ES2231973T3

ES2231973T3 - Medicamento antiangiogenico destinado para el tratamiento del cancer, artritis y retinopatia.

Info

Publication number: ES2231973T3
Application number: ES98911778T
Authority: ES
Inventors: Jack Henkin; Noel P. Bouck; David W. Dawson; Andrew J. Schneider
Original assignee: Abbott Laboratories; Northwestern University
Current assignee: Abbott Laboratories; Northwestern University
Priority date: 1997-03-17
Filing date: 1998-03-16
Publication date: 2005-05-16
Anticipated expiration: 2018-03-16
Also published as: CA2255661A1; PT918795E; DE69827223T2; JP2009001576A; WO1998041542A1; JP2001506671A; EP0918795B1; DE69827223D1; JP4254972B2; EP0918795A1; ATE280781T1; DK0918795T3; CA2255661C

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A PEPTIDOS DE FORMULA: T - GLY VAL D - ILE - THR - ARG - ILE - U, V - GLY - D - VAL - ILE - D - THR - D - ARG - D - ILE - W, X - D - ARG - D - ILE - D - ARG - D THR - ILE - D - VAL - Y Y Z - GLY - VAL - ILE - THR - ARG - ILE -U, DONDE T ESTA AUSENTE O SE SELECCIONA A PARTIR DE UN GRUPO PROTECTOR DE N Y UN POLIPEPTIDO DE HASTA 12 RESIDUOS AMINOACIDOS, TERMINADO OPCIONALMENTE EN UN GRUPO PROTECTOR DE N; U SE SELECCIONA A PARTIR DE ARG Y ARG - NR 1 R 2 , DONDE R 1 Y R 2 SE SELECCIONAN INDEPENDIENTEMENTE A PAR TIR DE HIDROGENO Y ALQUILO DE UNO A CUATRO ATOMOS DE CARBONO; V ESTA AUSENTE O ES UN GRUPO PROTECTOR DE N; W SE SELECCIONA A PARTIR DE D - ARG Y D - ARG - NR 1 R 2 ; X ESTA AUSENTE O ES UN GRUPO PROTECTOR DE N; Y SE SELECCIONA A PARTIR DE GLY Y GLY NR 1 R 2 ; Y Z ES 1-12 RESIDUOS AMINOACIDOS, TERMINADOS OPCIONALMENTE POR UN GRUPO PROTECTOR DE N, DONDE AL MENOS UNO DE LOS RESIDUOS AMINOACIDOS ES UN RESIDUO DE AMINOACIDO D. DICHOS COMPUESTOS INHIBEN LA ANGIOGENESIS YSON UTILES PARA EL TRATAMIENTO DE ESTADOS DE ENFERMEDAD, COMO EL CANCER, ARTRITIS, DEGENERACION MACULAR Y RETINOPATIA DIABETICA, EN LOS CUALES LA ANGIOGENESIS JUEGA UN PAPEL.

Description

Medicamento antiangiogénico destinado para el tratamiento del cáncer, artritis y retinopatía.

Campo técnico

La presente invención se relaciona con compuestos útiles para tratar estados patológicos que surgen o se exacerban por angiogénesis. Más concretamente, la invención se relaciona con determinados péptidos que inhiben la angiogénesis, con composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y con el uso de estos compuestos para fabricar un medicamento para tratar a un paciente que necesite terapia anti-angiogénesis.

Antecedentes de la invención

La angiogénesis es el proceso fundamental mediante el cual se forman nuevos vasos sanguíneos y es esencial para una variedad de actividades corporales normales (tales como la reproducción, el desarrollo y la reparación de heridas). Aunque el proceso no está totalmente comprendido, se cree que implica una interacción compleja de moléculas que a la vez estimulan e inhiben el crecimiento de las células endoteliales, las células primarias de los vasos sanguíneos capilares. En condiciones normales, estas moléculas parecen mantener la microvasculatura en un estado quiescente (es decir, un estado de ausencia de crecimiento capilar) durante períodos prolongados, que pueden durar hasta semanas o, en algunos casos, décadas. Cuando es necesario, sin embargo (tal como durante la reparación de heridas), estas mismas células pueden sufrir una rápida proliferación y renovación en un período de 5 días. (Folkman, J. y Shing, Y., The Journal of Biological Chemistry, 267(16): 10931-10934, y Folkman, J. y Klagsbrun, M., Science, 235: 442-447 (1987)).

Aunque la angiogénesis es un proceso altamente regulado en condiciones normales, muchas enfermedades (caracterizadas como "enfermedades angiogénicas") están dirigidas por angiogénesis no regulada persistente. Dicho de otra manera, la angiogénesis no regulada puede, o bien causar una enfermedad particular directamente, o bien exacerbar una condición patológica existente. Por ejemplo, se ha implicado a la neovascularización ocular como la causa más común de ceguera y domina aproximadamente 20 enfermedades oculares. En ciertas condiciones existentes, tales como la artritis, los vasos sanguíneos capilares formados de novo invaden las articulaciones y destruyen el cartílago. En la diabetes, los nuevos capilares formados en la retina invaden el vítreo, sangran y provocan ceguera. El crecimiento y la metástasis de tumores sólidos son también dependientes de la angiogénesis (Folkman, J., Cancer Research, 46: 467-473 (1986); Folkman, J., Journal of The National Cancer Institute, 82: 4-6 (1989)). Se ha visto, por ejemplo, que, tumores que aumentan hasta más de 2 mm, deben obtener su propio aporte de sangre y lo hacen induciendo el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos capilares. Una vez quedan embebidos estos nuevos vasos sanguíneos en el tumor, proporcionan un medio para que las células tumorales entren en la circulación y metastaticen a sitios distantes, tales como el hígado, el pulmón o el hueso (Weidner, N. y col., The New England Journal of Medicine, 324(1): 1-8 (1991)).

La trombospondina-1 (TSP1, PM 450.000) es una gran proteína de matriz modular que inhibe la neovascularización in vivo (Good y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 6624 (1980)). La mayor parte de la actividad anti-angiogénica de la TSP1 reside en la región del tallo central de 70 kD. Se prepararon péptidos sintéticos que imitan las secuencias encontradas en la región de repetición de tipo properdina 1 de la región del tallo central de la molécula de la TSP1. Uno de estos péptidos, el así llamado MalII, es un 19-mero de fórmula Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg (Tolsma y col., J. Cell. Biol., 122, 497 (1993)). El péptido MalII bloqueaba la neovascularización in vivo en la córnea de rata e inhibía la migración de células endoteliales cultivadas, con una DE_{50} de aproximadamente 1 \muM.

Aunque actualmente se están desarrollando varios inhibidores de la angiogénesis para uso en el tratamiento de enfermedades angiogénicas (Gasparini, G. y Harris, A.L., J. Clin. Oncol., 13(3): 765-782, 1995)), existen inconvenientes asociados a varios de estos compuestos. Por ejemplo, la suramina es un potente inhibidor de la angiogénesis, pero causa (a las dosis requeridas para alcanzar actividad antitumoral) grave toxicidad sistémica en humanos. Otros compuestos, tales como los retinoides, interferones y antiestrógenos, son seguros para uso humano, pero tienen sólo un débil efecto anti-angiogénico. Aún otros compuestos pueden ser difíciles o caros de producir. Los péptidos cortos son relativamente simples de producir y representan un método efectivo en cuento a coste de tratamiento de estados de la enfermedad en los que interviene la angiogénesis y en el diseño de inhibidores de la angiogénesis dirigidos.

Resumen de la invención

En su realización principal, la presente invención proporciona un péptido, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, seleccionado entre el grupo consistente en:

IT-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-U

y

IVZ-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-U

donde T está ausente o es seleccionado entre un grupo N-protector y un polipéptido de hasta 12 residuos de aminoácido que eventualmente termina con un grupo N-protector; U es seleccionado entre Arg y Arg-NR^{1}R^{2}, donde R^{1} y R^{2} son independientemente seleccionados entre hidrógeno y alquilo de uno a cuatro átomos de carbono, y Z es 1-12 residuos de aminoácidos eventualmente acabados en un residuo N-protector, donde al menos uno de los residuos de aminoácido es un residuo de D-aminoácido.

Los compuestos preferidos de la presente invención tienen la fórmula T-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-U, donde T está ausente o es seleccionado entre un grupo N-protector y un polipéptido de hasta 12 residuos de aminoácidos eventualmente rematado con un grupo N-protector y U es seleccionado entre Arg y Arg-NR^{1}R^{2}.

Son compuestos más preferidos los de fórmula T-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-U donde T está ausente o es acetilo y U es seleccionado entre el grupo consistente en Arg, Arg-NH_{2} y Arg-NHCH_{2}CH_{3}.

En otra realización, la presente invención proporciona retroisómeros de los péptidos anteriores, o isómeros retroinversos de los péptidos anteriores, o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de retroisómeros y de isómeros retroinversos son seleccionados entre el grupo consistente en:

IIV-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-W

y

IIIX-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Y

donde V está ausente o es un grupo N-protector, W es seleccionado entre D-Arg y D-Arg-NR^{1}R^{2}, X está ausente o es un grupo N-protector e Y es seleccionado entre Gly y Gly-NR^{1}R^{2}.

En otra realización, la presente invención proporciona una composición para tratar a un paciente que necesite terapia anti-angiogénesis, consistente en un péptido definido anteriormente en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En aún otra realización, la presente invención proporciona el uso de un péptido definido anteriormente para fabricar un medicamento para tratar a un paciente que necesite terapia anti-angiogénesis. Dicha terapia consiste en administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido según se ha definido anteriormente.

En aún otra realización, la presente invención proporciona una composición para el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre el grupo consistente en cáncer, artritis, psoriasis, angiogénesis del ojo asociado a infección o intervención quirúrgica, degeneración macular y retinopatía diabética, consistente en un péptido según se ha definido anteriormente en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En aún otra realización, la presente invención proporciona el uso de un péptido definido anteriormente para fabricar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre el grupo consistente en cáncer, artritis, degeneración macular y retinopatía diabética. Dicho tratamiento consiste en administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido según se ha definido anteriormente.

Se puede usar un péptido de las Fórmulas I y IV en un método de aislamiento del receptor de la TSP-1 de las células endoteliales, consistente en unir un péptido de las Fórmulas I y IV al receptor, aislar el complejo péptido-receptor y purificar el receptor.

Descripción detallada

El término "alquilo" se refiere a un grupo monovalente derivado de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada por eliminación de un solo átomo de hidrógeno. Son ejemplos de grupos alquilo metilo, etilo, n- e iso-propilo, n-, sec-, iso- y terc-butilo y similares.

El término "grupo N-protector", tal como se usa aquí, se refiere a un grupo fácilmente eliminable que se conoce en la técnica como protector de un grupo amino frente a reacción indeseable durante los procedimientos sintéticos y como selectivamente eliminable. El uso de grupos N-protectores es bien conocido en la técnica para proteger grupos frente a reacciones indeseables durante un procedimiento sintético y se conocen muchos de tales grupos protectores; véase, por ejemplo, T.H. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª edición, John Wiley & Sons, New York (1991). Como ejemplos de grupos N-protectores, se incluyen, aunque sin limitación, grupos acilo, incluyendo acetilo, trifluoroacetilo, acilisotiocianato, aminocaproílo, benzoílo y similares, y grupos aciloxi, incluyendo t-butiloxicarbonilo (BOC) y carbobenciloxi y similares.

El término "retroisómero", tal como se usa aquí, se refiere a un péptido en el cual se han revertido los L- y D-aminoácidos de las Fórmulas I y IV, es decir, que los L-aminoácidos han sido substituidos por D-aminoácidos y los D-aminoácidos han sido substituidos por L-aminoácidos. Un ejemplo de retroisómero es de la Fórmula II. El término "retroisómeros" incluye fragmentos de tales isómeros.

El término "isómero retroinverso", tal como se usa aquí, se refiere a un péptido en el cual (i) los L- y D-aminoácidos de las Fórmulas I y IV han sido revertidos como en el retroisómero y (ii) la secuencia, cuando se lee desde el extremo N hasta el extremo C, está revertida. Un ejemplo de isómero retroinverso es de la Fórmula III. El término "isómeros retroinversos" incluye fragmentos de tales isómeros.

Por "sal farmacéuticamente aceptable", se entienden aquellas sales que son adecuadas, dentro del alcance del juicio médico fundado, para uso en contacto con los tejidos de humanos y animales inferiores, sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares y que guardan proporción con una razón beneficio/riesgo razonable. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, S.M. Berge y col. describen sales farmacéuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66: 1-19. Las sales pueden ser preparadas in situ durante el aislamiento final y la purificación de los compuestos de la invención, o por separado mediante reacción de la función básica libre con un ácido orgánico adecuado. Como sales de adición de ácido representativas, se incluyen las sales acetato, adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, hemisulfato, heptonato, hexanoato, bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, 3-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, toluensulfonato, undecanoato, valerato y similares. Como sales representativas de metales alcalinos o alcalinotérreos, se incluyen las de sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares, así como las de cationes no tóxicos de amonio, amonio cuaternario y amina, incluyendo, aunque sin limitación, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetil-amina, trietilamina, etilamina y similares.

Tal como se usa aquí, el término "éster farmacéuticamente aceptable" se refiere a ésteres que se hidrolizan in vivo e incluyen los que se destruyen fácilmente en el cuero humano para dejar el compuesto parental o una sal del mismo. Como grupos éster adecuados, se incluyen, por ejemplo, los derivados de ácidos carboxílicos alifáticos farmacéuticamente aceptables, particularmente ácidos alcanoicos, alquenoicos, cicloalcanoicos y alcanodioicos, en donde cada resto alquilo o alquenilo no tiene ventajosamente más de 6 átomos de carbono. Como ejemplos de ésteres particulares, se incluyen formiatos, acetatos, propionatos, butiratos, acrilatos y etilsuccinatos.

El término "profármacos farmacéuticamente aceptables", tal como se usa aquí, se refiere a aquellos profármacos de los compuestos de la presente invención que son, dentro del alcance del juicio médico fundado, adecuados para uso en contacto con los tejidos de humanos y de animales inferiores sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares y que guardan proporción con una razón beneficio/riesgo razonable, y efectivos para su uso pretendido, así como a las formas zwit-teriónicas, cuando sea posible, de los compuestos de la invención. El término "profármaco" se refiere a compuestos que se transforman rápidamente in vivo para dar el compuesto parental de la fórmula anterior, por ejemplo por hidrólisis en la sangre. Se da una discusión exhaustiva en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 de la A.C.S. Symposium Series, y en Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.

A menos que se indique de modo diferente mediante un prefijo "D", la estereoquímica del carbono \alpha de los aminoácidos y de los residuos de aminoacilo en los péptidos descritos en esta descripción y en las reivindicaciones adjuntas es la configuración natural o "L". Se usan las designaciones Cahn-Ingold-Prelog "R" y "S" para especificar la estereoquímica de centros quirales en algunos de los substituyentes acilo en el extremo N de los péptidos de esta invención. La designación "R,S" pretende indicar una mezcla racémica de las dos formas enantioméricas. Esta nomenclatura sigue la descrita en R.S. Cahn y col., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5, 385-415 (1966).

En su mayor parte, los nombres de los residuos de aminoacilo naturales y no naturales usados aquí siguen las convenciones de nomenclatura sugeridas por la IUPAC Commission on The Nomenclature of Organic Chemistry y la IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature establecidas en "Nomenclature of \alpha-Amino Acids (Recommendations, 1974)", Biochemistry, 14(2) (1975). En la medida en que los nombres y abreviaturas de los aminoácidos y de los residuos de aminoacilo empleados en esta descripción y en las reivindicaciones adjuntas difieran de esta sugerencias, se le aclararán al lector mediante lo siguiente.

Es bien sabido en la técnica que se pueden hacer modificaciones y cambios en la estructura de un polipéptido sin alterar substancialmente la función biológica de ese péptido. Por ejemplo, determinados aminoácidos pueden ser substituidos por otros aminoácidos en un polipéptido dado sin pérdida apreciable de función. Al hacer tales cambios, se pueden hacer substituciones de residuos de aminoácidos similares en base a la similitud relativa de los substituyentes de cadenas laterales, por ejemplo, su tamaño, carga, hidrofobicidad, hidrofilicidad y similares.

Tal como se detalla en la Patente Estadounidense Nº 4.554.101, se han asignado los siguientes valores de hidrofilicidad a los residuos de aminoácidos: Arg (+3,0), Lys (+3,0), Asp (+3,0), Glu (+3,0), Ser (+0,3), Asn (+0,2), Gln (+0,2), Gly (0), Pro (-0,5), Thr (-0,4), Ala (-0,5), His (-0,5), Cys (-1,0), Met (-1,3), Val (-1,5), Leu (-1,8), Ile (-1,8), Tyr (-2,3), Phe (-2,5) y Trp (-3,4). Se entiende que un residuo de aminoácido puede ser substituido por otro que tenga un valor de hidrofilicidad similar (por ejemplo, dentro de un valor de más o menos 2,0) y aún obtener un polipéptido biológicamente equivalente.

De un modo similar, se pueden hacer substituciones en base a la similitud en el índice hidropático. Se ha asignado a cada residuo de aminoácido un índice hidropático en base a sus características de hidrofilicidad y de carga. Esos valores de índice hidropático son: Ile (+4,5), Val (+4,2), Leu (+3,8), Phe (+2,8), Cys (+2,5), Met (+1,9), Ala (+1,8), Gly (-0,4), Thr (-0,7), Ser (-0,8), Trp (-0,9), Tyr (-1,3), Pro (-1,6), His (-3,2), Glu (-3,5), Gln (-3,5), Asp (-3,5), Asn (-3,5), Lys (-3,9) y Arg (-4,5). Al hacer una substitución en base al índice hidropático, se prefiere un valor dentro de más o menos 2,0.

Los compuestos contemplados como dentro del alcance de la presente invención incluyen, aunque sin limitación:

Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg,

Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2},

Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg,

Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2} y

Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly,

D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2},

D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly,

Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2},

Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NHCH_{2}CH_{3},

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2} y

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2} y

Ac-Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}.

Efecto de los compuestos de la invención sobre la migración de células endoteliales

Se determinó el efecto de los péptidos de la invención sobre la migración de células endoteliales in vitro usando el ensayo de migración de células endoteliales. Este ensayo fue realizado esencialmente como describen Polverini, P.J. y col., Methods Enzymol., 198: 440-450 (1991). Resumiendo, se privaron de alimento células endoteliales capilares (adrenales) bovinas (BCE, suministradas por Judah Folkman, Harvard University Medical School) durante la noche en DMEM que contenía un 0,1% de seroalbúmina bovina (BSA). Se recogieron entonces las células con tripsina y se resuspendieron en DMEM con un 0,1% de BSA a una concentración de 1,5 x 10^{6} células/ml. Se añadieron las células al fondo de una cámara de Boyden modificada de 48 pocillos (Nucleopore Corporation, Cabin John, MD). Se montó e invirtió la cámara y se dejó que las células se unieran durante 2 horas a 37ºC a membranas de quimiotaxis de policarbonato (tamaño de poro 5 \mum) que habían sido empapadas en gelatina al 0,1% durante la noche y secadas. Se reinvirtió entonces la cámara y se añadieron los compuestos de ensayo a los pocillos de la cámara superior (hasta un volumen total de 50 \mul); se incubó luego el aparato durante 4 horas a 37ºC. Se volvieron a cubrir las membranas, se fijaron y se tiñeron (DiffQuick, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) y se contó el número de células que habían migrado a la cámara superior por 10 campos de alta potencia. Se restó la migración de fondo a DMEM + BSA 0,1% y se dieron los datos como el número de células que migraron por 10 campos de alta potencia (400X) o, cuando se combinaron los resultados de múltiples experimentos, como porcentaje de migración máxima en comparación con un control positivo simultáneo. Los compuestos de la invención inhiben la migración celular, tal como se muestra en la
Tabla 1.

TABLA 1 Efecto de los compuestos de la invención sobre la migración de células endoteliales

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1

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Se midió la inhibición de la angiogénesis in vivo usando un ensayo de neovascularización corneal en rata. En consecuencia, se implantaron pellas de hidrón al 6% que contenían péptido solo o en combinación con bFGF 0,15 \muM en córneas de ratas a 1-1,5 mm del limbo. A los 7 días, las ratas fueron sacrificadas y perfundidas con carbón coloidal para visualizar los vasos y se extrajeron las córneas. Se puntuó un crecimiento vigoroso de los vasos hacia el interior como una respuesta angiogénica positiva. El control de inducción indica respuesta al bFGF 0,15 \muM solo. Se hicieron controles negativos frente a la BSA al 0,1%, que no induce crecimiento de vasos hacia el interior. En la Tabla 2, se muestra la inhibición de la neovascularización por los compuestos de la invención.

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TABLA 2 Inhibición de la neovascularización corneal de rata por los compuestos de la invención

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Los compuestos de la invención, incluyendo, aunque sin limitación, los especificados en los ejemplos, poseen actividad anti-angiogénica. Como inhibidores de la angiogénesis, dichos compuestos son útiles en el tratamiento de tumores sólidos tanto primarios como metastáticos, incluyendo los carcinomas de mama, colon, recto, pulmón, orofaringe, hipofaringe, esófago, estómago, páncreas, hígado, vesícula biliar y conductos biliares, intestino delgado, tracto urinario (incluyendo el riñón, la vejiga y el urotelio), tracto genital femenino (incluyendo el cuello, el útero y los ovarios, así como el coriocarcinoma y la enfermedad trofoblástica gestacional), tracto genital masculino (incluyendo la próstata, las vesículas seminales, los testículos y los tumores de células germinales), glándulas endocrinas (incluyendo la glándula tiroidea, las adrenales y la pituitaria) y piel, así como de hemangiomas, melanomas, sarcomas (incluyendo los que surgen del hueso y de los tejidos blandos, así como el sarcoma de Kaposi) y tumores de cerebro, nervios, ojos y meninges (incluyendo los astrocitomas, los gliomas, los glioblastomas, los retinoblastomas, los neuromas, los neuroblastomas, los Schwannomas y los meningiomas). Dichos compuestos pueden ser también útiles en el tratamiento de tumores sólidos que surgen de malignidades hematopoyéticas, tales como las leucemias (es decir, cloromas, plasmacitomas y las placas y tumores de micosis fungoides y el linfoma/leucemia de células T cutáneos), así como en el tratamiento de linfomas (linfomas tanto Hodgkin como no-Hodgkin). Además, estos compuestos o los genes que codifican su expresión pueden ser útiles en la prevención de metástasis de los tumores antes descritos cuando se usan solos o en combinación con radioterapia y/u otros agentes quimioterápicos.

Otros usos incluyen el tratamiento y la profilaxis de enfermedades autoinmunes, tales como la artritis reumatoide, inmune y degenerativa; diversas enfermedades oculares, tales como la retinopatía diabética, la retinopatía de la premadurez, el rechazo de injertos de córnea, la fibroplasia retrolental, el glaucoma neovascular, la rubeosis, la neovascularización retiniana debida a degeneración macular, la hipoxia, la angiogénesis en el ojo asociada a infección o intervención quirúrgica y otras condiciones de neovascularización anormal del ojo; enfermedades de la piel, tales como la psoriasis; enfermedades de los vasos sanguíneos, tales como los hemangiomas y la proliferación capilar en placas ateroscleróticas; el Síndrome de Osler-Webber; la angiogénesis miocárdica; la neovascularización de placas; la telangiectasia; las articulaciones del hemofílico; el angiofibroma, y la granulación de heridas. Otros usos incluyen el tratamiento de enfermedades caracterizadas por estimulación excesiva o anormal de las células endoteliales, incluyendo, aunque sin limitación, las adhesiones intestinales, la enfermedad de Crohn, la aterosclerosis, la esclerodermia y las cicatrices hipertróficas, es decir, los queloides. Otro uso es como agente del control del nacimiento, inhibiendo la ovulación y el establecimiento de la placenta. Los compuestos de la invención son también útiles en el tratamiento de enfermedades que tienen angiogénesis como consecuencia patológica, como la enfermedad del arañazo del gato (Rochele minalia quintosa) y las úlceras (Helicobacter pylori). Los compuestos de la invención son también útiles para reducir la hemorragia por administración previa a la cirugía, especialmente en el tratamiento de tumores resecables.

Los compuestos de la invención pueden ser usados en combinación con otras composiciones y procedimientos para el tratamiento de enfermedades. Por ejemplo, un tumor puede ser tratado convencionalmente con cirugía, radiación o quimioterapia en combinación con un péptido de la presente invención y luego se puede administrar a continuación un péptido de la presente invención al paciente para prolongar la latencia de las micrometástasis y para estabilizar e inhibir el crecimiento de cualquier tumor primario residual. Adicionalmente, los compuestos de la invención pueden ser combinados con excipientes farmacéuticamente aceptables y eventualmente con matrices de liberación mantenida, tales como polímeros biodegradables, para formar composiciones terapéuticas.

Una matriz de liberación mantenida, tal como se usa aquí, es una matriz hecha de materiales, normalmente polímeros, que son biodegradables por hidrólisis enzimática o ácido-básica o por disolución. Una vez insertada en el cuerpo, la matriz sufre la acción de las enzimas y de los fluidos corporales. Una matriz de liberación mantenida es deseablemente seleccionada entre materiales biocompatibles, tales como liposomas, polilactidas (ácido poliláctico), poliglicolida (polímero de ácido glicólico), polilactida-co-glicolida (copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico), polianhídridos, poli(orto)ésteres, polipéptidos, ácido hialurónico, colágeno, sulfato de condroitina, ácidos carboxílicos, ácidos grasos, fosfolípidos, polisacáridos, ácidos nucleicos, poliaminoácidos, aminoácidos tales como fenilalanina, tirosina e isoleucina, polinucleótidos, polivinilpropileno, polivinilpirrolidona y silicona. Una matriz biodegradable preferida es una matriz de uno de los siguientes: polilactida, poliglicolida o polilactida-co-glicolida (copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico).

Cuando se usan en los tratamientos anteriores o en otros, se puede emplear una cantidad terapéuticamente efectiva de uno de los compuestos de la presente invención en forma pura o, cuando dicha forma exista, en forma de sal farmacéuticamente aceptable. Por "cantidad terapéuticamente efectiva" del compuesto de la invención, se entiende una cantidad suficiente del compuesto para tratar una enfermedad angiogénica (por ejemplo, para limitar el tumoral o para enlentecer o bloquear la metástasis tumoral) con una razón beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico. Se entenderá, sin embargo, que el uso total diario de los compuestos y de las composiciones de la presente invención serán decididos por el médico asistente dentro del alcance del juicio médico fundado. El nivel específico de dosis terapéuticamente efectiva para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores, incluyen el trastorno que se esté tratando y la gravedad del trastorno, la actividad del compuesto específico empleado, la composición específica empleada, la edad, el peso corporal, el estado general de salud, el sexo y la dieta del paciente, el tiempo de administración, la vía de administración y la velocidad de excreción del compuesto específico empleado, la duración del tratamiento, los fármacos usados en combinación o coincidentemente con el compuesto específico empleado y factores similares bien conocidos en las artes médicas. Por ejemplo, está dentro de los conocimientos de la técnica iniciar las dosis del compuesto a niveles inferiores a los requeridos para alcanzar el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta alcanzar el efecto terapéutico deseado.

Los compuestos de la presente invención pueden ser usados en forma de sales derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos. Estas sales incluyen, aunque sin limitación, las siguientes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidro-xietanosulfonato (isetionato), lactato, maleato, metanosulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, fosfato, glutamato, bicarbonato, p-toluensulfonato y undecanoato. Se obtienen así productos solubles o dispersables en agua o aceites.

Como ejemplos de ácidos que pueden ser empleados para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, se incluyen ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, el ácido sulfúrico y el ácido fosfórico y ácidos orgánicos tales como el ácido maleico, el ácido succínico y el ácido cítrico. Otras sales incluyen sales con metales alcalinos o metales de tierras alcalinas, tales como sodio, potasio, calcio o magnesio, o con bases orgánicas. Como sales preferidas de los compuestos de la invención, se incluyen fosfato, tris y acetato.

La dosis total diaria de los compuestos de esta invención administrada a un humano o a un animal inferior puede variar entre aproximadamente 0,001 y aproximadamente 1 mg/kg de masa corporal del paciente/día. Si se desea, la dosis diaria efectiva puede ser dividida en múltiples dosis con fines de administración; en consecuencia, las composiciones de dosis única pueden contener dichas cantidades o submúltiplos de las mismas que completen la dosis diaria.

Alternativamente, se puede emplear un compuesto de la presente invención como composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de interés en combinación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable se refiere a un rellenante sólido, semisólido o líquido, diluyente, material encapsulante o ayuda de formulación no tóxico de cualquier tipo. Las composiciones pueden ser administradas parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como mediante polvos, ungüentos, gotas o parches transdérmicos), rectal o bucalmente. El término "parenteral", tal como se usa aquí, se refiere a modos de administración que incluyen la inyección y la infusión intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intraesternal, subcutánea e intraarticular.

Las composiciones farmacéuticas para inyección parenteral comprenden soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones estériles acuosas o no acuosas farmacéuticamente aceptables, así como polvos estériles para reconstitución en soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso. Como ejemplos de soportes, diluyentes, solventes o vehículos acuosos y no acuosos adecuados, se incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares), carboximetilcelulosa y mezclas adecuadas de éstos, aceites vegetales (tales como el aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables, tales como el oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de revestimiento, tales como lectina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones y mediante el uso de surfactantes.

Estas composiciones pueden contener también adyuvantes, tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsores y agentes dispersantes. La prevención de la acción de los microorganismos puede quedar asegurada gracias a la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabén, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcar, cloruro de sodio y similares. Se puede conseguir la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable por inclusión de agentes que retrasen la absorción, tales como el monoestearato de aluminio y la gelatina.

Se preparan formas inyectables depot formando matrices de microencapsulación del fármaco en polímeros biodegradables, tales como polilactida-poliglicolida, poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Dependiendo de la proporción entre fármaco y polímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. También se preparan formulaciones inyectables depot atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con los tejidos orgánicos.

Las formulaciones inyectables pueden ser esterilizadas, por ejemplo, por filtración a través de un filtro de retención de bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse o dispersarse en agua estéril o en otro medio inyectable estéril justo antes de su uso.

La administración tópica incluye la administración a la piel o a las mucosas, incluyendo las superficies del pulmón y del ojo. Se pueden preparar composiciones para administración tópica, incluyendo las inhalatorias, como polvo seco, que puede ser presurizado o no presurizado. En las composiciones en polvo no presurizado, el ingrediente activo, en forma finamente dividida, puede ser usado en mezcla con un vehículo inerte farmacéuticamente aceptable de mayor tamaño que contiene partículas con un tamaño, por ejemplo, de hasta 100 micrómetros de diámetro. Como vehículos inertes adecuados, se incluyen azúcares tales como la lactosa. Deseablemente, al menos un 95% en peso de las partículas del ingrediente activo tienen un tamaño efectivo de partícula de 0,01 a 10 micrómetros.

Alternativamente, la composición puede estar presurizada y contener un gas comprimido, tal como nitrógeno o un propulsor gaseoso licuado. El medio propulsor licuado, y ciertamente la composición total, es preferiblemente tal que el ingrediente activo no se disuelva en el mismo en ningún grado substancial. La composición presurizada puede contener también un agente tensoactivo, tal como un agente tensoactivo no iónico líquido o sólido, o puede ser un agente tensoactivo aniónico sólido. Se prefiere usar el agente tensoactivo aniónico sólido en forma de sal de sodio.

Una forma más de administración tópica es al ojo. Se administra un compuesto de la invención en un vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable, de tal forma que el compuesto se mantenga en contacto con la superficie ocular durante un período de tiempo suficiente como para permitir al compuesto penetrar en las regiones corneales e internas del ojo, como, por ejemplo, la cámara anterior, la cámara posterior, el cuerpo vítreo, el humor acuoso, el humor vítreo, la córnea, el iris/cuerpo ciliar, la lente, la coroides/retina y la esclera. El vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, un ungüento, un aceite vegetal o un material encapsulante. Alternativamente, los compuestos de la invención pueden ser inyectados directamente en el humor vítreo y acuoso.

Las composiciones para administración rectal o vaginal son preferiblemente supositorios, que pueden ser preparados por mezcla de los compuestos de esta invención con excipientes o vehículos no irritantes adecuados, tales como la manteca de cacao, el polietilenglicol o una cera de supositorio, que son sólidos a temperatura ambiente, pero líquidos a la temperatura corporal y, por lo tanto, se funden en el recto o en la cavidad vaginal y liberan el compuesto activo.

Los compuestos de la presente invención pueden ser también administrados en forma de liposomas. Como es sabido en la técnica, los liposomas derivan generalmente de fosfolípidos o de otras substancias lipídicas. Los liposomas se forman por cristales líquidos hidratados mono- o multilamelares dispersos en un medio acuoso. Se puede usar cualquier lípido no tóxico, fisiológicamente aceptable y metabolizable capaz de formar liposomas. Las presentes composiciones en forma de liposomas pueden contener, además de un compuesto de la presente invención, estabilizantes, conservantes, excipientes y similares. Los lípidos preferidos son los fosfolípidos y las fosfatidilcolinas (lecitinas), tanto naturales como sintéticos. Se conocen en la técnica métodos para formar liposomas. Véase, por ejemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volumen XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33 y siguientes.

Aunque los compuestos de la invención pueden ser administrados como único agente farmacéutico, pueden ser también usados en combinación con uno o más agentes convencionalmente administrados a pacientes para tratar las enfermedades angiogénicas. Por ejemplo, los compuestos de la invención son efectivos a corto plazo para hacer que los tumores sean más sensibles a las terapias citotóxicas tradicionales, tales como los agentes químicos y la radiación. Los compuestos de la invención aumentan también la efectividad de las terapias anticancerosas adyuvantes citotóxicas existentes. Los compuestos de la invención pueden también combinarse con otros agentes antiangiogénicos para aumentar su efectividad, o combinarse con otros agentes antiangiogénicos y administrados junto con otros agentes citotóxicos. En particular, cuando se usan en el tratamiento de tumores sólidos, los compuestos de la invención pueden ser administrados con IL-12, retinoides, interferones, angiostatina, endostatina, talidomida, trombospondina-1, trombospondina-2, captopril, agentes antineoplásicos tales como el alfa-interferon, COMP (ciclofosfamida, vincristina, metotrexato y prednisona), etopósido, mBACOD (metotrexato, bleomicina, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina y dexametasona), PRO-MACE/MOPP (prednisona, metotrexato (c/rescate de leucovina), doxorrubicina, ciclofosfamida, taxol, etopósido/mecloretamina, vincristina, prednisona y procarbazina), vincristina, vinblastina, angioinhibinas, TNP-470, polisulfato de pentosán, factor plaquetario 4, angiostatina, LM-609, SU-101, CM-101, Techgalan, talidomida, SP-PG y similares, así como con radiación.

La dosis total diaria de las composiciones de la invención para administración a un humano u otro hospedador mamífero en dosis únicas o divididas puede ser en cantidades, por ejemplo, de 0,0001 a 300 mg/kg de peso corporal dl día, y más habitualmente de 1 a 300 mg/kg de peso corporal.

Se entenderá que los agentes que pueden combinarse con el compuesto de la presente invención para la inhibición, el tratamiento o la profilaxis de enfermedades angiogénicas no se limitan a los enumerados anteriormente, sino que incluyen, en principio, cualquier agente útil para el tratamiento o la profilaxis de las enfermedades angiogénicas.

Los péptidos de la invención pueden ser usados para el desarrollo de columnas de afinidad para el aislamiento de receptores relevantes para la actividad anti-angiogénica del péptido de la invención, por ejemplo, el receptor de TSP-1, en, por ejemplo, células endoteliales cultivadas. Como es sabido en la técnica, el aislamiento y la purificación del receptor pueden ir seguidos de secuenciación de aminoácidos para identificar y aislar polinucleótidos que codifican para el receptor. La expresión recombinante de este receptor permitiría producir mayores cantidades de receptor, por ejemplo, producir una cantidad suficiente para uso en ensayos de rastreo de alto rendimiento para identificar otros inhibidores de la angiogénesis.

Los péptidos de la presente invención pueden copularse químicamente a isótopos, enzimas, proteínas vehiculizadoras, agentes citotóxicos, moléculas fluorescentes, quimioluminiscentes, bioluminiscentes y otros compuestos para una variedad de aplicaciones. Por ejemplo, se puede marcar un péptido para facilitar el estudio de su capacidad para unirse a antisueros o para detectar tipos celulares que poseen un receptor relevante. La técnica de copulación es generalmente seleccionada en base a los grupos funcionales disponibles sobre los aminoácidos del péptido, incluyendo, aunque sin limitación, amino, sulfhidral, carboxilo, amida, fenol e imidazol. Entre los diversos reactivo usados para efectuar dichas copulaciones, se incluyen, entre otros, glutaraldehído, benzidina diazodizada, carbodiimida y p-benzoquinona.

La eficacia de la reacción de copulación es determinada usando diferentes técnicas apropiadas para la reacción específica. Por ejemplo, se puede conseguir el radiomarcaje del péptido con I^{125} usando cloramina T y NaI^{125} de alta actividad específica. La reacción finaliza con metabisulfito de sodio se desala la mezcla en columnas desechables. Se eluye el péptido marcado de la columna y se recogen las fracciones. Se retiran alícuotas de cada fracción y se mide la radiactividad en un contador gamma. De esta forma, se puede obtener un péptido marcado que está libre de NaI^{125} no reaccionado.

Los péptidos de la presente invención pueden ser también usados como antígenos para generar anticuerpos policlonales o monoclonales. Dichos anticuerpos pueden ser usados en métodos y kits diagnósticos para detectar o cuantificar el péptido de la invención o péptidos relacionados con el mismo en un fluido o tejido corporal. Los resultados de estas pruebas podrían ser usados para diagnosticar o determinar la relevancia de pronóstico de tales péptidos.

El uso de los péptidos de la presente invención para generar anticuerpos monoclonales en animales tales como el ratón, el conejo o la oveja sigue técnicas bien conocidas en este campo. Si se desea, los anticuerpos pueden ser entonces usados para preparar anticuerpos anti-idiotipo, los cuales, a su vez, pueden ser humanizados como es sabido en la técnica para evitar respuestas inmunológicas. Los anticuerpos humanizados pueden ser usados para inhibir la angiogénesis o para preparar kits para detectar el receptor como aquí se describe.

Para la producción de antisueros policlonales en conejos, ovejas, cabras u otros animales, los péptidos de la invención se copulan, por ejemplo, a través de residuos de lisina con seroalbúmina bovina purificada usando glutaraldehído. La eficacia de esta reacción puede ser determinada midiendo la incorporación de péptido radiomarcado. El glutaraldehído no reaccionado y el péptido pueden ser separados por diálisis y el conjugado almacenado para posterior uso.

Se pueden analizar muestras de suero de la generación de antisueros policlonales o muestras de medio de la producción de antisueros monoclonales en cuanto a la determinación del título de anticuerpos y, en particular, en cuanto a la determinación de antisueros de título elevado. A continuación, se pueden estudiar los antisueros de título más alto para establecer lo siguiente: a) la dilución óptima del antisuero para la mayor unión específica del antígeno y la menor unión no específica, b) la capacidad para unirse a cantidades crecientes de péptido en una curva patrón de desplazamiento, c) la reactividad cruzada potencial con péptidos y proteínas inmunológicamente relacionados (incluyendo plasminógeno, TSP-1 y TSP-1 de especies relacionadas) y d) la capacidad para detectar el péptido de la invención en extractos de plasma, orina y tejidos y en medios de cultivo celular.

Se puede establecer el título a través de diversos medios conocidos en la técnica, tales como "dot blot" y análisis de densidad, y también por precipitación de complejos radiomarcados de péptido-anticuerpo usando proteína A, antisueros secundarios, etanol frío o carbón-dextrano, seguido de medición de la actividad con un contador gamma. Si se desea, se puede purificar el antisuero de mayor título en columnas de afinidad. Por ejemplo, se pueden copular los péptidos de la invención con una resina comercial y usarlos para formar una columna de afinidad. Se pueden pasar entonces muestras de antisuero a través de la columna, de tal forma que los anticuerpos para los péptidos de la invención se unan (a través del péptido) a la columna. Estos anticuerpos unidos son luego eluidos, recogidos y evaluados para la determinación del título y de la especificidad.

También se contemplan como parte de la presente invención kits para la medición de los compuestos de la invención. Se pueden usar los antisueros que poseen el mayor título y especificidad y que pueden detectar los péptidos de la invención en extractos de plasma, orina y tejidos y en medios de cultivo celular para establecer kits de ensayo para la medición y localización rápida, fiable, sensible y específica de los péptidos de la invención. Estos kits de ensayo pueden emplear (aunque sin limitación) las siguientes técnicas: ensayos competitivos y no competitivos, radioinmunoensayo (RIA), ensayos de bioluminiscencia y quimioluminiscencia, ensayos fluorométricos, ensayos en emparedado, ensayos inmunorradiométricos, dot blots, ensayos ligados a enzimas, incluyendo el ELISA, placas de microtitulación, tiras o varillas de inmersión revestidas de anticuerpo para la rápida monitorización de la orina o de la sangre e inmunocitoquímica. Para cada kit, se establece el rango, la sensibilidad, la precisión, la fiabilidad, la especificidad y la reproductibilidad del ensayo por medios bien conocidos para los expertos en la técnica.

El kit de ensayo antes descrito proporcionaría instrucciones, antisuero, uno o más péptidos de la invención y posiblemente péptidos radiomarcados de la invención y/o reactivos para la precipitación de los complejos unidos de péptido/anticuerpo. Dicho kit sería útil para la medición del péptido de la invención en fluidos biológicos y en extractos de tejidos de animales y humanos con y sin tumores, como es bien sabido en la técnica.

Otro kit puede ser usado para visualizar o localizar el péptido de la invención en tejidos y células. Las técnicas y kits de inmunohistoquímica, por ejemplo, que emplean dichas técnicas, son bien conocidos para quienes tienen conocimientos ordinarios en este campo. Dicho kit proporciona antisueros para el péptido de la invención y posiblemente suero bloqueante y antisuero secundario unido a una molécula fluorescente, tal como isotiocianato de fluoresceína, o a algún otro reactivo usado para visualizar el antisuero primario. Usando esta metodología, se pueden examinar los tumores biopsiados en cuanto a los sitios de producción del péptido o en cuanto a los sitios del receptor del péptido. Alternativamente, un kit puede suministrar ácidos nucleicos radiomarcados para uso en hibridación in situ para sondar en cuanto al ARN mensajero que codifica para el compuesto de la invención.

Síntesis de los péptidos

Los polipéptidos de la presente invención pueden ser sintetizados por cualquier técnica conocida para los expertos en esta área. Para la síntesis peptídica en fase sólida, se puede encontrar un resumen de las muchas técnicas en J.M. Stewart y J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co. (San Francisco), 1963, y en J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2, p. 46, Academic Press (New York), 1973. Para la síntesis clásica en solución, véase G. Schroder y K. Lupke, The Peptides, Vol. 1, Academic Press (New York), 1965.

En general, estos métodos consisten en la adición secuencial de uno o más aminoácidos o aminoácidos adecuadamente protegidos a una cadena peptídica en crecimiento. Normalmente, bien el grupo amino, bien el grupo carboxilo, del primer aminoácido está protegido por un grupo protector adecuado. El aminoácido protegido o derivatizado puede entonces unirse a un soporte sólido inerte o ser utilizado en solución añadiendo el siguiente aminoácido en la secuencia que tiene el grupo complementario (amino o carboxilo) adecuadamente protegido, en condiciones adecuadas para formar la unión amida. El grupo protector es entonces eliminado de este nuevo residuo de aminoácido recién añadido y se añade luego el siguiente aminoácido (adecuadamente protegido), y así sucesivamente. Después de haberse unido todos los aminoácidos deseados en la secuencia apropiada, se elimina cualquier grupo protector restante (y cualquier soporte sólido) secuencialmente o al mismo tiempo, para obtener el polipéptido final. Por simple modificación de este procedimiento general, es posible añadir más de un aminoácido de una vez a una cadena en crecimiento, por ejemplo, copulando (en condiciones que no racemicen los centros quirales) un tripéptido protegido con un dipéptido apropiadamente protegido para formar, tras la desprotección, un pentapéptido.

Un método particularmente preferido de preparación de compuestos de la presente invención implica la síntesis peptídica en fase sólida.

En este método particularmente preferido, la función alfa-amino está protegida por un grupo sensible a ácidos o a bases. Dichos grupos protectores deben tener la propiedad de ser estables a las condiciones de formación de la unión peptídica, siendo al mismo tiempo fácilmente eliminables sin destrucción de la cadena peptídica en crecimiento o racemización de cualquiera de los centros quirales en ella contenidos. Son grupos protectores adecuados el 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), el t-butiloxicarbonilo (Boc), el benciloxicarbonilo (Cbz), el bifenilisopropiloxicarbonilo, el t-amiloxicarbonilo, el isoborniloxicarbonilo, el (\alpha,\alpha-dimetil-3,5-dimetoxiben-ciloxicarbonilo, el o-nitrofenilsulfenilo, el 2-ciano-t-butiloxicarbonilo y similares. El 9-fluorenilmetiloxicar-bonilo (Fmoc) es el grupo protector preferido.

Los grupos protectores de cadenas laterales particularmente preferidos son, para los grupos amino de cadenas laterales, como en la lisina y la arginina: 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo (Pmc), nitro, p-toluensulfonilo, 4-metoxibencenosulfonilo, Cbz, Boc y adamantiloxicarbonilo; para la tirosina: bencilo, o-bromobenciloxicarbonilo, 2,6-diclorobencilo, isopropilo, t-butilo (t-Bu), ciclohexilo, ciclopentilo y acetilo (Ac); para la serina: t-butilo, bencilo y tetrahidropiranilo; para la histidina: tritilo, bencilo, Cbz, p-toluensulfonilo y 2,4-dinitrofenilo; para el triptófano: formilo.

En el método de síntesis peptídica en fase sólida, el aminoácido C-terminal se une a un soporte sólido o resina adecuados. Son soportes sólidos adecuados útiles para la síntesis anterior aquellos materiales que son inertes a los reactivos y a las condiciones de reacción de las reacciones de condensación-desprotección por etapas, así como insolubles en los medios usados. El soporte sólido preferido para la síntesis de péptidos con carboxi C-terminal es el 4-hidroximetilfenoximetil-co-poli(estireno-1% divinilbenceno). El soporte sólido preferido para los péptidos con amida C-terminal es la resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)fenoxiaceta-midoetilo que puede ser adquirida de Applied Biosystems [ciudad, estado].

El aminoácido C-terminal se copula a la resina por medio de N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), N,N'-diiso-
propilcarbodiimida (DIC) o hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), con o sin 4-dimetilaminopiridina (DMAP), 1-hidroxibenzo-triazol (HOBT), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitris(dime-
tilamino)fosfonio (BOP) o cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfina (BOPCI), copulación mediada durante aproximadamente 1 a aproximadamente 24 horas a una temperatura de entre 10º y 50ºC en un solvente, tal como diclorometano o DMF. Cuando el soporte sólido es resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)fenoxiace-tamidoetilo, el grupo Fmoc se escinde con una amina secundaria, preferiblemente piperidina, antes de la copulación con el aminoácido C-terminal, según se ha descrito anteriormente. El método preferido para la copulación con la resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil-Fmoc-aminometil)feno-xiacetamidoetilo desprotegida es el hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU, 1 equiv.) y el 1-hidroxibenzotriazol (HOBT, 1 equiv.) en DMF.

Se puede llevar a cabo la copulación de aminoácidos protegidos sucesivos en un sintetizador de polipéptidos automático como es bien sabido en la técnica. En una realización preferida, la función \alpha-amino del aminoácido de la cadena peptídica en crecimiento está protegida con Fmoc. Se consigue la eliminación del grupo protector Fmoc del lado N-terminal del péptido en crecimiento mediante tratamiento con una amina secundaria, preferiblemente piperidina. Cada aminoácido protegido es entonces introducido en un exceso aproximadamente 3 veces molar y se lleva a cabo preferiblemente la copulación en DMF. El agente copulante es normalmente hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU, 1 equiv.) y 1-hidroxibenzotriazol (HOBT, 1 equiv.).

Al final de la síntesis en fase sólida, se separa el polipéptido de la resina y se desprotege, ya sea sucesivamente o en una sola operación. La separación del polipéptido y la desprotección pueden ser conseguidas en una sola operación tratando el polipéptido unido a la resina con un reactivo de escisión, por ejemplo tianisol, agua, etanoditiol y ácido trifluoroacético.

En casos en los que el extremo C del polipéptido es una alquilamida, la resina es escindida por aminolisis con una alquilamina. Alternativamente, se puede separar el péptido por transesterificación, por ejemplo, con metanol, seguida de aminolisis, o por transamidación directa. El péptido protegido puede ser purificado en este punto o llevado a la siguiente etapa directamente. Se consigue la eliminación de los grupos protectores de cadenas laterales usando el cóctel de escisión descrito anteriormente.

Se purifica el péptido totalmente desprotegido por medio de una secuencia de etapas cromatográficas empleando cualquiera o todos de los siguientes tipos: intercambio iónico sobre una resina débilmente básica en forma de acetato; cromatografía de adsorción hidrofóbica sobre poliestireno-divinilbenceno no derivatizado (por ejemplo;
AMBERLITE® XAD); cromatografía de adsorción en gel de sílice; cromatografía de intercambio iónico sobre carboximetilcelulosa; cromatografía de reparto, por ejemplo, sobre SEPHADEX® G-25, LH-20 o distribución contracorriente; cromatografía líquida de alto rendimiento ("HPLC"), especialmente HPLC de fase invertida sobre empaquetamiento de columna de fase unida a octil- u octadecilsilil-sílice.

Los siguientes ejemplos servirán para ilustrar aún más la preparación de los nuevos compuestos de la invención.

Preparación del reactivo de escisión

Se prepara el reactivo de escisión (2 ml) mezclando, en el siguiente orden, tioanisol (100 \mul), agua (50 \mul), etanoditiol (50 \mul) y ácido trifluoroacético (1,8 ml). Se enfría la mezcla recién preparada a una temperatura de -5ºC a -10ºC y se usa como se describe a continuación.

Procedimiento de escisión

Se agita una mezcla de polipéptido unido a resina y reactivo de escisión a 0ºC durante 10-15 minutos y luego a temperatura ambiente durante 1,75 horas más. Se aumenta la cantidad de tiempo en 0,5 horas por cada arginina adicional hasta un total de tres horas. Se determina la cantidad de reactivo de escisión usando la siguiente fórmula:

Peso de la resina (mg)	Cantidad de reactivo de escisión (\mul)
0-10	100
10-25	200
25-50	400
50-100	700
100-200	1.200

Se filtra entonces la resina y se aclara con ácido trifluoroacético neto. Se añade entonces el filtrado en porciones de 0,5 ml a un tubo de centrífuga que contiene aproximadamente 8 ml de éter dietílico frío. Se centrifuga luego la suspensión y se decanta el sobrenadante. Se resuspende la pella en aproximadamente 8 ml de éter, se añaden otros 0,5 ml del filtrado y se repite el proceso hasta haber precipitado todo el péptido. Se lava entonces el filtrado precipitado con éter, se seca y se liofiliza.

Si el péptido no precipita al añadirlo al éter, se agita la mezcla con ácido acético acuoso al 30%. Se extrae entonces la fase orgánica dos veces con ácido acético acuoso al 30% y se liofilizan los extractos acuosos combinados.

Ejemplo 1 Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

En la posición de la columna de síntesis peptídica de un sintetizador de péptidos SYNERGY® de Perkin Elmer/Applied Biosystems, se pone una columna de síntesis peptídica de Arg(Pmc) (25 \muM de aminoácido, Applied Biosystems). Se añaden los aminoácido secuencialmente según el siguiente ciclo sintético:

0.: Solvatación de la resina usando DMF durante aproximadamente 5 minutos;

1.: Desbloqueo para eliminar el grupo Fmoc de la función \alpha-aminoácido usando piperidina en DMF durante aproximadamente 15 minutos;

2.: Lavado con DMF durante aproximadamente 5 minutos;

3.: Activación del aminoácido Fmoc-protegido entrante (75 \muM) usando una solución 0,2 M de HBTU (75 \muM) y HOBT (75 \muM) en DMSO-NMP (N-metilpirrolidona) y una solución 0,4 M de diisopropiletilamina (150 \muM) en DMSO-NMP;

4.: Copulación usando una solución en DMF del aminoácido Fmoc-protegido activado preparado en la etapa 3 anterior durante aproximadamente 30 minutos, y

5.: Lavado con DMF durante 5 minutos.

Se copulan los aminoácidos con la resina en el orden siguiente usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Ile	30 minutos
2. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
3. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-D-Ile	30 minutos
5. Fmoc-Val	30 minutos
6. Fmoc-Gly	30 minutos
7. Fmoc-Asp(O-tBu)	30 minutos
8. Fmoc-Gly	30 minutos

Tras completarse la síntesis, se lava la resina con THF durante aproximadamente 5 minutos para eliminar la DMF y encoger la resina. Se seca entonces la resina con argón gaseoso durante aproximadamente 10 minutos y con nitrógeno gaseoso durante otros 10 minutos para obtener el péptido unido a resina (80 mg).

Se consigue la escisión usando el procedimiento antes descrito (40 mg de péptido unido a resina seca, 700 \mul de reactivo de escisión, tiempo de escisión 2,5 horas) para obtener el péptido bruto (14 mg). La purificación por HPLC usando una columna C18 Symmetry Prep de 7 \mum (7,8x300 mm) con mezclas de solventes que varían en un gradiente del 5% al 100% de acetonitrilo-agua con un 0,1% en volumen de ácido trifluoroacético a lo largo de un período de 50 minutos, seguida de liofilización, da Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg (5 mg). MS (FAB) m/z 986 (M+H)^{+}.

Ejemplo 2 Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el péptido deseado poniendo 40 mg del péptido unido a resina preparado en el Ejemplo 1 en el sintetizador de péptidos y repitiendo las etapas 3-5 anteriores, excepto por la substitución con ácido acético (87 \muM) del aminoácido Fmoc-protegido y la utilización de 87 \muM de cada de HBTU y HOBT. La escisión y la purificación por HPLC (gradiente del 15% al 100% de acetonitrilo-agua) según se describe en el Ejemplo 1 dieron Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg (4 mg).

Ejemplo 3 Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 1, excepto por la utilización de resina de síntesis de amida en la columna de síntesis del sintetizador de péptidos. Se copulan los aminoácidos con la resina usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
2. Fmoc-Ile	30 minutos
3. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
4. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-D-Ile	30 minutos
6. Fmoc-Val	30 minutos
7. Fmoc-Gly	30 minutos
8. Fmoc-Asp(O-tBu)	30 minutos
9. Fmoc-Gly	30 minutos

Ejemplo 4 Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 2 usando el péptido unido a resina preparado en el Ejemplo 3.

Ejemplo 5 Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Etapa 1

Gly-Asp(Pmc)-Gly-Val-D-Ile-Thr(t-Bu)-Arg(Pmc)-Ile-Arg(Pmc)-NHCH_{2}CH_{3}

Se sella una mezcla de resina unida a péptido preparada como en el Ejemplo 1 y etilamina en un vial y se agita durante 4 horas. Se evapora entonces la etilamina y se añade el metanol al residuo. Se filtra la mezcla y se concentra el filtrado a vacío. Se recoge el residuo en metanol-agua (3:7) y se liofiliza para obtener el péptido protegido.

Etapa 2

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado por desprotección del péptido preparado en la etapa 1 usando el reactivo de escisión y el procedimiento descritos anteriormente.

Ejemplo 6 Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 1 copulando los aminoácidos con la resina en el siguiente orden usando las reacciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Ile	30 minutos
2. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
3. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-D-Ile	30 minutos
5. Fmoc-Val	30 minutos
6. Fmoc-Gly	30 minutos

Ejemplo 7 Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 2, excepto por la utilización del péptido unido a resina preparado como en el Ejemplo 6. MS (FAB) m/z 856 (M+H)^{+}.

Ejemplo 8 Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 3 copulando los aminoácidos con la resina en el orden siguiente usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
2. Fmoc-Ile	30 minutos
3. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
4. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-D-Ile	30 minutos
6. Fmoc-Val	30 minutos
7. Fmoc-Gly	30 minutos

Ejemplo 9 Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 2, excepto por la utilización del péptido unido a resina preparado como en el Ejemplo 8. MS (FAB) m/z 855 (M+H)^{+}, 877 (M+Na)^{+}.

Ejemplo 10 Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el péptido deseado según el método del Ejemplo 5, excepto por la substitución con el péptido unido a resina del Ejemplo 6 del péptido unido a resina del Ejemplo 1.

Ejemplo 11 Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg unido a resina del Ejemplo 7 usando el método del Ejemplo 5. MS (FAB) m/z 883 (M+H)^{+}.

Ejemplo 12 Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 1 copulando los aminoácidos a la resina en el siguiente orden usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Ile	30 minutos
2. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
3. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-D-Ile	30 minutos
5. Fmoc-Val	30 minutos
6. Fmoc-Gly	30 minutos
7. Fmoc-Tyr(tBu)	30 minutos

Ejemplo 13 Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 3 copulando los aminoácidos con la resina en el siguiente orden usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
2. Fmoc-Ile	30 minutos
3. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
4. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-D-Ile	30 minutos
6. Fmoc-Val	30 minutos
7. Fmoc-Gly	30 minutos
8. Fmoc-Tyr(tBu)	30 minutos

Ejemplo 14 Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 12 usando el método del Ejemplo 5.

Ejemplo 15 Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 12 usando el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 16 Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 13 usando el método del Ejemplo 2. MS (FAB) m/z 1018 (M+H)^{+}.

Ejemplo 17 Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg unido a resina usando el método del Ejemplo 5.

Ejemplo 18 Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 1 copulando los aminoácidos con la resina en el orden siguiente usando las condiciones indicadas.

(Continuación)

\alm{1} Aminoácido	Copulación
9. Fmoc-Ala	30 minutos
10. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
11. Fmoc-Val	30 minutos
12. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
13. Fmoc-Ala	30 minutos
14. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
15. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
16. Fmoc-Trp	30 minutos
17. Fmoc-Pro	30 minutos
18. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos

Ejemplo 19 Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
2. Fmoc-Ile	30 minutos
3. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
4. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-D-Ile	30 minutos
6. Fmoc-Val	30 minutos
7. Fmoc-Gly	30 minutos
8. Fmoc-Asp(O-tBu)	30 minutos
9. Fmoc-Gly	30 minutos
10. Fmoc-Ala	30 minutos
11. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
12. Fmoc-Val	30 minutos
13. Fmoc-Ser(t-Bu)	30 minutos
14. Fmoc-Ala	30 minutos
15. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
16. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
17. Fmoc-Trp	30 minutos
18. Fmoc-Pro	30 minutos
19. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos

Ejemplo 20 Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el péptido deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 19 usando el procedimiento del Ejemplo 5.

Ejemplo 21 Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 18 usando el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 22 Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 19 usando el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 23 Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 21 usando el método del Ejemplo 5.

Ejemplo 24 D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 1 copulando los aminoácidos con la resina en el siguiente orden usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Ile	30 minutos
2. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
3. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-D-Ile	30 minutos
5. Fmoc-Val	30 minutos
6. Fmoc-Gly	30 minutos
7. Fmoc-D-Tyr(tBu)	30 minutos

Ejemplo 25 D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
2. Fmoc-Ile	30 minutos
3. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
4. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-D-Ile	30 minutos
6. Fmoc-Val	30 minutos
7. Fmoc-Gly	30 minutos
8. Fmoc-D-Tyr(tBu)	30 minutos

Ejemplo 26 D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 24 usando el método del Ejemplo 5.

Ejemplo 27 Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 24 según el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 28 Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 25 según el método del Ejemplo 2. MS (FAB) m/z 1018 (M+H)^{+}.

Ejemplo 29 Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del péptido unido a resina del Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg del Ejemplo 27 usando el método del Ejemplo 5.

Ejemplo 30 Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg

Se prepara el péptido deseado según el método del Ejemplo 3, excepto por la utilización de resina de 4-hidroximetilfenoximetilo (Applied Biosystems) y la copulación de los aminoácidos con la resina en el siguiente orden usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-D-Arg(Pmc)	30 minutos
2. Fmoc-D-Ile	30 minutos
3. Fmoc-D-Arg(Pmc)	30 minutos
4. Fmoc-D-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-Ile	30 minutos
6. Fmoc-D-Val	30 minutos
7. Fmoc-Gly	30 minutos

Ejemplo 31 Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 3 por copulación de los aminoácidos con la resina según se describe en el Ejemplo 30.

Ejemplo 32 Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el péptido deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 30 usando el método del Ejemplo 5.

Ejemplo 33 Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg

Se prepara el péptido deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 30 según el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 34 Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado a partir del Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2} unido a resina del Ejemplo 31 según el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 35 Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg unido a resina del Ejemplo 33 según el método del Ejemplo 5. MS (FAB) m/e 855 (M+H)^{+}.

Ejemplo 36 D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly

Se prepara el péptido deseado según el método del Ejemplo 1 usando una columna de síntesis peptídica de Gly y copulando los aminoácidos con la resina en el orden siguiente usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-D-Val	30 minutos
2. Fmoc-Ile	30 minutos
3. Fmoc-D-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-D-Arg(Pmc)	30 minutos
5. Fmoc-D-Ile	30 minutos
6. Fmoc-D-Arg(Pmc)	30 minutos

Ejemplo 37 D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2}

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Gly	30 minutos
2. Fmoc-D-Val	30 minutos
3. Fmoc-Ile	30 minutos
4. Fmoc-D-Thr(t-Bu)	30 minutos
5. Fmoc-D-Arg(Pmc)	30 minutos
6. Fmoc-D-Ile	30 minutos
7. Fmoc-D-Arg(Pmc)	30 minutos

Ejemplo 38 D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el péptido deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 36 usando el método del Ejemplo
5.

Ejemplo 39 Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly

Se prepara el péptido deseado a partir del péptido unido a resina del Ejemplo 36 usando el método del Ejemplo
2.

Ejemplo 40 Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2}

Se prepara el compuesto deseado a partir del D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2} unido a resina del Ejemplo 37 usando el método del Ejemplo 2.

Ejemplo 41 Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NHCH_{2}CH_{3}

Se prepara el compuesto deseado a partir del Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly unido a resina del Ejemplo 36 usando el método del Ejemplo 5. MS (FAB) m/e 855 (M+H)^{+}.

\newpage

Ejemplo 42 Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 1 y copulando los aminoácidos con la resina en el siguiente orden usando las condiciones indicadas.

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Ile	30 minutos
2. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
3. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-Ile	30 minutos
5. Fmoc-Val	30 minutos
6. Fmoc-Gly	30 minutos
7. Fmoc-Asp(O-tBu)	30 minutos
8. Fmoc-Gly	30 minutos
9. Fmoc-Ala	30 minutos
10. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
11. Fmoc-Val	30 minutos
12. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
13. Fmoc-Ala	30 minutos
14. Fmoc-D-Ser(tBu)	30 minutos
15. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
16. Fmoc-Trp	30 minutos
17. Fmoc-Pro	30 minutos
18. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos

Ejemplo 43 Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

\alm{1} Aminoácido	Copulación
1. Fmoc-Ile	30 minutos
2. Fmoc-Arg(Pmc)	30 minutos
3. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
4. Fmoc-D-Ile	30 minutos
5. Fmoc-Val	30 minutos
6. Fmoc-Gly	30 minutos
7. Fmoc-Asp(O-tBu)	30 minutos
8. Fmoc-Gly	30 minutos
9. Fmoc-Ala	30 minutos
10. Fmoc-Thr(t-Bu)	30 minutos
11. Fmoc-Val	30 minutos
12. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
13. Fmoc-Ala	30 minutos
14. Fmoc-D-Ser(tBu)	30 minutos
15. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos
16. Fmoc-Trp	30 minutos
17. Fmoc-Pro	30 minutos
18. Fmoc-Ser(tBu)	30 minutos

Ejemplo 44 Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg

Se prepara el compuesto deseado según el método del Ejemplo 43, pero substituyendo con Fmoc-D-Ser(tBu) el aminoácido número 15 y substituyendo con Fmoc-Ser(tBu) el aminoácido número 14.

Claims

1. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable seleccionado entre el grupo consistente en

T-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-U

V-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-W

X-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Y y

Z-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-U

donde

T está ausente o es seleccionado entre

: un grupo N-protector y

: un polipéptido de hasta 12 residuos de aminoácidos eventualmente terminado en un grupo N-protector;

U es seleccionado entre Arg y Arg-NR^{1}R^{2},

: donde R^{1} y R^{2} son independientemente seleccionados entre hidrógeno y alquilo de uno a cuatro átomos de carbono;

V está ausente o es un grupo N-protector;

W es seleccionado entre D-Arg y D-Arg-NR^{1}R^{2};

X está ausente o es un grupo N-protector;

Y es seleccionado entre Gly y Gly-NR^{1}R^{2}, y

Z es 1-12 residuos de aminoácidos eventualmente terminados en un grupo N-protector, donde al menos uno de los residuos de aminoácidos es un resido de D-aminoácido,

y donde dicho péptido o dicha sal tiene actividad antiangiogénica.

2. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 1 de fórmula

T-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-U.

3. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 2, donde U es seleccionado entre Arg y Arg-NHCH_{2}CH_{3}.

4. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 2, donde T está ausente.

5. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 2, donde T es acetilo.

6. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 2, donde T es un péptido de hasta 12 residuos de aminoácido eventualmente rematado con acetilo.

7. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 6, donde T es Gly-Asp- eventualmente terminado en acetilo.

8. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido mediante la reivindicación 2, seleccionado entre el grupo consistente en

Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-D-Tyr-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2},

Ac-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NH_{2} y

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}.

9. U péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según la reivindicación 1 que tiene la fórmula

V-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-W.

10. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 9, seleccionado entre el grupo consistente en

Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg,

Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2},

Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg,

Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NH_{2} y

Ac-Gly-D-Val-Ile-D-Thr-D-Arg-D-Ile-D-Arg-NHCH_{2}CH_{3}.

11. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 1 que tiene la fórmula

X-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Y.

12. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 11, seleccionado entre el grupo consistente en

D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly,

D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2},

D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NHCH_{2}CH_{3},

Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly,

Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NH_{2} y

Ac-D-Arg-D-Ile-D-Arg-D-Thr-Ile-D-Val-Gly-NHCH_{2}CH_{3}.

13. Una composición para tratar a un paciente que necesite terapia anti-angiogénesis, consistente en el péptido de la reivindicación 1 en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. El uso de un péptido de la reivindicación 1 para fabricar un medicamento para el tratamiento de un paciente que necesite terapia anti-angiogénesis.

15. Una composición para el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre el grupo consistente en cáncer, artritis, psoriasis, angiogénesis en el ojo asociada a infección o intervención quirúrgica, degeneración macular y retinopatía diabética, consistente en el péptido de la reivindicación 1 en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

16. El uso de un péptido de la reivindicación 1 para fabricar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre el grupo consistente en cáncer, artritis, psoriasis, angiogénesis en el ojo asociada a infección o intervención quirúrgica, degeneración macular y retinopatía diabética.

17. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 2, seleccionado entre el grupo consistente en

Ac-Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-NHCH_{2}CH_{3}.

18. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 1 de fórmula

Z-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-U.

19. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 18, donde U es seleccionado entre Arg, Arg-NH_{2} y Arg-NHCH_{2}CH_{3} y Z termina eventualmente en un grupo N-protector.

20. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 18, seleccionado entre el grupo consistente en

Ser-Pro-Trp-Ser-D-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

Ser-Pro-Trp-D-Ser-Ser-Ala-Ser-Val-Thr-Ala-Gly-Asp-Gly-Val-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg,

21. Un péptido o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable según se ha definido en la reivindicación 1 para uso como agente terapéutico.