ES2255107T3

ES2255107T3 - Fomento de la cicatrizacion de heridas mediante tetraciclinas modificadas quimicamente.

Info

Publication number: ES2255107T3
Application number: ES97935248T
Authority: ES
Inventors: Nungavaram S. Ramamurthy; Lorne M. Golub; Thomas F. Mcnamara
Original assignee: Research Foundation of State University of New York
Current assignee: Research Foundation of State University of New York
Priority date: 1996-08-01
Filing date: 1997-08-01
Publication date: 2006-06-16
Anticipated expiration: 2017-08-01
Also published as: DE69734661T2; DE69734661D1; ATE309804T1; EP0923378B1; KR100494206B1; WO1998005340A1; DK0923378T3; CA2261805C; JP2000516214A; KR20000029753A; EP0923378A4; US5827840A; AU3823497A; EP0923378A1; CA2261805A1

Abstract

SE EXPONE UN PROCEDIMIENTO PARA MEJORAR LA RESPUESTA DE LA CICATRIZACION DE TEJIDO EPITELIAL (POR EJEMPLO, PIEL, MUCOSA) ANTE LESIONES TRAUMATICAS AGUDAS. EL PROCEDIMIENTO INCLUYE EL EMPLEO DE UN COMPUESTO DE TETRACICLINA, QUE CARECE PRACTICAMENTE DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA, A FIN DE MEJORAR LA CAPACIDAD DEL TEJIDO EN EPITELIZACION PARA CICATRIZAR LAS HERIDAS AGUDAS. EL PROCEDIMIENTO SUPONE CONCRETAMENTE UN AUMENTO DEL PORCENTAJE DE ACUMULACION DE COLAGENO EN EL TEJIDO EN CURACION, SUPERIOR AL QUE CORRESPONDE A LA CICATRIZACION DE UNA HERIDA EN LA PERSONA. EL PROCEDIMIENTO DISMINUYE LA ACTIVIDAD PROTEOLITICA EN EL TEJIDO SOMETIDO A REEPITELIZACION POR MEDIO DEL COMPUESTO DE TRETACICLINA, DISMINUYENDO CASI SIEMPRE LA ACTIVIDAD COLAGENOLITICA Y/O REDUCIENDO LA ACTIVIDAD GELATINOLITICA. SE HA DEMOSTRADO QUE, CON EL PROCEDIMIENTO DE LA INVENCION, DISMINUYE LA ACTIVIDAD DE LA COLAGENASA Y LA GELATINASA. EL PROCEDIMIENTO SE EMPLEA PREFERENTEMENTE PARA MEJORAR LA CAPACIDAD DE CURACION DE HERIDASDE SUJETOS HUMANOS O ANIMALES EN LOS QUE DICHA CAPACIDAD APARECE INALTERADA. POR OTRA PARTE, LA TETRACICLINA NO ANTIBIOTICA SE ADMINISTRA PREFERENTEMENTE POR VIA TOPICA EN EL LUGAR DE LA HERIDA.

Description

Fomento de la cicatrización de heridas mediante tetraciclinas modificadas químicamente.

Antecedentes de la invención

La invención se refiere al uso de tetraciclinas para la fabricación de un medicamento para favorecer la cicatrización de heridas. Específicamente, la invención se refiere al uso de tetraciclinas modificadas químicamente para la fabricación de un medicamento para mejorar la cicatrización de heridas agudas o no crónicas en sujetos en los que dicha cicatrización está dificultada.

La importancia médica de la cicatrización de heridas no puede ser exagerada. Para poder superar una lesión traumática, una intervención quirúrgica, y las heridas debidas a agentes microbianos y otros agentes físicos o químicos, la capacidad para cicatrizar es fundamental para el bienestar humano. Clásicamente, se ha entendido que el principal impedimento para la cicatrización de las heridas ha sido la infección por bacterias u otros microbios. Con este fin, se han concebido e implementado barreras químicas y físicas a la infección. Las barreras químicas incluyen agentes y procedimientos antisépticos generales, encabezados por Lister y otros. La inhibición química de los microbios introdujo una nueva era con la llegada de los antibióticos, capaces de ser usados tópicamente, pero también capaces de administración a seres humanos y animales por diversas rutas sistémicas. Las barreras físicas, por contraste, no atacan a los elementos microbianos, sino que dificultan su acceso físico a las heridas, protegiendo la herida de la infección, y protegiendo también contra la repetición de la lesión. También se ha empleado la aplicación combinada de barreras químicas y físicas, tal como la incorporación de un antibiótico a un apósito de
heridas.

Una clase particular de antibióticos que ha tenido éxito es la de tetraciclinas. Compuestos tales como tetraciclina, esporociclina, etc., son antibióticos de amplio espectro, que tienen utilidad contra una amplia diversidad de bacterias. El compuesto original, tetraciclina, tiene la siguiente estructura general:

100

El sistema de numeración del núcleo de anillo múltiple es como sigue:

101

La tetraciclina, así como los derivados 5-OH (terramicina) y 7-Cl (aureomicina), existen en la naturaleza y son todos antibióticos bien conocidos. Las tetraciclinas naturales se pueden modificar sin perder sus propiedades antibióticas, aunque, para que ocurra esto, ciertos elementos de la estructura tienen que ser conservados. Las modificaciones que se pueden hacer o no en la estructura básica de la tetraciclina han sido revisadas por Mitscher (1978). Según
Mitscher, se puede hacer la modificación en las posiciones 5-9 del sistema de anillos de tetraciclina sin que se produzca la pérdida completa de las propiedades antibióticas. Sin embargo, los cambios en la estructura básica del sistema de anillos, o el reemplazamiento de sustituyentes en las posiciones 1-4 ó 10-12, conduce generalmente a tetraciclinas sintéticas con sustancialmente menos actividad antibacteriana, o esencialmente ninguna. Por ejemplo, se considera comúnmente que la 4-dedimetilamino-tetraciclina es una tetraciclina no antibacteriana.

El uso de antibióticos de tetraciclina, aunque generalmente eficaz para tratar la infección, puede conducir a efectos secundarios indeseables. Por ejemplo, la administración de antibióticos de tetraciclina a largo plazo, puede reducir o eliminar flora saludable, tal como flora intestinal, y puede conducir a la producción de organismos resistentes a los antibióticos o al excesivo crecimiento de levaduras y hongos.

Las tetraciclinas antibacterianas se pueden administrar enteralmente o parenteralmente, pero también se pueden aplicar tópicamente como inhibidores de crecimiento bacteriano. Compuestos de este tipo, y otros antibióticos, se han empleado en combinación con barreras físicas tales como vendajes.

La memoria descriptiva de la patente de EE.UU. nº US 5.229.380 describe que la invención se refiere a un procedimiento para detener y tratar úlceras duodenales y gástricas, y gastritis crónica que comprende administrar una cantidad eficaz de monohidrocloruro de [4S(4\alpha,5a\alpha,12a\alpha)]-4,7-bis(dimetilamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahidro-3,10,12,2a-tetrahidroxi-1,11-dioxo-2-naftacenocarboxiimida.

Berg y col., en la patente de EE.UU. nº 4.841.962 describen un uso de antibióticos y otros tipos de agentes químicos en apósitos de heridas. Por ejemplo, Berg y col. sugieren que se incorpore tetraciclina a una matriz de colágeno adherida a un apósito, para liberación en un sitio de una herida. Sin embargo, el documento de Berg y col. no describe ni sugiere el uso de una tetraciclina para otros usos distintos de los usos de antibiótico. Además, no hay descripción de la prevención de la degradación de colágeno en la cicatrización de heridas.

Se conocen otros ejemplos de agentes antibacterianos que se incorporan en apósitos de heridas, por ejemplo, la patente de EE.UU nº 5.081.106 de Bentley y col. que describe apósitos de gelatina de colágeno que incluyen yodo, y la patente de EE.UU. nº 5.227.168 de Chvapil y col. que describe un apósito de colágeno que incluye compuestos de cloro estabilizados.

La patente de EE.UU. nº 4.950.483 de Ksander y col. ilustra un uso de una matriz implantable para cicatrización de heridas, formada por fibrillas de colágeno, que puede incluir un antibiótico u otro agente bioactivo tal como FGF o TGF-\beta. Ksander y col. indican que la propia matriz es útil para inducir la reparación del tejido. Véanse también las patentes de EE.UU. n^{os} 5.024.841 y 5.110.604 de Chu y col. Otras patentes de EE.UU. describen otros procedimientos y productos para implantar colágeno en heridas para facilitar la cicatrización, por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 4.837.024 de Michaeli.

Aunque la prevención de la infección bacteriana en las heridas es importante, la reparación del tejido lesionado es esencial, puesto que incluso la herida más limpia permanece como herida si no se reconstruye para formar tejido nuevo intacto. Los procesos implicados en la reparación de las heridas cutáneas son notoriamente complejos. (Véase Clark 1993). Están implicados varios procesos distintos, pero superpuestos, que incluyen inflamación, formación de tejido nuevo, y remodelación de la matriz extracelular (ECM) de tejido conjuntivo subyacente. El proceso de formación de nuevo tejido incluye procesos de reepitelialización, para restablecer rápidamente la barrera protectora de la piel contra la invasión bacteriana, y formación de tejido de granulación, un proceso multifaceta que se produce más profundamente en el tejido y que lleva más tiempo para iniciarse y completarse.

El colágeno es un componente principal de las matrices de tejido conjuntivo, no sólo en la piel, sino también en otros tejidos tales como huesos, sinovio, ojos, tendones, cartílagos y encías. La deposición y acumulación de colágeno durante la cicatrización de heridas agudas comienza con la aparición de la formación de tejido de granulación y continúa a través de la fase extensiva de remodelación de la matriz. Sin embargo, la retirada de colágeno tempranamente en el proceso de reparación de la herida es esencial para desbridamiento de la herida y para colocar el escenario para la apropiada reconstrucción de la epidermis. La descomposición del colágeno está mediada por colagenasa mamífera, una metaloproteinasa de matriz bien caracterizada, que se produce inmediatamente después de que se hace una herida (Inoue y col. 1995). Así, se considera que la actividad colagenolítica es una característica normal de la reparación de heridas agudas. Efectivamente, a primera vista parecería que niveles inhabitualmente altos de descomposición de colágeno podrían ser beneficiosos en el desbridamiento y la remodelación de los tejidos que se recuperan de una agresión dérmica. Sin embargo, se reconoce que la producción de colagenasa puede llegar a ser excesiva.

Recientemente, se ha definido una nueva clase de compuestos que se relaciona estructuralmente con las tetraciclinas antibióticas, pero que han tenido extinguida parcialmente o totalmente su actividad antibiótica por modificación química. Se ha encontrado que estos compuestos, conocidos como tetraciclinas modificadas químicamente (CMTs), poseen un cierto número de propiedades interesantes, tales como la inhibición de la actividad colagenolítica excesiva en vivo. (Véase, por ejemplo, Golub y col. 1991; Ryan y col. 1996).

En la patente de EE.UU nº 4.704.383 de McNamara y col. se hizo la sugerencia de usar CMTs para ayudar en la cicatrización de las heridas crónicas. En ella se establece que se pueden aplicar tópicamente tetraciclinas a la piel en el tratamiento de lesiones ulcerosas tales como úlceras de decúbitos, úlceras diabéticas y epidermolisis bulbosa. Dicha aplicación se refiere a la acción de tetraciclinas como inhibidores de la excesiva actividad de colagenasa en las dolencias en las que se encuentra dicha actividad excesiva. Las úlceras crónicas mencionadas en el documento de McNamara y col. son típicas de aquellas que se derivan o son atribuibles a excesiva actividad colagenolítica. Las úlceras de este tipo no cicatrizan espontáneamente de una manera que se aproxime a la velocidad de cicatrización normal, y a menudo no cicatrizan en absoluto. Ciertamente, el uso de antibiótico a largo plazo en dolencias de este tipo no habilita la cicatrización per se, subrayando el punto de que, aunque la inhibición microbiana es una consideración importante, los antibióticos no favorecen los mecanismos subyacentes (acogida metabólica) por los que se repara el tejido ulcerado. Más aun, aunque aparentemente útiles para tratar las heridas que resultan de la excesiva actividad colagenolítica, no es evidente a partir de la patente de McNamara y col. que las CMTs tengan alguna utilidad en heridas agudas, que están inducidas por otras causas. Ni tampoco proporciona este documento sugerencia alguna de que la inhibición de la actividad colagenolítica pudiera ser beneficiosa en otros tipos de heridas.

La patente de EE.UU. nº 5.196.196 de Scott y col. describe un uso de inhibidores de proteasa, segregados de células de tejido conjuntivo, en apósitos de heridas como un medio de regular la actividad de enzimas (proteasas de serina) implicadas en remodelación o destrucción de tejidos. Sin embargo, los inhibidores de este tipo requieren técnicas recombinantes para su identificación y complejos procesos biotecnológicos para su producción, confiriendo un gasto significativo para su preparación.

En vista de las consideraciones anteriores, es claro que los procedimientos en uso en la técnica existente para favorecer la cicatrización de las heridas por trauma agudo están limitados en un cierto número de maneras. Por ejemplo, la técnica existente no proporciona medios eficaces para favorecer los procesos fisiológicos implicados en la cicatrización de heridas por trauma agudo tales como laceraciones, abrasiones e incisiones. Por consiguiente, uno de los propósitos de esta invención es superar las limitaciones anteriores en la práctica de la medicina, proporcionando una manera de favorecer la cicatrización de las heridas agudas y no crónicas.

Sumario de la invención

Se ha descubierto ahora que estos y otros objetivos se pueden alcanzar por la presente invención que proporciona el uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento para favorecer la cicatrización de heridas en la piel y en otros tejidos epitelializados o de mucosas. Por consiguiente, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento para favorecer la cicatrización de heridas en un mamífero que tiene una herida por trauma agudo a un tejido epitelializado, en el que se usa el compuesto de tetraciclina en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana pero que es eficaz para mejorar la cicatrización de la herida en el sujeto.

En el uso según la invención, se prefiere que el compuesto de tetraciclina sustancialmente no se absorba sistémicamente. Los compuestos de tetraciclina preferidos incluyen, por ejemplo, CMT-2 (tetraciclinonitrilo) y CMT-6
(4-hidroxi-4-dedimetilaminotetraciclina). Un uso preferido implica administrar tópicamente el compuesto de tetraciclina al tejido epitelializado o de mucosas. Más aun, el compuesto de tetraciclina se usa para la fabricación de dicho medicamento junto con una cantidad anti-inflamatoria de un fármaco anti-inflamatorio no esteroideo.

En un caso preferido, el mamífero tiene dificultada la capacidad de cicatrización de heridas en el tejido epitelizado, y el medicamento mejora la capacidad de cicatrización de heridas en el mamífero, incluso hasta niveles iguales o por encima de los niveles que se considera que son normales en la población. En este caso, la cicatrización de heridas dificultada se caracteriza típicamente por el aumento de actividad proteolítica en la piel u otro tejido epitelializado del sujeto. El aumento de la actividad proteolítica puede derivarse del aumento de la actividad colagenolítica o del aumento de la actividad gelatinolítica o de ambos.

En otra realización, la invención proporciona el uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento para aumentar el colágeno en un tejido epitelializado sometido a una herida aguda, en el que el compuesto de tetraciclina se introduce en el tejido epitelializado en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana, pero que es suficiente para aumentar el contenido en colágeno en el tejido epitelializado.

En esta realización, el uso de un compuesto de tetraciclina según la invención implica introducir en la piel u otro tejido epitelializado, un compuesto de tetraciclina en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana, pero que es suficiente para aumentar el contenido en colágeno del tejido epitelializado para reemplazar el colágeno o tejido conjuntivo que se había perdido debido al trauma. El medicamento se puede usar para aumentar los niveles de colágeno en la piel u otro tejido epitelializado de un sujeto que tiene niveles de colágeno anormalmente bajos en su tejido.

La invención proporciona además un apósito de heridas para favorecer la cicatrización de una herida por trauma agudo a la piel u otro tejido epitelializado. El apósito de heridas incluye: una base de soporte, y un compuesto de tetraciclina en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana, pero que es suficiente para favorecer la cicatrización en el tejido epitelializado. El apósito de heridas puede incluir también un fármaco anti-inflamatorio no esteroideo en una cantidad suficiente para inhibir la inflamación en el tejido epitelializado.

Estas y otras ventajas de la presente invención se apreciarán a partir de la descripción detallada y ejemplos que se exponen en este documento. La descripción detallada y los ejemplos mejoran la comprensión de la invención, pero no tienen la intención de limitar el alcance de la invención.

Breve descripción de los dibujos

El expediente de esta patente contiene al menos un dibujo realizado en color. Copias de esta patente con dibujos en color serán proporcionadas por la Oficina de Patentes y Marcas tras petición y abono de las tasas necesarias.

Se han elegido realizaciones preferidas de la invención para fines de ilustración y descripción, pero no tienen la intención de restringir en modo alguno el alcance de la invención. En los dibujos que se acompañan, se muestran las realizaciones preferidas de ciertos aspectos de la invención, en los que:

La figura 1 es un escaneado por ordenador de un gel PAGE que muestra el efecto de un tratamiento con tetraciclina (CMT-6) sobre la actividad de colagenasa en la herida que cicatriza, evaluado usando [^{3}H-metil]colágeno como substrato, y

la figura 2 es un fluorograma de un gel PAGE que muestra el efecto de un tratamiento con tetraciclina (CMT-2) sobre la actividad de colagenasa en la herida que cicatriza, evaluado usando [^{3}H-metil]colágeno como substrato.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

La presente invención se dirige al fomento de la cicatrización de heridas por trauma agudo en tejidos epitelializados. La invención se refiere al uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento para restaurar o mejorar la cicatrización de heridas por trauma agudo a la piel u otros tejidos epitelializados. Los compuestos de tetraciclina que se usan son preferiblemente tetraciclinas modificadas químicamente, que tienen generalmente poca capacidad antimicrobiana, o ninguna. Sin embargo, se pueden usar, también, según la invención dosis sub-antimicrobianas de tetraciclinas típicamente anti-bacterianas.

El medicamento preparado usando un compuesto de tetraciclina según la invención, está adaptado para usarse para el fomento de la cicatrización de heridas por trauma agudo en mamíferos. Las heridas por trauma agudo son típicamente de aparición súbita, tales como las lesiones producidas en un daño traumático. La clase de heridas susceptibles de tratamiento por el medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención incluye las heridas por trauma agudo que cicatrizan por primera intención y las heridas por trauma agudo que cicatrizan por segunda intención. Así, el medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención es útil para mejorar la cicatrización de heridas que cicatrizan por primera intención, que se caracterizan por la cicatrización de la herida sin intervención de granulaciones. Las heridas de este tipo se tipifican por las incisiones quirúrgicas. El medicamento también es útil para ayudar a la cicatrización de heridas que cicatrizan por segunda intención, esto es, heridas en las que la cicatrización se caracteriza por la formación de granulaciones. Las heridas por segunda intención se ejemplifican por laceraciones, perforaciones, abrasiones y similares. Las heridas por trauma agudo tratables según la invención también pueden ser designadas como heridas "no crónicas".

Las heridas que se clasifican generalmente como "crónicas", o de duración prolongada y/o espontáneas o de origen no traumático, están fuera del alcance de la invención. Por ejemplo, el medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención no es para lesiones o erosiones ulcerativas, tales como las úlceras de decúbito (llagas de la cama), úlceras diabéticas, epidermolisis bulbosa, y úlceras corneales estériles, o similares.

El medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención favorece la cicatrización de la piel (cutis) incisa, lacerada, perforada, o erosionada en el sujeto que está siendo tratado. En las heridas agudas cutáneas o de mucosas de este tipo pueden estar implicados tejidos epidérmicos, dérmicos y subcutáneos subyacentes, y la cicatrización se puede mejorar en cualquiera de estos tipos de tejidos o en todos ellos por medio de la invención. Asimismo, se puede usar el medicamento para mejorar la cicatrización en otros tejidos epitelializados, tales como cualquier tejido en el que una capa epitelial está dañada, ya sea con o sin daño a los tejidos conjuntivos o de soporte subyacentes. La expresión "tejido epitelializado" se aplica generalmente en este documento para denominar la piel y otros tejidos cualesquiera que tienen o están asociados con un epitelio (como este último término se usa convencionalmente). Otros tejidos dentro del significado de la expresión "tejido epitelializado" y, por lo tanto, adecuados para tratamiento según la invención incluyen, sin limitación, tejidos de mucosas en la cavidad oral y otras cavidades del cuerpo. Funcionalmente, el medicamento es útil para tratar cualquier tejido corporal traumatizado agudamente en el que la inhibición de la actividad colagenolítica sea beneficiosa para mejorar la cicatrización del tejido.

Las dolencias tratables por medio de la presente invención suceden en sujetos mamíferos. Mamíferos incluyen, por ejemplo, seres humanos, así como animales de compañía, tales como perros y gatos, animales de laboratorio tales como ratas y ratones, y animales de granja, tales como caballos y vacas.

Entre los beneficios del medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención está el que se puede usar para mejorar la integridad de la piel que cicatriza reduciendo la cantidad de granulación durante el proceso de cicatrización. La granulación se caracteriza por la formación en las heridas de masas de tejido pequeñas, redondeadas compuestas en gran parte de capilares y fibroblastos, a menudo con células inflamatorias presentes. Así, se puede reducir el tejido cicatricial excesivo, lo que se acompaña de disminución de la desfiguración o la distorsión de la piel asociada con la cicatriz.

El uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un compuesto según la invención implica el uso de un compuesto de tetraciclina en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana, pero que es eficaz para mejorar la cicatrización de una herida por trauma agudo en un tejido epitelializado. Preferiblemente, el compuesto de tetraciclina ha sido modificado químicamente para reducir o eliminar sus propiedades antimicrobianas. Procedimientos para reducir las propiedades antimicrobianas de las tetraciclinas se describieron por Mitscher (1978). Como se ha señalado por Mitscher, la modificación de la tetraciclina en las posiciones 1, 2, 3, 4, 10 ó 12a conduce a la pérdida de actividad antimicrobina. En la presente invención se prefiere el uso de tetraciclinas modificadas químicamente de este tipo, puesto que se pueden usar a niveles más altos que las tetraciclinas antimicrobianas, al tiempo que se evitan ciertos inconvenientes, tales como la muerte indiscriminada de microbios beneficiosos, y la aparición de microbios resistentes, que a menudo acompaña al uso de antimicrobianos o cantidades antimicrobianas de tales
compuestos.

Las tetraciclinas modificadas químicamente preferidas son las que carecen de grupo dimetilamino en la posición 4 de la estructura de anillos. Las tetraciclinas modificadas químicamente de este tipo incluyen, por ejemplo,
4-dedimetilaminotetraciclina (CMT-1), 4-dedimetilamino-5-oxitetraciclina, 4-dedimetilamino-7-clorotetraciclina
(CMT-4), 4-hidroxi-4-dedimetilamino-tetraciclina (CMT-6), 5a,6-anhidro-4-hidroxi-4-dedimetil-aminotetraciclina, 6-demetil-6-deoxi-4-dedimetilamino-tetraciclina (CMT-3), 4-dedimetilamino-12a-deoxi-tetraciclina (CMT-7), y 6-\alpha-deoxi-5-hidroxi-4-dedimetil-aminotetraciclina (CMT-8). Asimismo, las tetraciclinas modificadas en la posición de carbono 2 para producir un nitrilo, por ejemplo, tetraciclinonitrilo, son útiles como agentes anti-metaloproteinasa, no antibacterianos.

Ejemplos adicionales de tetraciclinas modificadas para una actividad antimicrobiana reducida incluyen 6-\alpha-benciltiometilenotetraciclina, la amida mono-N-alquilada de tetraciclina, 6-fluoro-6-demetiltetraciclina, y 11\alpha-clorotetraciclina.

Una CMT particularmente preferida es 4-hidroxi-4-dedimetilaminotetraciclina (designada en el presente documento por CMT-6), la cual se ha encontrado que mejora el contenido en colágeno en las heridas que cicatrizan. Otra CMT muy preferida es tetraciclinonitrilo (CMT-2) que parece ser incluso más eficaz en favorecer la cicatrización. Efectivamente, CMT-2 y CMT-6 no se absorben sustancialmente en la corriente sanguínea cuando se ingieren, y generalmente están limitadas en su biodistribución. CMT-2, CMT-6 y otras CMTs, que exhiben distribución sustancialmente local de este tipo, se prefieren por su eficacia localizada en inhibir la actividad colagenolítica en el sitio de la lesión, sin exhibir inhibición sistémica más amplia de la actividad proteolítica. Por ejemplo, la aplicación tópica de estas CMTs no absorbibles sería deseable en lesiones orales, puesto que las CMTs no se absorberían en grado significativo alguno incluso si se tragaran.

La invención también puede usar compuestos de tetraciclina que poseen actividad antibacteriana. Sin embargo, los compuestos de este tipo se emplean en una cantidad que no tiene sustancialmente efecto antibacteriano, pero que es eficaz para mejorar la cicatrización de una herida por trauma agudo en el tejido epitelializado. Compuestos preferidos de este tipo incluyen tetraciclina, doxiciclina, demecloclicina, y minociclina.

Los compuestos de tetraciclina que se usan en la fabricación de un medicamento según la invención parece que exhiben su efecto beneficioso de una manera dependiente de la dosis. Así, dentro de amplios límites, se ha observado que la administración de cantidades más grandes de un compuesto de tetraciclina mejora la cicatrización de las heridas en mayor grado que la administración de una cantidad más pequeña. Más aun, se ha observado eficacia a dosificaciones por debajo del nivel al que se ha visto toxicidad.

La cantidad del compuesto de tetraciclina que se usa según la invención es una cantidad que es eficazmente anti-colagenolítica, al tiempo que no es eficazmente antimicrobiana. Una cantidad de un compuesto de tetraciclina es eficazmente anti-colagenolítica si reduce significativamente la actividad colagenolítica. Un compuesto de tetraciclina no es eficazmente antimicrobiano si no previene significativamente el crecimiento de microbios.

La dosificación máxima para un sujeto es la dosificación más alta que no produce efectos secundarios indeseables o intolerables. Por ejemplo, el compuesto de tetraciclina puede ser administrado en una cantidad desde aproximadamente 0,1 mg/kg/día hasta aproximadamente 30 mg/kg/día, y preferiblemente desde aproximadamente 1 mg/kg/día hasta aproximadamente 18 mg/kg/día. Para la finalidad de la presente invención, los efectos secundarios incluyen actividad antimicrobiana o antibacteriana clínicamente significativa, así como efectos tóxicos. Por ejemplo una dosis por exceso de aproximadamente 50 mg/kg/día probablemente produciría efectos secundarios en la mayoría de los mamíferos, incluso en seres humanos. En cualquier caso, el profesional habilitado se ha de guiar por su habilidad y conocimiento en el campo práctico, y la presente invención incluye sin limitación dosificaciones que son eficaces para alcanzar los fenómenos descritos.

La aplicación tópica de compuestos de tetraciclina en cantidades hasta aproximadamente 25% (peso/peso) en un vehículo son por lo tanto apropiadas, dependiendo de la indicación. Más preferiblemente, se piensa que la aplicación de compuestos de tetraciclina en cantidades desde aproximadamente 0,1% hasta aproximadamente 10% favorece eficazmente la cicatrización según la invención. Se piensa que estas cantidades no inducen significativamente toxicidad en el sujeto que está siendo tratado.

Se contempla bajo la invención la administración tópica y sistémica combinada o coordinada. Por ejemplo, se puede administrar tópicamente un compuesto de tetraciclina no absorbible, tal como CMT-2 o CMT-6, al tiempo que se administra sistémicamente un compuesto de tetraciclina capaz de absorción sustancial y distribución sistémica eficaz en el sujeto, tal como CMT-1, CMT-3, CMT-7 o CMT-8.

El compuesto de tetraciclina también se puede administrar con un agente capaz de inhibir la inflamación en un tejido sometido a una herida por trauma agudo. Agentes anti-inflamatorios preferidos capaces de co-administración incluyen fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (AINEs). Los AINE se pueden seleccionar entre diversas clases de compuestos de este tipo. Las clases de este tipo incluyen, por ejemplo, salicilatos tales como ácido acetilsalicílico y diflunisal; ácidos acéticos tales como indometacin, sulindac, tolmetin, diclofenac, y etodolac; ácidos propiónicos tales como flurbiprofen, naproxen, ketoprofen; y fenamatos tales como meclofenamato; y oxicams tales como piroxicam. Generalmente, la cantidad de AINE es una cantidad suficiente para inhibir la inflamación en el tejido afectado. La cantidad de anti-inflamatorio dependerá del AINE empleado y de otros factores que se entienden y puede ser fácilmente determinada por el profesional experto.

La composición farmacéutica preferida, para uso en el medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención, comprende una combinación de un compuesto de tetraciclina en un soporte (vehículo) o excipiente farmacéuticamente adecuado según se entiende por los profesionales habilitados en la técnica. Un medio de suministro muy preferido incluye la aplicación tópica. Por consiguiente, el soporte se ajusta preferiblemente para aplicación tópica. Composiciones que se estima son adecuadas para dicho uso tópico incluyen geles, pomadas, lociones, ungüentos y similares. La cantidad no antimicrobiana del compuesto de tetraciclina se puede incorporar con una base o matriz de soporte o similar para proporcionar un apósito o vendaje quirúrgico o para quemaduras pre-empaquetado que se puede aplicar directamente a una herida. Los apósitos de este tipo se pueden emplear con o sin aplicación de sustancias facilitadoras farmacéuticamente aceptables tales como cremas antibióticas. Se puede emplear administración gradual en el tiempo o de liberación controlada, por ejemplo aplicando el compuesto de tetraciclina con un polímero biocompatible co-formado en un material fibroso. Efectivamente, las matrices reabsorbibles de colágeno son adecuadas para liberación gradual en el tiempo de medicamentos (véanse por ejemplo las patentes de EE.UU. n^{os} 4.440.680 de Cioca; 4.407.787 de Stemberger; y 4.294.241 de Miyata), y se pueden emplear para liberar compuestos de tetraciclina según la presente invención. Opcionalmente, se puede incluir un compuesto antibiótico que no es tetraciclina con la cantidad no microbiana del compuesto de tetraciclina y el soporte para inhibir el crecimiento microbiano en el sitio de la herida. Alternativamente, el medio de liberación del compuesto de tetraciclina con el soporte farmacéutico puede estar en forma de una cápsula, pastilla comprimida, píldora, solución o suspensión adecuada para administración oral al sujeto. Las composiciones que se contemplan incluyen las que se formulan con soportes adecuados para administración oralmente, tópicamente, por inyección, o por otro
medio.

El uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento según la invención aumenta la velocidad de acumulación de colágeno en el tejido epitelializado que cicatriza. Por consiguiente, la invención aumenta la velocidad de cicatrización de heridas por trauma agudo inhibiendo las metaloproteinasas de matriz de mamífero (MMPs), especialmente colagenasa y gelatinasa, disminuyendo con ello la velocidad de descomposición de colágeno en el tejido que cicatriza. (Es posible que la velocidad observada de aumento en el contenido de colágeno refleje, en parte, aumento en la síntesis y/o secreción de colágeno). Los compuestos de tetraciclina parece que inhiben colagenasa neutrófila, así como colagenasa fibroblástica. Por ejemplo Chang y col. (1996) han mostrado que la diabetes se asocia con el aumento de las cantidades de colagenasa y gelatinasa de tipo leucocito en la piel, presumiblemente producidas por fibroblastos (estimulados por citoquina). Por consiguiente, se piensa que el medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención aumenta eficazmente la cicatrización de las heridas por trauma agudo inhibiendo colagenasa fibroblástica, que es normalmente activa en la remodelación de tejidos, o colagenasa neutrófila leucocitaria, una enzima que es típicamente activa en las etapas tempranas de la cicatrización de heridas, desgarrando el tejido lesionado en el momento en que está sucediendo la inflamación. El medicamento es particularmente aplicable a la inhibición de colagenasa de tipo neutrófilo.

Asimismo, dado que la colagenasa neutrófila y la colagenasa fibroblástica se generan en el sitio de la lesión, en diferentes momentos, está dentro del alcance de la invención proporcionar un régimen basado en el tiempo que incluye una secuencia de dos o más compuestos de tetraciclina que actúan específicamente, de modo que la inhibición de colagenasa neutrófila sea más temprano en el proceso de cicatrización y la inhibición de colagenasa fibroblástica sea más tarde. Alternativamente una dificultad en la expresión de un único tipo de actividad colagenolítica en ciertos individuos podría indicar la aplicación de un régimen dirigido a inhibir esta fuente única de activi-
dad.

El uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento según la invención es particularmente aplicable a sujetos en quienes el proceso de cicatrización está dificultado. Por ejemplo, en los casos en que los niveles de colagenasa aumentan en respuesta a una lesión por trauma agudo, pero que no caen de nuevo como lo harían normalmente, la lesión puede llegar a ser crónica, tardando un tiempo excesivamente largo en cicatrizar. El medicamento que se fabrica usando un compuesto de tetraciclina según la invención se puede usar para superar el fracaso de la piel para reducir el nivel de actividad colagenolítica, permitiendo con ello un aumento en la deposición de colágeno y la concomitante cicatrización normalizada, y previniendo la inducción de una lesión
crónica.

Así, el uso de tetraciclinas modificadas químicamente para la fabricación de un medicamento según la invención es útil en personas que tienen una dificultad aguda o no crónica de cicatrización de las heridas, lo más especialmente en personas que padecen diabetes. Se sabe que la dificultad en la cicatrización de las heridas es una de las muchas complicaciones de la diabetes melitus que apenas se controla. Se han identificado varias anormalidades inducidas por la diabetes en el metabolismo del colágeno, las cuales incluyen colagenasa y gelatinasa patológicamente excesivas en encías y piel de rata diabética por estreptozotocin (Ramamurthy y col. 1983; Chang y col. 1996). Los autores de la presente han mostrado que tales anormalidades pueden ser inhibidas eficazmente, conduciendo a la restauración de la cicatrización de las heridas agudas en personas que padecen tales dolencias.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ayudar en el entendimiento de la invención. Los materiales y condiciones particulares empleados tienen la intención de ilustrar adicionalmente la invención y no limitan el alcance razonable de la misma.

Ejemplo 1

Se distribuyeron ratas adultas macho Sprague-Dawley (aprox. 350 g de peso corporal) en los siguientes grupos experimentales:

Grupo I (n = 4 ratas): controles no diabéticas tratadas con vehículo solo (grupo NDC);

Grupo II (n = 3 ratas): diabéticas no controladas tratadas con vehículo solo (grupo D); y

Grupo III (n = 3 ratas): diabéticas tratadas tópicamente con CMT-6 (suspensión al 1% en un vehículo de petrolátum a base de aceite mineral).

Al comienzo del experimento (T=0), se administró al número de ratas apropiado estreptozotocin (STZ) (70 mg/kg) por inyección intravenosa por la vena de la cola, para inducir diabetes e hiperglucemia según el procedimiento establecido por Yu y col. (1993). A continuación, 21 días después de la inyección de STZ, todas las ratas fueron anestesiadas, y se hicieron seis heridas circulares de espesor completo con un punzón de biopsia de 6 mm de diámetro en la piel dorsal de cada rata (se dejó que las heridas cicatrizaran por segunda intención). Empezando en el día que fueron hechas las heridas, se aplicó el vehículo de petrolátum, tanto solo como conteniendo CMT-6, una vez al día durante siete
días.

Al final del período de siete días, se diseccionaron quirúrgicamente las heridas y se examinaron, tanto histológicamente como bioquímicamente. Para el primer análisis, las biopsias de la piel se almacenaron en formalina neutra tamponada al 10%, a continuación se seccionaron y se tiñeron con tricromo de Mason, que tiñe las fibras de colágeno (el principal constituyente estructural del tejido conjuntivo) de color azul. Para el último examen, se secaron las biopsias de la piel a 37ºC, se pesaron y, a continuación, se hidrolizaron en HCl 6 M (106ºC, 24 hr, en un tubo de ensayo sellado) para descomponer la proteína de colágeno en sus aminoácidos constituyentes y se analizaron colorimétricamente a continuación respecto a hidroxiprolina, que es un aminoácido "marcador" de colágeno, según el procedimiento de Stegmann (1958).

En los tres grupos de ratas, el epitelio pareció que estaba completamente reconstruido sobre la dermis de la cicatriz antes del día 7 de la creación de la herida. Los resultados de estos análisis se resumen en la Tabla 1. La tinción de tricromo se expresa cualitativamente, y el contenido de hidroxiprolina en las muestras de piel se expresa como mg/mg de tejido seco (\pm error típico de la media).

Las muestras de piel que cicatriza, teñidas como se describe para ilustrar el contenido en colágeno, fueron sometidas a análisis microscópico (confirmado por fotomicrografía). Una micrografía de la piel que cicatriza de una rata normal (Grupo I) mostró tinción densa de colágeno. En contraposición, una micrografía de la piel que cicatriza de una rata diabética sin tratar (Grupo II) sólo mostró muy ligera tinción de colágeno, ilustrativa de la dificultad de cicatrización en estos animales. Finalmente, una micrografía de la piel que cicatriza de una rata diabética tratada con CMT-6 al 1% según se ha descrito (Grupo III) mostró que el contenido en colágeno en la piel se aumenta significativamente sobre el encontrado en las ratas diabéticas sin tratar. Estos datos se resumen cualitativamente en la
Tabla 1.

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TABLA 1

Grupo experimental	Contenido en colágeno al día 7
	Histología	Hidroxiprolina (\mug/mg)
I: Normales	++++	29\pm6
II: Diabéticas sin tratar	+	20\pm3
III: Diabéticas con CMT-6 al 1%	+++	25\pm7

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Como se muestra en la Tabla 1, las ratas que se habían hecho diabéticas redujeron el contenido en colágeno de la herida que cicatriza en comparación con los controles de normales. Esta conclusión se basó en una reducción del 31% en el contenido en hidroxiprolina, y se basó en una reducción en la tinción de azul tricromo de las fibras de colágeno, en comparación con el grupo NDC. No obstante, las ratas del Grupo III (diabéticas más CMT-6) mostraron un contenido en colágeno de la piel que cicatriza que había aumentado 25% sobre las diabéticas sin tratar basado en las mediciones de hidroxiprolina, que a su vez era coherente con el aumento de tinción de de colágeno con tricromo basado en la observación histológica.

Ejemplo 2

Se llevó a cabo un experimento similar al que se ha descrito en el Ejemplo 1, excepto que se suspendieron dos concentraciones de CMT-6 en el vehículo de petrolátum a base de aceite mineral, esto es, se probaron suspensiones de 1% y 3% de CMT-6. En este caso se distribuyeron 21 ratas adultas macho en 4 grupos experimentales:

Grupo I (n = 4 ratas): controles no diabéticas (NDC) tratadas diariamente por aplicación tópica de vehículo solo;

Grupo II (n = 5 ratas): diabéticas no controladas (D) tratadas como anteriormente con vehículo solo;

Grupo III (n = 6 ratas): diabéticas no controladas tratadas diariamente con CMT-6 al 1% en petrolátum; y

Grupo IV (n = 6 ratas): diabéticas no controladas tratadas diariamente con CMT-6 al 3% en petrolátum.

Como en el Ejemplo 1, después de un protocolo de 7 días, las ratas fueron anestesiadas, se cortaron las biopsias de la piel, se hidrolizaron y se analizaron colorimétricamente respecto al contenido en hidroxiprolina. Los resultados de este análisis se presentan en la Tabla 2, en la que el contenido en hidroxiprolina se expresa como \mug de hidroxiprolina/mg de tejido seco (\pmS.E.M.).

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TABLA 2

Grupo experimental	Contenido de la piel en hidroxiprolina
I: Controles no diabéticas	25\pm2
II: Diabéticas sin tratar	19\pm2
III: Diabéticas con CMT-6 al 1%	27\pm6
IV: Diabéticas con CMT-6 al 3%	33\pm11

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En este experimento, la inducción de diabetes redujo el contenido de colágeno de la piel que cicatriza en los animales del Grupo II por debajo de los niveles del control (Grupo I) en un 24% (Tabla 2). Sin embargo, el tratamiento de ratas diabéticas por administración tópica de CMT-6 al 1% (Grupo III) y CMT-6 al 3% (Grupo IV) aumentó el contenido en colágeno de las heridas en un 42% y un 74%, respectivamente, por encima de las diabéticas sin tratar (Grupo II). Esto indica claramente un efecto de respuesta a la dosis en la cicatrización de las heridas.

Ejemplo 3

En este experimento se distribuyeron ratas adultas macho en cuatro grupos experimentales diferentes, con n = 4-6 ratas por grupo:

Grupo I: Diabéticas con vehículo solo;

Grupo II: Diabéticas con CMT-6 al 1%;

Grupo III: Diabéticas con CMT-6 al 3%; y

Grupo IV: Diabéticas con CMT-2 al 1%.

Se empleó el protocolo de producción de heridas según se ha descrito anteriormente. En el día 7 posterior a la producción de las heridas, y después de la aplicación tópica diaria tanto de vehículo solo como de CMT-6 o CMT-2, las heridas se cortaron quirúrgicamente y se midió la actividad de colagenasa según el procedimiento de Golub y col. (1985).

Resumidamente, la actividad de colagenasa se midió como sigue: se pesó cada biopsia de piel, se extrajo, y se purificaron parcialmente los extractos por precipitación con sulfato amónico. Se incubaron partes alícuotas de extractos de piel con [^{3}H-metil]colágeno a 22ºC, y los productos de reacción se separaron por fluorografía SDS-PAGE. A continuación, se escanearon los fluorogramas por medio de un densitómetro láser para evaluar la actividad de colagenasa. (Este análisis se llevó a cabo en ausencia de acetato aminofenilmercúrico (APMA), para evaluar colagenasa activa, no latente, según se describe por Golub y col. (1994)).

La Figura 1 muestra el patrón electroforético de [^{3}H-metil]colágeno después de la incubación con extractos de piel de ratas diabéticas de los Grupos I-III. Canales 2-4: t=0; canales 5-7: placebo (vehículo solo); canales 8-10: CMT-6 al 1%; y canales 11-13: CMT-6 al 3%. El canal 1 es una muestra de control de colágeno sin extracto de piel, que muestra el patrón de colágeno sin degradar, incluyendo los componentes de colágeno \alpha, \beta y \gamma. Nótese la alta actividad de colagenasa en la piel de ratas diabéticas a t=0 (fragmentos \alpha^{A})(canales 2-4) que es incluso más alta en la piel tratada con placebo (tratada con vehículo) de las diabéticas (canales 5-7). El tratamiento con CMT-6 disminuyó el exceso de actividad de colagenasa, según se indica por (i) la disminución de la pérdida de componentes de colágeno \alpha, \beta y \gamma, y (ii) la disminución de la formación de productos de descomposición \alpha^{A} intermediados por colagenasa. Es evidente un efecto de dependencia de la dosis de CMT-6 (canales 8-13).

La Figura 2 muestra el patrón electroforético de [^{3}H-metil]colágeno después de la incubación con extractos de piel de ratas diabéticas con placebo (tratadas con vehículo)(canales 1-2) y de ratas diabéticas tratadas con CMT-2 al 1% (canales 3-5). Como en la Figura 1 anterior, se ve un alto nivel de actividad de colagenasa en la piel tratada con placebo, al tiempo que se evidencia también la más drástica inhibición de la actividad de colagenasa por CMT-2.

La descomposición de [^{3}H-metil]colágeno radiomarcado por los extractos de piel reveló fragmentos (\alpha_{1}^{A} y \alpha_{2}^{A}) de colágeno de elevado peso molecular, característicamente producidos por colagenasa de mamíferos. Los resultados de este análisis se presentan en la Tabla 3.

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TABLA 3

Grupo Experimental	Actividad de colagenaza
	(% de ^{3}H-colágeno degradado)
I: Diabéticas sin tratar	47,4\pm0,6
II: Diabéticas con CMT-6 al 1%	8,3\pm0,5
III: Diabéticas con CMT-6 al 3%	6,4\pm4,3
IV: Diabéticas con CMT-2 al 1%	0\pm0

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El escaneado densitométrico de los fluorogramas (Figuras 1 y 2, Tabla 3) indicó que se degradó un 47% del substrato de ^{3}H-colágeno por las muestras de piel de ratas tratadas con vehículo. El tratamiento de ratas diabéticas con CMT-6 al 1% o 3%, o con CMT-2 al 1%, redujo en todos los casos sustancialmente esta alta actividad de colagenasa. Específicamente, CMT-6 al 1% redujo la actividad colagenolítica en las ratas diabéticas en un 83%; CMT-6 al 3% redujo la actividad en un 87% y CMT-2 al 1% redujo la actividad en un 100%. (En un experimento por separado (no se muestran los datos), piel de ratas no diabéticas de control al día 7 mostraron degradación de colágeno de aproximadamente 19%, que se compara con el nivel de degradación de 47% exhibido por el grupo diabético en este experimento, y la aplicación tópica de CMT-6 al 3% no redujo significativamente (p>0,05) la actividad colagenolítica en la piel de ratas NDC.)

Ejemplo 4

Además de los experimentos anteriormente descritos, se hizo un estudio del efecto de CMT-6 sobre la actividad de colagenasa y gelatinasa en ratas normales y diabéticas-SZT. Se dividieron veinticuatro ratas en seis grupos experimentales:

I: Normales (n = 4 ratas) tratadas con vehículo de petrolátum solo;

II: Normales (n = 3 ratas) tratadas con CMT-6 al 3%;

III: Diabéticas (n = 6 ratas) sin tratar, probadas a tiempo = 0

IV: Diabéticas (n = 4 ratas) vehículo solo, probadas a tiempo = 7 días;

V: Diabéticas (n = 4 ratas) tratadas con CMT-6 al 1%; y

VI: Diabéticas (n = 3 ratas) tratadas con CMT-6 al 3%.

Se trataron las ratas según el protocolo anteriormente descrito, con la excepción de que las ratas en el Grupo III fueron probadas en el día en que se hicieron las heridas. Las biopsias de los tejidos se dividieron por la mitad, usándose una mitad para extraer colagenasa y gelatinasa, y usándose la otra mitad para analizar el contenido en colágeno. Se analizaron el contenido en colágeno y la actividad de colagenasa usando los protocolos anteriormente descritos. La actividad de colagenasa se analizó usando colágeno desnaturalizado (gelatina) como substrato. Se incubó substrato de [^{3}H-metil]gelatina radiomarcado con la enzima extraída a 37ºC durante 4 hr. Se precipitó la gelatina no digerida por adición de gelatina sin marcar, y TCA al 45%. Después de la centrifugación, los sobrenadantes que contenían los productos de degradación de la gelatina se contaron en un espectrómetro de centelleo
líquido.

Se analizaron las dos MMPs (colagenasa y gelatinasa) en ausencia de activación por APMA y con incubación de los extractos de enzimas con APMA. Los resultados sin activación se describen en la Tabla 4, a continuación. La actividad de colagenasa se expresa como la velocidad de descomposición de colágeno, esto es, ng de colágeno degradado/hr/mg de proteína (\pmS.E.M.). La actividad de gelatinasa se expresa como la velocidad de descomposición de gelatina, esto es, mg de gelatina degradada/hr/mg de proteína (\pmS.E.M.).

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TABLA 4

Grupo experimental	Colagenasa	Gelatinasa
Normales	138\pm18	0,6\pm0,2
Normales + CMT-6 al 3%	84\pm50	0,3\pm0,1
Diabéticas (Día=0)	333\pm48	1,7\pm0,1
Diabéticas (Día=7)	330\pm41	1,1\pm0,1
Diabéticas + CMT-6 al 1%	48\pm29	0,8\pm0,1
Diabéticas + CMT-6 al 3%	38\pm20	0,4\pm0,1

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Como se observa en la Tabla 4, ambos niveles de colagenasa y de gelatinasa fueron elevados en los tejidos de heridas diabéticas tratadas con vehículo. Esencialmente la totalidad (90-95%) de las MMPs en los extractos fue activa, y muy poca fue activable por APMA o latente. El escaneado del fluorograma reveló que se había degradado un 48% del colágeno por los tejidos de las ratas diabéticas. A tiempo = 0, los tejidos de piel de ratas diabéticas también contenían colagenasa activa y gelatinasa activa. En las heridas tratadas con CMT al 1% o 3%, los niveles de colagenasa y gelatinasa se redujeron de una manera dependiente de la dosis. La piel de ratas normales no mostró actividad de colagenasa al tiempo 0. Sin embargo, al producir heridas en la piel de ratas no diabéticas se indujo un aumento de la actividad de colagenasa (17% de colágeno degradado) y al tratar las heridas con CMT-6 al 3% se redujo significativamente la gelatinasa activa (P<0,05), pero se redujo la colagenasa a un grado que no fue significativo.

Por lo tanto, aunque se han descrito las que en el momento presente se piensa que son las realizaciones preferidas de la presente invención, los expertos en la técnica se darán cuenta que se pueden hacer otras y posteriores realizaciones sin alejarse del alcance de la invención, y que se tiene intención de incluir todas las modificaciones y cambios posteriores que vengan dentro del alcance de las reivindicaciones establecidas en el presente documento.

Bibliografía

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Clark, RAF, "Biology of dermal wound repair", Dermatol. Clinics 11(4):647-666(1993).

Golub y col., J. Periodontal Res. 20:12 (1985).

Golub LM, NS Ramamurthy, TF McNamara, RA Greenwald y BR Rifkin, "Tetracyclines inhibit connective tissue breakdown: New therapeutic implications for an old family of drugs", Crit. Rev. in Oral Biol. and Med. 2(2): 297-322 (1991).

Golub y col., J.A.D.A. 125:163 (1994).

Inoue, M, G Kratz, A Haegerstand, y M St\mathring{a}hle-Bäckdahl, "Collagenase expression is rapidly induced in wound-edge keratinocytes after acute injury in human skin, pesists during healing, and stops at re-epithelialization", J. Invest. Dermatol. 104(4): 479-483 (1995).

Mitscher, LA, The Chemistry of the Tetracycline Antibiotics, Ch. 6, Marcel Dekker, Nueva York (1978). Ramamurthy, NS, LM Golub, y M Leung, "The effect of diabetes on lysyl oxidase activity and extractability of newly synthesized collagen in rat gingiva and skin,"Gerodontology 2:15-19 (1983).

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Stegmann, H, "A microcolorimetric assay for hydroxyproline", Hoppe-Seylers Z Physiol. Chem. 311:41-45 (1958).

Claims

1. Uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento para favorecer la cicatrización de heridas en un mamífero que tiene una herida por trauma agudo a un tejido epitelializado, en el que el compuesto de tetraciclina se usa en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana, pero que es eficaz para mejorar la cicatrización de heridas en el sujeto.

2. Uso según se describe en la reivindicación 1, en el que el sujeto tiene dificultada la capacidad de cicatrización de heridas.

3. Uso según se describe en la reivindicación 1, en el que dicho compuesto de tetraciclina sustancialmente no se absorbe sistémicamente.

4. Uso según se describe en la reivindicación 1, en el que dicho medicamento que comprende dicho compuesto de tetraciclina se administra tópicamente a dicho tejido epitelializado.

5. Uso según se describe en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el compuesto de tetraciclina es CMT-2 o CMT-6.

6. Uso según se describe en la reivindicación 2, en el que la dificultad de la cicatrización de heridas se caracteriza por el aumento de la actividad proteolítica en el tejido epitelializado del mamífero.

7. Uso según se describe en la reivindicación 6, en el que el aumento de la actividad proteolítica comprende una mayor actividad colagenolítica o una mayor la actividad gelatinolítica o ambas.

8. Uso según se describe en una cualquiera de las precedentes reivindicaciones, en el que dicho tejido epitelializado es la piel.

9. Uso según se describe en la reivindicación 1,

a) que comprende el uso de un primer compuesto de tetraciclina para la fabricación de un primer medicamento para administración tópica, siendo dicho primer compuesto de tetraciclina sustancialmente incapaz de distribución sistémica en dicho mamífero; y

b) uso de un segundo compuesto de tetraciclina para la fabricación de un segundo medicamento para administración sistémica, siendo dicho segundo compuesto de tetraciclina capaz de distribución sistémica sustancial en dicho mamífero.

10. Uso según se describe en la reivindicación 1, en el que el compuesto de tetraciclina se usa en la fabricación de dicho medicamento junto con una cantidad anti-inflamatoria de un fármaco anti-inflamatorio no esteroideo.

11. Uso de un compuesto de tetraciclina para la fabricación de un medicamento según se describe en la reivindicación 1, en el que el medicamento es para aumentar colágeno en tejido epitelializado sometido a una herida aguda, en el que el compuesto de tetraciclina se introduce en el tejido epitelializado en una cantidad que no tiene sustancialmente actividad antibacteriana, pero que es suficiente para aumentar el contenido en colágeno en el tejido epitelializado.

12. Uso según se describe en la reivindicación 11, en el que el compuesto de tetraciclina sustancialmente no se absorbe sistémicamente.

13. Uso según se describe en la reivindicación 11, en el que el compuesto de tetraciclina es CMT-2 o CMT-6.

14. Uso según se describe en la reivindicación 11, en el que el tejido epitelializado es un tejido epitelializado de un sujeto que tiene niveles de colágeno anormalmente bajos.

15. Uso según se describe en la reivindicación 11, en el que el mayor contenido en colágeno se asocia con un descenso en la actividad colagenolítica en el tejido epitelializado.

16. Uso según se describe en la reivindicación 11, en el que el tejido epitelializado es la piel.

17. Uso según se describe en la reivindicación 11, en el que el compuesto de tetraciclina usado para la fabricación de dicho medicamento se introduce en dicho tejido epitelializado junto con una cantidad anti-inflamatoria de un fármaco anti-inflamatorio no esteroideo.