parte de lado de extremo (la parte que se ha de intercalar entre la pieza inferior termoconductora con forma de placa y la pieza superior con forma de placa) tiene otra porción de extremo 42a y dos porciones de conexión 43a, 43b que se extienden hasta un lado de extremo de la lámina de cobertura 4 desde la otra porción de extremo 42a.
La otra parte de lado de extremo 42 (dicho de otro modo, la otra parte de lado de extremo dispuesta al otro lado de la lámina de cobertura respecto de la porción que se pliega 41) está intercalada entre la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3 y fijada a las mismas. La lámina de cobertura 4 se puede plegar en un extremo de la pieza superior con forma de placa 3, dicho de otro modo, en la porción que se pliega 41. La pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3 están en contacto directo entre sí en la porción de las mismas donde la lámina de cobertura 4 no está intercalada entre ellas y fijada a ellas. La lámina de cobertura 4 de esta realización tiene una porción cóncava en un lado exterior de cada una de las porciones de conexión 43a, 43b de la misma.
Como se muestra en la figura 8, la lámina de cobertura 4 está dispuesta de tal forma que su otra parte de lado de extremo 42 se sitúe sobre una porción de extremo de la parte rectangular de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. De este modo, la porción abierta 44 se sitúa sobre la porción de extremo de la parte rectangular de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. Como se muestra en las figuras 3 a 6, la porción de extremo de la pieza superior con forma de placa 3 está dispuesta de forma fija sobre la otra parte de lado de extremo 42 de la lámina de cobertura 4 de tal modo que la parte recortada 32 de la pieza superior con forma de placa se ubique sobre la porción abierta 44 de la lámina de cobertura 4. Por lo tanto, en el soporte de trozos de tejido 1 de esta realización, en la parte para colocar trozos de tejido 5, la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 está expuesta al exterior. En consecuencia, el trozo de tejido colocado en la parte para colocar trozos de tejido 5 está en contacto con la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2, lo que permite que el trozo de tejido se enfríe de manera satisfactoria.
De manera más específica, la parte para colocar trozos de tejido 5 está formada por la superficie superior de una parte, de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2, que está rodeada por el borde interior de la parte recortada de la pieza superior con forma de placa 3. Como se muestra en las figuras 3 a 5, la parte para colocar trozos de tejido está formada como una porción cóncava que tiene una profundidad igual al grosor total de la pieza superior con forma de placa 3 y de la lámina de cobertura 4. Si bien se prefiere que la parte para colocar trozos de tejido tenga la construcción antes mencionada, es posible que la lámina de cobertura 4 no tenga la porción abierta y que la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 esté cubierta con la lámina de cobertura 4 en la parte para colocar trozos de tejido 5.
Al plegar la lámina de cobertura 4, la lámina de cobertura es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la parte periférica de la misma y, además, la totalidad o una parte de la otra porción de extremo de la pieza superior con forma de placa 3. En esta realización, como se muestra en la figura 2, cuando la lámina de cobertura 4 se pliega (dicho de otro modo, cuando la parte para colocar trozos de tejido se cubre con la lámina de cobertura), un extremo de la lámina de cobertura no llega hasta el otro extremo de la pieza superior con forma de placa 3. Por lo tanto, cuando la parte para colocar trozos de tejido se cubre con la lámina de cobertura, la otra porción de extremo 33 de la pieza superior con forma de placa 3 está expuesta al exterior. Esta forma permite que la lámina de cobertura 4 se despegue fácilmente de la pieza superior con forma de placa.
Como un soporte de trozos de tejido 1a de una realización representada en la figura 13, el soporte de trozos de tejido de la presente invención también se puede construir de forma tal que una pieza superior con forma de placa 3a tenga una parte recortada 32a y una parte para colocar trozos de tejido 5a cuyas porciones periféricas estén rodeadas por la pieza superior con forma de placa 3a. La periferia total de la parte recortada 32a de esta realización está rodeada por la parte de placa plana 30, las porciones extendidas 31a, 31b, y una porción de conexión de porciones extendidas 31c. En consecuencia, la parte para colocar trozos de tejido 5a completa está formada como una parte cóncava. La construcción de las porciones extendidas 31a, 31b es similar a la del soporte de trozos de tejido 1 descrito anteriormente. Es preferible fijar el ancho de la porción de conexión de porciones extendidas 31c con dimensiones iguales o inferiores a las de las porciones extendidas 31a, 31b.
El soporte de trozos de tejido de la presente invención se puede formar como un soporte de trozos de tejido 1b de una realización representada en las figuras 15 a 17.
Como en el soporte de trozos de tejido de la realización descrita anteriormente, el soporte de trozos de tejido 1b utilizado en el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de esta realización se puede alojar dentro de la bolsa de alojamiento hecha de resina 11 y está compuesto por la parte de cuerpo termoconductora con forma de placa y la lámina de cobertura 4a sujeta por la parte de cuerpo con forma de placa. La parte para colocar trozos de tejido 5 del soporte de trozos de tejido 1b se provee sobre la parte de cuerpo con forma de placa. La lámina de cobertura 4a es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido.
Como se muestra en las figuras 15 a la 17, el soporte de trozos de tejido 1b está compuesto por la parte de cuerpo con forma de placa y la lámina de cobertura 4a sujeta por la parte de cuerpo con forma de placa. La parte de cuerpo con forma de placa está compuesta por la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3 fijada a la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. La pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3 son las mismas que las del soporte de trozos de tejido 1 descrito anteriormente. La pieza inferior termoconductora con forma de placa 2 y la pieza superior con forma de placa 3 se pueden formar en una única pieza.
La parte recortada 32 de la pieza superior con forma de placa 3 se extiende desde un lado de extremo hacia el otro lado de extremo de la misma. La pieza superior con forma de placa 3 de esta realización se dispone de forma tal que el extremo de la misma con la parte recortada 32 esté situado cerca del extremo de la parte aproximadamente rectangular de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. En esta realización, la parte recortada 32 se extiende con una longitud predeterminada desde un extremo (cerca de un extremo de la parte rectangular 20 de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2) de la pieza superior con forma de placa 3 hacia el otro lado de extremo de la misma. Por lo tanto, como se muestra en la figura 7, las dos porciones extendidas 31a, 31b de la pieza superior con forma de placa 3 sobresalen del extremo de la parte de placa plana 30.
Como en el soporte de trozos de tejido descrito anteriormente, la parte para colocar trozos de tejido 5 del soporte de trozos de tejido 1b está formada sobre la superficie superior de la parte de cuerpo con forma de placa. Como en el soporte de trozos de tejido 1 descrito anteriormente, la parte para colocar trozos de tejido 5 está formada por la parte recortada 32 provista sobre la pieza superior con forma de placa 3 y una parte, de la superficie superior de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2, que está dispuesta en la parte recortada 32. El tamaño de la parte para colocar trozos de tejido 5 es como se describe anteriormente.
Como se muestra en la figura 15, la lámina de cobertura 4a es capaz de cubrir por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido 5. En la lámina de cobertura 4a de esta realización, como se muestra en las figuras 15 y 17, una parte de lado de extremo de la lámina de cobertura 4a está formada como la parte que se puede cubrir 40 capaz de cubrir la parte para colocar trozos de tejido 5, mientras que la otra parte de lado de extremo 45 de la misma está fijada a la superficie superior de la porción de extremo de la parte de cuerpo con forma de placa. De manera más específica, la otra parte de lado de extremo de la lámina de cobertura está fijada a la superficie superior de la porción de extremo de la pieza inferior termoconductora con forma de placa 2. Por lo tanto, normalmente, la lámina de cobertura 4a cubre por completo la parte para colocar trozos de tejido 5 y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido 5. Al plegar la lámina de cobertura 4a, la parte para colocar trozos de tejido 5 entera y la porción periférica de la parte para colocar trozos de tejido 5 pueden quedar expuestas al exterior.
La lámina de cobertura 4a de esta realización se extiende más allá de la parte para colocar trozos de tejido 5 y es capaz de cubrir una parte de una superficie superior de la pieza superior con forma de placa entre un extremo de la pieza superior con forma de placa y la parte para colocar trozos de tejido 5 o casi la totalidad de las superficies superiores de la pieza superior con forma de placa entre un extremo de la pieza superior con forma de placa y la parte para colocar trozos de tejido 5. Como en el caso del soporte de trozos de tejido descrito anteriormente, en el soporte de trozos de tejido 1b de esta realización, como se muestra en la figura 15, cuando la pieza superior con forma de placa 3 está cubierta con la lámina de cobertura 4a, la otra porción de extremo 33 de la pieza superior con forma de placa 3 está expuesta al exterior. Preferentemente, la lámina de cobertura descrita anteriormente se puede utilizar como la lámina de cobertura 4a.
La bolsa de alojamiento hecha de resina 11 para alojar el soporte de trozos de tejido 1 se describe a continuación. La bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 tiene una forma capaz de alojar el soporte de trozos de tejido 1 dentro de la misma. La porción periférica de la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 está parcialmente abierta para que el soporte de trozos de tejido se pueda introducir dentro de ella.
De manera más específica, la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 se forma uniendo dos películas rectangulares transparentes de resina y termosellando entre sí tres lados 16 de ambas películas. Se forma una porción abierta con dos lados de ambas películas sin termosellar. La porción abierta se puede termosellar cuando la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 tiene el soporte de trozos de tejido 1 alojado dentro. La porción abierta de la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 forma una porción de sellado 17 como se muestra en la figura 12.
Como en una bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 a para uso en un instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido 10a de una realización representada en la figura 14, la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina puede tener una porción de extremo 18 redondeada en ambas esquinas de la misma. En la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina de esta realización, ambas esquinas de la porción de extremo, así como la porción de extremo y la porción termosellada en la porción de extremo son redondeadas. En un caso en el cual se utiliza el soporte de trozos de tejido 1 redondeado en su porción de extremo, es aconsejable introducir el soporte de trozos de tejido en la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina que tiene la forma descrita anteriormente desde la porción de extremo redondeada de la misma. De este modo, el grado de desprendimiento de la lámina de cobertura es bajo al introducir el soporte de trozos de tejido 1 en la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 a. Asimismo, es posible disminuir el grado de movimiento del soporte de trozos de tejido 1 alojado dentro de la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11a.
La bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 está hecha de resina resistente al nitrógeno líquido y es transparente tal y como se muestra en las figuras 1, 11 y 12. Es preferible formar la bolsa de alojamiento transparente hecha de resina 11 uniendo dos películas de resina, teniendo cada una de ellas una capa exterior (por ejemplo, de polietileno de alta densidad, tereftalato de polietileno) resistente al nitrógeno líquido y una capa interior termosellable (polietileno de temperatura de fusión baja), estando las capas interiores termosellables enfrentadas entre sí, y termosellando los bordes periféricos de las capas interiores entre sí en forma de U. Es preferible que la capa exterior se forme con una película orientada biaxialmente. Por ejemplo, es preferible usar una película de poliéster orientada biaxialmente (película de tereftalato de polietileno orientada biaxialmente), una película de polipropileno orientada biaxialmente, una película de poliestireno orientada biaxialmente, una película de poliamida orientada biaxialmente, y una película de polietileno de alta densidad orientada biaxialmente. En especial, se prefiere que estas películas sean transparentes.
En particular, el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido de la presente invención es eficaz como instrumento de crioconservación de trozos de tejido ovárico. Asimismo, el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido se puede utilizar de forma eficaz como instrumento de crioconservación de trozos de tejido hepático. El procedimiento para congelar trozos de tejido recogido (procedimiento para congelar trozos de tejido recogido mediante vitrificación) que se ha de llevar a cabo utilizando el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido 10 se describe a continuación con referencia a las figuras 9 a 12.
El procedimiento para congelar trozos de tejido recogido de la presente invención se lleva a cabo utilizando el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido descrito anteriormente. El procedimiento para congelar trozos de tejido recogido incluye una etapa de sumergir trozos de tejido en la que un trozo de tejido recogido se sumerge en una disolución de vitrificación; una etapa de colocar trozos de tejido en la que el trozo de tejido sacado de la disolución de vitrificación se coloca sobre la parte para colocar trozos de tejido del soporte de trozos de tejido; una etapa de cubrir trozos de tejido en la que el trozo de tejido colocado sobre la parte para colocar trozos de tejido se cubre con la lámina de cobertura y la lámina de cobertura se pone en contacto estrecho con el trozo de tejido; una etapa de alojar y sellar en la que el soporte de trozos de tejido que sujeta el trozo de tejido se aloja dentro de la bolsa de alojamiento sin poner el soporte de trozos de tejido en contacto con un medio refrigerante y la porción abierta de la bolsa de alojamiento se termosella; y una etapa de congelar en la que el trozo de tejido se congela alojando el soporte de trozos de tejido dentro de la bolsa de alojamiento y el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido sellado se pone en contacto con el medio refrigerante.
En el procedimiento para congelar trozos de tejido recogido de la presente invención, en una etapa preparatoria inicial que no forma parte de la presente invención, se lleva a cabo una etapa de recoger trozos de tejido en la que un trozo de tejido 7 se recoge de un tejido vivo que se ha de someter a crioconservación.
El trozo de tejido se puede recoger del tejido vivo que se ha de someter a crioconservación (por ejemplo, de un órgano vivo tal como un ovario extraído de un cuerpo vivo) utilizando un instrumento de corte de tejido e indicador de posición como se describe en la publicación de solicitud de patente japonesa abierta a consulta por el público N.° 2008-222640. El trozo de tejido 7 se puede recoger utilizando un bisturí normal o elemento similar. El trozo de tejido 7 se recoge de forma tal que, por su tamaño, se pueda colocar sobre una superficie de la parte para colocar trozos de tejido 5 del soporte de trozos de tejido 1.
A partir de ese momento se lleva a cabo la etapa de sumergir el trozo de tejido en una disolución en la que el trozo de tejido 7 se sumerge en la disolución de vitrificación.
La etapa de sumergir el trozo de tejido en disolución de vitrificación se lleva a cabo sumergiendo el trozo de tejido recogido en la disolución de vitrificación. Es posible usar disoluciones de vitrificación comúnmente utilizadas. De manera más específica, es preferible usar las disoluciones de vitrificación que contienen una clase o no menos de dos clases de un crioprotector permeable a membranas seleccionado de entre glicerol, propilenglicol, dimetilsulfóxido (DMSO), etilenglicol, y butanodiol y una clase o no menos de dos clases de un crioprotector impermeable a membranas seleccionado de entre sacarosa, trehalosa, percoll, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, suero bovino, albúmina y ficol. Es preferible llevar a cabo un tratamiento en el cual el trozo de tejido recogido se sumerge en un líquido de equilibrio antes de sumergir dicho trozo de tejido recogido en la disolución de vitrificación. Como líquido de equilibrio, se prefiere una disolución de baja concentración del crioprotector permeable a membranas. Como crioprotector permeable a membranas, es posible usar las sustancias descritas anteriormente.
Una vez finalizada la etapa de sumergir el trozo de tejido en la disolución de vitrificación, se lleva a cabo la etapa de colocar trozos de tejido en la que el trozo de tejido sacado de la disolución de vitrificación se coloca sobre la parte para colocar trozos de tejido 5 del soporte de trozos de tejido 1.
En esta etapa, como se muestra en la figura 9, después de que la lámina de cobertura 4 del soporte de trozos de tejido 1 se despliega para que la parte para colocar trozos de tejido 5 quede en un estado expuesto, el trozo de tejido 7 sacado de la disolución de vitrificación se coloca sobre la parte para colocar trozos de tejido 5 sin poner el trozo de tejido en contacto con el medio refrigerante. En la operación de colocar el trozo de tejido sobre la parte para colocar trozos de tejido 5, el trozo de tejido no se somete a crioconservación mediante vitrificación.
A partir de ese momento, como se muestra en la figura 10, se lleva a cabo la etapa de cubrir trozos de tejido en la que el trozo de tejido 7 colocado sobre la parte para colocar trozos de tejido 5 se cubre con la lámina de cobertura 4 y la lámina de cobertura 4 se pone en contacto estrecho con el trozo de tejido. Esta etapa se puede llevar a cabo plegando la lámina de cobertura 4 y poniendo la superficie interior de la parte que se puede cubrir 40 de la lámina de cobertura 4 plegada en contacto estrecho con el trozo de tejido 7. Al llevar a cabo esta etapa, la superficie superior del trozo de tejido 7 se cubre con la lámina de cobertura, quedando el trozo de tejido completamente encapsulado por el soporte de trozos de tejido 1. En este estado, el soporte de trozos de tejido 1 sujeta el trozo de tejido 7.
A continuación, se lleva a cabo la etapa de sellar la bolsa de alojamiento en la que el soporte de trozos de tejido 1 que sujeta el trozo de tejido recogido se aloja dentro de la bolsa de alojamiento hecha de resina 11 y la porción abierta de la misma se termosella
En esta etapa, como se muestra en la figura 11, el soporte de trozos de tejido 1 que sujeta el trozo de tejido 7 se aloja dentro de la bolsa de alojamiento hecha de resina 11 introduciendo el soporte de trozos de tejido dentro de la bolsa de alojamiento hecha de resina desde su lado de extremo redondeado en ambas esquinas del mismo. A partir de ese momento, como se muestra en la figura 12, al sellar la porción abierta de la bolsa de alojamiento hecha de resina 11 con un sellador de calor, la porción abierta se forma como la porción sellada 17. De este modo, el soporte de trozos de tejido 1 queda encerrado dentro de la bolsa de alojamiento hecha de resina 11. El instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido sellado 10 se prepara de esta forma.
A partir de este momento, se lleva a cabo la etapa de congelar el trozo de tejido poniendo el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido sellado 10 en contacto con el medio refrigerante.
Esta etapa se lleva a cabo introduciendo el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido sellado 10 en un recipiente cargado con el medio refrigerante (en general, nitrógeno líquido). El contacto entre el instrumento de crioconservación de tejido vivo recogido y el medio refrigerante hace que la bolsa de alojamiento hecha de resina 11, el soporte de trozos de tejido 1 y el trozo de tejido 7 se enfríen. Puesto que el trozo de tejido 7 contiene la disolución de vitrificación (de manera más específica, en cierta medida, el fluido intracelular es reemplazado por la disolución de vitrificación), el trozo de tejido no se cristaliza, sino que se vitrifica cuando el trozo de tejido se congela. El trozo de tejido se conserva en este estado hasta su uso.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) para someter a crioconservación un trozo de tejido vivo recogido en un estado sellado,
comprendiendo dicho aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) un soporte de trozos de tejido (1) capaz de sujetar dicho trozo de tejido vivo y una bolsa de alojamiento hecha de resina (11) que es capaz de alojar dicho soporte de trozos de tejido (1) en ella, que se puede termosellar después de alojar dicho soporte de trozos de tejido (1) en la misma, y que es resistente al nitrógeno líquido,
donde dicho soporte de trozos de tejido (1) comprende una parte de cuerpo con forma de placa compuesta por una pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) y una pieza superior con forma de placa (3) fijada a una superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) y una lámina de cobertura (4) sujeta por dicha parte de cuerpo con forma de placa; dicho soporte de trozos de tejido (1) tiene una parte para colocar trozos de tejido (5) formada por una parte recortada (32) provista sobre dicha pieza superior con forma de placa (3) y una parte, de dicha superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2), que está dispuesta en dicha parte recortada(32); y
dicha lámina de cobertura (4) es capaz de cubrir por completo dicha parte para colocar trozos de tejido (5) y una porción periférica de dicha parte para colocar trozos de tejido(5).
2. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según la reivindicación 1, donde dicha lámina de cobertura (4) es transparente y se adhiere a dicho trozo de tejido.
3. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según la reivindicación 1 o 2, donde una parte de lado de extremo de dicha lámina de cobertura (4) está formada como una parte que se puede cubrir (40) capaz de cubrir dicha parte para colocar trozos de tejido (5); otra parte de lado de extremo de dicha lámina de cobertura (4) está intercalada entre dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) y dicha pieza superior con forma de placa (3); y dicha lámina de cobertura (4) se puede plegar en un extremo de dicha pieza superior con forma de placa (3).
4. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicha lámina de cobertura (4) se extiende más allá de dicha parte para colocar trozos de tejido (5) y es capaz de cubrir una parte de una superficie superior de dicha pieza superior con forma de placa (3) y la superficie superior de dicha parte para colocar trozos de tejido (5) o casi la totalidad de dichas superficies superiores de las mismas entre un extremo de dicha pieza superior con forma de placa (3) y dicha parte para colocar trozos de tejido (5).
5. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) tiene una porción de extremo (21) redondeada en ambas esquinas de la misma y una parte aproximadamente rectangular (20) que se extiende desde dicha porción de extremo (21) hasta la otra porción de extremo de la misma.
6. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde dicha parte recortada (32) de dicha pieza superior con forma de placa (3) se extiende desde un lado de extremo de la misma hacia el otro lado de extremo de la misma.
7. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según la reivindicación 6, donde dicha pieza superior con forma de placa (3) se dispone de forma tal que dicho extremo de la misma con la parte recortada (32) esté situado cerca de un extremo de dicha parte aproximadamente rectangular (20) de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2).
8. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde en dicha parte para colocar trozos de tejido (5), dicha superficie superior de dicha pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) está expuesta al exterior.
9. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 3 o 4, donde cuando dicha pieza superior con forma de placa (3) está cubierta con dicha lámina de cobertura (4), la otra porción de extremo (33) de dicha pieza superior con forma de placa (3) está expuesta al exterior.
10. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde la pieza inferior termoconductora con forma de placa (2) y la pieza superior con forma de placa (3) están formadas en una única pieza.
11. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, donde dicha bolsa de alojamiento hecha de resina (11) tiene una capa exterior hecha de resina resistente al nitrógeno líquido y una capa interior termosellable.
12. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que es un aparato de crioconservación de trozos de tejido ovárico o un aparato de crioconservación de trozos de tejido hepático.
13. Un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, donde dicha lámina de cobertura (4) es transparente y se adhiere a dicho trozo de tejido.
14. Un procedimiento para congelar trozos de tejido recogido que se ha de llevar a cabo utilizando un aparato de crioconservación de tejido vivo recogido (10) según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, comprendiendo dicho procedimiento para congelar trozos de tejido recogido una etapa de sumergir trozos de tejido en la que un trozo de tejido recogido se sumerge en una disolución de vitrificación; una etapa de colocar trozos de tejido en la que dicho trozo de tejido sacado de dicha disolución de vitrificación se coloca sobre dicha parte para colocar trozos de tejido (5) de dicho soporte de trozos de tejido (1); una etapa de cubrir trozos de tejido en la que dicho trozo de tejido colocado sobre dicha parte para colocar trozos de tejido (5) se cubre con dicha lámina de cobertura (4) y dicha lámina de cobertura (4) se pone en contacto estrecho con dicho trozo de tejido; una etapa de alojar y sellar en la que dicho soporte de trozos de tejido (1) que sujeta dicho trozo de tejido se aloja dentro de dicha bolsa de alojamiento (11) sin poner dicho soporte de trozos de tejido (1) en contacto con un medio refrigerante y una porción abierta de dicha bolsa de alojamiento (11) se termosella; y una etapa de congelar en la que dicho trozo de tejido se congela alojando dicho soporte de trozos de tejido (1) dentro de dicha bolsa de alojamiento (11) y dicho aparato de crioconservación de tejido vivo recogido sellado (10) se pone en contacto con dicho medio refrigerante.
15. Un procedimiento para congelar trozos de tejido recogido según la reivindicación 14,
que es un procedimiento para congelar trozos de tejido ovárico o un procedimiento para congelar trozos de tejido hepático.
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