ES2242411T3 - Agentes antibacterianos. - Google Patents
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Abstract
El uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal, hidrato o solvato farmacéutica o veterinariamente aceptable del mismo en la preparación de una composición antibacteriana: en la que R2 representa un grupo alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, cicloalquil(alquil C1-C6)- o aril(alquil C1-C6)-, y A representa un grupo de fórmula (IA), o (IB): en la que R4 representa la cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural, y R5 y R6 son cada uno de forma independiente hidrógeno o alquilo C1-C6, compuesto heterocíclico o aril(alquil C1-C6)-, o R5 y R6 cuando se toman junto con el átomo de nitrógeno al que se encuentran unidos forman de manera opcional un anillo heterocíclico saturado y sustituido de 3 a 8 átomos, cuyo anillo está condensado opcionalmente a un compuesto carbocíclico o a un segundo anillo heterocíclico.
Description
Agentes antibacterianos.
Esta invención se refiere al uso de derivados de
N-formil hidroxilamina como agentes antibacterianos,
a una nueva clase de tales compuestos y a composiciones
farmacéuticas y veterinarias que comprenden tales compuestos.
En general, los patógenos bacterianos se
clasifican como gram-positivos o como
gram-negativos. Muchos agentes antibacterianos
(incluyendo los antibióticos) son específicos frente a una u otra
clase Gram de patógenos. Por lo tanto se considera de manera general
que los agentes antibacterianos eficaces frente a patógenos
gram-positivos y a patógenos
gram-negativos tienen un amplio espectro de
actividad.
Se conocen muchas clases de agente
antibacterianos, que incluyen penicilinas y cefalosporinas,
tetraciclinas, sulfonamidas, monobactamas, fluoroquinolonas y
quinolonas, aminoglucósidos, glucopéptidos, macrólidos, polimixinas,
lincosamidas, trimetoprima y cloranfenicol. Los mecanismos de acción
fundamentales de estas clases antibacterianas varían.
La resistencia bacteriana a muchos
antibacterianos conocidos es un problema creciente. Por
consiguiente, existe una continua necesidad en la técnica de agentes
antibacterianos alternativos, especialmente los que tengan
mecanismos de acción fundamentalmente diferentes de los de las
clases conocidas.
Entre los patógenos
Gram-positivo, tales como estafilococos,
estreptococos, micobacterias y enterococos, han surgido o se han
desarrollado cepas resistentes, que los hacen particularmente
difíciles de erradicar. Ejemplos de tales cepas son
Staphylococcus aureus (SARM) resistente a meticilina,
estafilococos coagulasa negativos resistentes a la meticilina
(SCNRM), Streptococcus pneumoniae resistente a penicilina y
Enterococcus faecium multirresistentes.
Con frecuencia, las bacterias patógenas son
resistentes a los antibióticos de tipo aminoglucósido,
\beta-lactama (penicilinas y cefalosporinas) y
cloranfenicol. Esta resistencia implica la inactivación enzimática
del antibiótico mediante hidrólisis o mediante formación de
derivados inactivos. La familia de antibióticos de
\beta-lactama (penicilina y cefalosporina) se
caracteriza por la presencia de una estructura de anillo de
\beta-lactama. La resistencia a esta familia de
antibióticos en las cepas clínicas se debe, de la manera más común,
a la producción de una enzima "penicilinasa"
(\beta-lactamasa) por bacteria resistente, que
hidroliza el anillo de \beta-lactama eliminando de
esta forma su actividad antibacteriana.
Recientemente, han emergido unas cepas de
enterococo resistentes a la vancomicina (Woodford N. 1998
Glycopeptide-resistant enterococci: a decade of
experience. Journal of Medical Microbiology.
47(10):849-62). Los enterococos resistentes a
la vancomicina son particularmente peligrosos ya que son causa
frecuente de infecciones en los hospitales y son resistentes de
forma inherente a la mayoría de los antibióticos. La vancomicina
funciona uniéndose a los residuos terminales
D-Ala-D-Ala del
precursor de peptidoglucano de la pared celular. La resistencia de
elevado nivel a de la vancomicina se conoce como VanA y es conferida
por unos genes localizados en un elemento transportable que modifica
los residuos terminales
D-Ala-D-lac,
disminuyendo de esta forma la afinidad por la vancomicina.
A la vista del rápido surgimiento de bacterias
multirresistentes a fármacos, es de suma importancia el desarrollo
de agentes antibacterianos con nuevos modos de acción que sean
eficaces frente al número creciente de bacterias resistentes,
particularmente frente al enterococo resistente a vancomicina y a
las bacterias resistentes a los antibióticos
\beta-lactámicos, tales como Staphylococcus
aureus resistente a meticilina.
La invención se basa en el descubrimiento de que
determinados derivados de N-formil hidroxilamina
tienen actividad antibacteriana, y pone a disposición una nueva
clase de agentes antibacterianos. Los inventores han encontrado que
los compuestos a los que afecta esta invención son antibacterianos
respecto a un intervalo de organismos gram-positivos
y gram-negativos.
Aunque puede ser interesante establecer el
mecanismo de acción de los compuestos a los que afecta la invención,
es su capacidad para inhibir el crecimiento bacteriano lo que les
hace útiles. No obstante, en la actualidad se cree que su actividad
antibacteriana se debe, al menos en parte, a la inhibición
intracelular de la polipéptido-deformilasa
bacteriana (PDF; EC 3.5.1.31).
Toda la síntesis de proteínas mediada por
ribosomas comienza con un residuo de metionina. En procariontes, el
resto metionilo transportado por tRNA iniciador es
N-formilado antes de su incorporación al
polipéptido. Consecuentemente, la N-formilmetionina
está siempre presente en el extremo N del polipéptido bacteriano
naciente. No obstante, la mayoría de las proteínas maduras no
retienen el grupo N-formilo o el residuo de
metionina terminal. La desformilación es necesaria antes de la
retirada de la metionina, dado que la
metionina-aminopeptidasa no reconoce péptidos con un
residuo de formilmetionina N-terminal (Solbiati y
col., J. Mol. Biol. 290:607-614, 1999). Por lo
tanto, la desformilación es una etapa crucial en la biosíntesis de
proteínas bacterianas y la enzima responsable, PDF, resulta esencial
para el crecimiento bacteriano normal. Aunque el gen que codifica la
PDF (def) está presente en todas las bacterias patógenas de
secuencias conocidas (Meinnel y col., J. Mol. Biol.
266:939-949, 1997), no tiene equivalente eucarionte,
convirtiéndolo en un objetivo atractivo para la quimioterapia
antibacteriana.
El aislamiento y la caracterización de PDF ha
sido facilitado mediante la comprensión de la importancia del ion
metálico en el sitio activo (Groche y col., Biophys. Biochem. Res.
Commun., 246:324-326, 1998). La forma de Fe^{+2}
es altamente activa in vivo pero es inestable cuando se aísla
debido a degradación oxidativa (Rajagopalan y col., J. Biol. Chem.
273:22305-22310, 1998). La forma de Ni^{+2} de la
enzima tiene actividad específica comparable con la enzima ferrosa
pero es insensible al oxígeno (Ragusa y col, J. Mol. Biol. 1998,
280:515-523, 1998). La enzima Zn^{+2} también es
estable pero está casi desprovista de actividad catalítica
(Rajagopalan y col., J. Am. Chem. Soc.
119:12418-12419, 1997).
Se han publicado diferentes estructuras
cristalinas de rayos-X y estructuras de RMN de PDF
de E. coli, con y sin inhibidores unidos (Chan y col.,
Biochemistry 36:13904-13909, 1997; Becker y col.,
Nature Struct. Biol. 5:1053-1058, 1998; Becker y
col., J. Biol. Chem. 273:11413-11416, 1998; Hao y
col, Biochemistry, 38:4712-9, 1999; Dardel y col.,
J. Mol. Biol. 280:501-513, 1998; O'Connell y col.,
J. Biomol. NMR, 13:311-324, 1999), que indican
similitudes en la geometría de sitio activo con las
metaloproteinasas tales como termolisina y metcincinas.
Recientemente, la especificidad de substrato de
PDF ha sido ampliamente estudiada (Ragusa y col., J. Mol. Biol.
289:1445-1457, 1999; Hu y col., Biochemistry
38:643-650, 1999; Meinnel y col., Biochemistry,
38:4287-4295, 1999). Estos autores concluyen que es
preferible una cadena hidrófoba no ramificada en P1', mientras que
se acepta una gran variedad de sustituyentes de P2' y un
sustituyente aromático puede resultar ventajoso en la posición P3'.
También ha habido informes de que pequeños compuestos peptídicos que
contienen un grupo H-fosfonato de unión a metal (Hu
y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 8:2479-2482, 1998)
o tiol (Meinnel y col., Biochemistry, 38:4287-4295,
1999) son inhibidores micromoleculares de PDF. También se ha
mostrado que los aldehídos de péptido tales como calpeptina
(N-Cbz-Leu-norleucinal)
inhiben PDF (Durand y col., Arch. Biochem. Biophys.,
367:297-302, 1999). No obstante, la identidad del
grupo de unión a metal y su distancia del resto de la molécula
("fragmento de reconocimiento") no se han estudiado de manera
amplia. Además, no se han identificado inhibidores de PDF no
peptídicos, que puedan ser deseables desde el punto de vista de la
permeabilidad de la pared celular bacteriana o de la
biodisponibilidad oral en especies huéspedes.
Determinados derivados de
N-formil hidroxilamina han sido previamente
reivindicados en las publicaciones de patente mencionadas
anteriormente, aunque se han realizado y descrito de manera
específica muy pocos ejemplos de tales compuestos:
| Documento EP-B-0236872 | (Roche) |
| Documento WO 92/09563 | (Glycomed) |
| Documento WO 96/23791 | (Syntex) |
| Documento WO 96/16027 | (Syntex/Agouron) |
| Documento WO 97/03783 | (British Biotech) |
| Documento WO 97/18207 | (DuPont Merck) |
| Documento WO 98/38179 | (GlaxoWellcome) |
| Documento WO 98/47863 | (Labs Jaques Logeais) |
La utilidad farmacéutica atribuida a los
derivados de N-formil hidroxilamina en esas
publicaciones es la capacidad para inhibir las metaloproteinasas de
la matriz (MMP) y en algunos casos la liberación del factor de
necrosis del tumor (TNF), (véase también el documento WO 94/10990),
y por tanto el tratamiento de las enfermedades o trastornos mediados
por esas enzimas, tal como cáncer y artritis reumatoide. Esta
técnica anterior no describe o implica que los derivados de
N-formil hidroxilamina tengan actividad
antibacteriana.
Además de estos, el documento
US-A-4.738.803 (Roques y col.) y la
publicación de Fournie-Zaluski y col., J. Med. Chem.
1985: 28, 1158-1169, también describe los derivados
de N-formil hidroxilamina, no obstante, estos
compuestos se describen como inhibidores de encefalinasa y se
proponen para su uso como antidepresores y agentes hipotensores.
También, el documento WO 97/38705 (Bristol-Myers
Squibb) describe determinados derivados de N-formil
hidroxilamina como inhibidores enzimáticos que convierten
angiotensina y encefalinasa. Jin y col., Bioorg. Med. Chem. Let. 8
(1998) 3515-3518 describe determinados derivados de
N-formil hidroxilamina como inhibidores de
termolisina. Esta técnica anterior tampoco describe o implica que
los derivados de N-formil hidroxilamina tengan
actividad antibacteriana.
La solicitud de patente internacional pendiente
de tramitación Nº PCT/GB99/0386 (documento WO 01/10835) describe y
reivindica, entre otros, el uso de un compuesto de fórmula (I) o una
sal farmacéutica o veterinariamente aceptable del mismo en la
preparación de una composición antibacteriana:
en la que R_{2} representa un
grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido o no
sustituido, cicloalquil(alquil
C_{1}-C_{6})- o aril(alquil
C_{1}-C_{6})-, y A representa un grupo de
fórmula (IA), o
(IB):
en la que R_{4} representa la
cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural, y R_{5}
y R_{6} son cada uno de forma independiente hidrógeno o alquilo
C_{1}-C_{6}, compuesto heterocíclico o
aril(alquil C_{1}-C_{6})- o R_{5} y
R_{6} cuando se toman junto con el átomo de nitrógeno al que se
encuentran unidos forman de manera opcional un anillo heterocíclico
saturado y sustituido de 3 a 8 átomos, cuyo anillo está condensado
opcionalmente a un compuesto carbocíclico o a un segundo anillo
heterocíclico.
La presente invención proporciona miembros
adicionales de la clase de compuestos descritos en el documento
PCT/GB99/00386, pero que no se identificaron de manera específica o
pusieron ejemplos en él. Como miembros de la clase descrita en el
documento PCT/GB99/00386, los presentes compuestos son activos desde
el punto de vista antibacteriano, y se cree que sus mecanismos de
acción son debidos al menos en parte a su capacidad para inhibir las
deformilasas de péptido bacterianas.
Por consiguiente, la presente invención
proporciona un compuesto de fórmula (I) como se ha definido
anteriormente, seleccionado del grupo constituido por:
N-[3S-(4-bencilpiperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-3-ciclopentil-2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-propionamida,
N-[2R-(4-bencil-piperidin-1-carbonil)-hexil]-N-hidroxi-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(2-metilpiperidin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(piperidin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(piperazin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
pirrolidin-1-ilamida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
metil-(1-metil-piperidin-4-il)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
N-[2R-(acepan-1-carbonil)-hexil]-N-hidroxi-formamida,
(4-metil-piperazin-1-il)amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]hexanoico,
diisopropilamida del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]hexanoico,
éster etílico del ácido
1-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-piperidin-3-carboxílico,
éster etílico del ácido
4-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-piperazin-1-carboxílico,
yoduro de
4-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-1,1-dimetil-piperazinio,
[2,2-dimetil-1S-(piperidin-1-carbonil)-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(3,4-dihidro-1H-isoquinolina-2-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-4-hidroxi-piperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
(3-bencilsulfanil-1S-dimetilcarbamoil-propil)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
éster bencílico del ácido
3S-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoilamino}-N,N-dimetilsuccinámico,
éster bencílico del ácido
4S-dimetilcarbamoil-4-{2R[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoilamino}-butírico,
cloruro de
(5S-dimetilcarbamoil-5-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoilamino}-pentil)-dimetil-amonio,
(1-carbamoil-2,2-dimetilpropil)amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-butírico,
(1-carbamoil-2,2-dimetilpropil)amida
del ácido
2-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
2R-[2-(4-clorofenil)-3-(formil-hidroxi-amino)-propionilamino]-2S-3,3,N,N-tetrametil-butiramida,
[2(3,4-dihidroxifenil)-etil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[2(4-hidroxifenil)-etil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico
y las sales, hidratos y solvatos farmacéutica y
veterinariamente aceptables de los mismos.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona el uso de un compuesto específicamente mencionado justo
antes, o una sal, solvato e hidrato farmacéutica o veterinariamente
aceptables del mismo, en la preparación de una composición
antibacteriana.
De los compuestos de la invención, los siguientes
se prefieren especialmente ahora por su potencia como agentes
antibacterianos:
N-[3S-(4-bencilpiperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-3-ciclopentil-2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-propionamida,
metil-(1-metil-piperidin-4-il)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-4-hidroxi-piperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-piperazin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
(3-bencilsulfanil-1S-dimetilcarbamoil-propil)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
y
(1-carbamoil-2,2-dimetil-propil)amida
del ácido
2-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico.
Sobre la hipótesis de que los compuestos (I)
actúan mediante inhibición de la PDF intracelular, puede lograrse el
efecto antibacteriano más potente mediante el uso de compuestos que
atraviesen eficazmente la pared celular bacteriana. Así, para su uso
de acuerdo con la invención, se prefieren compuestos que sean muy
activos como inhibidores de PDF in vitro y que penetren en
las células bacterianas. Se debe esperar que la potencia
antibacteriana de los compuestos que son potentes inhibidores de la
enzima PDF in vitro, pero penetran poco en la célula, puede
mejorarse mediante su uso en forma de profármaco, es decir un
análogo modificado estructuralmente que se convierte en la molécula
parental de fórmula (I), por ejemplo mediante acción enzimática,
después de que ha atravesado de la pared celular bacteriana.
Las sales de los compuestos de la invención
incluyen sales de adición de ácidos aceptables fisiológicamente por
ejemplo clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, metanosulfonatos,
p-toluensulfonatos, fosfatos, acetatos, citratos,
succinatos, lactatos, tartratos, fumaratos y maleatos. También
pueden formarse sales con bases, por ejemplo, sales de sodio,
potasio, magnesio y calcio.
Las composiciones a las que hace referencia la
invención pueden prepararse para administración por cualquier vía
consistente con las propiedades farmacocinéticas del(de los)
principio(s) activo(s).
Las composiciones administrables por vía oral
pueden estar en forma de comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos,
pastillas, preparaciones líquidas o de gel, tales como soluciones o
suspensiones orales, tópicas, o parenterales estériles. Los
comprimidos y las cápsulas para administración oral pueden estar en
forma de presentación de dosis unitaria, y pueden contener
excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, por
ejemplo jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o
polivinilpirrolidona; cargas por ejemplo lactosa, azúcar, almidón de
maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricantes de
formación de comprimidos, por ejemplo estearato de magnesio, talco,
polietilenglicol o sílice; disgregantes por ejemplo almidón de
patata o agentes humectantes aceptables tales como laurilsulfato de
sodio. Los comprimidos se pueden recubrir de acuerdo con
procedimientos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal.
Las preparaciones líquidas orales pueden estar en forma de, por
ejemplo, suspensiones, disoluciones, emulsiones, jarabes o elixires
acuosos u oleosos, o pueden presentarse en forma de producto anhidro
para reconstitución en agua o en otro vehículo apropiado antes de su
uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos
convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo,
sorbitol, jarabe, metilcelulosa, jarabe de glucosa, grasas
comestibles hidrogenadas con gelatina; agentes emulsionantes, por
ejemplo lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga; vehículos
no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo
aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos
tales como glicerina, propilenglicol o alcohol etílico;
conservantes, por ejemplo p-hidrobenzoato de metilo
o de propilo o ácido sórbico, y si se desea, aromatizantes
convencionales o agentes colorantes.
Para aplicación tópica sobre la piel, el
principio(s) activo(s) puede prepararse en forma de
crema, loción o pomada. Las formulaciones de crema o pomada que
pueden usarse para el medicamento son formulaciones convencionales
bien conocidas en la técnica, por ejemplo como se describe en los
libros de texto estándar de farmacia tal como la Farmacopea
Británica.
El(los) principio(s)
activo(s) también pueden administrarse por vía parenteral en
un medio estéril. Dependiendo del vehículo y de la concentración
usada, el medicamento pueden estar suspendido o disuelto en el
vehículo. De manera ventajosa, pueden disolverse en el vehículo
adyuvantes tales como anestésicos locales, conservantes y agentes de
tamponamiento. La infusión intravenosa es otra vía de administración
para los compuestos usados de acuerdo con la invención.
Las dosis seguras y eficaces para las diferentes
clases de paciente y para los diferentes estados de la enfermedad se
determinarán mediante ensayo clínico como es necesario en la
técnica. Se comprenderá que el nivel de dosis específica para
cualquier paciente en particular dependerá de una serie de factores
que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la
edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la
alimentación, el tiempo de administración, la vía de administración,
la velocidad de eliminación, la combinación de medicamentos y la
gravedad de la enfermedad en particular que se somete a terapia.
Los siguientes ejemplos describen la preparación
de los compuestos de la invención. En los ejemplos, se registraron
los espectros de RMN de ^{1}H y ^{13}C usando un espectrómetro
Bruker DPX 250 a 250,1 y 62,9 MHz, respectivamente. Se obtuvieron
los espectros de masas usando un espectrómetro Perkin Elmer Sciex
API 165, usando ambos modos de ionización positiva y negativa. Se
registraron los espectros infrarrojos en un espectrómetro Perkin
Elmer PE 1600 FTIR. Se han usado las siguientes abreviaturas:
- DIAD
- Diisopropilazodicarboxilato
- DIPEA
- Diisopropiletilamina
- DMF
- N,N-dimetilformamida
- EDC
- Clorhidrato de 1-(3-Dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
- HOAt
- 1-Hidroxi-7-aza-benzotiazol
- HOBt
- 1-Hidroxibenzotriazol
- EMBR
- Espectrometría de masas de baja resolución
- THF
- Tetrahidrofurano
Se preparó el compuesto del título como se
detalla a continuación (véase también el esquema 1).
Esquema
1
Reactivos y condiciones: A: TiCl_{4}, trioxano,
CH_{2}Cl_{2}; B: H_{2}O_{2}, LiOH; C: H_{2}NOB_{n}, WSC,
THF/H_{2}O; D: Ph_{3}P, DIAD, THF; E: LiOH, THF/MeOH/H_{2}O;
F: anhídrido acético fórmico, NEt_{3}, THF; G:
H-Tle-amida, EDCI, HOAt, DMF; H:
Pd/C, H_{2}, MeOH.
Etapa
A
Se añadió una disolución de tetracloruro de
titanio (1M en diclorometano, 73,25 ml, 73,2 mmol), gota a gota, a
una disolución agitada y fría (0ºC) de
4S-bencil-(3-ciclopentil-propionil)-oxazolidin-2-ona
(21 g, 69,8 mmol) en diclorometano (350 ml). La suspensión
amarillenta resultante se agitó durante 10 minutos a 0ºC y
posteriormente se añadió gota a gota DIPEA (13,37 ml, 76,7 ml) para
proporcionar una disolución de color rojo oscuro. La agitación se
mantuvo durante 1 h a 0ºC y posteriormente se añadió gota a gota una
disolución de s-trioxano (7,53 g, 83,7 mmol), en
diclorometano (70 ml), seguido de la adición de una disolución de
tetracloruro de titanio (1M en diclorometano, 73,25 ml, 73,2 mmol).
Posteriormente, se agitó la mezcla de reacción durante 4 h a 0ºC. Se
añadió una disolución acuosa saturada de cloruro de amonio (250 ml)
a la mezcla de reacción y se extrajo la fase acuosa con
diclorometano adicional (2x300 ml). Las fases orgánicas combinadas
se lavaron con agua (150 ml) y con salmuera (80 ml), se secaron
sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a
vacío para dar lugar a un sólido amarillo que, tras trituración con
éter dietílico, proporcionó un sólido blanco (16,57 g, 72%).
RMN-^{1}H; \delta (CDCl_{3}),
7,38-7,22 (5H, m), 4,70 (1H, m),
4,22-4,18 (2H, m), 3,99 (1H, m),
3,96-3,75 (2H, m), 3,31 (1H, dd, J = 13,4 y 3,3 Hz),
2,82 (1H, dd, J = 13,4 y 9,4 Hz), 2,24 (1H, dd, J = 8,3 y 4,5 Hz),
2,81-1,30 (4H, m) y 1,13 (1H, m);
RMN-^{13}C; \delta (CDCl_{3}), 176,3, 153,6,
135,2, 129,5, 129,0, 127,4, 66,2, 64,2, 55,7, 44,8, 37,9, 37,8,
34,6, 33,0, 32,4 y 25,1.
Etapa
B
Se añadió peróxido de hidrógeno acuoso al 27,5%
(24 ml, 194 mmol), seguido de hidróxido de litio monohidratado (4,07
g, 97 mmol) en agua (50 ml) a una disolución agitada y fría (0ºC) de
4S-bencil-3-[3-ciclopentil-2R-hidroximetil-propionil]-oxazolidin-2-ona
(16,05 g, 48,5 mmol) en THF-agua (4:1, 250 ml). Tras
completarse la reacción (30 min), se retiró el THF a vacío. La fase
acuosa se extrajo con diclorometano (3x100 ml) y se acidificó hasta
pH 2 con ácido clorhídrico 4M. La fase acuosa se extrajo con éter
dietílico (2x150 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con
salmuera (60 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se
filtraron. Se retiró el disolvente a vacío para dar lugar a un
aceite amarillo que después se purificó por cromatografía en columna
(acetato de etilo al 25% en hexanos hasta acetato de etilo al 100%)
para proporcionar el compuesto del título en forma de aceite (8,3 g,
cuant.). RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}),
6,60-5,90 (1H, s ancho), 3,80-3,78
(2H, m), 2,67 (1H, m), 1,98-1,40 (9H, m) y
1,20-0,98 (2H, m). RMN-^{13}C;
\delta(CDCl_{3}), 181,0, 63,2, 46,9, 37,8, 34,5, 32,7,
32,6, 25,1 y 25,1.
Etapa
C
Se añadió O-bencilhidroxilamina a
una mezcla agitada y fría (0ºC) de ácido
3-ciclopentil-2R-hidroximetil-propiónico
(1,1 g, 6,4 mmol) e THF-agua (4:1, 30 ml). Se ajustó
el pH de la disolución resultante a 4,5 mediante adición de ácido
clorhídrico 1M, y posteriormente se añadió de una vez EDC (1,84 g,
9,6 mmol). Se agitó la disolución resultante durante 2,5 h a
temperatura ambiente al tiempo que se controlaba el pH a 4,5
mediante la adición de ácido clorhídrico 1M. Tras retirar el THF, se
extrajo la fase acuosa con acetato de etilo (3x40 ml) y se lavaron
las fases orgánicas combinadas con ácido cítrico al 10% (3x15 ml),
hidrogenocarbonato de sodio al 5% y se secó sobre sulfato de
magnesio anhidro. Se retiró el disolvente a vacío para dar lugar al
compuesto del título sin ninguna purificación adicional.
RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}), 8,14 (1H,
s ancho), 7,40-7,34 (5H, m), 4,94 (2H, s ancho),
3,76-3,66 (2H, m), 1,79-1,47 (11H,
m) y 1,17-0,97 (2H, m). EMBR: ionización positiva
278 [M+H], 555 [2M+H].
Etapa
D
Se añadió DIAD (6,12 ml, 31,1 mmol), gota a gota,
a una disolución agitada y fría (0ºC) de
N-benciloxi-3-ciclopentil-2R-hidroximetil-propionamida
(8,63 g, 31,1 mmol). La disolución resultante se agitó a temperatura
ambiente durante la noche. Tras retirar el THF a vacío, el residuo
se purificó por cromatografía en columna (hexanos:acetato de etilo,
5:1 a 3:1) para dar el producto deseado en forma de sólido blanco
(6,7 g, 83%). RMN-^{1}H;
\delta(CDCl_{3}), 7,76-7,39 (5H, m), 4,94
(2H, s ancho), 3,36 (1H, m), 2,96-2,80 (2H, m),
1,89-1,38 (9H, m) y 1,18-0,98 (2H,
m). RMN-^{13}C; \delta(CDCl_{3}),
167,7, 129,6, 129,3, 129,0, 78,1, 52,5, 45,1, 39,1, 35,2, 33,1,
32,9, 25,5, y 25,3. EMBR: ionización positiva 260 [M+H], 519
[2M+H].
Etapa
E
Se añadió hidróxido de litio
monohidratado(1,3 g, 31,0 mmol) en agua (25 ml) a una
disolución agitada y fría (0ºC) de
N-benciloxi-3R-ciclopentilmetil-acetidin-2-ona
(6,7 g, 25,8 mmol) en THF-metanol (3:1, 100 ml). Se
agitó la mezcla de reacción y se dejó calentar hasta temperatura
ambiente durante la noche. Se retiró el disolvente a vacío y se
extrajo la fase acuosa con éter dietílico, posteriormente se
acidificó a pH 2 mediante a adición de ácido clorhídrico 4M. Se
extrajo la fase acuosa con éter dietílico (3x40 ml) y las fases
orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre
sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a vacío
para dar el compuesto del título en forma de cristales blancos (6,02
g, 84%). RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}),
7,68-7,30 (5H, m), 4,78-4,68 (2H,
m), 3,12-3,10 (2H, d, J = 6,9 Hz), 2,76 (1H, m),
1,91-1,39 (11H, m), 1,20-1,00 (2H,
m). RMN-^{13}C; \delta(CDCl_{3}),
180,1, 137,7, 129,0, 128,9, 128,5, 78,0, 53,9, 42,9, 38,3, 36,6,
33,1, 33,0, 25,5. EMBR: ionización negativa 276
[M-H], 553 [2M-H].
Etapa
F
Se añadió anhídrido acético fórmico (3,01 g, 34,2
mmol) y trietilamina (5,72 ml, 41,0 mmol) a una disolución agitada y
fría (0ºC) de ácido
2R-(benciloxiamino-metil)-3-ciclopentil-propiónico
(3,79 g, 13,7 mmol) en THF (20 ml). Se agitó la mezcla de reacción
durante 1 h a 0ºC y 45 min a temperatura ambiente. Se retiró el
disolvente a vacío y se purificó la mezcla por cromatografía
ultrarrápida (hexanos:acetato de etilo, 1:1) para dar el compuesto
del título en forma de un aceite amarillo (3,04 g, 73%). EMBR:
ionización negativa 304 [M-H], ionización negativa
609 [2M-H].
Etapa
G
Se añadieron EDC (274 mg, 1,43 mmol) y HOAt (8,8
mg, 0,065 mmol) a una disolución agitada y fría (0ºC) de ácido
2R-[(benciloxi-formil-amino)-metil]-3-ciclopentil-propiónico
(396 mg, 1,3 mmol) y
2S-amino-1-(4-bencil-piperidin-1-il)-3,3-dimetil-butan-1-ona
(véase a continuación) en DMF (5 ml). Se agitó la mezcla de reacción
durante la noche a temperatura ambiente. Se retiró el DMF a vacío
para proporcionar un aceite amarillo, que se disolvió en acetato de
etilo. Posteriormente se lavó la fase orgánica con ácido clorhídrico
1M (2x5 ml) y agua (5 ml). Se extrajo de nuevo la fase acuosa con
acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con
salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron
y se retiró el disolvente a vacío para proporcionar una espuma
blanca (660 mg, 88%) que se usó en la etapa siguiente sin
purificación alguna.
Etapa
H
Se añadió Pd/C (70 mg) a una disolución agitada
de
2R-[(benciloxi-formil-amino)-metil]-N-[1S-(4-bencilpiperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-3-ciclopentil-propionamida
(655 mg, 1,14 mmol) en metanol (8 ml) bajo atmósfera de argón. Se
borboteó hidrógeno gas a través de la suspensión durante 30 minutos.
Posteriormente se filtró la mezcla de reacción a través de celite y
se retiró el disolvente a vacío para proporcionar un sólido rosa
pálido (522 mg, 95%). RMN-^{1}H;
\delta(CDCl_{3}, rotámeros), 8,40 (0,4H, m), 7,83 (0,6H,
m), 7,34-7,09 (5H, m), 6,55 (1H, m), 4,90 (1H, m),
4,57 (1H, m), 4,11-3,99 (1,5H, m),
3,85-3,77 (0,8H, m), 3,63-3,59
(0,7H, m), 3,51-3,47 (0,6H, m),
3,08-2,95 (1,2H, m), 2,88-2,62
(1,2H, m), 2,57-2,49 (3H, m),
1,89-0,90 (25H, m). EMBR: ionización positiva 508
[M+Na], ionización negativa 484 [M-H].
Esquema
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Reactivos y condiciones: A. NEt_{3},
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida, MeOH; B. EDCl,
HOAt, DMF; C. Ciclohexeno, Pd/C, EtOH.
Etapa
A
Se añadieron trietilamina (26,56 ml, 190 mmol) y
N-(benciloxicarbonil-oxi)-succinimida
(24,88 g, 99,8 mmol) a una suspensión de L-terc-leucina
(11,88 g, 90,7 mmol) en metanol (200 ml). Se agitó la mezcla de
reacción a temperatura ambiente durante 14 h. Se retiró el metanol a
vacío para proporcionar un aceite viscoso amarillo pálido, que se
disolvió en acetato de etilo (100 ml). La fase orgánica se lavó con
ácido clorhídrico 1M (15 ml) y salmuera, se secó sobre sulfato de
magnesio anhidro y se filtró. Se retiró el disolvente a vacío para
proporcionar el compuesto del título en forma de aceite (24 g,
cuant.). RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}),
7,43-7,36 (5H, m), 5,36 (1H, d, J = 9,4 Hz), 5,12
(2H, s ancho), 4,20 (1H, d, J = 9,6 Hz) y 1,02 (9H, s). EMBR:
ionización positiva 266 [M+H], ionización negativa 264
[M-H], 529 [2M-H].
Etapa
B
Se añadieron EDC (734 mg, 3,83 mmol) y HOAt (10
mg, 0,07 mmol) a una disolución de ácido
2S-benciloxicarbonilamino-3,3-dimetil-butírico
(923 mg, 3,48 mmol) y
4-bencil-piperidina (735 \mul,
4,18 mmol) en DMF (16 ml). Se agitó la mezcla de reacción durante 14
h a temperatura ambiente. Se retiró el DMF a vacío y se disolvió el
residuo puro en acetato de etilo. Se lavó la fase orgánica con ácido
clorhídrico 1M (2x10 ml), agua (10 ml), salmuera (10 ml), se secó
sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró. La retirada del
disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna
(hexanos:acetato de etilo, 5:1) proporcionaron la amida deseada (784
mg, 54%). RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}),
7,36-7,14 (10H, m), 5,65 (1H, m),
5,17-5,05 (2H, m), 4,70-4,29 (2H,
m), 2,96 (1H, m), 2,57-2,47 (2H, m),
1,90-1,59 (2H, m) y 1,38-0,87 (14H,
m). EMBR: ionización positiva 423 [M+H].
\newpage
Etapa
C
Se añadió paladio al 10% sobre carbón (70 mg) y
ciclohexeno (380 \mul, 3,71 mmol) a una disolución agitada de
éster bencílico del ácido
2S-[1-(4-bencil-piperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil-carbámico
(784 mg, 1,86 mmol) en etanol (4 ml). Se calentó la suspensión a
75ºC durante 1,5 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de
Celite y se retiró el disolvente a vacío para dejar
cuantitativamente el compuesto del título en forma de aceite
viscoso. RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}),
7,32-7,12 (5H, m), 4,69 (1H, m), 4,01 (1H, m), 3,53
(1H, m), 2,86 (1H, m), 2,63-2,45 (3H, m),
1,80-1,63 (3H, m), 1,30-1,08 (3H,
m), 0,99 (4,5H, m) y 0,94 (4,5H, m). EMBR: ionización positiva 289
[M+H].
Ejemplos
2-12
Se prepararon los compuestos de los ejemplos
2-12 (Tabla 1) en orden usando el procedimiento
genérico explicado a continuación (véase también el esquema 3).
Esquema
3
Reactivos y condiciones: A. Piperidina, HCHO,
EtOH, 80ºC, o/n; B. ^{t}BuCOCl, Et_{3}N posteriormente
3-litio-4-bencil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona;
C. H_{2}NOBzl, temperatura ambiente, o/n posteriormente pTsOH,
EtOAc; D. LiOH, THF acuoso, 0ºC; E. anhídrido acético fórmico,
Et_{3}N, THF; F. PfpOH, EDC, HOBt. THF; G. Amina; H. Ciclohexeno,
Pd/C, EtOH.
Se realizó una HPLC analítica en un Beckman
System Gold, usando una columna C18 de Waters Nova Pak (150 mm, 3,9
mm) con un gradiente de disolvente B de 20 a 90% (1ml/min) como fase
móvil. [Disolvente A: TFA al 0,05% en agua al 10% y metanol al 90%;
Disolvente B: TFA al 0,05% en 90% de metanol al 10%], longitud de
onda de detección a 230 nm. Se realizó la HPLC preparativa en un
instrumento de autopreparación Gilson usando un cartucho delta
prep-pak C18 Waters (15 \mum, 300 A, 25 mm, 10 mm)
con un gradiente de disolvente B al 20 a 90% como fase móvil.
[Disolvente A agua; Disolvente B: metanol], detección UV fue a 230
nm.
Etapa
A
Se añadió piperidina (12,76 ml, 129 mmol) y
formaldehído acuoso al 37% (40,3 ml, 538 mmol) a una disolución de
ácido n-butilmalónico (17,2 g, 107 mmol) en etanol
(200 ml). Se calentó la disolución a 80ºC, tiempo durante el cual
apareció un precipitado y se redisolvió gradualmente durante 1 hora.
Se agitó la mezcla de reacción a 80ºC durante la noche y
posteriormente se enfrió hasta temperatura ambiente. Se retiraron
los disolventes a presión reducida y el residuo se disolvió en
acetato de etilo (200 ml), se lavó sucesivamente con ácido
clorhídrico 1M y con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio
anhidro y se filtró. El producto filtrado se concentró para dar el
compuesto del título en forma de aceite transparente (13,37 g, 97%).
RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}), 6,29 (1H,
s), 5,65 (1H, s), 2,34-2,28 (2H, m),
1,54-1,26 (4H, m), 0,94 (3H, t, J = 7,1 Hz).
\newpage
Etapa
B
Se disolvió ácido
2-butil-acrílico (21,5 g, 168 mmol)
en THF anhidro (500 ml) y se enfrió hasta -78ºC bajo una atmósfera
de argón. Se añadieron trietilamina (30 ml, 218 mmol) y cloruro de
pivaloílo (21 ml, 160 mmol) a una velocidad tal que la temperatura
se mantuvo por debajo de -60ºC. Se agitó la mezcla a -78ºC durante
30 minutos, se calentó a temperatura ambiente durante 2 horas y
finalmente se volvió a enfriar a -78ºC.
En un matraz separado, se disolvió
4S-bencil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona
en THF anhidro (500 ml) y se enfrió a -78ºC bajo una atmósfera de
argón. Se añadió lentamente
n-butil-litio (disolución 2,4M en
hexanos, 83 ml, 200 mmol) y se agitó la mezcla durante 30 minutos a
temperatura ambiente. El anión resultante se transfirió a través de
una cánula al interior del recipiente de reacción original. Se dejó
calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó durante la
noche a temperatura ambiente. Se inactivó la reacción con
hidrogenocarbonato de potasio 1M (200 ml) y se retiraron los
disolventes a presión reducida. El residuo se repartió entre acetato
de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó
sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a
presión reducida para dar un aceite naranja. El análisis por TLC
reveló la presencia de un subproducto quiral sin reaccionar, además
del producto deseado. Se disolvió una parte del material (30 g) en
diclorometano y se limpió a través de una almohadilla de sílice para
dar el compuesto del título puro en forma de aceite amarillo (25,3
g). RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}),
7,31-7,19 (5H, m), 5,41 (2H, s), 4,51 (1H, dd, J =
9,7 y 4,2 Hz), 3,32 (1H, dd, J = 14,2 y 4,2 Hz), 2,82 (1H, dd, J =
14,2 y 9,7 Hz), 2,40-2,34 (2H, m),
1,48-1,32 (4H, m), 1,43 (3H, s), 1,27 (3H, s), 0,91
(3H, t, J = 7,1 Hz). Algún subproducto quiral se recuperó limpiando
la almohadilla de sílice con metanol.
Etapa
C
Se mezcló
4S-bencil-3-(2-butil-acriloil)-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona
(19,8 g, 62,8 mmol) con O-bencilhidroxilamina (15,4
g, 126 mmol) y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se
disolvió la mezcla en acetato de etilo y se lavó la disolución con
ácido clorhídrico 1M, carbonato de sodio 1M y salmuera, se secó
sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró. Se concentró el
producto filtrado a presión reducida para proporcionar un aceite
amarillo pálido (25,3 g), cuyo análisis por RMN y HPLC mostró que
contenía
4S-bencil-3-[2-(benciloxiamino-metil)-hexanoil]-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona
(aproximadamente 82% e.d.) junto con una cantidad mínima del
material de partida. El producto se combinó con otro lote (26,9 g,
76% e.d.) y se disolvió en acetato de etilo (200 ml). Se añadió
ácido p-toluensulfónico (22,7 g, 119 mmol) y la
mezcla se enfrió a 0ºC. Se obtuvo el compuesto del título en forma
de sólido cristalino blanco mediante siembra y raspado. Rendimiento:
25,2 g (diastereoisómero sencillo, 34%). También se obtuvo un
segundo producto (14,7 g, 20%, diastereoisómero sencillo).
RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}), 7,89 (2H,
d, J = 8,2 Hz), 7,37-7,12 (10H, m), 7,02 (2H, d, J
= 6,9 Hz), 5,28-5,19 (2H, m), 4,55 (1H, m), 4,23
(1H, m), 3,93 (1H, m), 3,58 (1H, m), 2,58 (1H, m), 2,35 (3H, s),
1,67-1,51 (2H, m), 1,29-1,16 (4H,
m), 1,25 (3H, s), 1,11 (3H, s), 0,80-0,75 (3H,
m).
Etapa
D
Se repartió
4S-bencil-3-[2R-(benciloxiamino-metil)-hexanoil]-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona
sal de ácido p-toluensulfónico (25,2 g, 40,2 mmol)
entre acetato de etilo y carbonato de sodio 1M. La fase orgánica se
secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se evaporó a
presión reducida. El aceite residual se disolvió en THF (150 ml) y
agua (50 ml), se enfrió a 0ºC y se trató con hidróxido de litio
(1,86 g, 44,2 mmol). La disolución se agitó durante 30 minutos a
0ºC, y posteriormente durante la noche a temperatura ambiente. La
reacción se acidificó hasta pH 4 con ácido cítrico 1M y se retiraron
los disolventes. El residuo se repartió entre diclorometano y
carbonato de sodio 1M. La fase acuosa básica se acidificó hasta pH 4
con ácido cítrico 1M y se extrajo tres veces acetato de etilo. Las
fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio
anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar el
compuesto del título en forma de aceite incoloro (7,4 g, 73%).
RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}), 8,42 (2H,
s ancho), 7,34-7,25 (5H, m),
4,76-4,66 (2H, m), 3,20-3,01 (2H,
m), 2,73 (1H, m), 1,70-1,44 (2H, m),
1,34-1,22 (4H, m) y 0,92-0,86 (3H,
m).
Etapa
E
Se añadió anhídrido acético fórmico (26,8 ml,
0,31 mmol) a 0ºC a una disolución de ácido
2R-(benciloxiamino-metil)-hexanoico
(30,6 g, 0,12 moles) en THF anhidro (300 ml). Se añadió trietilamina
(18,5 ml, 0,13 moles) y se agitó la reacción durante 1 hora a 0ºC y
durante 60 horas a temperatura ambiente. Se retiró el disolvente a
vacío para proporcionar el compuesto del título en forma de aceite
amarillo (33,6 g, 99%) que se usó en la etapa F sin purificación
adicional. RMN-^{1}H; (CDCl_{3}, rotámeros),
8,20-8,08 (0,7H, s ancho), 8,07-7,92
(0,3H, s ancho), 7,50-7,25 (5H, m ancho),
5,07-4,70 (2H, m ancho), 3,95-3,52
(2H, m ancho), 2,90-2,66 (1H, s ancho),
1,72-1,20 (6H, m ancho), 1,00-0,78
(3H, s ancho). EMBR: ionización positiva 280 [M+1].
Etapa
F
Se añadió pentafluorofenol (44,3 g, 0,24 moles),
EDC (27,7 g, 0,14 moles) y HOBt (16,2 g, 0,12 moles) a una
disolución de ácido
2R-[(benciloxi-formilamino)-metil)]-hexanoico
(7,8 g, 19,9 mmol) en THF anhidro (500 ml). Se agitó la reacción
durante la noche a temperatura ambiente. Se retiró el disolvente a
vacío y se disolvió el residuo en acetato de etilo, se lavó
sucesivamente con carbonato de sodio 1M (3x500 ml) y agua (1x500ml),
se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró. Se retiró el
disolvente a vacío para proporcionar un aceite amarillo (60 g) que
se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (5:1, hexano:acetato
de etilo \rightarrow 1:2 hexano:acetato de etilo) para dar un
aceite transparente (42,0 g, 79%). RMN-^{1}H;
\delta(CDCl_{3}, rotámeros), 8,20-8,09
(0,7H, s ancho), 8.09-7,92 (0,3H, s ancho),
7,60-7,21 (5H, m ancho), 5,00-4,70
(2H, m ancho), 4,04-3,72 (2H, m ancho),
3,18-3,00 (1H, s ancho), 1,85-1,57
(2H, m ancho), 1,50-1,26 (4H, m ancho),
1,00-0,82 (3H, m ancho); EMBR. 466 [M+H].
Etapa
G
Se llevó a cabo el acoplamiento de aminas al
éster pentafluorofenílico del ácido
2R-[(benciloxi-formil-amino)-metil]-hexanoico
en un robot de laboratorio Zymate XPII. Se añadieron aminas
individuales (0,25 mmol) a disoluciones de éster de pentafluorofenol
(55,8 mg, 0,12 mmol) en diclorometano (2 ml) y se agitaron las
mezclas de reacción a temperatura ambiente durante 60 horas. Se
llevó a cabo la purificación retirando el exceso de amina y de
pentafluorofenol usando resinas antioxidantes. El pentafluorofenol
se retiró usando un exceso del triple (0,36 mmol) de resina de
carbonato A-26 (carga de 3,5 mmol). Se añadió la
resina a las mezclas de reacción y se agitó durante 24 horas,
después de lo cual se filtró. Se retiraron los excesos de aminas
usando un exceso del triple (0,36 mmol) de resina de metilisocianato
de poliestireno (carga de 1,2 mmol). Se añadió la resina a las
mezclas de reacción y se agitó durante 4 horas, después de lo cual
se filtró. Se retiró el disolvente a vacío usando un Savant Speed
Vac Plus para dar los productos acoplados. No se calcularon los
rendimientos y se verificó la pureza e integridad de cada compuesto
usando HPLC y EMBR.
Etapa
H
Los productos de la etapa G se absorbieron en
etanol (2,7 ml) y en ciclohexeno (0,3 ml), se añadió paladio al 20%
sobre carbón y se agitaron las reacciones a 80ºC durante 24 horas.
El Pd/C se filtró y el disolvente se retiró a vacío usando un Savant
Speed Vac Plus para dar los compuestos del título (ejemplos
2-12, Tabla 1). No se calcularon los rendimientos y
se verificó la pureza e integridad de cada compuesto usando HPLC y
EMBR.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Se preparó el compuesto del título usando el
mismo procedimiento de los ejemplos 2 a 12, excepto para la
metilación final (véase el esquema 4)
Esquema
4
Reactivos y condiciones: G.
N-metilpiperazina; H. H_{2}, Pd/C, EtOH; I.Mel,
THF anhidro.
Etapa
I
Se añadió yoduro de metilo (22 \mul, 0,34 mmol)
gota a gota a 0ºC a una disolución de
N-hidroxi-N-[2R-(4-metil-piperazin-1-carbonil)-hexil]-formamida
(46 mg, 0,17 mmol) en THF anhidro (5 ml). Se agitó la mezcla de
reacción a 0ºC durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 18
horas. Se retiró el disolvente a vacío para dar el compuesto del
título en forma de sólido higroscópico blanco (68 mg, 97%).
RMN-^{1}H; CD_{3}OD, rotámeros), 8,31 (0,7H, s),
7,88 (0,3H, s), 4,44-3,20 (17H, m),
1,75-1,20 (6H, m), 1,00-0,87 (3H, t,
J = 6,6 Hz). EMBR: ionización positiva 286 [M].
Se prepararon los compuestos de los ejemplos
14-17 a partir de éster pentafluorometílico del
ácido
2R-[(benciloxi-formil-amino)-metil]-hexanoico
(ejemplo 2) y de los derivados apropiados de L-terc-leucina
por analogía con el procedimiento descrito en el ejemplo 2.
Espuma blanca. EMBR: ionización positiva 392
[M+Na], ionización negativa 368 [M-H]. HPLC: Tiempo
de retención = 20,7 min. (Pureza 88%).
Espuma blanca. EMBR: ionización positiva 440
[M+Na], ionización negativa 416 [M-H]. HPLC: Tiempo
de retención = 20,7 min. (Pureza 91%).
Espuma blanca. EMBR: ionización positiva 498
[M+Na], ionización negativa 474 [M-H]. HPLC: Tiempo
de retención = 21,0 min. (Pureza 96%).
Espuma blanca. EMBR: ionización positiva 461
[M+H]. HPLC: Tiempo de retención = 16,6 min. (Pureza 86%).
Se prepararon los compuestos de los ejemplos 18 a
25 por analogía con el procedimiento descrito en el ejemplo 2.
Goma de color amarillo pálido.
RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}, rotámeros),
8,39 (0,4H, s), 7,80 (0,6H, s), 7,27 (5H, m), 7,10 (0,4H, d, J = 7,9
Hz), 6,97 (0,6H, d, J = 8,3 Hz), 5,04 (1H, m), 4,03 (0,4H, dd, J =
14,6 y 7,6 Hz), 3,73 (2,6H, m), 3,47 (1H, m), 3,06 (1,2H, s), 3,03
(1,8H, s), 2,94 (1,2H, s), 2,92 (1,8H, s), 2,78(0,6H, m),
2,62 (0,4H, m), 2,40 (2H, m), 1,54 (8H, m) y 0,86 (3H, t, J = 6,6
Hz). ^{13}C-RMN; \delta(CD_{3}OD,
rotámeros), 176,5, 176,2, 173,8, 173,7, 140,4, 130,4, 129,9, 128,5,
128,4, 53,9, 50,7, 49,9, 45,9, 45,8, 38,1, 37,3, 36,6, 32,8, 32,1,
31,4, 31,3, 30,7, 28,9, 28,8, 28,6, 24,1 y 14,7. EMBR: ionización
positiva 424 [M+H], 446 [M+Na].
Sólido blanco. RMN-^{1}H;
\delta(CDCl_{3}, rotámeros), 8,36 (0,3H, s), 7,79 (0,7H,
s), 7,23 (6H, m), 5,30 (1H, m), 5,09 (2H, m), 3,96 (0,3H, dd, J =
14,2 y 8,6 Hz), 3,71 (0,7H, dd, J = 13,9 y 10,1 Hz), 3,47 (1H, m),
3,09 (1H, s), 3,06 (2H, s), 2,92 (1H, s), 2,91 (2H, s), 2,82 (3H,
m), 1,68 (1H, m), 1,33 (5H, m) y 0,86 (3H, m).
^{13}C-RMN; \delta(CDCl_{3},
rotámeros), 175,0, 173,1, 171,0, 170,7, 135,9, 129,0, 128,9, 128,8,
67,6, 67,3, 52,5, 49,2, 46,7, 46,4, 46,1, 45,9, 45,1, 37,7, 37,5,
37,4, 36,5, 36,4, 30,0, 29,8, 22,9 y 14,3. EMBR: ionización positiva
444 [M+Na], 422 [M+H].
Aceite amarillo pálido. EMBR: ionización positiva
458 [M+Na], ionización negativa 434 [M-H].
Aceite amarillo. RMN-^{1}H;
\delta(CDCl_{3}), 7,77 (1H, s), 7,45 (1H, d, J = 8,9 Hz),
4,99 (1H, m), 3,81 (1H, m), 3,46 (1H, m), 3,09 (6H, s), 2,98 (3H,
m), 2,97 (3H, s), 2,95 (3H, s), 1,51 (12H, s) y 0,88 (3H, m).
^{13}C-RMN; \delta(CDCl_{3}), 173,6,
171,5, 158,8, 58,2, 53,6, 48,6, 45,4, 37,6, 36,2, 31,4, 30,2, 29,7,
24,7, 23,0, 22,5 y 14,3. EMBR: ionización positiva 373 [M+H].
Sólido blanco higroscópico.
RMN-^{1}H; \delta(CDCl_{3}), 9,29
(0,4H, s), 8,41 (0,4H, s), 7,84 (0,6H, s), 6,67 (0,4H, d, J = 6,7
Hz), 6,52 (0,6H, d, J = 10,1 Hz), 4,92-4,85 (1H, m),
4,05 (0,4H, dd, J = 14,6 y 6,6 Hz), 3,84 (0,6H, dd, J = 13,9 y 9,6
Hz), 3,59 (0,4H, dd, J = 14,7 y 3,3 Hz), 3,50 (0,6H, dd, J = 5,5 y
4,2 Hz), 3,16 (1,2H, s), 3,15 (1,8H, s), 2,98 (1,2H, s), 2,96 (1,8H,
s), 2,72 (0,4H, m), 2,58 (0,6H, m), 1,68-1,42 (2H,
m), 1,00-0,96 (9H, m) y 0,92-0,89
(3H, m).
\newpage
^{13}C-RMN;
\delta(CDCl_{3}), 173,1, 55,5, 54,9, 51,7, 48,4, 48,0,
46,6, 38,9, 38,8, 36,3, 36,1, 31,3, 27,0, 26,9, 23,9, 23,8 y 12,1.
EMBR: ionización positiva 324 [M+Na] 300 [M-H].
Polvo blanco. RMN-^{1}H;
\delta((CD_{3})_{2}SO), 9,95 (0,4H, s), 9,50 (0,6H, s),
8,24 (0,4H, s), 7,79 (0,6H, s), 7,74 (1H, m ancho), 7,42 (1H, s
ancho), 7,04 (1H, s ancho), 4,22 (1H, d, J = 9,5 Hz),
3,69-3,26 (2H, m), 2,98-2,75 (1H, m
ancho), 1,55-1,02 (6H, m ancho), 0,91 (9H, s) y 0,84
(3H, t, J = 6,8 Hz).^{13}C-RMN;
\delta((CD_{3})_{2}SO), 172,9, 172,4, 79,5, 60,0, 52,3,
48,7, 43,4, 43,2, 34,1, 29,8, 28,9, 27,1, 22,5 y 14,2. EMBR:
ionización positiva 324 [M+Na], 302 [M+H] ionización negativa 300
[M-H].
Polvo blanco. RMN-^{1}H;
\delta(CD_{3}OD, rotámeros), 8,12 (0,1H, s), 7,60 (0,9H,
s), 4,90 (1H, m), 3,67 (1H, dd, J = 12,2, 12,2 Hz), 3,38 (1H, m),
3,22-3,09 (2H, m), 3,11 (3H, s), 3,02 (1H, m), 2,94
(3H, s), 1,74-1,47 (5H, m),
1,47-1,20 (5H, m) y 0,90 (3H, t, J = 6,6 Hz).
^{13}C-RMN; \delta(CD_{3}OD,
rotámeros), 174,4, 172,0, 157,9, 55,9, 49,0, 45,0, 41,4, 37,7, 36,2,
30,6, 29,8, 29,7, 25,1, 23,2 y 14,4. EMBR: ionización positiva 373
[M+H].
Aceite incoloro. RMN-^{1}H;
\delta(CDCl_{3}, rotámeros), 8,35 (0,25H, s), 7,78
(0,75H, s), 7,29 (4H, s), 7,08 (1H, d, J = 9,4 Hz), 4,89 (1H, d, J =
9,3 Hz), 4,28-4,07 (2H, m), 3,84 (0,25H, dd, J =
13,3 y 3,5 Hz), 3,63 (0,75H, dd, J = 13,1 y 4,4 Hz), 3,10 (1H, s),
3,07 (2H, s), 2,91 (1H, s), 2,88 (2H, s), 0,92 (9H, s); EMBR:
ionización positiva 384 [M+H].
Sólido amarillo. RMN-^{1}H;
\delta(CD_{3}OD, rotámeros), 8,25 (0,3H, s), 8,08 (1H,
m), 7,85 (0,7H, s), 6,68 (2H, m), 6,51 (1H, m), 3,70 (1H, m), 3,35
(3H, m), 2,80-2,50 (3H, m),
1,60-1,10 (6H, m) y 0,89 (3H, t, J = 6,6 Hz);
^{13}C-RMN; \delta(CD_{3}OD,
rotámeros), 176,5, 176,1, 146,7, 145,2, 132,3, 121,5, 117,8, 116,8,
60,7, 46,2, 46,1, 42,6, 36,3, 31,3, 30,8, 24,1 y 14,7; EMBR:
ionización positiva 325 [M+H], 347 [M+Na]; ionización negativa 323
[M-H].
Sólido blanco. RMN-^{1}H;
\delta(CD_{3}OD, rotámeros), 8,24 (0,3H, s), 8,10 (1H, m
ancho), 7,84 (0,7H, s), 7,03 (2H, d, J = 8 Hz), 6,70 (2H, d, J = 7
Hz), 3,68 (1H, m), 3,35 (3H, m), 2,70 (3H, m),
1,65-1,10 (6H, m) y 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz);
^{13}C-RMN; \delta(CD_{3}OD,
rotámeros), 176,5, 176,1, 157,3, 131,6, 131,2, 116,7, 53,9, 46,1,
45,1, 42,9, 36,1, 31,7, 31,2, 24,1 y 14,7.; EMBR: ionización
positiva 309 [M+H], 331 [M+Na]; ionización negativa 307
[M-H].
Ejemplo biológico
A
Se determinaron como se muestra a continuación
las concentraciones mínimas inhibidoras (CMI) de inhibidores frente
a la cepa DH5\alpha de E.coli (Genotipo;
F-\varphi80dlacZ\DeltaM15(lacZYA-argF)U169
deoR recA1 endA1 hsdR17 (r_{k}^{-},
m_{k}^{+})phoA supE44\lambda ^{-} thi-1
gyrA96 relA1) obtenida de GibcoBRL Life Technologies,
Enterobacter cloacae (American Type Culture Collection nº
13047), Klebsiella pneumoniae (American Type Culture
Collection nº 13883) o Staphylococcus capitis (American Type
Culture Collection nº 35661). Se prepararon disoluciones madre del
compuesto de ensayo (compuestos 1 y 2 para los ejemplos 1 y 2
respectivamente (ambos isómero A)) y tres antibióticos estándar de
laboratorio, carbenicilina (Sigma, Nº de catálogo C3416), kanamicina
(Sigma, Nº de catálogo K4000) y cloranfenicol (Sigma, Nº de catálogo
C1919), preparadas mediante disolución de cada compuesto en
dimetilsulfóxido a 10 mM. Para la determinación de la concentración
mínima inhibidora, se prepararon dos diluciones seriadas dos veces
en caldo 2xYT (triptona 16 g/l, extracto de levadura 10 g/l, cloruro
de sodio 5 g/l obtenido a partir de BIO 101 Inc, 1070 Joshua Way,
Vista, CA92083, EE.UU.) para dar 0,05 ml de medio que contenía el
compuesto por pocillo. Los inóculos se prepararon a partir de
cultivos incubados durante la noche en caldo 2xYT a 37ºC. Se
ajustaron las densidades de células a una absorbancia a 660 nm
(A_{660}) = 0,1; las preparaciones estándar con densidad óptica se
diluyeron 1:1000 en caldo 2xYT; y cada pocillo se inoculó con 0,05
ml de bacterias diluidas. Se incubaron placas de microvaloración a
37ºC durante 18 horas en un incubador humidificado. Se registró la
CMI (\muM) como la concentración mínima de medicamento que inhibía
el crecimiento visible. Los compuestos de los ejemplos inhibieron el
crecimiento bacteriano. Por ejemplo, el compuesto del ejemplo 7 tuvo
una CMI frente a E. coli de 12,5 \muM.
\newpage
Ejemplo biológico
B
Se clonó el gen de PDF de E.coli en
pET24a(+) (designado pET24-PDF) y se usó para
transformar células BL21 DE3 de Novagen Inc, (Madison, Wisconsin).
Los clones se seleccionaron a 37ºC sobre placas de agar YT (triptona
8 g/l, 5 g/extracto de levadura, NaCl 5 g/l, agar 15 g/l)
complementado con 30 \mug/ml de kanamicina.
Se usó un cultivo incubado durante la noche de 20
ml de células BL21 DE3 que portaban pET24-PDF para
infectar 500 ml de caldo 2xYT (16 g/l de triptona, 10 g/l de
extracto de levadura, 5 g/l de NaCl) que contenía 30 \mug/ml de
kanamicina en un matraz de 2 litros con deflector y se incubó a 37ºC
con agitación hasta una DO_{600} de 0,6. Posteriormente se indujo
el cultivo ajustando el medio a isopropil \beta-D
tiogalactopiranósido (IPTG) 1,0 mM. Se dejó que la inducción
transcurriese durante 3 horas más a 37ºC, las células de recogieron
por centrifugación y el sedimento celular se lavó con 250 ml de
disolución salina tamponada de fosfato (PBS) y el sedimento se
almacenó a -70ºC.
Se resuspendieron las células de la expresión de
1 litro en 2x25 ml de disolución salina tamponada de fosfato
enfriada con hielo. La suspensión celular se sometió a ultrasonidos
en hielo usando un MSE Soniprep 150 conectado a una sonda de medio y
a una amplitud de 20-25 micrómetros en pulsos de
6x20 segundos. Posteriormente la suspensión resultante se aclaró por
centrifugación a 20.000 g durante 15 minutos. Después se usó el
sobrenadante para la purificación posterior de la enzima.
El lisado de E. coli procedente de un
cultivo de 1 litro en disolución salina tamponada de fosfato (PBS)
se ajustó con sulfato de amonio 2 M. Se equilibró una columna de 15
ml de fenil sefarosa con PBS/sulfato de amonio 2 M a 4ºC. Se
introdujo el lisado en la columna y se lavó con el tampón de
equilibrio. La columna se eluyó reduciendo la concentración de
sulfato de amonio de 2 M a 0 M sobre 10 volúmenes de columna. Se
recogieron fracciones de 5 ml y se analizaron mediante
SDS-PAGE. Se combinaron las fracciones que contenían
la mayor parte del PDF de 20 kDa. Las fracciones juntas se
concentraron usando una membrana de 3 kDa de punto de corte hasta un
volumen de 5 ml. Posteriormente la fracción se cargó en una columna
Superdex 75 (cromatografía de exclusión por tamaño) equilibrada en
PBS. La combinación de PDF concentrada eluyó a un ml/min a 4ºC y se
recogieron fracciones de 5 ml y se analizaron por
SDS-PAGE. Las fracciones más puras se combinaron y
se almacenaron a -70ºC.
El ensayo se realizó en una única placa de 96
pocillos en un volumen final de 100 \mul que contenía:
- -
- 20 \mul de PDF (4 \mug/ml)
- -
- 20 \mul de Hepes 100 mM pH 7,0 + KCl 1 M + Brij al 0,05%
- -
- dilución seriada de 10 \mul del compuesto de ensayo en DMSO al 20%
- -
- 50 \mul de formil-Met-Ala-Ser (8 mM)
El ensayo se incubó a 37ºC durante 30 minutos. El
grupo amino libre del producto desformilado
(Met-Ala-Ser) se detectó usando
fluorescamina, mediante las siguientes adiciones:
- -
- 50 \mul de borato 0,2 M a pH 9,5
- -
- 50 \mul de fluorescamina (150 \mug/ml en dioxano anhidro)
Se cuantificó la fluorescencia en un lector de
placa SLT Fluostar usando una longitud de onda de excitación de 390
nM y una longitud de onda de emisión de 485 nM. Las reacciones de
control estándar son una reacción sin inhibidor que proporciona el
valor 0 de inhibición y una reacción sin enzima y sin inhibidor que
proporciona un valor de 100% de inhibición. Los datos se analizaron
mediante conversión de las unidades de fluorescencia en % de
inhibición y representando la concentración de inhibidor frente a %
de inhibición. Los datos se ajustaron a un función sigmoidal: y =
A+((B-A)/(1+((C/x)^{D}))), en la que A
representa inhibición cero, B representa inhibición de 100% y C
representa el CI_{50}. D representa la pendiente. El CI_{50}
representa la concentración de inhibidor (nM) necesaria para
disminuir la actividad de la enzima en 50%.
Se encontró que los compuestos de la invención
inhibían la PDF bacteriana in vitro.
Claims (2)
1. El uso de un compuesto de fórmula (I) o una
sal, hidrato o solvato farmacéutica o veterinariamente aceptable del
mismo en la preparación de una composición antibacteriana:
en la que R_{2} representa un
grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido o no
sustituido, cicloalquil(alquil
C_{1}-C_{6})- o aril(alquil
C_{1}-C_{6})-, y A representa un grupo de
fórmula (IA), o
(IB):
en la que R_{4} representa la
cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural, y R_{5}
y R_{6} son cada uno de forma independiente hidrógeno o alquilo
C_{1}-C_{6}, compuesto heterocíclico o
aril(alquil C_{1}-C_{6})-, o R_{5} y
R_{6} cuando se toman junto con el átomo de nitrógeno al que se
encuentran unidos forman de manera opcional un anillo heterocíclico
saturado y sustituido de 3 a 8 átomos, cuyo anillo está condensado
opcionalmente a un compuesto carbocíclico o a un segundo anillo
heterocíclico,
caracterizado porque dicho compuesto se
selecciona del grupo constituido por
N-[3S-(4-bencilpiperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-3-ciclopentil-2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-propionamida,
N-[2R-(4-bencil-piperidin-1-carbonil)-hexil]-N-hidroxi-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(2-metil-piperidin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(piperidin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(piperazin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
pirrolidin-1-ilamida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
metil-(1-metil-piperidin-4-il)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
N-[2R-(acepan-1-carbonil)-hexil]-N-hidroxi-formamida,
(4-metil-piperazin-1-il)amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
diisopropilamida del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
éster etílico del ácido
1-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-piperidin-3-carboxílico,
éster etílico del ácido
4-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-piperazin-1-carboxílico,
yoduro de
4-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-1,1-dimetil-piperazinio,
[2,2-dimetil-1S-(piperidin-1-carbonil)-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(3,4-dihidro-1H-isoquinolin-2-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-4-hidroxi-piperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-piperazin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
(3-bencilsulfanil-1S-dimetilcarbamoil-propil)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
éster bencílico del ácido
3S-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoilamino}-N,N-dimetilsuccinámico,
éster bencílico del ácido
4S-dimetilcarbamoil-4-{2R[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoilamino}-butírico,
cloruro de
(5S-dimetilcarbamoil-5-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoilamino}-pentil)-dimetil-amonio,
(1-carbamoil-2,2-dimetilpropil)amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-butírico,
(1-carbamoil-2,2-dimetilpropil)amida
del ácido
2-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
(1-dimetil-carbamoil-4-guanidinobutil)-amida
del ácido
2R-[formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico
2R-[2-(4-clorofenil)-3-(formil-hidroxi-amino)-propionilamino]-2S-3,3,N,N-tetrametil-butiramida,
[2(3,4-dihidroxifenil)-etil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[2(4-hidroxifenil)-etil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico
y sales, hidratos y solvatos farmacéutica y
veterinariamente aceptables del mismo.
2. Un compuesto de fórmula (I) o una sal, hidrato
o solvato farmacéutica o veterinariamente aceptable del mismo
en la que R_{2} representa un
grupo alquilo C_{1}-C_{6} sustituido o no
sustituido, cicloalquil(alquil
C_{1}-C_{6})- o aril(alquil
C_{1}-C_{6})-, y A representa un grupo de
fórmula (IA), o
(IB):
en la que R_{4} representa la
cadena lateral de un alfa aminoácido natural o no natural, y R_{5}
y R_{6} son cada uno de forma independiente hidrógeno o alquilo
C_{1}-C_{6}, compuesto heterocíclico o
aril(alquil C_{1}-C_{6})-, o R_{5} y
R_{6} cuando se toman junto con el átomo de nitrógeno al que se
encuentran unidos forman de manera opcional un anillo heterocíclico
saturado y sustituido de 3 a 8 átomos, cuyo anillo está condensado
opcionalmente a un compuesto carbocíclico o a un segundo anillo
heterocíclico,
caracterizado porque dicho compuesto se
selecciona del grupo constituido por
N-[3S-(4-bencilpiperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-3-ciclopentil-2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-propionamida,
N-[2R-(4-bencil-piperidin-1-carbonil)-hexil]-N-hidroxi-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(2-metilpiperidin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(piperidin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
N-hidroxi-N-[2R-(piperazin-1-carbonil)-hexil]-formamida,
pirrolidin-1-ilamida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
metil-(1-metil-piperidin-4-il)-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
N-[2R-(acepan-1-carbonil)-hexil]-N-hidroxi-formamida,
(4-metil-piperazin-1-il)amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]hexanoico,
diisopropilamida del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]hexanoico,
éster etílico del ácido
1-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-piperidin-3-carboxílico,
éster etílico del ácido
4-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-piperazin-1-carboxílico,
yoduro de
4-{2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoil}-1,1-dimetil-piperazinio,
[2,2-dimetil-1S-(piperidin-1-carbonil)-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(3,4-dihidro-1H-isoquinolina-2-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-4-hidroxi-piperidin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
[1S-(4-bencil-piperazin-1-carbonil)-2,2-dimetil-propil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
(1-carbamoil-2,2-dimetilpropil)amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-butírico,
2R-[2-(4-clorofenil)-3-(formil-hidroxi-amino)-propionilamino]-2S-3,3,N,N-tetrametil-butiramida,
[2(3,4-dihidroxifenil)-etil]-amida
del ácido
2R-[(formil-hidroxi-amino)-metil]-hexanoico,
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y sales, hidratos y solvatos farmacéutica y
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